專利名稱：作為趨化因子受體拮抗劑的哌嗪基哌啶衍生物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及調(diào)節(jié)趨化因子受體例如CCR5活性或與之結合的化合物。在一些實施方案中，所述化合物對CCR5是選擇性的?；衔锟梢员挥糜诶缰委熍c趨化因子受體表達或活性相關的疾病，例如炎性疾病、免疫疾病和病毒感染。
背景技術：
白細胞從血管向疾病組織的遷移和轉(zhuǎn)運涉及到正常對抗疾病的炎癥反應的引發(fā)。該過程，還被稱作白細胞的募集，還涉及威脅生命的炎癥性以及導致虛弱的自身免疫疾病的發(fā)作和發(fā)展。所導致的這些疾病的病理學來自防衛(wèi)正常組織的身體免疫系統(tǒng)的攻擊。因此，在炎癥和自身免疫疾病中預防和阻斷白細胞向靶標組織的募集將會是高度有效的治療干預方法。
在細胞免疫反應中涉及的不同種類的白細胞包括單細胞、淋巴細胞、嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞。在大多數(shù)情況下，淋巴細胞為引發(fā)、匹配和保持慢性炎癥反應的白細胞種類，因此阻斷這些細胞侵入炎癥位點是所希望的。淋巴細胞將單細胞吸引至組織位點，單細胞與淋巴細胞一起是在炎性疾病中發(fā)生的大多數(shù)實際組織損傷的原因。已知淋巴細胞和/或單細胞的滲入導致許多慢性自身免疫疾病，以及器官移植排斥。這些疾病包括但不限于類風濕性關節(jié)炎、慢性接觸性皮炎、炎性腸病、狼瘡、全身性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化癥、動脈粥樣硬化、牛皮癬、肉樣瘤病、先天性肺纖維化、皮肌炎、皮膚類天皰瘡和相關疾病(例如尋常性天皰瘡、落葉性天皰瘡、紅斑性天皰瘡)、腎小球性腎炎(glomerulonephritides)，血管炎、肝炎、糖尿病、同種異體移植排斥和移植物對抗宿主的疾病。
白細胞離開血流、在炎癥位點聚集和引發(fā)疾病的過程被認為具有至少三個步驟，其被描述為(1)翻滾，(2)活化/固定粘連和(3)穿過內(nèi)皮遷移[Springer，T.A.，Nature 346425-433(1990)；Lawrence和Springer，Cell 65859-873(1991)；Butcher，E.C，Cell 671033-1036(1991)]。第二個步驟在分子水平被趨化受體介導。然后在白細胞表面的趨化受體結合在損傷或感染位點細胞分泌的趨化細胞因子。受體結合活化白細胞，增加了介導穿過內(nèi)皮遷移的粘連分子的粘合性，從而促進細胞朝向趨化細胞因子的直接遷移。
趨化細胞因子(白細胞趨化/活化因子)還被稱作趨化因子，還被稱作間分泌(intercrine)，SIS細胞因子為一類分子量6-15kDa的炎癥/免疫調(diào)節(jié)性多肽因子，其由在炎癥位點的各種各樣的細胞例如巨噬細胞、單細胞、嗜酸性粒細胞、嗜中性粒細胞、成纖維細胞、血管內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞和肥大細胞所釋放(在Luster，New Eng.J Med.，338，436-445(1998)和Rollins，Blood，90，909-928(1997)中綜述)。而且趨化因子曾經(jīng)在Oppenheim，J.J.等，Annu.Rev.Immunol.，9617-648(1991)；Schall和Bacon，Curr.Opin.Immunol.，6865-873(1994)；Baggiolini，M.，等，Adv.Immunol.，5597-179(1994)中描述過。趨化因子具有刺激直接的細胞遷移的能力，該過程被稱作趨化現(xiàn)象。每個趨化因子含有四個半胱氨酸殘基(C)和兩個內(nèi)二硫鍵。基于兩個氨基端半胱氨酸殘基是直接相連(CC家族)或被一個氨基酸分隔(CXC家族)，趨化因子可以被分為兩個亞家族。這些不同與將這兩個亞家族安排到各自的基因簇相關。在每個基因簇內(nèi)，趨化因子典型地表現(xiàn)出25至60％的序列相似性。CXC趨化因子，例如白介素-8(I1-8)、嗜中性粒細胞活化蛋白-2(NAP-2)和黑素瘤生長刺激性活性蛋白質(zhì)(MGSA)主要對嗜中性粒細胞和T淋巴細胞有趨化性，然而CC趨化因子例如RANTES、MIP-1α、MIP-Iβ、單細胞趨化蛋白(MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4和MCP-5)和eotaxins(-1和-2)對其它細胞類型巨噬細胞、T淋巴細胞、嗜酸性粒細胞、樹狀細胞和嗜堿性粒細胞有趨化性。還存在趨化因子淋巴趨化因子-1、淋巴趨化因子-2(兩者都是C趨化因子)和fractalkine(CXXXC趨化因子)不屬于任一個主要趨化因子亞家族。
MCP-1(還被稱為MCAF(對于巨噬細胞趨化和活化因子的縮寫)或JE)為CC趨化因子，由單細胞/巨噬細胞、平滑肌細胞、成纖維細胞和血管內(nèi)皮細胞產(chǎn)生，其導致細胞遷移和單細胞的細胞粘連(參見例如Valente，A.J.，等，Bioehemistry，1988，27，4162；Matsushima，K.，等，J.Exp.Med.，1989，169，1485；Yoshimura，T.等，J.Immunol.，1989，142，1956；Rollins，B.J.，等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1988，85，3738；Rollins，B.J.，等，Blood，1991，78，1112；Jiang，Y.，等，J.Immunol，1992，148，2423；Vaddi，K.，等，J.Immunol.，1994，153，4721)，記憶T淋巴細胞(參見例如Carr，M.W.，等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1994，91，3652)，T淋巴細胞(參見例如Loetscher，P.，等，F(xiàn)ASEB J.，1994，8，1055)和天然殺傷細胞(參見例如Loetscher，P.，等，J.Immunol.，1996，156，322；Allavena，P.，等，Eur.J.Immunol.，1994，24，3233)，以及由嗜堿性粒細胞介導組胺釋放(參見例如Alam，R.，等，J.Clin.Invest，1992，89，723；Bisch off，S.C，等，J.Exp.Med.，1992，175，1271；Kuna，P.，等，J.Exp.Med.，1992，175，489)。此外，在其中單細胞/巨噬細胞和/或T細胞聚集的疾病中MCP-1高表達被認為在疾病進程的引發(fā)中有重要作用，所述疾病例如動脈粥樣硬化(參見例如Hayes，I.M.，等，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.，1998，18，397；Takeya，M..等，Hum.Pathol.，1993，24，534；Yla-Herttuala，S.，等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1991，88，5252；Nelken，N.A.，J.Clin.Invest.，1991，88，1121)、類風濕性關節(jié)炎(參見例如Koch、A.E.，等，J.Clin.Invest.，1992，90，772；Akahoshi，T.，等，Arthritis Rheum.，1993，36，762；Robinson，E.，等，Clin.Exp.Immunol.，101，398)、腎炎(參見例如Noris，M.，等，Lab.Invest.，1995，73，804；Wada，T.，等，Kidney Int.，1996，49，761；Gesualdo，L.，等，Kidney Int.，1997，51，155)、腎病(參見例如Saitoh，A.，等，J.Clin.Lab.Anal.，1998，12，1；Yokoyama，H.，等，J.Leukoc.Biol.，1998，63，493)、肺纖維化、肺肉樣瘤病(參見例如Sugiyama，Y.，等，Internal Medicine，1997，36，856)、哮喘(參見例如Karina，M.，等，J.Invest.Allergol.Clin.Immunol.，1997，7，254；Stephene，T.H.，Am.J.Respir.Crit.Care Med.，1997，156，1377；Sousa，A.R.，等，Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.，1994，10，142)、多發(fā)性硬化癥(參見例如McManus，C.，等，J.Neuroimmunol，1998，86，20)、牛皮癬(參見例如Gillitzer，R.，等，J.Invest Dermatol.，1993，101，127)、炎性腸病(參見例如Grimm，M.C，等，J.Leukoc.Biol.，1996，59，804；Reinecker，H.C.，等，Gastroenterology，1995，106，40)、心肌炎(參見例如Seino，Y.，等、Cytokine，1995，7，301)、子宮內(nèi)膜異位癥(參見例如Jolicoeur、C.，等，Am.J.Pathol.，1998，152，125)、腹膜內(nèi)粘連(參見例如Zeyneloglu，H.B.，等，HumanReproduction，1998，13，1194)、充血性心力衰竭(參見例如Aurust，P.，等、Circulation，1998，97，1136)、慢性肝病(參見例如Marra，F(xiàn).，等，Am.J.Pathol.，1998，152，423)、病毒性腦膜炎(參見例如Lahrtz，F(xiàn).，等，Eur.J.Immunol.，1997，27，2484)、川崎病(kawasakidisease)(參見例如Wong，M.；等，J.Rheumatol.，1997，24，1179)和膿毒病(參見例如Salkowski、C.A.；等，Infect.Immun.，1998，66，3569)。而且，抗-MCP-1曾被報導在以下疾病的動物模型中有抑制作用或治療作用類風濕性關節(jié)炎(參見例如Schimmer，R.C，等，J.Immunol.，1998，160，1466；Schrier，D.J.，J.Leukoc.Biol.，1998，63，359；Ogata，H.，等，J.Pathol.，1997，182，106)、多發(fā)性硬化癥(參見例如Karpus、W.J.，等，J.Leukoc.Biol.，1997，62，681)、腎炎(參見例如Lloyd、C.M.，等，J.Exp.Med.，1997，185，1371；Wada，T.，等，F(xiàn)ASEB J.，1996，10，1418)、哮喘(參見例如Gonzalo，J.-A.，等，J.Exp.Med.，1998，188，157；Lukacs，N.W.，J.Immunol.，1997，158，4398)、動脈粥樣硬化(參見例如Guzman，L.A.，等、Circulation，1993，88(suppl.)，1-371)、延遲型過敏癥(參見例如Rand，M.L.，等，Am.J.Pathol.，1996，148，855)、肺因高血壓(參見例如Kimura，H.，等，Lab.Invest.，1998，78，571)和腹膜內(nèi)粘連(參見例如Zeyneloglu，H.B.，等，Am.J.Obstet.Gynecol，1998，179，438)。MCP-1，MCP-1(9-76)的肽拮抗劑曾被報導抑制小鼠關節(jié)炎模型(參見Gong，J.-H.，J.Exp.，第四版，1997，186，131)，以及在MCP-1-缺乏小鼠的研究中顯示MCP-1對于體內(nèi)單細胞的募集是必要的(參見Lu，B.，等，J.Exp.Med.，1998，187，601；Gu，L.，等，Moll.Cell，1998，2，275)。
文獻顯示趨化因子例如MCP-1和MIP-1α將單細胞和淋巴細胞吸引到疾病位點并介導它們的活化，因此被認為與單細胞和淋巴細胞深入相關疾病的引發(fā)、發(fā)展和保持密切關聯(lián)，所述疾病例如動脈粥樣硬化、再狹窄、類風濕性關節(jié)炎、牛皮癬、哮喘、潰瘍性結腸炎、腎炎(腎病)、多發(fā)性硬化癥、肺纖維化、心肌炎、肝炎、胰腺炎、肉樣瘤病、局限性腸炎(Crohn’s disease)、子宮內(nèi)膜異位癥、充血性心力衰竭、病毒腦膜炎、腦梗塞、神經(jīng)病、川崎病和膿毒病(參見例如Rovin，B.H.，等，Am.J.Kidney Dis.，1998，31，1065；Lloyd、C，等，Curr.Opin.Nephrol.Hypertens.，1998，7，281；Conti，P.，等，Allergy andAsthma Proc，1998，19，121；Ransohoff，R.M.，等，Trends Neurosci.，1998，21，154；MacDermott，R.P.，等，Inflammatory Bowel Diseases，1998，4，54)。
與趨化因子結合的特定細胞表面受體屬于G-蛋白-偶聯(lián)的七次跨膜域蛋白家族(在Horuk，Trends Pharm.Sci.，15，159-165(1994)中綜述)，其在術語上稱作“趨化因子受體”。在與它們的同源配體結合時，趨化因子受體通過相關的三聚G蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導細胞內(nèi)信號，除其它響應之外，導致細胞內(nèi)鈣濃度的快速增長、細胞形狀改變、細胞粘連分子增長的表達、細胞的脫粒、促進細胞遷移。
編碼特定趨化因子受體的基因已經(jīng)被克隆，并且已知這些受體是在各種白細胞種群中存在的G蛋白質(zhì)-偶聯(lián)的七次跨膜受體。到目前為止，至少五個CXC趨化因子受體(CXCR1-CXCR5)和八個CC趨化因子受體(CCR1-CCR8)已經(jīng)被鑒定。例如I1-8是CXCR1和CXCR2的配體，MIP-1α是CCRl和CCR5的配體，MCP-1是CCR2A和CCR2B的配體(作為參考，參見例如Holmes、W.E.，等，Science 1991、253，1278-1280；Murphy P.M.，等，Science，253，1280-1283；Neote，K.等，Cell，1993，72，415-425；Charo，I.F.，等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1994，91、2752-2756；Yamagami，S.，等，Biochem.Biophys.Res.Commun.，1994，202，1156-1162；Combadier，C.，等，The Journalof Biological Chemistry，1995，270，16491-16494，Power，C.A.，等，J.Biol.Chem.，1995，270，19495-19500；Samson，M.，等，Biochemistry，1996，35，3362-3367；Murphy，P.M.，Annual Review of Immunology，1994，12，592-633)。據(jù)報道肺炎和granuroma的形成在CCR1-缺乏的小鼠中受到抑制(參見Gao，J.-1.，等，J.Exp.Med.，1997，185，1959；Gerard，C.，等，J.Clin.Invest，1997，100，2022)，并且巨噬細胞的募集和動脈粥樣硬化損傷的形成在CCR2-缺乏小鼠中減少(參見Boring，L.，等，Nature，1998，394，894；Kuziel、W.A.，等，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，1997，94，12053；Kurihara，T.，等，J.Exp.Med.，1997，186，1757；Boring，L.，等，J.Clin.Invest.，1997，100，2552)。
趨化因子受體還已知為病毒侵入的共同受體導致病毒感染，例如HIV感染。逆轉(zhuǎn)錄和蛋白加工是病毒生命周期的標準步驟，抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療劑被設計來阻斷它。盡管許多被認為阻斷病毒侵入的新藥仍是有希望的，但目前還沒有治療劑是HIV-1所不能獲得抗性的。產(chǎn)生形成抗性基礎的基因多樣性要求病毒多輪復制。侵入抑制劑與其它藥劑的聯(lián)合治療，其中復制被最大地抑制，仍然是治療的基礎。在病毒侵入過程中多步驟的靶標被認為具有協(xié)同作用的潛力(Starr-Spires等、Clin.Lab.Med.，2002，22(3)，681)。
HIV-1侵入CD4(+)細胞要求病毒包膜糖蛋白質(zhì)與CD4以及共同受體例如趨化因子受體CCR5和CXCR4的相繼的相互作用。阻斷該過程的似乎合理的方法是使用共同受體功能的小分子拮抗劑。TAK-779分子是一個這樣的CCR5拮抗劑，用于預防HIV-1感染。TAK-779抑制病毒表面糖蛋白gp120與CCR5的相互作用在膜融合階段抑制HIV-1復制。TAK-779在CCR5上的結合位點位于接近受體的細胞外表面，在跨膜螺旋1、2、3和7之間形成的腔穴內(nèi)(Dragic等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，2000，97(10)，5639)。
趨化因子受體CXCR4和CCR5被認為分別被T細胞-tropic(X4)和巨噬細胞-tropic(R5)HIV-1種系用作共同受體，用于侵入它們的宿主細胞。HIV-1R5種系在CD4淋巴細胞和巨噬細胞上的繁殖要求CCR5共同受體在細胞表面的表達。個體缺失CCR5(CCR5δ32純純合表型)為表型正常的，且對HIV-1感染有抗性。病毒侵入可以受到CXCR4(CXC趨化因子SDF-1)和CCR5(CC趨化因子RANTES、MIP-1α和MIP-1β)天然配體的抑制。第一個與CCR5相互作用而不與CXCR4相互作用的非肽化合物為季銨鹽衍生物，稱作TAK-779，其還具有有效的但是可變的抗-HIV活性(De Clercq等，Antivir.Chem.Chemother.2001，12 Suppl.1，19。
SCH-C(SCH 351125)是另一個通過CCR5共同受體的HIV-1侵入的小分子抑制劑。SCH-C，肟-哌啶化合物，是在多受體結合和信號轉(zhuǎn)導分析中確定的特異性的CCR5拮抗劑。該化合物在U-87星狀神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞中特異性地抑制通過CCR5介導的HIV-1感染，但是對CXCR4-表達細胞的感染沒有作用。(Strizki等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，2001，98(22)，12718或Tremblay等，Antimicrobial Agents andChemotherapy，2002，46(5)，1336)。
AD101，在化學上與SCH-C相關，也是通過人CCR5抑制人免疫缺陷病毒類型1(HIV-1)的侵入。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)AD101通過恒河猴短尾猿CCR5抑制HIV-1侵入而SCH-C則不是。在人和短尾猿共同受體版本之間不同的八個殘基中，只有一個甲硫氨酸-198，說明短尾猿CCR5對SCH-C抑制的不敏感性。198位在CCR5跨膜(TM)螺旋5上，不位于以前定義的AD101和SCH-C的結合位點之內(nèi)，其涉及到螺旋1、2、3和7?；谠贑CR5中氨基酸替代的研究，已經(jīng)提出接近198殘基的CCR5區(qū)域能夠影響該受體構象狀態(tài)。(Billick等，2004，J Virol，78(8)，4134)。
因此，抑制趨化因子與它們相應的受體結合的藥物能夠用作抑制趨化因子在靶標細胞起效和/或阻斷病毒侵入表達這些受體的細胞中的藥物。對調(diào)節(jié)趨化因子受體活性或阻斷病毒蛋白結合的化合物的鑒定代表了優(yōu)越的藥物設計方法，用于研發(fā)治療炎癥病癥、病毒感染和其它與趨化因子受體活化相關的疾病的藥理活性物質(zhì)。本發(fā)明化合物幫助實現(xiàn)這些以及其它需要。
發(fā)明概述本發(fā)明提供式I的化合物 或其可藥用鹽或前藥，其中的組成成員如下文所定義。
本發(fā)明進一步提供包含式I化合物和可藥用載體的組合物。
本發(fā)明進一步提供調(diào)節(jié)趨化因子受體活性的方法，包含將趨化因子受體與式I化合物接觸。
本發(fā)明進一步提供治療患者與趨化因子受體表達或活性相關疾病的方法，包含給所述患者施用治療有效量的式I化合物。
本發(fā)明進一步提供治療患者以下疾病或病癥的方法，選自炎性疾病、免疫病癥和病毒感染，包含給所述患者施用治療有效量的式I化合物。
本發(fā)明進一步提供治療患者HIV感染的方法，包含給所述患者施用治療有效量的式I化合物。
本發(fā)明進一步提供式I化合物在治療中的用途。
本發(fā)明進一步提供式I化合物在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療。
發(fā)明詳述本發(fā)明尤其提供式I化合物 或其可藥用鹽或前藥，其中R1為任選被一個或多個R6取代的雜芳基；R2為H、鹵素、氰基、硝基、C1-C6烷基、C1-C6鹵代烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、芳基、雜芳基、C3-C7環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、SOR7、SO2R7、COR8、OR9、SR9、COOR9、NR10R11或NR10COR8；R3為F、Cl、Br、I、C1-C4鹵代烷基、C1-C4鹵代烷氧基或雜芳基；R4為H、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基或C1-C6鹵代烷基；R5為H、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基或C1-C6鹵代烷基；R6為H、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷氧基、氨基、(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基；R7為H、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6鹵代烷基、芳基、雜芳基、C3-C7環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基烷基、雜芳基烷基、(C3-C7環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)烷基烷基或NR12R13；R8為H、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6鹵代烷基、芳基、雜芳基、C3-C7環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基烷基、雜芳基烷基、(C3-C7環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)烷基烷基或NR12R13；R9為H、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6鹵代烷基、烷氧基烷基、鹵代烷氧基烷基、芳基氧基烷基、雜芳基氧基烷基、環(huán)烷基氧基烷基、雜環(huán)烷基氧基烷基、芳基、雜芳基、C3-C7環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基烷基、雜芳基烷基；(C3-C7環(huán)烷基)烷基或雜環(huán)烷基烷基；R10和R11各自獨立為H、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6鹵代烷基、芳基、雜芳基、C3-C7環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基烷基、雜芳基烷基；(C3-C7環(huán)烷基)烷基或雜環(huán)烷基烷基；或R10和R11與它們所連的N原子一起形成3-、4-、5-、6-或7-元雜環(huán)烷基；R12和R13各自獨立為H、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6鹵代烷基、芳基、雜芳基、C3-C7環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基烷基、雜芳基烷基；(C3-C7環(huán)烷基)烷基或雜環(huán)烷基烷基；或R12和R13與它們所連的N原子一起形成3-、4-、5-、6-或7-元雜環(huán)烷基；和r為1、2或3。
在一些實施方案中，R1為含有至少一個成環(huán)N原子的5-、6-、9-或10-元雜芳基，其中所述的5-、6-、9-或10-元雜芳基任選被1、2、3或4個R6基團取代。
在一些實施方案中，R1為含有至少一個成環(huán)N原子的9-或10-元雜芳基，其中所述的6-元雜芳基任選被1、2、3或4個R6基團取代。
在一些實施方案中，R1為含有至少一個成環(huán)N原子的6-或5-元雜芳基，其中所述的5-元雜芳基任選被1、2、3或4個R6基團取代。
在一些實施方案中，R1為含有至少一個成環(huán)N原子的6-元雜芳基，其中所述的6-元雜芳基任選被1、2、3或4個R6基團取代。
在一些實施方案中，R1為含有至少一個成環(huán)N原子的5-元雜芳基，其中所述的5-元雜芳基任選被1、2、3或4個R6基團取代。
在一些實施方案中，R1為喹啉基、異喹啉基、1，5-二氮雜萘基、吲哚基、吲唑基、吡啶基、嘧啶基、N-氧代吡啶基、N-氧代嘧啶基、異唑、吡唑、吡咯基、咪唑基、唑基或噻唑基，每個任選被1、2、3或4個R6基團取代。
在一些實施方案中，R1為喹啉基、異喹啉基、1，5-二氮雜萘基、吡啶基、嘧啶基、N-氧代吡啶基、異唑或吡唑，每個任選被1、2、3或4個R6基團取代。
在一些實施方案中，R1為吡啶基、嘧啶基、N-氧代吡啶基、N-氧代嘧啶基、異唑、吡唑、吡咯基、咪唑基、唑基或噻唑基，每個任選被1、2、3或4個R6基團取代。
在一些實施方案中，R1為吡啶基、嘧啶基、N-氧代吡啶基、異唑或吡唑，每個任選被1、2、3或4個R6基團取代。
在一些實施方案中，R1為 在一些實施方案中，R1為 在一些實施方案中，R1為
在一些實施方案中，R1為 在一些實施方案中，R1為 在一些實施方案中，R1為 在一些實施方案中，R2為H、C1-C6烷基、C1-C6鹵代烷基、OR9、SR9或NR10R11。
在一些實施方案中，R2為H或OR9。
在一些實施方案中，R3為F、Br、CF3或6-或5-元雜芳基。
在一些實施方案中，R3為F、Br、CF3、OCF3、噻唑基、嘧啶基、吡啶基。
在一些實施方案中，R3為F、Br或CF3。
在一些實施方案中，R4為C1-C6烷基。
在一些實施方案中，R4為甲基。
在一些實施方案中，R5為C1-C6烷基。
在一些實施方案中，R5為甲基。
在一些實施方案中，r為1。
在一些實施方案中，r為2。
在一些實施方案中，本發(fā)明化合物具有式IIa或IIb的結構 在一些化合物具有式IIa或IIb的實施方案中，R1為 在一些化合物具有式IIa或IIb的實施方案中，R1為
在一些化合物具有式IIa或IIb的實施方案中，R1為 在一些化合物具有式IIa或IIb的實施方案中，R1為 在一些化合物具有式IIa或IIb的實施方案中，R2為H、C1-C6烷基、C1-C6鹵代烷基、OR9、SR9或NR10R11。
在一些化合物具有式IIa或IIb的實施方案中，R2為H或OR9。
在一些化合物具有式IIa或IIb的實施方案中，R3為F、Br、CF3、5-或6-元雜芳基。
在一些化合物具有式IIa或IIb的實施方案中，R3為F、Br或CF3。
應當認識到，本發(fā)明的某些特征，為了解釋清楚，在上下文中以分開的實施例描述，還可以以單個實施例中以組合形式提供。相反地，本發(fā)明的各種特征，為了簡潔起見，在上下文中以單個實施方案描述，也可以以分開的或以任何適當?shù)膩喗M提供。
本文中所用的術語“烷基”意指直鏈或支鏈的飽和烴基。烷基的實例包括甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(例如正丙基和異丙基)丁基(例如正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基)、戊基(例如正戊基、異戊基、新戊基)等等。烷基可以含有從1至約20個、從2至約20個、從1至約10個、從1至約8個、從1至約6個、從1至約4個或從1至約3個碳原子。
本文中所用的“鏈烯基”意指有一個或多個碳碳雙鍵的烷基。鏈烯基的實例包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、丁二烯基、戊二烯基、己二烯基等等。
本文中所用的“炔基”意指具有一個或多個碳碳三鍵的烷基。炔基的實例包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基等等。
本文中所用的“鹵代烷基”意指具有一個或多個鹵素取代基的烷基。鹵代烷基的實例包括CF3、C2F5、CHF2、CCl3、CHCl2、C2Cl5等等。其中所有的氫原子都被鹵素原子取代的烷基被稱作“全鹵代烷基”。全鹵代烷基的實例包括CF3和C2F5。
本文中所用的“芳基”意指單環(huán)或多環(huán)的芳香烴例如苯基、萘基、蒽基、菲基、茚滿基、茚基等等。在一些實施方案中，芳基具有從6至約18個碳原子。
本文中所用的“環(huán)烷基”意指非芳香環(huán)烴，包括環(huán)狀的烷基、鏈烯基和炔基。環(huán)烷基可以包括二環(huán)或多環(huán)環(huán)系統(tǒng)且可以任選含有不飽和部分。環(huán)烷基的實例包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、環(huán)己二烯基、環(huán)庚二烯基、降莰烷基、降蒎烷基、降蒈烷基、金剛烷基等等。在環(huán)烷基的定義中還包括具有一個或多個與環(huán)烷基環(huán)稠合的芳香環(huán)的部分，例如環(huán)戊烷(茚滿基)、環(huán)己烷(四氫萘基)等等的苯并衍生物。環(huán)烷基可以具有從約3至約20、3至約12或3至約7個碳原子。
本文中所用的“雜芳基”基團為單環(huán)和多環(huán)芳香烴，具有至少一個雜原子環(huán)成員例如硫、氧或氮。雜芳基包括而不局限于吡啶基、N-氧代吡啶基、嘧啶基、N-氧代嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、三嗪基、1，5-二氮雜萘基、呋喃基、喹啉基、異喹啉基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、吲哚基、吡咯基、唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、異唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、吲唑基、1，2，4-噻二唑基、異噻唑基、苯并噻吩基、嘌呤基、卡唑基、苯并咪唑基、2，3-二氫苯并呋喃基、2，3-二氫苯并噻吩基、2，3-二氫苯并噻吩基-S-氧化物、2，3-二氫苯并噻吩基-S-二氧化物等等。在一些實施方案中，雜芳基可以具有從1至約20個碳原子，在進一步的實施方案中，從約3至約20碳原子。在一些實施方案中，雜芳基具有1至約4、1至約3或1至2個雜原子。在一些實施方案中，雜芳基具有5至50、5至20、5至14或5至7環(huán)成員。在一些實施方案中，雜芳基為5-、6-、9-或10-元基團。在一些實施方案中，雜芳基含有至少一個成環(huán)N原子。
本文中所用的“雜環(huán)烷基”意指環(huán)狀的非芳香烴，包括環(huán)烷基、鏈烯基和炔基，其中一個或多個成環(huán)碳原子被雜原子例如O、N或S原子替換。雜環(huán)烷基的實例包括哌啶基、吡咯烷基、嗎啉代、四氫呋喃基等等。在雜環(huán)烷基的定義中還包括與非芳香雜環(huán)稠合(即具有一根共用的鍵)的一個或多個芳香環(huán)的部分，例如鄰苯二甲酰亞氨基、1，2-萘二甲酰亞氨基、pyromellitic diimidyl、phthalanyl和飽和雜環(huán)例如吲哚和異吲哚基團的苯并衍生物。在一些實施方案中，雜環(huán)烷基具有3至20、3至14或3至7個環(huán)成員。
本文中所用的“鹵”或“鹵素”包括氟、氯、溴和碘。
本文中所用的“烷氧基”意指-O-烷基。烷氧基的實例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如正丙氧基和異丙氧基)、叔丁氧基等等?！胞u代烷氧基”意指-O-鹵代烷基。
本文中所用的“芳基烷基”意指被至少一個芳基取代的烷基。芳基烷基的實例為芐基。
本文中所用的“環(huán)烷基烷基”意指被至少一個環(huán)烷基取代的烷基。
本文中所用的“雜芳基烷基”意指被至少一個雜芳基取代的烷基。
本文中所用的“雜環(huán)烷基烷基”意指被至少一個雜環(huán)烷基取代的烷基。
本文中所用的“芳基氧基”意指-O-芳基。
本文中所用的“雜芳基氧基”意指-O-雜芳基。
本文中所用的“環(huán)烷基氧基”意指-O-環(huán)烷基。
本文中所用的“雜環(huán)烷基氧基”意指-O-雜環(huán)烷基。
本文中所用的“烷氧基烷基”意指被至少一個烷氧基取代的烷基。烷氧基烷基實例包括甲氧基甲基、甲氧基乙基、甲氧基丙基等等。
本文中所用的“鹵代烷氧基烷基”意指被至少一個鹵代烷氧基取代的烷基。
本文中所用的“芳基烷氧基烷基”意指被至少一個芳基氧基取代的烷基。
本文中所用的“環(huán)烷基氧基烷基”意指被至少一個環(huán)烷基氧基取代的烷基。
本文中所用的“雜芳基氧基烷基”意指被至少一個雜芳基氧基取代的烷基。
本文中所用的“雜環(huán)烷氧基烷基”意指被至少一個雜環(huán)烷基氧基取代的烷基。
本文中所用的術語“氨基”意指NH2。類似地，術語“烷基氨基”意指被烷基取代的氨基，術語“二烷基氨基”意指被二個烷基取代的氨基。
本文中所用的“取代”表示化學基團中至少一個氫原子被非氫部分替換。當化學基團被取代時，其可以至多全部化合價被取代，得到穩(wěn)定的化合物或穩(wěn)定的結構；例如甲基可以被1、2或3個取代基取代，亞甲基可以被1或2個取代基取代，苯基可以被1、2、3、4或5個取代基取代等等。
本文描述的化合物可以為不對稱的(例如具有一個或多個立體中心)。所有的立體異構體例如對映異構體和非對映異構體都是在目標中的，除非另外指明。本發(fā)明含有不對稱取代碳原子的化合物可以以光學活性或外消旋的形式被分離。如何從光學活性原料制備光學活性形式的方法在本領域是已知的，例如通過拆分外消旋混合物或立體選擇性地合成。烯烴和C＝N雙鍵等的許多幾何異構體也可以在本文描述的化合物中存在，所有這樣的穩(wěn)定的異構體在本發(fā)明中是預期的。描述了本發(fā)明化合物的順和反幾何異構體，可以分離為異構體混合物或分離的異構體的形式。
化合物的外消旋混合物的拆分可以以本領域已知的許多方法中任何方法實施。示例性的方法包括使用“手性拆分酸”分步重結晶，所述的酸為光學活性的成鹽有機酸。合適的用于分步重結晶方法的拆分試劑例如光學活性酸，例如D和L形式的酒石酸、二乙?；剖?、二苯甲?；剖?、扁桃酸、蘋果酸、乳酸或各種光學活性的樟腦磺酸例如β-樟腦磺酸。其它適合分步重結晶方法的拆分試劑包括立體異構體純形式的α-甲基芐基胺(例如S和R形式或非對映異構體純形式的)、2-苯基氨基乙醇、去甲麻黃堿、麻黃堿、N-甲基麻黃堿、環(huán)己基乙基胺、1，2-二氨基環(huán)己烷等等。
外消旋混合物的拆分還可以通過洗脫裝填有光學活性拆分試劑(例如二硝基苯甲?；交拾彼?的柱子完成。合適的洗脫溶劑組合物可以由本領域技術人員確定。
本發(fā)明化合物還可以包括互變異構形式，例如酮式-烯醇式互變異構體?；プ儺悩嬓问娇梢酝ㄟ^適當?shù)娜〈云胶庥诨蚩臻g鎖定于一種形式。
本發(fā)明的化合物還包括水合物和溶劑合物。
本發(fā)明的化合物還可以包括在中間體或最終化合物中存在的所有的同位素原子。同位素包括那些具有相同原子數(shù)但是不同質(zhì)量數(shù)的原子。例如氫的同位素包括氚和氘。
本文采用的措詞“可藥用”意指那些化合物、物質(zhì)、組合物和/或劑型，其在正確的醫(yī)學判斷范圍內(nèi)，合適用于接觸人和動物組織而沒有過量的毒性、刺激性、過敏反應或其它問題或并發(fā)癥，與合理的益處/危險比率相當。
本發(fā)明還包括本文描述的化合物的可藥用鹽。本文中所用的“可藥用鹽”意指本文公開化合物的衍生物，其中通過將存在酸或堿部分轉(zhuǎn)化為其鹽的形式將母體化合物修飾?？伤幱名}的實例包括但不限于堿性基團例如胺的無機或或有機酸鹽；酸性基團例如羧酸的堿或有機的鹽等等。本發(fā)明的可藥用鹽包括母體化合物形成的常規(guī)無毒鹽或季銨鹽，例如從無毒無機的或有機酸形成的。本發(fā)明的可藥用鹽可以從含有堿性或酸性部分的母體化合物通過常規(guī)的化學方法合成。一般說來，這樣的鹽可以通過將這些化合物的游離酸或堿形式與化學計量的適當?shù)膲A或酸在水或有機溶劑或兩者混合物中反應制備；通常，優(yōu)選非水溶液介質(zhì)例如醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈。合適的鹽的列表在Remington′s Pharmaceutical Sciences，第17版，Mack PublishingCompany，Easton，Pa.，1985，p.1418和Journal of PharmaceuticalScience，66，2(1977)中查找，以其各自的全部內(nèi)容在此引入作為參考。
本發(fā)明還包括本文描述化合物的前藥。本文中所用的“前藥”意指任何共價結合的載體，當施用給哺乳動物施用對象時釋放出活性的母體藥物。前藥可以通過修飾在化合物中存在的官能團而制備，所作的修飾以這樣的方式被裂解為母體化合物或者以常規(guī)的操作，或者在體內(nèi)。前藥包括其中羥基、氨基、巰基或羧基基團與任何基團相結合的化合物，當施用給哺乳動物施用對象時，分別裂解為游離的羥基、氨基、巰基或羧基基團。前藥的實例包括但不限于本發(fā)明化合物中醇和胺官能團的乙酸酯、甲酸酯和苯甲酸酯衍生物。前藥的制備和使用在T.Higuchi和V.Stella，“Pro-drugs as Novel Delivery Systems，”Vol.14，the A.C.S.Symposium Series，和在Bioreversible Carriers inDrug Design，ed.Edward B.Roche，American PharmaceuticalAssociation and Pergamon Press，1987中討論，兩者以其全部內(nèi)容在此引入作為參考。
合成本發(fā)明的化合物包括其鹽、水合物和溶劑合物，可以使用已知的有機合成技術制備，并且可以按照許多可能合成路線的的任何路線合成。
制備本發(fā)明化合物的反應可以在合適的溶劑中完成，其可以由有機合成領域的技術人員方便地選擇。合適的溶劑可以基本上與原料(反應物)、中間體或產(chǎn)物在反應實施的溫度下不反應，例如溫度范圍從溶劑的凝固溫度至溶劑的沸騰溫度。給定的反應可以在一種溶劑或多種溶劑的混合物中實施。取決于特定的反應步驟，可以選擇特定反應的合適的溶劑。
本發(fā)明化合物的制備可以包括各種化學基團的保護和脫保護。保護和脫保護的需要以及適當保護基的選擇可以由本領域技術人在員方便地確定。保護基的化學可以例如T.W.Green和P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，第3版、Wiley & Sons，Inc.，New York(1999)中找到，在此以其全部內(nèi)容引入作為參考。
反應可以以本領域已知的任何合適的方法進行監(jiān)測。例如產(chǎn)物的形成可以通過光譜方法例如核磁共振光譜法(例如1H或13C)、紅外光譜法、分光光度法(例如紫外可見)或質(zhì)譜法監(jiān)測，或通過色譜法例如高效液相色譜法(HPLC)或薄層色譜法監(jiān)測。
本發(fā)明化合物合成路線的實例在下面流程

圖1-5中提供，其中描述的結構式的組成成分為本文所定義。
流程圖1 式1-8的茚酮中間體可以使用流程圖1概述的方法合成。例如苯甲醛1-3可以通過溴苯(1-1)用強堿例如2，2，6，6-四甲基哌啶/正丁基鋰脫質(zhì)子，隨后通過用例如DMF淬滅得到?；蛘撸郊兹?-3可以通過使用適當?shù)倪€原劑例如二異丁基鋁氫化物(DIBAL)將芐腈(1-2)還原得到。使用更強的還原劑例如硼氫化鈉將醛還原為醇之后，通過使用合適的氯化劑例如亞硫酰氯處理得到的醇1-4，可以將其轉(zhuǎn)化為氯化物。使用合適的堿(例如氫化鈉)用丙二酸二乙酯取代氯化物1-5得到二酯1-6。使用堿例如氫氧化鈉皂化該二酯，隨后脫羧得到單羧酸1-7。用適當?shù)沫h(huán)合試劑例如正丁基鋰處理1-7得到環(huán)合產(chǎn)物茚-1-酮1-8。
流程圖2 式2-6的中間體可以使用在流程圖2中描述的方法合成。式2-1的酮衍生物使用合適的還原劑例如硼氫化鈉還原得到醇2-2。在使用適當?shù)穆然瘎├鏢OCl2轉(zhuǎn)化為氯化物后，將氯化物2-3與式2-4的哌嗪衍生物反應得到2-5。在二烷中使用酸例如4N HCl除去Boc保護基得到式2-6的中間體。
流程圖3 式3-4中間體可以使用在流程圖3中概述的順序制備。醇中間體2-2在合適的條件下(例如p-TsOH在甲苯中回流)經(jīng)歷脫氫得到茚3-1。使用適當?shù)难趸瘎├缡宥』^氧化氫環(huán)氧化得到環(huán)氧化物3-2。使用式2-4的哌嗪衍生物使環(huán)氧化物開環(huán)提供3-3。用烷化劑例如烷基碘化物(RI)對3-3中的醇烷基化，隨后使用酸除去Boc得到式3-4(其中R為烷基)的中間體。
流程圖4 式4-4的化合物可以使用在流程圖4中描述的方法制備。式4-1的哌嗪衍生物與式4-2被保護的哌啶(Pr為氨基保護基例如Boc)反應提供衍生物4-3。使用合適的試劑(例如酸例如在二烷中的4N HCl)除去氨基保護基(Pr)后，可以使用合適的偶聯(lián)試劑例如BOP將得到的游離胺與羧酸偶聯(lián)得到式4-4的化合物。
流程圖5 式5-4的化合物可以使用在流程圖5中描述的方法制備。將式5-1的哌嗪衍生物與4-氧代-1-哌啶羧酸叔丁酯反應，隨后用二乙基氰化鋁處理得到氰基衍生物5-2。用甲基溴化鎂取代氰基基團得到5-3。在使用酸例如在二烷中的4N HCl除去Boc基團后，使用偶聯(lián)試劑例如BOP將得到的胺與羧酸偶聯(lián)得到式5-4的化合物。
流程圖6 4，6-二甲基嘧啶-5-羧酸(6-5)可以使用在流程圖6中概述的方法制備。將乙酰乙酸乙酯與乙烯酮二乙基縮醛在堿例如乙醇鈉的存在下反應得到中間體6-3。將6-3與甲脒乙酸鹽環(huán)合提供乙酯6-4，將其皂化得到羧酸6-5。
流程圖7 或者，式I化合物可以使用在流程圖7-9中描述的方法合成。苯甲醛衍生物7-1在N，N，N′-三甲基乙烷-1，2-二胺的存在下用正丁基鋰鋰化，隨后用烯丙基溴化物淬滅提供烯丙基衍生物7-2。在使用Ph3PCH3Br/n-BuLi處理將醛轉(zhuǎn)化為烯烴后，使用Grubbs催化劑將7-3環(huán)合得到茚衍生物7-4。使用Jacobsen催化劑不對稱環(huán)氧化得到環(huán)氧化物7-5。
流程圖8 4-Boc-2-甲基哌嗪8-1用芐基溴化物烷基化，隨后使用酸例如HCl除去Boc得到8-3。使用在流程圖5中描述的方法可以將中間體8-3轉(zhuǎn)化為8-4。通過使用Pd(OH)2作為催化劑氫化除去在8-4中的芐基得到中間體8-5。
流程圖9 如在流程圖9中所示，將中間體7-5和8-5在溶劑例如乙醇中在升高的溫度下結合得到中間體9-1。使用堿例如氫化鈉將得到的醇可以用R9I完成烷基化，使用偶聯(lián)試劑例如EDCI將得到的胺與R1CO2H偶聯(lián)提供式9-3的化合物。
流程圖10 或者，式I化合物可以按照流程圖10所示制備。通過在N，N，N′-三甲基乙烷-1，2-二胺存在下用正丁基鋰處理可以將苯甲醛衍生物7-1烷基化，隨后用丙烯醛淬滅。通過用Ph3PCH3Br/正丁基鋰處理可以將得到的半縮醛10-1轉(zhuǎn)化為烯烴。使用Grubbs催化劑環(huán)合得到3-羥基茚衍生物10-3，使用氧化劑例如吡啶氯鉻酸鹽(PCC)可以將其氧化。將中間體8-5向得到的酮10-4上進行邁克爾加成得到中間體10-5。在將酮還原為醇后，使用堿例如氫化鈉可以用R9I完成烷基化。除去Boc，隨后使用偶聯(lián)試劑例如EDCI/HOBt與R1CO2H偶合得到式10-7的化合物。
方法在一些實施方案中，本發(fā)明的化合物能夠調(diào)節(jié)一種或多種趨化因子受體的活性。術語“調(diào)節(jié)”意指增加或減小受體活性的能力。因此，本發(fā)明化合物可以被用于用任何一個或多個本文描述的化合物或組合物接觸受體而調(diào)節(jié)趨化因子受體的方法中。在一些實施方案中，本發(fā)明的化合物可以被用作趨化因子受體的抑制劑。在進一步的實施方案中，通過施用調(diào)節(jié)量的式I化合物，本發(fā)明的化合物可以被用于對需要調(diào)節(jié)該受體的個體調(diào)節(jié)趨化因子受體的活性。
在一些實施方案中，本發(fā)明的化合物可以以阻斷或抑制內(nèi)源性和其它趨化因子受體配體結合的方式與趨化因子受體結合。在一些實施方案中，本發(fā)明的化合物可以阻斷或抑制外源性的配體包括病毒蛋白的結合，所述病毒蛋白涉及病毒侵入細胞表達趨化因子受體。因此，本發(fā)明的化合物可以阻斷病毒侵入和抑制病毒感染。在一些實施方案中，本發(fā)明的化合物可以抑制人免疫-缺陷病毒(HIV)感染，通過例如阻斷趨化因子受體(例如CCR5)與HIV糖蛋白質(zhì)120(gp120)的相互作用。
本發(fā)明化合物結合和/或調(diào)節(jié)的趨化因子受體包括任何趨化因子受體。在一些實施方案中，趨化因子受體屬于趨化因子受體的CC家族包括例如CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7和CCR8。在一些實施方案中，趨化因子受體為CCR2。在一些實施方案中，趨化因子受體為CCR5。
本發(fā)明的化合物可以為選擇性的?！斑x擇性”意指與至少一種其它趨化因子受體比較，化合物結合或抑制趨化因子受體分別具有更大的親和性或強度。
本發(fā)明的化合物可以為選擇性CCR5結合劑，意指與另一個趨化因子受體例如CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR6、CCR7和CCR8中的至少一個相比，本發(fā)明的化合物可以以更大的親和性與CCR5結合。在一些實施方案中，本發(fā)明化合物對CCR5的結合選擇性超過對CCR2的。在一些實施方案中，本發(fā)明化合物對CCR5的結合選擇性超過對CCR1的。在一些實施方案中，本發(fā)明化合物對CCR5的結合選擇性超過對任何其它的CCR的。選擇性可以為至少約10-倍、至少約20-倍、至少約50-倍、至少約100-倍、至少約200-倍、至少約500-倍或至少約1000-倍。在一些實施方案中，本發(fā)明化合物對CCR5的結合親和性比對CCR1、CCR2或任何其它趨化因子受體的結合親和性大至少約10-倍、至少約20-倍、至少約50-倍、至少約100-倍、至少約200-倍、至少約500-倍或至少約1000-倍。結合親和性可以根據(jù)本領域常規(guī)方法例如根據(jù)本文提供的分析方法測定。
在一些實施方案中，本發(fā)明的化合物可以為CCR5的選擇性抑制劑，意指本發(fā)明的化合物相比至少一個其它趨化因子受體例如CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR6、CCR7和CCR8，具有對CCR5的更強的抑制活性。在一些實施方案中，本發(fā)明化合物對CCR5抑制選擇性超過對CCR2的。在一些實施方案中，本發(fā)明化合物對CCR5抑制選擇性超過對CCR1的。在一些實施方案中，本發(fā)明化合物對CCR5抑制選擇性超過對任何其它CCR的。選擇性可以為至少約10-倍、至少約20-倍、至少約50-倍、至少約100-倍、至少約200-倍、至少約500-倍或至少約1000-倍。在一些實施方案中，本發(fā)明化合物對CCR5的抑制親和性比對CCR1、CCR2或任何其它趨化因子受體的抑制親和性大至少約10-倍、至少約20-倍、至少約50-倍、至少約100-倍、至少約200-倍、至少約500-倍或至少約1000-倍。抑制強度可以根據(jù)本領域常規(guī)方法例如根據(jù)本文提供的分析方法測定。
本發(fā)明的另一方面涉及通過對有此需要的個體施用治療有效量或劑量的本發(fā)明的化合物或其藥物組合物對個體(例如患者)治療與趨化因子受體-相關的疾病或病癥的方法。趨化因子受體-相關的疾病可以包括任何直接地或間接地與趨化因子受體表達或活性關聯(lián)的疾病、病癥或狀況。趨化因子受體-相關的疾病還可以包括任何通過調(diào)節(jié)趨化因子受體活性而可以預防、改善或治愈的疾病、病癥或狀況。趨化因子受體-相關的疾病可以進一步包括任何以感染劑例如病毒或病毒蛋白質(zhì)與趨化因子受體結合為特征的疾病、病癥或狀況。在一些實施方案中，趨化因子受體-相關的疾病為CCR5-相關的疾病例如HIV感染。
趨化因子受體-相關的疾病、病癥或狀況的實例包括炎癥和炎性疾病、免疫病癥和病毒感染。炎性疾病的實例包括具有炎癥成分的疾病例如哮喘、過敏性鼻炎、再狹窄、動脈粥樣硬化、多發(fā)性硬化癥、局限性腸炎、潰瘍性結腸炎、過敏性肺疾病、過敏性肺炎、嗜酸性粒細胞肺炎、延遲型過敏、哮喘、間隙肺疾病(ILD)(例如先天性肺纖維化或與類風濕性關節(jié)炎、全身性紅斑狼瘡、強直性脊椎炎、全身性硬化癥、Sjogren’s綜合征、多發(fā)性肌炎或皮肌炎相關的ILD)等等。免疫病癥的實例包括類風濕性關節(jié)炎、牛皮癬關節(jié)炎、全身性紅斑狼瘡、重癥肌無力、青少年發(fā)作的糖尿?。荒I小球腎炎、自身免疫throiditis、器官移植排斥包括同種異體移植排斥和移植物對抗宿主的疾病。病毒感染的實例包括HIV感染。
本文中所用的術語“接觸”意指將指定的部分在體外系統(tǒng)或體內(nèi)系統(tǒng)中帶到一起。例如用本發(fā)明的化合物“接觸”趨化因子受體包括將本發(fā)明的化合物施用給具有趨化因子受體的個體或患者例如人，以及例如將本發(fā)明的化合物引入到包含趨化因子受體的細胞或純化制劑的樣品中。
本文中所用的術語“個體”或“患者”，可以交換使用，意指任何動物包括哺乳動物，優(yōu)選小鼠、大鼠、其它嚙齒動物、兔子、狗、貓、豬、牛、綿羊、馬或靈長類，最優(yōu)選人。
本文中所用的措詞“治療有效量”意指活性化合物或藥物的量，該量可以在組織、系統(tǒng)、動物、個體或人中引起生物的或藥物的響應，所述響應是研究者、獸醫(yī)、臨床醫(yī)生或其它臨床人員所追求的，其包括下述一種或多種(1)預防疾病；例如在個體中預防疾病、狀況或病癥，所述個體易于患上所述疾病、狀況或病癥，但是還沒有體驗到或顯示出所述疾病的病理學或癥狀；(2)抑制疾??；例如在個體中抑制疾病、狀況或病癥，所述個體正在體驗或顯示所述疾病、狀況或病癥的病理學或癥狀(即阻止病理學和/或癥狀的進一步發(fā)展)，例如在病毒感染的情況下穩(wěn)定病毒負載；和(3)改善疾病；例如在個體中改善疾病、狀況或病癥，所述個體正在體驗或顯示所述疾病、狀況或病癥的病理學或癥狀(即逆轉(zhuǎn)病理學和/或癥狀)，例如在病毒感染的情況下降低病毒負載。
一種或多種另外的藥物制劑例如抗病毒劑、抗體、抗炎劑和/或免疫抑制劑可以被用于與本發(fā)明的化合物聯(lián)合用于治療趨化因子受體相關的疾病、病癥或狀況。所述藥劑可以與本發(fā)明化合物以單劑型組合，或者可以以分離的劑型同時或順序地施用。
預期用于與本發(fā)明的化合物聯(lián)合的合適的抗病毒劑可以包含核苷和核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NRTIs)、非核苷逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NNRTIs)、蛋白酶抑制劑和其它抗病毒藥物。
合適的NRTIs的實例包括齊多夫定(AZT)；地丹諾辛(ddl)；扎西他賓(ddC)；司他夫定(d4T)；拉米夫定(3TC)；阿巴卡韋(1592U89)；阿德福韋酯[bis(POM)-PMEA]；洛布卡韋(BMS-180194)；BCH-10652；恩曲他賓[(-)-FTC]；β-1-FD4(還稱作β-L-D4C和命名為β-L-2′，3′-dicleoxy-5-氟-胞啶)；DAPD，((-)-β-D-2，6，-二氨基-嘌呤二氧戊環(huán))；和洛德腺苷(FddA)。
典型的合適的NNRTIs包括奈韋拉平(BI-RG-587)；地拉韋定(BHAP，U-90152)；依非韋倫(DMP-266)；PNU-142721；AG-1549；MKC-442(1-(乙氧基-甲基)-5-(1-甲基乙基)-6-(苯基甲基)-(2，4(1H，3H)-嘧啶二酮)；和(+)-calanolide A(NSC-675451)和B。
典型的合適的蛋白酶抑制劑包括沙奎那韋(Ro 31-8959)；利托那韋(ABT-538)；印地那韋(MK-639)；奈非那韋(AG-1343)；安潑那韋(141W94)；lasinavir(BMS-234475)；DMP-450；BMS-2322623；ABT-378；和AG-I 549。
其它抗病毒劑包括羥基脲、利巴韋林、I1-2、I1-12、pentafuside和Yissum Project No.11607。
在一些實施方案中，預期與本發(fā)明的化合物聯(lián)合的抗炎藥或鎮(zhèn)痛藥可以包含例如阿片激動劑、脂氧酶抑制劑例如5-脂氧酶抑制劑、環(huán)氧合酶抑制劑例如環(huán)氧合酶-2抑制劑、白介素抑制劑例如白介素-I抑制劑、NNMA拮抗劑、一氧化氮抑制劑或一氧化氮合成酶抑制劑、非甾體抗炎藥、細胞因子抑制抗炎藥例如撲熱息痛、阿司匹林、可待因、芬太尼、布洛芬、吲哚美辛、酮洛酸、嗎啡、萘普生、非那西丁、吡羅昔康、甾體鎮(zhèn)痛藥、舒芬太尼、舒林酸(sunlindac)、替尼達普等等。類似地，本發(fā)明化合物可以與疼痛減輕劑；增效劑例如咖啡堿；H2-拮抗劑；西甲硅油、氫氧化鋁或氫氧化鎂、解充血藥例如苯福林、苯基丙醇胺、偽麻黃堿、羥甲唑啉、ephinephrine、萘甲唑林、賽洛唑啉、丙己君或左旋去氧麻黃堿；止咳藥例如可待因、氫可酮、卡拉美芬、噴托維林或右美沙芬；利尿劑；和鎮(zhèn)靜劑或非鎮(zhèn)靜抗組胺藥一起施用。
在一些實施方案中，預期與本發(fā)明的化合物聯(lián)合的藥物可以包含(a)VLA-4拮抗劑例如在US 5,510,332、WO 95/15973、WO 96/01644、WO 96/06108、WO 96/20216、WO 96/229661、WO 96/31206、WO96/4078、WO 97/030941、WO 97/022897 WO 98/426567、WO 98/53814、WO 98/53817、WO 98/538185、WO 98/54207和WO 98/58902中描述的那些；(b)類固醇例如丙酸倍氯米松、methylpi-ednisolone、倍他米松、強的松、地塞米松和氫化可的松；(c)免疫抑制劑例如環(huán)孢菌素、他克莫司、雷帕霉素和其它FK506型免疫抑制劑；(d)抗組胺藥(HI-組胺拮抗劑)例如溴苯那敏、氯苯那敏、右氯苯那敏、曲普利啶、氯馬斯汀、苯海拉明、二苯拉林、曲吡那敏、羥嗪、甲地拉嗪、異丙嗪、阿利馬嗪、阿扎他定、賽庚啶、安他唑啉、非尼拉敏、美吡拉敏、阿司咪唑、特非那定、氯雷他定、西替利嗪、非索非那定、desearboethoxyloratadine等；(e)非類固醇類抗哮喘藥例如特布他林、硫酸奧西那林、非諾特羅、乙基異丙腎上腺素、沙丁胺醇、比托特羅、吡布特羅、茶堿、色甘酸鈉、阿托品、異丙托溴銨，白三烯拮抗劑(例如扎魯司特、孟魯司特、普侖司特、伊拉司特、泊比司特、SKB-106，203)，白三烯生合成抑制劑(例如齊留通、BAY-1005)；(f)非甾體抗炎藥(NSAIDs)例如丙酸衍生物(例如阿明洛芬、苯惡洛芬、布氯酸、卡洛芬、芬布芬、非諾洛芬、氟洛芬、氟比洛爾、布洛芬、吲哚洛芬、酮洛芬、咪洛芬、萘普生、丙嗪、吡洛芬、普拉洛芬、舒洛芬、噻洛芬酸和硫洛芬)、乙酸衍生物(例如吲哚美辛、acernetacin、阿氯芬酸、環(huán)氯茚酸、二氯芬酸、芬氯酸、芬克洛酸、芬替酸、呋羅芬酸、布芬酸、伊索克酸、oxpinac、舒林酸、硫平酸、托美丁、齊多美辛和佐美酸)、芬那酸衍生物(氟芬那酸、甲氯芬那酸、甲芬那酸、尼氟滅酸和托芬那酸)、聯(lián)苯羧酸衍生物(二氟苯水楊酸和氟苯柳)、昔康類(伊索昔康、吡羅昔康、舒多昔康和替諾昔康)、水楊酸酯(乙酰基水楊酸、水楊酸偶氮磺胺吡啶)和吡唑酮(阿扎丙宗、bezpiperylon、非普拉宗、莫非布宗、羥布宗、保泰松)；(g)環(huán)氧合酶-2(COX-2)抑制劑；(h)磷酸二酯酶IV抑制劑(PDE-IV)；(i)其它趨化因子受體拮抗劑，尤其是CXCR-4、CCR1、CCR2、CCR3和CCR5；(j)降低膽固醇藥物例如HMG-CoA還原酶抑制劑(洛伐他汀、斯伐他汀和普伐他汀、氟伐他汀、阿伐他汀和其它他汀類)，螯合劑(考來烯胺和考來替泊)、煙酸、非諾貝酸衍生物(吉非貝齊、氯貝特、非諾貝特和苯扎貝特)和丙丁酚；(k)抗糖尿病藥物例如胰島素、磺酰脲類、雙胍類(二甲雙胍)，U-葡萄糖苷酶抑制劑(阿卡波糖)和orlitazones(曲格列酮和匹格列酮)；(1)干擾素β制劑(干擾素β-1o.、干擾素β-1P)；(m)其它化合物例如氨基水楊酸、抗代謝物例如硫唑嘌呤和6-巰基嘌呤和細胞毒癌癥化療劑。本發(fā)明化合物與第二個活性成分的重量比可以變化，取決于每個成分的有效劑量。
藥物制劑和劑型當用作藥物時，式I化合物可以以藥物組合物形式施用。這些組合物可以以藥物技術中眾所周知的方法制備，可以通過多種途徑被施用，取決于是否希望局部或全身治療，以及取決于治療的面積。施用可以為局部(包括眼部和粘膜包括鼻內(nèi)、陰道和直腸輸送)、肺(例如通過吸入或吹入粉末或氣霧劑，包括被噴霧器；氣管內(nèi)、鼻內(nèi)、表皮和經(jīng)皮)、眼睛、口服或腸胃外。眼睛輸送的方法可以包括局部施用(眼睛滴劑)、結膜下、眼周或眼球玻璃體內(nèi)注射劑或被氣球?qū)Ч芤牖蜓鄄坎迦胛锸中g放置在結膜囊內(nèi)。腸胃外施用包括靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)或肌肉內(nèi)注射劑或輸注；或顱內(nèi)，例如鞘內(nèi)或心室內(nèi)施用。腸胃外施用可以單次快速濃注劑量形式或可以為例如連續(xù)灌注泵。用于局部施用的藥物組合物和劑型可以包括經(jīng)皮貼劑、軟膏劑、洗劑、乳膏劑、凝膠劑、滴劑、栓劑、噴霧劑、液體和粉末。常規(guī)的藥用載體、水溶液、粉末或油性基質(zhì)、增稠劑等可以為必需或希望的。
本發(fā)明還包括藥物組合物，其含有作為活性成分的一個或多個上述式I的化合物與一種或多種可藥用載體混合。在制備本發(fā)明的組合物時，典型地將活性成分與賦形劑混合，用賦形劑稀釋或?qū)⑵浞馊脒@樣的載體形式例如膠囊、藥包、紙或其它容器中。當賦形劑用作稀釋劑時，其可以為固體、半固體或液體物質(zhì)，其作為活性成分的介質(zhì)、載體或媒介。因此，組合物可以為以下形式、片劑、丸劑、粉末、糖錠劑、藥包、扁囊劑、酏劑、混懸劑、乳劑、溶液、糖漿、氣霧劑(以固體或以液體為媒介)、軟膏劑，含有例如以重量計至多10％的活性化合物，軟和硬明膠膠囊、栓劑、滅菌可注射的溶液和滅菌包裝的粉末。
在制備劑型時在與其它成分混合之前，可以將活性化合物碾磨以提供適當?shù)奈⒘４笮　Ｈ绻钚曰衔锘旧喜豢扇?，其可以被碾磨為顆粒大小小于200目。如果活性化合物基本上是水可溶的，微粒大小可以通過碾磨調(diào)節(jié)為在劑型中均勻分布，例如約40目。
合適賦形劑的一些實例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯樹膠、磷酸鈣、海藻酸鹽、黃蓍膠、明膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水、糖漿和甲基纖維素。劑型可以另外包括潤滑劑例如滑石粉、硬脂酸鎂和礦物油；增濕劑；乳化劑和懸浮劑；防腐劑例如羥基苯甲酸甲酯和丙酯；甜味劑；和矯味劑。本發(fā)明的組合物可以被配制，通過采用本領域已知的方法施用給患者后，以提供活性成分的快速、持續(xù)或延遲釋放。
所述組合物可以以單位劑型配制，每個劑量含有從約5至約100mg，更通常從約10至約30mg的活性成分。術語“單位劑型”意指適合作為人和其它動物施用對象單位劑量的物理上分開的單位，每個單位含有與適當?shù)乃幬镔x形劑相混合的預定量的活性物質(zhì)，以產(chǎn)生希望的治療效果。
活性化合物在寬的劑量范圍中可以是有效的，一般以藥物有效量被施用。但是應當理解實際施用的化合物量通常由醫(yī)師根據(jù)以下相關狀況確定，包括被治療的病癥、選擇的施用途徑、實際施用的化合物、個體患者的年齡、體重、反應、患者癥狀的嚴重性等等。
為制備固體組合物例如片劑，將主要活性成分與藥物賦形劑混合以形成含有本發(fā)明化合物均勻混合物的固體預配制組合物。當提及這些預配制組合物為均勻的時，是指活性成分典型地被平均分散在整個組合物當中，以致組合物可以方便地被細分為相同有效的單位劑型例如片劑、丸劑和膠囊。然后將這種固體預配制劑型細分為上面所述的，含有例如0.1至約500mg本發(fā)明活性成分的單位劑型。
本發(fā)明的片劑或丸劑可以被包衣或復合，以提供具有延長作用優(yōu)點的劑型。例如片劑或丸劑可以包含內(nèi)部劑量和外部劑量成分，后者可以為前者外的包被的形式。兩種成分可以被腸溶層分開，用以抵抗在胃中的崩解，允許內(nèi)層成分完整通過十二指腸或者被延遲釋放。許多物質(zhì)可以被用于這樣的腸溶層或包衣中，這樣的物質(zhì)包括許多多元酸，以及多元酸與這樣的物質(zhì)例如蟲膠、十六烷基醇和纖維素乙酸酯的混合物。
本發(fā)明化合物和組合物可以配合形成用以口服或注射施用的液體形式，包括水溶液、合適的風味糖漿、水溶液或油混懸劑和與食用油例如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油的風味乳劑，以及酏劑和類似的藥物介質(zhì)。
用于吸入或吹入的組合物包括在可藥用的水溶液或有機溶劑或其混合物中的溶液和混懸劑以及粉末。液體或固體組合物可以含有如上所述的合適的可藥用賦形劑。在一些實施方案中，通過口服或鼻腔呼吸途徑施用組合物以得到局部或全身的效果。通過使用惰性氣體組合物可以被霧化。噴霧溶液可以從霧化設備中直接被吸入，或者將霧化設備連接在面罩或間斷的正壓呼吸設備上。溶液、混懸劑或粉末組合物可以從以適當?shù)姆绞捷斔蛣┬偷脑O備上口服或鼻腔施用。
施用給患者的化合物或組合物的量將會依據(jù)被施用的物質(zhì)、施用目的例如預防或治療、患者狀態(tài)、施用方式等等而變化。在治療應用中，可以對已經(jīng)患上疾病的患者施用組合物，組合物的量足以治愈或至少部分遏制疾病癥狀及其并發(fā)癥。有效劑量將取決于被治療的疾病狀況，以及臨床醫(yī)生依據(jù)多種因素例如疾病的嚴重性、患者的年齡、體重和一般狀況等的判斷。
施用給患者的組合物可以以如上所述的藥物組合物的形式。通過常規(guī)的滅菌技術，這些組合物可以被滅菌，或者可以被滅菌過濾。水溶液可以被包裝使用，或者被冷凍干燥，在施用前可以將冷凍干燥制劑與滅菌水溶液載體混合。化合物制劑的pH典型地為3至11之間，更優(yōu)選5至9之間，最優(yōu)選7至8之間。應當理解某些前述的賦形劑、載體或穩(wěn)定劑的使用將會導致藥物鹽的形成。
本發(fā)明化合物的治療劑量可以根據(jù)治療的特定用途、化合物施用方式、患者的健康狀況和處方醫(yī)生的判斷而不同。在藥物組合物中本發(fā)明化合物的比例或濃度可以依據(jù)許多因素包括劑量、化學特征(例如疏水性)和給藥途徑而變化。例如本發(fā)明化合物可以以生理緩沖水溶液形式提供，其中含有約0.1至約10％w/v的化合物用于腸胃外施用。一些典型的劑量范圍為從約1μg/kg體重每天至約1g/kg體重每天。在一些實施方案中，劑量范圍為從約0.01mg/kg體重每天至約100mg/kg體重每天。劑量可能依據(jù)這樣的變量，如疾病或病癥的類型和進展程度、特定患者的整體健康狀況、所選擇化合物的相對生物學效果、賦形劑的劑型以及給藥途徑。有效劑量可以從由來自體外或動物模型試驗系統(tǒng)的劑量-反應曲線推斷。
本發(fā)明化合物還可以與一種或多種另外的活性成分聯(lián)合，包括任何藥物例如抗病毒藥、抗體、免疫抑制劑、抗炎藥等等。在一些實施方案中，本發(fā)明化合物可以與一種或多種抗病毒藥包括蛋白酶抑制劑和其它藥物用于抗-HIV治療。
標記化合物和分析方法本發(fā)明另一方面涉及式I的放射性標記的化合物，其不僅被用于放射性成象，還可以被體外和體內(nèi)用于在組織樣品包括人中固定和定量趨化因子受體，通過抑制放射性標記化合物的結合鑒定趨化因子受體配體。因此，本發(fā)明包括含有這樣的放射性標記化合物趨化因子受體的分析。
本發(fā)明進一步包括同位素標記的式I化合物?！巴凰亍被颉胺派湫詷擞浀摹被衔餅楸景l(fā)明的化合物，其中一個或多個原子被原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)不同于天然存在(即天然發(fā)生)的原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)的原子所替換或取代。合適的放射性核素可以被引入到本發(fā)明化合物中，包括但不限于2H(對氘還寫作D)、3H(對氚還寫作T)、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、18F、35S、36Cl、82Br、75Br、76Br、77Br、123I、124I、125I和131I。被引入到本發(fā)明放射性標記的化合物中的放射性核素依據(jù)具體放射性標記的化合物的應用。例如對體外趨化因子受體標記，一般最常用引入3H、14C、82Br、125I、131I、35S。對于放射性應用，一般最常用引入11C、18F、125I、123I、124I、131I、75Br、76Br或77Br。
應當理解“放射性標記的”或“標記的化合物”為具有引入至少一個放射性核素的化合物。在一些實施方案中，放射性核素選自3H、14C、125I、35S和82Br。
將放射性同位素引入到有機化合物的合成方法可以用于本發(fā)明的化合物，這些方法在本領域是眾所周知的。
本發(fā)明的放射性標記化合物可以被用于篩選分析以鑒定/評價化合物。一般說來，新合成的或鑒定的化合物(即試驗化合物)可以被評價其減小本發(fā)明放射性標記的化合物與趨化因子受體結合的能力。因此，試驗化合物與放射性標記的化合物競爭與趨化因子受體的結合，所述與受體的結合與結合親和性直接相關。
藥盒本發(fā)明還包括藥盒，例如用于治療或預防趨化因子-相關的疾病或病癥，例如HIV感染，包括一個或多個含有藥物組合物的容器，所述藥物組合物包含治療有效量的式I化合物。這樣的藥盒可以進一步包括，如果需要，一種或多種各種的常規(guī)的藥物藥盒成分，例如有一種或多種可藥用載體的容器，另外的容器等，這對本領域那些技術人員是顯而易見的。在藥盒中包括說明書，或為插入物或標簽，顯示被給藥的成分的量、給藥指導方案和/或成分混合的指導方案。
通過具體實施例的方式本發(fā)明將更詳細地描述。下列實施例是為舉例說明的目的提供，而不是以任何方式對本發(fā)明限制。本領域那些技術人員容易認識到許多非關鍵參數(shù)，可以將其改變或修改以得到基本上相似的結果。
實施例實施例15-({4-[(3S)-4-(5-溴-2，3-二氫-1H-茚-1-基)-3-甲基哌嗪-1-基]-4-甲基哌啶-1-基}羰基)-4，6-二甲基嘧啶 步驟A5-溴-1-茚醇向5-溴-1-茚酮(2.0g，9.5mmol)在THF(20mL)中的溶液中，加入NaBH4(0.5g，12.8mmol)。在室溫下攪拌過夜后，加入水淬滅溶液。將到的溶液用EtOAc萃取兩次。將合并的EtOAc層用Na2SO4干燥，在真空下濃縮得到2.0g標題化合物，為固體。MS對C9H9BrO計算值(M+H)+212.9；實測值194.9(M+H-H2O)+，197.0(M+H-H2O)+。
步驟B(3S)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯向(2S)-2-甲基哌嗪(20.0g，0.200mol)在二氯甲烷(300mL)和三乙胺(20.4g，0.202mol)中的溶液中，經(jīng)5小時滴加二碳酸二叔丁酯(44.0g，0.202mol)在CH2Cl2(100mL)中的溶液?；旌衔镉盟Ⅺ}水洗滌然后MgSO4干燥并濃縮。硅膠柱色譜法(含10-20％MeOH的EtOAc)得到32.0g(80％)標題化合物，為油狀物。
步驟C(3S)-4-(5-溴-2，3-二氫-1H-茚-1-基)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯將步驟A的5-溴-1-茚醇(1.0g，4.7mmol)溶解在亞硫酰氯(10mL)中。在室溫下攪拌2小時后，將溶液在真空下濃縮。將殘余物吸收在DMF(10mL)中。向該混合物中加入(3S)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.94g，4.7mmol)、NaI(2g，13mmol)和三乙胺(1.5mL，10mmol)。將得到的溶液在70℃攪拌過夜。在冷卻至室溫后，加入水。將溶液用EtOAc萃取兩次。合并的EtOAc層用鹽水洗滌、MgSO4干燥并濃縮。硅膠柱色譜法(含50％EtOAc的己烷)提供兩個異構體。異構體1(移動快的異構體)0.36g；MS對于C19H27BrN2O2(M+H)+的計算值395；實測值395.1、397.0。異構體2(移動慢的異構體)0.33g；MS實測值395.1，397.0。
步驟D4-[(3S)-4-(5-溴-2，3-二氫-1H-茚-1-基)-3-甲基哌嗪-1-基]-4-氰基哌啶-1-羧酸叔丁酯將來自步驟C(0.33g，0.83mmol)的異構體1溶解在含4N HCl的二氧六環(huán)(4mL)中。在室溫下攪拌2小時后，將溶液濃縮。將殘余物吸收在CH2Cl2(5mL)中。向其中加入4-氧代-1-哌啶羧酸叔丁酯(0.17g，0.85mmol)、Ti(Oi-Pr)4(0.87mL)和三乙胺(0.6mL)。將混合物在室溫下攪拌過夜，在真空下除去揮發(fā)物。將殘余物溶解在THF(5mL)中。向混合物中加入1.0M的二乙基氰化鋁溶液(1mL)。將得到的溶液在30℃攪拌5小時，濃縮得到粗品標題化合物(0.32g)，無須純化將其用于下一步反應。MS對于C25H35BrN4O2的計算值(M+H)+503；實測值503.1，505.1。
步驟E4-[(3S)-4-(5-溴-2，3-二氫-1H-茚-1-基)-3-甲基哌嗪-1-基]-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯向4-[(3S)-4-(5-溴-2，3-二氫-1H-茚-1-基)-3-甲基哌嗪-1-基]-4-氰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.32g，0.64mmol)在THF(2mL)中的溶液中，加入3M甲基溴化鎂的溶液(1.1mL，3.3mmol)。在室溫下攪拌過夜后，將溶液濃縮。在硅膠(2∶1己烷/EtOAc)純化得到標題化合物(0.25g)。MS對于C25H37BrN3O2的計算值(M+H)+491；實測值491.2，494.2。
步驟F(2S)-1-(5-溴-2，3-二氫-1H-茚-1-基)-2-甲基-4-(4-甲基哌啶-4-基)哌嗪將從步驟E得到的中間體(0.23g)溶解在含4N HCl的二烷溶液(3mL)中。在室溫下攪拌2小時后，將溶液濃縮得到標題化合物，為三鹽酸鹽(0.23g)。MS對于C20H30BrN3的計算值(M+H)+392；實測值392.2，394.2。
步驟G4，6-二甲基嘧啶-5-羧酸2-乙?；?3-乙氧基丁-2-烯酸乙酯。在配有機械攪拌器、冷凝器、熱電偶套管、加料漏斗和N2入口的5L 4-頸燒瓶中放入乙酰乙酸乙酯(493.1g，483mL，3.7931mol，1.0equiv)和乙醇鈉(3.1g，0.046mol，1.2mol％)。經(jīng)1小時加入乙烯酮二乙基縮醛(880.0g，1000mL，7.5862mol，2.0equiv)，通過外部冷卻使反應溫度保持在＜22℃。當?shù)渭油瓿珊?，將反應混合物?5℃±5℃加熱7.5小時。將黃棕色反應混合物冷卻至室溫，并攪拌過夜。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(浴溫～65℃)上抽去較多的較低沸點的組分[EtOH、EtOAc、Me(OEt)3]。蒸餾殘余的黃橙色油狀物，收集bp 100-107℃(1.8-2.1Torr)的餾分得到675.2g(89％)的產(chǎn)物，為黃色液體。
4，6-二甲基嘧啶-5-羧酸乙酯。將2-乙酰基-3-乙氧基丁-2-烯酸乙酯(10.7g，0.0537mol)、甲脒乙酸鹽(5.6g，0.054mol)和乙醇鈉(2.7M在乙醇中，20.0mL)在乙醇(30mL)中混合，將混合物在90℃攪拌4小時。將反應混合物冷卻，用水淬滅并濃縮。通過硅膠快速色譜法純化粗品，用含10％、50％乙酸乙酯的己烷洗脫得到所需的產(chǎn)物(7.4g，76％)，為黃色油狀物。MS(EI)181.1(M+1)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ(ppm)8.97(s，1H)，4.44(q，2H)，2.56(s，6H)，1.42(t，3H)。
4，6-二甲基-嘧啶-5-羧酸。將4，6-二甲基嘧啶-5-羧酸乙酯(10.9g，0.0605mol)與氫氧化鈉(4.0g，0.10mol)在水(70mL)中的溶液混合。將混合物在室溫下攪拌過夜。使用濃鹽酸將水溶液的反應物酸化，然后濃縮至干燥。向該殘余物中加入丙酮(100mL)。濾出不溶的氯化鈉，用甲醇(100mL)洗滌。將濾液濃縮至干燥。將殘余物用ACN洗滌得到8.5g(92％)的產(chǎn)物，為固體。MS(EI)153.1(M+1)。1HNMR(400MHz，CD3OD)δ(ppm)8.89(s，1H)，2.56(s，6H)。
步驟H5-({4-[(3S)-4-(5-溴-2，3-二氫-1H-茚-1-基)-3-甲基哌嗪-1-基]-4-甲基哌啶-1-基}羰基)-4，6-二甲基嘧啶向(2S)-1-(5-溴-2，3-二氫-1H-茚-1-基)-2-甲基-4-(4-甲基哌啶-4-基)哌嗪三鹽酸鹽(30mg，0.06mmol)和4，6-二甲基-嘧啶-5-羧酸(9mg，0.06mmol)在DMF(2mL)中的溶液中加入苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)六氟磷酸鹽(30mg，0.06mmol)，隨后加入三乙胺(30mg，0.3mmol)。在室溫下攪拌5小時后，將混合物用EtOAc和Na2CO3在水中的溶液稀釋。分離有機層，用水洗滌幾次，Na2SO4干燥并濃縮。在反相HPLC上純化，并冷凍干燥得到最終產(chǎn)物，為TFA鹽(20mg)。MS對于C27H36BrN5O計算值(M+H)+526；實測值526.1，528.1。
實施例25-({4-[(3S)-4-(5-氟-2，3-二氫-1H-茚-1-基)-3-甲基哌嗪-1-基]-4-甲基哌啶-1-基}羰基)-4，6-二甲基嘧啶使用適當?shù)脑希旧习凑諏嵤├?描述的方法制備該化合物。MS對于C27H36FN5O的計算值(M+H)+466；實測值466.2。
實施例3
5-({4-[(3S)-4-(6-溴-2，3-二氫-1H-茚-1-基)-3-甲基哌嗪-1-基]-4-甲基哌啶-1-基}羰基)-4，6-二甲基嘧啶使用適當?shù)脑?，基本上按照實施?描述的方法制備該化合物。MS對于C27H36BrN5O的計算值(M+H)+526；實測值526.1，528.1。
實施例45-({4-[(3S)-4-(6-氟-2，3-二氫-1H-茚-1-基)-3-甲基哌嗪-1-基]-4-甲基哌啶-1-基}羰基)-4，6-二甲基嘧啶使用適當?shù)脑?，基本上按照實施?描述的方法制備該化合物。MS對于C27H36FN5O的計算值(M+H)+466；實測值466.2。
實施例55-({4-[(3S)-4-(6-溴-1，2，3，4-四氫萘-1-基)-3-甲基哌嗪-1-基]-4-甲基哌啶-1-基}羰基)-4，6-二甲基嘧啶使用適當?shù)脑?，基本上按照實施?描述的方法制備該化合物。MS對于C28H38BrN5O的計算值(M+H)+540；實測值540.2，542.1。
實施例65-({4-[(3S)-4-(7-溴-1，2，3，4-四氫萘-1-基)-3-甲基哌嗪-1-基]-4-甲基哌啶-1-基}羰基)-4，6-二甲基嘧啶使用適當?shù)脑?，基本上按照實施?描述的方法制備該化合物。MS對于C28H38BrN5O的計算值(M+H)+540；實測值540.2，542.1。
實施例74，6-二甲基-5-[(4-甲基-4-{(3S)-3-甲基-4-[6-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)羰基]嘧啶 步驟A[2-溴-4-(三氟甲基)芐基]丙二酸二乙酯在10℃向氫化鈉(1.4g，58mmol)在DMF(37mL)中的懸浮液中滴加丙二酸乙酯(14g，88mmol)。在加入后，將混合物在室溫下攪拌1小時。向其中緩慢加入2-溴-1-(氯甲基)-4-(三氟甲基)苯(10.0g，36.6mmol)在DMF(20mL)中的溶液。在室溫下攪拌過夜后，將混合物傾入到冰水(300mL)中。得到的溶液用醚萃取兩次。將合并的萃取液用水和鹽水洗滌，MgSO4干燥并濃縮。硅膠柱色譜法(含5-10％EtOAc的己烷)得到標題化合物，為油狀物(13.5g，93％)。MS對于C15H16BrF3O4計算值(M+H)+397；實測值397.0，399.0。
步驟B[2-溴-4-(三氟甲基)芐基]丙二酸向[2-溴-4-(三氟甲基)芐基]丙二酸二乙酯(13.5g，34mmol)在乙醇(60mL)和水(28mL)中的溶液中加入5M氫氧化鈉在水(20mL)中的溶液。在室溫下攪拌過夜后，在真空下除去乙醇。通過加入更多的水稀釋水溶液，用醚萃取兩次。用濃HCl將得到的水層酸化至pH＝3，用醚萃取三次。將合并的醚層用水和鹽水洗滌，MgSO4干燥并濃縮得到標題化合物，為白色固體(9.8g，84％)。MS對于C11H8BrF3O4計算值(M+H)+341；實測值363(M+Na)+。
步驟C3-[2-溴-4-(三氟甲基)苯基]丙酸將[2-溴-4-(三氟甲基)芐基]丙二酸(9.80g，28.7mmol)在圓底燒瓶中加熱至180℃，并連續(xù)在180℃加熱1.5小時。在冷卻至室溫后，將固體溶解在醚中，得到的溶液用MgSO4干燥并濃縮。固體用己烷洗滌得到標題化合物(7.20g，85％)。MS對于C10H8BrF3O2計算值(M+H)+297；實測值297.0，299.0。
步驟D6-(三氟甲基)茚-1-酮在-78℃向3-[2-溴-4-(三氟甲基)苯基]丙酸(6.40g，21.5mmol)在THF(300mL)和己烷(80mL)中的溶液中加入2.5M正丁基鋰在己烷(19mL)中的溶液。在攪拌15分鐘后，將混合物傾入到2N HCl溶液(150mL)中。分離兩層，水層用醚萃取。將合并的有機層用NaHCO3溶液、水、鹽水洗滌，MgSO4干燥并濃縮。硅膠柱色譜法(含10-20％EtOAC的己烷)得到標題化合物(2.2g，51％)，為油狀物。MS對于C10H7F3O計算值(M+H)+201；實測值201.0。
步驟E
6-(三氟甲基)茚-1-醇向6-(三氟甲基)茚-1-酮(2.20g，11mmol)在THF(30mL)中的溶液中加入硼氫化鈉(0.50g，13mmol)。在攪拌30分鐘后，緩慢加入甲醇(10mL)。連續(xù)攪拌2小時。通過加入氯化銨水溶液將反應淬滅。分離兩層，水層用醚萃取。合并的有機層用水、鹽水洗滌，MgSO4干燥并濃縮。硅膠柱色譜法(含10-15％EtOAC的己烷)得到標題化合物(1.52g，68％)，為油狀物。MS對于C10H9F3O計算值(M+H)+203；實測值185.0(M-H2O+1)+。
步驟F1-氯-6-(三氟甲基)茚滿將6-(三氟甲基)茚-1-醇(1.52g，7.5mmol)溶解在亞硫酰氯(15mL)中。在室溫下攪拌2小時后，在真空下濃縮溶液得到標題化合物(1.5g，90％)。
步驟G(3S)-3-甲基-4-[6-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯在60℃將1-氯-6-(三氟甲基)茚滿(1.52g，6.89mmol)、(3S)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.1g，10mmol)、碘化鈉(3g，20mmol)和三乙胺(3g，30mmol)在DMF(20mL)中的溶液攪拌過夜。在冷卻至室溫后，加入水。將得到的溶液用EtOAc萃取兩次。合并的萃取液用水和鹽水洗滌、MgSO4干燥并濃縮。硅膠柱色譜法(含10％-30％EtOAc的己烷)得到兩個異構體。異構體10.52g(棕色油狀物)。MS對于C20H27F3N2O2計算值(M+H)+385；實測值385.2。異構體20.41g(棕色油狀物)。MS(M+H)+385.2。
步驟H(2S)-2-甲基-1-[6-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]哌嗪將(3S)-3-甲基-4-[6-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯(從步驟G得到的異構體1，0.52g，1.4mmol)溶解在4M的HCl在1，4-二烷(10mL)的溶液中。在室溫下攪拌2小時后，在真空下濃縮溶液得到標題化合物，為二鹽酸鹽(0.48g，100％)。MS對于C15H19F3N2計算值(M+H)+285；實測值285.1。
步驟I4-氰基-4-{(3S)-3-甲基-4-[6-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]哌嗪-1-基}哌啶-1-羧酸叔丁酯將(2S)-2-甲基-1-[6-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]哌嗪二鹽酸鹽(0.38g，1.3mmol)溶解在二氯甲烷中。用NaHCO3飽和溶液洗滌該溶液，MgSO4干燥并濃縮。殘余物吸收在二氯甲烷(20rnL)中。向其中加入4-氧代-1-哌啶羧酸叔丁酯(0.32g，1.6mmol)和四異丙氧化鈦(0.8g，3mmol)。將混合物在室溫下攪拌過夜并在真空下濃縮。將殘余物吸收在THF(20mL)中。加入二乙基氰化鋁(0.18g，1.6mmol)。在室溫下攪拌5小時后，通過加入水(3mL)將溶液淬滅。通過硅藻土過濾得到的溶液，用二氯甲烷洗滌硅藻土幾次。濾液用MgSO4干燥并濃縮得到標題化合物(0.72g，98％)，為棕色粘稠的油狀物。MS對于C26H35F3N4O2計算值(M+H)+493；實測值493.2。
步驟J4-甲基-4-{(3S)-3-甲基-4-[6-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]哌嗪-1-基}哌啶-1-羧酸叔丁酯向4-氰基-4-{(3S)-3-甲基-4-[6-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]哌嗪-1-基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.72g，1.3mmol)在THF(20mL)中的溶液中加入3M甲基溴化鎂在醚(4.0mL)中的溶液。在室溫下攪拌過夜后，通過加入水將反應淬滅。將得到的溶液用EtOAc萃取兩次。干燥并濃縮合并的EtOAc層。硅膠柱色譜法(含20-30％EtOAc的己烷)提供標題化合物(0.32g，50％)，為粘稠油狀物。MS對于C26H38F3N3O2計算值(M+H)+482；實測值482.3。
步驟K(2S)-2-甲基-4-(4-甲基哌啶-4-基)-1-[6-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]哌嗪將4-甲基-4-{(3S)-3-甲基-4-[6-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]哌嗪-1-基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.32g，0.6mmol)溶解在含4M HCl的二烷溶液(8.0mL)中。在室溫下攪拌2小時后，將溶液濃縮得到標題化合物(0.35g)，為三鹽酸鹽。MS對于C21H30F3N3計算值(M+H)+382；實測值382.2。
步驟L4，6-二甲基-5-[(4-甲基-4-{(3S)-3-甲基-4-[6-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)羰基]嘧啶向(2S)-2-甲基-4-(4-甲基哌啶-4-基)-1-[6-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]哌嗪三鹽酸鹽(100mg，0.183mmol)、4，6-二甲基-嘧啶-5-羧酸(67mg，0.22mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)六氟磷酸鹽(97mg，0.22mmol)，隨后加入三乙胺(90mg，0.9mmol)。在室溫下攪拌過夜后，加入NaHCO3在水中的溶液。將得到的溶液用EtOAc萃取兩次。合并的EtOAc層用鹽水洗滌，MgSO4干燥并濃縮。硅膠柱色譜法(含10-20％MeOH的EtOAc)得到標題化合物(60mg)，為油狀物。MS對于C28H36F3N5O計算值(M+H)+516；實測值516.2。
實施例84，6-二甲基-5-[(4-甲基-4-{(3S)-3-甲基-4-[5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)羰基]嘧啶 步驟A[2-溴-5-(三氟甲基)苯基]甲醇向2-溴-5-(三氟甲基)芐腈(10.0g，40mmol)在二氯甲烷(100mL)中的溶液中滴加1.0M二異丁基氫化鋁在己烷(48mL)中的溶液。在環(huán)境溫度氮氣氛下將得到的溶液攪拌1小時，然后加入醚(100mL)稀釋。在冰浴中冷卻后，小心地加入3N HCl溶液，將混合物在環(huán)境溫度下劇烈攪拌15分鐘。有機層用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并蒸發(fā)。將得到的油狀物用快速色譜法(5％EtOAc/己烷)純化得到5g的2-溴-5-三氟甲基苯甲醛。1H NMR(CDCl3)δ10.39(s，1H)，8.18(d，J＝I Hz，1H)，7.82(d，J＝8.8Hz，1H)，7.70(dd，J＝8.5Hz，2Hz，1H)。
在0℃向2-溴-5-(三氟甲基)苯甲醛(5g，20mmol)在THF(20mL)中的混合物中加入硼氫化鈉(0.8g，20mmol)。得到的混合物在0℃至環(huán)境溫度下攪拌1小時。通過加入NaHCO3水溶液淬滅反應。得到的溶液用EtOAc萃取兩次。合并的萃取液用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)、過濾并濃縮得到所需的醇，為白色固體(4.4g)。1H NMR(CDCl3)δ7.81(s，1H)，7.66(d，J＝8.3Hz，1H)，7.42(dd，J＝8.3Hz，2.0Hz，1H)，4.81(d，J＝6.3Hz，2H)，2.03(m，1H)。
步驟B1-溴-2-(氯甲基)-4-(三氟甲基)苯向[2-溴-5-(三氟甲基)苯基]甲醇(4.4g，17mmol)中加入亞硫酰氯(5mL)，得到的混合物在室溫下攪拌1小時。在真空下蒸發(fā)得到粗產(chǎn)物，為油狀物。1H NMR(CDCl3)δ7.77(d，J＝8.3Hz，1H)，7.73(d，J＝2.0Hz，1H)，7.53(dd，J＝8.5，2.2Hz，1H)，5.66(d，J＝12.7Hz，1H)，5.46(d，J＝12.2Hz)。
步驟C[2-溴-5-(三氟甲基)芐基]丙二酸二乙酯在0℃向丙二酸乙酯(23g，140mmol)在DMF(70mL)中的溶液中加入氫化鈉(3.9g，60％在礦物油中，97mmol)，得到的混合物在環(huán)境溫度攪拌30分鐘。向混合物中加入1-溴-2-(氯甲基)-4-(三氟甲基)苯(16g，60mmol)在DMF(20mL)中的溶液。反應混合物在室溫下攪拌3小時，用冰水淬滅。得到的溶液用EtOAc萃取兩次。萃取液用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)、過濾并濃縮。粗品用硅膠快速色譜法純化，用含3％EtOAc的己烷，然后用含5％EtOAc的己烷洗脫得到所需的產(chǎn)物(15.2g，64％)，為油狀物。LC/MS對于C15H16BrF3O4計算值(M+H)+397；實測值397.1/399.1。
步驟D3-[2-溴-5-(三氟甲基)苯基]丙酸向[2-溴-5-(三氟甲基)芐基]丙二酸二乙酯(22.9g，57.6mmol)在乙醇(100mL)和水(50mL)中的溶液中加入5M氫氧化鈉在水中的溶液(30mL)。混合物加熱回流2小時。蒸發(fā)除去乙醇。水層用醚萃取，然后用濃HCl酸化至pH 5，此時大量白色固體沉淀。過濾收集固體。濾液用乙酸乙酯萃取兩次，萃取液用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮得到白色固體。
將合并的固體通過在加熱至180℃的油浴中脫羧約1小時。將得到的黃色油狀物冷卻，在真空下泵吸得到所需的單酸(11.5g，67％)。LC/MS對于C10H8BrF3O2計算值(M+H)+297；實測值297.1/299.1。
步驟E5-(三氟甲基)茚-1-酮在-78℃向3-[2-溴-5-(三氟甲基)苯基]丙酸(2.8g，9.4mmol)在THF(100mL)和己烷(20mL)中的溶液中滴加2.5M在己烷(8.3mL)中的正丁基鋰溶液。在完成加入后，將反應用飽和NH4Cl淬滅。得到的溶液用乙酸乙酯萃取兩次。萃取液用飽和的NaHCO3和鹽水洗滌，MgSO4干燥并濃縮。粗品用硅膠快速色譜法純化，用含10-20％EtOAc的己烷洗脫得到所需的產(chǎn)物，為白色固體(0.7g，37％)。LCMS對于C10H7F3O計算值(M+H)+201；實測值201.1。
步驟F5-(三氟甲基)茚-1-醇向在冰浴冷卻的5-(三氟甲基)茚-1-酮(0.7g，3mmol)在THF(5mL)中的溶液中加入硼氫化鈉(0.1g，3mmol)，隨后加入MeOH(1mL)。在攪拌30分鐘后，用NaHCO3水溶液淬滅反應。得到的溶液用EtOAc萃取兩次。萃取液用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)、過濾并濃縮。粗品通過硅膠快速色譜法純化，用20％EtOAc/己烷洗脫得到所需的產(chǎn)物(0.65g，92％)，為油狀物。LC/MS對于C10H9F3O計算值(M+H)+203；實測值185.1(M+H-H2O)+。
步驟G4，6-二甲基-5-[(4-甲基-4-{(3S)-3-甲基-4-[5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)羰基]嘧啶以5-(三氟甲基)茚-1-醇為原料，按照在實施例7中描述的方法制備標題化合物。MS對于C28H36F3N5O計算值(M+H)+516；實測值516.2。
實施例91-((2S)-4-{1-[(4，6-二甲基嘧啶-5-基)羰基]-4-甲基哌啶-4-基}-2-甲基哌嗪-1-基)-5-(三氟甲基)茚-2-醇
步驟A6-(三氟甲基)-1H-茚將5-(三氟甲基)茚-1-醇(1.6g，7.9mmol)和對甲苯磺酸(0.02g，0.1mmol)在甲苯(20mL)中的混合物通過迪安分水器回流約3小時。在真空下濃縮溶液，殘余物通過硅膠快速色譜法純化，用5％EtOAc/己烷洗脫得到所需的產(chǎn)物，為油狀物(1.4g，96％)。
步驟B4-(三氟甲基)-6，6a-二氫-1aH-茚并[1，2-b]環(huán)氧乙烯在-78℃向6-(三氟甲基)-1H-茚(1.1g，6mmol)在無水二氯甲烷(80mL)中的溶液中加入5.5M叔丁基氫過氧化物在正癸烷中的溶液(1.3mL)，隨后加入四氯化鈦(0.79mL，7.2mmol)。在-78℃攪拌1小時后，將得到的棕色溶液用Et2O/飽和Na2SO3溶液的混合物淬滅。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌1小時得到無色溶液。分離有機層，用鹽水洗滌，MgSO4干燥并濃縮得到粗產(chǎn)物(1.2g)，為固體。LC/MS對于C10H7F3O計算值(M+H)+201；實測值201.0。
步驟C(3S)-4-[2-羥基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯將4-(三氟甲基)-6，6a-二氫-1aH-茚并[1，2-b]環(huán)氧乙烯(1.2g，6.0mmol)和(3S)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.4g，7.2mol)在乙醇(20mL)中的混合物回流過夜。再加入1g(3S)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯。將混合物轉(zhuǎn)移到密封燒瓶中，加熱至95℃ 2天。濃縮溶劑，殘余物通過快速色譜法純化，用含25％EtOAc的己烷洗脫，隨后用5％MeOH/EtOAc+0.5％濃NH4OH洗脫。分離出兩個異構體。異構體1(移動快的異構體)0.45g；MS對于C20H27F3N2O3的計算值(M+H)+401；實測值401.1。異構體2(移動慢的異構體)0.38g；MS實測值401.1。
步驟D1-((2S)-4-{1-[(4，6-二甲基嘧啶-5-基)羰基]-4-甲基哌啶-4-基}-2-甲基哌嗪-1-基)-5-(三氟甲基)茚-2-醇以(3S)-4-[2-羥基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(來自步驟C的異構體1)為原料，使用與在實施例7中描述的那些類似的方法制備標題化合物。MS對于C28H36F3N5O2計算值(M+H)+532；實測值532。
實施例105-[(4-{(3S)-4-[2-甲氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-4，6-二甲基嘧啶 步驟A(3S)-4-[2-甲氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯在0℃向(3S)-4-[2-羥基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(來自實施例9步驟C的異構體1)(50mg，0.1mmol)在THF(2mL)中的溶液中加入NaH(8mg，60％在油中，0.2mmol)。在攪拌10分鐘后，加入MeI(28mg，0.2mmol)。將混合物在環(huán)境溫度下攪拌1小時，用NH4Cl水溶液淬滅。得到的溶液用EtOAc萃取兩次。萃取液用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)、過濾并濃縮得到粗產(chǎn)物。LC/MS對于C21H29F3N2O3計算值(M+H)+415；實測值415.2。
步驟B(2S)-1-[2-甲氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-2-甲基哌嗪(3S)-4-[2-甲氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(51.8mg，0.125mmol)中加入4.0M氯化氫在二烷(2mL)中的溶液。將混合物在室溫下攪拌1小時，并在真空下濃縮得到標題化合物，為二鹽酸鹽。LC/MS對于C16H22ClF3N2O計算值(M+H)+351；實測值351.1。
步驟C4-{(3S)-4-[2-甲氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯向(2S)-1-[2-甲氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-2-甲基哌嗪鹽酸鹽(44mg，0.12mmol)和4-氧代-1-哌啶羧酸叔丁酯(25mg，0.12mmol)在二氯甲烷(2mL)中的混合物中，加入三乙胺(0.07mL，0.5mmol)，隨后加入四異丙氧基鈦(0.037mL，0.12mmol)。得到的混合物在室溫下攪拌過夜并濃縮得到粗品烯胺。
將粗品烯胺溶解在THF中，用在甲苯中的1.0M二乙基氰化鋁(0.15mL)處理。混合物在室溫下攪拌過夜，通過加入NaHCO3水溶液和EtOAc淬滅。得到的溶液通過硅藻土過濾。分離濾液，有機層用鹽水洗滌、干燥(MgSO4)、過濾并濃縮得到粗品氰基化合物。LC/MS523.2(M+H)+。
將粗品氰基化合物溶解在THF中，在0℃用3.0M甲基溴化鎂在醚中的溶液(0.2mL)處理?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時。加入另一份0.2mL的甲基溴化鎂溶液，將混合物在室溫下攪拌兩天。反應用NaHCO3水溶液淬滅，用EtOAc萃取兩次。萃取液用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)、過濾并濃縮。粗品通過硅膠快速色譜法純化，用含25％EtOAc的己烷，然后用含50％EtOAc的己烷洗脫得到標題化合物(25mg)。MS對于C27H40F3N3O3計算值(M+H)+512；實測值512.2。
步驟D5-[(4-{(3S)-4-[2-甲氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-4，6-二甲基嘧啶向4-{(3S)-4-[2-甲氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.02g，0.04mmol)中加入4.0M HCl在1，4-二烷中的溶液(2.0mL)。將得到的混合物在室溫下攪拌1小時，濃縮和在真空下泵吸至干燥。
向上述胺鹽酸鹽中加入DMF(2.0mL)、4，6-二甲基-嘧啶-5-甲酸(0.01g，0.08mmol)、苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷六氟磷酸鹽(0.026g，0.059mmol)和三乙胺(0.02mL，0.1mmol)。在室溫下攪拌過夜后，用NaHCO3水溶液淬滅反應，用EtOAc萃取兩次。萃取液用鹽水洗滌、干燥(MgSO4)、過濾并濃縮。粗品通過反相HPLC純化(含有0.05％TFA含10-80％乙腈的水，30分鐘，10ml/min)得到標題化合物(25mg)，為雙-TFA鹽。LC/MS對于C29H38F3N5O2計算值(M+H)+546；實測值546.2。
實施例115-[(4-(3S)-4-[(1R，2R)-2-乙氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-4，6-二甲基嘧啶二鹽酸鹽。
步驟A2-烯丙基-4-(三氟甲基)苯甲醛向配有高空攪拌、氮氣針頭、500mL加料漏斗、250mL加料漏斗和溫度計的烘箱干燥的5L 4-頸圓底燒瓶中，加入四氫呋喃(1400mL)和N，N，N′-三甲基乙烷-1，2-二胺(105mL，0.788mol)。將溶液冷卻至-40℃(干冰/MeCN浴)。正丁基鋰(1.6M在己烷中，510mL)加入到500mL加料漏斗中，然后經(jīng)40分鐘加入到上述溶液(-40至-35℃)中。無色溶液變成淺黃色。然后除去冷卻浴，將反應混合物攪拌30分鐘，同時升溫至-10℃的溫度。反應冷卻至-40至-45℃，通過注射器向250mL加料漏斗中加入對三氟甲基苯甲醛(77mL，0.56mol)。經(jīng)15分鐘滴加醛，同時保持反應溫度為-40至-35℃。在加料過程中反應變?yōu)樽厣?。?50至-40℃將反應攪拌30分鐘。通過加料漏斗經(jīng)50分鐘加入第二批的1.6M在己烷中的正丁基鋰(400mL)，使反應混合物升溫至-25℃，保持在-20至-30℃3小時，隨后通過粉末加料漏斗直接加入溴化亞銅(I)(108g，0.738mol)。除去冷卻浴，將反應升溫并再攪拌90分鐘。將反應冷卻至-30至-25℃，經(jīng)40分鐘通過250mL加料漏斗分批滴加在四氫呋喃(240mL)中的烯丙基溴化物(78mL，0.90mol)的溶液。在攪拌2小時后，通過加入甲醇(100.0mL)淬滅反應。除去冷卻浴，將混合物攪拌5分鐘后，隨后加入6.00M的鹽酸溶液(300.0mL)(pH＝～7)。將混合物再攪拌15分鐘后，通過硅藻土層，硅藻土層用醚洗滌。加入飽和的氯化銨(400mL)，收集有機相。水相進一步用300mL醚萃取。將合并的有機相用400ml飽和的氯化銨(400mL)、1M碳酸氫鈉(3×400mL)和鹽水(400mL)洗滌，硫酸鎂干燥。過濾除去干燥劑后，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮濾液得到棕色液體。進一步通過蒸餾純化得到105.4g(85％)的產(chǎn)物。1H NMR(400MHz、CDCl3)δ(ppm)10.22(s，1H)，8.02(d，1H)，7.80(d，1H)，7.74(s，1H)，6.02(m，1H)，5.06(m，1H)，4.96(m，1H)，3.89(d，2H)。
步驟B2-烯丙基-4-(三氟甲基)-1-乙烯基苯將三苯基甲基溴化物(182g，0.508mol)懸浮在乙醚(900mL，8mol)中，冷卻至0℃。通過注射器快速加入正丁基鋰(1.60M在己烷中，289mL)，得到的混合物升溫至室溫，攪拌過夜(18小時)。停止攪拌讓固體沉降，通過管子將上層清液轉(zhuǎn)移到2-烯丙基-4-(三氟甲基)苯甲醛(99.0g，0.462mol)在二氯甲烷(900mL)中的溶液中，將其在0℃攪拌。加入后，除去冰浴，將混合物加熱至回流約30小時。在冷卻至室溫后，濃縮橙色溶液直至剩余少量溶劑。向攪拌的溶液中加入硅膠直至得到漿液。加入戊烷(500mL)，析出更多的固體。使用戊烷(1.5L)將混合物通過在熔融玻璃的真空漏斗中的硅膠過濾。將戊烷溶液收集在3L圓底燒瓶中。然后濃縮該接近無色的液體得到純的二烯(78g，79.3％)；H NMR(400MHz、CDCl3)δ(ppm)7.58(d，1H)，7.45(d，1H)，7.41(s，1H)，6.95(dd，1H)，5.95(m，1H)，5.72(d，1H)，5.41(d，1H)，5.11(d，1H)，5.00(d，1H)，3.48(d，2H)。
步驟C6-(三氟甲基)-1H-茚將二氯甲烷(0.6L)加入到含有2-烯丙基-4-(三氟甲基)-1-乙烯基苯(80.0g，0.377mol)的1L燒瓶中。將雙(三環(huán)己基膦)benzylidine釕(IV)二氯化物(Grubbs催化劑，第一代)(3.1g，0.0038mol)加入到該溶液中，將得到的溶液回流過夜(18小時)。蒸發(fā)溶劑得到黑色油狀物，使用戊烷將其通過硅膠短柱。在小心地除去戊烷后，收集純產(chǎn)物57g(82.8％)，為微棕色油狀物。1H NMR(400MHz、CDCl3)δ(ppm)7.72(s，1H)，7.55(d，1H)，7.48(d，1H)，6.93(m，1H)，6.74(m，1H)，3.46(brs，1H)。
步驟D4-(三氟甲基)-6，6a-二氫-1aH-茚并[1，2-b]環(huán)氧乙烯在0℃向2M次氯酸鈉在水(200mL)中的溶液中加入氫氧化鈉水溶液(1M，40mL)、4-(3-苯基丙基)吡啶N-氧化物(6.0g，0.03mol)和(S，S)-(+)-N，N′-雙(3，5-二叔丁基水楊亞基)-1，2-環(huán)己烷二氨基錳(III)氯化物(4.13g，0.00651mol)在二氯甲烷(700mL)中的溶液。在0℃將得到的棕色溶液攪拌15分鐘。向該冷卻的溶液中，加入6-(三氟甲基)-1H-茚(51g，0.24mol)在二氯甲烷(700mL)中的溶液，同時加入次氯酸鈉(2M，200mL)水溶液。將反應保持在0℃，在加入茚時棕色溶液保持相同的顏色。4小時后，收集有機相，硫酸鈉干燥。使用戊烷將混合物通過硅膠短柱。在除去溶劑后，得到42g(88％，84％ee)的環(huán)氧化物。1H NMR(400MHz、CDCl3)δ(ppm)7.72(s，1H)，7.55(d，1H)，7.48(d，1H)，6.93(m，1H)，6.74(m，1H)，3.46(brs，1H)。
步驟E(2S)-1-芐基-2-甲基哌嗪將(3S)-3-甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(380.0g，1.897mol)和溴化芐(248mL，2.09mol)在乙腈(440mL)中混合。小心地加入三乙胺(300.0mL，2.152mol)，混合物回流過夜。在混合物冷卻至室溫后，過濾出固體。濃縮濾液。將殘余物與固體合并，溶解在二氯甲烷中。二氯甲烷溶液用1N NaOH洗滌，硫酸鎂干燥。在除去溶劑后，在0℃直接用6N HCl處理殘余物，3小時后，將溶液通過緩慢加入固體氫氧化鈉堿化。將得到的混合物用二氯甲烷萃取，萃取液用硫酸鎂干燥。在除去溶劑后，得到330g(91.4％)的產(chǎn)物。將產(chǎn)物直接用于下一步驟。1H NMR(400MHz、CDCl3)δ(ppm)7.30(m，5H)，4.05(d，1H)，3.15(d，1H)，2.92(m，1H)，2.83(m，2H)，2.67(m，1H)，2.60(m，1H)，2.38(m，1H)，2.36(bs，2H)，2.06(m，1H)，1.14(d，3H)。MS(EI)191.1(M+1)。
步驟F4-[(3S)-4-芐基-3-甲基哌嗪-1-基]-4-氰基哌啶-1-羧酸叔丁酯。
在5L燒瓶中，將(2S)-1-芐基-2-甲基哌嗪(260.0g，1.366mol)、二氯甲烷(1000mL)、4-氧代-1-哌啶羧酸叔丁酯(272g，1.37mol)和四異丙氧基鈦(480.0mL，1.626mol)混合，將混合物在室溫下攪拌20小時。將混合物冷卻至0℃，滴加在甲苯中的二乙基鋁氰化物(1.0M，1600mL)。將得到的混合物在室溫下攪拌20小時。然后將反應內(nèi)容物分開放入兩個5L燒瓶中，向每個燒瓶中，加入1L的乙酸乙酯、500g的碳酸氫鈉、150g的硅藻土，然后使用干冰/乙腈將它們冷卻至-40℃。然后向每個燒瓶中，在劇烈攪拌下緩慢加入200mL的飽和的硫酸鈉水溶液。在反應混合物緩慢升溫至室溫后，攪拌4小時，向每個燒瓶中加入1L的甲醇。在攪拌過夜后，將反應混合物通過薄砂層過濾。將濾餅放回5L燒瓶中，與3L的甲醇攪拌5小時，過濾除去不溶的固體。將合并的濾液濃縮至干燥，加入3L的二氯甲烷。過濾除去不溶的固體。將濾液用硫酸鎂干燥，除去溶劑得到484g(88.9％)的產(chǎn)物，為淺黃色固體。粗產(chǎn)物基本上是純的，在下一步中直接使用。1HNMR(400MHz、CDCl3)δ(ppm)7.32(m，5H)，4.04(d，1H)，3.95(brs，2H)，3.15(d，1H)，3.15(brs，2H)，2.82(m，1H)，2.73(m，2H)，2.44(m，2H)，2.25(t，1H)，2.15(m，1H)，2.05(m，1H)，1.66(m，1H)，1.46(s，9H)，1.17(d，3H)；MS(EI)399.2(M+1)。
步驟G4-[(3S)-4-芐基-3-甲基哌嗪-1-基]-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯使用干冰/乙腈將在5L燒瓶中的4-[(3S)-4-芐基-3-甲基哌嗪-1-基]-4-氰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(242g，0.605mol)在四氫呋喃(1.5L)中的溶液冷卻至-40℃。緩慢加入在四氫呋喃中的甲基溴化鎂(3.0M在四氫呋喃中，800mL)。加入后，將反應混合物緩慢升溫至室溫，并攪拌過夜。在使用干冰/乙腈冷卻至-40℃后，加入硅藻土(200g)，然后小心地加入乙酸乙酯(500mL)。加入后，將混合物攪拌4小時，同時溫度緩慢升至室溫。將反應混合物再次冷卻回-40℃，加入水(200mL)，然后加入甲醇(1.5L)。在室溫下攪拌過夜后，將混合物通過薄砂層過濾。將濾餅放回5L燒瓶中，與甲醇(2L)攪拌5小時。過濾除去不溶固體。將合并的濾液濃縮至干燥。加入二氯甲烷(3.5L)。過濾除去不溶固體。濾液用硫酸鎂干燥。在除去溶劑后，得到436g(92.6％)的產(chǎn)物，為白色粘稠固體。粗產(chǎn)物基本上為純的，在下一步驟中直接使用。MS(EI)388.3(M+1)。
步驟H4-甲基-4-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯在2.25L帕爾瓶中的4-[(3S)-4-芐基-3-甲基哌嗪-1-基]-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(45.5g，0.118mol)在甲醇(320mL)和乙酸(35mL，～5當量)中的溶液中充入H2至60psi，將混合物振搖18小時。將反應混合物通過一層硅藻土過濾，用甲醇洗滌濾墊。在真空下濃縮濾液。將殘余的油狀物溶解在DCM(500mL)中，用氫氧化鈉水溶液(300mL)洗滌。水相用二氯甲烷(200mL)萃取回去。合并的有機溶液用鹽水(500mL)洗滌，硫酸鈉干燥，在真空下除去溶劑得到35g(100％)的產(chǎn)物，為淡黃色粘稠油狀物，其緩慢結晶。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ(ppm)3.44(m，2H)，3.36(m，2H)，2.97(dt，1H)，2.84(dd，1H)，2.78(m，1H)，2.71(brd，2H)，2.16(dt，1H)，1.81(t，2H)，1.76(m，1H)，1.45(s，9H)，1.34(m，3H)，1.03(d，3H)，0.90(s，3H)；MS(EI)298.2(M+1)。
步驟I4-(3S)-4-[(1R，2R)-2-羥基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯[(1R)-7，7-二甲基-2-氧代二環(huán)[2.2.1]庚-1-基]甲烷磺酸鹽將(1aS，6aR)-4-(三氟甲基)-6，6a-二氫-1aH-茚并[1，2-b]環(huán)氧乙烯(118.4g，0.5917mol)和4-甲基-4-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁基酯(160.00g，0.53793mol)在乙醇(100mL)中的混合物在70℃(油浴溫度)加熱兩天。濃縮混合物，使用含有1％三乙胺的乙酸乙酯將殘余物通過硅膠短柱。在除去溶劑后，得到267.67g的泡沫狀固體。向該固體中加入乙腈(500mL)，將混合物攪拌30分鐘。向上述混合物中，一次加入固體[(1R)-7，7-二甲基-2-氧代二環(huán)[2.2.1]庚-1-基]甲烷磺酸(124.96g，0.53793mol)。溶液緩慢變得澄清，然后突然開始出現(xiàn)白色固體。在攪拌過夜后，過濾收集固體，用乙腈洗滌，干燥得到232g的產(chǎn)物。中和濾液并濃縮，在殘余物中完成類似的成鹽處理得到另外的74g的產(chǎn)物。合并的收率是70％。MS(EI)498.2(M+1)。
步驟J4-(3S)-4-[(1R，2R)-2-羥基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯將4-(3S)-4-[(1R，2R)-2-羥基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯[(1R)-7，7-二甲基-2-氧代二環(huán)[2.2.1]庚-1-基]甲烷磺酸鹽(512g，0.701mol)溶解在1M氫氧化鈉水溶液(1L)中，將溶液用二氯甲烷(2×2L)萃取。合并的有機層用硫酸鎂干燥并濃縮。在高真空下將殘余物進一步干燥得到的灰白色泡沫狀物固體(346g.99.1％)。MS(EI)498.2(M+1)。
步驟K4-(3S)-4-[2-乙氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯在0℃將氫化鈉(5.225g，0.1306mol)與干燥的DMF(150mL)混合。在0℃經(jīng)20分鐘滴加4-(3S)-4-[2-羥基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(50.0g，0.1005mol)在DMF(100mL)中的溶液。加入后，將混合物再攪拌20分鐘，一次加入碘乙烷(12.06mL，0.1507mol)。在攪拌1小時后，將反應物質(zhì)小心地傾入到500mL冰水中。將混合物用二氯甲烷(500mL×3)萃取。用鹽水洗滌合并的有機層，硫酸鎂干燥。在除去溶劑后，殘余物溶解在二氯甲烷中，用乙酸乙酯/己烷/三乙胺50∶50∶1通過硅膠短柱(將短柱用相同的溶劑系統(tǒng)預飽和)。在除去溶劑后，得到48.4g(91.6％)的產(chǎn)物，為粘性的固體，MS(EI)526.2(M+1)。
步驟L5-[(4-(3S)-4-[(1R，2R)-2-乙氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-4，6-二甲基嘧啶二鹽酸鹽在室溫下將4-(3S)-4-[2-乙氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(48.4g，0.0921mol)用4.0M氯化氫在1，4-二烷(230mL)中的溶液處理1小時。將反應混合物濃縮至干燥，在高真空下將殘余物進一步干燥。將得到的胺鹽酸鹽與4，6-二甲基-嘧啶-5-羧酸(16.8g，0.110mol)在二氯甲烷(100mL)中混合，然后加入1-羥基苯并三唑(16.80g，0.1243mol)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(25.00g，0.1304mol)和三乙胺(65.0mL，0.466mol)。將得到的反應混合物在室溫下攪拌過夜，隨后用二氯甲烷稀釋，用氫氧化鈉水溶液(1M)和鹽水洗滌。收集有機層并用硫酸鎂干燥。在除去溶劑后，將殘余物溶解在二氯甲烷(50mL)中，將溶液通過硅膠短柱用含有1％三乙胺的乙酸乙酯過濾。濃縮溶液并將殘余物溶解在900mL的乙酸異丙酯中。向上述溶液中，緩慢加入185mL的含1.0N HCl乙酸異丙酯?；旌衔锞徛兊没鞚?，攪拌過夜。收集得到的白色固體，用40mL的乙酸異丙酯洗滌?？諝飧稍餅V餅得到47.0g(80.7％)的產(chǎn)物。MS(EI)560.3(M+1)。
實施例125-[(4-{(3S)-4-[(1R，2R)-2-(2-甲氧基乙氧基)-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-4，6-二甲基嘧啶使用適當?shù)脑?，基本上按照實施?1描述的方法制備該化合物。MS(M+H)+590。
實施例134-[(4-{(3S)-4-[(1S，2R)-2-乙氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]噌啉使用適當?shù)脑?，基本上按照實施?1描述的方法制備該化合物。MS(M+H)+582.4。
實施例144-[(4-{(3S)-4-[(1R，2R)-2-乙氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]喹啉使用適當?shù)脑?，基本上按照實施?1描述的方法制備該化合物。MS(M+H)+581.4。
實施例155-[(4-{(3S)-4-[(1R，2R)-2-乙氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]喹啉使用適當?shù)脑希旧习凑諏嵤├?1描述的方法制備該化合物。MS(M+H)+581.4。
實施例164-[(4-{(3S)-4-[(1R，2R)-2-乙氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-1，8-萘啶使用適當?shù)脑希旧习凑諏嵤├?1描述的方法制備該化合物。MS(M+H)+582.4。

實施例175-[(4-{(3S)-4-[(1R，2R)-2-乙氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]異喹啉使用適當?shù)脑?，基本上按照實施?1描述的方法制備該化合物。MS(M+H)+581.4。
實施例185-[(4-{(3S)-4-[(1R，2R)-5-溴-2-乙氧基-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-4，6-二甲基嘧啶 步驟A6-溴-1H-茚將5-溴茚-1-醇(5.00g，23.5mmol)和對甲苯磺酸單水合物(100mg，0.5mmol)在苯(150.00mL)中的溶液加熱回流2小時，用迪安分水器從反應混合物連續(xù)除去水。在冷卻至室溫后，用水洗滌苯溶液，無水Na2SO4干燥并在減壓下濃縮。通過快速色譜法(己烷)純化殘余物得到純的5-溴茚(4.0g，87％)。
步驟B4-溴-6，6a-二氫-1aH-茚并[1，2-b]環(huán)氧乙烯在0℃向4-(3-苯基丙基)吡啶N-氧化物(68.88mg，0.323mmol)在二氯甲烷(6.00mL)中的溶液中加入(S，S)-(+)-N，N′-雙(3，5-二叔丁基水楊基亞基)-1，2-環(huán)己烷二氨基-錳(III)氯化物(58.62mg，0.09.23mmol)和2.0M的在水(4.00mL)中的次氯酸鈉。將得到的棕色懸浮液在0℃攪拌15分鐘。在0℃向該冷卻的懸浮液中加入6-溴-1H-茚(900mg，4.6141mmol)在二氯甲烷(6.00mL)中的溶液，同時在0℃加入2.0M的在水(4.00mL)中的次氯酸鈉。將反應在0℃保持1小時。將反應升溫至室溫，然后在室溫下攪拌過夜。將反應混合物傾入到鹽水中，然后用二氯甲烷萃取(4×40mL)。將合并的萃取液用無水Na2SO4干燥、過濾并在減壓下蒸發(fā)。粗產(chǎn)物在下一步反應中直接使用。兩個非對映異構體的比率為8/1。
步驟C4-{(3S)-4-[(1R，2R)-5-溴-2-羥基-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯向4-溴-6，6a-二氫-1aH-茚并[1，2-b]環(huán)氧乙烯(247.9mg，1.1746mmol)在乙醇(10.00mL)中的溶液中，加入4-甲基-4-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(349.36mg，1.1746mmol)。將反應混合物加熱回流過夜。在冷卻后，在減壓下將混合物蒸發(fā)。用50％乙酸乙酯(1％NH4OH)和己烷在硅膠上純化，得到快速移動的產(chǎn)物，為所需的化合物(295mg；49.4％)。
步驟D4-{(3S)-4-[(1R，2R)-5-溴-2-乙氧基-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯在室溫下向4-{(3S)-4-[(1R，2R)-5-溴-2-羥基-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(564mg，1.1mmol)在四氫呋喃(20.00mL)中的溶液中加入氫化鈉(448mg，17.75mmol)。在攪拌10分鐘后，加入碘乙烷(1.42mL，17.75mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜，用飽和的氯化銨水溶液(20mL)淬滅。分離有機層，用乙酸乙酯(3×30mL)萃取水相。合并的萃取液用鹽水洗滌，無水Na2SO4干燥、過濾和在減壓下蒸發(fā)得到粗產(chǎn)物(488mg，82％)。LC-MS[M+1]＝536.3，538.8。
步驟E(2S)-1-[(1R，2R)-5-溴-2-乙氧基-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-2-甲基-4-(4-甲基哌啶-4-基)哌嗪三鹽酸鹽向4-{(3S)-4-[(1R，2R)-5-溴-2-乙氧基-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(50mg，0.093mmol)在四氫呋喃(3mL)中的溶液中，加入4.00M氯化氫在1，4-二烷(3mL)中的溶液。將反應混合物在室溫下攪拌1小時。在減壓下蒸發(fā)得到所需的脫-Boc產(chǎn)物。
步驟F5-[(4-{(3S)-4-[(1S，2R)-5-溴-2-乙氧基-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-4，6-二甲基嘧啶向(2S)-1-[(1R，2R)-5-溴-2-乙氧基-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-2-甲基-4-(4-甲基哌啶-4-基)哌嗪三鹽酸鹽(50mg，0.0916mmol)在二氯甲烷(6mL)中的漿液中加入4，6-二甲基-嘧啶-5-羧酸(27.88mg，0.183mmol)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(21.07mg，0.11mmol)、1-羥基苯并三唑(13.62mg，0.101mmol)和三乙胺(0.0894mL，0.641mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌過夜。直接硅膠色譜法用10％MeOH/EtOAc(1％NH4OH)得到所需的產(chǎn)物(42mg，80％)。LC-MS[M+1]＝570.10；572.05。
實施例194-[(4-{(3S)-4-[(1R，2R)-5-溴-2-乙氧基-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]噌啉使用適當?shù)脑?，基本上按照實施?8描述的方法制備該化合物。MS(M+H)+592.3，594.3。
實施例204-[(4-{(3S)-4-[(1R，2R)-5-溴-2-乙氧基-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-1，8-萘啶使用適當?shù)脑?，基本上按照實施?8描述的方法制備該化合物。MS(M+H)+592.3，594.3。

實施例215-[(4-{(3S)-4-[(1R，2R)-5-溴-2-(吡啶-2-基氧基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-4，6-二甲基嘧啶使用適當?shù)脑?，基本上按照實施?8描述的方法制備該化合物。MS(M+H)+619.3，621.3。
實施例225-[(4-{(3S)-4-[(1R，2R)-2-乙氧基-5-(1，3-噻唑-2-基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-4，6-二甲基嘧啶 步驟A[(5-溴-2，3-二氫-1H-茚-1-基)氧基](叔丁基)二甲基硅烷在室溫下向5-溴茚-1-醇(4.00g，18.8mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(25.00mL)中的溶液中加入三乙胺(5.23mL，37.5mmol)、叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(4.244g，28.16mmol)和4-二甲基氨基吡啶(115mg，0.939mmol)。反應混合物在室溫下攪拌3小時?；旌衔镉妹?100mL)稀釋，用水淬滅。用醚(4×40mL)萃取水相。將合并的萃取液用鹽水洗滌、無水Na2SO4干燥、過濾和在減壓下蒸發(fā)。硅膠色譜法，用5％EtOAc/己烷洗脫得到所需的產(chǎn)物(6.05g，98％)。
步驟B2-(1-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2，3-二氫-1H-茚-5-基)-1，3-噻唑向攪拌下的鋅(899mg，13.75mmol)在四氫呋喃(1.60mL)中的懸浮液中加入1，2-二溴乙烷(0.118mL，1.37mmol)。將懸浮液用加熱棒加熱直至沒有乙烯放出。加入三甲基氯硅烷(0.0698mL，0.55mmol)和2-溴噻唑(0.413mL，4.58mmol)在四氫呋喃中的溶液。在15分鐘后，將溶解在四氫呋喃(8.00mL)中的[(5-溴-2，3-二氫-1H-茚-1-基)氧基](叔丁基)二甲基硅烷(1.0g，3.055mmol)和四(三苯基膦)鈀(0)(70.6mg，0.0611mmol)加入。將混合物回流下攪拌24小時，用15mL的鹽水淬滅。分離有機層，水相用二氯甲烷(25mL×3)萃取。將合并的萃取液用鹽水洗滌，無水Na2SO4干燥，在減壓下蒸發(fā)。硅膠色譜法用2.5％EtOAc/己烷得到所需的偶合產(chǎn)物(800mg，79％)。
步驟C5-(1，3-噻唑-2-基)茚-1-醇在0℃向2-(1-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}-2，3-二氫-1H-茚-5-基)-1，3-噻唑(630mg，1.9mmol)在四氫呋喃(10.00mL)中的溶液中加入1.00M四丁基氟化銨物三水合物在四氫呋喃(1.90mL)中的溶液。除去冰浴，將反應混合物在室溫下攪拌1小時?；旌衔镉妹严♂專蔑柡偷腘aCl水溶液洗滌，無水MgSO4干燥，過濾和在減壓下蒸發(fā)得到所需的產(chǎn)物(410mg，99％)。
步驟D2-(1H-茚-6-基)-1，3-噻唑向5-(1，3-噻唑-2-基)茚-1-醇(900.00mg，0.0041420mol)在四氫呋喃(20.00mL)中的溶液中加入1.0M鹽酸水溶液(20.00mL)。反應混合物加熱至回流過夜。在冷卻至室溫后，用30mL的1N NaOH水溶液淬滅反應。分離有機層，水相用EtOAc(3×30mL)萃取。合并的萃取液用鹽水洗滌，無水MgSO4干燥，過濾并在減壓下蒸發(fā)得到所需的產(chǎn)物(381mg，46％)。LC-MS[M+1]＝200.2。
步驟E5-[(4-{(3S)-4-[(1R，2R)-2-乙氧基-5-(1，3-噻唑-2-基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-4，6-二甲基嘧啶以步驟D的中間體為原料，使用實施例18中所述類似的方法制備標題化合物。MS(M+H)575.2。
實施例235-[(4-{(3S)-4-[(1R，2R)-2-乙氧基-5-吡啶-2-基-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-4，6-二甲基嘧啶以與實施例22類似的方法制備標題化合物，MS(M+H)569.3。
實施例245-[(4-{(3S)-4-[3-甲氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-4，6-二甲基嘧啶
步驟A5-(三氟甲基)-3-乙烯基-1，3-二氫-2-苯并呋喃-1-醇在-40℃向N，N，N′-三甲基-1，2-乙烷二胺(4.76mL，37.4mmol)在四氫呋喃(150.00mL)中的溶液中加入1.6M正丁基鋰在己烷(25.7mL)中的溶液。無色溶液變成淺黃色。除去冷卻浴，將反應攪拌30分鐘，同時升溫至-15℃。將反應再次冷卻至-40℃，加入4-三氟甲基苯甲醛(5.00mL，37.4mmol)。將反應在-50℃攪拌35分鐘，隨后第二次加入1.60M正丁基鋰在己烷中的溶液。將反應升溫至-25℃，保持在-25℃2小時，此時加入丙烯醛(2.75mL，41.2mmol)。將反應混合物攪拌過夜，通過加入30mL的6N HCl水溶液淬滅。分離有機層，水相用EtOAc萃取兩次(2×30mL)。用鹽水洗滌合并的萃取液，Na2SO4干燥，在真空下蒸發(fā)，通過快速色譜法純化得到所需的產(chǎn)物(2.4g，28％產(chǎn)率)。LC-MS[M+1]＝231.2。
步驟B1-[5-(三氟甲基)-2-乙烯基苯基]丙-2-烯-1-醇將三苯基甲基溴化磷(1.71g，4.78mmol)溶解在醚(20.00mL)中。在冷卻至0℃后，通過注射器快速加入1.60M正丁基鋰在己烷(2.72mL)中的溶液，將得到的橙色混合物升溫至室溫和攪拌過夜。停止攪拌使固體沉降，然后在0℃伴隨著攪拌下通過導管將葉立德轉(zhuǎn)移到5-(三氟甲基)-3-乙烯基-1，3-二氫-2-苯并呋喃-1-醇(1.00g，4.34mmol)在醚(10.00mL)中的溶液中。加入后，除去冰浴，混合物加熱至回流過夜。冷卻反應，然后過濾固體，用小量的醚洗滌。蒸發(fā)大部分的溶劑，將粗產(chǎn)物負載到硅膠上，用己烷/EtOAc(10∶1)洗脫得到所需的產(chǎn)物(0.81g，82％)，LC-MS[M+1]＝229.2。
步驟C6-(三氟甲基)-1H-茚-1-醇在氮氣氛下向1-[5-(三氟甲基)-2-乙烯基苯基]丙-2-烯-1-醇(462mg，2.02mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入benzylidene-雙(三環(huán)己基膦)二氯釕(70mg，0.08mmol)。將該黑色混合物在25℃攪拌30分鐘并濃縮。殘余物通過快速色譜法純化得到所需的化合物(278.1mg，68％)。LC-MS[M+1]＝279.2。
步驟D6-(三氟甲基)-1H-茚-1-酮向氯鉻酸吡啶鹽(1.08g，5.0mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液中滴加6-(三氟甲基)-1H-茚-1-醇(500mg，2.498mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液。在攪拌14小時后，加入醚(30mL)，反應混合物通過硅膠過濾。在真空下濃縮濾液。粗品經(jīng)色譜法(10∶1己烷/EtOAc)得到200mg(40％)的產(chǎn)物。LC-MS[M+1]＝199.2。
步驟E4-甲基-4-{3-甲基-4-[3-氧代-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]哌嗪-1-基}哌啶-1-羧酸叔丁酯在攪拌下將6-(三氟甲基)-1H-茚-1-酮(100mg，0.505mmol)和4-甲基-4-(3-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(420mg，1.412mmol)在四氯化碳(8.00mL)中的溶液在60℃加熱18小時。在蒸發(fā)溶劑后，殘余物在硅膠上純化得到兩個非對映異構體(3/1比率)。產(chǎn)率180mg(72％)。LC-MS[M+1]＝496.4。
步驟F4-{(3S)-4-[3-羥基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯向4-甲基-4-{3-甲基-4-[3-氧代-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]哌嗪-1-基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(100mg，0.202mmol)在乙醇(7mL)中的溶液中加入硼氫化鈉(57mg，1.5mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌2小時。在真空下蒸發(fā)溶劑，用10mL的1N NaOH水溶液和10mL的EtOAc淬滅殘余物。分離有機相，水層用EtOAc萃取兩次(2×15mL)。將合并的萃取液用鹽水洗滌，Na2SO4干燥，在減壓下蒸發(fā)得到所需的產(chǎn)物，直接用于下一步驟(93mg，92％)。LC-MS[M+1]＝498.4。
步驟G4-{(3S)-4-[3-甲氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯向氫化鈉(150mg，3.75mmol)在四氫呋喃(15mL)中的懸浮液中加入4-{4-[3-羥基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(92mg，0.185mmol)在四氫呋喃(5mL)中的溶液。將反應混合物在室溫下攪拌1小時，加入碘甲烷(0.50mL，8.05mmol)。將反應在室溫下連續(xù)攪拌過夜，通過加入10mL的水和10mL的EtOAc淬滅。分離有機相，水層用EtOAc萃取兩次(2×15mL)。用鹽水洗滌合并的萃取液，Na2SO4干燥，在減壓下蒸發(fā)得到粗產(chǎn)物(81mg，85％)，直接使用于下一步驟。LC-MS[M+1]＝511.3。
步驟H5-[(4-{(3S)-4-[3-甲氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-4，6-二甲基嘧啶將4-{4-[3-甲氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-羧酸叔丁酯(85mg，0.166mmol)溶解在4.00M氯化氫在1，4-二烷(2mL)中的溶液中。將混合物攪拌1小時，濃縮至干燥并在真空下泵吸。
在0℃向4，6-二甲基-嘧啶-5-羧酸(50.6mg，0.333mmol)在乙腈(4mL)中的漿液中，加入一滴DMF(用作催化劑)，隨后加入草酰氯(0.028mL，0.333mmol)。將得到的漿液在室溫下攪拌2小時。在0℃在三乙胺(0.139mL，0.998mmol)存在下將反應混合物加入到上述胺鹽酸鹽在乙腈(4mL)中的溶液中。得到的漿液在45-50℃加熱6小時，在80℃加熱3小時。直接硅膠色譜法得到所需的產(chǎn)物(71mg，78％)。LC-MS[M+1]＝546.3。
實施例245-[(4-{(3S)-4-[3-乙氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-4，6-二甲基嘧啶以與實施例23類似的方法制備標題化合物。MS(M+H)560.2。
實施例ACCR5表達白細胞單采術(Biological Specialty，Colmar，PA)在正常的無藥物的受體上獲得，外周血單核細胞(PBMCs)通過密度梯度離心法分離。通過離心淘析進一步分離單細胞。洗滌后，將單細胞再次以106細胞/ml懸浮在補充有10％FBS(Hyclone，Logan，UT)和10-20ng/mL的重組人IL-10(R&D systems，Minneapolis，MN)的RPMI(Invitrogen，Carlsbad，CA)中，在相同的介質(zhì)中在37℃5％CO2下培養(yǎng)24-48小時。然后通過用PE-軛合的抗人CCR5抗體((PharMingen，San Diego，CA)染色細胞，隨后通過使用FACSCalibur(BD Biosciences，Bedford，MA)進行FACS分析驗證CCR5在IL-10處理的單細胞上的表達。
實施例BCCR5結合分析在96孔MultiScreenTM過濾板(Millipore Systems，Billerica，MA)中，將在含有20mM HEPES(Invitrogen，Carlsbad，CA)和0.3％BSA(Sigma，St Louis，MO)的150μL RPMI(Invitrogen，Carlsbad，CA)中3×105IL-10處理的單細胞，與0.2nM125I-MIP-Iβ(PerkinElmer，Boston，MA)和系列濃度的本發(fā)明的化合物一起在室溫下培養(yǎng)1小時。通過將細胞與0.3μM MEP-1β(R&D Systems，Minneapolis，MN)一起培養(yǎng)測定非特異性結合。通過將細胞在真空歧管(MilliporeSystems，Billerica，MA)上收集到板中的過濾器中終止結合反應。用補充有20mM HEPES(Invitrogen，Carlsbad，CA)、0.3％BSA(Sigma，St Louis，MO)和0.4M NaCl的RPMI(Invitrogen，Carlsbad，CA)在真空歧管上洗滌過濾器5次，空氣干燥，從板中剝落。使用MilliporePunch System(Millipore Systems，Billerica，MA)將在過濾板上與樣品孔相應的過濾盤沖壓出來。在每個過濾盤中結合放射性活性的量通過γ計數(shù)器計數(shù)確定。特異性結合定義為總結合減去非特異性結合。使用Prism(GraphPad Software，San Diego，CA)評價結合數(shù)據(jù)。根據(jù)本分析發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物具有約1μM或更小的結合親和性。
實施例CHIV-1侵入分析通過共同轉(zhuǎn)染編碼NL4-3種系的HIV-1(其曾通過突變包膜基因和引入熒光素酶報告質(zhì)粒而被修飾)的質(zhì)粒以及編碼例如Connor等，Virology，206(1995)，935-944描述的幾種HIV-1包膜基因的質(zhì)粒，產(chǎn)生復制缺陷HIV-1報告病毒。在兩種質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后，磷酸鈣沉淀，在第3天收獲病毒上清液，滴定測定功能病毒。然后將該批用于穩(wěn)定表達CD4和趨化因子受體CCR5的感染U87細胞，其已經(jīng)與試驗化合物預先培養(yǎng)或者沒有與試驗化合物預先培養(yǎng)。在37℃2小時完成感染，洗滌細胞，介質(zhì)用含有化合物的新鮮介質(zhì)替換。細胞培養(yǎng)3天，溶解，測定熒光素酶活性。結果報導為在對照培養(yǎng)中抑制50％的熒光素酶活性要求的化合物濃度。
實施例D在MT-4細胞中HIV-1復制分析抑制HIV-1NL4.3(或IIIB)復制分析可以按照以前的描述(Bridger，等，J.Med.Chem.423971-3981(1999)；De Clercq，等，Proc.Natl.Acad.Sci.895286-5290(1992)；De Clercq，等，Antimicrob.Agents Chemother.38668-674(1994)；Bridger，等，J.Med.Chem.38366-378(1995))完成?？傊?，平行完成抗-HIV活性和細胞毒性測定，基于MT-4細胞的生存能力，將其在各種的濃度試驗化合物存在下用HIV感染。在MT-4細胞增生5天后，能養(yǎng)活細胞的數(shù)量在96-孔微盤中通過基于四唑的量熱法3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑溴化物(MTT)方法定量。結果可以定量得到EC50值，該值代表對抗病毒致病保護50％病毒感染細胞要求的濃度。
實施例E趨化因子受體抑制/結合分析本發(fā)明化合物拮抗趨化因子受體(例如CCR2)功能的能力可以使用合適的篩選(例如高通量分析)確定。例如，可以在細胞外酸化分析、鈣流出分析、配體結合分析或趨化現(xiàn)象分析(參見例如Hesselgesser等，J Biol.Chem.273(2S)15687-15692(1998)；WO 00/05265和WO 98/02151，每個均以其全部內(nèi)容在此引入作為參考)中試驗物質(zhì)。
在實施例分析中，使用可以被分離或重組得到的趨化因子受體，其具有哺乳動物趨化因子受體的至少一種性質(zhì)、活性或功能。特定的性質(zhì)可以為結合性質(zhì)(例如配體或抑制劑)、信號活性(例如哺乳動物G蛋白的活化，快速和短暫誘導細胞溶質(zhì)的游離鈣[Ca++]的增加)、細胞響應功能(例如通過白細胞刺激趨化現(xiàn)象或炎癥介質(zhì)的釋放)等等。
在一個實施方案中，含有趨化因子受體或其變種的組合物在適合于結合的條件下被保持。將受體與受試化合物接觸，檢測或測定結合。
在進一步的實施方案中，分析為基于細胞的分析，其中使用的細胞為穩(wěn)定或短暫轉(zhuǎn)染載體或表達具有編碼受體核酸序列的盒子。將細胞在適合表達受體的條件下保持，在適合結合的條件下與物質(zhì)接觸。可以使用標準技術檢測結合。例如結合的范圍可以相對于合適的對照確定。而且，細胞部分，例如膜部分，其含有可以用于代替整個細胞的受體。
本發(fā)明化合物和趨化因子受體之間結合或復合物形成的測定可以直接或間接被檢測。例如，化合物可以被合適的標記物標記(例如熒光標記、標記、同位素標記、酶標記等)，通過檢測標記測定結合。特異性的和/或競爭性的結合可以通過競爭或替代研究評價，使用非標記物質(zhì)或配體作為競爭物。
試驗物質(zhì)的拮抗活性可以報導為在受體結合分析中50％抑制(IC50值)特異性結合要求的抑制劑濃度，受體結合分析使用例如125I-標記的MCP-1作為配體，外周血單核細胞(PBMCs)是通過密度梯度離心從正常人全血中制備的。特異性結合優(yōu)選定義為總結合(例如在過濾器上總的cpm)減去非特異性結合。非特異性結合定義為在過量未標記的競爭物(例如MCP-1)存在下仍然能檢測到的cpm的量。
如上所述的人PBMCs可以被用于合適的結合分析。例如200,000至500,000細胞可以與0.1至0.2nM125I-標記的MCP-1一起培養(yǎng)，有或沒有未標記的競爭物(10nM MCP-1)或各種濃度的被試化合物。125I-標記的MCP-1，可以通過合適的方法被制備，或從商人處購買(PerkinElmer，Boston MA)，結合反應可以在室溫下在50至250μl的含有1M HEPES pH 7.2和0.1％BSA(牛血清白蛋白)的結合緩沖劑中反應30分鐘完成。結合反應可以通過從玻璃纖維過濾器(Perkin Elmer)快速過濾收獲膜而終止，玻璃纖維過濾器中可以在0.3％聚乙烯亞胺或磷酸鹽緩沖劑鹽水(PBS)中預先浸泡。過濾器可以用約600μL的含有0.5M NaCl或PBS的結合緩沖液洗滌，然后干燥，結合的放射性活性的量可以通過在γ計數(shù)器(Perkin Elmer)上計數(shù)確定。
化合物拮抗趨化因子受體功能的能力還可以在白細胞趨化現(xiàn)象分析中使用合適的細胞確定。合適的細胞包括、重組細胞或表達趨化因子受體(例如CCR2)并經(jīng)歷趨化因子受體配體誘導的(例如MCP-1)趨化現(xiàn)象的分離細胞。分析利用人外周血單核細胞，在改進的BoydenChamber(Neuro Probe)上進行。將在無血清DMEM介質(zhì)(InVitrogen)中的500,000細胞，在有或沒有抑制劑下培養(yǎng)，保溫至37℃。將趨化現(xiàn)象腔(Neuro Probe)預先升溫。除了陰性對照外，將400μL保溫的10nM MCP-1加入到所有孔的底腔，陰性對照中加入DMEM。將8微米膜過濾器(Neuro Probe)放在頂部，關閉腔的蓋。然后將細胞加入到腔蓋上的孔中，其與過濾器膜下的腔孔相連。將整個腔在37℃，5％CO2中溫孵30分鐘。然后將細胞抽吸出來，打開腔蓋，輕輕移出過濾器。將過濾器的頂部用PBS洗滌3次，底部不觸摸。將過濾器空氣干燥，用Wright Geimsa stain(Sigma)染色。通過顯微鏡對過濾器計數(shù)。陰性對照用作背景，并從所有值中減去。通過將遷移到含有拮抗劑的孔中底部腔的細胞數(shù)，與遷移到MCP-1對照孔底部腔的細胞數(shù)比較確定拮抗強度。
如果對于上述分析它們的IC50值在約0.01至約500nM的范圍中，本發(fā)明化合物可以有相當?shù)幕钚浴Ｔ谮吇F(xiàn)象分析中，活性化合物具有的IC50值的范圍為約1至約3000nM。
本發(fā)明的各種修改，除了那些本文描述的，從前面的描述中對于本領域技術人員來說是顯而易見的。這樣的修改也落在本文所附的權利要求的范圍中。在本申請中每個引用的參考文獻，包括所有的專利、出版物和書籍，均以其全部內(nèi)容引入作為參考。
權利要求
1.式I化合物 或其可藥用鹽或前藥，其中R1為任選被一個或多個R6取代的雜芳基；R2為H、鹵素、氰基、硝基、C1-C6烷基、C1-C6鹵代烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、芳基、雜芳基、C3-C7環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、SOR7、SO2R7、COR8、OR9、SR9、COOR9、NR10R11或NR10COR8；R3為F、Cl、Br、I、C1-C4鹵代烷基、C1-C4鹵代烷氧基或雜芳基；R4為H、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基或C1-C6鹵代烷基；R5為H、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基或C1-C6鹵代烷基；R6為H、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷氧基、氨基、(C1-C6烷基)氨基或二(C1-C6烷基)氨基；R7為H、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6鹵代烷基、芳基、雜芳基、C3-C7環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基烷基、雜芳基烷基、(C3-C7環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)烷基烷基或NR12R13；R8為H、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6鹵代烷基、芳基、雜芳基、C3-C7環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基烷基、雜芳基烷基、(C3-C7環(huán)烷基)烷基、雜環(huán)烷基烷基或NR12R13；R9為H、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6鹵代烷基、烷氧基烷基、鹵代烷氧基烷基、芳基氧基烷基、雜芳基氧基烷基、環(huán)烷基氧基烷基、雜環(huán)烷基氧基烷基、芳基、雜芳基、C3-C7環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基烷基、雜芳基烷基；(C3-C7環(huán)烷基)烷基或雜環(huán)烷基烷基；R10和R11各自獨立為H、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6鹵代烷基、芳基、雜芳基、C3-C7環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基烷基、雜芳基烷基；(C3-C7環(huán)烷基)烷基或雜環(huán)烷基烷基；或R10和R11與它們所連的N原子一起形成3-、4-、5-、6-或7-元雜環(huán)烷基；R12和R13各自獨立為H、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、C2-C6炔基、C1-C6鹵代烷基、芳基、雜芳基、C3-C7環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、芳基烷基、雜芳基烷基；(C3-C7環(huán)烷基)烷基或雜環(huán)烷基烷基；或R12和R13與它們所連的N原子一起形成3-、4-、5-、6-或7-元雜環(huán)烷基；和r為1、2或3。
2.權利要求1的化合物，其中R1為5-、6-、9-或10-元雜芳基，含有至少一個成環(huán)N原子，其中所述的5-、6-、9-或10-元雜芳基任選被1、2、3或4個R6基團取代。
3.權利要求1的化合物，其中R1為
4.權利要求1的化合物，其中R1為
5.權利要求1的化合物，其中R1為
6.權利要求1的化合物，其中R2為H、C1-C6烷基、C1-C6鹵代烷基或OR9、SR9或NR10R11。
7.權利要求1的化合物，其中R2為H或OR9。
8.權利要求1的化合物，其中R3為F、Br、CF3或6-或5-元雜芳基。
9.權利要求1的化合物，其中R4為C1-C6烷基。
10.權利要求1的化合物，其中R4為甲基。
11.權利要求1的化合物，其中R5為C1-C6烷基。
12.權利要求1的化合物，其中R5為甲基。
13.權利要求1的化合物，具有式Ha 或其可藥用鹽形式或前藥。
14.權利要求13的化合物，其中R1為
15.權利要求13的化合物，其中R1為
16.權利要求1的化合物，特征在于是CCR5的選擇性結合劑或抑制劑。
17.權利要求1的化合物，選自5-({4-[(3S)-4-(5-溴-2，3-二氫-1H-茚-1-基)-3-甲基哌嗪-1-基]-4-甲基哌啶-1-基}羰基)-4，6-二甲基嘧啶；5-({4-[(3S)-4-(5-氟-2，3-二氫-1H-茚-1-基)-3-甲基哌嗪-1-基]-4-甲基哌啶-1-基}羰基)-4，6-二甲基嘧啶；5-({4-[(3S)-4-(6-溴-2，3-二氫-1H-茚-1-基)-3-甲基哌嗪-1-基]-4-甲基哌啶-1-基}羰基)-4，6-二甲基嘧啶；5-({4-[(3S)-4-(6-氟-2，3-二氫-1H-茚-1-基)-3-甲基哌嗪-1-基]-4-甲基哌啶-1-基}羰基)-4，6-二甲基嘧啶；5-({4-[(3S)-4-(6-溴-1，2，3，4-四氫萘-1-基)-3-甲基哌嗪-1-基]-4-甲基哌啶-1-基}羰基)-4，6-二甲基嘧啶；5-({4-[(3S)-4-(7-溴-1，2，3，4-四氫萘-1-基)-3-甲基哌嗪-1-基]-4-甲基哌啶-1-基}羰基)-4，6-二甲基嘧啶；4，6-二甲基-5-[(4-甲基-4-{(3S)-3-甲基-4-[6-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)羰基]嘧啶；4，6-二甲基-5-[(4-甲基-4-{(3S)-3-甲基-4-[5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]哌嗪-1-基}哌啶-1-基)羰基]嘧啶；1-((2S)-4-{1-[(4，6-二甲基嘧啶-5-基)羰基]-4-甲基哌啶-4-基}-2-甲基哌嗪-1-基)-5-(三氟甲基)-茚-2-醇；5-[(4-{(3S)-4-[2-甲氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-4，6-二甲基嘧啶；5-[(4-(3S)-4-[(1R，2R)-2-乙氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-4，6-二甲基嘧啶二鹽酸鹽；5-[(4-{(3S)-4-[(1R，2R)-2-(2-甲氧基乙氧基)-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-4，6-二甲基嘧啶；4-[(4-{(3S)-4-[(1S，2R)-2-乙氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]噌啉；4-[(4-{(3S)-4-[(1R，2R)-2-乙氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]喹啉；5-[(4-{(3S)-4-[(1R，2R)-2-乙氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]喹啉；4-[(4-{(3S)-4-[(1R，2R)-2-乙氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-1，8-萘啶；5-[(4-{(3S)-4-[(1R，2R)-2-乙氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]異喹啉；5-[(4-{(3S)-4-[(1R，2R)-5-溴-2-乙氧基-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-4，6-二甲基嘧啶；4-[(4-{(3S)-4-[(1R，2R)-5-溴-2-乙氧基-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]噌啉；4-[(4-{(3S)-4-[(1R，2R)-5-溴-2-乙氧基-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-1，8-萘啶；5-[(4-{(3S)-4-[(1R，2R)-5-溴-2-(吡啶-2-基氧基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-4，6-二甲基嘧啶；5-[(4-{(3S)-4-[(1R，2R)-2-乙氧基-5-(1，3-噻唑-2-基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-4，6-二甲基嘧啶；5-[(4-{(3S)-4-[(1R，2R)-2-乙氧基-5-吡啶-2-基-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-4，6-二甲基嘧啶；5-[(4-{(3S)-4-[3-甲氧基-5-(三氟甲基)-2，3-二氫-1H-茚-1-基]-3-甲基哌嗪-1-基}-4-甲基哌啶-1-基)羰基]-4，6-二甲基嘧啶。
18.包含權利要求1至17任何一項的化合物和可藥用載體的組合物。
19.調(diào)節(jié)趨化因子受體活性的方法，包含用權利要求1至17任何一項的化合物與所述的趨化因子受體接觸。
20.權利要求19的方法，其中所述的趨化因子受體為CCR5。
21.權利要求19的方法，其中所述的調(diào)節(jié)對應于抑制。
22.權利要求19的方法，其中所述的化合物為CCR5的選擇性抑制劑。
23.權利要求19的方法，其中所述的化合物為CCR5的選擇性結合劑。
24.對患者治療與趨化因子受體的表達或活性相關疾病的方法，包含給所述的患者施用治療有效量的權利要求1至17任何一項的化合物。
25.權利要求24的方法，其中所述的趨化因子受體為CCR5。
26.權利要求25的方法，其中所述的化合物為CCR5的選擇性抑制劑或結合劑。
27.治療患者疾病或病癥的方法，所述疾病或病癥選自炎性疾病、免疫病癥和病毒感染，包含給所述患者施用治療有效量的權利要求1至17任何一項的化合物。
28.權利要求27的方法，其中所述的疾病或病癥為炎性疾病。
29.權利要求28的方法，其中所述的疾病或病癥為免疫病癥。
30.權利要求28的方法，其中所述的疾病或病癥為病毒感染。
31.權利要求30的方法，其中所述的病毒感染為HIV感染。
32.對患者治療HIV感染的方法，包含給所述的患者施用治療有效量的權利要求1至17任何一項的化合物。
33.權利要求32的方法，進一步包含同時或順序地施用至少一種抗病毒藥物。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)的化合物其中可變的取代基為說明書定義的，其調(diào)節(jié)趨化因子受體例如CCR5的活性或結合。在一些實施方案中，本發(fā)明化合物對CCR5有選擇性?；衔锟梢员挥糜诶缰委熍c趨化因子受體表達或活性相關的疾病，例如炎性疾病、免疫疾病和病毒感染。
文檔編號A61K31/495GK1968698SQ200580019184
公開日2007年5月23日 申請日期2005年4月12日 優(yōu)先權日2004年4月13日
發(fā)明者C·－B·薛, G·曹, T·黃, L·陳, K·張, A·王, D·梅洛尼, R·阿南德, J·格倫, B·梅特卡夫 申請人:因塞特公司