專利名稱：黃芪總苷注射劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種黃芪總苷注射劑，具體地，是黃芪總苷為活性成分制備而成的注射劑及其制備方法，屬藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
病毒心肌炎為臨床常見的心臟病之一，近十多年來(lái)其發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)，增長(zhǎng)近10倍，常遺留不同程度的后遺癥(如心律失常、心功能不全)，嚴(yán)重危害人類健康，目前尚無(wú)特效藥物。因此，針對(duì)病毒性心肌炎進(jìn)行新藥開發(fā)和研究是極為重要和必要的?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，其病因?yàn)槎喾N病毒感染所致，臨床上絕大多數(shù)病毒性心肌炎系由柯薩奇病毒和ECHO病毒引起。針對(duì)病毒性心肌炎，實(shí)際臨床目前主要采用促進(jìn)心肌代謝的藥物，如三磷酸腺苷、輔酶A、肌苷、環(huán)化腺苷酸、細(xì)胞色素C等。
中藥黃芪來(lái)源于豆科植物黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的根，中藥黃芪及黃芪中成藥產(chǎn)品(包括黃芪注射液及黃芪口服制劑)對(duì)病毒性心肌炎的治療和輔助治療具有顯著的療效，已為臨床醫(yī)生較為廣泛地接受和采用。同時(shí)，隨著對(duì)黃芪藥化、藥理及臨床研究的不斷深入，由中藥黃芪提取分離總苷可獲得黃芪總苷。已有大量的實(shí)驗(yàn)及臨床研究已充分證實(shí)，黃芪所含黃芪總苷是黃芪治療病毒性心肌炎的主要活性成分。中藥黃芪類制劑既有一定的抗病毒作用，又具有調(diào)節(jié)免疫、保護(hù)心肌細(xì)胞、改善和增強(qiáng)心臟功能等多方面藥理作用，因而其在病毒性心肌炎的治療方面具有較大的優(yōu)勢(shì)和潛力。古今臨床應(yīng)用實(shí)踐及大量現(xiàn)代藥理研究已充分證實(shí)，中藥黃芪及其提取物黃芪皂苷是臨床治療病毒性心肌炎的有效藥物，其療效可靠，作用機(jī)理明確。
目前臨床使用黃芪注射劑，多為黃芪提取物制成，采用靜脈輸液給藥，其中黃芪甲苷含量低、差異大，藥效不易控制，雜質(zhì)較多，病人用藥后不良反應(yīng)多；在每次臨床用藥前，必需用氯化鈉溶液配制稀釋，因而給臨床用藥帶來(lái)不便，尤其容易增加靜脈輸液的污染機(jī)會(huì)。制備黃芪總苷注射劑(小針劑、粉針劑、葡萄糖輸液及氯化鈉輸液)，不易制得黃芪總苷含量高、穩(wěn)定性高、澄明度好、雜質(zhì)含量低、符合要求的制劑。專利CN1481806公開了黃芪皂苷、黃芪多糖的藥物組合物，專利CN1481806公開了黃芪總苷注射液，采用水提—醇沉法得到黃芪提取物，其中有效成分黃芪總苷的含量為5-50mg，黃芪總提取物中有效成分黃芪總苷的含量占30-90％，且需要添加助溶劑和助稀釋劑；專利CN 1515295公開了黃芪注射液，相當(dāng)于40g黃芪生藥/250ml，黃芪甲苷量不低于8mg/250ml；專利CN1543976黃芪甲苷注射劑制劑及其制備方法，公開了黃芪甲苷原料中黃芪甲苷的重量濃度為90-100％，每瓶注射液中黃芪甲苷的含量為1-100mg，也添加了助溶劑和助稀釋劑。注射劑中添加助溶劑和助稀釋劑會(huì)增加發(fā)生副作用的風(fēng)險(xiǎn)，尤其容易增加靜脈輸液發(fā)生副作用的風(fēng)險(xiǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了一種黃芪總苷注射劑，本發(fā)明的另一技術(shù)方案是提供了該黃芪總苷注射劑的制備方法。
本發(fā)明提供了一種黃芪總苷注射劑，它是以黃芪總苷提取物為活性成分，不含助溶劑和助稀釋劑，加上藥學(xué)上可接受的注射劑附加劑，制備而成的注射劑。
上述黃芪總提取物中有效成分黃芪總苷的含量占80-100％，總苷的含量為每制劑單位含90～300mg。
所述的黃芪甲苷的百分含量占黃芪總苷提取物的6-50％?；?，所述的注射液中黃芪甲苷的含量為每制劑單位不得少于20mg。所述的每制劑單位是指按每瓶裝量限定，為100ml/瓶或250ml/瓶。
其中，所述的黃芪總苷的提取方法為a、將黃芪藥材采用水提醇沉法或者乙醇浸漬、滲漉，收集滲漉液，濃縮，得濃縮液；b、將a步驟的濃縮液加乙醇至含醇量達(dá)50％-80％，在0℃～5℃冷藏靜置，24～48小時(shí)，濾過(guò)，濾液濃縮至每毫升相當(dāng)于0.5-1.0克生藥，冷藏靜置，24～48小時(shí)，濾過(guò)；取濾液通過(guò)大孔吸附樹脂柱，水洗至近無(wú)色，用稀乙醇洗脫，收集洗脫液，濾過(guò)，回收乙醇并濃縮至無(wú)醇味，冷藏靜置，濾過(guò)，得濾液；c、將b步驟所述的濾液，加入乙醇至含醇量達(dá)70％～95％，冷藏靜置，濾過(guò)，回收乙醇，煮沸，濾過(guò)，即得黃芪總苷提取物。
其中，所述的注射劑是粉針劑、滴注劑、注射液。
所述的注射液的pH值為5.5～7.5。
所述的注射液是由下述重量配比的原料提取物及附加劑制備而成黃芪總苷提取物1-5份、注射劑用附加劑8-25份。
進(jìn)一步地，所述的注射劑用附加劑為等滲劑pH值調(diào)節(jié)劑，所述的等滲劑為氯化鈉、氯化鎂、氯化鈣、乳酸鈉、葡萄糖、木糖醇、山梨醇或左旋糖酐中的一種或混合；所述的pH值調(diào)節(jié)劑是鹽酸、醋酸、乳酸、NaOH、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、枸櫞酸鈉中的一種。
進(jìn)一步地，所述的注射液是由如下重量配比的原料及附加劑制備而成黃芪總苷提取物0.40-3.50份、氯化鈉9.00份、磷酸二氫鈉0.5份。
本發(fā)明還提供了該黃芪總苷注射劑的制備方法，它包括如下步驟a.將黃芪藥材采用水提醇沉法或者乙醇浸漬、滲漉，收集滲漉液，濃縮，得濃縮液；b、將a步驟的濃縮液加乙醇至含醇量達(dá)60％-70％，在0℃-5℃冷藏靜置，濾過(guò)，濾液濃縮至每毫升相當(dāng)于0.5-1.0克生藥，冷藏靜置，過(guò)濾；取濾液通過(guò)大孔吸附樹脂柱，水洗至近無(wú)色，用乙醇洗脫，收集洗脫液，濾過(guò)，回收乙醇并濃縮至無(wú)醇味，冷藏靜置，濾過(guò)；加乙醇至含醇量達(dá)80％-90％，冷藏靜置，濾過(guò)；回收乙醇，煮沸，濾過(guò)，即得黃芪總苷提取物；c、取黃芪總苷、氯化鈉和磷酸二氫鈉適量，加注射用水至200-800ml，加入0.1％-0.2％活性炭，煮沸30分鐘后，濾過(guò)，加注射用水至1000ml，用飽和氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.2-8.2，超濾，灌封，滅菌，檢驗(yàn)，即得。
在長(zhǎng)期放置過(guò)程中pH值有可能會(huì)緩慢下降及pH值對(duì)澄明度影響，在滅菌前調(diào)pH值為7.2-8.2，以增加制劑穩(wěn)定性。
其中，步驟b所用的大孔樹脂為非極性或/和弱極性大孔吸附樹脂，型號(hào)為HPD100A、HPD700、LD140以及其他類型的大孔吸附樹脂，或以上不同型號(hào)的大孔吸附樹脂按一定比例混合。步驟c所用超濾膜為5000-10000道爾頓。
具體地，本發(fā)明黃芪總苷是由下述方法制備而成1.黃芪總苷的提取a.取黃芪藥材，加水煎煮三次，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至無(wú)乙醇，得黃芪濃縮液，比重為1.15-1.25，60℃測(cè)；b.取黃芪藥材粗粉，稀乙醇為溶劑，浸漬24小時(shí)后滲漉，收集滲漉液，濾液減壓濃縮至無(wú)乙醇，得黃芪濃縮液，比重為1.15-1.25，60℃測(cè)。
2.黃芪總苷的精制將上述黃芪濃縮液加乙醇至含醇量達(dá)50％-80％，在0℃-5℃冷藏靜置24-36小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇并濃縮至每毫升相當(dāng)于0.5-1.0克生藥，冷藏靜置24-36小時(shí)，濾過(guò)。取濾液通過(guò)大孔吸附樹脂柱，水洗至近無(wú)色，用稀乙醇洗脫，收集洗脫液，濾過(guò)，回收乙醇并濃縮至無(wú)醇味，冷藏靜置24-36小時(shí)，濾過(guò)；加乙醇至含醇量達(dá)70％-90％，冷藏靜置24-36小時(shí)，濾過(guò)；回收乙醇，煮沸30分鐘，加水至1000ml，密封，冷藏24小時(shí)以上，濾過(guò)，檢驗(yàn)，即得。
3.黃芪總苷注射液的制備取黃芪總苷、氯化鈉和磷酸二氫鈉適量，加注射用水至200-800ml，加入0.1％-0.2％活性炭，煮沸30分鐘后，濾過(guò)，加注射用水至1000ml，用飽和氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.2-8.2，超濾，灌封，滅菌，檢驗(yàn)，即得。
本發(fā)明還提供了該黃芪總苷注射劑在制備治療病毒性心肌炎、心力衰竭藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明黃芪總苷注射液每瓶黃芪總苷含量高(每制劑單位中，100ml/瓶或250ml/瓶，有效成分黃芪甲苷的含量不得少于20mg，總苷的含量為90～300mg)，質(zhì)量可控、穩(wěn)定性高(市售包裝穩(wěn)定性大于2年)，澄明度好，不含助溶劑和助稀釋劑，發(fā)生副作用的風(fēng)險(xiǎn)低，為臨床治療病毒性心肌炎提供一種更為方便而有效的中藥制劑，滿足臨床用藥的需要。
顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的內(nèi)容實(shí)施例1本發(fā)明黃芪總苷注射液1制備方法黃芪藥材符合中國(guó)藥典2000年版第一部249頁(yè)黃芪項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定，且黃芪藥材中黃芪甲苷照高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，黃芪藥材含黃芪甲苷(C41H68O14)不得少于0.06％。
取500公斤黃芪飲片(2-4mm厚片，內(nèi)蒙古產(chǎn))，加水8倍量煎煮三次，每次1.5小時(shí)，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮(溫度70℃；真空度-0.08Mpa)至相對(duì)密度為1.15(60℃測(cè))，用95％乙醇沉淀至含醇量達(dá)80％，冷藏靜置24小時(shí)，濾過(guò)，取濾液回收乙醇并濃縮至每毫升相當(dāng)于0.75克生藥，冷藏靜置48小時(shí)，濾過(guò)。取濾液通過(guò)LD140大孔吸附樹脂柱，水洗至近無(wú)色，用80％乙醇洗脫，收集洗脫液，濾過(guò)，回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.25(60℃測(cè))，冷藏靜置28小時(shí)，濾過(guò)；加95％乙醇至含醇量達(dá)90％，冷藏靜置36小時(shí)，濾過(guò)；回收乙醇，煮沸30分鐘，加水至50升，密封，冷藏24小時(shí)以上，濾過(guò)，檢驗(yàn)，即得。
取黃芪總苷13升、9.0Kg氯化鈉和500克磷酸二氫鈉，加注射用水至400升，加入0.08％活性炭，煮沸30分鐘后，濾過(guò)，加注射用水至1000升，用飽和氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.2，濾過(guò)，灌封為250ml/瓶，滅菌，檢驗(yàn)，即得。
實(shí)施例2本發(fā)明黃芪總苷注射液2制備方法取500公斤黃芪飲片(2-4mm厚片，陜西省產(chǎn))，加水12倍量煎煮2次，每次2小時(shí)，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮(溫度70℃；真空度-0.08Mpa)至相對(duì)密度為1.25(60℃測(cè))，用95％乙醇沉淀至含醇量達(dá)90％，冷藏靜置27小時(shí)，濾過(guò)，取濾液回收乙醇并濃縮至每毫升相當(dāng)于0.75克生藥，冷藏靜置36小時(shí)，濾過(guò)。取濾液通過(guò)HPD700大孔吸附樹脂柱，水洗至近無(wú)色，用80％乙醇洗脫，收集洗脫液，濾過(guò)，回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.15(60℃測(cè))，冷藏靜置24小時(shí)，濾過(guò)；加95％乙醇至含醇量達(dá)80％，冷藏靜置24小時(shí)，濾過(guò)；回收乙醇，煮沸30分鐘，加水至50升，密封，冷藏24小時(shí)以上，濾過(guò)，檢驗(yàn)，即得。
取黃芪總苷25.4升、9Kg氯化鈉和500克磷酸二氫鈉，加注射用水至400升，加入0.10％活性炭，煮沸30分鐘后，濾過(guò)，加注射用水至1000升，用飽和氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.5，濾過(guò)，灌封為250ml/瓶，滅菌，檢驗(yàn)，即得。
實(shí)施例3本發(fā)明黃芪總苷注射液3制備方法取500公斤黃芪飲片(2-4mm厚片，山西省產(chǎn))，加水8倍量煎煮三次，每次1.5小時(shí)，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮(溫度70℃；真空度-0.08Mpa)至相對(duì)密度為1.25(60℃測(cè))，用95％乙醇沉淀至含醇量達(dá)65％，冷藏靜置27小時(shí)，濾過(guò)，取濾液回收乙醇并濃縮至每毫升相當(dāng)于0.75克生藥，冷藏靜置24小時(shí)，濾過(guò)。取濾液通過(guò)LD140大孔吸附樹脂柱，水洗至近無(wú)色，用75％乙醇洗脫，收集洗脫液，濾過(guò)，回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.20(60℃測(cè))，冷藏靜置28小時(shí)，濾過(guò)；加95％乙醇至含醇量達(dá)85％，冷藏靜置36小時(shí)，濾過(guò)；回收乙醇，煮沸30分鐘，加水至50升，密封，冷藏24小時(shí)以上，濾過(guò)，檢驗(yàn)，即得。
取黃芪總苷95升、8.1Kg氯化鈉和450克磷酸二氫鈉，加注射用水至300升，加入0.12％活性炭，煮沸30分鐘后，濾過(guò)，加注射用水至900升，用飽和氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.9，濾過(guò)，灌封為100ml/瓶，滅菌，檢驗(yàn)，即得。
實(shí)施例4本發(fā)明黃芪總苷注射液4制備方法取500公斤黃芪飲片(2-4mm厚片，甘肅隴南產(chǎn))(切片)，加水10倍量煎煮三次，每次1小時(shí)，合并煎煮液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮(溫度70℃；真空度-0.08Mpa)至相對(duì)密度為1.15(60℃測(cè))，用95％乙醇沉淀至含醇量達(dá)60％，冷藏靜置27小時(shí)，濾過(guò)，取濾液回收乙醇并濃縮至每毫升相當(dāng)于0.75克生藥，冷藏靜置24小時(shí)，濾過(guò)。取濾液通過(guò)D101大孔吸附樹脂柱，水洗至近無(wú)色，用80％乙醇洗脫，收集洗脫液，濾過(guò)，回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度為1.15(60℃測(cè))，冷藏靜置28小時(shí)，濾過(guò)；加95％乙醇至含醇量達(dá)85％，冷藏靜置36小時(shí)，濾過(guò)；回收乙醇，煮沸30分鐘，加水至50升，密封，冷藏24小時(shí)以上，濾過(guò)，檢驗(yàn)，即得。
取黃芪總苷40升、8.1Kg氯化鈉和450克磷酸二氫鈉，加注射用水至300升，加入0.15％活性炭，煮沸30分鐘后，濾過(guò)，加注射用水至900升，用飽和氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.9，濾過(guò)，灌封為100ml/瓶，滅菌，檢驗(yàn)，即得。
實(shí)施例5本發(fā)明黃芪總苷注射液中黃芪甲苷、黃芪總苷的檢測(cè)為了控制制劑質(zhì)量，黃芪甲苷采用高效液相色譜—蒸發(fā)光散射法檢測(cè)；黃芪總苷采用紫外分光光度法檢測(cè)，以黃芪甲苷(C41H68O14)計(jì)。
表1 本發(fā)明黃芪總苷提取物注射液中黃芪總苷、黃芪甲苷的含量

分別按原藥材、黃芪總苷和成品供試品制備方法制備供試品。另取黃芪甲苷對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。以氯仿-甲醇-水(體積比13∶7∶2)的下層溶液為展開劑，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘至斑點(diǎn)顯色。三者圖譜基本一致，說(shuō)明本工藝最大限度保留了黃芪藥材中黃芪甲苷同系物。黃芪甲苷同系物在水中的溶解度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于黃芪甲苷，而在水中的溶解度大在制藥中優(yōu)勢(shì)是顯而易見的。
實(shí)施例6本發(fā)明黃芪總苷注射液考察結(jié)果按實(shí)施例1-4方法制制得的三批樣品進(jìn)行了穩(wěn)定性考查，試驗(yàn)結(jié)果表明制劑質(zhì)量在2年內(nèi)穩(wěn)定，下面是按按實(shí)施例4方法制制得的三批樣品(1、2、3號(hào)樣品)考察結(jié)果表2 1號(hào)樣品的考察結(jié)果

+-呈正反應(yīng)，∨-表示符合規(guī)定表3 2號(hào)樣品的考察結(jié)果

表4 3號(hào)樣品的考察結(jié)果

以下通過(guò)藥效學(xué)試驗(yàn)證明本發(fā)明的有益效果。
試驗(yàn)例1本發(fā)明藥物注射劑對(duì)戊巴比妥鈉引起貓急性心力衰竭的治療試驗(yàn)2～4kg動(dòng)物貓(北京通利動(dòng)物飼養(yǎng)廠提供體重，雌雄兼用)分為正常對(duì)照組、陽(yáng)性藥組(西地蘭)、黃芪總苷注射液大劑量組、黃芪總苷注射液中劑量和黃芪總苷注射液小劑量，一共5組，每組7～8只。3％戊巴比妥鈉(北京化學(xué)試劑公司，批號(hào)020402，以生理鹽水配制成)腹腔注射30mg/kg麻醉，頸靜脈插管用于恒速滴注3％戊巴比妥鈉，股靜脈插管用于恒速滴注受試藥物，連接心電圖(ECG)肢導(dǎo)、氣管插管、連接人工呼吸機(jī)，呼吸頻率為26次/min，潮氣量為29～70ml，開胸，左心室插管，連接壓力換能器。ECG、左心室內(nèi)壓(LVP)及左心室內(nèi)壓微分(LVdp/dt)經(jīng)Rm6240C生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)連續(xù)記錄于計(jì)算機(jī)中。動(dòng)物手術(shù)后穩(wěn)定30分鐘的各項(xiàng)數(shù)值作為正常基礎(chǔ)值。
以左心室內(nèi)壓最大上升速率(LVdp/dtmax)作為心肌收縮性指標(biāo)，靜脈恒速滴注3％戊巴比妥鈉后，LVdp/dtmax逐漸下降，當(dāng)下降到26.6～66.5kPa(200～500mmHg)，5min無(wú)上升傾向，視為形成急性心衰，然后靜脈恒速滴注0.2ml/min受試藥物，空白對(duì)照組滴注生理鹽水，陽(yáng)性藥組滴注去乙酰毛花甙注射液(西地蘭，上海旭東海普藥業(yè)有限公司，批號(hào)010901，臨用前以無(wú)菌生理鹽水稀釋至所需濃度)0.1mg/ml，黃芪總苷(黃芪總苷注射液，由實(shí)施例4制得)大劑量12g藥材/ml，黃芪總苷注射液中劑量1g藥材/ml，黃芪總苷注射液小劑量0.5g藥材/ml。
3％戊巴比妥鈉恒速靜脈注射致貓心衰后，恒速靜脈注射黃芪總苷三個(gè)濃度(12g生藥/ml，1g生藥/ml，0.5g生藥/ml)，西地蘭0.1mg/ml及生理鹽水對(duì)照組，LVSP及LVdp/dtmax最大上升差值見表5。
表5 黃芪總苷恒速靜注前后對(duì)心衰貓LVdp/dtmax及LVSP最大上升差值的影響

注與生理鹽水對(duì)照組比*P＜0.05。
從表5可見，以3％戊巴比妥鈉致貓急性心衰，黃芪總苷濃度0.5g藥材/ml恒速注射0.2ml/min，左心室內(nèi)壓峰值(LVSP)及左心室內(nèi)壓最大上升速率(LVdp/dtmax)的上升幅度高于生理鹽水對(duì)照組(P＜0.05)，并顯著延長(zhǎng)動(dòng)物存活時(shí)間(P＜0.01)。黃芪總苷1g生藥/ml濃度恒速注射0.2ml/min，心衰貓LVSP和LVdp/dtmax上升的幅度與生理鹽水對(duì)照組比無(wú)顯著差別(P＞0.05)，但顯著延長(zhǎng)動(dòng)物存活時(shí)間(P＜0.01)。黃芪總苷12g生藥/ml對(duì)LVSP、LVdp/dtmax和動(dòng)物存活時(shí)間均無(wú)明顯影響(P＞0.05)。治療量、中毒量、致死量、治療寬度、治療指數(shù)。
①治療量LVdp/dtmax上升至峰效應(yīng)的1/2時(shí)的累積量；②中毒量以出現(xiàn)頻發(fā)心律失常為指標(biāo)，計(jì)算累積量；③致死量心電圖消失10s時(shí)的累積量；④治療寬度＝中毒量/治療量；⑤治療指數(shù)＝致死量/治療量。結(jié)果見表6。
表6黃芪總苷恒速靜注對(duì)心衰貓治療量、中毒量、致死量、治療寬度、治療指數(shù)的影響

注生理鹽水組無(wú)法求出治療量，黃芪總苷(黃芪總苷注射液，由實(shí)施例4制得)1.0g/ml，12g/ml組與生理鹽水組比無(wú)明顯治療作用。與生理鹽水對(duì)照組比**P＜0.01，***P＜0.001。與西地蘭組比#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001.
從表6可見，黃芪總苷0.5g/ml組、1.0g/kg組致死量顯著高于生理鹽水對(duì)照組(P＜0.01)。黃芪總苷0.5g/ml組的治療指數(shù)顯著高于西地蘭組(P＜0.05)。
黃芪總苷0.5g藥材/ml濃度恒速靜脈滴注0.2ml/min LVSP及LVdp/dtmax最大上升幅度較生生理鹽水對(duì)照組顯著升高(P＜0.05)。與生理鹽水組、西地蘭組比非常顯著延長(zhǎng)動(dòng)物存活時(shí)間(P＜0.001)。黃芪總苷0.5g藥材/ml濃度組治療指數(shù)顯著高于西地蘭組(P＜0.05)。
黃芪總苷1g藥材/ml濃度恒速靜脈滴注0.2ml/min與滴注生理鹽水組比能非常顯著延長(zhǎng)動(dòng)物存活時(shí)間(P＜0.01)。
黃芪總苷在0.5g藥材/ml、1.0g藥材/ml、12.0g藥材/ml濃度恒速滴注與生理鹽水組比對(duì)貓心率無(wú)明顯影響。
黃芪總苷注射液過(guò)敏試驗(yàn)結(jié)果表明給藥未引起豚鼠全身過(guò)敏反應(yīng)。溶血試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)黃芪總苷注射液有溶血現(xiàn)象。黃芪總苷注射液對(duì)家兔靜脈血管刺激性試驗(yàn)表明，對(duì)家兔靜脈血管無(wú)明顯刺激性。
試驗(yàn)例2本發(fā)明藥物注射劑體內(nèi)治療小鼠CV B3心肌炎試驗(yàn)小鼠CV B3心肌炎模型的建立BALB/C小鼠(6周齡，體重16-18g/只，由華西醫(yī)學(xué)中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理中心提供，動(dòng)物合格證(1996)川實(shí)動(dòng)質(zhì)管第75號(hào))每組10只，共三組。分別采用10-2/ml、10-4/ml和10-6/ml三個(gè)濃度的CVB3病毒液注入小鼠腹腔，0.2ml/只，。第7天觀察小鼠的心率、存活情況和心肌組織病理學(xué)檢測(cè)，確定注射CVB3ID50為10-4/ml病毒液0.2ml，可引起較典型的小鼠病毒性心肌炎。
黃芪總苷治療小鼠CV B3心肌炎試驗(yàn)共分為六個(gè)實(shí)驗(yàn)組(1)正常對(duì)照組，10只，不作任何處理；(2)病毒感染組，20只，腹腔注入CVB310-4/ml 0.2ml，不用藥；(3)黃芪總苷實(shí)驗(yàn)組A20只，注入CVB30.2ml 2h后，用0.63g/ml黃芪總苷(黃芪總苷注射液，由實(shí)施例4制得)，0.1ml/10g體重；(4)黃芪總苷實(shí)驗(yàn)組B20只，注入CV B30.2ml 2h后，用1.25g/ml黃芪總苷，0.1ml/10g體重；(5)黃芪總苷實(shí)驗(yàn)組C20只，注入CV B30.2ml 2h后，用2.5g/ml黃芪總苷，0.1ml/10g體重；(6)藥物對(duì)照組，10只，注入CV B30.2ml 2h后，注入病毒唑0.1g/kg，每日一次。
在第8天，取小鼠眼眶血，分離血清，供檢測(cè)血清磷酸肌酸激酶(CK)、乳酸脫氨酶(LDH)和病毒中和抗體。處死小鼠后，稱重，取心臟。
連續(xù)iv不同劑量的黃芪總苷對(duì)CV B3心肌炎小鼠心臟重量及心臟表面病變的影響，結(jié)果見表7。
表7 黃芪總苷對(duì)心肌炎小鼠心臟重量及心臟表面病變的影響(X±S)

注與模型組比較，*p＜0.05，**p＜0.01。
從表7可見，正常對(duì)照組小鼠與模型組小鼠心臟重量、系數(shù)比有顯著差異(p＜0.01)，模型組小鼠體重下降，而正常組體重是增重，兩者有顯著差異，且表面無(wú)出血點(diǎn)，表明小鼠病毒性心肌炎模型可靠。連續(xù)iv黃芪總苷6.3、12.5、25g(生藥)/kg.d 7天，結(jié)果三種劑量黃芪總苷小鼠的心臟重量、系數(shù)、出血點(diǎn)、出血斑均較模型組有明顯抑制，對(duì)體重亦較模型組顯著增加(p＜0.01)，表明黃芪總苷對(duì)CV B3致小鼠病毒性心肌炎有顯著抑制作用，表現(xiàn)出對(duì)小鼠心臟有良好的保護(hù)作用。保護(hù)作用的強(qiáng)弱與iv劑量有明顯的劑量依賴性。
連續(xù)iv不同劑量的黃芪總苷對(duì)CV B3心肌炎小鼠血清CK和LDH酶活性的影響，結(jié)果見表8。
表8 黃芪總苷對(duì)心肌炎小鼠血清中CK、LDH酶活性(X±SD)的影響

注與模型組比較，*p＜0.05，**p＜0.01。
從表8可見，模型組的CK和LDH均較正常組顯著升高，p均小于0.01。表明CV B3心肌炎可引起CK、LDH顯著升高，而黃芪總苷各組的CK、LDH均較模型組有顯著降低，表明連續(xù)iv黃芪總苷可阻止心肌炎病毒所致的CK、LDH升高。
連續(xù)iv不同劑量的黃芪總苷對(duì)CV B3心肌炎小鼠血清中和抗體和心肌細(xì)胞中CV3滴度的影響，結(jié)果見表9。
表9 黃芪總苷對(duì)小鼠血清中和抗體和CV B3滴度的影響

注與模型組比較，中和抗體或滴度差達(dá)4倍時(shí)，表明診斷意義，即p＜0.01。
從表9可見，正常組的血清中均未查出中和抗體和CV B3病毒，而模型組的中和抗體和滴度分別為1∶32、1∶16，表明CV3病毒引起心肌炎小鼠的中和抗體和心肌細(xì)胞中CV B3升高，黃芪總苷中、高劑量組對(duì)中和抗體抑制均非常顯著(p＜0.01)，三種劑量的黃芪總苷對(duì)心肌CV B3滴度抑制均非常顯著。表明黃芪總苷對(duì)心肌炎小鼠的中和抗體及心肌細(xì)胞CV B3有良好的調(diào)節(jié)作用。
連續(xù)iv不同劑量的黃芪總苷對(duì)小鼠CV B3心肌炎心肌病理組織積分的影響，結(jié)果見表10。
表10 黃芪總苷對(duì)小鼠心肌病理組織積分的影響

注與模型組比較，*p＜0.05，**p＜0.01。
從表10可知，連續(xù)iv黃芪總苷6.3、12.5、25g(生藥)/kg.d對(duì)CV B3心肌炎小鼠病理積分(炎性浸潤(rùn)及壞死)有顯著的抑制，表明黃芪總苷對(duì)心肌炎致小鼠的病理?yè)p傷有良好的保護(hù)作用。
用黃芪總苷治療小鼠柯薩奇病毒性心肌炎能降低血清磷酸肌酸激酶、乳酸脫氨酶水平和中和抗體，降低心肌細(xì)胞的病毒滴度，減輕病毒對(duì)心肌細(xì)胞的損傷。顯示黃芪總苷對(duì)柯薩奇病毒具有殺傷作用，對(duì)心肌細(xì)胞有較好的保護(hù)作用。
體內(nèi)試驗(yàn)表明對(duì)感染CV B3病毒性心肌炎BALB/C小鼠iv不同劑量的黃芪總苷6.3、12.5、25g(生藥)/kg.d，連續(xù)7天，結(jié)果心肌炎小鼠的血清CK、LDH、中和抗體、心臟系數(shù)、心肌細(xì)胞中CV B3滴度及炎性浸潤(rùn)面積壞死程度，與模型組比p均小于0.01，表明黃芪總苷具有較好的抗CV B3所致病毒性心肌炎作用。
試驗(yàn)例3毒理學(xué)試驗(yàn)一次尾靜脈注射給予小鼠黃芪總苷的半數(shù)致死量為184.2g(生藥)/kg。黃芪總苷大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)表明給藥7周中、低劑量組使大鼠的紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白含量及紅細(xì)胞壓積增高，血糖顯著增高，各給藥組的其余血液學(xué)、生化學(xué)指標(biāo)無(wú)異常。解剖動(dòng)物時(shí)未發(fā)現(xiàn)肉眼可見的病理變化，臟器系數(shù)基本正常，病理檢查正在進(jìn)行中。
犬長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)顯示給藥初期中、高劑量組動(dòng)物出現(xiàn)明顯的嘔吐和搔癢癥狀，搔癢癥狀在給藥后很快消失，二周后大部分動(dòng)物不再出現(xiàn)嘔吐癥狀。除高、中劑量引起血糖降低外，對(duì)血液生化指標(biāo)均未見明顯影響。
從上數(shù)據(jù)中可以看出本發(fā)明的黃芪總苷治療病毒心肌炎小鼠的有效劑量為0.25、0.125、0.063g/kg天，而文獻(xiàn)中國(guó)新藥與臨床雜志2003年9月，22(9)515-519，報(bào)道黃芪甲苷治療小鼠心肌炎小鼠的有效劑量0.5g/kg天，而0.056g/kg天，0.17g/kg天治療小鼠心肌炎小鼠無(wú)效?？梢钥闯鳇S芪甲苷治療小鼠心肌炎的有效劑量大于黃芪總苷。證明黃芪總苷中黃芪甲苷同系物在治療病毒心肌炎小鼠有協(xié)同增效作用。
通過(guò)上述制劑參數(shù)的控制及本發(fā)明藥物穩(wěn)定性的測(cè)定，證明本發(fā)明注射劑在不含助溶劑和助稀釋劑的情況下，同樣能夠達(dá)到制劑的質(zhì)量要求，根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員的公知常識(shí)，輔料的選擇對(duì)制劑的安全性影響很大，特別是注射劑中的助溶劑和助稀釋劑容易造成過(guò)敏，因此，本發(fā)明的技術(shù)方案所得到的黃芪總苷注射劑達(dá)到了意想不到的有益效果，其附加劑中不含有助溶劑和助稀釋劑，是由本發(fā)明的黃芪總苷提取物的特殊性質(zhì)所決定的，通過(guò)藥效學(xué)試驗(yàn)證明，原料提取物中黃芪總苷中黃芪甲苷同系物發(fā)揮了協(xié)同增效的作用，為臨床提供了一種更加安全、有效的治療病毒性心肌炎藥物注射劑的新選擇。
權(quán)利要求
1.一種黃芪總苷注射劑，其特征在于它是以黃芪總苷提取物為活性成分，不含助溶劑和助稀釋劑，加上藥學(xué)上可接受的注射劑附加劑，制備而成的注射劑，其中，所述的黃芪總苷提取物中有效成分黃芪總苷的含量占80-100％，每制劑單位中黃芪總苷的含量為90～300mg。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的黃芪總苷注射劑，其特征在于所述的黃芪甲苷的百分含量占黃芪總苷提取物的6-50％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的黃芪總苷注射劑，其特征在于所述的黃芪總苷的提取方法為a.以中藥黃芪，加水煎煮或10-80％乙醇滲漉，合并煎煮液或滲漉液，減壓濃縮，得黃芪濃縮液；b、將a步驟的濃縮液加乙醇至含醇量達(dá)50％-80％，在0℃～5℃冷藏靜置，24～48小時(shí)，濾過(guò)，濾液濃縮至每毫升相當(dāng)于0.5-1.0克生藥，冷藏靜置，24～48小時(shí)，濾過(guò)；取濾液通過(guò)大孔吸附樹脂柱，水洗至近無(wú)色，用稀乙醇洗脫，收集洗脫液，濾過(guò)，回收乙醇并濃縮至無(wú)醇味，冷藏靜置，濾過(guò)，得濾液；c、將b步驟所述的濾液，加入乙醇至含醇量達(dá)70％～95％，冷藏靜置，濾過(guò)，回收乙醇，煮沸，濾過(guò)，即得黃芪總苷提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的黃芪總苷注射劑，其特征在于所述的注射劑是粉針劑、滴注劑、注射液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的黃芪總苷注射劑，其特征在于所述的注射液的pH值為5.5～7.5。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的黃芪總苷注射劑，其特征在于所述的注射液是由下述重量配比的原料提取物及附加劑制備而成黃芪總苷提取物1-5份、注射劑用附加劑8-25份。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的黃芪總苷注射劑，其特征在于所述的注射劑用附加劑為等滲劑、pH值調(diào)節(jié)劑，所述的等滲劑為氯化鈉、氯化鎂、氯化鈣、乳酸鈉、葡萄糖、木糖醇、山梨醇或左旋糖酐中的一種或任意幾種混合；所述的pH值調(diào)節(jié)劑是鹽酸、醋酸、乳酸、NaOH、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、枸櫞酸鈉中的一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的黃芪總苷注射劑，其特征在于所述的注射液是由如下重量配比的原料及附加劑制備而成黃芪總苷提取物0.40-3.50份、氯化鈉9.00份、磷酸二氫鈉0.5份。
9.一種制備權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的黃芪總苷注射劑的方法，它包括如下步驟a.將黃芪藥材采用水提醇沉法或者乙醇浸漬、滲漉，收集滲漉液，濃縮，得濃縮液；b、將a步驟的濃縮液加乙醇至含醇量達(dá)50％-80％，在0℃-5℃冷藏靜置24～36小時(shí)，濾過(guò)，濾液濃縮至每毫升相當(dāng)于0.5-1.0克生藥，冷藏靜置24～36小時(shí)，過(guò)濾；取濾液通過(guò)大孔吸附樹脂柱，水洗至近無(wú)色，用稀乙醇洗脫，收集洗脫液，濾過(guò)，回收乙醇并濃縮至無(wú)醇味，冷藏靜置，濾過(guò)；加乙醇至含醇量達(dá)70％-90％，冷藏靜置，濾過(guò)；回收乙醇，煮沸，濾過(guò)，即得黃芪總苷提取物；c、取黃芪總苷、等滲劑、pH調(diào)節(jié)劑，加注射用水，加入注射用水總量0.1％-0.2％活性炭，煮沸30分鐘后，濾過(guò)，調(diào)pH至7.2-8.2，超濾，灌封，滅菌，檢驗(yàn)，即得。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的黃芪總苷注射劑的制備方法，其特征在于步驟b所用的大孔樹脂為非極性或/和弱極性大孔吸附樹脂，型號(hào)為HPD100、HPD500、D101、PD100A、HPD700、LD140中的一種或其混合。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的黃芪總苷注射劑的制備方法，其特征在于步驟c所用超濾膜為5000～10000道爾頓。
12.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的黃芪總苷注射劑在制備治療病毒性心肌炎、心力衰竭的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種黃芪總苷注射劑，它是以黃芪總苷提取物為活性成分，加上藥學(xué)上可接受的注射劑附加劑，制備而成的注射劑，其中黃芪總提取物中有效成分黃芪總苷的含量占80－100％，每制劑單位含黃芪總苷90～300mg。本發(fā)明藥物成分明確、質(zhì)量可控、性能穩(wěn)定，100ml/瓶或250ml/瓶，且沒有添加助溶劑和助稀釋劑。室溫長(zhǎng)期留樣試驗(yàn)結(jié)果表明制劑質(zhì)量在2年內(nèi)穩(wěn)定(市售包裝)，穩(wěn)定性強(qiáng)。
文檔編號(hào)A61K31/7048GK1839920SQ20061000849
公開日2006年10月4日 申請(qǐng)日期2006年1月26日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月6日
發(fā)明者劉忠榮, 付鐵軍, 及元喬, 龐紅, 何民, 黃瑜, 李伯剛 申請(qǐng)人:成都地奧九泓制藥廠