專(zhuān)利名稱(chēng)：除去異常蛋白質(zhì)用組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及除去異常蛋白質(zhì)用組合物及預(yù)防伴隨異常蛋白質(zhì)積累引起的疾病的組合物。
背景技術(shù)：
異常蛋白質(zhì)隨著年齡的增加而增加，已證明其與身體內(nèi)積累的蛋白質(zhì)的分解異常引起的疾病或障礙(阿爾查默病、帕金森病、路易體癡呆、三堿基重復(fù)病、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、白內(nèi)障、動(dòng)脈硬化、糖尿病腎病癥、皮膚光老化、皮膚皺褶等)等很多疾病相關(guān)(非專(zhuān)利文獻(xiàn)BIO Clinica，11卷、第5號(hào)、1996年)。此外，即使年輕，因過(guò)度緊張、紫外線等而使身體內(nèi)慢慢產(chǎn)生大量活性氧時(shí)，會(huì)加速異常蛋白質(zhì)的積累?，F(xiàn)在，因蛋白質(zhì)分解異常引起的疾病的預(yù)防及治療已成為大的課題。以往，有關(guān)抑制異常蛋白質(zhì)在身體內(nèi)積累方面，已經(jīng)對(duì)抑制蛋白質(zhì)氧化修飾進(jìn)行了研究。即嘗試將身體抑制機(jī)制不能應(yīng)對(duì)程度的由氧化應(yīng)激反應(yīng)生成的活性氧，通過(guò)攝取抗氧化物質(zhì)而消除，從而抑制蛋白質(zhì)氧化。代表性的抗氧化物質(zhì)是維生素E類(lèi)、類(lèi)胡蘿卜素類(lèi)及多種植物中含有的類(lèi)黃酮類(lèi)。
但是，雖然抗氧化物質(zhì)的攝取有助于消除身體內(nèi)產(chǎn)生的活性氧，但是對(duì)已經(jīng)積累的異常蛋白質(zhì)的除去不起任何作用。因此，為了預(yù)防和治療與伴隨年齡增加而在身體內(nèi)積累的異常蛋白質(zhì)相關(guān)的各種疾病，必須除去異常蛋白質(zhì)。
一方面，本發(fā)明者著眼于大豆皂苷的作用機(jī)理并對(duì)其繼續(xù)研究，已提出其具有除去異常蛋白質(zhì)功能(專(zhuān)利文獻(xiàn)1日本特開(kāi)2002-179592號(hào)公報(bào)、專(zhuān)利文獻(xiàn)2日本特開(kāi)2004-115438號(hào)公報(bào))、預(yù)防或改善紫外線損傷功能(專(zhuān)利文獻(xiàn)3日本特開(kāi)2004-131431號(hào)公報(bào))等。
另一方面，本發(fā)明者對(duì)除去異常蛋白質(zhì)的成分進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)除大豆皂苷以外，羽衣甘藍(lán)(Kale)(專(zhuān)利文獻(xiàn)4日本特開(kāi)2004-91398號(hào)公報(bào))也具有該功能。
以預(yù)防和治療與異常蛋白質(zhì)相關(guān)的伴隨年齡增加而引起的各種疾病為目的，已經(jīng)證明如果使用上述大豆皂苷，作為通常的攝取量負(fù)擔(dān)量增多。所以對(duì)使用少量就具有高效的成分進(jìn)行開(kāi)發(fā)研究。
專(zhuān)利文獻(xiàn)1日本特開(kāi)2002-179592號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)2日本特開(kāi)2004-115438號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)3日本特開(kāi)2004-131431號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)4日本特開(kāi)2004-91398號(hào)公報(bào)發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是，著眼于大豆皂苷，特定并提供高效的除去異常蛋白質(zhì)用組合物，并且提供有助于因蛋白質(zhì)分解異常引起的疾病的預(yù)防及治療等的組合物、制劑、食品。
本發(fā)明者為了達(dá)到上述目的，使用大豆皂苷的分離物研究除去異常蛋白質(zhì)的成分。其結(jié)果在高純度B類(lèi)大豆皂苷中發(fā)現(xiàn)了所期望的效果，完成了本發(fā)明。
本發(fā)明的主要構(gòu)成如下所示。
(1)除去異常蛋白質(zhì)用組合物，其特征在于，以B類(lèi)大豆皂苷為主要成分。
(2)如上述(1)所述的除去異常蛋白質(zhì)用組合物，其特征在于，B類(lèi)大豆皂苷為在100重量份大豆提取物中含有40～100重量份B類(lèi)大豆皂苷的大豆提取物。
(3)如上述(1)或(2)所述的除去異常蛋白質(zhì)用組合物，其中，B類(lèi)大豆皂苷為SoyasaponinI、II、III、IV、V或這些物質(zhì)的乙酰體，A類(lèi)大豆皂苷為SoyasaponinA1、A2、A3、A4、A5、A6、Ac、Ad或這些物質(zhì)的乙酰體、或這些物質(zhì)的混合物。
(4)如上述(1)～(3)中任一項(xiàng)所述的除去異常蛋白質(zhì)用組合物，其特征在于，含有從膠原、明膠、膠原水解物、明膠水解物中選擇的任何一種以上及/或水飛薊素。
(5)紫外線損傷預(yù)防·改善劑用組合物，其含有上述(1)～(4)中任一項(xiàng)所述的除去異常蛋白質(zhì)用組合物。
(6)抗老化食品，其含有上述(1)～(4)中任一項(xiàng)所述的除去異常蛋白質(zhì)用組合物或上述(5)所述的紫外線損傷預(yù)防·改善劑用組合物。
(7)抑制皮膚灰暗或抑制皺紋或保濕用食品，其含有上述(1)～(4)中任一項(xiàng)所述的除去異常蛋白質(zhì)用組合物或上述(5)所述的紫外線損傷預(yù)防·改善劑用組合物。
(8)抗老化化妝料，其含有上述(1)～(4)中任一項(xiàng)所述的除去異常蛋白質(zhì)用組合物或上述(5)所述的紫外線損傷預(yù)防·改善劑用組合物。
(9)抑制皮膚灰暗或抑制皺紋或保濕用化妝料，其含有上述(1)～(4)中任一項(xiàng)所述的除去異常蛋白質(zhì)用組合物或上述(5)所述的紫外線損傷預(yù)防·改善劑用組合物。
(10)抗老化飼料或動(dòng)物藥，其含有上述(1)～(4)中任一項(xiàng)所述的除去異常蛋白質(zhì)用組合物或上述(5)所述的紫外線損傷預(yù)防·改善劑用組合物。
(11)抑制皮膚灰暗或抑制皺紋或保濕用飼料或動(dòng)物藥，其含有上述(1)～(4)中任一項(xiàng)所述的除去異常蛋白質(zhì)用組合物或上述(5)所述的紫外線損傷預(yù)防·改善劑用組合物。
(12)寵物動(dòng)物用抗老化化妝料，其含有上述(1)～(4)中任一項(xiàng)所述的除去異常蛋白質(zhì)用組合物或上述(5)所述的紫外線損傷預(yù)防·改善劑用組合物。
(13)寵物動(dòng)物用抑制皮膚灰暗或抑制皺紋或保濕用化妝料，其含有上述(1)～(4)中任一項(xiàng)所述的除去異常蛋白質(zhì)用組合物或上述(5)所述的紫外線損傷預(yù)防·改善劑用組合物。
通過(guò)提供高純度B類(lèi)大豆皂苷作為除去異常蛋白質(zhì)用的有效成分，與以往的大豆皂苷相比，可得到更好的效果，可將沒(méi)有負(fù)擔(dān)的基準(zhǔn)量設(shè)定為通常的攝取量。
使用本發(fā)明的除去異常蛋白質(zhì)用組合物，能夠除去積累的異常蛋白質(zhì)。因此，本發(fā)明的制劑，在蛋白質(zhì)分解異常引起的疾病或障礙(阿爾查默病、帕金森病、路易體癡呆、三堿基重復(fù)病、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、白內(nèi)障、動(dòng)脈硬化、糖尿病腎病癥、皮膚光老化、皮膚皺褶等)等蛋白質(zhì)分解異常引起的疾病的預(yù)防或治療方面有效。并且，也可將其作為抗老化用的化妝料、食品應(yīng)用。
具體來(lái)說(shuō)，可期待其具有抗老化效果、抑制皮膚灰暗效果、抑制皺紋效果、保濕效果、紫外線損傷預(yù)防·改善作用。
作為具體的利用形式，能夠在醫(yī)藥、食品、化妝料、飼料等中利用。


圖1表示UV照射試驗(yàn)中皂苷給藥量和皮膚水分量的關(guān)系。
圖2表示UV照射試驗(yàn)中皂苷給藥量和皮膚彈性的關(guān)系。
圖3表示UV照射試驗(yàn)中皂苷給藥量和皮膚羰基化蛋白質(zhì)的關(guān)系。
圖4表示負(fù)荷百草枯(paraquat)時(shí)皂苷給藥量和皮膚羰基化蛋白質(zhì)的關(guān)系。
圖5表示負(fù)荷百草枯(paraquat)時(shí)皂苷給藥量和肝臟羰基化蛋白質(zhì)的關(guān)系。
圖6表示負(fù)荷百草枯(paraquat)時(shí)皂苷給藥量和紅血球羰基化蛋白質(zhì)的關(guān)系。
具體實(shí)施例方式
以下，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。
在本發(fā)明中，異常蛋白質(zhì)一般是指伴隨年齡增加而被氧化、糖化、或醛修飾的蛋白質(zhì)。
來(lái)自大豆的皂苷，廣泛分布于大豆種子中的種皮、子葉、胚軸或大豆植物體的葉、莖、根等中，其結(jié)構(gòu)上雖然類(lèi)似甘草甜素的結(jié)構(gòu)，但在三萜類(lèi)骨架中具有2～5個(gè)糖組成的糖鏈。根據(jù)糖苷配基(aglycone)(非糖類(lèi))的結(jié)構(gòu)大豆皂苷可分為4類(lèi)(A、B、E、及DDMP類(lèi))，各類(lèi)皂苷均具有多種多樣的糖鏈結(jié)構(gòu)，到目前為止，已鑒定出分別以Soyasapogenol A、B、E、DDMP作為各類(lèi)糖苷配基的8種A類(lèi)、2種E類(lèi)、5種B類(lèi)、6種DDMP類(lèi)(非專(zhuān)利文獻(xiàn)Agric Biol Chem，55315-322(1991)(非專(zhuān)利文獻(xiàn)AgricBiol Chem，55911-917(1991)(非專(zhuān)利文獻(xiàn)Agric Biol Chem，57546-550(1993))。
A類(lèi)皂苷是在Soyasapogenol A的C-3和C-22位這兩處結(jié)合糖鏈的雙糖鏈皂苷，僅分布于大豆的種子胚軸中，是產(chǎn)生不愉快味道(苦味、收斂味)的主要原因。有關(guān)A類(lèi)皂苷現(xiàn)在有2種命名，Soyasaponin A1和Soyasaponin Ab是同一種化合物，同樣A2為Af、A3為Ah、A4為Aa、A5為Ae、A6為Ag。對(duì)于Ac及Ad的別名還不清楚(非專(zhuān)利文獻(xiàn)BBB62(12)2291-2299，1998)。
B類(lèi)皂苷和E類(lèi)皂苷是僅在C-3位結(jié)合1個(gè)糖鏈的單糖鏈皂苷。DDMP類(lèi)皂苷在溫和條件下提取后能夠精制(非專(zhuān)利文獻(xiàn)Agric Biol Chem，57546-550(1993))，但在加熱條件下及堿性條件下轉(zhuǎn)化為B類(lèi)皂苷。因此，大豆中存在的皂苷幾乎都是A類(lèi)皂苷和DDMP類(lèi)皂苷，B類(lèi)皂苷只有少量，推測(cè)B類(lèi)皂苷大多在提取時(shí)由DDMP類(lèi)皂苷生成的Artifact成分。B類(lèi)皂苷大量存在于大豆胚軸、子葉中，有關(guān)B類(lèi)皂苷現(xiàn)在有2種命名，Soyasaponin I和Soyasaponin Bb是同一種化合物，同樣II為Bc、III為Bb’、IV為Bc’、V為Ba(非專(zhuān)利文獻(xiàn)BBB 62(12)2291-2299，1998)。
以往，不清楚大豆皂苷的吸收動(dòng)態(tài)，但推測(cè)Soyasaponin I在人體腸道內(nèi)不會(huì)被直接吸收，而被腸內(nèi)細(xì)菌分解為糖苷配基Soyasapogenol B，并且呈濃度依賴(lài)性吸收，這表明其他B類(lèi)皂苷也作為糖苷配基型被吸收(非專(zhuān)利文獻(xiàn)J Nutr134 1687-1873(2004))。因此，將B類(lèi)皂苷作為食品攝取時(shí)，可推測(cè)不論其組成如何(糖苷、糖苷配基或/及其衍生物等)，同樣作為糖苷配基型被吸收。
一般來(lái)說(shuō)，皂苷多具有溶血性，但有報(bào)告指出大豆皂苷幾乎沒(méi)有溶血性(非專(zhuān)利文獻(xiàn)基礎(chǔ)和臨床(日語(yǔ)原文基礎(chǔ)と臨床)Vol.15No.5 1981)。此外，本發(fā)明者對(duì)從大豆中得到的大豆皂苷類(lèi)在家兔2％血液懸浮液中的溶血指數(shù)進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果其與人參皂苷相同，為100以下，證明其沒(méi)有溶血性，與其他報(bào)告一致。
本發(fā)明者為了分析B類(lèi)大豆皂苷的安全性，對(duì)變異原性及急性毒性進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果均無(wú)異常，證明其安全性高。
本發(fā)明的高含量B類(lèi)大豆皂苷，可以通過(guò)下述工序制得。
原料大豆胚軸可以使用事先用有機(jī)溶劑等脫脂后的大豆胚軸，也可以使用未脫脂的大豆胚軸，但從皂苷的提取效率來(lái)看，優(yōu)選使用脫脂后的大豆胚軸。從原料大豆胚軸中提取皂苷的方法，一般的方法是在室溫到80℃下，在原料中加入其5～10倍容量的提取溶劑進(jìn)行攪拌，但只要是能夠充分提取皂苷的條件，沒(méi)有特別限定。
本發(fā)明中的離子交換樹(shù)脂，只要是含有3級(jí)胺的弱堿性陰離子交換樹(shù)脂，沒(méi)有特別限定，可利用粒徑不均勻的樹(shù)脂例如三菱化成制DIAIONWA-30等，但優(yōu)選在平均粒徑±10％的范圍內(nèi)具有90％以上的粒度分布的均勻粒徑的離子交換樹(shù)脂。
從上述皂苷提取液中通過(guò)蒸餾操作餾去溶劑，將用水稀釋的皂苷溶液吸附于上述離子交換樹(shù)脂，然后用水、醇、含水醇洗滌樹(shù)脂，然后再使用酸或堿洗脫出吸附于樹(shù)脂上的皂苷。將洗脫的皂苷溶液直接干燥得到的大豆皂苷粗精制物的純度低為20～50重量％，皂苷以外的雜質(zhì)多，生理活性高的B類(lèi)大豆皂苷的比率僅低為20～30重量％程度。
為了提高皂苷的純度，將洗脫的皂苷直接用水稀釋?zhuān)乖碥瘴接跓o(wú)極性的合成吸附劑上。作為無(wú)極性的合成吸附劑，有苯乙烯·二苯乙烯型樹(shù)脂等，可以使用如三菱化學(xué)制的DIAION HP-20、Rohm and Haas公司制的Amberlite XAD-2等。使其吸附于合成吸附劑上時(shí)使用的含水醇的醇濃度因醇的種類(lèi)不同而不同，如果是甲醇優(yōu)選為0～50重量％，乙醇則優(yōu)選為0～30重量％。接著，用水或含水乙醇洗滌樹(shù)脂后，使用比洗滌時(shí)的醇濃度高的含水醇進(jìn)行洗脫，能夠得到高純度皂苷溶液。
根據(jù)需要使用pH調(diào)節(jié)劑將得到的高純度皂苷溶液調(diào)節(jié)pH后，采用加熱干燥、減壓加熱干燥、噴霧干燥、冷凍干燥等方法進(jìn)行干燥，能夠得到高純度大豆皂苷粉末。
通過(guò)上述工序能夠高效、廉價(jià)地得到純度為70重量％以上的高純度大豆皂苷，并且能夠?qū)⒒钚愿叩腂類(lèi)大豆皂苷濃縮為50重量％以上的濃度，此外，能夠?qū)⒖傇碥罩械腂類(lèi)大豆皂苷的比率提高為70重量％以上。
使用樹(shù)脂進(jìn)行精制的順序?yàn)椋褂藐庪x子交換樹(shù)脂進(jìn)行處理后，使用無(wú)極性合成吸附劑進(jìn)行精制。先用合成吸附劑處理時(shí)，低極性物質(zhì)等被合成吸附劑牢固吸附，即使進(jìn)行堿處理等通常的樹(shù)脂再生處理，也會(huì)引起樹(shù)脂劣化，樹(shù)脂能力逐漸降低，與此相比，通過(guò)先用陰離子交換樹(shù)脂對(duì)大豆皂苷進(jìn)行粗精制，能夠除去大豆異黃酮、寡糖，還可以除去低極性物質(zhì)，使接下來(lái)的無(wú)極性合成吸附劑的處理能力提高，難于發(fā)生劣化。此時(shí)，陰離子交換樹(shù)脂通過(guò)堿處理可以重復(fù)使用多次。
調(diào)制的富含B類(lèi)大豆皂苷的組合物，其具有良好的除去異常蛋白質(zhì)作用、紫外線損傷預(yù)防·改善作用、抗老化作用、抑制皮膚灰暗作用、抑制皺紋作用及保濕作用的效果，并可得到確認(rèn)。
利用這種作用效果的形式為，醫(yī)藥、食品、飲料、營(yíng)養(yǎng)輔助食品、食品添加劑、化妝料、飼料、飼料添加劑、動(dòng)物藥等。均可供與經(jīng)口給藥或非經(jīng)口給藥。
高純度B類(lèi)大豆皂苷本身可用于各種用途，并且根據(jù)目的可以預(yù)先與各種其他成分混合，或添加到食品、飼料或動(dòng)物藥中。
作為食品，可直接或添加各種營(yíng)養(yǎng)成分使用。例如可以在添加淀粉、乳糖、麥芽糖、植物油脂粉末、可可脂粉末、硬脂酸等適當(dāng)助劑后，使用常用方法，使其成型為適合食用的形式如顆粒狀、粒狀、片劑、膠囊、糊狀等，作為健康輔助食品、保健功能性食品等供與食用；或也可以添加在各種食品如火腿、香腸等肉食加工食品，魚(yú)糕、圓筒狀魚(yú)糕等水產(chǎn)加工食品，面包、點(diǎn)心、黃油、奶粉、發(fā)酵乳制品中使用；也可以添加在水、果汁、牛奶、清涼飲料等飲料中使用。所述的制劑、食品，能夠利用通常采用的制劑化技術(shù)制造。
作為化妝料，直接或添加在小麥胚芽油或橄欖油等中作為化妝料成分使用，可使用這些物質(zhì)制造化妝料。
作為醫(yī)藥的適用方法，可采用經(jīng)口給藥或非經(jīng)口給藥的任何方式。給藥時(shí)，可以將有效成分和適合經(jīng)口給藥、直腸內(nèi)給藥、注射等給藥方法的固體或液體醫(yī)藥用無(wú)毒性載體混合，以常用的醫(yī)藥制劑形式給藥。
非經(jīng)口適用的組合物，可適用于如水溶液、油劑、乳液、懸浮液等液體制劑，凝膠、乳膏等半固體制劑，粉末、顆粒、膠囊、微膠囊、固體等固體制劑的形式。采用以往公知的方法制成上述形式，能夠制成洗劑、乳劑、凝膠劑、乳膏劑、軟膏、硬膏、巴布劑、氣霧劑、栓劑、注射劑、粉末劑等各種劑型。通過(guò)涂抹、粘貼、噴霧等可將這些制劑適用于身體上。特別是這些劑型中，洗劑、乳劑、乳膏劑、軟膏劑、硬膏劑、巴布劑、氣霧劑等適用于皮膚外用劑。作為化妝料，可以為化妝水、乳液、乳膏、面膜等皮膚化妝料，化妝底液、化妝乳膏、乳液狀或乳膏或軟膏型粉底、口紅、眼影、胭脂等化妝用化妝料，護(hù)手霜、護(hù)腿霜、護(hù)體液等身體用化妝料等。
預(yù)先形成與增量劑混合的組合物的狀態(tài)能夠方便使用。作為增量劑，能夠使用葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖等糖類(lèi)，山梨糖醇等糖醇，糊精、環(huán)糊精等加工淀粉、小麥淀粉、玉米淀粉等淀粉類(lèi)，酪蛋白、大豆蛋白質(zhì)等蛋白質(zhì)，阿拉伯膠、海藻酸鈉、酪蛋白鈉、明膠、果膠、粉末纖維素、羧甲基纖維素等高分子穩(wěn)定劑，卵磷脂、蔗糖脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯等乳化劑、鈣粉末等。
本發(fā)明的除去異常蛋白質(zhì)用組合物，除含有上述高純度B類(lèi)大豆皂苷外，還可含有具有抗氧化作用的化合物。具有抗氧化作用的化合物沒(méi)有特別限定，例如可以為各種維生素類(lèi)、水飛薊素等各種多酚類(lèi)、生育三烯酚、輔酶素Q10及含有這些物質(zhì)的天然成分等。
本發(fā)明的除去異常蛋白質(zhì)用組合物，除含有上述高純度B類(lèi)大豆皂苷外，還可含有具有身體膠原合成促進(jìn)劑的化合物。具有身體膠原合成促進(jìn)作用的化合物，沒(méi)有特別限定，例如可以為膠原及明膠的分解物、包含N末端含有甘氨酸的三肽的肽混合物等。
膠原可使用從牛、豬、魚(yú)等動(dòng)物的皮膚、骨及腱等結(jié)締組織中提取的物質(zhì)，或使膠原進(jìn)行熱變性后的明膠等所有膠原。作為膠原及/或明膠的分解物，優(yōu)選使用含有分子量為400以下的分解物的多肽，更優(yōu)選含有高含量平均分子量在200～300附近的分解物的多肽。含有分子量為400以下的分解物的多肽、更優(yōu)選的含有高含量的平均分子量在200～300附近的物質(zhì)的多肽，因?yàn)榘被岬姆肿恿繛?00左右，所以相當(dāng)于含有高含量三肽的多肽。分子量為400以下的膠原及/或明膠的分解物可以精制，也可不精制。例如也可以為其他膠原及/或明膠的分解物等的混合物。
因此，膠原及/或明膠的分解物，通過(guò)含有作為特定有效成分的分子量約為400以下的肽，通過(guò)其水解處理，能夠有助于提高身體內(nèi)的膠原合成促進(jìn)活性。
水飛薊素(Silymarin；CAS No.65666-07-1)是從菊科水飛薊(別名大薊、大翅薊、奶薊草；CAS No.84604-20-6)中提取的黃酮木脂素的總稱(chēng)，已確認(rèn)的主要成分有水飛薊賓(Silybin；CAS No.22888-70-6)、水飛薊寧Silydianin；CAS No.29782-68-1)、水飛薊亭(Silychristin；CASNo.33889-69-9)、異水飛薊賓(Isosilybin；CAS No.72581-71-6)等(天然藥物事典(日文原文天然薬物事典)奧田拓男編)。水飛薊素自古以來(lái)在歐洲一直用以預(yù)防和治療肝臟疾病而被使用。此外，其作為抗氧化劑廣為人知。作為對(duì)皮膚有用的組合物，已知有治療干癬及特應(yīng)性皮炎的制劑(專(zhuān)利文獻(xiàn)日本特開(kāi)平5-286864號(hào)公報(bào))；含有作為活性成分的黃酮木脂素和磷脂質(zhì)的復(fù)合物，對(duì)紅斑、燒傷、皮膚或粘膜的營(yíng)養(yǎng)障礙狀態(tài)、皮炎等的治療，防止皮膚老化及放射線、風(fēng)、太陽(yáng)等外部環(huán)境的刺激的保護(hù)方面有用的組合物(專(zhuān)利文獻(xiàn)專(zhuān)利第2948818號(hào))；透過(guò)表皮屏障強(qiáng)化劑(專(zhuān)利文獻(xiàn)日本特開(kāi)2000-169328)；皮脂分泌抑制劑(專(zhuān)利文獻(xiàn)日本特開(kāi)2000-169332)等。水飛薊素通常是從水飛薊的果實(shí)中進(jìn)行醇提取，利用噴霧干燥得到的干燥粉末提取物作為原料銷(xiāo)售。本發(fā)明使用的水飛薊素可直接使用市售的水飛薊素。此外，可以使用從水飛薊中分離、精制水飛薊賓、水飛薊寧、水飛薊亭、異水飛薊賓等水飛薊素的構(gòu)成成分得到的化合物。
本發(fā)明的除去異常蛋白質(zhì)用組合物，可以用于抗老化、抗紫外線損傷。并且，同時(shí)含有具有除去異常蛋白質(zhì)作用的化合物和具有抗氧化作用的化合物或具有身體膠原合成促進(jìn)作用的化合物的組合物，能夠提供具有抗老化作用、具有抑制異常蛋白質(zhì)積累及除去異常蛋白質(zhì)功能的抗老化用組合物。
具有除去異常蛋白質(zhì)作用的化合物，可作為化妝料使用，其化妝料具有抗老化、抗皮膚灰暗、抗皺紋、保濕的用途。本發(fā)明的組合物，能夠經(jīng)口給藥、或?qū)](méi)有溶血性的組合物作為注射劑給藥等非經(jīng)口給藥。經(jīng)口給藥時(shí)，能夠以健康食品、美容食品等食品形式給藥。
本發(fā)明的組合物，能夠適用于如水溶液、油劑、乳液、懸浮液等液體制劑，凝膠、乳膏等半固體制劑，散劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑等固體制劑的形式。采用以往公知方法制備成所述形式，能夠得到各種劑型。洗劑、乳劑、乳膏劑、軟膏劑、硬膏劑、巴布劑、氣霧劑等適用于皮膚外用劑。
本發(fā)明的化妝料中，可含有植物油類(lèi)的油脂類(lèi)、高級(jí)脂肪酸、高級(jí)醇、聚硅氧烷、陰離子表面活性劑、陽(yáng)離子表面活性劑、兩性表面活性劑、非離子表面活性劑、防腐劑、糖類(lèi)、金屬離子鰲合劑、水溶性高分子類(lèi)的高分子、增粘劑、粉體成分、紫外線吸收劑、紫外線遮斷劑、透明質(zhì)酸類(lèi)的保濕劑、香料、pH調(diào)節(jié)劑等。并且也能夠含有維生素類(lèi)、皮膚賦活劑、血流循環(huán)促進(jìn)劑、常在菌控制劑、活性氧除去劑、抗炎癥劑、抗癌劑、美白劑、殺菌劑等其他藥效成分、生理活性成分。
化妝料可以為，化妝水、乳液、乳膏、面膜等皮膚化妝料，化妝底液、化妝乳膏、乳液狀或乳膏狀或軟膏型粉底，護(hù)手霜、護(hù)腿霜、護(hù)體液等身體用化妝料等，入浴劑、頭發(fā)化妝料。通常按照化妝料使用的制劑化方法，能夠制造所述劑型?？梢詾榭诩t、眼影、胭脂等粉飾類(lèi)化妝料。
本發(fā)明的除去異常蛋白質(zhì)用組合物，含有作為主要有效成分的高純度B類(lèi)大豆皂苷，除此之外，根據(jù)需要能夠含有藥學(xué)許可的稀釋劑或載體等添加劑。此外根據(jù)需要，本發(fā)明的組合物能夠含有具有藥學(xué)活性的其他藥效成分。
現(xiàn)在，普遍認(rèn)為積累的異常蛋白質(zhì)與阿爾查默病、帕金森病、路易體癡呆、三堿基重復(fù)病、肌萎縮性側(cè)索硬化癥、白內(nèi)障、動(dòng)脈硬化、糖尿病腎病癥、皮膚光老化、皮膚灰暗或皮膚皺紋等疾病相關(guān)。因此認(rèn)為，通過(guò)攝取本發(fā)明的除去異常蛋白質(zhì)用組合物，可以預(yù)防或治療上述疾病(非專(zhuān)利文獻(xiàn)The FASEBJournal、9卷、1173-1182頁(yè)、1995年)。
本發(fā)明的組合物，可應(yīng)用于預(yù)防老化及防止老化用化妝料或健康食品、抗衰老化妝料或美容食品、預(yù)防皮膚氧化及防止皮膚氧化的化妝料或健康食品。本發(fā)明的除去異常蛋白質(zhì)用組合物，對(duì)于哺乳動(dòng)物具有良好的作用，且安全性高。
本發(fā)明的組合物，對(duì)將要暴露于紫外線或已暴露于紫外線的身體組織、特別是皮膚，可用于能夠預(yù)防或改善紫外線引起的損傷的紫外線預(yù)防或改善用組合物。其對(duì)因紫外線暴露產(chǎn)生的活性氧產(chǎn)生的細(xì)胞內(nèi)變性蛋白質(zhì)(異常蛋白質(zhì))進(jìn)行高效分解，抑制紫外線暴露引起的細(xì)胞損傷。
此外，根據(jù)用途、劑型能夠添加下述物質(zhì)。
作為油脂類(lèi)，例如可以為山茶油、月見(jiàn)草油、澳洲堅(jiān)果油、橄欖油、菜籽油、玉米油、芝麻油、霍霍巴油、胚芽油、小麥胚芽油、辛酸甘油三酯等液體油脂，可可脂、椰子油、硬化椰子油、棕櫚油、棕櫚核油、樹(shù)蠟、樹(shù)蠟核油、硬化油、硬化蓖麻油等固體油脂，蜂蠟、小燭樹(shù)蠟、棉蠟、糠蠟、羊毛脂、醋酸羊毛脂、液體羊毛脂、甘蔗蠟等蠟類(lèi)。
作為烴類(lèi)，例如可以為流體石蠟、角鯊烯(Squalene)、角鯊?fù)?Squalan)、Microcrystallenn wax等。
作為高級(jí)脂肪酸，例如可以為月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸、二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)。
作為高級(jí)醇，例如可以為月桂醇、硬脂醇、鯨蠟醇、十六烷醇～十八烷醇混合物等直鏈醇，單硬脂酰甘油醚、羊毛脂醇、膽固醇、植物甾醇、辛基十二烷醇等支鏈醇等。
作為聚硅氧烷，例如可以為鏈狀聚硅氧烷的二甲基聚硅氧烷、甲基苯基聚硅氧烷等，環(huán)狀聚硅氧烷的十甲基環(huán)戊硅氧烷等。
作為陰離子表面活性劑，例如可以為月桂酸鈉等脂肪酸鹽、月桂基硫酸鈉等高級(jí)烷基硫酸酯鹽、POE月桂基硫酸三乙醇胺等烷基醚硫酸酯鹽、N-酰替肌氨酸、硫基琥珀酸鹽、N-?；被猁}等。
作為陽(yáng)離子表面活性劑，例如可以為硬脂基三甲基氯化銨等烷基三甲基銨鹽、氯化亞芐基毒芹、氯化芐基銨等。
作為兩性表面活性劑，例如可以為烷基甜菜堿、胺基甜菜堿等甜菜堿類(lèi)表面活性劑等。
作為非離子表面活性劑，例如可以為山梨糖醇苷單油酸酯等山梨糖醇苷脂肪酸酯類(lèi)、硬化蓖麻油衍生物。
作為防腐劑，例如可以為對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯乙酸乙酯等。作為金屬離子鰲合劑，例如可以為乙二胺四乙酸二鈉、EDTA酸、EDTA酸鈉鹽等EDTA酸鹽。
作為高分子，例如可以為阿拉伯膠、黃蓍膠、半乳聚糖、瓜爾膠(Guargum)、卡拉膠(Carrageenan)、果膠、瓊脂、榅桲種子(Cydonia oblonga)、葡聚糖、支鏈淀粉、羧甲基淀粉、膠原、酪蛋白、明膠、甲基纖維素、甲基羥基丙基纖維素、羥基乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉(CMC)、海藻酸鈉、羧基乙烯聚合物(CARBOPOL)等乙烯類(lèi)高分子等。
作為增粘劑，例如可以為卡拉膠、黃蓍膠、榅桲種子、酪蛋白、糊精、明膠、CMC、羥基乙基纖維素、羥基丙基纖維素、羧基乙烯聚合物、瓜爾膠、蒼耳烷膠、膨潤(rùn)土等。
作為粉末成分，例如可以為滑石、高嶺土、云母、硅石、沸石、聚乙烯粉末、聚苯乙烯粉末、纖維素粉末、無(wú)機(jī)白色顏料、無(wú)機(jī)紅色類(lèi)顏料、氧化鈦云母粉、氧化鈦滑石粉、著色氧化鈦云母粉等珍珠顏料、紅色201號(hào)、紅色202號(hào)等有機(jī)顏料等。
作為紫外線吸收劑，例如可以為對(duì)氨基安息香酸、水楊酸苯酯、對(duì)甲氧肉桂酸異丙酯、對(duì)甲氧基肉桂酸辛酯、2，4-二羥基二苯甲酮等。
作為紫外線遮斷劑，例如可以為氧化鈦、滑石、胭脂紅、膨潤(rùn)土、高嶺土、氧化鋅等。
作為保濕劑，例如可以為聚乙二醇、丙二醇、二丙二醇、1，3-丁二醇、1，2-戊二醇、甘油、二甘油、聚甘油、木糖醇、麥芽糖醇、麥芽糖、山梨醇、葡萄糖、果糖、軟骨素硫酸鈉、透明質(zhì)酸鈉、乳酸鈉、吡咯烷酮羧酸、環(huán)糊精等。
作為藥效成分，例如可以為維生素A油、視黃醇等維生素A類(lèi)，核黃素等維生素B2類(lèi)，吡多辛鹽酸鹽等B6類(lèi)，L-抗壞血酸、L-抗壞血酸磷酸酯、L-抗壞血酸單棕櫚酸酯、L-抗壞血酸二棕櫚酸酯、L-抗壞血酸-2-葡糖苷等維生素C類(lèi)，泛酸鈣等泛酸類(lèi)，維生素D2、膽骨化醇等維生素D類(lèi)，α-生育酚、乙酸生育酚、煙酸DL-α-生育酚等維生素E類(lèi)等。
可以為胎盤(pán)提取物、谷胱肝肽、虎耳草提取物等美白劑，蜂王漿、山毛櫸提取物等皮膚賦活劑，辣椒素、姜辣素、斑蝥粉、魚(yú)石脂、咖啡因、單寧酸、γ-谷維素等血液循環(huán)促進(jìn)劑，甘草酸衍生物、甘草次酸(Glycyrrhetinic acid)衍生物、庚五烯等消炎劑，精氨酸、絲氨酸、白氨酸、色氨酸等氨基酸類(lèi)，常在菌抑制劑的麥芽糖蔗糖聚合物、氯化溶菌酶等。
進(jìn)而可以為母菊提取物、荷蘭芹提取物、山毛櫸提取物、葡萄酒酵母提取物、葡萄柚提取物、金銀花提取物、大米提取物、葡萄提取物、忽布提取物、米糠提取物、枇把提取物、黃檗提取物、薏苡仁提取物、當(dāng)藥提取物、草木樨(Melilotus officinalis Lam)提取物、白樺提取物、甘草提取物、芍藥提取物、皂草提取物、絲瓜提取物、辣椒提取物、檸檬提取物、龍膽(Gentiaha)提取物、紫蘇提取物、蘆薈提取物、迷迭香提取物、鼠尾草提取物、麝香草(thyme)提取物、茶提取物、海藻提取物、黃瓜提取物、丁香(clove)提取物、人參提取物、Marronnier提取物、金縷梅(Hamamelis)提取物、山桑提取物等各種提取物。
以下，根據(jù)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)地說(shuō)明，但本發(fā)明并不限于這些實(shí)施例等。
實(shí)施例1使無(wú)毛小白鼠在70天內(nèi)經(jīng)口攝取大豆皂苷，照射UVA及UVB，對(duì)高純度B類(lèi)大豆皂苷的有用性進(jìn)行探討。
導(dǎo)入時(shí)使用6周齡的無(wú)毛小白鼠(HosHR-1♂)，在以下條件下進(jìn)行試驗(yàn)。
1)試驗(yàn)對(duì)象物的制備及給藥無(wú)毛小白鼠的分組是在給藥開(kāi)始日，根據(jù)體重將一般狀態(tài)良好的動(dòng)物分成每組5只，各組間沒(méi)有差別。并且，各個(gè)體在1籠/組的條件下飼養(yǎng)。將粗大豆皂苷(A類(lèi)大豆皂苷14.9％、B類(lèi)大豆皂苷25.8％)懸浮于蒸餾水中，使單位體重的總皂苷量為50mg/kg((a)粗原料為123mg/kg)，將B類(lèi)大豆皂苷(A類(lèi)大豆皂苷9.5％、B類(lèi)大豆皂苷69.4％)懸浮于蒸餾水中，使單位體重的B類(lèi)皂苷量為50mg/kg((b)B類(lèi)皂苷原料為72mg/kg)，分別每日1次、10周時(shí)間使用胃管強(qiáng)制經(jīng)口給藥使其攝取。實(shí)施UV照射日是在照射2小時(shí)后進(jìn)行給藥。飼養(yǎng)條件如表1所示。


2)皮膚水分量的測(cè)定測(cè)定水分量時(shí)使用水分測(cè)定儀，對(duì)背部的從尾根部朝向頭部2cm、從腰椎向右側(cè)0.5cm的部位測(cè)定3次并求其平均值。測(cè)定日定為試驗(yàn)開(kāi)始日、中間觀察日及解剖日。
3)皮膚彈性的測(cè)定使用皮膚彈性測(cè)定裝置(非專(zhuān)利文獻(xiàn)Cutometer SEM 575/ElectronicGmbh co.制)，對(duì)背部的從尾根部朝向頭部2cm、從腰椎向右側(cè)0.5cm的部位測(cè)定3次并求其平均值。測(cè)定日定為解剖日。
4)氧化蛋白質(zhì)的測(cè)定氧化蛋白質(zhì)即羰基化蛋白質(zhì)，使用與因氧化障礙生成的蛋白質(zhì)的羰基特異性結(jié)合的2，4-二硝基苯基肼(DNPH)，將羰基化蛋白質(zhì)標(biāo)記后，使用與DNPH特異性結(jié)合的抗DNPH抗體檢測(cè)。具體方法如下所示，將UV照射部位的皮膚剪下1cm2，加入1ml的0.1M三羥甲基氨基甲烷緩沖液(pH7.5)進(jìn)行均質(zhì)，10000rpm×15分鐘離心分離，將其上清液過(guò)濾后進(jìn)行分析。蛋白質(zhì)的二硝基苯基肼(DNPH)化采用公知的方法(非專(zhuān)利文獻(xiàn)Nakamura，此外，Journal of Biochemistry、119卷、768～774頁(yè)、1996年)。利用SDS-PAGE分離DNPH化的蛋白質(zhì)，使用蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄裝置轉(zhuǎn)錄到Polyvinylidene difluoride(PVDF)膜上。將轉(zhuǎn)錄后的膜置于含有5％脫脂乳的PBS(-)溶液中封閉2小時(shí)以上，洗滌后使其與抗DNPH抗體反應(yīng)2小時(shí)，洗滌后再使其與生物素化抗兔IgG反應(yīng)1小時(shí)，洗滌后使用熒光檢測(cè)試劑盒(ECL PLUS)使PVDF膜感光，使用醫(yī)療用自動(dòng)顯像裝置轉(zhuǎn)錄圖象。使用密度計(jì)進(jìn)行圖象分析。
5)UV照射UV照射時(shí)，將動(dòng)物移到專(zhuān)用PC籠中，每組分別照射UVB20mj/cm2及UVA14j/cm2，在每周的周一、周三及周五這3日循環(huán)照射，照射10周時(shí)間。
6)解剖使每組從本飼養(yǎng)期間結(jié)束后的第二天開(kāi)始絕食18小時(shí)，然后通過(guò)在腹腔內(nèi)給藥戊巴比妥(40mg/kg)導(dǎo)入麻醉，實(shí)施解剖。有報(bào)告指出使用該照射量、照射期間可形成與人體光老化同樣的皮膚皺紋(非專(zhuān)利文獻(xiàn)Jof Dermatologicaln Science 27519-525(2001))。
7)統(tǒng)計(jì)處理試驗(yàn)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差表示，通過(guò)Excel統(tǒng)計(jì)Student’s-ttest檢測(cè)顯著誤差。
1.一般狀態(tài)觀察對(duì)于從第4周左右開(kāi)始UV照射的動(dòng)物，與UV非照射動(dòng)物相比，發(fā)現(xiàn)其頭部皮膚的輕度褐色化、頸部皺紋的深度及后肢背部的皺紋明顯。
在解剖時(shí)的外觀觀察中，確認(rèn)UV照射動(dòng)物的面部、頸部及后肢背部皺紋明顯。但UV照射中，攝取粗大豆皂苷及B類(lèi)大豆皂苷的動(dòng)物的該癥狀為輕度，特別是攝取B類(lèi)大豆皂苷的動(dòng)物的皺紋深度淺，肉眼觀察到的皺紋顏色淡。此外，攝取B類(lèi)大豆皂苷的動(dòng)物，與CONTROL相比較其皮膚有濕潤(rùn)感，特別是UV+攝取B類(lèi)大豆皂苷的動(dòng)物，其癥狀感覺(jué)明顯。
2.體重變化對(duì)于體重變化，各組沒(méi)有發(fā)現(xiàn)大的差異。
3.攝食量對(duì)于攝食量，與體重變化一樣，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)大的差異。
4.肝臟重量對(duì)于肝臟重量，也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)大的差異，沒(méi)有觀察到異常癥狀。此外，其他臟器也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)異常。
5.皮膚水分量可以推測(cè)，皮膚水分量的數(shù)值越大，皮膚中的水分越高即保濕能力越強(qiáng)。一般認(rèn)為通過(guò)UV照射皮膚的水分量會(huì)降低，在本試驗(yàn)中，中間觀察日、解剖日的水分量與對(duì)照組相比，UV照射組的降低。在皮膚水分量的測(cè)定中，在中間觀察日，與UV照射組相比，2組UV照射+攝取大豆皂苷的動(dòng)物都顯示高值。在解剖日的測(cè)定中，與UV照射組相比，UV照射+粗大豆皂苷組顯示低值，但UV照射+B類(lèi)大豆皂苷組的平均值顯示高值，是與對(duì)照組相同程度的值。結(jié)果如圖1所示。
6.皮膚彈性皮膚彈性，可以推測(cè)其數(shù)值越大皮膚的彈性越高。一般認(rèn)為通過(guò)UV照射皮膚的彈性會(huì)降低。其結(jié)果如圖2所示。在UV非照射組中，B類(lèi)大豆皂苷給藥組和粗大豆皂苷組相比，其彈性顯著提高。
7.氧化蛋白質(zhì)的量其結(jié)果如圖3所示，氧化蛋白質(zhì)的量作為羰基化蛋白質(zhì)的量被檢測(cè)。羰基化蛋白質(zhì)，其數(shù)值越低表示其在臟器內(nèi)的積累量越少。圖3表明，通過(guò)UV照射氧化蛋白質(zhì)的量與非照射相比顯著增加，但UV照射的同時(shí)給藥B類(lèi)大豆皂苷的組則顯著減少，表明高純度B類(lèi)大豆皂苷具有除去氧化蛋白質(zhì)的效果。
特別是，粗大豆皂苷組與UV照射組為相同程度，而B(niǎo)類(lèi)大豆皂苷組卻明顯減少，表明發(fā)揮了B類(lèi)大豆皂苷的作用。
由以上結(jié)果可以確認(rèn)，與普通的粗大豆皂苷、對(duì)照組相比，高純度B類(lèi)大豆皂苷對(duì)于因紫外線照射引起的皮膚應(yīng)激反應(yīng)可抑制水分量減少，并且是具有預(yù)防皮膚干燥、皺紋等生成效果的物質(zhì)。此外，與粗大豆皂苷、對(duì)照組相比，高純度B類(lèi)大豆皂苷可使氧化蛋白質(zhì)的量顯著減少，表明高純度B類(lèi)大豆皂苷的除去氧化蛋白質(zhì)效果的有效性。
并且證明，通過(guò)給藥高純度B類(lèi)皂苷，皮膚的彈性提高。用高純度B類(lèi)大豆皂苷50mg/kg對(duì)小白鼠給藥，使用體表面積換算公式y(tǒng)=(3x)2]]>換算成在人體內(nèi)的給藥量，相當(dāng)于約450mg/日/60kg體重，是能夠作為食品并不難于攝取的量。
實(shí)施例2[試驗(yàn)高純度B類(lèi)大豆皂苷對(duì)負(fù)荷百草枯應(yīng)激反應(yīng)大白鼠的效果]導(dǎo)入時(shí)使用6周齡的大白鼠(Wistar/Cri♂)，在以下條件下進(jìn)行試驗(yàn)。
1)試驗(yàn)對(duì)象物的制備及給藥Wistar系大白鼠的分組是在開(kāi)始給藥日，根據(jù)體重將一般狀態(tài)良好的動(dòng)物分成每組5只，各組間沒(méi)有差別。此外，各個(gè)體單獨(dú)飼養(yǎng)。粗大豆皂苷(A類(lèi)大豆皂苷14.9％，B類(lèi)大豆皂苷25.8％)作為混合食物給食，混合于東方酵母公司制的MF飼料中，以單位體重的總皂苷攝取量為15mg/kg進(jìn)行給食。B類(lèi)大豆皂苷(A類(lèi)大豆皂苷9.5％，B類(lèi)大豆皂苷69.4％)也作為混合給食，混合于東方酵母公司制的MF飼料中，以單位體重的B類(lèi)大豆皂苷的攝取量為15mg/kg進(jìn)行給食。百草枯，將使1000mg百草枯溶解于500ml生理食鹽水中的注射溶液，以單位體重10mg/kg的Dose每周1次，2個(gè)月腹腔內(nèi)注射給藥。飼養(yǎng)條件如表2所示。


2)解剖各組從本飼養(yǎng)期間結(jié)束的第二天開(kāi)始絕食18小時(shí)，然后通過(guò)在腹腔內(nèi)給藥戊巴比妥(40mg/kg)導(dǎo)入麻醉，實(shí)施解剖。
3)統(tǒng)計(jì)處理試驗(yàn)結(jié)果如圖4～6所示。
1.一般狀態(tài)觀察百草枯是引起急性中毒的強(qiáng)效農(nóng)藥，給藥后動(dòng)物個(gè)體立即出現(xiàn)體溫降低、失去活力及軟便化。但是，百草枯+大豆皂苷給藥組的該癥狀輕，給藥后第二天恢復(fù)到對(duì)照組水平的狀態(tài)。其中，百草枯+攝取B類(lèi)大豆皂苷的動(dòng)物的該癥狀為輕度，給藥期間的后半期也同樣。
2.體重變化對(duì)于體重變化，各組沒(méi)有發(fā)現(xiàn)大的差異。
3.攝食量對(duì)于攝食量，與體重變化一樣，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)大的差異。
4.氧化蛋白質(zhì)的量的測(cè)定(皮膚/紅血球/肝臟)在抽取的各樣品(皮膚1cm2/血液100μl/肝臟100mg)中加入1ml的0.1M三羥甲基氨基甲烷緩沖液(pH7.5)進(jìn)行均質(zhì)，10000rpm×15分鐘離心分離，將其上清液過(guò)濾后進(jìn)行分析。蛋白質(zhì)的二硝基苯基肼(DNPH)化采用公知的方法(非專(zhuān)利文獻(xiàn)Nakamura，此外，Journal ofBiochemistry、119卷、768～774頁(yè)、1996年)。利用SDS-PAGE分離DNPH化的蛋白質(zhì)，使用蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄裝置轉(zhuǎn)錄到Polyvinylidenedifluoride(PVDF)膜上。將轉(zhuǎn)錄后的膜置于含有5％脫脂乳的PBS(-)溶液中封閉2小時(shí)以上，洗滌后使其與抗DNPH抗體反應(yīng)2小時(shí)，洗滌后，再使其與生物素化抗兔IgG反應(yīng)1小時(shí)，洗滌后使用熒光檢測(cè)試劑盒(ECLPLUS)使PVDF膜感光，使用醫(yī)療用自動(dòng)顯像裝置轉(zhuǎn)錄圖象。使用密度計(jì)進(jìn)行圖象分析。
其結(jié)果如圖4～6所示，氧化蛋白質(zhì)的量作為羰基化蛋白質(zhì)的量被檢測(cè)。圖4～6表明，給藥百草枯后氧化蛋白質(zhì)的量顯著增加，百草枯+高純度B類(lèi)大豆皂苷給藥組的增加得到顯著抑制，與粗大豆皂苷組相比其效果良好。由此表明高純度B類(lèi)大豆皂苷具有除去氧化蛋白質(zhì)效果。
由以上結(jié)果可知，與通常的粗大豆皂苷、對(duì)照組相比，高純度大豆皂苷B可使給藥百草枯后產(chǎn)生的皮膚、肝臟、紅血球中的氧化蛋白質(zhì)的量顯著減少，表明高純度大豆皂苷B的除去氧化蛋白質(zhì)效果的有效性。將高純度B類(lèi)大豆皂苷15mg/kg給藥大白鼠，使用體表面積換算公式y(tǒng)=(3x)2]]>換算成在人體內(nèi)的給藥量，相當(dāng)于約134mg/日/60kg體重，是能夠作為食品并不難于攝取的量。
處方例1[膠囊劑]組成大豆皂苷(含有50％大豆皂苷B) 50mg生育三烯酚 30mg蜂蠟 10mg葡萄籽油 110mg將上述成分混合，填充到混合有明膠和甘油的膠囊基質(zhì)中，得到軟膠囊。
處方例2[片劑]組成大豆皂苷(含有50％大豆皂苷B) 25mg水飛薊(含有65％水飛薊素) 20mg膠原水解物 50mg纖維素 40mg淀粉 20mg蔗糖脂肪酸酯 2mg將上述成分混合、壓片，得到片劑。
處方例3[果汁]

處方例4[乳膏]

將上述成分(1)～(11)加熱到80℃溶解成為油相，將成分(12)～(14)加熱到70℃溶解成為水相。在油相中慢慢加入水相進(jìn)行乳化，邊攪拌邊冷卻到40℃，進(jìn)而攪拌冷卻到30℃，得到乳膏。
權(quán)利要求
1.除去異常蛋白質(zhì)用組合物，其特征在于，以B類(lèi)大豆皂苷為主要成分。
2.如權(quán)利要求1所述的除去異常蛋白質(zhì)用組合物，其特征在于，B類(lèi)大豆皂苷為在100重量份大豆提取物中含有40～100重量份B類(lèi)大豆皂苷的大豆提取物。
3.如權(quán)利要求1或2所述的除去異常蛋白質(zhì)用組合物，其中，B類(lèi)大豆皂苷為Soyasaponin I、II、III、IV、V或這些物質(zhì)的乙酰體，A類(lèi)大豆皂苷為SoyasaponinA1、A2、A3、A4、A5、A6、Ac、Ad或這些物質(zhì)的乙酰體、或這些物質(zhì)的混合物。
4.如權(quán)利要求1～3中任一項(xiàng)所述的除去異常蛋白質(zhì)用組合物，其特征在于，含有從膠原、明膠、膠原水解物、明膠水解物中選擇的任何一種以上及/或水飛薊素。
5.紫外線損傷預(yù)防·改善劑用組合物，其含有權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)所述的除去異常蛋白質(zhì)用組合物。
6.抗老化食品，其含有權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)所述的除去異常蛋白質(zhì)用組合物或權(quán)利要求5所述的紫外線損傷預(yù)防·改善劑用組合物。
7.抑制皮膚灰暗或抑制皺紋或保濕用食品，其含有權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)所述的除去異常蛋白質(zhì)用組合物或權(quán)利要求5所述的紫外線損傷預(yù)防·改善劑用組合物。
8.抗老化化妝料，其含有權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)所述的除去異常蛋白質(zhì)用組合物或權(quán)利要求5所述的紫外線損傷預(yù)防·改善劑用組合物。
9.抑制皮膚灰暗或抑制皺紋或保濕用化妝料，其含有權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)所述的除去異常蛋白質(zhì)用組合物或權(quán)利要求5所述的紫外線損傷預(yù)防·改善劑用組合物。
10.抗老化飼料或動(dòng)物藥，其含有權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)所述的除去異常蛋白質(zhì)用組合物或權(quán)利要求5所述的紫外線損傷預(yù)防·改善劑用組合物。
11.抑制皮膚灰暗或抑制皺紋或保濕用飼料或動(dòng)物藥，其含有權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)所述的除去異常蛋白質(zhì)用組合物或權(quán)利要求5所述的紫外線損傷預(yù)防·改善劑用組合物。
12.寵物動(dòng)物用抗老化化妝料，其含有權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)所述的除去異常蛋白質(zhì)用組合物或權(quán)利要求5所述的紫外線損傷預(yù)防·改善劑用組合物。
13.寵物動(dòng)物用的抑制皮膚灰暗或抑制皺紋或保濕用化妝料，其含有權(quán)利要求1～4中任一項(xiàng)所述的除去異常蛋白質(zhì)用組合物或權(quán)利要求5所述的紫外線損傷預(yù)防·改善劑用組合物。
全文摘要
除去異常蛋白質(zhì)用組合物，其用于提供高效的除去異常蛋白質(zhì)用組合物、或提供有助于因蛋白質(zhì)分解異常引起的疾病的預(yù)防及治療等的組合物、制劑、食品，其中以B類(lèi)大豆皂苷為主要成分。
文檔編號(hào)A61K36/00GK101048166SQ20058003654
公開(kāi)日2007年10月3日 申請(qǐng)日期2005年10月25日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月28日
發(fā)明者小野衣里日, 宮田智 申請(qǐng)人:株式會(huì)社芳珂