亚洲成年人黄色一级片,日本香港三级亚洲三级,黄色成人小视频,国产青草视频,国产一区二区久久精品,91在线免费公开视频,成年轻人网站色直接看

mfg12-鼠纖維介素反義質(zhì)粒的構(gòu)建方法及其藥學(xué)用途的制作方法

文檔序號(hào):1112764閱讀:312來(lái)源:國(guó)知局
專利名稱:mfg12-鼠纖維介素反義質(zhì)粒的構(gòu)建方法及其藥學(xué)用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及生物材料領(lǐng)域。具體是利用Mouse Fibrinogen-likeprotein 2,mfgl2、簡(jiǎn)稱mfgl2鼠纖維介素反義質(zhì)粒,構(gòu)建一種新的生物制劑,用于病毒誘導(dǎo)的重型肝炎和其它以微循環(huán)障礙損傷為主要病理生理特征疾病的治療的藥學(xué)用途。
背景技術(shù)
新近發(fā)現(xiàn)的纖維介素屬于纖維蛋白原相關(guān)蛋白超家族,又稱fgl2凝血酶原酶,具有絲氨酸蛋白酶活性。mfgl2鼠纖維介素,又稱為鼠凝血酶原酶,基因定位于5號(hào)染色體,編碼蛋白含432個(gè)氨基酸,與人纖維介素hfgl2具有80%的同源性。
用鼠3型肝炎病毒mouse hepatitis virus-3,MHV-3感染不同種系近親繁殖小鼠,已成功建立了類似人類各種不同臨床類型的肝炎,包括暴發(fā)型肝炎、慢性肝炎及臨床健康病毒攜帶者(授權(quán)公告號(hào)CN1181735C);MHV-3誘導(dǎo)產(chǎn)生的mfgl2在鼠病變肝組織中選擇性高度表達(dá),其基因表達(dá)水平與肝組織纖維蛋白沉積及廣泛肝細(xì)胞壞死密切相關(guān);MHV-3感染小鼠接受mfgl2凝血酶原酶中和抗體注射后可減輕肝臟疾病嚴(yán)重程度并顯著降低死亡率。以上結(jié)果表明,mfgl2凝血酶原酶在鼠暴發(fā)型肝炎的發(fā)病過(guò)程中起重要作用(參見(jiàn)Li C.等人,實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,176689(1992);寧琴等人,生物化學(xué)雜志,2749930(1999)。)在上述研究的基礎(chǔ)上,發(fā)明人進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)暴發(fā)型乙型肝炎或重癥乙型肝炎病人肝臟組織的枯否氏細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和壞死、纖維化區(qū)域發(fā)現(xiàn)hfgl2的高度表達(dá),說(shuō)明hfgl2在人病毒性肝炎的惡化進(jìn)展中起著關(guān)鍵性的作用。因此發(fā)明人提出fgl2在病毒性肝炎中引發(fā)肝臟纖維蛋白沉淀和微血管內(nèi)微循環(huán)障礙,導(dǎo)致肝細(xì)胞壞死。該理論在國(guó)際上首次提出,并對(duì)重型肝炎的分子機(jī)制發(fā)表了全新的見(jiàn)解(參見(jiàn)陳悅等人,中華醫(yī)學(xué)雜志,83446(2003);Marsden PA等人,臨床調(diào)查學(xué)雜志,11258(2003)。)由于病毒性肝炎發(fā)病率高、危害性大,且無(wú)確定有效的治療方法,已成為嚴(yán)重影響我國(guó)人民健康與生活水平、制約經(jīng)濟(jì)發(fā)展的重要疾病。病毒誘導(dǎo)的重型肝炎更是缺乏特異、有效的治療手段,預(yù)后不良,病死率極高?;蚍戳x技術(shù)是根據(jù)核酸雜交原理設(shè)計(jì)的,它能選擇性地與靶基因特定功能位置結(jié)合(雜交),抑制該基因表達(dá),而不影響宿主正常功能。自從80年代初由Izant和Weitraub首次報(bào)道胸腺嘧啶激酶(TK)基因反義RNA能選擇性抑制真核細(xì)胞TK基因表達(dá)以來(lái),反義RNA作為一種調(diào)控特定基因表達(dá)的手段已被廣泛采用。反義RNA分子與特異RNA分子互補(bǔ)結(jié)合,特異性封閉某些基因使其不表達(dá)或低表達(dá),從而影響細(xì)胞的代謝活性及功能,因此具有潛在的藥用價(jià)值。發(fā)明人構(gòu)建了mfgl2反義質(zhì)粒,并對(duì)其進(jìn)行了大量細(xì)胞和動(dòng)物水平的實(shí)驗(yàn),結(jié)果證明了mfgl2反義質(zhì)粒轉(zhuǎn)入細(xì)胞后表達(dá)反義RNA,并對(duì)mfgl2凝血酶原酶基因進(jìn)行特異性的抑制,從而對(duì)病毒誘導(dǎo)的重型肝炎和其它以微循環(huán)障礙損傷為主要病理生理特征疾病的治療具有潛在的藥學(xué)價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
所以,本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供獲得mfgl2凝血酶原酶基因的反義模板的方法;本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供將mfgl2凝血酶原酶基因的反義模板插入真核表達(dá)載體構(gòu)建mfgl2反義質(zhì)粒的過(guò)程;本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供利用mfgl2反義質(zhì)粒特異性地抑制Raw246.7細(xì)胞中mfgl2表達(dá)的方法;本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供利用mfgl2反義質(zhì)粒顯著提高暴發(fā)型肝炎小鼠模型生存率和改善肝組織病理學(xué)變化和肝功能的方法。
本發(fā)明基于重型肝炎暫無(wú)確定有效的治療方法,提出了一種用于治療病毒誘導(dǎo)的重型肝炎的基因藥物。發(fā)明人構(gòu)建了一種新的生物制劑-mfgl2反義質(zhì)粒,用以抑制mfgl2凝血酶原酶的表達(dá),緩解微循環(huán)障礙,減少局部纖維素沉積和細(xì)胞壞死,可望提高重型肝炎患者的存活率和生存質(zhì)量。我們通過(guò)大量的細(xì)胞實(shí)驗(yàn),證實(shí)mfgl2反義質(zhì)??梢杂行б种苖fgl2基因的表達(dá);同時(shí)利用MHV-3腹腔感染Balb/cJ小鼠導(dǎo)致的暴發(fā)型肝炎動(dòng)物模型,進(jìn)一步論證該基因藥物可以提高暴發(fā)型肝炎小鼠生存率和改善肝組織學(xué)變化和肝功能。
實(shí)現(xiàn)本發(fā)明所述的一種mfgl2鼠纖維反義質(zhì)粒的構(gòu)建方法包括以下步驟步驟一,載體的構(gòu)建部分1)PCR產(chǎn)生針對(duì)mfgl2凝血酶原酶基因的反義模板。
產(chǎn)生反義序列的模板gccgcactgc aaggatgagg cttcctggtt ggttgtggct gagttctgcc gtcctcgctg 60cctgccgagc ggtggaggag cacaacctga ctgaggggct ggaggatgcc agcgcccagg 120ctgcctgccc cgcgaggctg gagggcagcg ggaggtgcga ggggagccag tgccccttcc 180agctcaccct gcccacgctg accatccagc tcccgcggca gcttggcagc atggaggagg 240tgctcaaaga agtgcggacc ctcaaggaag cagtggacag tctgaagaaa tcctgccagg 300actgtaagtt gcaggctgac ga 322該序列mfgl2基因的部分外顯子1的序列,是通過(guò)PCR從含有mfgl2凝血酶原酶的mRNA cDNA的載體pCR3.1擴(kuò)增得到,部分外顯子1兩端引入酶切位點(diǎn)Xba I和EcoR I。
2)將1)步驟中產(chǎn)生的模板插入pcDNA3.0載體構(gòu)成mfgl2反義質(zhì)粒。
產(chǎn)生的反義模板可反向插入pcDNA3.0載體的酶切位點(diǎn)EcoR I和Xba I(見(jiàn)圖2)。
本發(fā)明所述的一種mfgl2鼠纖維反義質(zhì)粒的構(gòu)建方法,還在于產(chǎn)生mfgl2凝血酶原酶反義序列的模板為mfgl2基因的部分外顯子,其序列為gccgcactgc aaggatgagg cttcctggtt ggttgtggct gagttctgcc gtcctcgctg 60cctgccgagc ggtggaggag cacaacctga ctgaggggct ggaggatgcc agcgcccagg 120ctgcctgccc cgcgaggctg gagggcagcg ggaggtgcga ggggagccag tgccccttcc 180agctcaccct gcccacgctg accatccagc tcccgcggca gcttggcagc atggaggagg 240tgctcaaaga agtgcggacc ctcaaggaag cagtggacag tctgaagaaa tcctgccagg 300actgtaagtt gcaggctgac ga 322本發(fā)明所述的一種mfgl2鼠纖維反義質(zhì)粒的構(gòu)建方法,還在于mfgl2外顯子1來(lái)自含有mfgl2凝血酶原酶的mRNA cDNA的載體pCR3.1。
本發(fā)明所述的一種mfgl2鼠纖維反義質(zhì)粒的構(gòu)建方法,還在于構(gòu)建的產(chǎn)生mfgl2凝血酶原酶反義的模板需要通過(guò)反向插入載體pcDNA3.0構(gòu)成一表達(dá)體系。
本發(fā)明所述的一種mfgl2鼠纖維反義質(zhì)粒的保藏培養(yǎng)物Echerichid Coli JM109/pcDNA3.0 mfgl2 antisense已于2006年3月28日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏編號(hào)CCTCCNOM206030。
一種藥物組合物,它包括本發(fā)明所述的構(gòu)建針對(duì)mfgl2凝血酶原酶的反義質(zhì)粒和藥學(xué)上所接受的載體或賦形劑。
步驟二、載體的細(xì)胞和動(dòng)物水平的試驗(yàn)mfgl2反義質(zhì)粒對(duì)mfgl2基因表達(dá)的抑制作用1)RT-PCR、免疫組化和Western-blot等方法分別從基因水平和蛋白水平檢測(cè)到了mfgl2反義質(zhì)粒對(duì)Raw246.7細(xì)胞中mfgl2表達(dá)的特異性抑制作用2)生存曲線觀察到mfgl2反義質(zhì)粒治療使暴發(fā)性肝衰竭小鼠的生存率由0提高到33%。
3)RT-PCR、免疫組化分別從基因水平和蛋白水平檢測(cè)到mfgl2反義質(zhì)粒治療組中小鼠肝臟mfgl2的表達(dá)受到了特異性的抑制;HE染色亦觀察到mfgl2反義質(zhì)粒治療組小鼠肝組織壞死輕微,而對(duì)照組肝組織有大片壞死。
綜上所述,系列體內(nèi)外試驗(yàn)均表明本發(fā)明涉及的新的生物制劑mfgl2反義質(zhì)??捎行У馗深A(yù)mfgl2凝血酶原酶的表達(dá)。我們研究發(fā)現(xiàn),在血竇微血栓周圍和局部纖維素沉積區(qū)域的巨噬細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞高表達(dá)凝血酶原酶,推測(cè)mfgl2凝血酶原酶不僅在病毒誘導(dǎo)的重型肝炎的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮關(guān)鍵作用,而且在移植急性排斥反應(yīng)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等以微循環(huán)障礙為主要病理生理特征的疾病的發(fā)生中也起著重要作用。因此,本發(fā)明的提出對(duì)于探討這些以微循環(huán)障礙損傷為病理生理特征的病癥的發(fā)病機(jī)理及治療的藥學(xué)價(jià)值,尤其是在提高重型肝炎患者的存活率、延長(zhǎng)移植物存活時(shí)間等方面具有深遠(yuǎn)而重大的意義。


圖1本發(fā)明擴(kuò)增出的mfgl2基因的部分外顯示1的序列;圖2含有mfgl2凝血酶原酶的mRNAcDNA的載體pCR3.1列圖譜;圖3pcDNA3.0載體圖譜;圖4mfgl2鼠纖維介素反義質(zhì)粒構(gòu)建流程圖;
圖5RT-PCR檢測(cè)mfgl2 antisense plasmid轉(zhuǎn)染8h時(shí)對(duì)Raw246.7細(xì)胞中mfgl2 mRNA表達(dá)的抑制作用。
圖中,1.空白對(duì)照組;2.IFN-γ組;3.IFN-γ+mfgl2 sense plasmid組;4.mfgl2 antisense plasmid組。
圖6免疫組化檢測(cè)mfgl2 antisense plasmid轉(zhuǎn)染24h對(duì)Raw246.7細(xì)胞中mfgl2蛋白表達(dá)的抑制作用。
圖中,A.IFN-γ組;B.IFN-γ+mfgl2 antisense plasmid組(棕染區(qū)mfgl2表達(dá)陽(yáng)性區(qū)域)圖7Western blot檢測(cè)mfgl2 antisense plasmid轉(zhuǎn)染48h對(duì)Raw246.7細(xì)胞中mfgl2蛋白表達(dá)的抑制作用。
圖中,1.IFN-γ組;2.IFN-γ+mfgl2 sense plasmid組;3.IFN-γ+mfgl2 antisense plasmid組;4.空白對(duì)照組圖8mfgl2 antisense plasmid基因治療對(duì)暴發(fā)性肝衰竭小鼠生存率的影響。
圖9RT-PCR檢測(cè)mfgl2 antisense plasmid對(duì)小鼠暴發(fā)性肝衰竭模型肝臟mfgl2 mRNA表達(dá)的抑制作用。
圖中,1,2,3注射mfgl2 antisense plasmid;4,5,6注射mfgl2 sense plasmid圖10免疫組化檢測(cè)mfgl2 antisense plasmid對(duì)小鼠暴發(fā)性肝衰竭模型肝臟中mfgl2蛋白表達(dá)的抑制作用。
圖中,A.注射mfgl2 antisense plasmid小鼠肝臟;B.注射mfgl2sense plasmid小鼠肝臟(棕染區(qū)為mfgl2表達(dá)陽(yáng)性區(qū)域)圖11mfgl2 antisense plasmid治療組與mfgl2 sense plasmid組小鼠暴發(fā)性肝衰竭模型肝臟HE染色比較。
圖中,A.注射mfgl2 antisense plasmid小鼠肝臟;B.注射mfgl2sense plasmid組小鼠肝臟(箭頭所指區(qū)域?yàn)閴乃绤^(qū))具體實(shí)施方式
以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述本發(fā)明提出構(gòu)建mfgl2反義質(zhì)粒的方法并在細(xì)胞與動(dòng)物水平證實(shí)其治療效應(yīng)包括以下步驟一、載體的構(gòu)建部分構(gòu)建mfgl2反義質(zhì)粒的方法1、根據(jù)mfgl2凝血酶原酶cDNA序列,用軟件Primer設(shè)計(jì)出mfgl2基因的部分外顯子1(322nt)上下游的引物,通過(guò)PCR從含有mfgl2凝血酶原酶的mRNA cDNA的載體pCR3.1(見(jiàn)圖2)擴(kuò)增出部分外顯子1(見(jiàn)圖1),部分外顯子1序列兩端引入酶切位點(diǎn)XbaI和EcoRI。
2、擴(kuò)增出的mfgl2凝血酶原酶基因的的部分外顯子1反向插入pcDNA3.0載體(見(jiàn)圖3)相應(yīng)酶切位點(diǎn)EcoR I和Xba I,這樣連接形成的載體在轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)可轉(zhuǎn)錄出mfgl2基因的部分外顯子1的反義RNA。
二、載體的細(xì)胞和動(dòng)物水平的試驗(yàn)研究對(duì)于反義寡核苷酸表達(dá)體系在導(dǎo)入人體細(xì)胞后是否能特異性結(jié)合到靶基因并有效表達(dá)的問(wèn)題,目前國(guó)際上尚無(wú)能夠提供直接證據(jù)的相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法,只能通過(guò)最終干預(yù)效果來(lái)間接反映上述生物制劑結(jié)合和表達(dá)的效率。發(fā)明人構(gòu)建了mfgl2反義質(zhì)粒,并對(duì)其進(jìn)行細(xì)胞和動(dòng)物水平的實(shí)驗(yàn),現(xiàn)報(bào)告如下[實(shí)驗(yàn)一]材料mfgl2 antisense plasmidmfgl2反義質(zhì)粒,用于抑制mfgl2凝血酶原酶。
mfgl2 sense plasmid對(duì)照質(zhì)粒,用于實(shí)驗(yàn)空白對(duì)照。
Raw246.7細(xì)胞小鼠巨噬細(xì)胞系。
IFN-γ可刺激Raw246.7細(xì)胞表達(dá)mfgl2。
方法利用mfgl2 antisense plasmid轉(zhuǎn)染Raw246.7細(xì)胞6h后,加IFN-γ100U/ml刺激作為試驗(yàn)組(IFN-γ+mfgl2 sense plasmid組),同時(shí)設(shè)立IFN-γ+mfgl2 sense plasmid組、僅用IFN-γ刺激組(IFN-γ組)和未用IFN-γ刺激組(空白組)作為對(duì)照,通過(guò)RT-PCR、免疫組化和Western-blot來(lái)檢測(cè)mfgl2在Raw246.7細(xì)胞系中表達(dá)的情況。
結(jié)果如圖5所示,RT-PCR、免疫組化和Western-blot分別從基因水平和蛋白水平檢測(cè)到了mfgl2反義質(zhì)粒對(duì)Raw246.7細(xì)胞中mfgl2表達(dá)的特異性抑制作用。
1.空白對(duì)照組;2.IFN-γ組;3.IFN-γ+mfgl2 sense plasmid組;4.mfgl2antisense plasmid組;見(jiàn)圖5.RT-PCR檢測(cè)mfgl2 antisense plasmid轉(zhuǎn)染8h時(shí)對(duì)Raw246.7細(xì)胞中mfgl2 mRNA表達(dá)的抑制作用見(jiàn)圖6.免疫組化檢測(cè)mfgl2 antisense plasmid轉(zhuǎn)染24h對(duì)Raw246.7細(xì)胞中mfgl2蛋白表達(dá)的抑制作用A.IFN-γ+mfgl2 sense plasmid組;B.IFN-γ+mfgl2 antisense plasmid組(棕染區(qū)為mfgl2表達(dá)陽(yáng)性區(qū)域)見(jiàn)圖7.Western blot檢測(cè)mfgl2 antisense plasmid轉(zhuǎn)染48h對(duì)Raw246.7細(xì)胞中mfgl2蛋白表達(dá)的抑制作用1.IFN-γ組;2.IFN-γ+mfgl2 sense plasmid組;3.IFN-γ+mfgl2antisense plasmid組;4.空白對(duì)照組[實(shí)驗(yàn)二]材料mfgl2 antisense plasmid同上。
mfgl2 sense plasmid同上。
小鼠暴發(fā)性肝衰竭模型見(jiàn)本發(fā)明說(shuō)明書背景技術(shù)部分。
方法在制備暴發(fā)性肝衰竭小鼠模型病毒感染前1天和0天分別對(duì)其尾靜脈進(jìn)行高壓注射(即將大體積裸質(zhì)粒DNA溶液經(jīng)尾靜脈快速注入使之聚集于肝臟)mfgl2 antisense plasmid作為治療組,對(duì)照組用mfgl2sense plasmid代替,觀察兩組動(dòng)物生存曲線。
結(jié)果如圖8所示,生存曲線觀察到mfgl2 antisense plasmid治療使暴發(fā)性肝衰竭小鼠的生存率由0提高到33%。
mfgl2 antisense plasmid基因治療對(duì)暴發(fā)性肝衰竭小鼠生存率的影響[實(shí)驗(yàn)三]材料mfgl2 antisense plasmid同上。
mfgl2 sense plasmid同上。
小鼠暴發(fā)性肝衰竭模型見(jiàn)本發(fā)明說(shuō)明書背景技術(shù)部分。
方法在制備暴發(fā)性肝衰竭小鼠模型病毒感染前1天和0天分別對(duì)其尾靜脈進(jìn)行高壓注射mfgl2 antisense plasmid作為治療組,對(duì)照組用mfgl2 sense plasmid代替,感染后2天后收集小鼠肝臟標(biāo)本,RT-PCR和免疫組化染色方法檢測(cè)mfgl2的表達(dá)水平,HE染色觀察肝臟病理組織學(xué)改變。
結(jié)果如下圖所示,RT-PCR、免疫組化分別從基因水平和蛋白水平檢測(cè)到了mfgl2反義質(zhì)粒治療組中小鼠肝臟mfgl2的表達(dá)受到了特異性的抑制;HE染色亦觀察到mfgl2反義質(zhì)粒治療組小鼠肝組織壞死輕微,而對(duì)照組肝組織有大片壞死。
見(jiàn)圖9RT-PCR檢測(cè)mfgl2 antisense plasmid對(duì)小鼠暴發(fā)性肝衰竭模型肝臟中mfgl2 mRNA表達(dá)的抑制作用1,2,3注射mfgl2 antisense plasmid;4,5,6注射mfgl2 sense plasmid
見(jiàn)圖10.免疫組化檢測(cè)mfgl2 antisense plasmid對(duì)小鼠暴發(fā)性肝衰竭模型肝臟中mfgl2蛋白表達(dá)的抑制作用A.注射mfgl2 antisense plasmid小鼠肝臟;B.注射mfgl2 sense plasmid小鼠肝臟(棕染區(qū)為mfgl2表達(dá)陽(yáng)性區(qū)域)見(jiàn)圖11.mfgl2 antisense plasmid治療組與mfgl2 sense plasmid組小鼠暴發(fā)性肝衰竭模型肝臟HE染色比較;A.注射mfgl2 antisense plasmid小鼠肝臟;B.注射mfgl2 sense plasmid組小鼠肝臟(箭頭所指區(qū)域?yàn)閴乃绤^(qū))
權(quán)利要求
1.一種mfgl2鼠纖維反義質(zhì)粒的構(gòu)建方法,步驟如下步驟一,載體的構(gòu)建部分1)PCR產(chǎn)生針對(duì)mfgl2凝血酶原酶基因的反義模板。產(chǎn)生反義序列的模板gccgcactgc aaggatgagg cttcctggtt ggttgtggct gagttctgcc gtcctcgctg 60cctgccgagc ggtggaggag cacaacctga ctgaggggct ggaggatgcc agcgcccagg 120ctgcctgccc cgcgaggctg gagggcagcg ggaggtgcga ggggagccag tgccccttcc 180agctcaccct gcccacgctg accatccagc tcccgcggca gcttggcagc atggaggagg 240tgctcaaaga agtgcggacc ctcaaggaag cagtggacag tctgaagaaa tcctgccagg 300actgtaagtt gcaggctgac ga 322該序列mfgl2基因的部分外顯子1的序列,是通過(guò)PCR從含有mfgl2凝血酶原酶的mRNA cDNA的載體pCR3.1擴(kuò)增得到,部分外顯子1兩端引入酶切位點(diǎn)Xba I和EcoR I。2)將1)步驟中產(chǎn)生的模板插入pcDNA3.0載體構(gòu)成mfgl2反義質(zhì)粒。產(chǎn)生的反義模板可反向插入pcDNA3.0載體的酶切位點(diǎn)EcoRI和XbaI。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種mfgl2鼠纖維反義質(zhì)粒的構(gòu)建方法,其特征在于產(chǎn)生mfgl2凝血酶原酶反義序列的模板為mfgl2基因的部分外顯子,其序列為gccgcactgc aaggatgagg cttcctggtt ggttgtggct gagttctgcc gtcctcgctg 60cctgccgagc ggtggaggag cacaacctga ctgaggggct ggaggatgcc agcgcccagg 120ctgcctgccc cgcgaggctg gagggcagcg ggaggtgcga ggggagccag tgccccttcc 180agctcaccct gcccacgctg accatccagc tcccgcggca gcttggcagc atggaggagg 240tgctcaaaga agtgcggacc ctcaaggaag cagtggacag tctgaagaaa tcctgccagg 300actgtaagtt gcaggctgac ga 322
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種mfgl2鼠纖維反義質(zhì)粒的構(gòu)建方法,其特征在于mfgl2外顯子1來(lái)自含有mfgl2凝血酶原酶的mRNAcDNA的載體pCR3.1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種mfgl2鼠纖維反義質(zhì)粒的構(gòu)建方法,其特征在于構(gòu)建的產(chǎn)生mfgl2凝血酶原酶反義的模板需要通過(guò)反向插入載體pcDNA3.0構(gòu)成一表達(dá)體系。
5.根據(jù)權(quán)利要求書1所述的一種mfgl2鼠纖維反義質(zhì)粒的保藏培養(yǎng)物Echerichid Coli JM 109/pcDNA3.0 mfgl2 antisense已于2006年3月28日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心,保藏編號(hào)CCTCCNOM206030。
6.一種藥物組合物,它包括本發(fā)明所述的構(gòu)建針對(duì)mfgl2凝血酶原酶的反義質(zhì)粒和藥學(xué)上所接受的載體或賦形劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物材料領(lǐng)域。具體是利用MouseFibrinogen-like protein2,mfgl2、簡(jiǎn)稱mfgl2鼠纖維介素反義質(zhì)粒,構(gòu)建一種新的生物制劑,用于病毒誘導(dǎo)的重型肝炎和其它以微循環(huán)障礙損傷為主要病理生理特征疾病的治療的藥學(xué)用途。本發(fā)明基于重型肝炎暫無(wú)確定有效的治療方法,提出了一種用于治療病毒誘導(dǎo)的重型肝炎的基因藥物。發(fā)明人構(gòu)建了一種新的生物制劑-mfgl2鼠纖維介素反義質(zhì)粒,用以抑制mfgl2凝血酶原酶的表達(dá)。
文檔編號(hào)A61K49/00GK1844399SQ200610018749
公開(kāi)日2006年10月11日 申請(qǐng)日期2006年4月13日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月13日
發(fā)明者寧琴, 羅小平, 朱傳龍, 孫奕, 習(xí)東, 嚴(yán)偉明 申請(qǐng)人:華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院
網(wǎng)友詢問(wèn)留言 已有0條留言
  • 還沒(méi)有人留言評(píng)論。精彩留言會(huì)獲得點(diǎn)贊!
1