專利名稱：使用具有低于10000道爾頓的分子量的白細胞勻漿治療細胞免疫性缺陷的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種由分子量低于10000Da的血液細胞成分制備的組合物，包含該組合物的藥劑，所述組合物的制備，其用于治療細胞免疫性缺陷、尤其是癌癥、敗血病、變態(tài)反應的用途，以及該藥劑在使用例如細胞生長抑制劑或高能輻射治療癌癥患者中的預防用途。
人類和動物周圍的環(huán)境中包括大量的傳染性微生物，例如病毒、細菌、真菌和寄生蟲。此外，代謝的紊亂或改變，尤其是細胞分裂，可能會導致個體自身對病理過程，例如在自身免疫力、腫瘤疾病或良性息肉病中的處理。這些過程-例如處理外部和內部影響-通常發(fā)生交互作用，例如在炎癥反應中，作為對于可能從環(huán)境中侵入個體的病原體的反應的表達，引起細胞增殖。
上述過程可能引起病理性損害，并且，上述如果過程與生物體防御體系發(fā)生不可控相互作用，將會殺滅個體例如宿主。通常，與病原體的斗爭在時間上是有限的，然而，即使在這樣有限的時間里也可能在生物體中引起持久的損傷。這些反應的時限特別是歸功于免疫系統(tǒng)——個體的防御系統(tǒng)。
個體對于環(huán)境影響或者對于個體中的病理改變的免疫反應可以分為兩大類體液的免疫反應和細胞的免疫反應，盡管通常還不能經(jīng)常明確做出這兩種免疫反應對疾病過程和逐漸康復過程的明確任務，這是由于這些內部過程相互作用并且彼此依賴。術語“細胞介導免疫(zellvermittelten Immunitat)”最初被創(chuàng)造用于對生物體、通常是細胞內病原體的局部反應，其主要由于淋巴細胞和吞噬細胞引起，少部分是由于體液免疫系統(tǒng)部分的抗體引起。此外，細胞介導免疫這一術語被用于抗體不起主要作用的任何免疫反應。細胞介導的和抗體介導的反應不能彼此分開，這是因為，例如細胞也參與到抗體的形成中，并且，抗體在大量細胞介導的反應中承擔了介導元素的作用。
事實上，如果能以不同方式影響細胞反應的抗體不存在或者不是以最佳的量存在，則在本發(fā)明中的細胞介導的反應就不可能起動。
細胞免疫反應尤其是與巨噬細胞、B-細胞、T-細胞、淋巴細胞、NK-細胞、單核細胞以及很多其它細胞等相聯(lián)系。
上述細胞對于細胞因子例如TNF、M-CSF或GM-CSF被釋放負責。細胞、細胞因子和環(huán)境影響以及個體自身的反應例如體液免疫的協(xié)同作用會導致-殺微生物和殺腫瘤的活性，-炎癥反應和發(fā)燒，-淋巴細胞的活化，-組織重組和組織損害。
這不僅能殺滅微生物、多細胞寄生蟲，還能破壞腫瘤細胞并引起發(fā)燒反應。
鑒于這部分免疫防御的上述各種功能，人們進行了大量提高該系統(tǒng)活性的嘗試。提高該部分免疫防御的效率在預防中體現(xiàn)出顯著的優(yōu)勢，例如在病人需要進行大的手術時或在采用細胞抑制劑或放療治療病人時。提高細胞免疫反應的嘗試能防止新的感染、其它的轉移或者在腐敗、炎癥過程中具有有益的效果。
尤其是在治療自身免疫性疾病，例如牛皮癬、特異性濕疹、風濕性關節(jié)炎或青少年糖尿病時，認為其具有良好的治療效果，其條件是，在患者中細胞免疫反應能得到改善。
尤其是對于癌癥，關于細胞免疫體系作用的不斷增長的新知識已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了新的治療方法。使用所謂的“癌癥疫苗”試圖引導內生的細胞防御系統(tǒng)以準確的方式應對腫瘤細胞。迄今為止細胞免疫治療癌癥的目的一直是，消除由于腫瘤造成免疫體系的封鎖以及激活抗腫瘤的細胞毒素T細胞。然而，這些過程仍然與自身免疫反應的危險有關。
公知的方法包括，首先從血液或骨髓中分離出免疫細胞，在體外的試管中培養(yǎng)，然后返回給患者?？梢允褂脕碛谧泽w的細胞(同源細胞)或者來自外部供體的細胞(異源細胞)。來自供體和受體的細胞之間的差別越大，移植細胞能夠識別腫瘤細胞的可能性就越大。
進一步提高細胞免疫反應的另一種方法是供給樹狀細胞。據(jù)認為，樹狀細胞在激活免疫反應中起到關鍵作用。它們以下述方式顯示出腫瘤細胞區(qū)別于其它細胞對免疫系統(tǒng)的異常特征可以發(fā)生標記的反應，該反應超出了一個細胞的數(shù)量。
從特定患者身上取出樹狀細胞，與腫瘤細胞或其部分合并，然后返回患者身上。在體內，以這種方式輸入的樹狀細胞隨后呈現(xiàn)出腫瘤細胞片斷，從而引起對腫瘤的免疫反應。
從骨髓或血液移植干細胞是另外一種細胞免疫治療的方式。最初，干細胞移植是用于修復、更新由于高劑量化療治療或輻射損傷的白血病患者的骨髓。然而，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，由外部供體移植來的細胞對癌細胞也具有直接的效果，這是因為它們確實一點也不與這些受體的所有組織特征相符?；颊叩挠善渌w細胞形成的所謂新細胞免疫體系，能將殘留的白血病細胞識別為外來細胞并與其斗爭。
然而，細胞免疫反應的活化是高度規(guī)定的過程并需要大量的生物能量，此外，還涉及自身免疫的危險。因此，這樣的臨床干預對于患者具有不利的危險和副作用。
此外，在現(xiàn)有技術中公開了各種試劑，這些試劑可以從血液制品獲得并用于免疫系統(tǒng)的治療性激活。WO 89/06538A公開了一種由全血得到的組合物，該組合物會發(fā)生木瓜蛋白酶水解和醇變性。使用WO 89/06538所述的的組合物，僅能在某些條件下治愈，這是由于化合物具有大量的副作用。
在現(xiàn)有技術的描述中，US 4384991公開了約25種不同的細胞提取物，這些提取物基本都是由白血球獲得。即，本領域技術人員從該專利可以推斷出存在大量由這樣的細胞獲得的組合物。US 4384991中的這些組合物，由于各自的制備方法或其原料的原因，它們的純度上存在不同。特別優(yōu)選的是使用馬或小牛的白血球作為原料。從來自馬或小牛的原料得到的細胞提取物適合于獲得治療產(chǎn)品。然而，根據(jù)US 4384991的教導，需要分離出純的單獨的縮氨酸。與所謂的指紋特征相比，該縮氨酸的特征是高純度的分子。高純度分離可以通過純化步驟獲得，例如離子交換色譜或紙電泳。然而，來自馬或小牛白血球的純的縮氨酸在用于治療時沒有顯示出任何特別的效果。
雖然含有所揭示的縮氨酸的原始提取物也具有一定的效果，但該組分所需的量很高，使得本領域技術人員無法在實際中使用。此外，僅對于純的縮氨酸描述了不存在毒性效果，由此可以認定，獲得縮氨酸的原始提取物不具有這樣優(yōu)越的性質。
使用丙酮洗滌US 4384991的原始提取物，然后冰凍干燥。丙酮處理(在WO 89/06538中為水解和醇處理)導致原始組分的蛋白質組分的結構改變。尤其是通過在粒性白細胞上的積聚能分離出期望的縮氨酸，即，能有效分離白血球和單核細胞。從馬或小牛血液萃取的粒性白細胞提取物無法實際使用，這是由于其僅在高濃度下具有一定的效果，此外還具有毒性作用。
EP 0140134中公開了來自哺乳動物器官或細胞培養(yǎng)物的提取物。此外，其中還公開了從新鮮小牛血液或小牛血清獲得的細胞培養(yǎng)物的提取物。公開的組合物基本上是缺少具有超過10000Da成分的小牛血清、新鮮小牛血液或去纖維蛋白的小牛血液。這樣的提取物在目標生物體中會引起不期望的防御反應。
因此，本發(fā)明的目的是提供一種技術教導，其不包括現(xiàn)有技術的上述缺陷，能簡單、安全并有效地治療疾病，特別是由于細胞免疫反應的缺失而引起的疾病，例如敗血病、腫瘤疾病、濕疹、牛皮癬、神經(jīng)性皮炎和自身免疫性疾病。本發(fā)明的另一個目的是提供一種技術教導，尤其是一種藥劑，該藥劑可以向使用化療劑和/或輻射進行治療的病人給藥，從而通過改善細胞免疫反應而使患者的狀況達到最優(yōu)化。本發(fā)明還有一個目的是，提供一種用于預防和/或治療由于休克和/或身體的、心理的、精神的、病理的或放射性的結果產(chǎn)生的疲勞綜合癥的藥劑，本發(fā)明的上述任務通過根據(jù)權利要求1的方法而得到解決，該方法尤其是用于制備包括下列組分的組合物完全和/或部分的泛素特異性蛋白酶32、正輔因子2谷氨酰胺/Q-富含的相關蛋白、鈣粘著蛋白、轉錄因子GATA-2、推定的染色質結構調節(jié)物、含CUE域1、SUPT6H蛋白、白細胞介素18受體1前體、白細胞介素1受體類似的蛋白和粘蛋白4和/或腱生蛋白M、瞬時受體電位陽離子通道、外切核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶、SWI/SNF相關基質相關的肌動蛋白依賴的染色質調節(jié)劑、SWI/SNF染色質調節(jié)復合體亞基OSA1B120、OSA1核蛋白、ATP酶、H+/K+交換多肽、鋅指蛋白174、Ig重鏈V區(qū)域、ADAMTS-3前體/脫整聯(lián)蛋白類和金屬蛋白酶、凝結因子II(凝血酶)類受體3、二酰甘油激酶θ、p250R、SWI/SNF染色質-重調節(jié)復合體亞基OSA2、金屬磷酸酯酶、AMP脫氨酶、α-甘露糖苷酶、鈣粘著蛋白-9、Nik-相關激酶、α-1B-腎上腺素能受體、BRCA1-相關蛋白-1、CD99抗原類似的2同種型E3-E4、含SWHCF的肽和/或類FAT鈣粘著蛋白-FATJ、ATP結合區(qū)、核孔蛋白153kDa、ELK3蛋白、蛋白ELK-3ETS域、ATP酶、銅轉運蛋白激酶、蛋白-酪氨酸磷酸酶、無翅型MMTV整合位點族、MYC結合蛋白2、Cullin7、溶解的載體族5(碘化鈉同向轉運體)成員5、富谷氨酸的WD重復包含物1、MAP激酶相互作用的絲氨酸/蘇氨酸激酶1、ATP結合區(qū)、NOV-Plexin-A1蛋白和/或E3泛素連接酶SMURF2、?；?CoA合成酶、雌激素磺基轉移酶、2，4-二烯酰基CoA還原酶1前體、4-烯酰基-CoA還原酶、Claudin 10同種型b、DMBT1、細胞外連接域包含物1、淋巴管內皮細胞特異透明質酸受體LYVE-1、Rho GTP酶活化蛋白8同種型2、帶有血小板應答蛋白型1基元的類去整聯(lián)蛋白和金屬蛋白酶(Reprolysin類型)、Ig重鏈V區(qū)域、AS12蛋白、線粒體核糖體蛋白S9、28S核糖體蛋白S9、蛋白激酶底物MK2S4、NP220、推定的G蛋白偶聯(lián)受體、動力蛋白、軸線(Axonemal)重多肽5、N?；字Ｒ掖及匪饬字窪、白三烯B4受體、G-蛋白偶聯(lián)受體16、蛋白質原轉變酶(Proprotein Convertase)枯草桿菌蛋白酶/Kexin類型-1-抑制劑CMKRL1、雙特異酪氨酸磷酸化-調節(jié)激酶3、調節(jié)紅細胞激酶(長的形式)、DYRK3蛋白質、Igλ鏈V-VII區(qū)域(Mot)-人、谷胱甘肽還原酶、線粒體前體、膠原α1(XVI)鏈前體、11-β-羥基類固醇脫氫酶1、胰島素受體底物2、Vault多(ADP-核糖)聚合酶(VPARP)、鈣/鈣調蛋白-依賴3’，5’-環(huán)核苷酸、鋅指蛋白161、類H2.0同源框-1、類H2.0(果蠅)同源框-1和/或DOCK6(dedicator of cytokinesis 6)。
更令人驚訝的是，根據(jù)本發(fā)明的方法可以從上述細胞血液成分，尤其是淋巴細胞獲得一種組合物，該組合物能用于預防和治療細胞免疫的病原改變且沒有現(xiàn)有技術的缺點。這種獨特的方法步驟會產(chǎn)生具有有利性質的變性產(chǎn)品和分解的產(chǎn)品。本發(fā)明的方法和組合物能溶解迄今為止還不能溶解的緊急組織。迄今為止，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)各種技術對解決細胞免疫的病理改變的問題是沒有效果的。根據(jù)本發(fā)明的教導推薦了解決該問題的簡單方法。目前，科學技術在不同的方向中得到了發(fā)展(參見涉及現(xiàn)有技術狀態(tài)的解釋)。因此，根據(jù)本申請的教導顯示出短期研發(fā)中的成果，消除了在對現(xiàn)有技術中上述問題的解決中的錯誤思想。尤其是通過本發(fā)明的教導獲得的技術進步在如下方面變得顯著方法和由該方法得到的產(chǎn)品的改進或提高性能、低成本、節(jié)約時間、原料、工藝步驟、費用和難以獲得原料、改善的可靠性、錯誤的消除、改善的品質、提高的預防和治療潛力、以及其他試劑的提供和能提供獲得可用于細胞免疫病理改變的藥劑的其他方法，最后，通過根據(jù)本申請的教導，可以得到的藥物的范圍擴展了。
令人驚奇的是，根據(jù)本申請的組合物或制劑能用于預防和治療并具有生物活性。對于治療來說，可以將組合物用作注射藥劑治療慢性感染、膿毒性感染、特異反應性濕疹、神經(jīng)性皮炎(neurodermitis)、牛皮癬以及其他的上述免疫疾病。組合物的預防指征是將組合物給正在放療或使用細胞生長繁殖抑制劑進行化療的患者用藥，以防止或減輕這樣的治療引起的免疫抑制。在患者的手術前階段，將本發(fā)明的組合物預防給藥也是有意義的，例如，輸血會引起細胞耐受不良，其會不利地改變患者的免疫狀態(tài)。
更具體地說，當不同的細胞類型在生長不同階段的增殖和分化需要進行優(yōu)化、CD4或CD8和IF-γ的釋放增加或者T淋巴細胞的活性增加時，該組合物可以以促進或治療的方式使用。
另一種使用可能性是，胸腺細胞群(Th1)的激活或者細胞因子和白細胞介素的釋放。此外，還可以激活鈣離子通過細胞膜的轉移或者改善重要代謝器官例如肝或腎的細胞的氧化代謝。此外，可以激活免疫級聯(lián)(cascade)的規(guī)則抑制機制。
藥物可以是凍干無菌注射配方的形式，例如無菌注射水懸浮液。
上述配方可以以非腸道途徑(靜脈內、肌肉內、皮下)用于人類和動物中。對于動物來說，可以以適當配方通過進食或飲水有效地攝取。
本領域技術人員都知道，本發(fā)明的組合物能以不同的途徑與生物體，優(yōu)選人類或動物接觸。此外，本領域技術人員還知道，藥劑可以以不同的劑量給藥。給藥應當以如下方式進行盡可能有效地與疾病斗爭或通過預防性給藥防止疾病侵害。給藥的濃度和類型可以由本領域技術人員通過常規(guī)試驗確定。本發(fā)明組合物優(yōu)選的給藥是以注射液、浸劑和溶液的方式非腸道給藥。與本發(fā)明的組合物接觸優(yōu)選以預防或治療方式進行。
例如，給藥方式、劑量、給藥制度、輔藥的選擇等的適合性可以按以下所述確定從患者例如人類或動物身上取出血清試樣，并在治療過程中測試疾病的指示劑的存在。作為替換或伴隨的方案，也可以以常規(guī)方法確定腎、肝等的狀況以及免疫系統(tǒng)的T細胞或其他細胞的量，以獲得對患者免疫狀況的常規(guī)調查，尤其是對于代謝十分重要器官的狀況。此外，可以觀察患者的臨床狀況以獲得期望的效果。當獲得的治療效果不足時，可以使用本發(fā)明的藥劑對患者做進一步的治療，任選地使用其他公知的可以帶來整體狀況的改善的藥物進行修飾。
例如，肌肉內、皮下注射或向血管中注射可以認為是本發(fā)明的組合物的治療給藥的優(yōu)選途徑。
在一個優(yōu)選的實施方式中，本發(fā)明的組合物可以以優(yōu)選為每24小時0.05-500mg/kg體重的總量給藥，更優(yōu)選為5-100mg/kg體重。其中，有利的是使用的治療量能預防或改善紊亂、響應或病理生理學狀況的癥狀。
顯而易見的是，劑量取決于受藥人的年齡、健康狀況、重量、疾病的程度、必要的同時進行的治療類型、治療的頻率和期望效果的類型以及副作用。0.05-500mg/kg體重的每日劑量可以作為一次劑量或多次劑量給藥，以獲得期望的結果。通常，該藥劑每日分為1-10次給藥使用，或者，作為替代或附加的方案進行連續(xù)輸液。這樣的給藥可以可以用于慢性疾病或急癥的治療。當注射給藥時，宿主優(yōu)選與本發(fā)明的組合物每天接觸1-10次，或者采用連續(xù)輸液，優(yōu)選每日的量為1-4000mg。優(yōu)選的每日總量在人藥和獸藥中均是優(yōu)選的。也可以不使用上述的劑量，這取決于被治療宿主的性質和體重、疾病的類型和程度、配方的類型和藥劑給藥的方式、以及進行給藥的時間長短或間隔。因此，在某些情況下可以優(yōu)選的是，將藥劑以少于上述的量與生物體接觸，而在另外的情況下，則必須超出上述規(guī)定的有效物質的量。所需優(yōu)選的劑量以及活性物質的給藥方式可以由本領域技術人員根據(jù)本領域的常識簡單確定。
在本發(fā)明的另一個特別優(yōu)選的實施方式中，將該劑以1-100，尤其是2-50mg/kg體重的一次劑量給藥。不管是每日的總量，還是每次給藥的單獨劑量，均可以由本領域技術人員根據(jù)本領域的知識加以改變。本發(fā)明使用的組合物，可以以上述單獨的濃度和配方與飼料或飼料配方或飲用水混合用于動物的治療。在給藥時，一次劑量所含有的有效物質的量相應為1天、半天、三分之一天或四分之一天的劑量。因此，劑量單元優(yōu)選可以含有1、2、3或4或更多的一次劑量或者0.5、0.3或0.25個單獨劑量。優(yōu)選本發(fā)明組合物的每日的劑量分為2-10次給藥，更優(yōu)選為2-7次，特別優(yōu)選為3-5次給藥。顯而易見的是，本發(fā)明的藥劑也可以連續(xù)輸液。
本發(fā)明還涉及制備組合物的方法，該組合物用于上述預防和治療適應證以及用于與治療相關的生物效率的改善，尤其是細胞免疫系統(tǒng)。根據(jù)本發(fā)明的方法包括，收集沒有免疫耐受問題的血液組分并勻化。例如，勻化可以以機械方式進行和/或通過冷凍-融化循環(huán)或通過其它本領域技術人員公知的勻化方法進行。
就本發(fā)明而言，勻化包括所有能引起或促進細胞溶解的方法。通過該勻化，能在所有的范圍內混合自身不能混合或僅能少量混合的系統(tǒng)組分，從而使所得到的材料在很大程度上不取決于組分的數(shù)量而基本上以少量的相，尤其是以單相出現(xiàn)。勻化可以降低分散相的粒度，將顆粒聚集體分散，并能提供具有提高的沉降穩(wěn)定性的分散。勻化可以通過動態(tài)裝置和靜態(tài)裝置實現(xiàn)，即在沒有移動部件的攪拌器中進行。優(yōu)選的原料是血液細胞，優(yōu)選白血細胞。例如，血液細胞可以以血沉棕黃層糖劑(Buffy-Coat-Konserve)的形式制備，其富含血小板和紅血球，其中，制備這樣糖劑的標準方法是本領域的技術人員公知的。顯而易見的是，勻化試樣還可以以白血球濃縮物的形式獲得。
此外優(yōu)選的是，原料例如紅血球和/或白血球可以以血沉棕黃層糖劑的形式制備，然后通過例如冷凍融化循環(huán)將生物活性成分勻化。即，就本發(fā)明而言單獨的方法步驟的準確順序是可改變的。通過離析、離心和/或過濾，基本能將大于10000Da的所有成分從通過冷凍融化循環(huán)或其它勻化方法獲得的產(chǎn)物中移除。
有利的是能夠濃縮上述離析、離心或過濾的產(chǎn)物。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方式中，細胞血液成分例如白血球首先被勻化，然后離析并凍干。接著，優(yōu)選的是溶液可以按如下制備，其中，首先預過濾，然后進行超濾，接著再進行無菌過濾。
所得濾液例如可以在水浴中進行巴氏消毒。在該過程后，經(jīng)過巴氏消毒的物質可以被滅菌且再凍干。當然，也可以使用其它的無菌化方法，例如用高能輻射(如UV輻射)或X-射線進行處理。上述每一個單獨的步驟均可以在質量控制下完成。例如，可以從試樣中取出等分試樣并測試等分試樣中存在的微生物、病毒或其它不期望的成分。
血液細胞濃縮物，尤其是白血球濃縮物優(yōu)選采用冷凍/融化循環(huán)、細胞的超聲波處理或者這兩種方法的組合來制備。
勻化產(chǎn)品的離析按如下進行，低分子量膠體顆?；虼蠓肿油ㄟ^從勻化產(chǎn)物的分散，經(jīng)由半透膜遷移并進入優(yōu)選流動的純溶劑中，從而保留大的分子。離析的速率可以通過提高溫度或在例如電滲析中施加電壓而增大。顯而易見的是，離析還可以使用離析柱進行，從而移除分子量大于10kDa的分子。
尤其是，凍干可以用于濃縮離析的產(chǎn)物。本發(fā)明中的凍干是描述下述內容的術語通過將溶劑凍出，使其在冷凍狀態(tài)下通過升華進行蒸發(fā)而將冷凍的材料在高度真空中干燥。為了將凍干的材料重新溶解供使用，可以溶解在蒸餾水或其它的溶劑中。
在制備出上述溶液后，測定該材料的紫外光譜，尤其是在200nm～400nm的范圍內。如果該材料沒有不期望的成分或這些成分很少，優(yōu)選通過例如微孔膜進行預過濾。在該過程中，將固體顆粒從液體中分離出來。其中，使用多孔介質，例如具有預過濾器AP15的微孔薄膜RA(1，2/Am)，使液體的連續(xù)相流過該多孔膜，其中，分散相同時保留在多孔介質的表面或在其內部。
具有限制值10kDa的材料可以使用超濾移除。有利的是，可以通過額外的過濾步驟，使用無菌過濾器將所得材料滅菌，例如，超濾可以使用膜微量過濾或反滲透進行。對于超濾，大多使用不對稱結構的多孔膜，其由多種有機和無機材料例如聚砜或陶瓷以管、毛細管、中空纖維和平膜的形式制成。
有利的是，所得到的無菌材料通過加熱滅活而進行巴氏法滅菌。例如，巴氏法滅菌可以在水浴中及60℃的溫度下進行數(shù)小時。顯而易見的是，巴氏法滅菌可以在低于100℃的任意溫度下進行，在特定情況下也可以在100℃以上進行任意的時間。即，在100℃以上滅菌也是本發(fā)明意義上的巴氏法滅菌。
有利的是，這樣的在超過100℃下滅菌或巴氏法滅菌能獲得可再生的、穩(wěn)定的、能良好使用的變性產(chǎn)品和分離產(chǎn)品，其不存在現(xiàn)有技術組合物的缺陷。尤其是當細胞原料是人類白血球時。更令人驚訝的是，上述令人吃驚的優(yōu)點可以通過組合如下特征獲得(i)將人類白血球作為原料，(ii)使用根據(jù)本發(fā)明的方法進行處理和/或(iii)在超過100℃下巴氏法滅菌。在一個特別優(yōu)選的方式中，原料無需進行木瓜蛋白酶水解或醇改性。另外，有利的是，在例如離子交換色譜中或紙電泳中沒有激烈的清潔步驟，這是因為它們會導致產(chǎn)生在治療中幾乎無法使用的其它產(chǎn)品。此外，有利的是沒有紅血球細胞。令人吃驚的是，對該方法的少量修改，例如使用有機溶劑進行初始改性，能獲得完全不同的方法產(chǎn)物，這些產(chǎn)物不能用于解決本發(fā)明的問題。只有在某些特定的情況下，非人類的白血球能用于實現(xiàn)本發(fā)明的目的。此外，有利的是將尺寸大于3000Da的所有成分移除。尤其是這些組合物具有上述優(yōu)選的性質。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明的組合物和/或藥劑在治療與細胞免疫缺陷、例如根據(jù)ICD10代碼D.84.4的缺陷相關的疾病中的用途。這些疾病可以是敗血病、炎癥反應和發(fā)燒、自身免疫性疾病和與細胞分裂紊亂相關的疾病，例如癌癥。
本發(fā)明意義上的炎癥，是由結締組織和血管媒介傳導的、生物體對外部或內部引起的炎癥刺激產(chǎn)生的反應，其目的是消除或失活該炎癥刺激并修復由于刺激導致的組織損壞。引發(fā)是由下列因素產(chǎn)生的機械刺激(異物、壓力、損傷)和其它的物理因素(離子輻射、UV光、熱、冷)、化學物質(堿、酸、重金屬、細菌毒素、過敏原和免疫絡合物)以及病原體(微生物、寄生蟲、昆蟲)或致病的新陳代謝產(chǎn)物、變態(tài)酶、惡性腫瘤。該癥狀開始于帶有循環(huán)機能不全和組織變質的短暫的小動脈變窄(由于Adrenalin作用)，接著顯現(xiàn)出典型的局部炎癥(主要癥狀；根據(jù)GALEN和CELSUS)，即，變紅(＝發(fā)紅；由于組胺引起的血管擴張)，發(fā)熱(＝灼熱；由于局部新陳代謝增強引起)，腫塊(＝腫瘤；由于富蛋白的液體-還通過組胺-從改變的血管壁流出引起，由于血停滯前至血停滯中的延緩的血液循環(huán)而被促進)，疼痛(＝痛；由于增加的組織張力和引發(fā)疼痛的炎癥產(chǎn)物引起，例如緩激肽)和功能障礙(＝Functio laesa)。該過程伴隨有電解質代謝(礦物質的傳輸)的紊亂、嗜中性粒細胞和單細胞通過血管壁的遷移(白細胞趨向性)，其目的是，消除炎癥的刺激和受到損害乃至壞死的神經(jīng)細胞(吞噬作用)；此外，還遷移入淋巴作用細胞，從而形成對于炎癥刺激的特定的抗體(免疫反應)以及嗜酸性粒細胞(在治療階段或者-在非常早期階段-在過敏性-反應性過程中產(chǎn)生)。由于在反應中發(fā)生的補充體系的活化，使得這些體系產(chǎn)生碎片(C3a和C5a)，其-例如組胺和緩激肽-作為炎癥的傳遞質起作用，即，在刺激下會產(chǎn)生所述血液細胞的趨化性；此外還激活血液的凝結。接著，發(fā)生相關器官軟組織的損壞(營養(yǎng)不良和凝集壞死)。取決于炎癥的強度和種類，整個的生物體發(fā)生反應，例如發(fā)熱、應激反應(還表現(xiàn)為適應綜合癥)、白細胞增多和在血漿蛋白質的組成的改變(急性階段反應)，導致加速的紅血球沉降反應。優(yōu)選本發(fā)明中的炎癥是化膿的、滲出性、纖維化、壞疽性、顆?；?、出血的、粘膜性、壞死性、增殖的或多產(chǎn)性、假膜的、血清的、特定的和/或潰瘍性的炎癥。
本發(fā)明意義上的自身免疫性疾病，是完全地或部分地歸因于自身抗體形成以及其對整個生物體或器官體系的損害影響，即自身攻擊的疾病。一種分類是分為器官特異的、媒介的和/或系統(tǒng)性的自身免疫性疾病。優(yōu)選的器官特異自身免疫性疾病是HASHIMOTO甲狀腺炎、原發(fā)粘液水腫、甲狀腺中毒(BASEDOW疾病)、惡性貧血、ADDISON疾病、重癥肌無力和/或少年糖尿病。優(yōu)選媒介自身免疫性疾病是GOODPASTURE綜合癥、自身免疫溶血性貧血、自身免疫白細胞減少、自發(fā)性血小板減少癥、尋常天皰瘡、交感神經(jīng)眼炎、原發(fā)肝硬化、自身免疫性肝炎、結腸慢性潰瘍和/或SJGREN綜合癥。優(yōu)選的系統(tǒng)性自身免疫性疾病是類風濕性關節(jié)炎、風濕性發(fā)熱、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、皮膚肌炎/多肌炎、漸進性系統(tǒng)性硬化、WEGENER顆粒化、全身動脈炎和/或過敏性脈管炎。典型的自身免疫性疾病是甲狀腺中毒、甲狀腺引發(fā)的的粘液水腫、HASHIMOTO甲狀腺炎、全身性內分泌疾病、惡性貧血、A型慢性胃炎、血液的單獨性或總體性微粒元素疾病(例如自身免疫性溶血作用貧血、自發(fā)性血小板減少或原發(fā)性疾病；自發(fā)性白血球減少或粒細胞缺乏癥)、尋常天皰瘡和類天皰瘡、交感神經(jīng)眼炎和多種葡萄膜炎、原發(fā)肝硬化和慢性侵入自身免疫性疾病、I型糖尿病、CROHN疾病和結腸慢性潰瘍炎、SJGREN綜合癥、ADDISON疾病、播散性紅斑狼瘡和作為這些疾病的Diskoide形式，作為皮膚肌炎、皮膚硬化、類風濕關節(jié)炎(＝原發(fā)慢性多關節(jié)炎)、抗腎小球基膜-腎炎?；A的是侵入的免疫反應，其包括由于抑制細胞導致的相對于自身終點的免疫耐受性崩潰，且T-抑制細胞(具有淋巴細胞標記T8)的活性降低或T-協(xié)助細胞(具有淋巴細胞標記T4)過多；此外，還可以形成自身抗體基因，例如通過與具有半抗原(例如藥物)的活性蛋白質聯(lián)用，通過組織的個體發(fā)育，其首先對自身耐受性產(chǎn)生影響，并用于與例如注射的病毒或細菌相關的蛋白質成分中暴露的蛋白質的改變；此外，還與新蛋白質中存在的腫瘤相關。
本發(fā)明定義中的敗血病是由于來自疾病病灶的病原細菌和/或它們的毒素連續(xù)或間歇的入侵和它們在淋巴血液路線上擴散而形成整體或局部的感染。
本發(fā)明定義中的敗血病優(yōu)選是創(chuàng)傷敗血病(蜂窩織炎、血栓靜脈炎、淋巴管炎)、分娩敗血病(在分娩發(fā)燒中)、耳因性敗血病(在耳炎介質中)、tonsillogenic敗血病(在咽痛、扁桃體周炎中)、膽管敗血病(在含膿膽囊炎、膽管炎中)、門靜脈敗血病(在門靜脈炎中)、臍帶敗血病(在臍炎等中)、菌尿癥以及牙齒肉芽瘤。本發(fā)明定義中的敗血病可以是急性或高度急性(爆發(fā)的)、亞急性(例如心內膜炎)或慢性的，顯而易見的是，還可以是新生兒敗血病。
因此，本發(fā)明定義中的敗血病是在在患者中的所有病理改變，其可以涉及間歇性的發(fā)燒和寒冷，具有脾腫瘤、毒性反應或骨髓或血液的損害(多核白血球增多、貧血癥、溶血、血小板減少)或在心臟和血管收縮神經(jīng)中(心動過速、血液循環(huán)的集中化、水腫、少尿癥；可能地休克)或在消化道(干燥、舌苔脫落、腹瀉)具有病理反應或具有毒血癥(具有敗血梗塞形成和轉移膿腫形式的毒血癥)。
在本發(fā)明的定義中，優(yōu)選的與細胞免疫系統(tǒng)相關的疾病還包括AIDS、AKne、蛋白尿(proteinuria)、Alcoholentzugs綜合癥、Allergien、禿頭癥(頭發(fā)脫落)、ALS(肌萎縮性脊髓側索硬化癥)、Alzheimer疾病、AMD(年齡相關性黃斑變性)、貧血癥、抑郁癥、炭疽(Milzbrand)、大動脈硬化、下肢動脈閉塞疾病、動脈硬化、動脈閉塞、Arteriitis temporalis、動靜脈瘺管、哮喘、呼吸不足、自身免疫性疾病、腰椎間盤突出、腹膜的炎癥、胰腺癌、Becker肌肉營養(yǎng)不良、良性增生(BPH)、膀胱肉瘤、血友病、支氣管肉瘤、胸癌、BSE、衣原體感染、慢性疼痛、硬化、腦震蕩(brain concussion)、Creutzfeld-Jakob-疾病、腸肉瘤、肺結核、輕度糖尿病、糖尿病性視網(wǎng)膜病變、Duchenne肌肉營養(yǎng)不良、十二指腸肉瘤、營養(yǎng)不良dystrophia musculorum progressiva、營養(yǎng)不良、埃博拉病毒、濕疹、陽痿、肥胖、纖維癥、子宮頸癌、子宮癌、腦出血、腦炎、頭發(fā)脫落、偏癱、溶血性貧血、血友病、尿間斷、寵物敏感(動物毛發(fā)敏感)、皮膚癌、皰疹帶狀疹子、心臟梗塞、心博不足、心瓣炎、腦新陳代謝、腦中風、腦癌、睪丸癌、局部缺血、Kahler-疾病(漿細胞瘤)、脊髓灰質炎(小兒麻痹癥)、骨質疏松、結腸肉瘤、接觸濕疹、癱瘓、肝硬化、白血病、肺纖維化、肺癌、肺浮腫、淋巴腺癌(Morbus Hodgkin)、淋巴肉芽腫病、淋巴瘤、狂犬病、胃肉瘤、腦膜炎、黏稠液病(囊腫性纖維化)、多硬化(MS)、心肌梗塞、neurodermitis、纖維神經(jīng)瘤、神經(jīng)腫瘤、腎癌(腎細胞肉瘤)、骨質疏松、胰腺肉瘤、肺炎、多發(fā)性關節(jié)炎、神經(jīng)病、力量紊亂、進行性系統(tǒng)性硬皮病(PSS)、前列腺癌。直腸肉瘤、胸膜炎、顱腦外傷、陰道肉瘤、竇炎、食道癌、顫抖、肺結核、癌癥疼痛、燒燙傷、上癮、病毒性腦膜炎、更年期、軟組織肉瘤、軟組織腫瘤、腦血液循環(huán)紊亂、CNS腫瘤。
在一個優(yōu)選實施方式中，被治療或避免的腫瘤疾病或癌癥選自耳-鼻-喉范圍的癌癥疾病或腫瘤疾病，肺、縱隔、胃腸道、泌尿生殖系統(tǒng)、婦科系統(tǒng)、乳房、內分泌系統(tǒng)、皮膚、骨骼的腫瘤疾病，軟組織肉瘤、間皮瘤、黑瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的螯生物，在嬰兒期中的腫瘤疾病或癌癥，淋巴瘤，白血病，癌旁的綜合癥、無基本癌癥的轉移瘤(CUP-并發(fā)癥)、腹膜乳房癌素、惡性免疫缺陷和/或癌轉移瘤。
更具體地說，腫瘤可以包括下述類型的癌乳腺癌、前列腺癌和結腸癌；各種形式的在支氣管中開始的肺癌；骨髓癌、黑瘤、肝細胞瘤、神經(jīng)母細胞瘤；乳頭狀瘤；胺前體攝取脫羧細胞瘤、迷芽瘤、原瘤；惡性癌癥-并發(fā)癥；癌癥-心臟疾病、癌(例如沃克癌、基礎細胞-癌、嗜鹼扁平細胞癌、Brown-Pearce癌、導管癌、埃爾利希癌、原位癌、癌-2癌、美克耳細胞癌、粘液性癌、非-小細胞支氣管癌、oat-細胞癌、乳頭狀癌、硬癌、細支氣管-小泡癌、小支氣管癌、鱗狀上皮細胞癌和過渡型細胞癌)；組織細胞功能性紊亂；白血病(例如涉及B-細胞白血病、總細胞白血病、中性細胞白血病、T-細胞白血病、慢性T-細胞白血病、HTLV-II-聯(lián)合白血病、急性淋巴囊腫白血病、慢性淋巴囊腫白血病、肥大細胞白血病和脊髓白血病)；惡性組織細胞增殖、霍奇金癌癥、非霍奇金淋巴瘤、單獨血漿細胞癌；網(wǎng)狀內皮細胞組織增殖、成軟骨細胞瘤；軟骨瘤、軟骨肉瘤；纖維瘤、纖維肉瘤；大細胞癌；組織細胞增殖；脂肪瘤、脂肪肉瘤；白血病性肉瘤；間皮瘤；粘液瘤；粘液肉瘤；骨瘤；骨皮瘤；尤因皮瘤；滑膜瘤；腺纖維瘤；腺淋巴瘤；癌肉瘤；脊索瘤、顱咽管瘤、無性細胞瘤、錯構瘤、間質瘤；中腎瘤；肌肉瘤、成釉細胞瘤、牙骨質瘤；牙瘤；畸胎瘤；胸腺瘤、成絨(毛)膜細胞瘤；腺肌肉瘤、腺瘤；膽管瘤；珠光瘤；圓柱瘤；半胱胺加氧酶瘤、囊腺瘤；粒層細胞癌；兩性胚細胞瘤；汗腺腺瘤；島狀細胞瘤；Leydig細胞癌；乳突淋瘤；塞爾托利細胞癌、囊細胞癌、平滑肌瘤；平滑肌肉瘤；成肌細胞瘤；肌瘤；肌肉瘤；橫紋肌瘤；橫紋肌肉瘤；室管瘤；神經(jīng)節(jié)細胞瘤、神經(jīng)膠質瘤；成神經(jīng)管細胞瘤、腦(脊)膜瘤；神經(jīng)鞘瘤；成神經(jīng)細胞瘤；神經(jīng)上皮瘤、纖維神經(jīng)瘤、神經(jīng)瘤、副神經(jīng)節(jié)瘤、非嗜鉻副神經(jīng)節(jié)瘤、血管角質瘤、嗜酸性的成血管淋巴增殖；硬化型血管瘤；血管肉瘤；血管球瘤；血管內皮瘤；血管瘤；血管外皮細胞瘤、血管肉瘤；淋巴管瘤、淋巴管瘤、淋巴管肉瘤；松果體瘤；葉狀膀胱肉瘤；血管肉瘤；淋巴管肉瘤；多發(fā)性黏液瘤、卵巢瘤；肉瘤(例如尤因肉瘤、實驗、卡波濟氏肉瘤和肥大細胞肉瘤)；瘤(例如骨狀瘤、胸腔瘤、消化系統(tǒng)瘤、結腸直腸瘤、肝瘤、胰腺瘤、腦垂體瘤、睪丸瘤、眼眶瘤、頭部和頸部腫瘤、中央神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、耳部腫瘤、骨盆腫瘤、呼吸道腫瘤和泌尿生殖器腫瘤)；多發(fā)性神經(jīng)纖維瘤和頸部平上皮結構不良。
在另一個優(yōu)選的實施方式中，被治療和避免的腫瘤疾病或癌癥選自耳-鼻-喉范圍內的腫瘤，包括內鼻腔癌、鼻竇癌、鼻咽癌、唇癌、口腔癌、口咽癌、喉癌、下咽部癌、耳癌、唾液腺癌；神經(jīng)節(jié)細胞瘤；肺癌，包括非-小細胞支氣管癌、小細胞支氣管癌、縱隔癌；胃腸道癌，包括食道癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、膽囊癌和膽管癌、小腸癌、結腸和直腸癌以及肛門癌；泌尿生殖器癌，包括腎癌、輸尿管癌、膀胱癌、前列腺癌、尿道癌、陰莖和睪丸癌；婦科癌癥，包括子宮頸癌、陰道癌、外陰癌、子宮癌、惡性滋養(yǎng)層疾病、卵巢癌、輸卵管癌(TubaFaloppii)；腹腔癌，乳房癌，內分泌器官癌，包括甲狀腺癌、副甲狀腺癌、腎上腺皮質癌，內分泌胰腺癌、致癌性腫瘤和致癌性并發(fā)癥、多內分泌瘤、骨肉瘤和軟組織肉瘤、間皮瘤、皮膚癌、黑素瘤，包括皮膚和皮內黑素瘤；中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌；嬰兒期的癌癥，包括成視網(wǎng)膜細胞瘤、Wilms癌、膀胱癌、成神經(jīng)細胞瘤、尤因肉瘤癌癥族、橫紋肌肉瘤；淋巴瘤，包括非霍奇金淋巴瘤、皮膚T細胞淋巴瘤、中樞神經(jīng)系統(tǒng)的基本淋巴瘤、霍奇金疾??；白血病，包括急性白血病、慢性白血病和淋巴組織白血病，血漿細胞瘤、骨髓塑料化綜合癥、瘤形成綜合癥、無基本癌癥的轉移瘤(CUP-并發(fā)癥)、peritoneale致癌性轉移瘤、免疫性缺陷相關的惡性腫瘤，包括AIDS相關的惡性腫瘤，如Kaposi肉瘤、與AIDS聯(lián)發(fā)的淋巴瘤、與AIDS聯(lián)發(fā)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤、與AIDS聯(lián)發(fā)的霍奇金疾病和與AIDS聯(lián)發(fā)的肛門和生殖器癌、移植相關的惡性腫瘤、轉移瘤性癌，包括腦部轉移瘤、肺部轉移瘤、肝部轉移瘤、骨轉移瘤、胸膜和心包轉移瘤以及惡性腹水。
在另一個優(yōu)選的實施方式中，被治療和預防的腫瘤疾病或癌癥選自癌性乳腺炎；胃腸癌，包括結腸癌、胃癌、胰腺癌、結腸癌、小腸癌；卵巢癌；子宮頸癌；肺癌；前列腺癌；腎細胞癌和/和肝轉移瘤。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明的組合物在用于預防和/或治療具有致病性改變和/或細胞免疫性缺陷，尤其是與細胞抑制劑治療、化療和/或放療相關的癌癥、敗血病、過敏反應的人、動物和/或患者，或者在與涉及核、生物、化學和/或輻射物質和/或材料相關的患者的預防和/或治療的過程中的用途，本發(fā)明還涉及試劑盒及其在藥物中的用途。優(yōu)選的是，將本發(fā)明的組合物或含有其的試劑盒用于聯(lián)合治療，尤其是用于治療癌癥。其中特別優(yōu)選的是，所述的聯(lián)合治療包括化學治療、細胞抑制治療和/或放射治療。在本發(fā)明的一個特別優(yōu)選的實施方式中，聯(lián)合治療是輔助的生物專一性治療方式。更特別優(yōu)選的是，治療方式為免疫治療。還特別優(yōu)選的是，聯(lián)合治療包括基因治療和/或使用本發(fā)明組合物的治療。對于本領域技術人員來說，各種不同的聯(lián)合治療，特別是用于癌癥的聯(lián)合治療是公知的。例如，在聯(lián)合治療中進行細胞抑制治療或例如在確定的癌癥區(qū)域照射放射線，其中，這些治療可以與基因治療結合，其中使用本發(fā)明的組合物作為抗腫瘤劑。因此，可以特別優(yōu)選的是，將本發(fā)明的組合物用于提高癌癥細胞對細胞抑制和/或放射線的敏感性。另外優(yōu)選的是，將本發(fā)明的組合物用于抑制細胞的活性、增殖和/或用于引發(fā)細胞死亡和細胞周期停滯。
以下，通過實施例進一步闡述本發(fā)明，但本發(fā)明并不限于這些實施例。
實施例采用本發(fā)明的方法得到本發(fā)明的組合物的一般性說明。
白血球勻漿的制備↓
滲析↓在過程中凍干↓合并單獨的溶液形成大量溶液↓所得溶液的過程中控制↓預過濾↓超濾↓無菌過濾↓在水浴中巴氏滅菌↓殺菌↓(藻裝↓凍干↓質量控制↓貼標簽并封裝↓最終控制)方法描述1.包含細胞血液成分例如白血球或紅血球的濃縮物的制備首先，制備所選細胞的勻漿，例如通過將細胞重復冷凍-融化循環(huán)或超聲波處理，或者通過這兩種方法的組合。然后，合并單獨的容積部分。
2.勻漿的滲析以柱或膜滲析的方式進行滲析，其中，移除所有尺寸大于10kDa的顆粒。
3.中間凍干通過凍干濃縮滲析產(chǎn)物，所述凍干采用慣用的標準方法進行。
4.本發(fā)明組合物的臨時溶液的制備用2ml水填充凍干產(chǎn)品。
5.中間控制通過在260～280nm的光譜范圍內的吸收測量進行中間控制。
6.預過濾通過使用AP15預過濾器的微孔RA膜(1.2μm)進行過濾。
7.超濾通過在具有10kDa排阻限的微孔盒式體系中的PTGC膜進行超濾。
8.通過過濾滅菌通過使用微孔GS過濾器(0.22μm)過濾，進行無菌化。
9.加熱滅活在水浴中及60℃的溫度下，在單容器中將本發(fā)明的溶液巴氏滅菌10小時。
10.等分試樣在無菌條件下將液體組合物進行自動等分試樣(將2升的總體溶液倒入5ml小瓶中)。
11.凍干使用標準方法進行凍干。在氮氣氛中和冷卻條件下填充單個的等分試樣。
在進一步的測試中，觀察本發(fā)明的組合物的有效性在不同的動物體系中，在體內試驗本發(fā)明的組合物。通過在豚鼠T白血球上的花結試驗，觀察在本發(fā)明組合物與氧代鉑、開普拓(Campto)、泰素(Taxol)和奧沙利鉑(Eloxatin)聯(lián)用的影響下細胞免疫力的狀態(tài)。在每一個測試中，將本發(fā)明的組合物給藥后，測試免疫抑制的豚鼠的T白血球狀態(tài)。在測試前，采用花結試驗確定豚鼠中的T白血球水平，然后，確定通過免疫抑制咪唑硫嘌呤引起的T白血球量的減少。在咪唑硫嘌呤給藥7天后，進行T白血球的第二次測定。接著，將本發(fā)明組合物給試驗動物皮下給藥。在將本發(fā)明組合物給藥14-19天后，測定最終的豚鼠T白血球計數(shù)。
在這些體內試驗中發(fā)現(xiàn)，氧代鉑給藥后花結(Rosetten)的產(chǎn)生降低約30％。在本發(fā)明的組合物給藥后，花結形成的平均增加為單獨氧代鉑給藥的27％和動物事先用2倍量的氧代鉑處理情況下的23％。
在使用開普拓和該組合物的試驗中，發(fā)現(xiàn)在開普拓給藥后花結的產(chǎn)生降低23％，在所述組合物給藥后增加26％。
當使用泰素和該組合物時，花結的產(chǎn)生下降16％，且在本發(fā)明的組合物給藥后增加23％。
在奧沙利鉑給藥后，花結的形成降低22％，且在本發(fā)明的組合物給藥后增加29％。
此外，為了進一步驗證本發(fā)明組合物的效果，對人類進行臨床研究。
使用該組合物對五位患有硬化病(PSS)的女性患者進行了治療。檢測蓮座細胞的正常化。除了細胞免疫力正常外，還檢測到肢體末端的循環(huán)也得到改善。該組合物在蓮座細胞水平的正?；械呐R床效果獲得了38％-64％的提高。
此外，對于患有尋常牛皮癬和衍生自牛皮癬的關節(jié)炎形式的人類患者試驗本發(fā)明的組合物。以一周的間隔將該組合物向患者給藥3個劑量，每一次單獨的劑量在2ml中包含4mg組合物。在開始治療6個月后，發(fā)現(xiàn)在8位患者中有3位的上述兩種疾病的癥狀完全消失。在其它的五例中，觀察到臨床影象得到顯著改善。全部情況的免疫改善與全部相關臨床數(shù)據(jù)的改善有關?；颊咧猩徸毎钠骄皆陂_始治療前為33％，在治療結束時提高至67％。
在另一個臨床試驗中，將本發(fā)明的組合物用于被診斷為患有系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)的女性患者。在這些患者中確認臨床影像得到改善。此外，一些患者感染了白念珠菌(Candida-Erregern)。類似地，在患者中確認臨床影像得到改善，使得可以開始進行標準治療。下表示出了觀察的臨床病例的概述。

此外，對35個診斷患有葡萄膜炎的患者進行調查。治療周期為35-85個月，在145-195個月的周期內重復調查治療的成功性。結果表明，上述長期的給藥在90％的患者中能防止葡萄膜炎的復發(fā)。在診斷出疾病復發(fā)的患者中，疾病以非常溫和的形式出現(xiàn)。約5％的患者對治療沒有反應。
權利要求
1.用于治療患者中細胞免疫缺陷的組合物的制備方法，包括下述步驟將細胞的血液成分尤其是白血球均化，將均化產(chǎn)物凍干并分離出分子量超過10000Da的成分。
2.根據(jù)權利要求1的方法，其特征在于，首先制備白血球濃縮物，接著進行滲析，然后預過濾、超濾并優(yōu)選接著進行巴氏滅菌。
3.根據(jù)權利要求1或2的方法，其特征在于a)通過冷凍-融化循環(huán)和/或超聲波處理使細胞的血液成分勻化；b)將根據(jù)a)得到的勻漿凍干；c)將根據(jù)b)得到的凍干物預過濾；d)將根據(jù)c)得到的預過濾物超濾；e)將根據(jù)d)得到的超濾物無菌過濾；f)將根據(jù)e)得到的無菌過濾物巴氏滅菌；g)將根據(jù)f)得到的巴氏滅菌產(chǎn)物無菌化；h)將根據(jù)g)得到的無菌產(chǎn)品凍干。
4.采用權利要求1-3中的一種方法得到的組合物。
5.根據(jù)權利要求4的組合物，包含泛素特異性蛋白酶32、正輔因子2谷氨酰胺/Q-富含的相關蛋白、鈣粘著蛋白、轉錄因子GATA-2、推定的染色質結構調節(jié)物、含CUE域1、SUPT6H蛋白、白細胞介素18受體1前體、白細胞介素1受體類似的蛋白和粘蛋白4和/或腱生蛋白M、瞬時受體電位陽離子通道、外切核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶、SWI/SNF相關基質相關的肌動蛋白依賴的染色質調節(jié)劑、SWI/SNF染色質調節(jié)復合體亞基OSA1 B120、OSA1核蛋白、ATP酶、H+/K+變換多肽、鋅指蛋白174、Ig重鏈V區(qū)域、ADAMTS-3前體/脫整聯(lián)蛋白類和金屬蛋白酶、凝結因子II(凝血酶)類受體3、二酰甘油激酶θ、p250R、SWI/SNF染色質-重調節(jié)復合體亞基OSA2、金屬磷酸酯酶、AMP脫氨酶、α-甘露糖苷酶、鈣粘著蛋白-9、Nik-相關激酶、α-1B-腎上腺素能受體、BRCA1-相關蛋白-1、CD99抗原類似的2同種型E3-E4、含SWHCF的肽和/或類FAT鈣粘著蛋白-FATJ、ATP結合區(qū)、核孔蛋白153kDa、ELK3蛋白、蛋白ELK-3 ETS域、ATP酶、銅轉運蛋白激酶、蛋白-酪氨酸磷酸酶、無翅型MMTV整合位點族、MYC結合蛋白2、Cullin7、溶解的載體族5(碘化鈉同向轉運體)成員5、富谷氨酸的WD重復包含物1、MAP激酶相互作用的絲氨酸/蘇氨酸激酶1、ATP結合區(qū)、NOV-Plexin-A1蛋白和/或E3泛素連接酶SMURF2、?；?CoA合成酶、雌激素磺基轉移酶、2，4-二烯?；鵆oA還原酶1前體、4-烯酰基-CoA還原酶、Claudin 10同種型b、DMBT1、細胞外連接域包含物1、淋巴管內皮細胞特異透明質酸受體LYVE-1、Rho GTP酶活化蛋白8同種型2、帶有血小板應答蛋白型1基元的類去整聯(lián)蛋白和金屬蛋白酶(Reprolysin類型)、Ig重鏈V區(qū)域、AS12蛋白、線粒體核糖體蛋白S9、28S核糖體蛋白S9、蛋白激酶底物MK2S4、NP220、推定的G蛋白偶聯(lián)受體、動力蛋白、軸線(Axonemal)重多肽5、N?；字Ｒ掖及匪饬字窪、白三烯B4受體、G-蛋白偶聯(lián)受體16、蛋白質原轉變酶(ProproteinConvertase)枯草桿菌蛋白酶/Kexin類型-1-抑制劑CMKRL1、雙特定酪氨酸磷酸化-調節(jié)激酶3、調節(jié)紅細胞激酶(長的形式)、DYRK3蛋白質、Igλ鏈V-VII區(qū)域(Mot)-人、谷胱甘肽還原酶、線粒體前體、膠原α1(XVI)鏈前體、11-β-羥基類固醇脫氫酶1、胰島素受體底物2、Vault多(ADP-核糖)聚合酶(VPARP)、鈣/鈣調蛋白-依賴3’，5’-環(huán)核苷酸、鋅指蛋白161、類H2.0同源框-1、類H2.0(果蠅)同源框-1和/或DOCK6(dedicator ofcytokinesis 6)。
6.一種藥劑，包含權利要求4或5所述的組合物，任選地聯(lián)用藥學上可接受的載體。
7.根據(jù)以上權利要求的藥劑，其特征在于，所述藥劑是注射溶液和/或輸液溶液。
8.試劑盒，包含權利要求4或5所述的組合物和/或權利要求6或7所述的藥物組合物，任選地帶有關于該試劑盒的組分的組合和/或處理的信息。
9.權利要求4或5所述的組合物和/或權利要求6或7所述的藥劑在制備用于治療患者中細胞免疫的病理性改變，尤其是根據(jù)ICDI0代碼D84.8的細胞免疫缺陷的藥物中的用途。
10.根據(jù)上述權利要求的用途，其特征在于，將該藥物與進行細胞抑制劑治療、化療和/或放療的患者接觸。
11.根據(jù)上述權利要求的用途，其特征在于，所述接觸是通過注射和/或通過輸液經(jīng)皮下、靜脈內、肌肉內、腹膜內進行。
12.根據(jù)上述權利要求中任一項的用途，其特征在于，在嚴重病情事故之前和/或之后將該藥物與人、動物和/或患者接觸，尤其是用于預防繼發(fā)的缺陷，優(yōu)選敗血病。
全文摘要
本發(fā)明涉及蛋白質、肽和/或肽成分的組合物，包含該組合物的藥劑，用于制備該組合物的方法，以及其在預防或治療與細胞抑制劑、化療和/放療相關的人類和/或患者中的用途，所述人類和/或患者具有病理性改變和/或細胞免疫缺陷，尤其是癌癥、敗血病或過敏反應。
文檔編號A61P37/04GK101056645SQ200580032097
公開日2007年10月17日 申請日期2005年9月26日 優(yōu)先權日2004年9月24日
發(fā)明者措澤·B.·扎拉馬 申請人:措澤·B.·扎拉馬