專利名稱：用于治療血管疾病的給藥系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于治療血管疾病的給藥系統(tǒng)，更具體的是指利用選擇性光熱解治療葡萄酒色斑(鮮紅斑痣)的一種給藥系統(tǒng)。
背景技術(shù)：
葡萄酒色斑(以下簡(jiǎn)稱PWS)為先天性血管病變其主要表現(xiàn)為乳突狀和中網(wǎng)狀真皮層的毛細(xì)血管及后微血管擴(kuò)張(直徑在30-300微米)。此類胎記的新生兒發(fā)生率為 0. 3-0. 5%，起初表現(xiàn)為平整粉紅色斑點(diǎn)逐漸發(fā)展成紅色到紫色的肥大性病變，其與患者年齡成正比。雖然其發(fā)病原因仍未知，但是據(jù)悉病變的逐漸肥大是因?yàn)閿U(kuò)張性血管周圍的神經(jīng)密度太低引起的，而會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)缺乏和受損脈管系統(tǒng)的強(qiáng)直性痙攣調(diào)節(jié)。增加的灌注壓以及年齡相關(guān)的真皮層的膠原退化都可能是引起血管擴(kuò)張的原因。到46歲，三分之二的患者會(huì)因?yàn)檐浗M織增生形成丘疹或結(jié)狀物質(zhì)，從而引起畸形，不對(duì)稱之自發(fā)性出血。此外，葡萄酒色斑(PWQ所表現(xiàn)出來(lái)的畸形外觀會(huì)嚴(yán)重?fù)p害患者的社會(huì)心理和健康，這也是要治療PWS的一個(gè)重要因素，因?yàn)?0-80%的胎記是出現(xiàn)在頭部和頸部的。三叉神經(jīng)葡萄酒色斑(PWS)的解剖位置和皮節(jié)分布(臉部各區(qū)域的眼科，上顎，下顎分支的三叉神經(jīng))可能會(huì)引起眼科以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥(青光眼和斯特季-韋伯綜合癥)的發(fā)生機(jī)會(huì)。另外還被證實(shí)會(huì)有其它PWS相關(guān)的紊亂發(fā)生，進(jìn)一步突出表明有效治療的需要。激光凝固法是基于通過(guò)激光照射的光熱反應(yīng)所引起的選擇性破壞血管。當(dāng)血管被血紅素優(yōu)先吸收的波長(zhǎng)(一般為580-600NM)激光照射，照射能量轉(zhuǎn)化成熱能后由所謂晶核形成中心(血紅細(xì)胞)傳播到低熱區(qū)域?；跀U(kuò)散和對(duì)流的程度，以及血管壁和血管周組織的情況，超臨界溫度(> 70°C )的產(chǎn)生和擴(kuò)散引起血的熱變性。由于用于激光凝固法的波長(zhǎng)沒(méi)有被血管周圍組織很好吸收，當(dāng)激光脈沖在目標(biāo)脈管的熱緩解時(shí)間(為組織通過(guò)傳播擴(kuò)散和對(duì)流流失50%之熱能所需要的時(shí)間)持續(xù)進(jìn)行時(shí)，非血管組織不會(huì)受到損害。適當(dāng)脈沖時(shí)，正常尺寸的毛細(xì)管(內(nèi)徑4-6 μ m)以及毛細(xì)血管后小靜脈(內(nèi)徑大概816 μ m)，具有相對(duì)較短的熱緩解時(shí)間以及熱質(zhì)量，所以即使在較長(zhǎng)的脈沖時(shí)間內(nèi)也不會(huì)受傷害，因?yàn)檫@些脈管中的熱傳遞不會(huì)有熱變溫度的產(chǎn)生。血管腔內(nèi)的超臨界溫度的產(chǎn)生導(dǎo)致血變性，接著會(huì)引發(fā)熱凝結(jié)物的形成其是不規(guī)則變性物質(zhì)團(tuán)(如血漿蛋白，血紅細(xì)胞等)其是形成與超臨界加熱的區(qū)域。因激光照射的形成人類血管中的熱凝結(jié)物在組織學(xué)治療PWS的分析已得到證實(shí)。[Hohenleutner U et al. J Invest Dermatol. 1995 May ； 104 (5) :798-802. , Fiskerstrand EJ et al. J Invest Dermatol. 1996 Nov ； 107 (5) :671-5]and in animal models[Heger M et al. Opt Express. 2005 Feb; 13 (3) :702-15,Suthamjariya K et al. J Invest Dermatol. 2004 Feb ； 122(2) :518-25, Bezemer R et al. Opt Express. 2007 Jul ；15(14) :8493-506].選擇性光熱解的效率取決于不可避免的內(nèi)在的綜合因素表皮色素增生，血和脈管疊生引起的光遮擋，以及PWS解剖和形態(tài)?？偟脕?lái)說(shuō)，治療效果和增加的黑色素含量，血管密度和重疊度，以及脈管直接和深度呈負(fù)相關(guān)，假如這些因素的顯著的程度與光穿透深度呈反比的話。因此，由脈管腔內(nèi)部均勻光子分布(就像直徑較大的脈管)引起的次臨界等溫線可能會(huì)導(dǎo)致不完全的光致凝結(jié)，也有可能會(huì)因?yàn)檎麄€(gè)脈管(比如處在較深位置或者光影下的脈管)的熱產(chǎn)生不足而阻礙(而不會(huì)產(chǎn)生不完全的光致凝結(jié))。管內(nèi)回轉(zhuǎn)通量率 (J/cm2)對(duì)急性組織和血液動(dòng)力反應(yīng)，以及最終病灶清除，都有深遠(yuǎn)的影響，其通過(guò)真皮血容量中的炎癥介導(dǎo)的減少而產(chǎn)生。整個(gè)血管腔容積內(nèi)激光引起的超臨界溫度的發(fā)生會(huì)引起廣泛的熱壞死，以及由熱處理過(guò)的成膠狀的含有色體的血紅細(xì)胞引起的血管堵塞。臨床上而言，脈管腔內(nèi)的完全光致凝結(jié)與良好反應(yīng)的病灶有關(guān)[Fiskerstrand EJ et al.J Invest Dermatol. 1996 Nov ； 107 (5) :671-5]，對(duì)應(yīng)大概 40 % 的案例[Greve B et al. Lasers Surg Med. 2004 ；34 (2) :168-73]。相反，適度反應(yīng)(20-46% )以及難治 (14-40% )的PWS具有術(shù)后脈管形狀的特征是，脈管部分光致凝結(jié)的程度隨半阻塞性熱凝結(jié)的變化而變化。由于現(xiàn)有的激光治療方法在大約60%的案例中都是無(wú)效的，本案的目的就是要提供一種方法提高清除率。

發(fā)明內(nèi)容
因此本發(fā)明提供一種與已知激光凝固法(通過(guò)選擇性光熱解)一起使用的輔助手段，其通過(guò)解決目標(biāo)血管阻塞從而提高了病灶清除率。本案研究表明在PWS脈管類似物中(倉(cāng)鼠背側(cè)皮膚折疊靜脈)，光熱響應(yīng)繼血流動(dòng)力反應(yīng)之后發(fā)生，即初級(jí)和次級(jí)止血是在激光引起的管內(nèi)損傷之后發(fā)生的。有越來(lái)越多的證據(jù)顯示錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)以及因此產(chǎn)生的被稱作淀粉體的纖維結(jié)構(gòu)有能激活血小板 (Herczenik E et al. Arterioscler Thromb Vase Biol. 2007 Jul ；27 (7) :1657-65)和接觸活化途徑的傾向(Maas C et al.J Clin Invest. 2008 Sep ； 118 (9) :3208-18).由于熱凝結(jié)是由熱變性(例如，錯(cuò)誤折疊的)蛋白質(zhì)組成，這些激光引起的病灶可能會(huì)形成除受熱折磨的內(nèi)皮之外的初級(jí)和次級(jí)止血開(kāi)始的基礎(chǔ)。初級(jí)止血反應(yīng)是以激光誘導(dǎo)病變周圍血小板聚集為特點(diǎn)(熱凝固仍然附著在血管壁上的情況)或者在引起熱凝固物的血管壁(激光脈沖后熱凝固脫落后的情況下) [Bezemer R et al. Opt Express. 2007 Jul ；15(14) :8493-506]。我們已經(jīng)證明，5，6-羧基熒光素標(biāo)記的血小板堆積在熱凝結(jié)物和激光照射血管壁上(圖1IA-F，M，0)以及血栓形成高峰在6. 15min，這標(biāo)志著纖溶隨后發(fā)病。這個(gè)過(guò)程被輸液抗-糖蛋白Λα抗體部分抑制， 表明血小板(初期止血)與血流動(dòng)力反應(yīng)有密切關(guān)系。此外，灌輸肝素對(duì)病灶的大小(圖 IG-L，N, 0)表現(xiàn)出一個(gè)阻礙的作用，表明凝血級(jí)聯(lián)(第二期止血)(圖2)對(duì)激光誘發(fā)的血栓形成也發(fā)揮了作用。進(jìn)一步表明，血栓和/或抗纖維蛋白溶解藥劑有能力通過(guò)擴(kuò)增分別在半光凝血管內(nèi)的血栓形成和血栓完整保存，以改善腔內(nèi)阻塞，這將通過(guò)隨之而來(lái)的慢性炎癥反應(yīng)及配套血管的重構(gòu)，而使皮損清除率最優(yōu)化。PWS的選擇性光熱以及血管有關(guān)病癥的的療效可以因此通過(guò)選擇性光熱之前的血栓和/或抗纖維蛋白溶解藥劑的施用而得到提高。
根據(jù)第一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種化合物的使用，其能夠在血栓的形成和維護(hù)方面施加影響以治療血管和血管有關(guān)的病癥，特別是通過(guò)選擇性光熱作用治療的PWS。這類化合物是血栓和/或抗纖維蛋白溶解的藥劑。對(duì)非凝血病患者進(jìn)行血栓和/或抗纖維蛋白溶解物質(zhì)腸外給藥的潛在危險(xiǎn)就是止血的“檢查與平衡”系統(tǒng)。因此，藥品的療效，最好應(yīng)被限制到只有需要治療的區(qū)域，而自然發(fā)生的止血的調(diào)控不會(huì)受到影響。為了達(dá)到這個(gè)目的，本發(fā)明提供一種在血管和血管有關(guān)的病癥的治療中使用的給藥系統(tǒng)(DDS)，其包括一個(gè)給藥平臺(tái)，包括至少一種化合物能夠在在需要治療的血管中的血栓的形成和/或維護(hù)施加影響的合物。該合并治療方法被稱為特定位置的藥物激光治療 (SSPLT)，即同一種藥品-封裝的給藥系統(tǒng)結(jié)合使用的選擇性光熱分解。SSPLT的主要組成部分如圖3所示。本發(fā)明的給藥系統(tǒng)最好具有以下特征以最小的被動(dòng)釋放封裝藥而具有穩(wěn)定的理化性質(zhì)，因?yàn)樗幬锏耐鈿ぐ鈱⑾拗破渖锼幮?，而具有高包封率，具有定位激光損傷部位的能力，是一種有效的藥物釋放機(jī)制，具有低免疫原性。脂質(zhì)體的組成本案的給藥系統(tǒng)可以是任何現(xiàn)有的平臺(tái)，包括脂質(zhì)體，聚合物藥物載體，細(xì)胞和鬼影細(xì)胞。鬼影細(xì)胞是指那些細(xì)胞質(zhì)內(nèi)容被細(xì)胞裂解液去除并被一種溶液取而代之的細(xì)胞， 例如，生理緩沖液可能含有一種藥劑。然而，脂質(zhì)體，由于淺顯的制備技術(shù)(允許批量生產(chǎn))，可操作性，并高效率封裝親水性和親脂性分子的能力，而構(gòu)成了最有利的載體系統(tǒng)。除了固有的非毒性中性磷脂，脂質(zhì)體可以在成分上被修改，以促成本案給藥系統(tǒng)的獨(dú)特的先決條件。較好地，具有脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)的脂質(zhì)主要為磷酸膽堿、磷酸乙醇胺、磷脂酸、磷酸甘油、磷酸絲氨酸、二磷酸肌醇、鞘氨基醇、甘油磷酸酯、甘油、乙二醇、沒(méi)食子酸丙三醇、和甘油-3-琥珀酸。脂酰基鏈最好為十三?；?13碳)、十四酰基(14碳)、肉豆蔻烯?；?14碳J幌式烯烴在Δ 9)、反肉豆蔻烯?；?14碳，反式烯烴在Δ 9)、十五?；?15碳)、十六酰基(16 碳)、棕櫚油酰基(16碳，順式烯烴在Δ9)、反棕櫚油?；?16碳，反式烯烴在Δ9)、植烷酰基(16碳，甲基在Δ 3，7，11，15)、十七?；?17碳)、十八?；?18碳)、十八碳烯?；?18 碳，順式烯烴在Δ6)、油?；?18碳，順式烯烴在Δ9)、反油?；?18碳，反式烯烴在Δ 9)、 亞油酸酰基(18碳，順式烯烴在Δ 9，12)、亞麻?；?18碳，順式烯烴在Δ 9，12，1 ，十九?；?19碳)、二十?；?20碳)、二十烯?；?20碳，順式烯烴在Δ 11)、花生四烯?；?20碳， 順式烯烴在Δ5，8，11，14)，二十一酰基(21碳)、二十二酰基(22碳)、二十二碳烯?；?22 碳，順式烯烴在Δ 13)、二十二碳六烯醇基(22碳，順式烯烴在Δ 4，7，10，13，16，19)、二十三?；?23碳)、二十四?；?4碳)、二十四碳烯酰04碳，順式烯烴在Δ 15)。油脂具有一個(gè)單?；?1-?；?2-羥基-sn-甘油-3頭基)或酰基(1_?；鵢2_酰基-sn-甘油-3頭基)的配置。體內(nèi)循環(huán)時(shí)間可以通過(guò)適當(dāng)?shù)某叽鐏?lái)提高。業(yè)內(nèi)熟知的調(diào)整尺寸的方法例如 Awasthi VE ET AL研究醫(yī)藥，2003年03月06日；253 (1-2) :121_32，中所描述的。適合作為發(fā)明的給藥系統(tǒng)中作為給藥平臺(tái)使用的脂質(zhì)體大小為30和1500納米之間，最好是90至200 納米。[Liu D et al. Biochim Biophys Acta. 1992 Feb 17 ；1104(1) :95_101]，較佳的是在160-200納米，最好約180納米?？臻g位阻穩(wěn)定為了防止脂質(zhì)體的聚集和融合，并提高循環(huán)半衰期，脂質(zhì)體最好是空間位阻穩(wěn)定的?？臻g位阻穩(wěn)定的方法例如在[Klibanov AL et al. FEBS Lett. 199007,30 ；268(1) 235-7, SeniorJ et al 中有描述· Biochim Biophys Acta. I99I 年 2 月 11 ;1062 (1) :77-82, Allen TM et al. Biochim Biophys Acta. 1991 年六月 1 日；1066(1) :29-36]。本案的較佳實(shí)施例是通過(guò)嫁接聚(乙二醇)(聚乙二醇，也稱作聚氧化乙烯(PEO)或聚氧乙烯(POE))到脂質(zhì)體表面，此方法在以下文章中有描述[Klibanov AL et al. FEBS Lett. 1990年6月30 日；268(1) :235-7, Allen TM et al. Biochim Biophys Acta. 1991 年 6 月 1 日；1066(1) 29-36，Blume G et al. Biochim Biophys Acta. 1990 年 11 月 2 日；1029(1) :91_7]。這會(huì)受以下因素影響，包括與脂質(zhì)成分(通常是磷脂酰乙醇胺(PE)或磷脂酰甘油(PG))共價(jià)連接的線性或分枝型聚乙二醇[Torchilin VP et al. J Pharm Sci. 1995年9月；84(9) 1049-53]的摩爾分?jǐn)?shù)，或者連接到脂雙層的疏水錨分子，如，但不局限于，膽固醇，聚(環(huán)氧丙烷)(PPO)，或單或雙?；?圖4)。聚乙二醇聚合物“密集的構(gòu)象云”在脂質(zhì)體表面的出現(xiàn)，PEG接枝膜和血液成分之間的排斥相互作用，PEG化制劑的親水性，親水性的聚乙二醇化脂質(zhì)體表面的血漿蛋白吸附率的降低產(chǎn)生所謂的所謂的λ隱身“屬性，藉此網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細(xì)胞迅速清除會(huì)被嚴(yán)重阻礙。這些隱形技術(shù)的使用也是本發(fā)明的一部分。在其它實(shí)施例中，脂質(zhì)體是長(zhǎng)循環(huán)的?？梢酝ㄟ^(guò)各種技術(shù)使脂質(zhì)體長(zhǎng)循環(huán)。舉例包括共價(jià)鍵連接的聚合物，嵌段共聚物，和/或以下多嵌段共聚物之一聚(乙烯醇)(PVA)， 聚縮水甘油，被激活為琥珀酰亞胺酯并和含胺鍵(通常是聚乙烯)錨定的聚(N-乙烯基吡咯烷酮)(PVP)，被激活為琥珀酰亞胺酯并和含胺鍵(通常是聚乙烯)錨定的聚(N-丙烯) 嗎啉(PAeM)，聚乙基-2-惡唑啉)(PEOZ)，聚甲基-2-惡唑啉)(PMOZ)，聚丙烯酰胺，聚(N-異丙基丙烯酰胺)(NIPAM)，聚[Ν-(2-羥丙基)甲基丙烯酰胺](HPMA)，聚(苯乙烯-順丁烯二酸/ 二酸酐)(SMA)，聚(二乙烯基醚順丁烯二酸酐)(DIVEMA)，以及/或以下一種疏水改性多糖茁霉多糖，葡聚糖，甘露聚糖和/或聚唾液酸，或者以下葡萄糖醛酸之一棕櫚酰葡萄糖醛酸苷(PGIcUA)，和/或棕櫚酰半乳糖醛酸苷，或者選自第一類單唾液神經(jīng)節(jié)苷酯(GMl)(，第三類單唾液神經(jīng)節(jié)苷酯(GM3)的唾液酸衍生物。本案的另一實(shí)施例中，陰離子脂質(zhì)體，即部分由陰離子成分組成的脂質(zhì)體是長(zhǎng)循環(huán)，通過(guò)吸附(電吸引力)聚合物，嵌段共聚物，和/或由以下陽(yáng)離子殘留之一組成的多嵌段共聚物季銨化聚乙烯基吡啶)(PEVP)，聚(乙烯亞胺)(PEI)，聚甜菜堿(PB)?？山馕?可光裂解聚乙二醇的空間位阻穩(wěn)定如下面介紹，有關(guān)脂質(zhì)體配方(其中血漿成分和脂質(zhì)體表面之間是直接接觸的) 的幾個(gè)實(shí)施方案最終可能會(huì)無(wú)法從將低免疫原性聚合物嫁接到脂質(zhì)體表面獲益。空間位阻穩(wěn)定，可能會(huì)阻礙目標(biāo)血漿成分到達(dá)脂質(zhì)膜成分。相反的，空間位阻不穩(wěn)定的藥物載體的全身給藥的，尤其是那些具負(fù)仏切電位，使這些藥物載體將在調(diào)理速度大大提高。那些外表面具有嫁接肽，抗體或抗體片段的空間位阻不穩(wěn)定的藥物載體也被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)攝取吸收。
為了規(guī)避這種分裂，本案給藥系統(tǒng)的選擇可以通過(guò)可解吸附或可裂解的空間位阻穩(wěn)定劑獲得穩(wěn)定，藉此暴露本發(fā)明所描述的用于調(diào)解抗纖維蛋白溶解或血栓的反應(yīng)給藥系統(tǒng)結(jié)合的成分。在第一較佳實(shí)施例中，規(guī)避這種分裂可以通過(guò)將可解吸附聚乙二醇-衍生PE(聚乙烯)，例如酰基鏈長(zhǎng)度不同的PEG-PE，并入陰離子脂質(zhì)體(而獲得)對(duì)此在關(guān)于磷脂酰絲氨酸(PS)脂質(zhì)體的[ChiuGN et al. Biochim Biophys Acta. 2002 Feb 18 ； 1560(1-2) :37-50]and[Chiu GN et al. Biochim Biophys Acta. 2003 Jun 27 ；1613(1-2) 115-21]中已經(jīng)有描述。根據(jù)本案的另一實(shí)施例，該給藥系統(tǒng)包括含有PEG修飾的plasmenyl型血脂的脂質(zhì)體。plasmenyl型脂質(zhì)體或縮醛磷脂可以是包含一個(gè)線性?；?，在sn-Ι (縮醛磷脂)和 sn-2(雙縮醛磷脂)位置，通過(guò)從乙烯醇乙烯殘留的乙醚血脂，和一個(gè)在Ai而不是典型的酯的烯烴，通常一個(gè)膽堿磷酸或磷酸乙醇胺sn-3碳的甘油]，連接甘油骨干。膽堿磷酸主要位于心臟(-50%的PE包含烯醚)，保護(hù)細(xì)胞受單線態(tài)氧(1O2)和活性氧(ROS)的破壞性影響。1O2和ROS在電乙烯基醚鏈攻擊縮醛磷脂形成一個(gè)單鏈的表面活性劑(具有脂肪醛和 dioxymethyl作為副產(chǎn)品)該表面活性劑可以誘導(dǎo)層狀到六角晶型相轉(zhuǎn)變，(I型縮醛磷脂酰膽堿膠束結(jié)構(gòu)和一個(gè)II型膠束結(jié)構(gòu)縮醛磷脂酰乙醇胺)。由于這些乙烯基醚是很容易受到酸性和氧化條件影響，只要具備這些條件，他們就可以適用于各種給藥系統(tǒng)的相關(guān)廣泛應(yīng)用中。其中一種可能的應(yīng)用是關(guān)于含聚乙二醇衍生di縮醛磷脂脂質(zhì)體的聚乙二醇的光氧化去除。在本實(shí)特定施例中，含有凝血磷脂的脂質(zhì)體以及表面嫁接有血栓和/或抗纖維蛋白溶解的化合物的脂質(zhì)體可以通過(guò)通過(guò)摻入摩爾分?jǐn)?shù)的聚乙二醇衍生縮醛磷脂而避免被調(diào)理作用。這些聚乙二醇-縮醛磷脂的合成路線是已知的，比如在下面文獻(xiàn)中就有提到 [Thompson DH et al. Methods Enzymol. 2004 ;387 153-68]。PEG存在于外表面有利于防止生物活性的化合物與各自的等血漿/細(xì)胞目標(biāo)交互影響。脫P(yáng)EG化的脫保護(hù)，從而激活給藥系統(tǒng)，可以通過(guò)由本分所描述的給藥系統(tǒng)內(nèi)置光敏劑產(chǎn)生1O2和R0S，以及隨之產(chǎn)生的乙烯醚裂解和PEG的釋放，而實(shí)現(xiàn)。脫P(yáng)EG化方法(圖4)可以和下面要描述的光敏劑的促凝SSPLT很好的結(jié)合使用。封裝/嫁接的方法在本實(shí)施例中，能夠?qū)ρǖ男纬珊途S護(hù)施加影響的藥物活性的化合物，不是封裝在水艙就是在脂質(zhì)體的磷脂雙分子層。在封裝多個(gè)化合物的情況下，該化合物可在脂質(zhì)體的水隔室，或者在雙層或鏈接到一個(gè)給藥系統(tǒng)(DDQ組成。不同化合物可以在不同的隔室內(nèi)(圖4)。初級(jí)止血和二次止血以及纖維蛋白溶解級(jí)聯(lián)的分子組成只能是有針對(duì)性的化合物，其不適合脂質(zhì)體封裝(例如，(短的，寡的，聚)的肽，(重組，修改或純化)的蛋白質(zhì)，抗體或Fab片段，因?yàn)樗麄兪悄蜔?在熱敏脂質(zhì)體的情況下)且太大而無(wú)法通過(guò)跨膜通道。在另一實(shí)施例中，這類化合物可能是(共價(jià)鍵)連接到一個(gè)磷脂化合物(如1， 2- 二?；?sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)，一個(gè)嵌入雙層的錨定分子，脂質(zhì)體的空間位阻穩(wěn)定的聚合物，例如PEG，使聚合物可能含有連接藥物活性化合物(圖4)的R-基團(tuán)或側(cè)鏈。根據(jù)本案的另一實(shí)施例，這些化合物可以在激光治療前或后直接以未封裝形式一起注入全身血液循環(huán)。例如，這可以適用于抗纖溶藥物，比如，氨甲環(huán)酸(TA)、ε-氨基己酸 (ACA)、ρ-氨甲苯酸(AMBA)和4-氨甲基-雙環(huán)-2，2，2壬酸(AMBOCA)，因?yàn)檫@些藥物只有在出現(xiàn)血栓時(shí)才會(huì)產(chǎn)生影響。因此，這些藥物降低了打亂止血平衡的風(fēng)險(xiǎn)，特別是在亞臨床型，輔助治療劑量給藥時(shí)?？估w維蛋白溶解劑能夠?qū)Υ委熝軆?nèi)血栓的形成和維護(hù)施加影響的化合物可以將此影響以任意程度施加在纖溶途徑，組織因子或接觸激活途徑(二級(jí)止血)，或血小板功能(初級(jí)止血) 上。纖溶途徑包括將纖維蛋白溶酶原轉(zhuǎn)換成纖維蛋白溶酶，將跨聚合纖維蛋白裂解成可溶性纖維蛋白降解產(chǎn)物，從而分解血栓。反過(guò)來(lái)纖維蛋白降解產(chǎn)物與凝血酶競(jìng)爭(zhēng)，阻礙纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白。圖2為纖溶系統(tǒng)的示意圖。根據(jù)本發(fā)明，光凝形成血栓的纖維蛋白溶解被抑制。而通過(guò)醫(yī)藥干預(yù)獲得的纖維蛋白溶解的抑制將保留血栓的完整性，促進(jìn)激光誘導(dǎo)血栓形成期間和之后的血栓的穩(wěn)定，拖延或防范纖溶和剪應(yīng)力引起的逐步血栓溶解的爆發(fā)。待封裝于給藥系統(tǒng)的適當(dāng)?shù)睦w溶定位化合物，特別是脂質(zhì)體內(nèi)，為纖溶系統(tǒng)一個(gè)或多個(gè)組成成分抑制劑，其促進(jìn)形成纖維蛋白溶酶，或纖維蛋白降解產(chǎn)物或纖溶系統(tǒng)的組成成分，或他們的興奮劑，并阻止纖維蛋白溶酶或纖維蛋白降解產(chǎn)物的形成。該化合物的第一實(shí)施例是一種纖維蛋白溶酶(原形式)抑制劑。纖溶酶，其是在血液凝固發(fā)作時(shí)慢慢形成，主要負(fù)責(zé)裂解構(gòu)成血栓的網(wǎng)狀網(wǎng)絡(luò)的交叉聚合纖維蛋白鏈。纖維蛋白溶酶(原形式)抑制劑選自脂肪酸組，其包括花生四烯酸，油酸，硬脂酸(可以被并入脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)的脂雙層)，最好選自合成纖維蛋白溶酶(原形式)抑制劑組，其包括TA， ACA, AMBA, AMB0CA，該抑制劑為TA或ACA為佳，最好是TA.所有文中提到的纖維蛋白溶酶 (原形式)合成抑制劑都是PH值化!1值=7.4)的中性兩性離子并封裝在脂質(zhì)體的水隔室。TA是一種抗纖維蛋白溶解的賴氨酸類似物，在臨床上被廣泛用來(lái)防止在心臟外科手術(shù)和其它高侵入性手術(shù)的術(shù)后失血。TA也為血友病及血管性血友病患者，以及月經(jīng)過(guò)多婦女的預(yù)防藥。TA通過(guò)占領(lǐng)其五個(gè)賴氨酸結(jié)合位點(diǎn)來(lái)完全抵消纖維蛋白溶酶(原形式)的生物活性，從而抑制纖維蛋白溶解所需的一個(gè)分子復(fù)合物的形成。TA的藥代動(dòng)力學(xué)已被廣泛研究并且TA在規(guī)定的劑量測(cè)定上被認(rèn)為是安全的美國(guó)食品和藥物管理局(FDA)批準(zhǔn)的應(yīng)用程序#01擬80(補(bǔ)充#008)和應(yīng)用(補(bǔ)充#009#01擬81)，批準(zhǔn)日期1999年9月9日。 TA構(gòu)成發(fā)明的給藥系統(tǒng)較佳化合物。根據(jù)本案一較佳實(shí)施例，該化合物是一種纖維蛋白溶酶抑制劑。例如可以是纖維蛋白溶酶的直接抑制劑，包括α 2-抗纖維蛋白溶酶，α 2-巨球蛋白和凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)。纖維蛋白溶酶抑制劑可以是自純化和/或重組α 2-抗纖維蛋白溶酶組，α 2-抗維蛋白溶酶多肽，α 2-巨球蛋白，純化和/或重組TAFIjP /或抑肽酶。根據(jù)本案另一較佳實(shí)施例，該化合物是組織型纖維蛋白溶酶原激活物(tPA)或尿激酶型纖維蛋白溶酶原激活物(UPA)的抑制劑。tPA和uPA，其被損壞和活化的內(nèi)皮細(xì)胞分泌進(jìn)入血液，通過(guò)將血栓被困纖維蛋白溶酶原轉(zhuǎn)換成纖維蛋白溶酶來(lái)調(diào)節(jié)纖維蛋白溶解。 一個(gè)正反饋環(huán)傳播可以促進(jìn)纖維蛋白溶酶的纖溶狀態(tài)，因?yàn)槔w溶酶會(huì)通過(guò)產(chǎn)生更活躍形式的tPA和uPA來(lái)進(jìn)一步刺激纖維蛋白溶酶的生成。tPA和UPA被纖維蛋白溶酶原激活物抑制劑1 (PAIl)和纖維蛋白溶酶原激活物抑制劑(PAI-幻所抑制。TPA抑制劑最好為分離純化human PAI1，分離和純化的 human PAI2，重組human PAI1，重組人PAI2，修改human PAI1， 修改human PAI2，抑制抗體，或其衍生(例如，F(xiàn)ab片段)，能抑制tPA的(聚，寡，短)縮氨酸(參見(jiàn)US-6, 159，938)。uPA抑制劑較佳為分離純化human PAI1，分離和純化的human PAI2，重組 human PAI1，重組 human PAI2 JfShuman PAIl ,human PAI2 修改，抑制抗體，或其衍生(例如，F(xiàn)ab片段)，針對(duì)uPA的，抑制抗體，或它的派生形式(例如，F(xiàn)ab片段)，針對(duì) UPA受體(uPAR)，能抑制uPA的(聚，寡，短)縮氨酸(參見(jiàn)美6，159，938)。在另一實(shí)施例中，該化合物是一種PAI1或PAI2興奮劑，即一種可以誘導(dǎo)分泌PAI1 或PAI2的制劑。就PAIl而言，此興奮劑是一種從玻連蛋白之S362-A380片段衍生出的被稱為BP4的合成肽，或?yàn)镾FLLRN的合成肽，其通過(guò)鏈接蛋白酶激活受體_1 (PAR-I)促進(jìn)PAIl 分泌。就PAI2而言，此興奮劑是一種促進(jìn)PAI2分泌的合成肽，例如，SLIGKV鏈接蛋白酶激活受體-2(PAR1)，或者為防止生理?xiàng)l件下PAI2聚合的合成肽，例如 TEAAAGTGGVMTG(RCL-PAI2)and SEAAASTAVVIAG(RCL-AT)，其可能會(huì)損害 PAI2 循環(huán)方面的功能[Mikus P，Ny T.絲氨酸蛋白酶纖溶酶原激活物抑制因子2型細(xì)胞內(nèi)的聚合。J Biol Chem.。1996 年 04 月 26 日；271 (17) :10048-53]。促凝-組織因子涂徑和接觸激活涂徑除了給藥系統(tǒng)的抗纖維蛋白溶解成分，還可封裝一個(gè)作用于作用于一個(gè)或多個(gè)的二次止血?jiǎng)┏煞?，而且到促凝血反?yīng)的制劑，即組織因子和接觸激活途徑(圖幻。凝血系統(tǒng)包括一個(gè)復(fù)雜的凝血因子級(jí)聯(lián)(如凝血因子VII，或fVII)其轉(zhuǎn)化為活性形式(例如， fVIIa)，藉此一個(gè)激活的凝血因子接著可以激活下一個(gè)酶原。組織因子和接觸激活途徑導(dǎo)致纖維蛋白原(FL)轉(zhuǎn)換為(FIA)，藉此通過(guò)交聯(lián)血小板和在血栓到處形成網(wǎng)狀網(wǎng)絡(luò)來(lái)凝聚和進(jìn)一步鞏固血塊。調(diào)解二次止血或一個(gè)或多個(gè)組件的二次止血抑制劑成分的拮抗劑的化合物可導(dǎo)致促凝狀態(tài)。組織因子和接觸激活途徑的介體的例子包括(一)純化的形式，重組形式的， 或作為市售的藥物制劑的一部分的fll (a) ；fill (組織因子，TF)，純凈的形式或重組形式的fV(a)；純凈的形式，重組形式的，或作為市售的藥物制劑的一部分的fVII ；純凈的形式或重組形式的fVIII(a)；純凈的形式，重組形式的，或作為市售的藥物制劑的一部分的fIX(a)；純凈的形式，重組形式的，或作為市售的藥物制劑的一部分的fX(a)；純凈的形式或重組形式的fXI (a)；純凈的形式或重組形式的fXII ；純凈的形式或重組形式的 fXIII (a)，前激肽釋放酶(PK)，激肽釋放酶，分子量激肽原(HMWK)。促凝血-凝血抑制劑的拮抗劑為了是凝血程度與血管損害的程度成比例，很多凝血因子抑制劑在血栓形成過(guò)程中發(fā)揮了抗凝作用。最顯著的抑制劑是抗凝血酶III (ATIII)，血漿源性糖蛋白，其抑制接觸活化(flXa，F(xiàn)Xa, fXIa, fXIIa)和組織因子(fVIIa)途徑，以及在共同通路產(chǎn)生的flla的在共同通路。ATIII還抑制激肽釋放酶。第二個(gè)重要組成部分是C蛋白，維生素K依賴性絲氨酸蛋白酶，其是通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞外膜表面的凝血酶約束血栓調(diào)節(jié)蛋白激活，在輔助因子蛋白S.存在時(shí)形成活化的蛋白C(APC)。APC是負(fù)責(zé)降解fVa和fVIIIa。第三個(gè)主要的抗凝血?jiǎng)┦墙M織因子途徑抑制物(TFPI)，為可逆性地抑制fXa的單鏈多肽，并且當(dāng)合成于fXa時(shí)，隨后還可以抑制fVIIa-TF聯(lián)合體。最后，蛋白質(zhì)Z依賴性蛋白酶抑制劑(ZPI)是抑制 fXIa和fla的血源性絲氨酸蛋白酶(絲氨酸蛋白酶抑制劑)。后者發(fā)生在結(jié)合蛋白質(zhì)Z，是一種可以另fXa-退化加快1000倍的糖蛋白。在另一實(shí)施例中，選擇的給藥系統(tǒng)可能封裝或嫁接凝血抑制劑的拮抗劑，其包括 ATIII，蛋白C，蛋白S，APC，血栓調(diào)節(jié)蛋白，TFPI, ZPI，蛋白質(zhì)Z。凝血抑制劑的拮抗劑可以為(短，寡，聚)肽，蛋白質(zhì)(重組，修改或純化)，及抗體或Fab片段。拮抗劑可封裝在給藥系統(tǒng)例或嫁接到一個(gè)磷脂成分，錨定分子或如上所述的用于空間位阻穩(wěn)定的高分子鏈。目前可用的促凝劑和現(xiàn)行有效之抗凝血的拮抗劑(如抗體)有時(shí)不適合用于封裝入(熱敏)脂質(zhì)體，因?yàn)檫@些化合物是耐熱蛋白質(zhì)，因?yàn)槠浯蟪叽缈赡軙?huì)破壞細(xì)胞膜的通透性。此外，這些類的藥物需要精細(xì)的GMP控制的配置和處理，其往往轉(zhuǎn)化為產(chǎn)品的高定價(jià)。促凝血?jiǎng)┲?光敏劑在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種替代方法來(lái)避免使用“傳統(tǒng)的”促凝血?jiǎng)＿@種方法是基于將光敏劑列入到脂雙層的疏水核心或脂質(zhì)體的水隔室(在這種情況下，光敏劑通過(guò)親水性基團(tuán)功能化)。光敏劑是一種分子，當(dāng)其通過(guò)輸入能量(如光)進(jìn)入電子激發(fā)態(tài)時(shí)，在電子衰變到基態(tài)分子得過(guò)程中，將部分能量轉(zhuǎn)移到鄰近的分子，通常的氧分子。光敏劑主要用于光動(dòng)力療法(PDT)，作為電子供體，并促進(jìn)形成高度細(xì)胞毒性和凝血的單線態(tài)氧(1O2)和活性氧物種(ROS)。在pdt過(guò)程中產(chǎn)生這些反應(yīng)的瞬態(tài)過(guò)程導(dǎo)致不可逆的組織破壞，賦予含有光敏劑的組織量以一種選擇性的治療效果。在選擇促凝給藥系統(tǒng)的情況下，活性氧物種的形成，可能會(huì)損壞那些具有血栓的細(xì)胞并進(jìn)一步破壞血管壁，從而導(dǎo)致更多的血栓形成。在另一實(shí)施例中，光敏劑是封裝在一個(gè)單獨(dú)的脂質(zhì)體配方具有促凝物質(zhì)的屬性一個(gè)給藥系統(tǒng)。適合本發(fā)明使用的的光敏劑可以是酞菁，萘酞菁，以及綠素類和菌綠素中的內(nèi)源性卟吩。特別對(duì)本發(fā)明有用的光敏劑是一般的分子C32H18N8(酞菁)，C48H2GN8(萘酞菁)， C2tlH16N4 (綠素類)或C2tlH18N4的(菌綠素)，如圖5所示，其也可以由以下一個(gè)或多個(gè)R-基團(tuán)取代，包括H，F(xiàn), CF(CF3)2, 0(CH2)nCF3, Cl, Br, CHCH2, (CH2)nCH3, (CH2)nCOOH, CONH(CH2) nNH2, (CH2) nC0NHCH2CH2NH2, CONH (CH2) nCH (NH2)COOH, CH2C0NHCH (CH2COOH) COOH, 0 (CH2) nCH3, S(CH2) nN (CH3)2, SO2NH (CH2) nCH3, SO2NH (CH2) nN (CH3)2, SO2N [ (CH2) nCH3]2, So2NHCH2CH(CH2CH3) (CH2) nCH3, C(CH3)3, OC[ (CH2) nCH3]3, OCH[CH(CH3)2J2, O(CH2) nN(CH3)2, O(CH2) nN(CH3)3, SC6H5， OC6H5，O(C6H4) C [(CHs)2] (C6H5)，O(C6H3) (COOH)2, O(C6H3) [COO (CH2) nCH3]2, C6H5, SO2NHCH(CH3) CH2(C6H3) (OCH3)2, SO3, SO2Cl, N(CH3)2, COOH, NO2, CH3, CONH2, CH2NH2,以及 R，基團(tuán)選自 H， CH3, A1C1, A10H, AlOSi (CH3)3, AlOSO3, Co, Cu, Li, GaOH, GaCl, Fe, FeCl, FeO2, Pb, Mg, Mn, MnCl, SiCH3Cl, Si (OH)2, Si (Cl)2, Si {0C[ (CH2)nCH3]3}2, Si [COCO(C6H4) (CH2)nCH3]2, Si [OSi (CH3) 2 (CH2) nN (CH3) 2] OH, Si
2, SiCH3, Si [OSi (CH3)2C(CH3)2C(CH3)J2，Ni, SnO, Sn(Cl)2, Ti (Cl)2, TiO, V0, Zn, Ag, Cd, Ge，InCl.酞菁適合的例子是^H，31H-酞菁；2，9，16，23_四叔丁基-29H，31H-酞菁；1,8, 15，22-四(苯基硫醇)-29H，3IH-酞菁；2，9，16，23-四(苯基硫醇)-29H, 3IH-酞菁；2，9， 16，23-四苯氧基-29H，3IH-酞菁；1，4，8，11，15，18，22，25-八丁氧基-29H, 3IH-酞菁；2，3， 9，10，16，17，23，24-Λ (辛氧基)49Η，31Η-酞菁；四(4-枯基苯氧基)-酞菁；29Η，31Η，1 ； 4，8，11，15，18，22，25-八氟-2，3，9，10，16，17，23，24-八全氟(異丙醇)_ 酞菁；29Η,31Η, 1，2，3，4，8，9，10，11，15，16，17，18，22，23，24，25-十六烷基，2，2-三氟乙氧基)酞菁； 鋅酞菁；四硝基鋅酞菁；鋅2，9，16，23_四叔丁基-29H，31H-酞菁；鋅2，9，16，23_四(苯基硫醇)49H，31H-酞菁；鋅 1,4,8,11,18,18,22,25-八丁氧基-29H，31H-酞菁；鋅 2，3， 9，10，16，17，23，24-八(辛氧基)-29H，31H-酞菁；1，2，3，4，8，9，10，11，15，16，17，18，22， 23，24，25-十六全氟-四扎31!1-酞菁；鋅 1，4，8，11，15 18，22，25-八氟-2，3，9，10，16，17， 23，24-八全氟(異丙醇)_ 酞菁；鋅 1，2，3，4，8，9，10，11，15，16，17，18，22，23，24，25-十六烷基-(2，2，2-三氟乙氧基)酞菁；鋅2，39，10，16，17，23，24-八[(3，5-二戊羰氧基)苯氧基]-酞菁；鋅2，3，9，10，16，17，23，24-八[(3，5-雙羧酯)苯氧基]-酞菁；鋅四(2， 4-dimetil-3-戊氧基)-酞菁；鋅四(N，N, N-三甲基氨乙氧基)-酞菁；鋅1，2，3，4，8，9， 10，11，15，16，17，18，22，23，24，25-十六氯-29!1，31!1-酞菁；鋅 2，3，9，10，16 17，23，24-八 [(N，N-二甲氨基)乙基硫]-酞菁；鋅酞菁-4，4’，5”，5”’-四磺酸；氯化鋁酞菁；氫氧化鋁酞菁；氯化鋁4，11，18，25-四(氯)_酞菁；氯化鋁1，8，15，22-四(苯基硫醇)49H，31H-酞菁；氯化鋁2，9，16，23_四(苯基硫醇)49Η，31Η-酞菁；鋁三乙烯硅氧烷鋁1，4，8，11， 15，18，22，25-八丁氧基 _29Η，31Η_ 酞菁；鋁 1,2,3,4,89,10，11，15，16，17，18，22，23，24， 25-十六氯-29Η,31Η-酞菁；硫酸鋁 1，2，3，4，8，9，10，11，15，16，17，18，22，23，24，25-十六氯-酞菁；氯化鋁四(磺胺二甲唑)49Η，31Η-酞菁；氫氧化鋁磺胺二甲唑酞菁；氫氧化鋁 1，8- 二(磺胺二甲唑)酞菁；氫氧化硅1，8，15-三(磺胺二甲唑)酞菁；二氯化硅酞菁；二羧基硅酞菁；氯甲基硅酞菁；二羧基硅2，9，16，23-四叔丁基-29Η，31Η-酞菁；二羧基硅2， 3,9,10,16,17, 23, 24-A (辛氧基)49Η，31Η-酞菁；二羧基硅二(三己基甲硅烷基氧化物) 酞菁；二(4-叔丁基)苯甲酸硅酞菁；二(3-噻吩)醋酸硅酞菁；二 O-甲氧基苯基)醋酸硅酞菁；二(3-甲氧基苯基)醋酸硅酞菁；二甲氧基苯基)醋酸硅酞菁；二(2，5-二甲氧基苯基)醋酸硅酞菁；雙(3，4_ 二甲氧基苯基)醋酸硅酞菁；二(3，4，5_三甲氧基苯基) 醋酸硅酞菁；雙(3，4-二甲氧基)苯甲酸硅酞菁；二 3-(3，4-二甲氧基苯基)丙酸硅酞菁； 雙-4-(3，4-二甲氧基苯基)丁酸硅酞菁；羧基硅(二甲氨基)_己酯甲硅烷基氧化物酞菁； 羧基硅(二甲氨基)-戊酯甲硅烷基氧化物酞菁；羧基硅(二甲氨基)-丁酯甲硅烷基氧化物酞菁；羧基硅(二甲氨基)_丙酯甲硅烷基氧化物酞菁；羧基硅(二甲氨基)_乙酯甲硅烷基氧化物酞菁；羧基硅(二甲氨基)_甲酯甲硅烷基氧化物酞菁；硅酞菁雙甲基氧乙烯； 鈷酞菁；鈷 1，2，3，4，8，9，10，11，15，16，17，18，22，23，24，25-十六氟 _29Η，31Η_ 酞菁；銅酞菁；銅1，8，15，22-四(磺胺二甲唑)酞菁；銅2，9，16，23-四叔丁基49Η，31Η-酞菁；銅 3,10,17,24-四叔丁基-1，8，15，22-四(二甲氨基)49Η，31Η-酞菁；銅 1，4，8，11，15，18， 22，25-八丁氧基-29禮31!1-酞菁；銅 2，3，9，10，16，17，23，24-八(辛氧基)49Η，31Η-酞菁；銅四(4-枯基苯氧基)_ 酞菁；銅 1，2，3，4，8，9，10，11，15，16，17，18，22，23，24，25-十六氟-29Η，31Η-酞菁；聚(銅酞菁)；二鋰酞菁；氯化鎵酞菁；氫氧化鎵酞菁；鐵酞菁；氯化鐵
14酞菁；鐵2，9，16，23_四(磺胺二甲唑)_酞菁；鉛酞菁；四(4-枯基苯氧基)鉛酞菁；鎂酞菁；錳酞菁；氯化錳酞菁；鎳酞菁；氫氧化鎳3，10，17，24-四(磺胺二甲唑)_酞菁；氫氧化鎳4，11，18，25-四(磺胺二甲唑)酞菁；鎳 1，4，8，11，15，18，22，25-八丁氧基-29H，31H-酞菁；氧化錫酞菁；鈦酞菁；二氯化鈦酞菁；釩2，9，16，23-四苯基-29H，3IH-酞菁；釩3，10， 17，24-四叔丁基-1，8，15，22-四(二甲氨基)-29H，3IH-酞菁；其它可能的金屬鈀，鍺，釕， 鉬，陸，釓。萘酞菁均選自，2，3_萘酞菁；2，11，20，四_四叔丁基_2，3_萘酞菁；5，9，14，18， 23，27，32，36-八丁氧基-2，3-萘酞菁；氯化硼sub_2，3-萘酞菁；鈷2，3-萘酞菁；銅2，3-萘酞菁；銅5，9，14，18，23，27，32，36-八丁氧基-2，3-萘酞菁；氯化鎵2，3_萘酞菁；鎳5，9， 14，18，23，27，32，36-八丁氧基_2，3-萘酞菁；二氯化硅2，3-萘酞菁；二羧基硅2，3-萘酞菁；二辛基氧化硅2，3_萘酞菁；硅二(三己基甲硅烷基氧化物)2，3_萘酞菁；錫2，3_萘酞菁；釩2，3-萘酞菁；釩2，11，20，29-四叔丁基_2，3-萘酞菁；鋅2，11，20，四-四-叔丁基-2，3-萘酞菁。如上所述，使用光敏劑的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是，除了上述的觸發(fā)效果，活性氧物種的形成可能進(jìn)一步破壞排列于血管壁的內(nèi)皮細(xì)胞，從而導(dǎo)致加劇了血栓的形成。促凝血?jiǎng)?陰離子脂質(zhì)體另一個(gè)凝血級(jí)聯(lián)的介體是磷脂酰絲氨酸(PQ，一個(gè)通過(guò)一個(gè)ATP依賴的轉(zhuǎn)移酶行動(dòng)不對(duì)稱分布在靜息血小板胞漿膜的陰離子磷脂。血小板活化后，流下稱為血小板衍生微粒，其已經(jīng)失去了不對(duì)稱PS分布，從而PS易位到外胞質(zhì)膜。血小板衍生微粒提供一個(gè)通過(guò)凝血酶原復(fù)合物凝結(jié)增殖所需的陰離子環(huán)境(圖2)。PS結(jié)合凝血酶上的兩個(gè)部位，fXa的兩個(gè)部位，fVa上的四個(gè)部位以誘導(dǎo)這些有助于凝血形成的蛋白質(zhì)的構(gòu)象變化。在這方面，有研究表明，[Chiu GN et al. Biochim Biophys Acta. 2003年06 月 27 ;1613 (1-2) :115-21]， 由PS組成的陰離子脂質(zhì)體，磷脂酸，[Jones ME et a 1. Thromb Res. 1985年9月15 ；39 (6) 711-24]并在較小程度上，磷脂(PG)和磷脂酰肌醇(PI)能夠調(diào)解凝血和凝血酶的形成。在另一實(shí)施例中，由PS，PA, PG或PI陰離子磷脂組成的脂質(zhì)體是用于SSPLT的血栓成分，以促進(jìn)通過(guò)凝血酶原復(fù)合物促進(jìn)激光弓I起的凝血。這類脂質(zhì)體(圖4)可封裝或嫁接本發(fā)明使用的抗纖維溶解劑，促凝血?jiǎng)?，和血小板激?dòng)劑，并且可以如上所述的是空間位阻穩(wěn)定的。在另一實(shí)施例中，該空間位阻穩(wěn)定可以通過(guò)加入2-6%的可光裂解PEG來(lái)實(shí)現(xiàn)，從而使陰離子膜在脫P(yáng)EGy化能后可以接近凝血因子。促凝血?jiǎng)?PE脂質(zhì)體當(dāng)PK，HMWK, fXI，and fXII接觸到帶負(fù)電荷的表面時(shí)，接觸激活途徑開(kāi)始發(fā)生。 這一發(fā)生是循環(huán)脂蛋白顆粒的磷脂(主要是磷脂，PE)相互作用的結(jié)果，如乳糜微粒和極低密度脂蛋白(VLDLs) [Klein S, Arterioscler Thromb Vase Biol. 2001 Oct ；21 (10) 1695-700]。在另一實(shí)施例中，通過(guò)并入PE作為膜的而模仿PE豐富的乳糜微粒和VLDLs的脂質(zhì)體，可以通過(guò)開(kāi)始激活通路用來(lái)增強(qiáng)(ENHANCE)血栓癥。這類脂質(zhì)體可封裝或嫁接本發(fā)明使用的抗纖維溶解劑，促凝血?jiǎng)?，和血小板激?dòng)劑，并且可以如上所述的是空間位阻穩(wěn)定的。在另一實(shí)施例中，所選擇的給藥系統(tǒng)的含PE的脂質(zhì)體可以通過(guò)加入2-6%的可光裂解PEG來(lái)實(shí)現(xiàn)空間穩(wěn)定，并使脂質(zhì)體表面較易接近1 ，HMWK及各個(gè)凝血因子，于脫P(yáng)EGy化時(shí)。促凝血?jiǎng)┲?含Ca21脂質(zhì)體凝血的形成高度依賴胞外鈣離子的存在(圖幻。凝血因子II，VII，IX和X通過(guò)鈣離子與活化血小板的帶負(fù)電荷的膜(即PS)結(jié)合，藉此構(gòu)成fVlla組織因子復(fù)合物和 tenase和凝血酶原復(fù)合物。此外，在血栓形成過(guò)程中的血小板動(dòng)力學(xué)受胞外鈣的超生理濃度的影響，因?yàn)殁}通過(guò)一種包括TXA2合成的正反饋機(jī)制來(lái)擴(kuò)大ADP誘導(dǎo)的血小板聚集。[Hu H et al. Thromb Res. 2005 ； 116 (3) :241-7]。在另一實(shí)施例中，鈣是單獨(dú)異封裝或與本案適用的抗纖維溶解劑，促凝血?jiǎng)脱“寮?dòng)劑一起封裝入所選擇的給藥系統(tǒng)(圖4)。在另一實(shí)施例中，鈣是封裝在如前所述的空間位阻穩(wěn)定的含脂質(zhì)體的陰離子磷脂中。該空間位阻穩(wěn)定可以通過(guò)加入2-6%的可光裂解PEG來(lái)實(shí)現(xiàn)，從而使陰離子膜在脫P(yáng)EGy化能后可以接近凝血因子。血小板激動(dòng)劑除了抗纖溶和促凝給藥系統(tǒng)，還可封裝一個(gè)通過(guò)對(duì)初級(jí)止血發(fā)揮影響而血栓性的藥劑。在傳統(tǒng)意義上的中，初級(jí)(初期)止血是受擾內(nèi)皮方位的血小板附著引起的。該附著過(guò)程是由糖蛋白復(fù)合物讓-以-￥，^^^(在高剪切力的區(qū)域)以及糖蛋白Ia/Iia和纖維蛋白原(在低剪切力的區(qū)域)調(diào)節(jié)的。血小板附著到血管壁上之后，開(kāi)始血小板活化。特征在于細(xì)胞，糖蛋白Ilb/IIIa的表達(dá)式，細(xì)胞表面P-選擇素的細(xì)胞形態(tài)改變，以及α和致密顆粒成分(包括血小板因子4，如血小板反應(yīng)蛋白，纖維連接蛋白和vWF的凝血因子，和初級(jí)/次級(jí)的抗止血物質(zhì)，如ADP，血清素和鈣離子)的釋放。此外，血小板合成和釋放血栓素 Α2 (TXA2)以及血小板活化因子(PAF)，其是有效的血小板活化劑。ADP，血清素，TXA2，和PAF 的釋放促進(jìn)額外的血小板的活化和補(bǔ)充，其與凝血酶結(jié)合發(fā)生是凝血途徑的產(chǎn)物。血小板聚集主要是通過(guò)將纖維蛋白原與相鄰血小板上的糖蛋白Ilb/IIIa結(jié)合來(lái)調(diào)節(jié)。正如上述推測(cè)，可能是激光誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷和熱凝固中熱變性的蛋白質(zhì)的出現(xiàn)最初觸發(fā)了初級(jí) (次級(jí))止血。在另一實(shí)施中，化合物封裝到用于激活或調(diào)解初級(jí)止血增殖的給藥系統(tǒng)中。適合的化合物選自具以下通用化學(xué)式的天然PAF磷脂1-烷基-2-乙?；?sn-甘油-3-膽堿磷酸和1-烷基-2-羥基-sn-甘油-3-膽堿磷酸，合成PAFS包括1_0_十六烷基_2_乙?；?sn-甘油-3-膽堿磷酸，1-0-十八烷基-2-乙?；?sn-甘油-3-膽堿磷酸，1-0-十六烷基-2- 丁?；?sn-甘油-3-膽堿磷酸，1-0-十八烷基-2- 丁酰基-sn-甘油-3-膽堿磷酸，1-棕櫚?；?2-乙?；?sn-甘油-3-膽堿磷酸，1-0-十六烷基-2-油?；?sn-甘油-3-膽堿磷酸，3-0-十六烷基-2-乙?；?sn-甘油-1-膽堿磷酸，1-0-十六烷基-2-乙?；?sn-甘油，1-0-十六烷基-2-羥基-sn-甘油-3-膽堿磷酸，1-0-十八烷基_2_羥基-sn-甘油3-膽堿磷酸，1-0-十六烷基-2-(亞麻酸?；?-sn-甘油-3-膽堿磷酸， 1-0-十六烷基-2-花生四烯?；?sn-甘油-3-膽堿磷酸，1-0-十六-2- 二十碳五烯酰基-sn-甘油-3-膽堿磷酸，1-0-十六-2- 二十二碳六烯醇基-sn-甘油_3_膽堿磷酸， 1-0-十八烷基-2-0-甲基-sn-甘油-3-膽堿磷酸，1-0-十六烷基_2_ 丁烯酰基-sn甘油-3-膽堿磷酸，1-肉豆蔻酰-2- (4-硝基苯琥珀?；?-sn-甘油-3-膽堿磷酸，磷酸腺苷 (ADP)，血清素，凝血酶，血栓素(TXA2)。藥物釋放方式-熱敏脂質(zhì)體
根據(jù)本發(fā)明，給藥系統(tǒng)最好是一經(jīng)觸發(fā)就能夠迅速釋放其內(nèi)容。因此藥物輸送系統(tǒng)，可以具有熱敏性的脂質(zhì)體。 熱敏脂質(zhì)體是一類相對(duì)較新的脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)。高熱已經(jīng)被用于體內(nèi)和體外的許多脂質(zhì)體制劑以產(chǎn)生膜通透性的改變，其將導(dǎo)致加載分子的快速釋放。熱誘導(dǎo)藥物釋放集中在出現(xiàn)在磷脂混合系統(tǒng)的晶界的周圍，該磷脂混合系統(tǒng)與相對(duì)有序的凝膠(Li3)和相對(duì)無(wú)序的液態(tài)晶體(LA)階段或在單核細(xì)胞增多以及經(jīng)歷的主要過(guò)渡階段(Tm)同時(shí)存在。一旦到達(dá)Tm，脂鏈的構(gòu)型熵的增益驅(qū)動(dòng)鏈融化過(guò)渡，其主要導(dǎo)致在旋轉(zhuǎn)異構(gòu)化(從一個(gè)TRANS 過(guò)渡到旁式構(gòu)象)和水分子的順序(即膜的水合狀態(tài))的改變。這接著會(huì)導(dǎo)致膜表面跨越分子的包裝缺陷，藉此極性和電荷的分子可以通過(guò)向溫誘導(dǎo)空腔進(jìn)入疏水核心。其次，細(xì)胞膜的通透性的增加與橫向壓縮性的增加相關(guān)，即在或接近Tm的脂質(zhì)鏈截面積的變化(或每脂質(zhì)分子體積)，并在T米附近。根據(jù)理論模型，這些在雙層的臨界密度振蕩在Tm最大， 降低了離子擴(kuò)散跨膜自由能障，并且據(jù)推測(cè)可以降低分子化合物——一種可以(用數(shù)學(xué)方法)推斷到的Tm上下幾個(gè)。C的溫度范圍的效果。在近臨界狀態(tài)的極性頭基之間的間距將碳?xì)浠衔锉┞队贖2O,這與半球形腔的暴露正好一致，從而可以作為滲透性通道。根據(jù)本案的較佳實(shí)施例，至少部分給藥平臺(tái)由熱敏脂質(zhì)體組成。鑒于在光凝固過(guò)程中腔內(nèi)損害的熱性質(zhì)，封裝在水隔室的藥物活性化合物可以很容易從脂質(zhì)體的給藥系統(tǒng)釋放。在一第一實(shí)施例中，觸發(fā)機(jī)制是基于溫敏性，其中磷脂是有脂質(zhì)體組成的，該脂質(zhì)體在體溫以上產(chǎn)生一個(gè)Tm，尤其在38°C和45°C之間，特別是在約42°C。脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)的熱敏特性最好源自納入1，2-二棕櫚酰-sn-甘油-3-磷脂酰膽堿(DPPC)為主要成分的磷脂(Tm值41°C)。在另一實(shí)施例中，具同相變溫度(即具有不同頭基和/或酰基鏈長(zhǎng))的磷脂可以并入脂脂質(zhì)體配方以調(diào)整系統(tǒng)的Tm。DPPC最好與一個(gè)變量酰基鏈長(zhǎng)為士2個(gè)碳原子的卵磷脂的摩爾分?jǐn)?shù)混合，以確保理想的混合階段，并延長(zhǎng)Tm的溫度肩膀(TEMPERATURE SHOULDER)。在另一實(shí)施例中，熱敏脂質(zhì)體通過(guò)并入2-6mol%的聚乙二醇獲得空間位阻穩(wěn)定， 從而延長(zhǎng)循環(huán)時(shí)間。除了的由卵磷脂組成的傳統(tǒng)熱敏脂質(zhì)體，含溶血軟磷脂的熱敏脂質(zhì)體已被發(fā)現(xiàn)可以提高包括在脂質(zhì)體化合物的釋放動(dòng)力。在另一實(shí)施例中，溶血磷脂酰膽堿，溶血磷脂酰乙醇胺，溶血磷脂酰甘油，溶血磷脂酰絲胺酸，溶血磷脂酸，或溶血磷脂的溶血磷脂質(zhì)的摩爾分?jǐn)?shù)的納入脂質(zhì)體的DDS以加快釋放動(dòng)力。待治療血管的溫度通過(guò)第二個(gè)激光脈沖(第一個(gè)激光脈沖用于光凝誘導(dǎo))或其它熱源，如紅外線(IR)光或加熱墊，可以提高到Tm。藥物釋放方式-縮酵磷脂脂質(zhì)體在第二個(gè)實(shí)施例中，觸發(fā)機(jī)制是基于含縮醛磷脂脂質(zhì)體中的光氧化誘導(dǎo)的膜滲透?？s醛磷脂比如1-0-(1’ -Z-十六碳)-2-棕櫚酰基-sn-甘油-3-膽堿磷酸))和雙縮醛磷脂(比如1，2_ 二 _0-(1’ -Z-十六碳)-sn-甘油-3-膽堿磷酸)，通過(guò)酸或氧化誘導(dǎo)進(jìn)行乙烯基團(tuán)的裂解(該裂解導(dǎo)致膜不穩(wěn)定和脂質(zhì)體內(nèi)容的釋放)，形成單鏈表面活性劑。 合成縮醛磷脂酰膽堿和雙縮醛磷脂酰膽堿的方法在業(yè)內(nèi)是已知的，例如在下面文獻(xiàn)中就有描述[Rui YJetal. J Organic Chem. 1994 ；59 (19) :5758-5762] and [Shin J et al. J Org Chem. 2003Aug 22 ；68 (17) :6760-6]。
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為了產(chǎn)生1O2和活性氧物種(ROS)，在給藥系統(tǒng)中必須加入光敏劑以將能量轉(zhuǎn)移到氧分子。迄今為止，已使用過(guò)三種不同的光敏劑，包括酞菁鋅，八丁氧基酞菁錫，細(xì)菌葉綠素 a，其產(chǎn)生感光劑的最快光敏釋放，從而在不到20分鐘內(nèi)讓鈣黃綠素完全釋放。然而，在本案中只用的任何光敏劑都會(huì)構(gòu)成一個(gè)合適的化合物，通過(guò)脂質(zhì)膜的光氧化不穩(wěn)定而調(diào)解觸發(fā)藥物的釋放。藥物釋放方式-光聚合膜脂在另一實(shí)施例中，觸發(fā)機(jī)制是基于膜脂的光聚作用。Bondurant和0’ Brien [J. Am. Chem. Sec. 1998，120，13541-13542]表明，由紫外線照射產(chǎn)生的具 1，2_ 二 [10-2，， 4’ -己二烯基)癸酰氨sn-甘油-3-膽堿磷酸(bis-SorbPC，山梨酰卵磷脂)的膜的交叉連接可能破壞某些聚乙二醇脂質(zhì)體并導(dǎo)致雙層膜通透性增加28000倍[Bondurant乙等。 [Bondurant Betal. Biochim Biophys Acta. 200IMar 9 ；1511(1) :113-22 ；Spratt Tetal. Biochim Biophys Acta. 2003 年 4 月 1 日；1611 (1-2) :35-43]。同樣，含山梨酰卵磷脂的脂質(zhì)體可以因?qū)1，1’ -雙十八烷基-3-3-3’ _3’ -四甲基吲哚羰基花青(DiI)或二硬脂?；胚狒驶ㄇ?distearoyl indocarbocyanine) (DiIC(18) —起封裝入磷脂雙分子層而被可見(jiàn)光破壞穩(wěn)定。這種技術(shù)和脂質(zhì)體的制備已在下面文獻(xiàn)有描述[Mueller A et al.Macromolecules. 2000 Jun 27 ；33(13) :4799_4804]and[Miller CR et al. FEBS Lett.2000 Feb 4 ；467(1) :52-6]。定位-抗體較佳的是，本案的給藥系統(tǒng)具有目標(biāo)定位特異性。導(dǎo)引脂質(zhì)體到目標(biāo)地點(diǎn)可以通過(guò)抗體，F(xiàn)ab’片段或多肽和所選擇的給藥系統(tǒng)的連接(圖4)來(lái)實(shí)現(xiàn)，最好連接到用于空間穩(wěn)定的聚合物鏈其化學(xué)修飾末端，如PEG?？贵w，F(xiàn)ab’片段或多肽最好是針對(duì)血小板活化特定的抗原表位的，包括CD41 (糖蛋白Lnb/IIIa)和CD62P(P_選擇素)，或是針對(duì)對(duì)纖維蛋白的。同樣，激活的內(nèi)皮細(xì)胞針對(duì)激活這些與白細(xì)胞粘附分子(比如E-選擇素和 VCAM-I)表達(dá)式有關(guān)的細(xì)胞，其有利于白血球附著到激活內(nèi)皮細(xì)胞以及之后的白血球滲出。 在另一實(shí)施例中，所選擇的給藥系統(tǒng)可以通過(guò)針對(duì)活化內(nèi)皮細(xì)胞特定抗原表位(包括E-選擇素，ICAM-l，and VCAM-1)的抗體，F(xiàn)ab’片段或多肽的結(jié)合來(lái)鎖定照射組織內(nèi)的活化內(nèi)皮細(xì)胞。定位-聚乙二醇化陰離子脂質(zhì)體較佳的是，磷脂合并，維持系統(tǒng)的熱敏性能，空間位阻穩(wěn)定，增強(qiáng)活化血小板親和力(而不是靜止休眠的血小板)。根據(jù)本發(fā)明令人驚訝的發(fā)現(xiàn)是，當(dāng)脂質(zhì)體由46mol%的 DPPC, 50mol % 的 1，2- 二棕櫚酰 _sn_ 甘油-3-磷酸甘油(DPPG)，和 4mol % 的 DSPE-PEG 構(gòu)成時(shí)，本發(fā)明的給藥系統(tǒng)是有限鎖定活化的血小板，即血栓中發(fā)現(xiàn)的血小板，而不是靜止休眠的血小板(圖6和7)。雖效果差一些，這也同樣適用于由46mol%的DPPC，50mol%的1， 2- 二棕櫚酰-sn-甘油-3-磷酸絲氨酸(DPPS)，和4mol %的DSPE-PEG (如圖6)組成的脂質(zhì)體。根據(jù)另一實(shí)施例，給藥系統(tǒng)的目標(biāo)鎖定可以通過(guò)具有一個(gè)磷酸甘油和/或磷酸絲氨酸頭基和2-6mol%的DSPE-PEG的任何酰基鏈長(zhǎng)度的磷脂來(lái)實(shí)現(xiàn)。誘導(dǎo)藥物的釋放治療方法中最好包含一個(gè)有利于熱誘導(dǎo)藥物釋放和光敏效果的臨床工具。在第一實(shí)施例中，集成到一個(gè)面板的發(fā)光二極管(LED)，在脈沖染料激光治療和給藥系統(tǒng)在半光凝血管形成積累后，將用來(lái)照射，在照射激光治療的鮮紅斑痣。發(fā)光二極管發(fā)出血紅蛋白優(yōu)先吸收的波長(zhǎng)，以是血液到達(dá)熱敏脂質(zhì)體(即藥物釋放)的相變溫度以及光化誘導(dǎo)ROS的產(chǎn)生(即誘發(fā)凝血和細(xì)胞毒作用)。前者適合的波長(zhǎng)為600-620納米，而后者適合的波長(zhǎng)為能被封裝光敏劑最大吸收的波長(zhǎng)。入射光的路徑最好是垂直于皮膚表面。該面板最好是可以全方向調(diào)節(jié)，這樣LED就可以靠近的鮮紅斑痣而不會(huì)引起病人的不適或位移。在第二實(shí)施例中，該面板的發(fā)光二極管發(fā)出的波長(zhǎng)為被血紅蛋白優(yōu)先吸收，藉此誘導(dǎo)藥物從熱敏脂質(zhì)體釋放。在第三實(shí)施例中，該面板的發(fā)光二極管發(fā)出的波長(zhǎng)應(yīng)該為能封裝的光敏劑最大吸收，藉此誘導(dǎo)產(chǎn)生ROS和血栓，以及產(chǎn)生局部的細(xì)胞毒作用。在另一實(shí)施例中，熱誘導(dǎo)藥物釋放和ROS的產(chǎn)生可以通過(guò)其它形式的光源來(lái)調(diào)節(jié)，比如紅外燈，激光，或氙汞燈為基礎(chǔ)的光源系統(tǒng)。HfMt -導(dǎo)向 SSPU(^iirwmmm^ff)為了達(dá)到最佳的治療效果，理想的選擇是使用目標(biāo)血管手術(shù)周圍成像設(shè)備，視野內(nèi)的血管的激光照射設(shè)備，以及局部熱感應(yīng)設(shè)備。合適的成像設(shè)備如Microscan公司的[美國(guó)專利 US2006241364，US2006184037, US2007232874, US2009012378]中揭露的設(shè)備，可以加以改進(jìn)成一個(gè)同時(shí)具有成像，輻射和熱感應(yīng)的一體手持設(shè)備。該成像組件可以包括一個(gè)， 用于正交偏振光譜成像[Heger M etal.，Opt Express 2005 Feb 7 ； 13 (3) :702-15]或用于的暗視野成像的放置于探頭頂端的LED燈環(huán)[Goedhart PT et al.，Opt Express. 2007 Nov 12 ;15(23) :15101-14],形狀的寬帶光源。照射組件包括具有基于光纖激光系統(tǒng)的手持設(shè)備，藉此成像組件光路和激光光路可以(部分)相同，并可以在用于成像的射出光的路徑上設(shè)置一個(gè)反射鏡。鏡子反射波長(zhǎng)(范圍)必須對(duì)應(yīng)激光的波長(zhǎng)，而不會(huì)干擾用于成像的射出光的傳輸。該熱誘導(dǎo)組件可以一個(gè)用于正交偏振光譜成像中作為光源的寬帶光源[Heger Metal. , Opt Express 2005 Feb]或用于的暗視野成像的放置于探頭頂端的LED燈環(huán)系統(tǒng) [Goedhart PT et al. ,Opt Express. 2007 Nov 12 ；15(23) :15101-14]，使發(fā)出的光波波長(zhǎng)大于600nm(例如，近紅外光)。這種裝置可以在SSPLT(特定位置的藥物激光治療)中和光增透劑結(jié)合使用(在 [W02005062938]中有敘述)用于1，定位目標(biāo)血管2，通過(guò)激光照射以及給藥系統(tǒng)的活化和釋放來(lái)治療目標(biāo)血管3，通過(guò)血流成像來(lái)確定激光治療的效果，及4)通過(guò)血流成像來(lái)確定藥物干預(yù)的效果。治療后血管生成妨礙物和新血管生成在[Heger etal. , Thromb Haemost. 2005 Feb ；93 (2) :242-56]中描述了兩種可以缺氧驅(qū)動(dòng)的裝置，其可能會(huì)妨礙療效，即血管生成，即從現(xiàn)有的血管叢形成新血管，以及新血管生成，即在沒(méi)有現(xiàn)有的血管網(wǎng)的情況下形成新血管。激光治療后損傷清除是通過(guò)消除發(fā)炎的光凝血管來(lái)減少真皮層血液量而獲得的結(jié)果。因此，激光治療后血管生成以及新血管生成可能受到抑制，以防止在治療后皮膚的血液量增加，從而優(yōu)化治療結(jié)果[Heger et al. ,Thromb Haemost. 2005 Feb ；93 (2) J42-56]。一些研究表明，治療后血管生成抑制劑的局部應(yīng)用改善了被脈沖染料激光照射過(guò)的鮮紅斑痣病變的清除。[e.g.，Wumg TL et al.,Lasers Surg Med. 2008 Jan ；40(1) :1_5]。過(guò)多的分子調(diào)節(jié)參與到血管生成和以及新血管生成，其中一些在這兩個(gè)進(jìn)程中都發(fā)揮了作用。這些分子包括來(lái)自用于降低細(xì)胞外基質(zhì)以形成血管官腔的單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞的蛋白酶(如纖維蛋白溶酶)。凝血酶，纖維蛋白降解產(chǎn)物，單核細(xì)胞趨化蛋白l(MCP-I)， 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)，以及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β (TGF-β)，來(lái)自血小板衍生性生長(zhǎng)因子都有助于炎性細(xì)胞的補(bǔ)充。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子以及基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-I(SDF-I)與新血管生成過(guò)程中形成內(nèi)皮單層的內(nèi)皮先驅(qū)細(xì)胞(EPCs)的補(bǔ)充有關(guān)。此外，細(xì)胞激素如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)，白細(xì)胞介素-6(IL-6)，IL-8和MCP-I是負(fù)責(zé)將單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)或EPCs分化成成熟的內(nèi)皮細(xì)胞。專門針對(duì)這些配體及其受體的藥物化合物(如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體Flt-I和Flt-1/KDR)可能會(huì)因此被用來(lái)阻止血管生成和新血管生成。同樣，負(fù)責(zé)將EPCs附著到細(xì)胞外基質(zhì)的附著分子，比如整合素ανβ3，ανβδ, α 2β 1及α 5β 1，，可能會(huì)妨礙可激光治療后的血管生成和新血管生成過(guò)程。在另外的實(shí)施例中，能夠抑制激光治療血管和血管有關(guān)的病理中血管生成和新血管生成的化合物可應(yīng)用于激光治療前，后，中能夠的局部或全身注射。該化合物可以以未封裝形式或封裝形式施用。對(duì)于任何現(xiàn)有平臺(tái)的這些化合物，包括脂質(zhì)體，聚合物藥物載體， 細(xì)胞和鬼細(xì)胞，可以進(jìn)行封裝。此外，血管生成和新血管生成的抑制劑可以通過(guò)圖4中所述的任何手段嫁接到給藥系統(tǒng)的表面。SSPLT(特定位置的藥物激光治療)的應(yīng)用范圍本發(fā)明是關(guān)于血管和血管相關(guān)病癥的治療準(zhǔn)備藥劑的給藥系統(tǒng)的使用。病理的一個(gè)具體實(shí)施例為一個(gè)葡萄酒色斑。其它的病理表現(xiàn)還包括血管瘤，毛細(xì)血管擴(kuò)張，化膿性肉芽腫，靜脈湖泊，匐行性血管瘤。其它可以同本發(fā)明給藥系統(tǒng)光熱解治療的眼內(nèi)血管或血管方面的病變，比如可以是，脈絡(luò)膜新血管生成(如濕性黃斑變性，脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎，高度近視，血管樣條紋癥，眼組織胞漿菌病的某些形式)，視網(wǎng)膜大動(dòng)脈瘤，眼內(nèi)黑色素瘤，視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，角膜血管生成，中心性漿液性脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜病變等?？梢杂帽景l(fā)明治療的胃腸道手術(shù)方面的血管或血管方面的病變包括藍(lán)色橡皮大皰痣綜合征，胃竇血管擴(kuò)張，輻射直腸結(jié)腸炎，遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥本發(fā)明的藥物輸送系統(tǒng)還可以用于去除高度血管實(shí)體腫瘤，以及在腦外科手術(shù)進(jìn)行復(fù)雜的動(dòng)靜脈畸形的微創(chuàng)治療。最佳實(shí)施例以下為根據(jù)權(quán)利要求項(xiàng)所述的本案較佳實(shí)施例的概述。本發(fā)明是關(guān)于用于治療血管和血管相關(guān)病癥的給藥系統(tǒng)，其包含一個(gè)給藥平臺(tái)， 該給藥平臺(tái)包括至少一個(gè)能在待治療血管血栓的形成和維護(hù)施加影響的化合物。該給藥平臺(tái)可以是脂質(zhì)體，高分子藥物載體，細(xì)胞和鬼細(xì)胞。其最好是空間阻位穩(wěn)定的，這可以通過(guò)很多方法實(shí)現(xiàn)(穩(wěn)定)。當(dāng)該平臺(tái)包括脂質(zhì)體時(shí)，該空間位阻穩(wěn)定可以通過(guò)在脂質(zhì)體表面嫁接聚乙二醇(PEG)或列入共價(jià)連接的聚合物的脂質(zhì)體，嵌段共聚物，和/或多嵌段共聚物的脂質(zhì)體來(lái)實(shí)現(xiàn)，該多嵌段共聚物可以是聚(乙烯醇)(PVA)，聚縮水甘油，被激活為琥珀酰亞胺酯并和含胺鍵(通常是聚乙烯)錨定的聚(N-乙烯基吡咯烷酮)(PVP)，被激活為琥珀酰亞胺酯并和含胺鍵(通常是聚乙烯)錨定的聚(N-丙烯)嗎啉(PAcM)，聚乙基-2-惡唑啉)(PEOZ)，聚O-甲基_2_惡唑啉)(PMOZ)，聚丙烯酰胺，聚(N-異丙基丙烯酰胺)(NIPAM)，聚[N_(2_羥丙基)甲基丙烯酰胺](HPMA)，聚(苯乙烯-順丁烯二酸/ 二酸酐)(SMA)，聚(二乙烯基醚順丁烯二酸酐) (DIVEMA)，和/或以下形式的疏水改性多糖茁霉多糖，葡聚糖，甘露聚糖和/或聚唾液酸， 或以下葡萄糖醛酸之一棕櫚酰葡萄糖醛酸苷(PGIcUA)，棕櫚酰半乳糖醛酸苷，或者選自單唾液神經(jīng)節(jié)苷酯(GMl)，GM3的唾液酸衍生物。當(dāng)該平臺(tái)包括部分由陰離子成分組成的脂質(zhì)體時(shí)，該空間位阻的穩(wěn)定可以通過(guò)由以下物質(zhì)的(電吸引力)的吸附來(lái)實(shí)現(xiàn)，包括聚合物，陽(yáng)離子殘基組成的多嵌段共聚物(該陽(yáng)離子殘基可以是陽(yáng)離子季銨化聚(4-乙烯基吡啶)(PEVP)，聚(乙烯亞胺)(PEI)，聚甜菜堿(PB)。給藥平臺(tái)包括脂質(zhì)體，并且能夠?qū)ρㄐ纬珊?或維護(hù)施加影響的化合物被封裝在水隔室和/或脂質(zhì)的磷脂雙層，和/或耦合(連接)到空間位阻穩(wěn)定計(jì)和/或連接到脂質(zhì)體雙層。該化合物可以被耦合(連接)到空間位阻穩(wěn)定計(jì)的末端或側(cè)鏈。另外，該化合物也可以通過(guò)通過(guò)一個(gè)連接器或錨耦合(連接)到脂質(zhì)雙分子層。該化合物對(duì)待治療血管中血栓的形成和/或維護(hù)適當(dāng)施加影響，可以在纖溶途徑，組織因子，接觸激活途徑(次級(jí)止血)，或血小板功能(初級(jí)止血)。因此，該化合物可能的纖維蛋白溶酶原酶抑制劑，為脂肪酸之一，比如花生四烯酸，油酸，硬脂酸，或者是合成纖溶酶(原形式)抑制劑，其中包括氨甲環(huán)酸(TA)，ε-氨基己酸(ACA)，ρ-氨甲苯酸(AMBA)，4-氨甲基-雙環(huán)-2，2，2壬酸(AMBOCA)?；蛘撸摶衔餅橐环N纖維蛋白溶酶抑制劑，比如純化和/或重組α 2抗纖溶酶，α 2抗纖溶酶多肽，純化和 /或重組凝血酶激活的纖溶抑制物TAFI和抑肽酶。在另一實(shí)施例中，該化合物是組織型纖溶酶原激活物(tPA)或尿激酶型纖溶酶原激活物(UPA)的抑制劑。該組織型纖溶酶原激活(tPA)抑制劑可以是以下制劑之一分離純化的人類PAI1，分離和純化的人類PAI2，重組人類PAI1，重組人類PAI2，修改人類PAI1， 修改人類PAI2，抑制抗體或其針對(duì)tPA的衍生物，多肽，寡肽或短肽，特別是在2-10氨基酸肽，抑制tPA和uPA的抑制劑，包括分離純化人類PAI1，分離和純化的人類PAI2，重組人類 PAI1，重組人類PAI2，修飾人類PAI1，修飾人類PAI2，抑制抗體或及其針對(duì)uPA的衍生物， 抑制抗體或及其針對(duì)uPA受體(uPAR)的衍生物，多肽，寡肽或短肽，特別是在2-10氨基酸肽，其能抑制uPA的。當(dāng)該化合物為PAIl or PAI2的激動(dòng)劑時(shí)，該針對(duì)PAIl激動(dòng)劑是一種人工合成的肽是玻連蛋白碎片s362-A38°的衍生物，簡(jiǎn)稱為BP4，或者是通過(guò)結(jié)合蛋白酶活化受體-1 (PAR-I)而促進(jìn)PAI2分泌的人工合成肽，特別是SFLLRN，針對(duì)PAI2的激動(dòng)劑是促進(jìn)PAI2分泌的人工合成肽.特別是SLIGKV，其結(jié)合于蛋白酶活化受體_2 (PAR-2)，或者是一種在生理?xiàng)l件下可以防止PAI2聚合的人工合成肽，特別是TEAAAGTGGVMTG(RCL-PAI2) andSEAAASTAVVIAG(RCL-AT)。該給藥系統(tǒng)還可進(jìn)一步包括一個(gè)通過(guò)作用于組織因子和接觸激活途徑而導(dǎo)致 (誘導(dǎo))促凝血反應(yīng)的制劑。這些制劑是次級(jí)止血系統(tǒng)的激動(dòng)劑，可以是凝血因子11(a)， 凝血因子III (組織因子，凝血因子V(a)，凝血因子VII (a)，凝血因子VIII (a)，凝血因子 IX (a)，凝血因子X(jué) (a)，凝血因子X(jué)I (a)，凝血因子X(jué)II (a)，凝血因子X(jué)III (a)，或者是接觸激活途徑的調(diào)節(jié)劑，比如前激肽釋放酶0 )，激肽釋放酶，分子量激肽原(HMWK)。
在另一實(shí)施例中，該給藥平臺(tái)包括具有光敏劑的脂質(zhì)體。該光敏劑是酞菁，萘酞菁，氯，菌綠素和內(nèi)源性卟吩(如圖5所示)，其可以被一個(gè)或多個(gè)r-基團(tuán)取代，該r-基團(tuán)包括h，f, cf(cf3)2, o(ch2)ncf3, cl, br, chch2, (ch2)nch3, (ch2)ncooh, conh(ch2)nnh2, (ch2) nc0nhch2ch2nh2, conh (ch2) nch (nh2) c00h, ch2c0nhch (ch2cooh) cooh, 0 (ch2) nch3, s (ch2) nn (ch3)2, so2nh (ch2) nch3, so2nh (ch2) nn (ch3)2, so2n [ (ch2) nch3]2, So2NHCH2CH(CH2CH3) (ch2) nch3, c(ch3)3, 0c[(ch2)nch3]3, och [ch (ch3)2j2, 0 (ch2) nn (ch3) 2, 0 (ch2) nn (ch3) 3, sc6h5, oc6h5, o(c6h4) c [(ch3)2] (c6h5), o(c6h3) (cooh)2, o(c6h3) [coo (ch2) nch3]2, c6h5, so2nhch(ch3) ch2 (c6h3) (och3)2, so3, so2cl，n(ch3)2, cooh, no2, ch3, conh2，ch2nh2。并且 r，-基團(tuán)選自以下基團(tuán)之一 h，ch3, a1c1, a10h, alosi (ch3)3, aloso3, co, cu, li，gaoh，gacl，fe，fecl，feo2, pb, mg, mn, mncl，sich3cl, si(oh)2, si(cl)2, si {0c[ (ch2)nch3]3}2，si [coco(c6h4) (ch2)nch3]2, si [osi (ch3) 2 (ch2) nn (ch3) 2] oh, si
2, sich3, si [osi (ch3)2c(ch3)2c(ch3)j2，ni, sno, sn(cl)2, ti (cl)2, tio, v0, zn, ag, cd, ge, incl0另外，該給藥平臺(tái)可設(shè)有目標(biāo)定位分子。該目標(biāo)分子可以是抗體或其衍生物，特別是針對(duì)血小板抗原表位或纖維蛋白的fab’碎片。該血小板抗原表位可以是cd41或cd62p。在已特別實(shí)施例中，該給藥平臺(tái)由脂質(zhì)體和以下脂質(zhì)體之一的頭基形成，包括磷脂酰膽堿，磷酸膽堿，磷脂酰乙醇胺，磷脂酸，磷脂酰甘油，磷脂酰絲氨酸，磷脂酰乙醇胺，磷脂酰肌醇，鞘磷脂，甘油磷酸，甘油，乙二醇，沒(méi)食子酸丙三醇和甘油-3-琥珀酸。該脂質(zhì)?；湠橐韵轮皇；?13碳)，十四?；?14碳)，肉豆蔻烯?；?14碳，順式烯烴在 δ 9)，反肉豆蔻烯酰基(14碳，反式烯烴在δ 9)，十五?；?15碳)，十六?；?16碳)，棕櫚油?；?16碳，順式烯烴在△ 9)，反棕櫚油酰基(16碳，反式烯烴在△ 9)，植烷?；?16碳， 甲基在δ3，7，11，ι5)，十七酰基(17碳)，十八酰基(18碳)，十八烯?；?18碳，順式烯烴在δ 6)，油?；?18碳，順式烯烴在δ 9)，反油酰基(18碳，反式烯烴在δ 9)，亞油酸?；?(18碳，順式烯烴在δ 9，12)，亞麻?；?18碳，順式烯烴在δ 9，12，15)，十九酰基(19碳)， 二十?；?20碳)，二十烯?；?20碳，順式烯烴在Δ 11)，花生四烯?；?20碳，順式烯烴在δ 5，8，11，14)，二十一酰基(21碳)，二十二?；?22碳)，二十二碳烯?；?22碳，順式烯烴在δ 13)，二十二碳六烯醇基(22碳，順式烯烴在δ 4，7，10，13，16，19)，二十三?；?23 碳)，二十四酰基( 碳)，二十四碳烯酰( 碳，順式烯烴在δ 15)。該脂質(zhì)體可以是單?；?1-?；?2-羥基-sn-甘油-3頭基)或二酰基(1_?；?2-?；?sn-甘油-3頭基)結(jié)構(gòu)。在另一實(shí)施例中，該給藥平臺(tái)包括脂質(zhì)體和至少構(gòu)成該脂質(zhì)體的部分磷脂，該脂質(zhì)體是二棕櫚酰磷脂酰甘油(dppg)。該給藥平臺(tái)也可以包含熱敏脂質(zhì)體。因此，這些脂質(zhì)體可以包括相變溫度高于體溫的磷脂，特別是相變溫度介于37°c和45°c之間，特別是41°c。在一較佳實(shí)施例中，至少形成脂質(zhì)體的部分磷脂是二棕櫚酰磷脂酰膽堿(dppc)。本發(fā)明進(jìn)一步是關(guān)于治療血管和血管相關(guān)病癥的準(zhǔn)備藥劑的給藥系統(tǒng)。該病理通常是葡萄酒色斑，但也可能是皮膚病癥，比如血管瘤，毛細(xì)血管擴(kuò)張，化膿性肉芽腫，靜脈湖，匐行性血管瘤。也可以是眼科病變，如脈絡(luò)膜新血管生成(如濕性黃斑變性，脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎，高度近視，血管樣條紋，眼組織胞漿菌病的某些形式)，視網(wǎng)膜大動(dòng)脈瘤，眼內(nèi)黑色素瘤，視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，角膜血管生成，中心性漿液性脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜病變；或者是胃腸手術(shù)方面的藍(lán)色橡皮大皰痣綜合征，胃竇血管擴(kuò)張，輻射直腸結(jié)腸炎，遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥。除以上之外，本發(fā)明也可以不用施用給藥平臺(tái)來(lái)施用該能否對(duì)待治療血管中的血栓的形成和/或維護(hù)產(chǎn)生作用的化合物。一個(gè)合適的例子是未封裝形式的抗纖維蛋白溶解劑氨甲環(huán)酸(TA)的施用。適當(dāng)，該化合物為佐劑數(shù)量。本發(fā)明將在以下實(shí)施例中做進(jìn)一步說(shuō)明，而這些實(shí)施例并非用來(lái)限制本發(fā)明。請(qǐng)參考以下圖示1-11和表1-2。


圖和表格說(shuō)明圖1 :5，6_羧基熒光素(CF)聚合-標(biāo)定血小板用活體熒光顯微鏡觀察到的在倉(cāng)鼠背側(cè)皮膚折疊靜脈激光引起的損傷，沒(méi)有(A-F)，有(G-L)預(yù)先注入肝素(HEP)。在㈧中的明亮的橢圓形是激光光斑。A=細(xì)動(dòng)脈，V=小靜脈，箭頭表示流動(dòng)方向。相對(duì)激光脈沖的時(shí)間顯示在右上角(min:sec)。箭頭(B)表示為有熱敏脂質(zhì)體釋放的熱導(dǎo)CF釋放導(dǎo)致的高熒光殘留區(qū)。箭頭(G)指向的是殘余熱凝固。病變尺寸的mean士SD(平均加減標(biāo)準(zhǔn)差) 最小和最大值作為羧基熒光素標(biāo)記血小板(M)和肝素(N)里出現(xiàn)的羧基熒光素標(biāo)記的血小板的時(shí)間函數(shù)。在(0)中，病變的相對(duì)增長(zhǎng)描繪成一個(gè)時(shí)間的函數(shù)。垂直線表示CF(淡) 和CF+H印(深暗)的增長(zhǎng)高峰。圖2 次級(jí)止血接觸激活，組織因子和凝血的共同途徑。當(dāng)前激肽釋放酶，高分子量激肽原，凝血因子X(jué)I和凝血因子X(jué)II接觸到帶負(fù)電荷的表面時(shí)，該接觸激活途徑被激活 (啟動(dòng))。組織因子途徑與損傷的部位開(kāi)始啟動(dòng)，以組織因子的釋放作為反應(yīng)。羅馬數(shù)字表示各自凝結(jié)因子，而"a "表示一個(gè)激活狀態(tài)。因子X(jué)II和TF需要陰離子磷脂(如磷脂質(zhì)絲胺酸和磷脂酰肌醇)增殖凝血。陰離子磷脂的存在，還需要tenase，凝血酶原，和TF-VIIA 復(fù)合物的形成。血栓，其是血小板聚集(初級(jí)止血)和纖維蛋白形成的結(jié)果，是酶裂解成纖維蛋白溶解后的纖維蛋白降解產(chǎn)物。纖維蛋白溶解由組織型纖溶酶原激活物(tPA)和尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)將纖維蛋白溶酶原轉(zhuǎn)換成纖溶酶而引起的，是一個(gè)被纖溶酶原激活物抑制劑(PAI) I和2，和fXIa，fXIIa,激肽釋放酶(由前激肽釋放酶，PK，通過(guò)fXIIa形成)抑制的過(guò)程。接著，血栓的纖維蛋白溶酶水解破裂被α2-抗纖溶酶(α-2-ΑΡ)，Ci2-巨球蛋白(α-2-Μ)，和凝血酶激活的纖溶抑制物(TAFI)抑制。生理抗凝血?jiǎng)╋@示在右上角， 其包括抗凝血酶III (ATIII)，蛋白C(PC)和蛋白S(PS)化合作為輔助因子，蛋白質(zhì)Z(PZ)， 蛋白質(zhì)Z依賴性蛋白酶抑制劑(ZPI)和組織因子途徑抑制物(TFPI)。圖3 傳統(tǒng)的選擇性光熱(SP)與特定地點(diǎn)的藥物激光治療(SSPLT)的原則對(duì)比。 在SP中，用黃色激光(A)照射難治性葡萄酒色斑(PWS)會(huì)導(dǎo)致半阻塞的光凝(B，插入)和血栓形成⑶。在10分鐘之內(nèi)，血栓就會(huì)因?yàn)槔w溶和剪應(yīng)力增加(C)而減弱(惡化)，導(dǎo)致病變漂白不最理想的損壞側(cè)面(D:l，熱凝固；2，血栓；3，專利內(nèi)腔)。SSPLT是一種治療難治性鮮紅斑痣的替代方法，據(jù)此，SP就與血栓和/或含有抗纖維蛋白溶解藥物載體的全身給藥相結(jié)合。一經(jīng)激光照射(E)，藥物載體就積累在血栓(F)里和其內(nèi)容通過(guò)第二個(gè)刺激(例如，熱)(G)獲得釋放，導(dǎo)致局部高凝血及血管腔(H)的堵塞。損害側(cè)面(I)符合最佳的皮損漂白預(yù)后。圖4 特定位置藥物激光治療脂質(zhì)體可能配方的基本圖示?？赡艿闹|(zhì)體配方被分成四個(gè)主要類別傳統(tǒng)的脂質(zhì)體，陰離子脂質(zhì)體，空間位阻穩(wěn)定脂質(zhì)體，目標(biāo)定位脂質(zhì)體。 每種主要類比都可以包含任何以下分類A)藥物類型1。親水性藥物(如氨甲環(huán)酸)；2。 疏水性藥物(例如，光敏劑)；3。官能光敏劑；4。離子(如鈣)；B)藥物嫁接方法5。(共價(jià))附件組件(磷酸)脂質(zhì)；6。(共價(jià)鍵)連接到一個(gè)錨定分子(如膽固醇)7。(共價(jià)) 附件一種聚合物側(cè)鏈(如聚乙二醇，聚乙二醇)8。(共價(jià)鍵)連接到一個(gè)功能化的聚合物的末端；C)膜的成分9。磷脂酰膽堿；10。具陰離子摩爾分?jǐn)?shù)的磷脂酰膽堿(磷酸)，血脂； D)空間位阻穩(wěn)定方法11。單鏈聚合物(如聚乙二醇)；12。多鏈聚合物；13。多塊共聚物 (如二或三嵌段共聚物)；14。可光裂解聚合物(如聚乙二醇縮醛磷脂)；15。吸附聚合物 (到陰離子膜表面上)；E)目標(biāo)定位方法16。抗體；17。抗體碎片(例如Fab’碎片)；18。 肽。各主要種類不是相互唯一的，例如，空間位阻穩(wěn)定的脂質(zhì)體可能含有陰離子膜成分以及目標(biāo)抗體。圖5 可以封裝在所選擇的給藥系統(tǒng)例的光敏劑分子結(jié)構(gòu)。
左欄為母體結(jié)構(gòu)，右欄為替代衍生物。圖6 各種流式細(xì)胞圖藻紅蛋白標(biāo)記的⑶61 (⑶61-PE)染色的(FL2)靜止休眠的(上排)和convulxin-activated人類血小板(下排)，用2毫米的羧基封裝(FLl)的 DPPC 孕育 30 分鐘DPPS DSPE-PEG (摩爾比 46 50 4)， DPPC DPPE DSPE-PEG (46 50 4)，DPPC DPPG DSPE-PEG (46 50 4)，and DPPC DPPA DSPE-PEG(46 50 4)擠壓技術(shù)配制的大型單層囊胚泡(LUVETs，直徑 0200納米)。在右上角的一個(gè)離散血小板群的出現(xiàn)，標(biāo)志著血小板和LUVETs之間的相互作用，為含DPPG的LUVETs中觀察到的，并在含DPPS的LUVETs中也較少程度的可觀察到。 DPPC，1,2- 二棕櫚酰-sn-甘油-3-磷脂酰膽堿；DPPS，1,2- 二棕櫚酰-sn-甘油-3-磷酸絲氨酸；DSPE-PEG，1,2-十八酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-聚乙二醇；DPPE，1,2- 二棕櫚酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺；DPPG，1,2- 二棕櫚酰-sn-甘油-3-磷酸甘油；DPPA，1，2_ 二棕櫚酰-sn-甘油-3-磷脂酸。圖7 體外誘導(dǎo)血栓的共聚焦顯微鏡圖像，通過(guò)2毫米的羧基(CF)封裝的DPPC， DPPG DSPE-PEG(摩爾比46 50 4)孕育十分鐘，其有擠壓技術(shù)配制，并由藻紅蛋白標(biāo)記 ⑶61(⑶61-PE，紅色)復(fù)染色的大型單層囊胚泡(LUVETs， 4. 8mM最終血脂濃度)。LUVET 封裝的CF的綠色熒光和CD61-PE標(biāo)記的血小板的紅色熒光的共定位，證實(shí)了如圖5流式細(xì)胞儀所觀察到的血小板和LUVETs之間的相互作用。圖8 幾個(gè)如例子1，2中所描述的氨甲環(huán)酸含聚乙二醇熱敏配方中的脂質(zhì)體的大小(Y軸)和多分散性(條狀內(nèi))。圖9:熱譜圖氨甲環(huán)酸封裝的DPPC DSPE-PEG (摩爾比為96 4)和 DPPC MPPC DSPE-PEG(86 10 4)擠壓技術(shù)獲得的大型單層囊胚泡，其包括抗纖維蛋白溶解SSPLT備選配方配制。圖10 氨甲環(huán)酸以下例子1，2中描述的幾個(gè)含氨甲環(huán)酸的聚乙二醇化熱敏配方的脂質(zhì)比。
圖11 左邊DPPC釋放的熱誘導(dǎo)氨甲環(huán)酸(TA) DSPE-PEG (96 4)擠壓技術(shù)獲得的大型單層囊胚泡，在39. 3°C (黑色虛線)和43.3°C (灰色，實(shí)線)的加熱時(shí)間對(duì)比。 右邊DPPC MPPC DSPE-PEG (86 10 4) LUVETs釋放的熱誘導(dǎo)氨甲環(huán)酸(TA)對(duì)比在 36. O0C (黑色虛線)和40·0 (灰色，實(shí)線)的加熱時(shí)間。釋放的TA濃度用總脂質(zhì)體TA 濃度的means士SD百分百表示。圖12 計(jì)算圖像分析程序中所使用的步驟概述。一個(gè)125幀對(duì)比產(chǎn)生對(duì)應(yīng)血小板通量對(duì)比圖(1)。然后與一種子圖( 結(jié)合產(chǎn)生血管的第一近似值(3)。血管的缺少部分通過(guò)強(qiáng)度梯度和多項(xiàng)式插值重建G)。血管中最小流動(dòng)部分用臨界值挑選出來(lái)(5)。在檢測(cè)的血栓和血管壁每一個(gè)像素分配兩個(gè)概率后 (6)，血栓的最終輪廓就可以形成了(7)?？s寫(按時(shí)間順序)det.=檢測(cè)；deriv.=衍生；polynom.=多項(xiàng)式；int.=插值。表格1 準(zhǔn)備在例1. 2中所述的平均包封率(Ε E FF)，陷閉量(Vt)，和幾個(gè)含氨甲環(huán)酸的聚乙二醇化熱敏配方的血管內(nèi)氨甲環(huán)酸濃度(Cta)。表格2 幾個(gè)在下列例子1，2中要描述的含氨甲環(huán)酸(TA)的聚乙二醇熱敏配方的基本屬性，其被用來(lái)計(jì)算參數(shù)，如每囊泡陷閉量(eVt)和血管內(nèi)氨甲環(huán)酸濃度((^表1)。 DPPC，1，2- 二棕櫚酰-sn-甘油-3-磷脂酰膽堿；DSPE-PEG，1，2-十八酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-聚乙二醇；MPPC，1-棕櫚酰-2-羥基-sn-甘油-3-磷脂酰膽堿；0M，外膜；IM，內(nèi)膜。實(shí)施例1 本發(fā)明給藥系統(tǒng)的配制.可以用于SSPLT中的給藥系統(tǒng)的幾個(gè)可能的組合在圖4中都有顯示。不同脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)的配制如下所述。1、封裝抗纖維蛋白溶解劑(氨甲環(huán)酸)的熱敏感型脂質(zhì)體。1，2- 二棕櫚酰-sn-甘油_3_磷脂酰膽堿(DPPC)和1_棕櫚酰_2_羥基-sn-甘油-3-膽堿磷酸(MPPC)都來(lái)自阿凡提極性脂(阿拉巴斯特，亞拉巴馬州)。HEPES[4-羥乙基哌嗪乙磺酸]的鈉鹽是來(lái)自Sigma Aldrich (圣劉易斯，密蘇里州)。氨甲環(huán)酸(4_(氨甲基)環(huán)己烷-1-羧酸，TA)購(gòu)自Fluka公司(瑞士布克斯，)。所有其它試劑均為分析純。擠壓技術(shù)配制的大型單層囊胚泡以90 10摩爾比由DPPC MPPC配制而得。DPPC 溶解于氯仿和MPPC，氯仿/甲醇比為G 1比例)，并且按上述比例混合。解決的辦法是蒸發(fā)干燥，利用N2氣體干燥并在真空保干器內(nèi)干燥20分鐘。由此產(chǎn)生的脂質(zhì)膜與318mM TA 在IOmM HEPES [4-羥乙基哌嗪乙磺酸]緩沖液(pH值7. 4，滲透壓為0. 302osmol/公斤)) 里水合到最終脂質(zhì)濃度為5毫米和進(jìn)行10分鐘的浴槽式超聲處理。將裝有樣品的管子保持在55°C的恒溫水浴中，使混合物經(jīng)歷10次凍融循環(huán)并用0. 2微米的過(guò)濾器(Anotop，濾紙，布倫特福德，英國(guó))擠壓5次。未封裝的TA通過(guò)體積排阻色譜在4分鐘內(nèi)用離心法 IOOxg (2毫升離心柱，膠量2. 2-2. 5毫升，裝載量200 μ L,經(jīng)S印hadex G-50罰款，奇異醫(yī)療， Chalfont圣賈爾斯，英國(guó))從LUVET懸浮液中排除。平衡緩沖液，從而成為L(zhǎng)UVETs存儲(chǔ)緩沖液，由IOmM的HEPES和0. 88% (W/V)氯化鈉組成，pH值7. 4，滲透壓是0. 291osmol/公斤。洗脫LUVETs存儲(chǔ)在溫度4°C的黑暗環(huán)境中。MPPC包含物是必要的，以防止在缺乏空間位阻穩(wěn)定的情況下脂質(zhì)體的聚集和融
25口 O2、封裝抗纖維蛋白溶解劑(氨甲環(huán)酸)的PEGlated熱敏感型脂質(zhì)體。1，2- 二棕櫚酰-sn-甘油_3_磷脂酰膽堿(DPPC)和1_棕櫚酰_2_羥基-sn-甘油-3-磷脂酰膽堿(MPPC)的聚乙二醇化熱敏性脂質(zhì)體來(lái)自阿凡提極性脂(阿拉巴斯特，亞拉巴馬州)。1,2-十八酰-Sn-甘油-3-磷酸乙醇胺-聚乙烯-乙二醇(DSPE-PEG2000，PEG平均分子質(zhì)量為2000amu)和HEPES [4-羥乙基哌嗪乙磺酸]鈉鹽來(lái)自西格瑪艾德立奇公司(圣劉易斯，密蘇里州)。氨甲環(huán)酸氨甲基)環(huán)己烷-1-羧酸，TA)購(gòu)自芙蘭卡公司(布克斯，瑞士)。所有其它試劑均為分析純。擠壓技術(shù)配制的大型單層囊胚泡(LUVETs)在下列化合物中配制DPPC DSPE-PEG2000 (摩爾比 98 2，96 4，禾口 94 6)禾口 DPPC MPPC DSPE-PEG2000 (84 :10:6 以及 86 10:4)。DPPC 和 DSPE-PEG2000 溶解在氯仿和MPPC溶解在氯仿甲醇G 1比例)并按上述比例混合。解決的辦法是蒸發(fā)干燥，利用N2氣體干燥并在室溫(RT)的真空保干器內(nèi)干燥20分鐘。由此產(chǎn)生的脂質(zhì)膜與 318mMTA在IOmM HEPES緩沖液(pH值7. 4，滲透壓為0. 302osmol/公斤))里水合到最終脂質(zhì)濃度為5mM和進(jìn)行10分鐘的浴槽式超聲處理。使混合物在55°C恒溫下經(jīng)歷10次凍融循環(huán)并用0.2微米的過(guò)濾器(Anotop，濾紙，布倫特福德，英國(guó))擠壓5次。該配方保存在4°C 的黑暗環(huán)境中有待后續(xù)只用。未封裝的TA通過(guò)體積排阻色譜法在4分鐘內(nèi)用離心法100xg(以及自4°C于2毫升離心柱，膠量2. 2-2. 5毫升，裝載量200 μ L，經(jīng)S印hadex G-50罰款，奇異醫(yī)療，Chalfont 圣賈爾斯，英國(guó))從LUVET懸浮液中排除。平衡緩沖液，即LUVETs存儲(chǔ)緩沖液，由IOmM的 HEPES和0.88% (w/v)氯化鈉組成，pH值7. 4，滲透壓是0. 291osmol/公斤。洗脫的LUVETs 存儲(chǔ)在溫度4°C的黑暗環(huán)境中。3.含有光敏劑的脂質(zhì)體使卵磷脂脂質(zhì)體將酞菁鋅(ZnPC)封裝在磷脂雙分子層的制備方法在[Ricchelli F et al. Biochim Biophys Acta. 1994 Dec 30 ； 1196 (2) :165-71] and[de Oliveira CA et al. Chem Phys Lipids. 2005 Jan ； 133(1) :69-78]中已經(jīng)有揭露。使卵磷脂脂質(zhì)體將功能化的酞菁鋅(ZnPC)封裝在磷脂雙分子層的制備方法(例如，鋅2，3，9，10，16，17，23，M-octakis [(N，N-二甲氨基)甲硫基肉桂酸1]酞菁)在 [Vittar NB et al. IntJ Biochem Cell Biol. 2008 ；40 (10) :2192-205]中已有揭露。一種用聚乙二醇磷脂脂質(zhì)體將具有功能的aluminum phthalocyanine封裝于脂質(zhì)體水隔室的制備方法在[Derycke AS et al. J Natl Cancer Inst. 2004Nov 3 ；96 (21) 1620-30]中已有揭露。4.封裝抗纖維蛋白溶解劑(氨甲環(huán)酸)于包含PEGylated zinc phthalocyanine 的脂質(zhì)體1，2-二棕櫚酰-sn-甘油-3-磷脂酰膽堿(DPPC)的含鋅酞菁的聚乙二醇熱敏脂質(zhì)體來(lái)自阿凡提公司極性脂(阿拉巴斯特，亞拉巴馬州)。1，2-十八酰-sn-甘油-3-磷脂-聚乙二醇(DSPE-PEG2000，PEG平均分子質(zhì)量為 2000amu)，酞菁鋅(SiPC)，HEPES鈉鹽購(gòu)自西格瑪艾德立奇公司(圣劉易斯，密蘇里州)。氨甲環(huán)酸氨甲基)環(huán)己烷-1-羧酸，TA)購(gòu)自芙蘭卡公司(布克斯，瑞士)。所有其它試劑均為分析純。擠壓技術(shù)配制的大型單層囊胚泡(LUVETs)在下列化合物中配制 DPPC DSPE-PEG2000摩爾比96 4，含5μ M酞菁鋅。磷脂溶于氯仿，酞菁鋅溶于吡啶 (100 μ M原液)，并按上述比例混合。解決的辦法是蒸發(fā)干燥，利用Ν2氣體干燥直到膜出現(xiàn)， 并在真空保干器內(nèi)干燥1小時(shí)。由此產(chǎn)生的脂質(zhì)膜與318mM TA在IOmM HEPES緩沖液(pH 值7. 4，滲透壓為0. 302osmol/公斤))里水合到最終脂質(zhì)濃度為5mM，進(jìn)行間歇性地浴槽式超聲處理30秒鐘，同時(shí)在55攝氏度的溫度下孕育1小時(shí)。將裝有樣品的管子保持在55°C 的恒溫水浴中，使混合物經(jīng)歷10次凍融循環(huán)并用0. 2微米的過(guò)濾器(Anotop，濾紙，布倫特福德，英國(guó))擠壓5次。未封裝的TA通過(guò)體積排阻色譜法在4分鐘內(nèi)用離心法100秘0毫升離心柱，膠量2. 2-2. 5毫升，裝載量200 μ L，經(jīng)S印hadex G-50罰款，GE醫(yī)療，Chalfont 圣賈爾斯，英國(guó))從LUVET懸浮液中排除。平衡緩沖液，即LUVETs存儲(chǔ)緩沖液，由IOmM的 HEPES和0.88% (w/v)氯化鈉組成，pH值7. 4，滲透壓是0. 291osmol/公斤。洗脫的LUVETs 存儲(chǔ)在溫度4°C的黑暗環(huán)境中。5.調(diào)解凝血酶原復(fù)合物形成的可解吸聚乙二醇陰離子脂質(zhì)體陰離子脂質(zhì)體，(可解吸)聚乙二醇陰離子脂質(zhì)體，和(可解吸)含功能化聚乙二醇陰離子脂質(zhì)體的配制在以下兩處分別都有揭露[Jones ME etal. Thromb Res. 1985 Sep 15 ；39 (6) :711-24], [Chiu GN et al. Biochim Biophys Acta. 2002 Feb 18 ；1560 (1-2) 37-50]，和[Chiu GN et al. Biochim Biophys Acta. 2003 Jun 27 ；1613(1-2) :115-21] 6.封裝光敏劑和抗纖維蛋白溶解劑(氨甲環(huán)酸)的聚乙二醇化縮醛磷脂脂質(zhì)體。封裝聚乙二醇化光敏劑的縮醛磷脂脂質(zhì)體的配制在[Shin J et al. J Control Release. 2003 Aug 28 ；91 (1-2) :187-200]禾口 [Thompson DH et al. Methods Enzymo 1. 2004 ；387 :153-68]都有揭露。該脂質(zhì)膜不是與鈣黃綠素和緩沖液水合，而是與含有318mM TA的IOmMHEPES緩沖液中水合到以配制封裝TA的脂質(zhì)體。未封裝的TA通過(guò)體積排阻色譜法在4分鐘內(nèi)用離心法IOOxg在4°C于2毫升離心柱，膠量2. 2-2. 5毫升，裝載量200 μ L，經(jīng)(Sephadex G-50罰款，GE醫(yī)療，Chalfont圣賈爾斯，英國(guó))從LUVET懸浮液中排除。平衡緩沖液，即LUVETs存儲(chǔ)緩沖液，由IOmM的HEPES 和0. 88% (w/v)氯化鈉組成，pH值7. 4，滲透壓是0. 291osmol/公斤。洗脫的LUVETs存儲(chǔ)在溫度4 °C的黑暗環(huán)境中。實(shí)施例2:本發(fā)明給藥系統(tǒng)的特征1.測(cè)定給藥系統(tǒng)的理化特征脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)脂質(zhì)體的大小和多分散性(粒度分布的測(cè)量)的理化特征是在用平衡緩沖液(10 毫米 HEPES，0. 88% (w/v)的 NaCl，pH 值=7.4,0. 291 公斤 osmol/kg)稀釋后，用測(cè)量光子相關(guān)光譜在90°角度使用單峰分析(英國(guó)馬爾文儀器，馬爾文激光粒度儀3000)測(cè)量獲得。幾個(gè)備選配方的結(jié)果顯示在圖8.脂質(zhì)體的相變溫度是在用平衡緩沖液將脂質(zhì)體稀釋到最終脂質(zhì)濃度為3mM后再用差示掃描量熱法(MICR0CAL，北安普頓，馬薩諸塞州)量測(cè)獲得。平衡緩沖液是用來(lái)作為參考。兩個(gè)候選配方的結(jié)果顯示在圖9。
2.脂質(zhì)體的氨甲環(huán)酸的測(cè)定脂質(zhì)的比例，封裝效率，被困量，每囊泡陷閉量，每囊泡氨甲環(huán)酸分子的數(shù)量和血管內(nèi)氨甲環(huán)酸濃度。建立一種基于具熒光胺(4-苯基螺-呋喃-2 (3H)，1_ 二氫異苯并呋喃]_3，3_ 二酮)(西格瑪艾德立奇公司，圣劉易斯，密蘇里州)的初級(jí)胺衍生物的檢測(cè)方法以在洗滌劑處理過(guò)的緩沖液里的脂質(zhì)體氨甲環(huán)酸(TA)量化。擠壓技術(shù)配制的大型單層囊胚泡(LUVETs 5mM最終脂質(zhì)濃度)并用平衡緩沖液 (IOmM 的 HEPES，0. 88% (w/v)的 NaCl，pH 值=7. 4，滲透壓的 0. 291osmolkg)進(jìn)行稀釋 500x。500 μ L的LUVET溶液與250 μ L的5% ΤΧ100(芙蘭克公司，布克斯，瑞士)(終濃度 1 % )和500 μ L的1. 08毫米熒光胺于丙酮中(終濃度為432 μ Μ)混合。[Udenfriend S et al. Science 1972 ；178 (63) :871-872].在37°C的溫度孵育30分鐘后，這些樣品通過(guò)熒光光譜測(cè)定λ ex = 391 士5nm and λ em = 483士5nm(SPF500C，美國(guó)儀器公司，銀泉，馬里蘭州)。 每次測(cè)定都使用在0-4. 0μ M TA濃度范圍內(nèi)參考標(biāo)準(zhǔn)。TA脂質(zhì)體的濃度，是通過(guò)解各自的熒光發(fā)射強(qiáng)度的參考曲線的回歸方程而測(cè)算得到的。磷脂濃度是根據(jù)[Rouser G et al. Lipids. 1970 ；5 (5) :494-6]通過(guò)磷含量測(cè)定獲得的。藥脂質(zhì)比是通過(guò)將熒光測(cè)定(凝膠過(guò)濾效率糾正)獲得的TA濃度除以由ROUSER 測(cè)定的磷脂濃度而計(jì)算出來(lái)。藥物幾個(gè)候選配方的脂質(zhì)比例如圖10所示。封裝效率，Eeff，是通過(guò)將脂質(zhì)體TA 脂質(zhì)摩爾比除以最初TA 摩爾比(318mM TA每 5mM磷脂，即63. 6)而計(jì)算獲得，封裝效率以百分比表達(dá)(表1)。陷閉量(Vt，L · mole-1 lipid)通過(guò)從[N. J. Zuidam, R. de Vrueh, D. J. Crommelin, in :V.P.Torchilin, V.Weissig(Eds. ), Liposomes,2nd Edition, Oxford University Press, Oxford, 2003, pp. 64]中獲得的方程式中計(jì)算得到，該方程式為Vt = (500/3) (A) (N) (rv)其中A是一個(gè)脂質(zhì)占據(jù)膜的面積，N為阿伏加德羅常數(shù)(6. 022χ1023Μ0Γ1)， 和rv是囊泡的半徑(基于光子相關(guān)光譜法)。每個(gè)磷脂分子面積是49. 4A2(DPPC)源自 [Nagle JF et al. Curr. Opin. Struc. Biol. 2000 ； 10 (4) :474-480]，50. OA2 (DSPE-PEG)源自 [Majewski J et al. J. Am. Chem. Soc. 1998 ； 120 (7) :1469-1473]，和 48. OA2 (MPPC)[Chi LM et al. Biophys. J. 1990 ；57 (6) 1225-1232]，磷脂混合物面積為指示各脂質(zhì)成分的摩爾比為的加權(quán)平均值A(chǔ)(ffeighted) = [(Adppc) (mol % DPPC) + (ADspe-PEg) (mol % DSPE-I5EG) + (Amppc) (ΠΙΟ 1 %
J]/100%所有沒(méi)有MPPC的配方的A(Weighted)是49. 4A2，而所有具有MPPC配方的則是49. 3A2。幾個(gè)候選配方的VtS如表1所示。每囊泡的Vt(eVt，表達(dá)為L(zhǎng)/囊泡)是通過(guò)推斷每個(gè)囊泡的磷脂分子的數(shù)量(表幻而得出的。每個(gè)囊泡的磷脂分子的數(shù)量被定義為外膜(l。m)和內(nèi)膜單張(Iim)上的脂質(zhì)體的累計(jì)數(shù)，基于Aweighted，測(cè)得的囊泡大小，半徑rv，雙層厚度3. 93nm [Tahara Y et al. Micron. 1994 ；25 (2) :141-149]，一球形形態(tài)(其中球形面積=4 π r2 ；Iom = 4 Ji rv2/AffeightedIim = 4 Ji (rv_3.93) VAffeighted
eVt 由 eVt = [ (l。m+lim) Vt]/N 計(jì)算得到。每個(gè)囊泡(Qta)的TA分子數(shù)量通過(guò)(l。m+lim)乘以TA 脂質(zhì)比而計(jì)算得到。血管內(nèi)TA濃度(Cta)可以從一已知eV的每個(gè)囊泡(Qta)的TA分子數(shù)量計(jì)算得到。Cta = (Qta/N) (1/eVt)幾個(gè)候選配方的CTAs如表1所示。3.脂質(zhì)體光敏劑濃度，二聚平衡常數(shù)，三重態(tài)性質(zhì)，和活性氧物種的產(chǎn)生的測(cè)定。脂質(zhì)體的鋅酞菁濃度的測(cè)定在[deOliveira CA et al. Chem Phys Lipids. 2005 Jan ； 133(1) :69-78]中已有揭露。脂質(zhì)體配方中的光敏劑二聚常數(shù)和三重態(tài)性質(zhì)的測(cè)定在[Nunes SM et al. Braz J Med Biol Res. 2004 Feb ；37 (2) :273-84]中有揭露。用脂質(zhì)體光敏劑測(cè)定活性氧產(chǎn)量物種的方法在[Hadjur C et al. Journal of Photochemistry and Photobiology B =Biology 1997 ；38 :196-202]巾實(shí)施例3本發(fā)明給藥系統(tǒng)的藥物釋放1.熱致氨甲環(huán)酸從聚乙二醇熱敏脂質(zhì)體的釋放從擠壓技術(shù)制備的熱敏性大型單層囊胚泡(LUVETs)釋放的熱誘導(dǎo)釋放的氨甲環(huán)酸的量化是為由DPPC DSPE-PEG(96 4摩爾比)and DPPC MPPC DSPE-PEG(86 10 4摩爾比)組成的配方而準(zhǔn)備的。在熱處理之前，凝膠過(guò)濾的LUVET懸浮液通過(guò)保存在4攝氏度環(huán)境中的平衡緩沖液進(jìn)行十倍稀釋。其中20 μ L凝膠過(guò)濾的LUVET懸浮液被稀釋50倍(n = 3per experiment) 并經(jīng)過(guò)熒光光譜測(cè)定血管內(nèi)總體TA濃度(最終稀釋1250倍)。平均總體TA濃度用來(lái)計(jì)算釋放的TA分子的百分比。在4°C的5分鐘平衡后，并在熱致藥物釋放前，160 μ L LUVETs懸浮在0. 2mL超薄PCR管內(nèi)(套管金，康寧，紐約，紐約)并孕育在4°C的環(huán)境中10分鐘，其通過(guò)熱循環(huán)儀來(lái)達(dá)成的(Biozym，奧爾登多夫，德國(guó))。從TA-封裝DPPC DSPE-PEG (96 4) and DPPC MPPC DSPE-PEG(86 10 4)LUVETs的活性藥物釋放是最大相變溫度(Tm)附近，即分別為43. 3和40. 0°C，(圖9)，以及低于！^!。樣品被經(jīng)過(guò)預(yù)設(shè)時(shí)間加熱后，立即被淹沒(méi)在冰浴。整個(gè)然后轉(zhuǎn)移至0. 5mL聚碳酸酯超速離心機(jī)管進(jìn)行離心分離(355，000xg， 時(shí)間60分鐘，溫度4攝氏度)藉此使LUVETs變成球狀。50 μ L表面漂浮物被仔細(xì)吸出，該漂浮物中釋放的TA在用平衡緩沖液稀釋50倍后(最終稀釋系數(shù)1250)被熒光光譜測(cè)定量化。磷脂的上清液分析表明，至少有99.9%的磷脂被顆?；?球形話)。四份未經(jīng)處理的 160LLUVET樣本也放入超速離心步驟中作為陰性對(duì)照。這些樣本按熱處理樣品同樣方法處理以測(cè)定超速離心誘導(dǎo)的TA泄露。TA釋放是通過(guò)熱處理樣品上層清液的平均TA濃度除以LUVETs里的總TA濃度而計(jì)算得到。TA濃度因超速離心對(duì)照樣本中上清液中平均TA內(nèi)容而得到糾正。該理想控制的 DPPC DSPE-PEG (96 4) and DPPC MPPC DSPE-PEG (86 10 4) LUVEI1S 樣本中的上清液中的該mean士SD TA濃度是總囊泡TA濃度的2. 4士5. 1% (n = 48)和7. 1 士 11. 1% (η =56).從 DPPC DSPE-PEG (96 4) and DPPC MPPC DSPE-PEG (86 10 4) LUVETs 釋放的熱誘導(dǎo)TA釋放動(dòng)力如圖11所示。
2.光敏劑的誘導(dǎo)釋放從縮醛磷脂脂質(zhì)體釋放的光氧化介導(dǎo)內(nèi)容的誘導(dǎo)和量化在[Thompson DH et al. Biochim Biophys Acta. 1996 Feb 21 ；1279(1) :25-34]中有揭露。實(shí)施例4目標(biāo)定位機(jī)制將聚乙二醇光敏劑封裝免疫脂質(zhì)體目標(biāo)定位到激光誘導(dǎo)損傷部位為了免疫脂質(zhì)體目標(biāo)定位到激光誘導(dǎo)損傷部位的體內(nèi)研究，倉(cāng)鼠背側(cè)皮膚折疊模型跟活體熒光顯微鏡和外部激光照明結(jié)合使用，如[Bezemer R et al. ,Opt Express 2007 Jul 25 ； 15 (4) :8493-8506]中所述。如實(shí)施例1. 4中所述一樣配制含聚乙二醇化鋅酞菁(ZnPC)的脂質(zhì)體。大鼠抗小鼠CD62P 單克隆抗體(clone RB40. 34，F(xiàn)itzgerald Industries, Concord, MA)與空間位阻穩(wěn)定脂質(zhì)體的結(jié)合配對(duì)在[A. L. Klibanov，V. P. Torchilin， S. Zalipsky, in :V. P. Torchilin, V. Weissig (Eds. ) , Liposomes, 2nd Edition, Oxford University Press, Oxford, 2003, pp. 231-263]中有詳細(xì)揭露。其上沒(méi)有嫁接抗體的脂質(zhì)體以及缺乏抗體的不含鋅酞菁的體脂質(zhì)體作為陰性對(duì)照。關(guān)于熒光血栓染色，血小板在體內(nèi)通過(guò)全身給藥5，6_羧基都被標(biāo)記，根據(jù)[Heger M etaL· Anal Quant Cyto Histol0 In press]。血小板標(biāo)記后，經(jīng)鎖骨下靜脈輕輕注入180 μ L脂質(zhì)體混懸液(10毫米最終血脂濃度)。用倍頻Nd :YAG激光(532nm，Entertainer，激光量子；圖5，7)功率2 毫瓦以及 mean士SD入射輻射曝光量為289士38J/cm2，光斑大小2. 3X10_3mm2，誘導(dǎo)亞阻塞血栓。激光是安裝在一個(gè)轉(zhuǎn)換臺(tái)上，將以一角度導(dǎo)引的光束通過(guò)激光探針的尖端的一面鏡子軸向定位到血管上。30毫秒的脈沖持續(xù)時(shí)間可以通過(guò)設(shè)置在激光光圈和反光鏡之間的振動(dòng)控制的模擬快門調(diào)節(jié)。激光束穿過(guò)與快門光圈結(jié)合的10%的傳輸過(guò)濾器，生成一個(gè)用以目標(biāo)定位的低功耗光斑。激光誘導(dǎo)血栓可用FITC過(guò)濾器裝置Uex = 480士 15nm，DC = 505nm，λ em = 535士20nm，B2EC, Nikon, Tokyo, Japan)成像顯示，另外血栓和脂質(zhì)體的共定位通過(guò)使用一個(gè)定制設(shè)計(jì)的過(guò)濾器設(shè)置觀察顯示Uex = 650 士 lOnm，型號(hào)FB650-10，Thorlabs，牛頓，新澤西州；λ em = 700 士 40nm，型號(hào) FB700-40，Thorlabs ；分色鏡=664nm,型號(hào) NT47-425，埃德蒙光學(xué)，巴林頓，新澤西州)。血管內(nèi)情況記錄30分鐘。關(guān)于圖像分析，在Mathematica開(kāi)發(fā)了一款軟件(版本6. 0. 1，Wolfram Research, Champaign, IL)基于客觀參數(shù)的基礎(chǔ)上量化標(biāo)記CF的病變。該程序是從圖12中所示的算法序列進(jìn)行編寫的。基本前提是該程序編排圍繞包括了動(dòng)態(tài)流量環(huán)境中損傷的相對(duì)靜態(tài)性質(zhì)。因此， 第一個(gè)被用來(lái)區(qū)分”靜態(tài)”和”動(dòng)態(tài)”區(qū)域的參數(shù)是血流量，這是通過(guò)計(jì)算像素點(diǎn)亮度的平均值時(shí)間導(dǎo)數(shù)計(jì)算出來(lái)的，即，熒光標(biāo)記的血小板，在125125幀(5S)的時(shí)間內(nèi)，通過(guò)超過(guò)連續(xù)幀的一個(gè)像素的數(shù)量(圖12，第1步)。隨后，區(qū)域增長(zhǎng)算法可以使用于使用者定義的種子圖片，其中需要查看的血管都被用畫線或畫叉做了手工標(biāo)記(圖12，第2步)，并結(jié)合使用流信息來(lái)劃分相關(guān)血管(圖12，第3步)。由于在激光致?lián)p傷部分缺乏流動(dòng)，相應(yīng)血管的無(wú)流段部分就可以從劃定的血管結(jié)構(gòu)中排除。像素亮度數(shù)據(jù)的二階高斯衍生可以用在垂直于血管縱軸的方向以重建缺失段。 此外，多項(xiàng)式插值是用來(lái)消除不確定的血管段，并用來(lái)合并固有像素亮度梯度引起的缺失的血管像素(圖12，第4步)。對(duì)側(cè)血管壁的界限被定義后，激光導(dǎo)致的損傷可以通過(guò)將臨界值放入流量數(shù)據(jù)，再僅選擇血管中最低流量的部分，就可以找出激光致傷部位(圖12，第 5步)段。流的臨界值由損傷部位的平均像素亮度的二階導(dǎo)數(shù)零交叉流切斷價(jià)值定義。該數(shù)值在處理整套前，如種子圖像，整個(gè)分析放映是都保持不變。下一步中，每一個(gè)像素點(diǎn)都被賦予兩個(gè)概率，視已被定義為部分血栓或血管壁其附近的像素?cái)?shù)量而定(圖12，第6步)。 隨后，血管壁附近的血栓利邊緣通過(guò)比較這些概率進(jìn)一步進(jìn)行細(xì)化(圖12，第7步)。最后， 損傷輪廓成像放在單獨(dú)的圖像文件保存以使用Sigmakan Pro量化Apix and It。t(SYSTAT軟 #，Mountain View, CA)。1.將聚乙二醇化陰離子脂質(zhì)體目標(biāo)定位于激光引起的損傷部位如實(shí)施例1.4中敘述的，按46 50 4的摩爾比配制按聚乙二醇化鋅酞菁 (ZnPC)含陰離子脂質(zhì)體組成的1，2- 二棕櫚酰-sn-甘油-3-磷脂酰膽堿(DPPC)，1，2- 二棕櫚酰-sn-甘油-3-磷脂(DPPG)，和1，2distear0yl-sn-甘油-3-磷脂-聚乙二醇 (DSPE-PEG2000, PEG 平均分子質(zhì)量 2000amu)關(guān)于體內(nèi)將脂質(zhì)體定位血栓到血管內(nèi)激光導(dǎo)致的損傷，其方案在例子4. 1中已經(jīng)有描述。已經(jīng)結(jié)合附圖介紹了本案的實(shí)施例，需要明白的是本發(fā)明不僅限于這些實(shí)施例， 在不離開(kāi)本發(fā)明的精神和所附權(quán)利要求書的范圍的情況下，可以作多種改變和變化。表格權(quán)利要求
1.一種治療血管疾病的給藥系統(tǒng)，包含一個(gè)給藥平臺(tái)，該給藥平臺(tái)包括至少一個(gè)能在待治療血管血栓的形成和維護(hù)施加影響的化合物。
2.如權(quán)利要求1所述的給藥系統(tǒng)，其中該給藥平臺(tái)是脂質(zhì)體，聚合物藥物載體，細(xì)胞或鬼細(xì)胞。
3.如權(quán)利要求1或2所述的給藥系統(tǒng)，其中該給藥平臺(tái)是空間位阻穩(wěn)定的。
4.如權(quán)利要求3所述的給藥系統(tǒng)，其中該給藥平臺(tái)包括脂質(zhì)體，該空間位阻穩(wěn)定可以通過(guò)在脂質(zhì)體表面嫁接聚乙二醇來(lái)實(shí)現(xiàn)。
5.如權(quán)利要求3或4所述的給藥系統(tǒng)，其中該平臺(tái)包括脂質(zhì)體，該空間位阻穩(wěn)定可以通過(guò)在脂質(zhì)體列入共價(jià)連接的聚合物的脂質(zhì)體，嵌段共聚物，和/或多嵌段共聚物的脂質(zhì)體來(lái)實(shí)現(xiàn)，該多嵌段共聚物可以是聚(乙烯醇)(PVA)，聚縮水甘油，被激活為琥珀酰亞胺酯并和含胺鍵(通常是聚乙烯)錨定的聚(N -乙烯基吡咯烷酮)(PVP)，其被激活作為琥珀酰亞胺酯并和含胺鍵(通常是聚乙烯)錨定的聚(N -丙烯)嗎啉(PAcM)，聚(2 -乙基-2 -惡唑啉)(ΡΕ0Ζ)，聚(2 -甲基-2 -惡唑啉)(ΡΜ0Ζ)，聚丙烯酰胺，聚(N -異丙基丙烯酰胺) (NIPAM)，聚[N - (2 -羥丙基)甲基丙烯酰胺](HPMA)，聚(苯乙烯-順丁烯二酸/ 二酸酐)(SMA)，聚(二乙烯基醚順丁烯二酸酐)(DIVEMA)，和/或以下之一形式的疏水改性多糖 茁霉多糖，葡聚糖，甘露聚糖和/或聚唾液酸，和/或以下葡萄糖醛酸之一棕櫚酰葡萄糖醛酸苷(PGIcUA)，和/或棕櫚酰半乳糖醛酸苷，或者選自第一類單唾液神經(jīng)節(jié)苷酯(GMl)，第三類單唾液神經(jīng)節(jié)苷酯(GiO)的唾液酸衍生物。
6.如權(quán)利要求3或4或5所述的給藥系統(tǒng)，其中該平臺(tái)包括部分由陰離子成分組成的脂質(zhì)體，該空間位阻的穩(wěn)定可以通過(guò)由以下物質(zhì)的(電吸引力)的吸附來(lái)實(shí)現(xiàn)，包括聚合物， 陽(yáng)離子殘基組成的多嵌段共聚物(該陽(yáng)離子殘基可以是陽(yáng)離子季銨化聚(4 -乙烯基吡啶) (PEVP)，聚(乙烯亞胺)(PEI )，聚甜菜堿(PB)。
7.如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的給藥系統(tǒng)，其中給藥平臺(tái)包括脂質(zhì)體，并且能夠?qū)ρㄐ纬珊?或維護(hù)施加影響的化合物被封裝在水艙和/或脂質(zhì)的磷脂雙層，和/或耦合連接到空間位阻穩(wěn)定劑和/或連接到脂質(zhì)體雙層。
8.如權(quán)利要求7所述的給藥系統(tǒng)，其中該化合物可以被耦合連接到空間位阻穩(wěn)定劑的末端或側(cè)鏈。
9.如權(quán)利要求7所述的給藥系統(tǒng)，其中該化合物也可以通過(guò)一個(gè)連接器或錨耦合連接到脂質(zhì)雙分子層。
10.如權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的給藥系統(tǒng)，其中該化合物對(duì)待治療血管中血栓的形成和維護(hù)適當(dāng)施加影響，可以在纖溶途徑，組織因子，接觸激活途徑(次級(jí)止血)，或血小板功能(初級(jí)止血)。
11.如權(quán)利要求10所述的給藥系統(tǒng)，其中該化合物是纖維蛋白溶酶原酶抑制劑。
12.如權(quán)利要求11所述的給藥系統(tǒng)，其中該抑制劑為脂肪酸之一，比如花生四烯酸， 油酸，硬脂酸，或者是合成纖溶酶(原形式)抑制劑，其中包括氨甲環(huán)酸(ΤΑ)，ε-氨基己酸 (ACA), ρ -氨甲苯酸(ΑΜΒΑ)，4 -氨甲基-雙環(huán)-2，2，2壬酸(AMB0CA)。
13.如權(quán)利要求10所述的給藥系統(tǒng)，其中該化合物為一種纖維蛋白溶酶抑制劑。
14.如權(quán)利要求13所述的給藥系統(tǒng)，其中該纖維蛋白溶酶抑制劑包括純化和/或重組 α 2抗纖溶酶，α 2抗纖溶酶多肽，純化和/或重組凝血酶激活的纖溶抑制物TAFI和抑肽酶。
15.如權(quán)利要求10所述的給藥系統(tǒng)，其中該化合物是組織型纖溶酶原激活物(tPA)或尿激酶型纖溶酶原激活物(UPA)的抑制劑。
16.如權(quán)利要求15所述的給藥系統(tǒng)，其中該組織型纖溶酶原激活(tPA)抑制劑可以是以下制劑之一分離純化的人類PAI1，分離和純化的人類PAI2，重組人類PAI1，重組人類 PAI2，修改人類PAI1，修改人類PAI2，抑制抗體或其針對(duì)tPA的衍生物，多肽，寡肽或短肽， 特別是在2-10氨基酸肽，抑制tPA和uPA的抑制劑，包括分離純化人類PAIl，分離和純化的人類PAI2，重組人類PAI1，重組人類PAI2，修飾人類PAIl，修飾人類human PAI2，抑制抗體或及其針對(duì)uPA的衍生物，抑制抗體或及其針對(duì)uPA受體(uPAR)的衍生物，多肽，寡肽或短肽，特別是在2-10氨基酸肽，其能抑制uPA的。
17.如權(quán)利要求10所述的給藥系統(tǒng)，其中該化合物為針對(duì)PAIlor PAI2的激動(dòng)劑。
18.如權(quán)利要求17所述的給藥系統(tǒng)，其中，該針對(duì)PAIl激動(dòng)劑是一種人工合成的肽是玻連蛋白碎片s 362 "A 380的衍生物，簡(jiǎn)稱為BP4，或者是通過(guò)結(jié)合蛋白酶活化受體-1 (PAR-I)而促進(jìn)PAI2分泌的人工合成肽，特別是SLIGKV，其結(jié)合于蛋白酶活化受體-2 (PAR- 2)， 或者是一種在生理?xiàng)l件下可以防止PAI2聚合的人工合成肽，特別是TEAAAGTGGVMTG (RCL-PAI2)and SEAAASTAVVIAG (RCL-AT)。
19.如權(quán)利要求10-18中任一項(xiàng)所述的給藥系統(tǒng)，包括通過(guò)作用于組織因子和接觸激活途徑而導(dǎo)致(誘導(dǎo))促凝血反應(yīng)的制劑。
20.如權(quán)利要求19所述的給藥系統(tǒng)，其中這些制劑是次級(jí)止血系統(tǒng)的激動(dòng)劑，其包括凝血因子II (a)、凝血因子111(組織因子，凝血因子V(a)、凝血因子VII (a)、凝血因子 VI 11(a),凝血因子IX(a)、凝血因子X(jué)(a)、凝血因子X(jué)I (a)、凝血因子X(jué)II (a)、和凝血因子 XIII(a)。
21.如權(quán)利要求19所述的給藥系統(tǒng)，其中這些制劑是接觸激活途徑的調(diào)節(jié)劑，包括前激肽釋放酶(PK )、激肽釋放酶、分子量激肽原(HMWK )。
22.如權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)所述的給藥系統(tǒng)，其中該給藥平臺(tái)包括具有光敏劑的脂質(zhì)體。
23.如權(quán)利要求22所述的給藥系統(tǒng)，其中該光敏劑包括酞菁，萘酞菁，氯，菌綠素和內(nèi)源性卟吩(如圖5所示)，其可以被一個(gè)或多個(gè)R -基團(tuán)取代，該R-基團(tuán)包括 H, F, CF(CF3)2，0 (CH2 )nCF3，Cl, Br, CHCH2，(CH2 )nCH3，(CH2 ) nCOOH, CONH (CH2) nNH2, (CH2) nC0NHCH2CH2NH2, CONH (CH2) nCH (NH2) C00H, CH2 CONHCH (CH2 C00H) C00H, 0 (CH2 )nCH3 , S (CH2 ) nN(CH3)2，SO2 NH(CH2)nCH3，SO2 NH (CH2)nN(CH3)2，SO2 N[(CH2 )nCH3 ]2 , SO2 NHCH2 CH(CH2 CH3 ) (CH2 )nCH3 , C(CH3 ) 3，OC [(CH2 )nCH3 ]3，OCH[CH(CH3 )2 ]2，0 (CH2 )nN(CH3 )2，0 (CH2 ) nN(CH3 ) 3，SC6 H5，OC6 H5，O(C6H4)Ct (CH3)2 ] (C6 H5 )，0 (C6 H3 ) (C00H)2，0 (C6 H3 ) [C00(CH2 )nCH3 ]2 , C6 H5 , SO2 NHCH(CH3 )CH2 (C6 H3 ) (OCH3 )2，SO3，SO2Cl, N(CH3 )2，C00H, NO2，CH3 ，CONH2，CH2 NH2 ；并且 R，-基團(tuán)選自以下基團(tuán)之一H, CH3, A1C1, A10H, AlOSi(CH3)3 ，AlOSO3，Co, Cu, Li, GaOH, GaCl, Fe, FeCl, FeO2，Pb, Mg, Mn, MnCl, SiCH3Cl, Si (OH)2) Si (Cl)2) Si {0C[ (CH2 )nCH3 ]3 I2 , Si [COCO(C6 H4 ) (CH2 )nCH3]2，Si [OSi (CH3 )2 CH2 )nN (CH3) 2] 0H, Si
2，Si [OSi (CH3) 2 (CH2) nN (CH3) 2，Si [OSi (CH2) nCH3] 2，SiCH3 ，Si [OSi (CH3 )2 C (CH3 )2 C (CH3 )2 ]2 , Ni, SnO, Sn (Cl)2 , Ti (Cl)2 , TiO, V0, Zn, Ag,Cd, Ge, InCl。
24.如權(quán)利要求1-23中任一項(xiàng)所述的給藥系統(tǒng)，其中該給藥系統(tǒng)具有目標(biāo)定位分子。
25.如權(quán)利要求M所述的給藥系統(tǒng)，其中該目標(biāo)分子是抗體或其衍生物，特別是纖維蛋白的Fab’碎片。
26.如權(quán)利要求25所述的給藥系統(tǒng)，其中該抗體或其衍生物是針對(duì)血小板抗原表位或纖維蛋白。
27.如權(quán)利要求沈所述的給藥系統(tǒng)，其中，該血小板抗原表位是⑶41或⑶62P。
28.如權(quán)利要求1-27中任一項(xiàng)所述的給藥系統(tǒng)，其中該給藥平臺(tái)由脂質(zhì)體和以下脂質(zhì)體之一的頭基形成，包括磷脂酰膽堿、磷酸膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酸、磷脂醯甘油、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、神經(jīng)鞘磷脂、甘油磷酸、甘油、乙二醇、沒(méi)食子酸丙三醇和甘油-3-琥珀酸。
29.如權(quán)利要求觀所述的給藥系統(tǒng)，其中該脂質(zhì)?；湠橐韵轮皇；?13碳)、 十四酰基(14碳)、肉豆蔻烯酰基(14碳，順式烯烴在Δ9)、反肉豆蔻烯?；?14碳，反式烯烴在Δ9)、十五?；?15碳)、十六?；?16碳)、棕櫚油?；?16碳，順式烯烴在Δ9)、反棕櫚油?；?16碳，反式烯烴在Δ 9)、植烷?；?16碳，甲基在Δ 3，7，11，I 5)、十七?；?(17碳)、十八?；?18碳)、十八烯?；?18碳，順式烯烴在Δ 6)、油?；?18碳，順式烯烴在 Δ9)、反油?；?18碳，反式烯烴在Δ9)、亞油酸?；?18碳，順式烯烴在Δ9，12)、亞麻?；?18碳，順式烯烴在Δ 9，12，15)、十九?；?19碳)、二十?；?20碳)、二十烯?；?20碳， 順式烯烴在Δ 11)、花生四烯酰基(20碳，順式烯烴在Δ5，8，11，14)、二i^一?；?21碳)、 二十二?；?22碳)、二十二碳烯?；?22碳，順式烯烴在Δ 13)、二十二碳六烯醇基(22碳， 順式烯烴，Δ4，7，10，13，16，19)、二十三酰基(23碳)、二十四?；?24碳)、或二十四碳烯酰( 個(gè)碳，順式烯烴在Δ15)。
30.如權(quán)利要求四所述的給藥系統(tǒng)，其中該脂質(zhì)體具有單?；?1-?；?2-羥基_ sn -甘油-3頭基)或二?；?1 -?；?2-?；?sn -甘油-3頭基)結(jié)構(gòu)。
31.如權(quán)利要求1-30中任一項(xiàng)所述的給藥系統(tǒng)，其中該給藥平臺(tái)包括脂質(zhì)體和至少構(gòu)成該脂質(zhì)體的部分磷脂，該脂質(zhì)體是二棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG)。
32.如權(quán)利要求1-31中任一項(xiàng)所述的給藥系統(tǒng)，其中該給藥平臺(tái)包含熱敏脂質(zhì)體。
33.如權(quán)利要求32所述的給藥系統(tǒng)，其中該脂質(zhì)體包括相變溫度高于體溫的磷脂。
34.如權(quán)利要求33所述的給藥系統(tǒng)，其中該磷脂相變溫度介于37°C和45°C之間，特別是41°C。
35.如權(quán)利要求34所述的給藥系統(tǒng)，其中該至少形成脂質(zhì)體的部分磷脂是二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)。
36.如權(quán)利要求1-35中任一項(xiàng)所述的給藥系統(tǒng)，其中該給藥平臺(tái)具有一種抑制血管生成和/或新血管生成的復(fù)合藥劑。
37.一種促進(jìn)如權(quán)利要求1-36所述給藥系統(tǒng)的藥物釋放或光敏作用的臨床手段是熱感應(yīng)。
38.一種促進(jìn)如權(quán)利要求37所述熱感應(yīng)或光敏作用的是由發(fā)光二極管。
39.如權(quán)利要求37所述的熱感應(yīng)是通過(guò)一個(gè)用于正交偏振光譜成像和/或側(cè)流暗視場(chǎng)成像中作為光源的寬帶光源或用于支流暗視野成像系統(tǒng)的LED燈環(huán)系統(tǒng)，來(lái)產(chǎn)生。
40.如權(quán)利要求1-36中任一項(xiàng)所述的給藥系統(tǒng)用于制備一種血管相關(guān)病癥的藥劑。
41.如權(quán)利要求40所述的病癥為葡萄酒色斑。
42.如權(quán)利要求40所述，其中該病癥為皮膚中的病癥，比如血管瘤，毛細(xì)血管擴(kuò)張，化膿性肉芽腫，靜脈湖，匐行性血管瘤；也可以是眼科病變，如脈絡(luò)膜新血管生成(如濕性黃斑變性，脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜炎，高度近視，血管樣條紋，眼組織胞漿菌病的某些形式)，視網(wǎng)膜大動(dòng)脈瘤，眼內(nèi)黑色素瘤，視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，角膜血管生成，中心性漿液性脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜病變；或者是胃腸手術(shù)方面的藍(lán)色橡皮大皰痣綜合征，胃竇血管擴(kuò)張，輻射直腸結(jié)腸炎，遺傳性出血性毛細(xì)血管擴(kuò)張癥。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于治療血管疾病的給藥系統(tǒng)，包含一個(gè)給藥平臺(tái)，該給藥平臺(tái)包括至少一個(gè)能在待治療血管血栓的形成和維護(hù)施加影響的化合物。該給藥平臺(tái)是空間位阻穩(wěn)定的脂質(zhì)體形成。該空間位阻穩(wěn)定可以通過(guò)在脂質(zhì)體表面嫁接聚乙烯(乙二醇)來(lái)實(shí)現(xiàn)。該化合物為止血環(huán)酸。該給藥系統(tǒng)用于治療葡萄酒色斑。
文檔編號(hào)A61K31/198GK102300557SQ201080013481
公開(kāi)日2011年12月28日 申請(qǐng)日期2010年1月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月26日
發(fā)明者麥克海洛 申請(qǐng)人:阿卡戴密克醫(yī)學(xué)中心