專利名稱：一種防治心腦腎血管疾病的藥物制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種以中草藥提取物為主要原料制成用于防治心腦腎血管疾病的藥物制劑，尤其是關(guān)于選擇作用清楚的中草藥活性成分按最佳的劑量比例配伍組方，是一種高效低毒天然抗氧化劑。
背景技術(shù)：
近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，氧化應(yīng)激和抗氧化機(jī)制的平衡失調(diào)導(dǎo)致人體內(nèi)氧自由基(OFR)過剩與一些臨床常見的心腦血管疾病如冠心病、中風(fēng)、心律失常、心肌梗塞、早老性癡呆、震顫麻痹癥和腎組織病變?nèi)缒I炎、急性腎、腎移植后排斥反應(yīng)等的發(fā)生和損傷有密切關(guān)系。據(jù)統(tǒng)計(jì)，1982～2002年間全球上市1000多種小分子藥品中，55％系來(lái)自天然產(chǎn)物或其衍生物，其中6％直接為天然產(chǎn)物。另有報(bào)告世界暢銷的25種藥品中，12種為天然產(chǎn)物或其衍生物。我國(guó)50年代以來(lái)研究成功的新藥90％以上系與天然產(chǎn)物有關(guān)。由此可見創(chuàng)新藥物與天然產(chǎn)物的關(guān)系密不可分，顯示從天然產(chǎn)物研發(fā)創(chuàng)新藥物的潛能十分巨大。我國(guó)中醫(yī)已經(jīng)有幾千年歷史了，這是一個(gè)巨大的天然抗氧化劑寶庫(kù)。很多實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明，天然抗氧化劑是許多中草藥的有效成分，包括現(xiàn)在已在臨床使用的茶多酚，銀杏葉提取物EGD761，田七，人參皂甙等。然而，在中藥抗氧化劑的研究中，發(fā)現(xiàn)要取得好的抗自由基損傷作用，不僅要掌握好劑量和適宜濃度，而且還需要多種抗氧化劑的協(xié)同和共濟(jì)作用，因?yàn)閱我坏那宄齽┑那宄饔檬沁h(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的。幾種天然抗氧化劑可以對(duì)不同種類自由基和自由基生成過程及損傷的不同環(huán)節(jié)起作用，同時(shí)有的還可提高體內(nèi)自由基清除酶的活力，加強(qiáng)人體自身清除自由基的能力。目前我國(guó)開發(fā)的具有防治心腦腎血管疾病的中藥天然抗氧化劑包括提取的有效活性成分類，如銀杏葉提取物、丹參素等和傳統(tǒng)配伍方劑，如補(bǔ)陽(yáng)還五湯、參芪合劑等。前者盡管有效，但靶點(diǎn)比較單一，后者雖為復(fù)方，但大多制劑粗糙，各組分(按現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論)所起作用不明確，生物利用度較低，藥效較差，要取得國(guó)際認(rèn)可，還需進(jìn)行拆方研究和劑型改進(jìn)。目前國(guó)外更趨于應(yīng)用現(xiàn)代提取工藝技術(shù)提取分離出對(duì)藥效作用顯著的成分后，再以現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)方法篩選配以復(fù)方使用，這樣效果更好，理化性狀和生物利用度也更高，這是發(fā)展趨勢(shì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于避免上述兩類藥物的缺陷，提供一種成本低、高效低毒的用以防治心腦腎血管疾病的中藥活性成分組方制劑，還可大大縮短現(xiàn)代中藥制劑的研發(fā)速度。
本發(fā)明的目的是通過如下措施來(lái)達(dá)到用綠茶、銀杏葉、田七莖葉、丹參根莖提取的活性成分茶多酚(TP)、銀杏提取物(Egb761)、三七總皂苷(PNS)、丹參素(DS)，以抗氧化活性較強(qiáng)的TP為主藥(君)，佐輔其他三成份，按重量比例15～50∶2.5～12.5∶5～15∶1～10組成復(fù)方制劑，各成分純度均為100％，若成分純度不同，配置時(shí)需折算成相應(yīng)的含量。
本發(fā)明的生產(chǎn)工藝方法按以上重量組份比稱取原料(茶多酚、銀杏提取物、三七總皂苷、丹參素均可在醫(yī)藥市場(chǎng)買到)，將其混勻，得干藥粉。
以重量組份按1∶0.05～0.1的比例稱取干藥粉、淀粉，用濃度為70％～90％的食用乙醇作潤(rùn)濕劑制濕顆粒，在37℃左右干燥，制成膠囊。
本發(fā)明的組方還可制成片劑等口服給藥制劑。
目前國(guó)內(nèi)外研究均表明多靶點(diǎn)作用較單靶點(diǎn)療效增強(qiáng)，不良反應(yīng)及耐藥性下降，如何氏治療AIDS的雞尾酒療法即是多靶點(diǎn)作用優(yōu)越性的一個(gè)范例?，F(xiàn)在臨床所用的天然抗氧化劑大多是單味藥制劑或提取的藥物單一活性成分，作用靶點(diǎn)不多；而參麥散、補(bǔ)陽(yáng)還五湯、參芪合劑等傳統(tǒng)方劑，則多數(shù)成分復(fù)雜，每種成分的具體藥理作用不明確且工藝粗糙，生物利用度和藥效均不高。例如，臨床研究顯示抗動(dòng)脈粥樣硬化天然藥物及其單體作用明確、安全性好，但往往作用較弱，藥物產(chǎn)生臨床療效時(shí)需較高劑量或靜脈給藥。西藥的化學(xué)實(shí)體為單一化合物，有特定的作用靶點(diǎn)，具有專一性、針對(duì)性，而無(wú)論是單味中藥或復(fù)方，它們的物質(zhì)基礎(chǔ)是活性物質(zhì)群，這些活性物質(zhì)群按一定要求配伍組合，作用于多個(gè)靶點(diǎn)，經(jīng)多途徑的整合而發(fā)揮作用，呈現(xiàn)多效性。本發(fā)明中的單味雖同是天然抗氧化劑，但所起的作用并不完全相同。茶多酚與氧作用而消耗密閉系統(tǒng)中殘留的氧，可與鐵離子絡(luò)合，抑制膽固醇的氧化，阻止食物中不飽和脂肪酸氧化。丹參素防止心肌線粒體H+-ATP酶的水解活性下降和線粒體的氧化磷酸化功能損傷，同時(shí)增加SOD及GSH-Px活性。Egb761具廣譜的自由基清除作用，可通過直接作用于自由基的生成位點(diǎn)、抑制促自由基產(chǎn)生的潛在催化劑同時(shí)穩(wěn)定靶細(xì)胞膜，舒張血管，促進(jìn)血液循環(huán)和對(duì)細(xì)胞氧、葡萄糖的輸送，增加細(xì)胞對(duì)缺氧和自由基的耐受。三七總皂苷糾正TXA2/PGI2比值失衡，改善腦循環(huán)。阿魏酸可提高GSH-Px及SOD活性，穩(wěn)定靶細(xì)胞膜，保護(hù)線粒體結(jié)構(gòu)和功能。這些具有不同抗氧化性能的物質(zhì)混合在一起，抗氧化的整體效果自然要增強(qiáng)。另外，不同抗氧化劑共用時(shí)，自由基之間可能互相還原，使抗氧化劑再生。本發(fā)明避開了從傳統(tǒng)中醫(yī)理論組方入手所需進(jìn)行繁瑣的拆方研究、成分不宜明確、耗時(shí)費(fèi)力等弊端，根據(jù)不同的作用靶點(diǎn)以及單味藥的功能主治，選擇來(lái)源豐富、已確知藥效的天然藥物活性成分有機(jī)組方，使復(fù)方中多種活性成分以低于它們中某一單體的治療劑量進(jìn)入人體，反復(fù)作用于疾病的多個(gè)直接靶點(diǎn)(治標(biāo))和間接靶點(diǎn)(治本)，從而提高療效，減輕毒副作用，大大縮短研發(fā)時(shí)間和費(fèi)用。
以下為本發(fā)明的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果根據(jù)預(yù)試，分別取TP、Egb761、PNS、DS各活性成分LD50的1/5為起始劑量，以1‰二甲基亞砜(DMSO)生理鹽水溶液作溶劑等比稀釋成一系列濃度，按表1、2所示加入各試劑，分別進(jìn)行O2·清除率、·OH清除率的測(cè)定，并描繪各單味藥量效曲線。(體外試驗(yàn))表1 O2·清除率的測(cè)定

表2·OH清除率的測(cè)定

從量效曲線上選擇ED50、1/2ED50、1/4ED50作為各藥的高、中、低三個(gè)濃度。
采用Fe2+-H2O2脂質(zhì)過氧化作用誘發(fā)體系，在預(yù)先泡酸處理的5ml玻璃離心管中依次加入正常大鼠大腦皮層10％組織勻漿0.2ml、0.16mM FeSO4(NH4)2、0.16mM H2O2、KH2PO4-NaOH緩沖液(pH7.4)后，按表3分別加入各濃度單味藥，將離心管置37C溫育30min后測(cè)定MDA(丙二醛)值。各管均重復(fù)兩次，同時(shí)做空白和標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照。以“MDA抑制率％”作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行方差分析，確定復(fù)方配比；再根據(jù)各藥生物利用度和預(yù)試驗(yàn)，最終確立大鼠體內(nèi)試驗(yàn)灌胃給予TPC的高、中、低三個(gè)劑量。
表3 L9(34)正交設(shè)計(jì)表

(注ATP BEgb761 CPNS DDS)
正交試驗(yàn)及預(yù)試驗(yàn)驗(yàn)證得出A2B1C2D3為最佳組方。其中主藥TP占復(fù)方總量的40％。
TPC急性毒性試驗(yàn)精密稱取TP(純度98％，批號(hào)20031108)165mg，Egb761(總黃酮/總內(nèi)酯＝24/6，批號(hào)20030710)60mg，PNS(純度90％，批號(hào)20030911)90mg，DS(3％針用提取物，批號(hào)20030815)240mg(以上四藥均購(gòu)自成都華高天然藥物有限公司)。以1‰二甲基亞砜(DMSO)生理鹽水溶液0.015ml作溶劑，加入20ml單蒸水充分混勻，即配成高劑量的復(fù)方制劑。中、低劑量組各藥物成分為高劑量組1/2、1/4用量，同上法配成。
考察組方急性口服毒性即可。采用“人用藥物注冊(cè)技術(shù)要求的國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)議(ICH)”推薦的最大耐受量試驗(yàn)(MTD)方法。將小鼠隨機(jī)分為高、中、低劑量藥物組、溶媒對(duì)照組(1‰二甲基亞砜生理鹽水)和空白對(duì)照組，根據(jù)試驗(yàn)所得出的最佳組方中各單味藥的量換算為成人劑量后的200倍、100倍、50倍，作為高、中、低劑量藥物組，每日給藥一次，連續(xù)7天。各組均無(wú)動(dòng)物死亡。
耐缺氧試驗(yàn)將小鼠隨機(jī)分為高、中、低劑量復(fù)方制劑、杏靈顆粒陽(yáng)性對(duì)照、溶媒對(duì)照(1‰二甲基亞砜生理鹽水)、空白對(duì)照共六組，分組i.g.7d，每天一次。末次給藥后1h將各組小鼠分別放入含鈉石灰的缺氧瓶中，記錄各組小鼠死亡時(shí)間(即耐常壓密閉缺氧時(shí)間)并評(píng)價(jià)動(dòng)物的耐缺氧能力。與空白和溶媒對(duì)照組相比，各用藥組小鼠耐缺氧能力明顯增強(qiáng)。
組方初步穩(wěn)定性試驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定，以EGCG含量變化為指標(biāo)。TPC溶液室溫下放置2h穩(wěn)定。
復(fù)方制劑防治急性腦缺血再灌注損傷的實(shí)驗(yàn)研究精密稱取TP(純度98％，批號(hào)20031108)330mg，Egb761(總黃酮/總內(nèi)酯＝24/6，批號(hào)20030710)120mg，PNS(純度90％，批號(hào)20030911)180mg，DS(3％針用提取物，批號(hào)20030815)480mg(以上四藥均購(gòu)自成都華高天然藥物有限公司)，以1‰二甲基亞砜(DMSO)生理鹽水溶液0.02ml作溶劑，加入20ml單蒸水充分混勻，即配成高劑量的復(fù)方制劑。中、低劑量組各藥物成分為高劑量組1/2、1/4用量，同上法配成。
雄性Wistar大鼠，隨機(jī)分為假手術(shù)、模型對(duì)照、復(fù)方制劑低、中、高劑量、XL陽(yáng)性對(duì)照共6組，每組6只，于術(shù)前7d，每天i.g.1次。其中復(fù)方制劑低、中、高劑量組分別按88、175、350mg.kg-1.d-1劑量給藥，陽(yáng)性對(duì)照組給予20mg.kg-1.d-1XL，假手術(shù)和模型對(duì)照組給予同體積1‰DMSO生理鹽水。第7d最后一次于缺血前60min給藥，術(shù)后清醒再按各分組劑量給藥一次。大鼠局灶性腦缺血再灌注模型(MCAO模型)24h后，取腦組織檢測(cè)。結(jié)果示復(fù)方制劑各劑量組均能使腦缺血大鼠的神經(jīng)行為明顯改善，腦組織含水量、腦梗塞面積下降并呈劑量依賴性；多項(xiàng)生化指標(biāo)測(cè)定表明高劑量組效果最明顯，與模型組相比，腦組織勻漿中的MDA、LA、ROS、NOS含量分別下降46.71％、59.39％、48.45％、65.19％，SOD、GSH、Ca2+-ATPase含量分別增加76.65％、82.93％、94.91％，對(duì)ADP誘導(dǎo)的血小板聚集抑制率為58.91％；此外，復(fù)方制劑可下調(diào)缺血大腦皮層ICAM-1和iNOS表達(dá)。病理切片顯示與模型組比較，復(fù)方制劑三個(gè)劑量組神經(jīng)元細(xì)胞的胞體腫脹、核固縮、核溶解程度明顯減輕。其中，高劑量組效果最明顯，可見神經(jīng)元結(jié)構(gòu)較清晰、周圍間隙縮小；胞體輕度腫脹，核膜完整，核仁清晰；壞死和凋亡細(xì)胞明顯減少。
復(fù)方制劑防治急性腎缺血再灌注損傷的實(shí)驗(yàn)研究Wista大鼠，雌雄各半，分組及給藥方法同前，只是將陽(yáng)性對(duì)照藥換成腎復(fù)康膠囊，給藥量為600mg.kg-1.d-1。腎缺血再灌24h后右眼球取血，處死大鼠，開腹取出雙側(cè)腎臟。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明復(fù)方制劑各劑量組均可降低Scr和Bun，減少腎組織勻漿MDA、ROS、NO含量，增加SOD活性并呈劑量依賴性。其中高劑量組效果最明顯，與模型組相比，分別使Scr和Bun降低27.06％、39.19％；腎組織MDA、ROS、NO含量分別下降34.77％、39.37％、40.21％；SOD活性增加47.38％。病理切片顯示與模型組相比，用藥后腎小管管腔較狹窄、管壁較厚，少數(shù)腎小管上皮細(xì)胞腫脹。其中以高劑量組損傷最輕細(xì)胞腫脹、核固縮、核深染等現(xiàn)象明顯減輕，蛋白管型減少，少數(shù)腎間質(zhì)血管輕微擴(kuò)張充血。
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已證明本發(fā)明是有效的防治心腦腎血管疾病的新復(fù)方制劑。試驗(yàn)結(jié)果表明心腦腎康能使腦缺血大鼠的神經(jīng)行為明顯改善，腦組織含水量、腦梗塞面積下降。多項(xiàng)生化指標(biāo)測(cè)定表明與模型組相比，腦組織勻漿中的MDA、LA、ROS、NOS含量分別下降46.71％、59.39％、48.45％、65.19％，SOD、GSH、Ca2+-ATPase含量分別增加76.65％、82.93％、94.91％，對(duì)ADP誘導(dǎo)的血小板聚集抑制率為58.91％；此外，可下調(diào)缺血大腦皮層ICAM-1和iNOS表達(dá)。病理切片顯示與模型組比較，神經(jīng)元細(xì)胞的胞體腫脹、核固縮、核溶解程度明顯減輕。神經(jīng)元結(jié)構(gòu)較清晰、周圍間隙縮??；胞體輕度腫脹，核膜完整，核仁清晰；壞死和凋亡細(xì)胞明顯減少。心腦腎康可降低Scr和Bun，減少腎組織勻漿MDA、ROS、NO含量，增力SOD活性。與模型組相比，分別使Scr和Bun降低27.06％、39.19％；腎組織MDA、ROS、NO含量分別下降34.77％、39.37％、40.21％；SOD活性增加47.38％。病理切片顯示與模型組相比，用藥后腎小管管腔較狹窄、管壁較厚，少數(shù)腎小管上皮細(xì)胞腫脹。細(xì)胞腫脹、核固縮、核深染等現(xiàn)象明顯減輕，蛋白管型減少，少數(shù)腎間質(zhì)血管輕微擴(kuò)張充血。
本發(fā)明各成分清楚，藥理作用明確；藥源充足、價(jià)格便宜；多靶點(diǎn)、多層次作用；制劑工藝較簡(jiǎn)單；藥效確切。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1以重量組份計(jì)算按15∶2.5∶5∶1比例取茶多酚(TP，純度98％)153g，銀杏提取物(Egb761，總黃酮/總內(nèi)酯＝24/6)25g，三七總皂苷(PNS，純度90％)56g，丹參素(DS，3％針用提取物)333g(以上四藥均購(gòu)自成都華高天然藥物有限公司)混勻(各成分用量均按純度比例折算)，得干藥粉。以重量組份計(jì)算按1∶0.05的比例稱取干藥粉500g、淀粉25g混勻，用濃度為70％的食用乙醇4ml作為潤(rùn)濕劑制成濕顆粒，在37℃左右干燥，制成1000粒膠囊，檢驗(yàn)合格，分裝，即得心腦腎康膠囊成品。
用法與用量口服，每次2～4粒，一日3次。
貯藏密封，置陰涼干燥處。
實(shí)施例2
以重量組份計(jì)算按50∶12.5∶15∶10比例取茶多酚(TP，純度98％)102g，銀杏提取物(Egb761，總黃酮/總內(nèi)酯＝24/6)25g，三七總皂苷(PNS，純度90％)33g，丹參素(DS，3％針用提取物)667g(以上四藥均購(gòu)自成都華高天然藥物有限公司)混勻(各成分用量均按純度比例折算)，得干藥粉。以重量組份計(jì)算按1∶0.1比例取干藥粉500g、淀粉50g混勻，用濃度為90％的食用乙醇6ml作為潤(rùn)濕劑制成濕顆粒，在37℃左右干燥，制成1060粒膠囊，檢驗(yàn)合格，分裝，即得心腦腎康膠囊成品。
用法與用量口服，每次2～4粒，一日3次。
貯藏密封，置陰涼干燥處。
權(quán)利要求
1.一種防治心腦腎血管疾病的藥物制劑，其特征是取茶多酚TP∶銀杏提取物Egb761∶三七總皂苷PNS∶丹參素DS按15～50∶2.5～12.5∶5～15∶1～10的重量比例配伍制成。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用綠茶、銀杏葉、田七莖葉、丹參根莖、當(dāng)歸提取的活性成分茶多酚(TP)、銀杏提取物(Egb761)、三七總皂苷(PNS)、丹參素(DS)，以抗氧化活性較強(qiáng)的TP為主藥(君)，佐輔其他三成份，按重量比例15～50∶2.5～12.5∶5～15∶1～10組成的復(fù)方制劑，該藥物制劑各成分清楚，藥理作用明確；藥源充足、價(jià)格便宜；多靶點(diǎn)、多層次作用；制劑工藝較簡(jiǎn)單；藥效確切。本發(fā)明是有效的防治心腦腎血管疾病的新復(fù)方制劑。
文檔編號(hào)A61K31/192GK1850129SQ20061001847
公開日2006年10月25日 申請(qǐng)日期2006年3月3日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月3日
發(fā)明者梁鋼 申請(qǐng)人:廣西醫(yī)科大學(xué)