專(zhuān)利名稱：含有黃褥花果葉萃取物的血糖水平升高抑制劑和age生成抑制劑以及含有它們的食品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及血糖水平升高抑制劑和高級(jí)糖基化終產(chǎn)物(AGE)生成抑制劑。
背景技術(shù)：
隨著近年來(lái)飲食習(xí)慣和生活方式的變化，糖尿病患者的數(shù)量日益增多。目前，在日本糖尿病患者的數(shù)量高達(dá)7,000,000，如果加上未來(lái)的糖尿病患者，該數(shù)目可能多達(dá)15,000,000。
糖尿病這種代謝障礙表現(xiàn)出由胰島素激素活性水平不足所引起的長(zhǎng)期血糖過(guò)多狀態(tài)。長(zhǎng)期血糖過(guò)多狀態(tài)可能導(dǎo)致引發(fā)各種類(lèi)型的并發(fā)癥，例如神經(jīng)疾病、白內(nèi)障、腎病、視網(wǎng)膜病變、關(guān)節(jié)硬化、動(dòng)脈粥樣硬化、以及糖尿病性壞疽。并發(fā)癥主要分為由借助于蛋白質(zhì)與患者血液中的葡萄糖相結(jié)合的非酶促糖基化而引起的血管疾病以及由葡萄糖代謝后生成的山梨糖醇堆積引起的細(xì)胞破壞而導(dǎo)致的神經(jīng)疾病。由蛋白質(zhì)-葡萄糖結(jié)合形成的糖基化蛋白質(zhì)隨著反應(yīng)的進(jìn)一步進(jìn)行生成被稱作高級(jí)糖基化終產(chǎn)物(advanced glycation end product，AGE)的化合物。據(jù)推論，AGE與血管內(nèi)皮細(xì)胞中的特異性受體(RAGE)相結(jié)合，促進(jìn)出現(xiàn)糖尿病性血管疾病。
因此，抑制血糖水平升高以及抑制AGE生成被認(rèn)為是用于治療和預(yù)防糖尿病及糖尿病并發(fā)癥的方法。
過(guò)去已經(jīng)開(kāi)發(fā)出很多用于治療和預(yù)防糖尿病及糖尿病并發(fā)癥的藥劑。
這類(lèi)藥劑的實(shí)例包括血糖水平升高抑制劑(其被施用至進(jìn)餐后血糖水平出現(xiàn)異常的糖尿病患者)和α-葡萄糖苷酶抑制劑(它可以抑制碳水化合物的消化和吸收，從而預(yù)防血糖水平升高)。已知伏格列波糖和阿卡波糖是α-葡萄糖苷酶的代表性抑制劑。已知羰基試劑氨基胍是AGE生成抑制劑的實(shí)例之一。這些藥劑作為抗糖尿病藥物或抗糖尿病并發(fā)癥藥物備受關(guān)注，并為此進(jìn)行了很多臨床試驗(yàn)。
盡管這些藥劑具有顯著的療效，但是它們也強(qiáng)加給患者各種各樣的副作用，例如攝取后出現(xiàn)胃氣脹、因與其它血糖過(guò)低藥物聯(lián)合使用而引發(fā)的血糖過(guò)低狀態(tài)、以及惡心或頭痛。
為了克服上述缺陷，已經(jīng)開(kāi)發(fā)出各種由天然成分制成的藥劑，它們具有緩和的療效，但是卻避免了與副作用相關(guān)的問(wèn)題。例如已知紫蘇萃取物(JP專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)(未審)2000-102313)、巴拉圭茶萃取物(JP專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)(未審)2003-146900)、羅布麻(Apocynum venetum)葉萃取物(JP專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)(未審)2002-053486)、以及枇杷葉萃取物(JP專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)(未審)2003-128571)是由天然成分制成的α-葡萄糖苷酶抑制劑。作為由天然成分制成的AGE生成抑制劑，例如通過(guò)萃取稻谷如野生稻谷得到的抗糖尿病活性物質(zhì)和抗糖尿病并發(fā)癥活性物質(zhì)以及其制備方法(JP專(zhuān)利號(hào)3,334,016)是已知的，當(dāng)然這類(lèi)藥劑的數(shù)量還不是足夠的多。
黃褥花果(Acerola)是一種Rutales目Malpighiaceae科Malpighia屬熱帶水果，其原產(chǎn)在加勒比群島。目前，黃褥花果果實(shí)在全世界范圍被廣泛用作飲料和保健食品。然而，目前尚未檢測(cè)出黃褥花果葉中的有用組分。黃褥花果葉作為從未使用過(guò)的資源，一直期待著發(fā)現(xiàn)其工業(yè)價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供由天然成分制得的血糖水平升高抑制劑和AGE生成抑制劑以及含有任一種抑制劑的食品。
本發(fā)明包括下述發(fā)明。
(1)血糖水平升高抑制劑，其中含有黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品作為活性成分。
(2)根據(jù)(1)的血糖水平升高抑制劑，其中所述黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品中含有多酚。
(3)AGE生成抑制劑，其中含有黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品作為活性成分。
(4)根據(jù)(3)的AGE生成抑制劑，其中所述黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品中含有多酚。
(5)根據(jù)(1)-(4)中任意一項(xiàng)的血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制劑，其被用于治療或預(yù)防糖尿病或糖尿病并發(fā)癥。
(6)根據(jù)(1)-(5)中任意一項(xiàng)的血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制劑，其將被加入至食品中。
(7)含有根據(jù)(1)-(6)中任意一項(xiàng)的血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制劑的食品。
(8)含有黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品的食品。
本說(shuō)明書(shū)中包括公開(kāi)在本申請(qǐng)優(yōu)先權(quán)文本日本專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?004-080520說(shuō)明書(shū)和/或附圖中的部分或全部?jī)?nèi)容。
發(fā)明效果本發(fā)明提供了含有天然形成的物質(zhì)作為活性成分的血糖水平升高抑制劑和AGE生成抑制劑，以及含有任一抑制劑的食品。
附圖簡(jiǎn)述

圖1示出了實(shí)施例1制備的純化黃褥花果葉萃取物與純化黃褥花果果實(shí)萃取物的麥芽糖酶抑制活性測(cè)量的對(duì)比結(jié)果。
圖2示出了實(shí)施例1制備的純化黃褥花果葉萃取物對(duì)AGE生成的抑制活性的測(cè)量結(jié)果。
發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案本發(fā)明涉及血糖水平升高抑制劑和AGE生成抑制劑，其中含有黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品作為活性成分。作為本發(fā)明所用的黃褥花果葉的萃取來(lái)源的黃褥花果的產(chǎn)地或種類(lèi)并無(wú)特別限制。例如，黃褥花果可以生長(zhǎng)在日本沖繩、或者巴西。本發(fā)明的血糖水平升高抑制劑和AGE生成抑制劑含有天然形成的物質(zhì)也就是黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品作為活性成分。因此，這類(lèi)抑制劑涉及很低的副作用。本發(fā)明有效地利用了從未使用過(guò)的資源即黃褥花果葉，這使得本發(fā)明更為可取。
黃褥花果葉萃取物可以由新鮮的、半干或干燥黃褥花果葉得到。另外，萃取物還可以由保持未處理狀態(tài)的葉或者被充分磨碎或切碎的葉得到。
對(duì)于黃褥花果葉萃取物并無(wú)特殊限制，只要是通過(guò)常規(guī)技術(shù)萃取到的即可。黃褥花果葉萃取物可以視需要進(jìn)行濃縮。在本發(fā)明中，還可以使用黃褥花果葉萃取物的加工產(chǎn)品。本文中所使用的術(shù)語(yǔ)“黃褥花果葉萃取物的加工產(chǎn)品”包括但不限于黃褥花果葉萃取物通過(guò)各種色譜技術(shù)得到的純化產(chǎn)物。
黃褥花果葉萃取物或其加工產(chǎn)品優(yōu)選使用水或親水性有機(jī)溶劑得到。至于親水性有機(jī)溶劑，可以使用例如各種已知的有機(jī)溶劑，諸如醇類(lèi)如甲醇、乙醇、甘油、丙二醇和1，3-丁二醇，丙酮，四氫呋喃，乙腈，1，4-二烷，吡啶，二甲亞砜，N，N-二甲基甲酰胺，以及乙酸。這類(lèi)親水性有機(jī)溶劑優(yōu)選與水混和。
對(duì)于萃取條件并無(wú)特殊現(xiàn)制。溫度范圍通常為0℃-120℃，優(yōu)選為20℃-50℃。萃取持續(xù)時(shí)間為大約1-24小時(shí)，優(yōu)選為大約1或2小時(shí)。用于萃取的溶劑用量?jī)?yōu)選為原料質(zhì)量的1-20倍。
萃取完畢后，殘余物可以通過(guò)過(guò)濾或者離心除去，得到萃取物。萃取物可以視需要進(jìn)一步濃縮。
所得到的萃取物偶爾含有糖類(lèi)、有機(jī)酸等。因此，為了除去這類(lèi)物質(zhì)，優(yōu)選完成一純化步驟。純化可以通過(guò)例如正相或逆相色譜法、離子交換色譜法、或凝膠過(guò)濾完成。這些技術(shù)可以充分地聯(lián)合使用。
如實(shí)施例所述，用于本發(fā)明中的黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品具有抑制血糖水平升高和抑制AGE生成的活性。這類(lèi)活性可能是由于所述黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品中含有多酚而引起的。盡管對(duì)于這些多酚的組成尚不清楚，但是據(jù)信這種組成在導(dǎo)致具有抑制血糖水平升高和抑制AGE生成的活性方面是有用的。
對(duì)于黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品在本發(fā)明血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制劑中的含量并無(wú)特殊限制，只要可以獲得所需效果即可。本發(fā)明的血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制劑中除了含有黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品之外，還可以含有任意的其它成分。
本發(fā)明的血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制劑可以為同時(shí)含有黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品與常規(guī)藥物載體的制劑形式。對(duì)于劑型并無(wú)特殊限制，其完全可以根據(jù)需要加以確定。一般來(lái)說(shuō)，劑型可以是口服制劑，例如片劑、膠囊劑、顆粒劑、細(xì)顆粒劑、粉劑、液體制劑、糖漿劑、混懸劑、乳劑、或酏劑，非腸道制劑例如注射劑、滴劑、栓劑、吸入劑、透皮吸收劑、透粘膜吸收劑、粘合制劑、或軟膏劑。
口服制劑可以通過(guò)常規(guī)技術(shù)，使用各種賦型劑例如淀粉、乳糖、蔗糖、甘露醇、羧甲基纖維素、玉米淀粉、或無(wú)機(jī)鹽制備得到。
除了上述賦型劑之外，這類(lèi)型制劑還可以含有例如粘合劑、崩解劑、表面活性劑、潤(rùn)滑劑、助流劑、調(diào)味劑、著色劑、或者芳香物質(zhì)。
粘合劑的具體實(shí)例包括結(jié)晶纖維素、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基纖維素、低取代的羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、羥丙基甲基纖維素乙酸琥珀酸酯、羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素、羧甲基乙基纖維素、羥乙基纖維素、小麥淀粉、大米淀粉、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、糊精、預(yù)膠化淀粉、部分預(yù)膠化淀粉、羥丙基淀粉、Pullulan、聚乙烯基吡咯烷酮、氨基烷基甲基丙烯酸酯共聚物E、氨基烷基甲基丙烯酸酯共聚物RS、甲基丙烯酸共聚物L(fēng)、甲基丙烯酸共聚物、聚乙烯縮醛二乙氨基乙酸酯、聚乙烯醇、阿拉伯樹(shù)膠、粉末阿拉伯樹(shù)膠、瓊脂、明膠、白色蟲(chóng)膠、黃蓍膠、純化蔗糖、以及聚乙二醇(Macrogol)。
崩解劑的具體實(shí)例包括結(jié)晶纖維素、甲基纖維素、低取代的羥丙基纖維素、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、小麥淀粉、大米淀粉、玉米淀粉、馬鈴薯淀粉、部分預(yù)膠化的淀粉、羥丙基淀粉、羧甲基淀粉鈉、以及黃蓍膠。
表面活性劑的具體實(shí)例包括大豆卵磷脂、蔗糖脂肪酸酯、硬脂酸聚烴氧基酯(polyoxyl stearate)、聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚氧乙烯聚氧丙二醇、去水山梨糖醇倍半油酸酯、去水山梨糖醇三油酸酯、去水山梨糖醇單硬脂酸酯、去水山梨糖醇單棕櫚酸酯、去水山梨糖醇單月桂酸酯、聚山梨酯、甘油單硬脂酸酯、十二烷基硫酸鈉、以及聚桂醇。
潤(rùn)滑劑的實(shí)例包括小麥淀粉、大米淀粉、玉米淀粉、硬脂酸、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、水合二氧化硅、輕質(zhì)無(wú)水硅酸、合成硅酸鋁、干燥氫氧化鋁凝膠、滑石、硅酸鎂鋁、磷酸氫鈣、無(wú)水磷酸氫鈣、蔗糖脂肪酸酯、石蠟、氫化植物油、以及聚乙二醇。
助流劑的具體實(shí)例包括水合二氧化硅、輕質(zhì)無(wú)水硅酸、干燥氫氧化鋁凝膠、合成硅酸鋁、以及硅酸鎂。
當(dāng)本發(fā)明的血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制劑以液體制劑、糖漿劑、混懸劑、乳劑、或酏劑形式給藥時(shí)，其中可以含有味道和香味矯正劑或者著色劑。
本發(fā)明還涉及含有前述血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制的食品。本發(fā)明的食品可以為任意形式，例如糖果(如蜜餞、糖錠、果醬、或口香糖)或飲料(諸如清爽飲料如茶或酒精飲料)形式、以及常見(jiàn)“食品”的形式。本發(fā)明的食品可以制備成用于特定保健用途的食品形式(例如用于預(yù)防糖尿病或糖尿病并發(fā)癥的食品)。對(duì)于血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制劑在食品中的含量并無(wú)特殊限制，只要能夠達(dá)到所需效果即可。
本發(fā)明還涉及含有黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品的食品。迄今為止，尚未將黃褥花果葉用于食品中。
下面參照后面的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更詳細(xì)的描述，當(dāng)然本發(fā)明的技術(shù)范圍并不受這些實(shí)施例的限制。
實(shí)施例1黃褥花果葉均勻加工處理后，向其中加入3倍體積的蒸餾水，接著進(jìn)行1小時(shí)萃取。上述步驟進(jìn)行兩次，萃取物離心、過(guò)濾、凍干后，再次稀釋在蒸餾水中。所得到的溶液裝填在C18筒柱(Sep-Pak Vac 35ccC18筒柱，Waters)上，用蒸餾水洗滌，0.2％TFA/甲醇溶液洗脫。洗脫部分蒸發(fā)至干，得到純化的萃取物。
接下來(lái)，通過(guò)Folin-Denis方法測(cè)量所得到的純化萃取物中的多酚含量。具體地說(shuō)，將純化萃取物溶解于蒸餾水中，濃度為0.5mg/ml，將0.1ml所得到的溶液、2.9ml蒸餾水、和0.5ml Folin-Ciocalteu試劑(Merck)進(jìn)行混和。混合物放置3分鐘，向其中加入20％碳酸鈉溶液，混合物再放置60分鐘，測(cè)量650nm處的吸收值。使用兒茶素作為標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)繪制分析曲線。
結(jié)果發(fā)現(xiàn)，純化萃取物中的多酚含量為25％。
實(shí)施例2按照下述方法，時(shí)實(shí)施例1中制得的純化黃褥花果葉萃取物進(jìn)行α-葡萄糖苷酶抑制活性(麥芽糖酶抑制活性)測(cè)量。
向商購(gòu)得到的大鼠小腸丙酮粉末中，加入9倍體積的56mM馬來(lái)酸鹽緩沖液(pH6.0)，混合物用玻璃勻化器勻化。產(chǎn)物離心后，回收上清液，將其定義為粗制酶溶液。將20倍稀釋的該粗制酶溶液用于麥芽糖酶反應(yīng)中。
開(kāi)始時(shí)，將0.6ml 2mg/ml樣本溶液加入至0.6ml 2％麥芽糖溶液中，混合物在37℃下培養(yǎng)5分鐘，向其中加入0.6ml上述粗制酶溶液，反應(yīng)在37℃下進(jìn)行120分鐘。通過(guò)在沸水中加熱10分鐘使酶滅活，離心后，通過(guò)HPLC測(cè)量上清液中的葡萄糖水平。
HPLC條件如下。
柱Shim-pack CLC-NH2柱(6.0×150mm)柱溫室溫流速2ml/分鐘流動(dòng)相75％乙腈檢測(cè)RI單獨(dú)地，除了使用蒸餾水而不是樣本溶液(用量與樣本溶液所用用量相同)之外，類(lèi)似地重復(fù)上述反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物定義為對(duì)照樣本，類(lèi)似地測(cè)得其中的葡萄糖水平。將對(duì)照樣本的測(cè)量結(jié)果定義為麥芽糖抑制作用為0％。
圖1示出了采用上述技術(shù)測(cè)得的結(jié)果。圖1還示出了黃褥花果果實(shí)的測(cè)量結(jié)果，作為對(duì)照實(shí)施例，它是按照與黃褥花果葉相同的方式得到的。
從圖1中明顯看出，純化黃褥花果葉萃取物具有麥芽糖酶抑制活性。
實(shí)施例3按照下述方法，對(duì)實(shí)施例1中制得的純化黃褥花果葉萃取物進(jìn)行抗AGE生成的抑制活性測(cè)量。
將牛血清白蛋白(16mg/ml，1ml)、1ml 4M葡萄糖、1ml 1/15M磷酸鹽緩沖液(pH7.2)、和1ml 0.3mg/ml樣本溶液進(jìn)行混和，產(chǎn)物儲(chǔ)存在60℃下。七天后，使用熒光光譜計(jì)測(cè)量由蛋白質(zhì)和葡萄糖生成的AGE。使用325nm的激發(fā)波長(zhǎng)和405nm的發(fā)射波長(zhǎng)分析AGE初始產(chǎn)物。使用370nm的激發(fā)波長(zhǎng)和440nm的發(fā)射波長(zhǎng)分析AGE高級(jí)產(chǎn)物。為了進(jìn)行對(duì)照，按照相同方式完成了使用氨基胍的試驗(yàn)。另外，除了使用蒸餾水而不是樣本溶液(用量與樣本溶液所用用量相同)之外，還重復(fù)進(jìn)行了與上述相同的試驗(yàn)，反應(yīng)產(chǎn)物定義為對(duì)照樣本，類(lèi)似地進(jìn)行熒光分析。將對(duì)照樣本的測(cè)量結(jié)果定義為AGE抑制作用為0％。
采用上述技術(shù)測(cè)得的結(jié)果如圖2所示。
從圖2中明顯看出，純化的黃褥花果葉萃取物具有與氨基胍相當(dāng)?shù)目笰GE生成的抑制活性。
在此將本文中所引用的全部出版物、專(zhuān)利、和專(zhuān)利申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容引入作為參考。
權(quán)利要求
1.血糖水平升高抑制劑，其中含有黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品作為活性成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的血糖水平升高抑制劑，其中所述黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品中含有多酚。
3.高級(jí)糖基化終產(chǎn)物(AGE)生成抑制劑，其中含有黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品作為活性成分。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的AGE生成抑制劑，其中所述黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品中含有多酚。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)的血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制劑，其被用于治療或預(yù)防糖尿病或糖尿病并發(fā)癥。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)的血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制劑，其將被加入至食品中。
7.含有根據(jù)權(quán)利要求1-6中任意一項(xiàng)的血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制劑的食品。
8.含有黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品的食品。
全文摘要
本發(fā)明目的在于提供由天然成分制得的血糖水平升高抑制劑和AGE生成抑制劑、以及含有這些抑制劑的食品。所述血糖水平升高抑制劑或AGE生成抑制劑中含有黃褥花果葉萃取物和/或其加工產(chǎn)品作為活性成分。
文檔編號(hào)A61P3/10GK1933846SQ20058000889
公開(kāi)日2007年3月21日 申請(qǐng)日期2005年3月15日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月19日
發(fā)明者青木仁史, 花村高行, 間山千鄉(xiāng) 申請(qǐng)人:株式會(huì)社日冷食品