專(zhuān)利名稱(chēng)：適用作毒蕈堿性受體拮抗劑的聯(lián)苯基化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的背景本發(fā)明的領(lǐng)域本發(fā)明涉及具有毒蕈堿性受體拮抗劑活性或抗膽堿能活性的新的聯(lián)苯基化合物。本發(fā)明還涉及包含這類(lèi)聯(lián)苯基化合物的藥物組合物、制備這類(lèi)聯(lián)苯基化合物的方法和中間體以及使用這類(lèi)聯(lián)苯基化合物治療肺疾病的方法。
本領(lǐng)域的狀態(tài)肺或呼吸障礙，例如慢性阻塞性肺疾病(COPD)和哮喘，在世界范圍內(nèi)影響數(shù)百萬(wàn)人并且這類(lèi)障礙是發(fā)病和死亡的主要原因。
已知毒蕈堿性受體拮抗劑產(chǎn)生支氣管保護(hù)作用，因此，這類(lèi)化合物適用于治療呼吸障礙，例如COPD和哮喘。當(dāng)被用于治療這類(lèi)障礙時(shí)，毒蕈堿性受體拮抗劑通常通過(guò)吸入給藥。然而，即使通過(guò)吸入給藥，常常顯著量的毒蕈堿性受體拮抗劑被吸收到系統(tǒng)循環(huán)中，導(dǎo)致系統(tǒng)副作用，例如口干、瞳孔散大和心血管副作用。
另外，許多吸入的毒蕈堿性受體拮抗劑的作用持續(xù)時(shí)間較短，需要將它們每天多次給藥。這種一天多次的給藥方案不但不方便，而且由于患者對(duì)所需頻繁給藥方案的不順應(yīng)性，會(huì)產(chǎn)生顯著的不充分治療的風(fēng)險(xiǎn)。
因此，對(duì)新的毒蕈堿性受體拮抗劑存在需求。特別是，對(duì)當(dāng)通過(guò)吸入給藥時(shí)具有高效價(jià)和減少的系統(tǒng)副作用的新毒蕈堿性受體拮抗劑存在需求。另外，對(duì)作用持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，從而允許一天一次或甚至一周一次給藥的吸入的毒蕈堿性受體拮抗劑存在需求。預(yù)期這類(lèi)化合物用于治療肺疾病，例如COPD和哮喘特別有效，同時(shí)減少或消除副作用，例如口干和便秘。
本發(fā)明概述本發(fā)明提供新的具有毒蕈堿性受體拮抗劑活性或抗膽堿能活性的聯(lián)苯基化合物。除了其它的性質(zhì)以外，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)當(dāng)通過(guò)吸入給藥時(shí)，本發(fā)明的化合物具有高效價(jià)和減少的全身副作用并且作用的持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。
因此，在其組成方面的一方面，本發(fā)明提供式I的化合物，或者其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體 其中a是0或1至5的整數(shù)；每個(gè)R1獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)環(huán)烷基、氰基、鹵素、-OR1a、-C(O)OR1b、-SR1c、-S(O)R1d、-S(O)2R1e、-NR1fR1g、-NR1hS(O)2R1i和-NR1jC(O)R1k；其中R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f、R1g、R1h、R1i、R1j和R1k中的每一個(gè)獨(dú)立地是氫、(1-4C)烷基或苯基(1-4C)烷基；b是0或1至4的整數(shù)；每個(gè)R2獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)環(huán)烷基、氰基、鹵素、-OR2a、-C(O)OR2b、-SR2c、-S(O)R2d、-S(O)2R2e、-NR2fR2g、-NR2hS(O)2R2i和-NR2jC(O)R2k；其中R2a、R2b、R2c、R2d、R2e、R2f、R2g、R2h、R2i、R2j和R2k中的每一個(gè)獨(dú)立地是氫、(1-4C)烷基或苯基(1-4C)烷基；W代表O或NWa，其中Wa是氫或(1-4C)烷基；c是0或1至5的整數(shù)；每個(gè)R3獨(dú)立地表示(1-4C)烷基或者兩個(gè)R3基團(tuán)連接在一起形成(1-3C)亞烷基、(2-3C)亞烯基或環(huán)氧乙烷-2，3-二基；m是0或1；R4選自氫、(1-4C)烷基和(3-4C)環(huán)烷基；s是0、1或2；Ar1表示亞苯基或(3-5C)亞雜芳基，含有1或2個(gè)獨(dú)立地選自氧、氮或硫的雜原子；其中亞苯基或亞雜芳基被(R5)q取代，其中q是0或1至4的整數(shù)并且每個(gè)R5獨(dú)立地選自鹵素、羥基、(1-4C)烷基或(1-4C)烷氧基；t是0、1或2；n是0或1至3的整數(shù)；d是0或1至4的整數(shù)；每個(gè)R6獨(dú)立地表示氟或(1-4C)烷基；p是0或1；并且R7和R8獨(dú)立地是氫或(1-4C)烷基；其中R1、R1a-1k、R2、R2a-2k、R3、R5、R6、R7和R8中的每個(gè)烷基和烷氧基任選被1至5個(gè)氟取代基取代。
在其組成方面的另一方面，本發(fā)明涉及藥物組合物，它包含藥學(xué)上可接受的載體和治療有效量的式I的化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體。這類(lèi)藥物組合物可以任選含有其它治療劑。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及這類(lèi)藥物組合物，其中該組合物還包含治療有效量的甾體抗炎劑，例如皮質(zhì)類(lèi)固醇；β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑；磷酸二酯酶-4抑制劑；或者它們的組合。
本發(fā)明的化合物具有毒蕈堿性受體拮抗劑活性。因此，預(yù)期式I的化合物適用于治療肺疾病，例如慢性阻塞性肺疾病和哮喘。
因此，在其方法方面的一方面，本發(fā)明涉及治療肺疾病的方法，該方法包括給患者給予治療有效量的式I的化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體。
另外，在其方法方面的另一方面，本發(fā)明涉及在患者中產(chǎn)生支氣管擴(kuò)張作用的方法，該方法包括給患者給予產(chǎn)生支氣管擴(kuò)張量的式I的化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體。
本發(fā)明還涉及治療慢性阻塞性肺疾病或哮喘的方法，該方法包括給患者給予治療有效量的式I的化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體。
在其方法方面的另一方面，本發(fā)明涉及拮抗哺乳動(dòng)物中毒蕈堿性受體的方法，它包括給所述哺乳動(dòng)物給予治療有效量的式I的化合物。
因?yàn)楸景l(fā)明的化合物具有毒蕈堿性受體拮抗劑活性，所以這類(lèi)化合物還適用作研究工具。因此，在其方法方面的還另一方面，本發(fā)明涉及將式I的化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體用作研究生物系統(tǒng)或樣品的研究工具的方法，或用于發(fā)現(xiàn)新的具有毒蕈堿性受體拮抗劑活性的化合物的方法。
本發(fā)明還涉及適用于制備式I的化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體的方法和新中間體。因此，在其方法方面的另一方面，本發(fā)明涉及制備式I的化合物的方法，該方法包括(a)使式II的化合物與式III的化合物反應(yīng)；或者(b)使式IV的化合物與式V的化合物偶聯(lián)；或者(c)使式VI的化合物與式VII的化合物反應(yīng)；或者(d)使式II的化合物與式VIII的化合物在還原劑的存在下反應(yīng)；或者(e)使式IX的化合物與式VII的化合物在還原劑的存在下反應(yīng)；或者(f)使式XVIII的化合物與式XIX的化合物反應(yīng)；如果必需，然后除去任何保護(hù)基，產(chǎn)生式I的化合物；其中式I-IX，XVIII和XIX的化合物，如本文中定義。
在一個(gè)實(shí)施方案中，上述方法進(jìn)一步包括形成式I化合物的藥學(xué)上可接受的鹽的步驟。在其它的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及本文描述的其它方法；并且涉及通過(guò)本文描述的任意方法制備的產(chǎn)物。
本發(fā)明還涉及用于治療中的或作為藥劑的式I的化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體。
另外，本發(fā)明涉及式I的化合物或者其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體，用于制備藥劑的用途；尤其是用于制備用于治療哺乳動(dòng)物中肺疾病或拮抗毒蕈堿性受體的藥物。
本發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明在其組成方面的一方面，本發(fā)明涉及式I的新的聯(lián)苯基衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體。這些化合物包含一個(gè)或多個(gè)手性中心，因此除非另外指出，本發(fā)明涉及外消旋混合物；純立體異構(gòu)體(即對(duì)映異構(gòu)體或非對(duì)映異構(gòu)體)；富含立體異構(gòu)體的混合物等。除非另外指出，當(dāng)本文展示或命名特定立體異構(gòu)體時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解少量的其它立體異構(gòu)體可以存在于本發(fā)明的組合物中，條件是組合物作為整體的有用性不被這類(lèi)其它異構(gòu)體的存在消除。
本發(fā)明的化合物也包含多個(gè)堿性基團(tuán)(例如氨基基團(tuán))，因此式I化合物可以作為游離堿或以各種鹽形式存在。所有這類(lèi)鹽形式都包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。此外，式I化合物的溶劑合物或其鹽包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
此外，除非另外指出，當(dāng)可適用時(shí)，式I化合物的所有順-反或E/Z異構(gòu)體(幾何異構(gòu)體)、互變異構(gòu)形式和拓?fù)洚悩?gòu)形式包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
式I的化合物，以及在其合成中使用的那些化合物還可以包括同位素標(biāo)記的化合物，即，其中一個(gè)或多個(gè)原子富集有具有不用于自然界主要發(fā)現(xiàn)的原子質(zhì)量的原子質(zhì)量的原子?？梢越Y(jié)合到式(I)化合物中的同位素的例子包括，但不限于2H、3H、13C、14C、15N、18O和17O。
本文采用的用以命名本發(fā)明化合物及其中間體的命名法一般是利用商業(yè)上可購(gòu)得的AutoNom軟件(MDL、San Leandro，California)派生的。通常，其中W是O的式I化合物被命名為聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸的酯衍生物。
有代表性的實(shí)施方案下述取代基和值是為了提供本發(fā)明各方面和實(shí)施方案的有代表性的例子。這些有代表性的值是為了進(jìn)一步定義和說(shuō)明這些方面和實(shí)施方案，并不是為了排除其它實(shí)施方案或限制本發(fā)明的范圍。在這一方面，除非具體指出，優(yōu)選特定值或取代基的表述不是為了以任何方式從本發(fā)明排除其它值或取代基。
a和b的值獨(dú)立地是0、1、2、3、4或5；尤其獨(dú)立地為0、1或2，甚至更特別的是0或1。在一個(gè)實(shí)施方案中，a和b都是0。
當(dāng)存在時(shí)，每個(gè)R1可以位于其所連接的苯基環(huán)的2、3、4、5或6-位。每個(gè)R1獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)環(huán)烷基、氰基、鹵素、-OR1a、-C(O)OR1b、-SR1c、-S(O)R1d、-S(O)2R1e、-NR1fR1g、-NR1hS(O)2R1i和-NR1jC(O)R1k，其例子包括甲基、氟、氯、溴、羥基、甲氧基、氨基、甲氨基、二甲氨基等。R1的特別的值是氟或氯。
當(dāng)存在時(shí)，每個(gè)R2可以位于其所連接的亞苯基環(huán)的3、4、5或6-位(其中與氮原子連接的亞苯基環(huán)上的碳原子是1位)。每個(gè)R2獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)環(huán)烷基、氰基、鹵素、-OR2a、-C(O)OR2b、-SR2c、-S(O)R2d、-S(O)2R2e、-NR2fR2g、-NR2hS(O)2R2i和-NR2jC(O)R2k，其例子包括甲基、氟、氯、溴、羥基、甲氧基、氨基、甲氨基、二甲氨基等。R2的特別的值是氟或氯。
如在R1和R2中分別使用的，每個(gè)R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f、R1g、R1h、R1i、R1j和R1k以及R2a、R2b、R2c、R2d、R2e、R2f、R2g、R2h、R2i、R2j和R2k獨(dú)立地是氫、(1-4C)烷基或苯基(1-4C)烷基，其例子包括氫、甲基、乙基、正-丙基、異丙基、正-丁基、仲-丁基、異丁基、叔-丁基或芐基。在一個(gè)實(shí)施方案中，這些基團(tuán)獨(dú)立地是氫或(1-3C)烷基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，這些基團(tuán)獨(dú)立地是氫、甲基或乙基。另外，R1、R1a-1k、R2和R2a-2k中的每個(gè)烷基和烷氧基任選地被1至5個(gè)氟取代基取代。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，W是O。在另一個(gè)實(shí)施方案中，W是NWa。一般說(shuō)來(lái)，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)其中W表示O的化合物表現(xiàn)出特別高的對(duì)毒蕈堿性受體的親和性。因此，本發(fā)明的特別實(shí)施方案中，W表示O。
當(dāng)W是NWa時(shí)，Wa是氫或(1-4C)烷基，其例子包括氫、甲基、乙基、正-丙基、異丙基、正-丁基、仲-丁基、異丁基和叔-丁基。在一個(gè)實(shí)施方案中，Wa是氫或(1-3C)烷基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，Wa是氫、甲基或乙基，特別是氫或甲基。在還另一個(gè)實(shí)施方案中，Wa是氫并且NWa是NH。
c的值是0、1、2、3、4或5；特別是0、1或2；更特別是0或1。在一個(gè)特別的實(shí)施方案中，c是0。在另一個(gè)實(shí)施方案中，c是2。
每個(gè)R3獨(dú)立地表示(1-4C)烷基或者兩個(gè)R3結(jié)合在一起形成(1-3C)亞烷基、(2-3C)亞烯基或環(huán)氧乙烷-2，3-二基。在一個(gè)實(shí)施方案中，每個(gè)R3獨(dú)立地是(1-4C)烷基，例如甲基、乙基、正-丙基、異丙基、正-丁基、仲-丁基、異丁基和叔-丁基。另外，R3中的每個(gè)烷基任選地被1至5個(gè)氟取代基取代。在一個(gè)實(shí)施方案中，每個(gè)R3獨(dú)立地是(1-3C)烷基，并且在另一個(gè)實(shí)施方案中，每個(gè)R3獨(dú)立地是甲基或乙基。
在一個(gè)實(shí)施方案中，每個(gè)R3處于哌啶環(huán)的3、4或5-位上(其中哌啶環(huán)的氮原子是1位)。在特別的實(shí)施方案中，R3在哌啶環(huán)的4-位上。在另一個(gè)實(shí)施方案中，R3在哌啶環(huán)的1-位上，即，在哌啶環(huán)的氮原子上，因此形成季胺鹽。
在還另一個(gè)實(shí)施方案中，兩個(gè)R3基團(tuán)連接在一起形成(1-3C)亞烷基或(2-3C)亞烯基。例如，在哌啶環(huán)的2和6-位上的兩個(gè)R3基團(tuán)可以結(jié)合形成亞乙基橋(即，哌啶環(huán)和R3基團(tuán)形成8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷環(huán))；或者在哌啶環(huán)的1和4-位上的兩個(gè)R3基團(tuán)可以結(jié)合形成亞乙基橋(即，哌啶環(huán)和R3基團(tuán)形成1-氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷環(huán))。在這一實(shí)施方案中，如本文中所定義的其它的R3基團(tuán)也可以存在。
在還另一個(gè)實(shí)施方案中，兩個(gè)R3基團(tuán)連接在一起形成環(huán)氧乙烷-2，3-二基基團(tuán)。例如，在哌啶環(huán)的2和6-位上的兩個(gè)R3基團(tuán)可以結(jié)合形成3-氧雜三環(huán)[3.3.1.02，4]壬烷環(huán))。在這一實(shí)施方案中，如本文中所定義的其它的R3基團(tuán)也可以存在。
m的值是0或1。在一個(gè)實(shí)施方案中，m是0。
R4表示氫、(1-4C)烷基或(3-4C)環(huán)烷基。(1-4C)烷基的例子包括甲基、乙基、正-丙基、異丙基、正-丁基、仲-丁基、異丁基和叔-丁基。(3-4C)環(huán)烷基基團(tuán)的例子包括環(huán)丙基和環(huán)丁基。在一個(gè)實(shí)施方案中，R4表示氫或(1-3C)烷基，特別是氫、甲基或乙基。在另一個(gè)實(shí)施方案中，R4是氫。
s的值是0、1或2。s的特別的值是0或1。在一個(gè)實(shí)施方案中，s是0。在另一個(gè)實(shí)施方案中，s是2。
Ar1是亞苯基或(3-5C)亞雜芳基，含有1或2個(gè)獨(dú)立地選自氧、氮或硫的雜原子。亞苯基或亞雜芳基可以是未被取代的(q是0)，也可以被1、2、3或4(q是1、2、3或4)個(gè)R5取代基取代，該取代基獨(dú)立地選自鹵素、羥基、(1-4C)烷基或(1-4C)烷氧基。另外，R5中的每個(gè)烷基和烷氧基任選地被1至5個(gè)氟取代基取代。q的值是0、1、2、3或4，特別是0、1、2或3。在一個(gè)實(shí)施方案中，q是0、1或2。對(duì)于Ar1的連接點(diǎn)在任意可利用的碳或雜原子環(huán)原子上。在某些實(shí)施方案中，Ar1是在間位或?qū)ξ贿B接的亞苯基基團(tuán)。
在一個(gè)實(shí)施方案中，Ar1是苯-1，3-亞基或苯-1，4-亞基，其中亞苯基未被取代或被1、2或3個(gè)R5取代基取代。有代表性的R5取代基包括氟、氯、溴、甲基、乙基、正-丙基、異丙基、正-丁基、異丁基、仲-丁基、叔-丁基、甲氧基、乙氧基、異丙氧基、二氟甲基、三氟甲基、2，2，2-三氟乙基和三氟甲氧基。這一實(shí)施方案中的Ar1基團(tuán)的特殊例子包括2-氟苯-1，4-亞基、3-氟苯-1，4-亞基、2-氯苯-1，4-亞基、3-氯苯-1，4-亞基、2-甲基苯-1，4-亞基、3-甲基苯-1，4-亞基、2-甲氧基苯-1，4-亞基、3-甲氧基苯-1，4-亞基、2-三氟甲氧基苯-1，4-亞基、3-三氟甲氧基苯-1，4-亞基、2，3-二氟苯-1，4-亞基、2，5-二氟苯-1，4-亞基、2，6-二氟苯-1，4-亞基、2，3-二氯苯-1，4-亞基、2，5-二氯苯-1，4-亞基、2，6-二氯苯-1，4-亞基、2-氯代-5-甲氧基苯-1，4-亞基、2-氯代-6-甲氧基苯-1，4-亞基、2-氯代-5-三氟甲氧基苯-1，4-亞基、2-氯代-6-三氟甲氧基苯-1，4-亞基和2，5-二溴苯-1，4-亞基。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，Ar1是(3-5C)亞雜芳基，含有1或2個(gè)獨(dú)立地選自氧、氮或硫的雜原子；其中亞雜芳基未被取代或被1或2個(gè)R5取代基取代。有代表性的亞雜芳基包括吡咯、咪唑、噻唑、噁唑、呋喃、噻吩、吡唑、異噁唑、異噻唑、吡啶、吡嗪、噠嗪和嘧啶的二價(jià)基團(tuán)，其中連接點(diǎn)在任意可利用的碳或氮環(huán)原子上。這類(lèi)Ar1基團(tuán)的更特定的例子包括2，5-亞呋喃基、2，4-亞噻吩基、2，5-亞噻吩基、2，5-亞吡啶基、2，6-亞吡啶基和2，5-亞吡咯基。有代表性的R5取代基包括氟、氯、甲基、乙基、正-丙基、異丙基、正-丁基、異丁基、仲-丁基、叔-丁基、甲氧基、乙氧基、異丙氧基、二氟甲基、三氟甲基、2，2，2-三氟乙基和三氟甲氧基。取代的Ar1基團(tuán)的特殊例子包括3-氟-2，5-亞噻吩基、3-氯代-2，5-亞噻吩基、3-甲基-2，5-亞噻吩基、3-甲氧基-2，5-亞噻吩基和3-甲氧基-6-氯代-2，5-亞吡啶基。
在一個(gè)特別的實(shí)施方案中，Ar1表示苯-1，3-亞基、苯-1，4-亞基、2，4-亞噻吩基或2，5-亞噻吩基；其中亞苯基或亞噻吩基任選被1或2個(gè)R5取代基取代。在另一個(gè)特殊的實(shí)施方案中，Ar1表示苯-1，4-亞基或2，4-亞噻吩基，其任選被1或2個(gè)R5取代基取代。
t的值是0、1或2。t的特殊的值是1。
n的值是0、1、2或3。n的特殊的值是1或2。在一個(gè)實(shí)施方案中，n是2。
d的值是0、1、2、3或4。d的特殊的值是0、1或2。在一個(gè)實(shí)施方案中，d是0。
每個(gè)R6獨(dú)立地表示氟或(1-4C)烷基，其例子包括甲基、乙基、正-丙基、異丙基、正-丁基、仲-丁基、異丁基和叔-丁基。另外，R6中的每個(gè)烷基和烷氧基任選地被1至5個(gè)氟取代基取代。在一個(gè)實(shí)施方案中，每個(gè)R6獨(dú)立地表示氟或(1-3C)烷基，并且在另一個(gè)實(shí)施方案中，每個(gè)R6獨(dú)立地選自氟、甲基、乙基或三氟甲基。
p的值是0或1。在一個(gè)特別的實(shí)施方案中，p是0。
R7和R8各自獨(dú)立地表示氫或(1-4C)烷基，其例子包括甲基、乙基、正-丙基、異丙基、正-丁基、仲-丁基、異丁基和叔-丁基。在一個(gè)實(shí)施方案中，R7和R8各自獨(dú)立地表示氫或(1-3C)烷基。在特別的實(shí)施方案中，R7是氫、甲基、乙基、正-丙基或異丙基并且R8是氫。在另一個(gè)特殊的實(shí)施方案中、R7和R8都是氫或都是乙基。另外，R7和R8中的每個(gè)烷基和烷氧基任選地被1至5個(gè)氟取代基取代。
如在式I中所注釋的，-CONR7R8基團(tuán)可以位于環(huán)上的任意碳原子上。例如，當(dāng)n是2時(shí)，-CONR7R8基團(tuán)可以位于鄰、間或?qū)ξ弧Ｔ谝粋€(gè)實(shí)施方案中，-CONR7R8基團(tuán)位于間或?qū)ξ唬徊⑶以谔厥獾膶?shí)施方案中，-CONR7R8基團(tuán)位于對(duì)位。
一組特殊的目標(biāo)化合物是式I的化合物，其中a、b、c和d是0；n是2；并且R4是氫、甲基或乙基。
另一組特殊的目標(biāo)化合物是式I的化合物，其中a、b、c和d是0；R4是氫、甲基或乙基；并且R7是氫。
另一組特殊的目標(biāo)化合物是式I的化合物其中a、b、c和d是0；R4是氫、甲基或乙基；R7是氫、甲基、乙基、正-丙基或異丙基和R8是氫。
另一組特殊的目標(biāo)化合物是式I的化合物其中a、b、c和d是0；R4是氫、甲基或乙基；并且R7和R8是乙基。
另一組特殊的目標(biāo)化合物是式I的化合物其中a、b、c和d是0；R4是氫、甲基或乙基；R7和R8是氫；并且s是0。
另一組特殊的目標(biāo)化合物是式I的化合物其中a、b、c和d是0；R4是氫、甲基或乙基；R7和R8是氫；s是0；并且t是1。
另一組特殊的目標(biāo)化合物是式I的化合物其中a、b、c和d是0；R4是氫、甲基或乙基；R7和R8是氫；s是0；t是1；并且m是0。
有代表性的亞屬基團(tuán)下面的亞屬式和基團(tuán)是用來(lái)提供本發(fā)明的各個(gè)方面和實(shí)施方案的有代表性的例子，這樣除非另有說(shuō)明，它們不用來(lái)將其它實(shí)施方案排除在外，也不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。
一組特殊的式I的化合物是在2004年3月11日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)No.60/552,443中公開(kāi)的那些化合物。該組包括式Ia的化合物，或者其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體 其中a是0或1至3的整數(shù)；每個(gè)R1獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)環(huán)烷基、氰基、鹵素、-OR1a、-C(O)OR1b、-SR1c、-S(O)R1d、-S(O)2R1e和-NR1fR1g；R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f和R1g中的每一個(gè)獨(dú)立地是氫、(1-4C)烷基或苯基(1-4C)烷基；b是0或1至3的整數(shù)；每個(gè)R2獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)環(huán)烷基、氰基、鹵素、-OR2a、-C(O)OR2b、-SR2c、-S(O)R2d、-S(O)2R2e和-NR2fR2g；R2a、R2b、R2c、R2d、R2e、R2f和R2g中的每一個(gè)獨(dú)立地是氫、(1-4C)烷基或苯基(1-4C)烷基；W代表O或NWa，其中Wa是氫或(1-4C)烷基；c是0或1至4的整數(shù)；每個(gè)R3獨(dú)立地表示(1-4C)烷基；m是0或1；R4是氫或(1-4C)烷基；s是0或1；Ar1表示亞苯基或(3-5C)亞雜芳基，含有1或2個(gè)獨(dú)立地選自氧、氮或硫的雜原子；其中亞苯基或亞雜芳基被(R5)q取代，其中q是0或1至4的整數(shù)并且每個(gè)R5獨(dú)立地選自鹵素、羥基、(1-4C)烷基或(1-4C)烷氧基；t是0或1；n是0、1或2；d是0或1至4的整數(shù)；每個(gè)R6獨(dú)立地表示氟或(1-4C)烷基；并且
R7是氫或(1-4C)烷基；其中R1、R1a-1g、R2、R2a-2g、R3、R5、R6或R7中的每個(gè)烷基和烷氧基任選被1至5個(gè)氟取代基取代。
該組還包括式Ib的化合物，或者其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體 其中R4、q、R5和R7如關(guān)于式Ia所定義。特殊實(shí)施方案包括式Ib的化合物，其中q是0、1或2并且R5獨(dú)立地選自鹵素、(1-4C)烷基或(1-4C)烷氧基，其中每個(gè)烷基和烷氧基任選被1至3個(gè)氟取代基取代。
另外，感興趣的特殊的式I化合物包括聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲?；鵠乙氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{甲基-[4-(4-甲基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲?；鵠氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-乙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{甲基-[4-(4-丙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲?；鵠氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-異丙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-2-氟苯甲酰氨基]乙基}哌啶-4-基酯；
聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[2，5-二溴代-4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-2-氟苯甲酰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[4-(4-二乙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-2-氟苯甲酰氨基]乙基}哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-二乙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-2-氟苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-二乙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(3-(S)-二乙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[4-(2氨基甲?；?哌啶-1-基甲基)苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨基甲酰基-哌啶-1-基甲基)-2-甲氧基苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)噻吩-2-羰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-((R)-3-二乙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)噻吩-2-羰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-((R)-3-二乙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)噻吩-2-羰基]氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)噻吩-2-羰基]氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-((R)-3-二乙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-1H-吡咯-2-羰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-1H-吡咯-2-羰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-((R)-3-二乙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)呋喃-2-羰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-(4-二乙基氨基甲酰基-哌啶-1-基甲基)呋喃-2-羰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)呋喃-2-羰基]-氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-((R)-3-二乙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)呋喃-2-羰基]氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-[2-({3-[4-(3-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯基]丙?；鶀甲氨基)乙基]哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-[2-({3-[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯基]丙?；鶀甲氨基)乙基]哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{3-[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯基]丙酰氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{3-[4-(4-二乙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯基]丙酰氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{3-[4-(3-二乙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯基]丙酰氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲酰氨基]乙基}哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-2-氯代-苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-2-氯代-5-甲氧基苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；以及聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-({2-[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯基]乙酰基}甲氨基)乙基]哌啶-4-基酯；或者它們的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。
定義當(dāng)描述本發(fā)明的化合物、組合物、方法和過(guò)程時(shí)，除非另外指出，下述術(shù)語(yǔ)具有下述含義。
術(shù)語(yǔ)“烷基”指可能是直鏈或支鏈的一價(jià)飽和烴基。除非另外定義，這種烷基基團(tuán)通常包含1-10個(gè)碳原子。有代表性的烷基基團(tuán)包括，甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基等。
術(shù)語(yǔ)“亞烷基”指可能是直鏈或支鏈的二價(jià)飽和烴基。除非另外定義，這種亞烷基基團(tuán)通常包含1-10個(gè)碳原子。有代表性的亞烷基基團(tuán)包括，亞甲基、乙烷-1，2-二基(“亞乙基”)、丙烷-1，2-二基、丙烷-1，3-二基、丁烷-1，4-二基、戊烷-1，5-二基等。
術(shù)語(yǔ)“烷氧基”指式(烷基)-O-的一價(jià)基團(tuán)，其中烷基如本文所定義。有代表性的烷氧基基團(tuán)包括，甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、異丁氧基、叔丁氧基等。
術(shù)語(yǔ)“烯基”指可能是直鏈或支鏈的一價(jià)不飽和烴基，其具有至少1個(gè)，通常有1、2或3個(gè)碳碳雙鍵。除非另外定義，這種烯基基團(tuán)通常包含2-10個(gè)碳原子。有代表性的烯基基團(tuán)包括，通過(guò)舉例，乙烯基，正丙烯基，異丙烯基，正丁-2-烯基，正己-3-烯基等。術(shù)語(yǔ)“亞烯基”指二價(jià)烯基基團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)“炔基”指可能是直鏈或支鏈的一價(jià)不飽和烴基，其具有至少1個(gè)，通常有1、2或3個(gè)碳碳三鍵。除非另外定義，這種炔基基團(tuán)通常包含2-10個(gè)碳原子。有代表性的炔基基團(tuán)包括，乙炔基、正丙炔基、正丁-2-炔基、正己-3-炔基等。術(shù)語(yǔ)“亞炔基”指二價(jià)炔基基團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)“芳基”指具有單環(huán)(即苯基)或稠合環(huán)(即萘)的一價(jià)芳族烴。除非另外定義，這種芳基基團(tuán)通常包含6-10個(gè)碳環(huán)原子。有代表性的芳基基團(tuán)包括，苯基和萘-1-基、萘-2-基等。術(shù)語(yǔ)“亞芳基”指二價(jià)芳基基團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)“氮雜環(huán)烷基”指包含一個(gè)氮原子的一價(jià)雜環(huán)，即其中一個(gè)碳原子被氮原子取代的環(huán)烷基基團(tuán)。除非另外定義，這類(lèi)氮雜環(huán)烷基基團(tuán)通常包含2-9個(gè)碳原子。氮雜環(huán)烷基基團(tuán)的有代表性的例子是吡咯烷基和哌啶基基團(tuán)。術(shù)語(yǔ)“亞氮雜環(huán)烷基”指二價(jià)氮雜環(huán)烷基基團(tuán)。亞氮雜環(huán)烷基基團(tuán)的有代表性的例子是亞吡咯烷基和亞哌啶基基團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”指一價(jià)飽和的碳環(huán)烴基。除非另外定義，這種環(huán)烷基基團(tuán)通常包含3-10個(gè)碳原子。有代表性的環(huán)烷基基團(tuán)包括，通過(guò)舉例、環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。術(shù)語(yǔ)“環(huán)亞烷基”指二價(jià)環(huán)烷基基團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)“鹵素”指氟、氯、溴和碘。
術(shù)語(yǔ)“雜芳基”指具有單環(huán)或兩個(gè)稠合環(huán)并且在環(huán)中包含至少一個(gè)(通常1-3個(gè)雜原子)選自氮、氧或硫的雜原子的一價(jià)芳基。除非另外定義，這種雜芳基基團(tuán)通常包含5-10個(gè)總環(huán)原子。有代表性的雜芳基基團(tuán)包括，通過(guò)舉例，吡咯，咪唑，噻唑，噁唑，呋喃，噻吩，三唑，吡唑，異噁唑，異噻唑，吡啶，吡嗪，噠嗪，嘧啶，三嗪，吲哚，苯并呋喃，苯并噻吩，苯并咪唑，苯并噻唑，喹啉，異喹啉，喹唑啉，喹噁啉等的一價(jià)類(lèi)，其中連接點(diǎn)是在任何可用的碳或氮環(huán)原子。術(shù)語(yǔ)“亞雜芳基”指二價(jià)雜芳基基團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)基”或“雜環(huán)”指具有單環(huán)或多稠合環(huán)且在環(huán)中包含至少一個(gè)選自氮、氧或硫的雜原子(通常1-3個(gè)雜原子)的一價(jià)飽和或不飽和(非芳香)基團(tuán)。除非另外定義，這種雜環(huán)基團(tuán)通常包含2-9個(gè)總環(huán)碳原子。有代表性的雜環(huán)基團(tuán)包括，一價(jià)類(lèi)的吡咯烷、咪唑烷、吡唑烷、哌啶、1、4-二噁烷、嗎啉、硫代嗎啉、哌嗪、3-吡咯林等，其中連接點(diǎn)是在任何可用的碳或氮環(huán)原子。術(shù)語(yǔ)“亞雜環(huán)基”指二價(jià)雜環(huán)基或雜環(huán)基團(tuán)。
關(guān)于本文采用的特定術(shù)語(yǔ)當(dāng)意指碳原子的特定數(shù)目時(shí)，在術(shù)語(yǔ)前的括號(hào)中顯示碳原子數(shù)目。例如，術(shù)語(yǔ)“(1-4C)烷基”指具有1-4個(gè)碳原子的烷基基團(tuán)。
術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的鹽”指能被接受用來(lái)給予患者例如哺乳動(dòng)物的鹽(例如對(duì)于給定的劑量方案具有可接受的哺乳動(dòng)物安全性的鹽)。這種鹽可以衍生自藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)或有機(jī)堿和衍生自藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)或有機(jī)酸。衍生自藥學(xué)上可接受的無(wú)機(jī)堿的鹽包括銨、鈣、銅、三價(jià)鐵、二價(jià)鐵、鋰、鎂、三價(jià)錳、二價(jià)錳、鉀、鈉、鋅等。特別優(yōu)選的是銨、鈣、鎂、鉀和鈉鹽。衍生自藥學(xué)上可接受的有機(jī)堿的鹽包括伯胺鹽、仲胺鹽何叔胺鹽，包括取代的胺、環(huán)胺、天然形成的胺等，例如精氨酸、甜菜堿、咖啡因、膽堿、N、N′-二芐基亞乙基二胺、二乙基胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、亞乙基二胺、N-乙基嗎啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡糖、組氨酸、海巴明、異丙基胺、賴(lài)氨酸、甲基葡萄糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶(piperadine)、聚胺樹(shù)脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙基胺、三甲基胺、三丙基胺、氨丁三醇等。來(lái)自藥學(xué)上可接受的酸的鹽包括醋酸鹽、抗壞血酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、樟腦磺酸鹽、檸檬酸鹽、乙磺酸鹽、乙二磺酸鹽、富馬酸鹽、龍膽酸鹽、葡糖酸鹽、葡萄糖醛酸鹽、谷氨酸鹽、馬尿酸鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、羥乙磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、馬來(lái)酸鹽、蘋(píng)果酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、粘液酸鹽、萘磺酸鹽、萘-1，5-二磺酸鹽、萘-2，6-二磺酸鹽、煙堿酸鹽、硝酸鹽、乳清酸鹽、雙羥萘酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、對(duì)-甲苯磺酸鹽、昔萘酸鹽等。特別優(yōu)選的是檸檬酸鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、羥乙磺酸鹽、馬來(lái)酸鹽、萘-1，5-二磺酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽和酒石酸鹽。
術(shù)語(yǔ)“其鹽”指當(dāng)一種酸的氫被陽(yáng)離子例如金屬陽(yáng)離子或有機(jī)陽(yáng)離子等取代形成的化合物。優(yōu)選地，該鹽是藥學(xué)上可接受的鹽，但是對(duì)于不是給予患者的中間體化合物的鹽來(lái)說(shuō)不需要這樣。
術(shù)語(yǔ)“溶劑合物”指通過(guò)一種溶質(zhì)即式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的一個(gè)或多個(gè)分子與一種溶劑的一個(gè)或多個(gè)分子形成的復(fù)合物或聚集體。這種“溶劑合物”通常是具有實(shí)質(zhì)上固定摩爾比的溶質(zhì)和溶劑的結(jié)晶固體。有代表性的溶劑包括水、甲醇、乙醇、異丙醇、醋酸等。當(dāng)溶劑是水時(shí)，形成的溶劑合物是水合物。
將理解，術(shù)語(yǔ)“或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體”指包括鹽、溶劑合物和立體異構(gòu)體的所有置換，例如式I化合物的立體異構(gòu)體的藥學(xué)上可接受的鹽的溶劑合物。
術(shù)語(yǔ)“治療有效量”指當(dāng)給予需要治療的患者時(shí)足以實(shí)現(xiàn)治療的量。
本文采用的術(shù)語(yǔ)“治療(treating)”或“治療(treatment)”指治療患者例如哺乳動(dòng)物(尤其是人)的疾病或醫(yī)學(xué)狀況(例如COPD)，這包括(a)預(yù)防疾病或醫(yī)學(xué)狀況發(fā)生，即預(yù)防性治療患者；(b)改善疾病或醫(yī)學(xué)狀況，即在患者中消除或使疾病或醫(yī)學(xué)狀況消退；(c)遏制疾病或醫(yī)學(xué)狀況，即在患者中延緩或阻止疾病或醫(yī)學(xué)狀況的發(fā)展；或者(d)在患者中減輕疾病或醫(yī)學(xué)狀況的癥狀。
術(shù)語(yǔ)“離去基團(tuán)”指在取代反應(yīng)例如親核取代反應(yīng)中能夠被另一官能團(tuán)或原子取代的一個(gè)官能團(tuán)或原子。有代表性的離去基團(tuán)包括氯、溴和碘基團(tuán)；磺酸酯基團(tuán)，例如甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、對(duì)溴苯磺酸酯、對(duì)硝基苯磺酸酯等；以及酰氧基基團(tuán)，例如乙酰氧基，三氟乙酰氧基等。
術(shù)語(yǔ)“其受保護(hù)的衍生物”指其中化合物的一個(gè)或多個(gè)官能團(tuán)被用保護(hù)或封端基團(tuán)保護(hù)免于參與不需要的反應(yīng)的特定化合物的衍生物?？梢员槐Ｗo(hù)的官能團(tuán)包括，羧酸基團(tuán)、氨基基團(tuán)、羥基基團(tuán)、硫羥基團(tuán)、羰基基團(tuán)等。羧酸的有代表性的保護(hù)基團(tuán)包括酯類(lèi)(例如對(duì)甲氧基芐基酯)、酰胺類(lèi)和酰肼類(lèi)；對(duì)于氨基基團(tuán)，氨基甲酸酯類(lèi)(例如叔-丁氧基羰基)和酰胺類(lèi)；對(duì)于羥基基團(tuán)，醚類(lèi)和酯類(lèi)；對(duì)于硫羥基團(tuán)，硫醚類(lèi)和硫酯類(lèi)；對(duì)于羰基基團(tuán)，縮醛類(lèi)和縮酮類(lèi)；等等。這些保護(hù)基團(tuán)對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是公知的，并且例如在T.W.Greene和G.M.Wuts，Protecting Groups In Organic Synthesis，Third Edition，Wiley，New York，1999及其中引用的參考文獻(xiàn)中有描述。
術(shù)語(yǔ)“氨基-保護(hù)基團(tuán)”指適于在氨基基團(tuán)防止不需要的反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)。有代表性的氨基-保護(hù)基團(tuán)包括，但不限于，叔丁氧基羰基(BOC)、三苯甲基(Tr)、芐氧基羰基(Cbz)、9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)、甲?；?、三甲基甲硅烷基(TMS)、叔-丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等。
術(shù)語(yǔ)“羧基-保護(hù)基團(tuán)”指適于在羧基基團(tuán)防止不需要的反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)。有代表性的羧基-保護(hù)基團(tuán)包括，但不限于，酯，例如甲基、乙基、叔丁基、芐基(Bn)、對(duì)甲氧基芐基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)、三甲基甲硅烷基(TMS)、叔-丁基二甲基甲硅烷基(TBS)、二苯基甲基(二苯甲基、DPM)等。
術(shù)語(yǔ)“羥基-保護(hù)基團(tuán)”指適于在羥基基團(tuán)防止不需要的反應(yīng)的保護(hù)基團(tuán)。有代表性的羥基-保護(hù)基團(tuán)包括，但不限于，甲硅烷基基團(tuán)，包括三(1-6C)烷基甲硅烷基基團(tuán)，例如三甲基甲硅烷基(TMS)、三乙基甲硅烷基(TES)、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS)等；酯類(lèi)(酰基基團(tuán))包括(1-6C)烷?；鶊F(tuán)，例如甲?；?，乙酰基等；芳基甲基基團(tuán)，例如芐基(Bn)、對(duì)甲氧基芐基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)、二苯基甲基(二苯甲基，DPM)等。此外，兩個(gè)羥基基團(tuán)也可以作為一個(gè)亞烷基被保護(hù)，例如丙-2-亞基(ylidine)，例如通過(guò)與酮例如丙酮反應(yīng)形成的。
一般合成方法本發(fā)明的聯(lián)苯基化合物可以利用下述一般方法和步驟，或通過(guò)應(yīng)用對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)容易獲得的其它信息，由容易獲得的原料來(lái)制備。雖然本文可能顯示或描述本發(fā)明的特殊實(shí)施方案，但是本領(lǐng)域那些技術(shù)人員將會(huì)認(rèn)識(shí)到，利用本文描述的方法或者通過(guò)應(yīng)用對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其它方法、試劑和原料，可以制備本發(fā)明的所有實(shí)施方案或方面。也將會(huì)理解，除非另外陳述，當(dāng)給出一般或優(yōu)選的方法條件(即反應(yīng)溫度、時(shí)間、反應(yīng)物的摩爾比、溶劑、壓力等)時(shí)，也能使用其它方法條件。雖然最佳反應(yīng)條件可以隨著采用的特定反應(yīng)物或溶劑變化，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員通過(guò)常規(guī)優(yōu)化程序能夠容易地確定這些條件。
此外，如對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員將顯而易見(jiàn)的是，為防止某些官能團(tuán)進(jìn)行不合需要的反應(yīng)，常規(guī)保護(hù)基團(tuán)可能是必需的或期望的。對(duì)于特殊官能團(tuán)的合適保護(hù)基團(tuán)以及這種官能團(tuán)的保護(hù)和脫保護(hù)的合適條件的選擇，在本領(lǐng)域中是公知的。如果需要，可以采用除在本文描述的方法中說(shuō)明的那些之外的保護(hù)基團(tuán)。例如，大量的保護(hù)基團(tuán)，以及它們的引入和除去，在T.W.Greene和G.M.Wuts，ProtectingGroups In Organic Synthesis，Third Edition，Wiley，New York，1999及其中引用的參考文獻(xiàn)中有描述。
舉例來(lái)說(shuō)，可以通過(guò)包括如下步驟的方法制備式I的化合物(a)使式II的化合物 或其鹽，與式III的化合物反應(yīng) 其中Z1表示離去基團(tuán)；或者(b)使式IV的化合物 與式V的化合物 或其反應(yīng)性衍生物偶聯(lián)；或者(c)使式VI的化合物
其中Z2表示離去基團(tuán)；與式VII的化合物反應(yīng) (d)使式II的化合物與式VIII的化合物 在還原劑的存在下反應(yīng)；或者(e)使式IX的化合物 與式VII的化合物在還原劑的存在下反應(yīng)；或者(f)使式XVIII的化合物 其中R’是H、-CH3或-CH2CH3，與式XIX的化合物反應(yīng)
NHR7R8XIX然后(g)除去可能存在的任何保護(hù)基，產(chǎn)生式I的化合物；并且任選地，形成其藥學(xué)上可接受的鹽。
一般說(shuō)來(lái)，如果在上述方法中使用原料之一的鹽，例如酸加成鹽，該鹽通常在反應(yīng)過(guò)程之前或在反應(yīng)過(guò)程中被中和。該中和反應(yīng)通常通過(guò)對(duì)于每摩爾當(dāng)量的酸加成鹽來(lái)說(shuō)，使所述鹽與一摩爾當(dāng)量的堿接觸來(lái)完成。
在步驟(a)中，式II化合物和III化合物之間的反應(yīng)，Z1代表的離去基團(tuán)可以是，例如，鹵素，例如氯、溴或碘，或磺酸酯基，例如甲磺酸酯或甲苯磺酸酯。在堿，例如，叔胺例如二異丙基乙胺的存在下，方便地進(jìn)行該反應(yīng)。常規(guī)的溶劑包括腈類(lèi)，例如乙腈。在0℃至100℃下方便地進(jìn)行該反應(yīng)。
在本領(lǐng)域中式II的化合物一般是已知的，或者可以通過(guò)式X的化合物脫保護(hù)來(lái)制備 其中P1表示氨基保護(hù)基，例如芐基。使用氫氣或甲酸銨和第VIII族金屬催化劑，例如鈀，通過(guò)還原方便地除去芐基。當(dāng)W表示NWa時(shí)，使用Pearlman’s催化劑(Pd(OH)2)方便地進(jìn)行氫化。
可以通過(guò)如下步驟制備式X的化合物使式XI的異氰酸酯化合物
XI與式XII的化合物反應(yīng) 式III的化合物可以從其中Z1表示羥基的相應(yīng)的化合物開(kāi)始進(jìn)行制備，例如，通過(guò)鹵化劑，例如亞硫酰氯的反應(yīng)，得到式III的化合物，其中Z1表示鹵素，例如氯。其中Z1表示羥基的化合物可以被制備，例如，通過(guò)使式V的化合物與適合的氨基取代的醇，例如2-氨基乙醇或3-氨基丙烷-1-醇反應(yīng)。
在步驟(b)中，使式IV的化合物與式V的化合物或其反應(yīng)性衍生物反應(yīng)。至于化合物V的“反應(yīng)性衍生物”，它是指羧酸被活化，例如，通過(guò)形成醛或羧酸鹵化物，例如羧酸氯化物。或者，可以使用常規(guī)羧酸/胺偶聯(lián)試劑，例如碳二亞胺類(lèi)，O-(7-氮雜苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’四甲尿鎓六氟磷酸鹽(HATU)等活化羧酸。在常規(guī)形成酰胺鍵的條件下可方便地進(jìn)行該反應(yīng)。該步驟在-10℃至100℃范圍內(nèi)的溫度下方便地進(jìn)行。
可以通過(guò)如下步驟制備式IV的化合物使式II的化合物與式XIII的化合物OHC(CH2)mCH2NR4P2XIII其中P2表示氫或氨基保護(hù)基，例如芐基，在還原劑，例如三乙酰氧基硼氫化鈉的存在下反應(yīng)，如果需要接著通過(guò)例如在鈀存在下的氫化，除去氨基保護(hù)基P2。
可以通過(guò)如下步驟制備式V的化合物使式VII的化合物與式XIV反應(yīng) 其中P3表示氫或羧基保護(hù)基，例如甲基或乙基，并且Z3表示離去基團(tuán)，如果需要接著除去羧基保護(hù)基P3?；蛘?，這類(lèi)化合物可以通過(guò)將式XV的化合物 用式VII的化合物在常規(guī)反應(yīng)條件下，例如關(guān)于步驟(d)和(e)所述的那些條件下，還原性氨基化來(lái)制備。
關(guān)于步驟(c)，Z2代表的離去基團(tuán)可以是，例如，鹵素，例如氯、溴或碘，或磺酸酯基，例如甲磺酸酯基或甲苯磺酸酯基。該反應(yīng)方便地在堿，例如，叔胺例如二異丙基乙胺的存在下進(jìn)行。常用的溶劑包括腈類(lèi)，例如乙腈。該反應(yīng)方便地在0℃至100℃范圍內(nèi)的溫度下進(jìn)行。式VI的化合物可以通過(guò)使式IV的化合物與式XVI的化合物 或其反應(yīng)性衍生物，例如?；然蛩狒磻?yīng)來(lái)制備。按照例如，本文所述步驟(b)的方法，可便利地進(jìn)行該反應(yīng)。式VII的化合物一般是已知的或者可以使用公知的合成方法，由可輕易獲得的原料進(jìn)行制備。
在步驟(d)中，還原劑可以是，例如，在第VIII族金屬催化劑，例如鈀存在下的氫氣，或金屬氫化物還原劑，例如硼氫化物，包括三乙酰氧基硼氫化鈉。適合的溶劑包括醇類(lèi)，例如甲醇。該反應(yīng)便利地在0℃至100℃范圍內(nèi)的溫度下進(jìn)行。式VIII的化合物可以通過(guò)氧化對(duì)應(yīng)于其中Z1表示羥基的式III的化合物進(jìn)行制備。這類(lèi)氧化反應(yīng)可以，例如，使用二氧化硫吡啶復(fù)合物，在二甲基亞砜中，在叔胺，例如二異丙基乙胺的存在下來(lái)進(jìn)行。
在步驟(e)中，還原劑可以是，例如，在第VIII族金屬催化劑，例如鈀存在下的氫氣，或金屬氫化物還原劑，包括硼氫化物，例如三乙酰氧基硼氫化鈉，任選與四醇鈦，例如四異丙醇鈦聯(lián)合使用。適宜的溶劑包括醇類(lèi)，例如甲醇和鹵代烴類(lèi)，例如二氯甲烷。該反應(yīng)便利地在0℃至100℃范圍內(nèi)的溫度下進(jìn)行。式IX的化合物可以通過(guò)使式IV的化合物與式XVII的化合物 在羧酸/胺偶聯(lián)劑，例如1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(EDC)和1-羥基苯并三唑水合物(HOBT)等存在下反應(yīng)來(lái)制備。
關(guān)于步驟(f)，式XVIII的化合物可以通過(guò)使式IX的化合物與式VII的化合物在還原劑，例如三乙酰氧基硼氫化鈉的存在下反應(yīng)來(lái)制備，與在步驟(e)中進(jìn)行的類(lèi)似。
正如對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員顯而易見(jiàn)的，使用本領(lǐng)域中公知的方法和試劑，可以進(jìn)一步將通過(guò)步驟(a)到(f)中的任一步驟制備的式I的化合物衍生化，以形成其它的式I化合物。舉例來(lái)說(shuō)，可以使式I的化合物與溴反應(yīng)，得到其中R2，例如，表示溴基團(tuán)的相應(yīng)的式I化合物。另外，可以將其中R4表示氫原子的式I化合物烷基化，得到其中R4表示(1-4C)烷基的相應(yīng)的式I化合物。
本文描述的某些中間體被認(rèn)為是新的，因此作為本發(fā)明的另一方面，提供這類(lèi)化合物，包括例如，式III、V和VIII的化合物，及其鹽。
在下面給出的實(shí)施例中描述了關(guān)于制備本發(fā)明有代表性的化合物或其中間體的具體反應(yīng)條件或其它方法的進(jìn)一步細(xì)節(jié)。
藥物組合物和制劑本發(fā)明的聯(lián)苯基化合物通常是以藥物組合物或制劑形式對(duì)患者給藥的。這類(lèi)藥物組合物可以通過(guò)任何可接受的給藥途徑對(duì)患者給藥，包括但不限于，吸入、口服、鼻用、局部(包括透皮)和腸胃外給藥方式。
應(yīng)該理解，適于特定給藥模式的本發(fā)明化合物的任何形式(即游離堿、藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑合物等等)可以被用在本文討論的藥物組合物中。
因此，在本發(fā)明組合物方面之一，本發(fā)明涉及包含藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑和治療有效量的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體的藥物組合物。任選地，如果需要，這類(lèi)藥物組合物可以包含其它治療劑和/或制劑用物質(zhì)。
本發(fā)明的藥物組合物通常包含治療有效量的本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體。通常，這類(lèi)藥物組合物將包含約0.01至約95％重量的活性劑；包括約0.01至約30％重量；例如約0.01至約10％重量的活性劑。
任何常規(guī)載體或賦形劑可以被用在本發(fā)明的藥物組合物中。特定載體或賦形劑，或者載體或賦形劑的組合的選擇，將取決于被用于治療特定患者的給藥模式或醫(yī)學(xué)狀況或疾病狀態(tài)的類(lèi)型。在這點(diǎn)上，用于特定給藥模式的合適藥物組合物的制備完全在藥物領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)。此外，用于這類(lèi)組合物的成分是商業(yè)上可購(gòu)得的，例如購(gòu)自Sigma，P.O.Box 14508，St.Louis，MO 63178。進(jìn)一步舉例來(lái)說(shuō)，在RemingtonThe Science and Practice of Pharmacy，第20版，Lippincott Williams & White，Baltimore，Maryland(2000)；和H.C.Ansel等人，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug DeliverySystems，第7版，Lippincott Williams & White，Baltimore，Maryland(1999)中描述了常規(guī)制劑技術(shù)。
可以作為藥學(xué)上可接受的載體的物質(zhì)的有代表性的例子包括，但不限于，下述物質(zhì)(1)糖類(lèi)，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；(3)纖維素及其衍生物，例如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和醋酸纖維素；(4)粉末狀黃蓍膠；(5)麥芽；(6)明膠；(7)滑石粉；(8)賦形劑，例如可可脂和栓劑蠟類(lèi)；(9)油，例如花生油、棉籽油、紅花油、麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；(10)二醇類(lèi)，例如丙二醇；(11)多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯類(lèi)，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩沖劑，例如氫氧化鎂和氫氧化鋁；(15)海藻酸；(16)無(wú)熱原的水；(17)等滲鹽水；(18)林格溶液；(19)乙醇；(20)磷酸鹽緩沖液；(21)壓縮推進(jìn)氣體，例如氯氟碳和氫氟碳；和(22)在藥物組合物中使用的其它無(wú)毒相容性物質(zhì)。
本發(fā)明的藥物組合物通常是通過(guò)徹底地和密切地混合或摻合本發(fā)明的化合物和藥學(xué)上可接受的載體和一種或多種任選的成分來(lái)制備的。如果必需或需要，可以利用常規(guī)方法和設(shè)備將得到的均勻混合的混合物塑形或加載到片劑、膠囊、丸劑、罐、藥筒等中。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物適于吸入給藥。用于吸入給藥的適合藥物組合物通常是氣霧劑或粉末形式。這類(lèi)組合物通常利用公知的給藥裝置給藥，例如霧化器吸入器、定量吸入器(MDI)、干粉吸入器(DPI)或類(lèi)似的給藥裝置。
在本發(fā)明的特定實(shí)施方案中，包含活性劑的藥物組合物是利用霧化器吸入器通過(guò)吸入給藥的。這種霧化器裝置通常產(chǎn)生高速氣流，它使得包含活性劑的藥物組合物作為霧被噴入患者的呼吸道。因此，當(dāng)被配制用于在霧化器吸入器中時(shí)，活性劑通常被溶解在合適的載體中以形成溶液。或者，可以將活性劑微粉化且與合適的載體混合，以形成可吸入大小的微粉化顆粒的懸浮液，其中微粉化通常被定義為大約90％或更多的顆粒具有小于約10μm的直徑。合適的霧化器裝置被商業(yè)上提供，例如由PARI GmbH(Starnberg，德國(guó))。其它的霧化器裝置包括Respimat(Boehringer Ingelheim)和那些例如在Lloyd等人的美國(guó)專(zhuān)利No.6,123,068和WO 97/12687(Eicher等人)中公開(kāi)的裝置。
用于霧化器吸入器中的有代表性的藥物組合物包括等滲水溶液，它包含約0.05μg/mL至約10mg/mL式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體。
在本發(fā)明的另一個(gè)特定實(shí)施方案中，包含活性劑的藥物組合物是利用干粉吸入器通過(guò)吸入給藥的。這種干粉吸入器通常給予自由流動(dòng)粉末形式的活性劑，其在吸入期間分散在患者的氣流中。為了獲得自由流動(dòng)的粉末，通常將活性劑與合適的賦形劑例如乳糖或淀粉一起配制。
用于干粉吸入器中的有代表性的藥物組合物的例子包括顆粒大小在約1μm和約100μm之間的干乳糖和式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體的微粉化顆粒。
這種干粉制劑可以，例如通過(guò)將乳糖和活性劑混合，然后干混合組分來(lái)制備?；蛘撸绻枰?，可以不用賦形劑來(lái)配制活性劑。然后通常將藥物組合物裝入干粉分配器中，或裝入與干粉給藥裝置一起使用的吸入藥筒或膠囊。
干粉吸入器給藥裝置的例子包括Diskhaler(GlaxoSmith Kline，Research Triangle Park，NC)(例如，參見(jiàn)Newell等人的美國(guó)專(zhuān)利No.5,035,237)；Diskus(GlaxoSmithKline)(例如，參見(jiàn)Davies等人的美國(guó)專(zhuān)利No.6,378,519；Turbuhaler(AstraZeneca，Wilmington，DE)(例如，參見(jiàn)Wetterlin等人的美國(guó)專(zhuān)利No.4,524,769)；Rotahaler(GlaxoSmithKline)(例如，參見(jiàn)Hallworth等人的美國(guó)專(zhuān)利No.4,353,365)和Handihaler(Boehringer Ingelheim)。在Casper等人的美國(guó)專(zhuān)利No.5,415,162、Evans等人的美國(guó)專(zhuān)利No.5,239,993和Armstrong等人的美國(guó)專(zhuān)利No.5,715,810及其中引用的參考文獻(xiàn)中描述了合適的DPI裝置的另外的例子。
在本發(fā)明的還另一個(gè)特定實(shí)施方案中，包含活性劑的藥物組合物是利用定量吸入器通過(guò)吸入給藥的。這種定量吸入器通常利用壓縮推進(jìn)氣體放出測(cè)定量的活性劑或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體。因此，利用定量吸入器給藥的藥物組合物通常包含活性劑在液化推進(jìn)劑中的溶液或懸浮液?？梢圆捎萌魏魏线m的液化推進(jìn)劑，包括含氯氟烴，例如CCl3F和氫氟烷類(lèi)(HFAs)，例如1，1，1，2-四氟乙烷(HFA 134a)和1，1，1，2，3，3，3-七氟-正-丙烷，(HFA 227)。由于擔(dān)心含氯氟烴影響臭氧層，通常優(yōu)選包含HFAs的制劑。HFA制劑的另外任選的成分包括共溶劑，例如乙醇或戊烷和表面活性劑，例如三油酸山梨坦、油酸、卵磷脂和甘油。參見(jiàn)例如Purewal等人的美國(guó)專(zhuān)利No.5,225,183、EP 0717987 A2(Minnesota Mining and ManufacturingCompany)和WO 92/22286(Minnesota Mining and ManufacturingCompany)。
用于定量吸入器中的有代表性的藥物組合物包含約0.01％至約5％重量的式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體；約0％-約20％重量的乙醇；和約0％-約5％重量的表面活性劑；余下的是HFA推進(jìn)劑。
這種組合物通常通過(guò)向包含活性劑、乙醇(如果存在)和表面活性劑(如果存在)的合適的器中加入冰冷的或加壓的氫氟烷類(lèi)進(jìn)行制備。為制備懸浮液，將活性劑微粉化，然后與推進(jìn)劑混合。然后將該制劑裝入氣霧劑罐，其形成定量吸入器裝置的一部分。在Marecki的美國(guó)專(zhuān)利No.6,006,745和Ashurst等人的美國(guó)專(zhuān)利No.6,143,277中提供了特別為與HFA推進(jìn)劑一起使用而開(kāi)發(fā)的定量吸入器裝置的例子?；蛘?，懸浮液制劑可以通過(guò)在微粉化的活性劑顆粒上噴霧干燥表面活性劑的包衣來(lái)制備。參見(jiàn)，例如WO 99/53901(Glaxo Group Ltd.)和WO 00/61108(Glaxo Group Ltd.)。
至于制備可吸入顆粒的方法，以及適于吸入給藥的制劑和裝置的其它例子參見(jiàn)Gao等人的美國(guó)專(zhuān)利No.6,268,533、Trofast等人的美國(guó)專(zhuān)利No.5,983,956、Briggner等人的美國(guó)專(zhuān)利No.5,874,063和Jakupovic等人的美國(guó)專(zhuān)利No.6,221,398；以及WO 99/55319(GlaxoGroup Ltd.)和WO 00/30614(AstraZeneca AB)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物適于口服給藥。用于口服給藥的合適藥物組合物可以是膠囊、片劑、丸劑、錠劑、扁膠囊、糖衣丸、粉劑、顆粒劑形式；或作為在含水或無(wú)水液體中的溶液或懸浮液；或作為水包油或油包水乳劑；或作為酏劑或糖漿等；每個(gè)包含預(yù)定量的作為活性成分的本發(fā)明的化合物。
當(dāng)用于以固體劑型(即膠囊、片劑、丸劑等形式)口服給藥時(shí)，本發(fā)明的藥物組合物通常將包含作為活性成分的本發(fā)明的化合物和一種或多種藥學(xué)上可接受的載體，例如檸檬酸鈉或磷酸二鈣。任選地或可選擇地，這種固體劑型也可以包含(1)填充劑或增充劑，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸；(2)粘合劑，例如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯膠；(3)濕潤(rùn)劑，例如甘油；(4)崩解劑，例如瓊脂-瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸鹽和/或碳酸鈉；(5)溶液阻滯劑，例如石蠟；(6)吸收加速劑，例如季銨化合物；(7)潤(rùn)濕劑，例如十六醇和/或單硬脂酸甘油酯；(8)吸收劑，例如高嶺土和/或膨潤(rùn)土；(9)潤(rùn)滑劑，例如滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉和/或它們的混合物；(10)著色劑；以及(11)緩沖劑。
釋放劑、濕潤(rùn)劑、包衣劑、甜味劑、調(diào)味劑和香味劑、防腐劑和抗氧化劑也可以存在于本發(fā)明的藥物組合物中。藥學(xué)上可接受的抗氧化劑的例子包括(1)水溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸、鹽酸半胱氨酸、硫酸氫鈉、偏硫酸氫鈉、亞硫酸鈉等；(2)油溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸棕櫚酸鹽、丁基化的羥基苯甲醚(BHA)、丁基化的羥基甲苯(BHT)、卵磷脂、沒(méi)食子酸丙酯、α-生育酚等；以及(3)金屬螯合劑，例如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。用于片劑、膠囊、丸劑等的包衣劑包括用于腸溶衣的那些，例如醋肽纖維素(CAP)、聚乙酸乙烯鄰苯二甲酸酯(PVAP)、羥丙甲基纖維素鄰苯二甲酸酯、甲基丙烯酸-甲基丙烯酸酯共聚物、乙酸-1，2，4-苯三酸纖維素(CAT)、羧甲基乙基纖維素(CMEC)、羥丙甲基纖維素乙酸琥珀酸酯(HPMCAS)等。
如果需要，本發(fā)明的藥物組合物也可以被配制以提供活性成分的緩慢或控制釋放，舉例來(lái)說(shuō)，利用不同比例的羥丙甲基纖維素；或其它聚合物基質(zhì)、脂質(zhì)體和/或微球。
此外，本發(fā)明的藥物組合物可以任選地包含遮光劑并且可以被配制，使得它們僅僅或優(yōu)先地在胃腸道的特定部分釋放活性成分，任選地，以延遲的方式。可以被采用的包埋組合物的例子包括聚合物質(zhì)和蠟?；钚猿煞忠部梢允俏⒛一问?，如果合適，與一種或多種上述賦形劑一起。
用于口服給藥的合適的液體劑型包括，舉例來(lái)說(shuō)，藥學(xué)上可接受的乳劑、微乳、溶液、懸浮液、糖漿和酏劑。這種液體劑型通常包含活性成分和惰性稀釋劑，例如水或其它溶劑、增溶劑和乳化劑，例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1，3-丁二醇、油類(lèi)(特別是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫呋喃醇、聚乙二醇和脫水山梨糖醇的脂肪酸酯和它們的混合物。除活性成分以外，懸浮液可以包含混懸劑例如乙氧基化的異硬酯醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脫水山梨糖醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤(rùn)土、瓊脂-瓊脂和西黃蓍膠和它們的混合物。
當(dāng)想用于口服給藥時(shí)，本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選地被包裝在單元?jiǎng)┬椭?。術(shù)語(yǔ)“單元?jiǎng)┬汀敝高m于給藥患者的物理上離散的單元，即每個(gè)單元包含被計(jì)算單獨(dú)或與一個(gè)或多個(gè)另外的單元結(jié)合產(chǎn)生需要的治療效果的預(yù)定量的活性劑。例如，這種單元?jiǎng)┬涂梢允悄z囊、片劑、丸劑等。
本發(fā)明的化合物也可以利用已知的透皮給藥系統(tǒng)和賦形劑透皮給藥。例如，本發(fā)明的化合物能夠與滲透促進(jìn)劑混合，例如丙二醇、聚乙二醇單月桂酸酯、氮雜環(huán)烷-2-酮等，并被加入貼片或相似的給藥系統(tǒng)。如果需要，可以在這種透皮組合物中使用另外的賦形劑包括膠凝劑、乳化劑和緩沖劑。
本發(fā)明的藥物組合物也可以包含其它治療劑，該治療劑與式I化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體共給藥。例如，本發(fā)明的藥物組合物可以進(jìn)一步包含一種或多種選自其它支氣管擴(kuò)張劑(例如PDE3抑制劑、腺苷2b調(diào)質(zhì)和β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑)；抗炎劑(例如甾體抗炎劑，例如皮質(zhì)類(lèi)固醇類(lèi)；非甾體抗炎劑(NSAIDs)和PDE4抑制劑)；其它毒蕈堿性受體拮抗劑(即抗膽堿能劑)；抗感染劑(例如革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性抗生素或抗病毒藥)；抗組胺藥；蛋白酶抑制劑；和傳入阻滯劑(例如D2激動(dòng)劑和神經(jīng)激肽調(diào)質(zhì))的治療劑。其它治療劑可以以藥物上可接受的鹽或溶劑合物的形式應(yīng)用。此外，如果合適，其它治療劑可以以光學(xué)純立體異構(gòu)體的形式使用。
能夠與本發(fā)明化合物組合使用的有代表性的β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑包括，但不限于沙美特羅、沙丁胺醇、福莫特羅、沙甲胺醇、非諾特羅、特布他林、沙丁胺醇、異他林、奧西那林、比托特羅、吡布特羅、左沙丁胺醇等，或它們的藥學(xué)上可接受的鹽?？梢耘c本發(fā)明化合物組合使用的其它β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑包括，但不限于3-(4-{[6-({(2R)-2-羥基-2-[4-羥基-3-(羥基甲基)-苯基]乙基}氨基)-己基]氧}丁基)苯磺酰胺和3-(3-{[7-({(2R)-2-羥基-2-[4-羥基-3-(羥基甲基)苯基]乙基}-氨基)庚基]氧}-丙基)苯磺酰胺和在WO 02/066422(GlaxoGroup Ltd.)中公開(kāi)的相關(guān)化合物；3-[3-(4-{[6-([(2R)-2-羥基-2-[4-羥基-3-(羥基甲基)苯基]乙基]氨基)己基]氧}丁基)-苯基]咪唑烷-2，4-二酮和在WO 02/070490(Glaxo Group Ltd.)中公開(kāi)的相關(guān)化合物；3-(4-{[6-({(2R)-2-[3-(甲?；被?-4-羥基苯基]-2-羥基乙基}氨基)己基]氧}丁基)-苯磺酰胺；3-(4-{[6-({(2S)-2-[3-(甲?；被?-4-羥基苯基]-2-羥基乙基}氨基)己基]氧}丁基)-苯磺酰胺，3-(4-{[6-({(2R/S)-2-[3-(甲?；被?-4-羥基苯基]-2-羥基乙基}氨基)己基]氧}丁基)-苯磺酰胺，N-(叔丁基)-3-(4-{[6-({(2R)-2-[3-(甲?；被?-4-羥基苯基]-2-羥基乙基}氨基)己基]-氧}丁基)苯磺酰胺，N-(叔丁基)-3-(4-{[6-({(2S)-2-[3-(甲?；被?-4-羥基苯基]-2-羥基乙基}氨基)-己基]氧}丁基)-苯磺酰胺，N-(叔-丁基)-3-(4-{[6-({(2R/S)-2-[3-(甲?；被?-4-羥基苯基]-2-羥基乙基}氨基)己基]-氧}丁基)苯磺酰胺和在WO 02/076933(Glaxo Group Ltd.)中公開(kāi)的相關(guān)化合物；4-{(1R)-2-[(6-{2-[(2，6-二氯芐基)氧]乙氧基}己基)氨基]-1-羥乙基}-2-(羥甲基)苯酚和在WO 03/024439(Glaxo Group Ltd.)中公開(kāi)的相關(guān)化合物；N-{2-[4-((R)-2-羥基-2-苯基乙氨基]苯基}乙基}-(R)-2-羥基-2-(3-甲酰氨基-4-羥基苯基)乙胺和在美國(guó)專(zhuān)利No.6,576,793(Moran等)中公開(kāi)的相關(guān)化合物；N-{2-[4-(3-苯基-4-甲氧基苯基)氨基苯基]乙基}-(R)-2-羥基-2-(8-羥基-2(1H)-喹啉酮-5-基)乙胺和在Moran等的美國(guó)專(zhuān)利No.6,653,323中公開(kāi)的相關(guān)化合物；以及它們的藥學(xué)上可接受的鹽。在特殊的實(shí)施方案中，β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑是N-{2-[4-((R)-2-羥基-2-苯基乙氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羥基-2-(3-甲酰氨基-4-羥基苯基)乙胺的結(jié)晶單鹽酸鹽。當(dāng)使用時(shí)，β2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑將以治療有效量存在于藥物組合物中。通常，β2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑以足以提供每劑量約0.05μg至約500μg的量存在。
能夠與本發(fā)明化合物組合使用的有代表性的甾體抗炎劑包括，但不限于，甲基潑尼松龍、潑尼松龍、地塞米松、丙酸氟替卡松、6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羥酸S-氟甲基酯、6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-3-氧-17α-丙酰氧基-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羥酸S-(2-氧-四氫呋喃-3S-基)酯、倍氯米松酯(例如17-丙酸酯或17，21-二丙酸酯)、布地奈德、氟尼縮松、莫米松酯(例如糠酸酯)、曲安西龍、羅氟奈德、環(huán)索奈德、布替可特丙酸酯、RPR-106541、ST-126等，或它們的藥學(xué)上可接受的鹽。當(dāng)使用時(shí)，甾體抗炎劑將以治療有效量存在于藥物組合物中。通常，甾體抗炎劑將以足以提供每劑量約0.05μg至約500μg的量存在。
示范性的組合是式I的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體，與作為β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑的沙美特羅，以及作為甾體抗炎劑的丙酸氟替卡松共給藥。另一個(gè)示范性的組合是式I的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體，與作為β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑的N-{2-[4-((R)-2-羥基-2-苯乙氨基)苯基]乙基}-(R)-2-羥基-2-(3-甲酰氨基-4-羥基苯基)乙胺的結(jié)晶單鹽酸鹽，以及作為甾體抗炎劑的6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羥酸S-氟甲酯共給藥。
其它合適的組合包括，例如其它抗炎劑，例如NSAIDs(例如色甘酸鈉；奈多羅米鈉；磷酸二酯酶(PDE)抑制劑(例如茶堿、PDE4抑制劑或混合的PDE3/PDE4抑制劑)；白三烯拮抗劑(例如孟魯司特)；白細(xì)胞三烯合成的抑制劑；iNOS抑制劑；蛋白酶抑制劑，例如類(lèi)胰蛋白酶和彈性酶抑制劑；β-2整聯(lián)蛋白拮抗劑和腺苷受體激動(dòng)劑或拮抗劑(例如腺苷2a激動(dòng)劑)；細(xì)胞因子拮抗劑(例如趨化因子拮抗劑例如白細(xì)胞介素抗體(αIL抗體)，特別地，αIL-4療法，αIL-13療法或它們的組合)；或細(xì)胞因子合成的抑制劑。
例如，能夠與本發(fā)明化合物組合使用的有代表性的磷酸二酯酶-4(PDE4)抑制劑或混合的PDE3/PDE4抑制劑包括，但不限于順式4-氰基-4-(3-環(huán)戊氧基-4-甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-羧酸、2-甲酯基-4-氰基-4-(3-環(huán)丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-酮；順-[4-氰基-4-(3-環(huán)丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)環(huán)己烷-1-醇]；順-4-氰基-4-[3-(環(huán)戊氧基)-4-甲氧基苯基]環(huán)己烷-1-羧酸等，或它們的藥學(xué)上可接受的鹽。其它有代表性的PDE4或混合的PDE4/PDE3抑制劑包括AWD-12-281(elbion)；NCS-613(INSERM)；D-4418(Chiroscience和Schering-Plough)；CI-1018或PD-168787(Pfizer)；在WO99/16766(Kyowa Hakko)中公開(kāi)的苯并間二氧雜環(huán)戊烯化合物；K-34(Kyowa Hakko)；V-11294A(Napp)；羅氟司特(Byk-Gulden)；在WO99/47505(Byk-Gulden)中公開(kāi)的pthalazinone化合物；普馬芬群(Byk-Gulden，now Altana)；阿羅茶堿(Almirall-Prodesfarma)；VM554/UM565(Vernalis)；T-440(Tanabe Seiyaku)；和T2585(TahabeSeiyaku)。
可以與本發(fā)明化合物組合使用的(除了本發(fā)明的化合物以外)有代表性的毒蕈堿性拮抗劑(即抗膽堿能劑)包括，但不限于阿托品、硫酸阿托品、氧阿托品、甲基硝酸阿托品、氫溴酸后馬托品、氫溴酸莨菪堿(d，l)、氫溴酸東莨菪堿、異丙托溴銨、氧托溴銨、噻托溴銨、溴甲胺太林、丙胺太林溴化物、辛托品甲基溴化物、克利溴銨、copyrrolate(甘羅溴銨)、異丙碘銨、溴美噴酯、氯化三乙己苯銨(Pathilone)、甲硫己環(huán)銨、鹽酸環(huán)戊通、托吡卡胺、鹽酸苯海索、哌侖西平、替侖西平、AF-DX 116和美索曲明等，或它們的藥學(xué)上可接受的鹽；或者，列出的那些化合物作為鹽，它們的可替換的藥學(xué)上可接受的鹽。
可以與本發(fā)明化合物組合使用的有代表性的抗組胺藥(即H1-受體拮抗劑)包括，但不限于，乙醇胺類(lèi)，例如馬來(lái)酸卡比沙明、富馬酸氯馬斯汀、鹽酸苯海拉明和茶苯海明；乙二胺類(lèi)，例如馬來(lái)酸(amleate)美吡拉敏、鹽酸芐吡二胺和檸檬酸芐吡二胺；烷基胺類(lèi)，例如氯苯那敏和阿伐斯??；哌嗪類(lèi)，例如鹽酸羥嗪、雙羥萘酸羥嗪、鹽酸苯甲嗪、乳酸賽克利嗪、鹽酸美克洛嗪和鹽酸西替立嗪；哌啶類(lèi)，例如阿司咪唑、左卡巴斯汀鹽酸鹽、氯雷他定或它的去乙氧羰基類(lèi)似物、特非那定和鹽酸非索那定；鹽酸氮卓斯丁等，或它們的藥學(xué)上可接受的鹽；或者，列出的那些化合物作為鹽，它們的可替換的藥學(xué)上可接受的鹽。
與本發(fā)明化合物組合給藥的其它治療劑的適合劑量在每天大約0.05μg至每天大約100mg范圍內(nèi)。
下述制劑舉例說(shuō)明本發(fā)明有代表性的藥物組合物制劑實(shí)施例A如下制備通過(guò)吸入給藥的干粉成分 量本發(fā)明化合物 0.2mg乳糖 25mg有代表性的方法將本發(fā)明化合物微粉化，然后與乳糖混合。將該混合的混合物裝入明膠吸入藥筒。利用粉末吸入器給藥藥筒內(nèi)容物。
制劑實(shí)施例B如下制備用在干粉吸入裝置中的干粉制劑有代表性的方法制備了本發(fā)明微粉化化合物與乳糖的混合(bulk)制劑比為1∶200的藥物組合物。將該組合物裝入每劑量能夠傳遞約10μg至100μg本發(fā)明化合物的干粉吸入裝置。
制劑實(shí)施例C如下制備在定量吸入器中通過(guò)吸入給藥的干粉有代表性的方法通過(guò)將10g平均粒徑小于10μm的微粉化顆粒形式的本發(fā)明化合物分散在由0.2g卵磷脂溶解在200mL軟化水中形成的溶液中，制備包含5wt％本發(fā)明的化合物和0.1wt％卵磷脂的懸浮液。將該懸浮液噴霧干燥并將得到的物質(zhì)微粉化成平均直徑小于1.5μm的顆粒。將顆粒裝入有加壓的1，1，1，2-四氟乙烷的藥筒中。
制劑實(shí)施例D如下制備用于定量吸入器的藥物組合物有代表性的方法通過(guò)將5g平均粒徑小于10μm的微粉化顆粒形式的活性成分分散在由0.5g海藻糖和0.5g卵磷脂溶解在100mL軟化水中形成的膠體溶液中，制備包含5wt％本發(fā)明化合物、0.5wt％卵磷脂和0.5wt％海藻糖的懸浮液。將該懸浮液噴霧干燥并將得到的物質(zhì)微粉化成平均直徑小于1.5μm的顆粒。將顆粒裝入有加壓的1，1，1，2-四氟乙烷的灌中。
制劑實(shí)施例E如下制備用于霧化器吸入器的藥物組合物有代表性的方法用于霧化器中的水性氣溶膠制劑是通過(guò)將0.1mg本發(fā)明化合物溶解在用檸檬酸酸化的1mL 0.9％氯化鈉溶液中進(jìn)行制備的。攪拌并聲處理混合物直到活性成分溶解。通過(guò)緩慢添加NaOH將溶液的pH調(diào)整至3至8范圍內(nèi)的值。
制劑實(shí)施例F如下制備用于口服給藥的硬明膠膠囊成分 量本發(fā)明化合物 250mg乳糖(噴霧干燥的) 200mg硬脂酸鎂 10mg
有代表性的方法將成分徹底混合，然后裝入硬明膠膠囊(每個(gè)膠囊460mg組合物)。
制劑實(shí)施例G如下制備用于口服給藥的懸浮液成分 量本發(fā)明化合物 1.0g富馬酸 0.5g氯化鈉 2.0g對(duì)羥基苯甲酸甲酯 0.15g對(duì)羥基苯甲酸丙酯 0.05g粒狀糖 25.5g山梨醇(70％溶液) 12.85gVeegum k(Vanderbilt Co.) 1.0g調(diào)味劑 0.035mL著色劑 0.5mg蒸餾水 適量至100mL有代表性的方法將成分混合以形成每10mL懸浮液包含100mg活性成分的懸浮液。
制劑實(shí)施例H如下制備可注射的制劑成分 量本發(fā)明化合物 0.2g乙酸鈉緩沖溶液(0.4M) 2.0mLHCl(0.5N)或NaOH(0.5N) 適量至pH4水(蒸餾的，無(wú)菌的)適量至20mL
有代表性的方法混合上述成分，并用0.5N HCl或0.5N NaOH將pH調(diào)節(jié)至4±0.5。
實(shí)用性預(yù)期本發(fā)明的聯(lián)苯基化合物適用作毒蕈堿性受體拮抗劑，因此，預(yù)期這類(lèi)化合物適用于治療由毒蕈堿性受體介導(dǎo)的醫(yī)學(xué)狀況，即，通過(guò)用毒蕈堿性受體拮抗劑得到改善的醫(yī)學(xué)狀況。這類(lèi)醫(yī)學(xué)狀況包括，舉例來(lái)說(shuō)，肺障礙或疾病，包括與可逆性氣道阻塞有關(guān)的那些，例如慢性阻塞性肺疾病(例如，慢性和喘鳴支氣管炎以及肺氣腫)、哮喘、肺纖維化、過(guò)敏性鼻炎、鼻溢等?？梢杂枚巨A性受體拮抗劑治療的其它醫(yī)學(xué)狀況是生殖泌尿道障礙，例如膀胱活動(dòng)過(guò)度或逼肌活動(dòng)過(guò)強(qiáng)和它們的癥狀；胃腸道障礙，例如過(guò)敏性腸綜合征、憩室疾病、弛緩不能、胃腸運(yùn)動(dòng)過(guò)度障礙和腹瀉；心律失常，例如竇性心動(dòng)過(guò)緩；帕金森氏?。徽J(rèn)知障礙，例如阿爾茨海默氏?。籨ismenorrhea；等。
在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物適用于治療哺乳動(dòng)物，包括人類(lèi)和他們的伙伴動(dòng)物(例如，狗、貓等)中的平滑肌障礙。這類(lèi)平滑肌障礙包括，舉例來(lái)說(shuō)，膀胱活動(dòng)過(guò)度、慢性阻塞性肺疾病和過(guò)敏性腸綜合征。
當(dāng)被用于治療平滑肌障礙或由毒蕈堿性受體介導(dǎo)的其它狀況時(shí)，本發(fā)明的化合物通常將以每天單日劑量或以多劑量經(jīng)口、直腸、胃腸外或通過(guò)吸入給藥。每劑量給予的活性劑的量或每天給予的總量通常將由患者的醫(yī)生確定并且將取決于這樣的因素例如患者狀況的性質(zhì)和嚴(yán)重性、被治療的狀況、患者的年齡和一般健康情況、患者對(duì)活性劑的耐受性、給藥途徑等。
典型地，治療平滑肌障礙或由毒蕈堿性受體介導(dǎo)的其它障礙的適合劑量將在大約0.14μg/kg/天至大約7mg/kg/天的活性劑范圍內(nèi)；包括大約0.15μg/kg/天至大約5mg/kg/天。對(duì)于平均70kg人來(lái)說(shuō)，這將相當(dāng)于每天大約10μg至每天大約500mg的活性劑。
在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物適用于治療包括人類(lèi)的哺乳動(dòng)物的肺或呼吸障礙，例如COPD或哮喘。當(dāng)被用于治療這類(lèi)障礙時(shí)，本發(fā)明的化合物通常將以每日多劑量或單日劑量或單周劑量通過(guò)吸入給藥。通常，治療肺障礙的劑量將在大約10μg/天至200μg/天的范圍內(nèi)。如在本文使用的，COPD包括慢性阻塞性支氣管炎和肺氣腫(例如見(jiàn)Barnes，Chronic ObstructivePulmonary disease，N EnglJ Med343269-78(2000))。
當(dāng)被用于治療肺障礙時(shí)，本發(fā)明的化合物任選與其它的治療劑聯(lián)合給藥，例如與β2-腎上腺素能受體激動(dòng)劑；皮質(zhì)類(lèi)固醇、非甾體抗炎藥或它們的組合。
當(dāng)通過(guò)吸入給藥時(shí)，本發(fā)明的化合物通常具有產(chǎn)生支氣管擴(kuò)張的作用。因此，在其方法方面的另一方面，本發(fā)明涉及在患者中產(chǎn)生支氣管擴(kuò)張的方法，該方法包括給患者給予產(chǎn)生支氣管擴(kuò)張量的本發(fā)明的化合物。一般說(shuō)來(lái)，產(chǎn)生支氣管擴(kuò)張作用的治療有效劑量將在大約10μg/天至大約200μg/天的范圍內(nèi)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物被用于治療膀胱活動(dòng)過(guò)度。當(dāng)被用于治療膀胱活動(dòng)過(guò)度時(shí)，本發(fā)明的化合物通常將以單日劑量或以每天多劑量；優(yōu)選以單日劑量口服給藥。優(yōu)選地，治療膀胱活動(dòng)過(guò)度的劑量將在大約1.0至大約500mg/天的范圍內(nèi)。
在還另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的化合物被用于治療過(guò)敏性腸綜合征。當(dāng)被用于治療過(guò)敏性腸綜合征時(shí)，本發(fā)明的化合物通常將以單日劑量或以每天多劑量口服給藥。優(yōu)選地，治療過(guò)敏性腸綜合征的劑量將在大約1.0至大約500mg/天的范圍內(nèi)。
因?yàn)楸景l(fā)明的化合物是毒蕈堿性受體拮抗劑，這類(lèi)化合物還適用作用于探索或研究含有毒蕈堿性受體的生物系統(tǒng)或樣品的研究工具。這樣的生物系統(tǒng)或樣品可包含M1、M2、M3、M4和/或M5毒蕈堿性受體。在這類(lèi)研究中可以使用任何適合的含有毒蕈堿性受體的生物系統(tǒng)或樣品，該研究可以在體外或體內(nèi)進(jìn)行。適合于這類(lèi)研究的有代表性的生物系統(tǒng)或樣品包括，但不限于，細(xì)胞、細(xì)胞提取物、質(zhì)膜、組織樣品、哺乳動(dòng)物(例如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗、豬等)等。
在這一實(shí)施方案中，使包含毒蕈堿性受體的生物系統(tǒng)或樣品與毒蕈堿性受體拮抗量的本發(fā)明的化合物接觸。然后利用常規(guī)方法和設(shè)備，例如放射配基結(jié)合試驗(yàn)和功能試驗(yàn)，測(cè)定拮抗毒蕈堿性受體的效果。這類(lèi)功能試驗(yàn)包括配基介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)環(huán)腺苷酸(cAMP)的變化、配基介導(dǎo)的酶腺苷酸環(huán)化酶(其合成cAMP)活性的變化、配基介導(dǎo)的經(jīng)由受體催化的[35S]GTPγS與GDP交換將鳥(niǎo)苷5′-O-(γ-硫代)三磷酸酯([35S]GTPγS)結(jié)合到分離膜中的變化，配基介導(dǎo)的游離細(xì)胞內(nèi)鈣離子的變化(例如用來(lái)自Molecular Devices，Inc.的熒光聯(lián)合成像板讀出器或FLIPR測(cè)量)。在上述列出的任何功能試驗(yàn)或類(lèi)似性質(zhì)的試驗(yàn)中，本發(fā)明化合物將拮抗或減少毒蕈堿性受體的活化。本發(fā)明化合物的毒蕈堿性受體拮抗量通常將在約0.1納摩爾至約100納摩爾的范圍內(nèi)。
此外，本發(fā)明的化合物可以被用作發(fā)現(xiàn)具有毒蕈堿性受體拮抗劑活性的新化合物的研究工具。在這一實(shí)施方案中，將試驗(yàn)化合物或試驗(yàn)化合物組的毒蕈堿性受體結(jié)合數(shù)據(jù)(例如，通過(guò)體外放射性配基置換試驗(yàn)測(cè)定的)與本發(fā)明化合物的毒蕈堿性受體結(jié)合數(shù)據(jù)相比較，以鑒別那些具有大約相同的或更好的毒蕈堿性受體結(jié)合的那些試驗(yàn)化合物，如果有的話。作為單獨(dú)的實(shí)施方案，本發(fā)明的這一方面包括，產(chǎn)生比較數(shù)據(jù)(利用合適的試驗(yàn))和分析該試驗(yàn)數(shù)據(jù)以鑒定目標(biāo)試驗(yàn)化合物。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，將本發(fā)明的化合物用于拮抗生物系統(tǒng)，以及哺乳動(dòng)物特別是，例如小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗、豬、人類(lèi)等中的毒蕈堿性受體。在這一實(shí)施方案中，給所述哺乳動(dòng)物給予治療有效量的式I的化合物。然后可以用常規(guī)方法和設(shè)備測(cè)定拮抗毒蕈堿性受體的作用，其例子在下文進(jìn)行描述。
除了其它的性質(zhì)外，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物為M3毒蕈堿性受體活性的強(qiáng)效抑制劑。因此，在特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及對(duì)于M3受體亞型的抑制解離常數(shù)(Ki)小于或等于10nM；優(yōu)選地，小于或等于5nM(例如，通過(guò)放射配體置換測(cè)定法測(cè)定的)的式I的化合物。
另外，還發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物具有令人驚奇和預(yù)料之外的作用持續(xù)時(shí)間。因此，在另一個(gè)特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及作用持續(xù)時(shí)間大于或等于大約24小時(shí)的式I的化合物。
此外，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物當(dāng)通過(guò)吸入給藥時(shí)，與通過(guò)吸入給予的其它已知的毒蕈堿性受體拮抗劑(例如tiotropium)相比，在有效劑量下具有減少的副作用，例如口干。
本發(fā)明化合物的性質(zhì)和實(shí)用性可以利用對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的各種體外和體內(nèi)試驗(yàn)來(lái)證明。例如，在下述實(shí)施例中進(jìn)一步詳細(xì)描述了有代表性的試驗(yàn)。
實(shí)施例下面的制備和實(shí)施例舉例說(shuō)明了本發(fā)明的特定實(shí)施方案。在這些實(shí)施例中，下列縮寫(xiě)具有下述含義AC 腺苷酸環(huán)化酶ACh 乙酰膽堿ACN 乙腈BSA 牛血清白蛋白cAMP 3′-5′環(huán)腺苷一磷酸CHO 中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢cM5克隆的黑猩猩M5受體DCM 二氯甲烷(即氯化亞甲)DIBAL氫化二異丁基鋁DIPEAN，N-二異丙基乙胺dPBS Dulbecco磷酸鹽緩沖鹽水DMF 二甲基甲酰胺DMSO 二甲基亞砜EDC 1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺EDCI 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽
EDTA 乙二胺四乙酸EtOAc 乙酸乙酯EtOH 乙醇FBS胎牛血清FLIPR 熒光測(cè)定成像板讀出器HATU O-(7-氮雜苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽HBSS Hank′s緩沖鹽溶液HEPES 4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪乙磺酸HOAt 1-羥基-7-氮雜苯并三唑hM1克隆的人M1受體hM2克隆的人M2受體hM3克隆的人M3受體hM4克隆的人M4受體hM5克隆的人M5受體HOBT 1-羥基苯并三唑水合物HPLC 高效液相色譜法IPA異丙醇MCh甲基膽堿MTBE 甲基叔-丁基醚TFA三氟醋酸THF四氫呋喃本文中使用但沒(méi)有定義的任何其它縮寫(xiě)具有它們的標(biāo)準(zhǔn)、被普遍接受的含義。除非另外指出，所有材料例如試劑、原料和溶劑購(gòu)自商品提供商(例如Sigma-Aldrich、Fluka等)并且在沒(méi)有進(jìn)一步純化的情況下使用。
除非另外顯示，使用裝配有具有3.5微米顆粒尺寸的ZorbaxBonus RP 2.1×50mm柱(Agilent)的Agilent(Palo Alto，CA)系列1100儀器進(jìn)行HPLC分析。用在214nm處的UV吸收度進(jìn)行檢測(cè)。使用的流動(dòng)相如下(按體積計(jì))A是ACN(2％)、水(98％)和TFA(0.1％)；B是ACN(90)、水(10％)和TFA(0.1％)。使用6分鐘梯度內(nèi)10至70％B(余下的為A)的0.5mL/分鐘的流速，獲得HPLC 10-70數(shù)據(jù)。相似地，使用5分鐘梯度內(nèi)5％至35％B；或10％至90％B，獲得HPLC 5-35和HPLC 10-90數(shù)據(jù)。
用Applied Biosystems(Foster City，CA)型API-150EX儀器獲得液相色譜質(zhì)譜(LCMS)數(shù)據(jù)。用5分鐘梯度內(nèi)10至90％流動(dòng)相B獲得LCMS 10-90數(shù)據(jù)。
利用來(lái)自Applied Biosystems的API 150EX Prep工作站系統(tǒng)進(jìn)行小規(guī)模純化。使用的流動(dòng)相如下(按體積計(jì))是A是水和0.05％TFA；并且B是ACN和0.05％TFA。對(duì)于系統(tǒng)(通常約3至50mg回收樣本大小)采用下述條件20mL/分鐘流速；15分鐘梯度和有5微米顆粒的20mm×50mm Prism RP柱(ThermoHypersil-Keystone，Bellefonte，PA)。對(duì)于更大規(guī)模純化(通常大于100mg粗制樣本)，采用下述條件60ml/分鐘流速；30分鐘梯度和有10微米顆粒的41.4mm×250mm Microsorb BDS柱(Varian，PaloAlto，CA)。
制備1聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸哌啶-4-基酯將聯(lián)苯基-2-異氰酸酯(97.5g，521mmol)和4-羥基-N-芐基哌啶(105g，549mmol)在70℃一起加熱12小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物冷卻到50℃并添加EtOH(1L)，然后緩慢加入6M HCl(191mL)。然后將得到的混合物冷卻到室溫并添加甲酸銨(98.5g，1.56mol)，然后使氮?dú)馔ㄟ^(guò)溶液鼓泡20分鐘。然后添加活性炭上鈀(20g，10wt.％干基)并且在40℃加熱反應(yīng)混合物12小時(shí)，然后通過(guò)硅藻土墊過(guò)濾。然后減壓除去溶劑并將1M HCl(40mL)添加到粗殘余物中。然后用10NNaOH調(diào)節(jié)混合物的pH至pH 12。用乙酸乙酯(2×150mL)提取水層并干燥(硫酸鎂)有機(jī)層、過(guò)濾并減壓除去溶劑得到155g標(biāo)題中間體(100％收率)。HPLC(10-70)Rt＝2.52；m/z[M+H+]C18H20N2O2計(jì)算值，297.15；實(shí)測(cè)值，297.3。
制備2N-芐基-N-甲氨基乙醛向3-頸2-L燒瓶中添加N-芐基-N-甲基乙醇胺(30.5g，0.182mol)、DCM(0.5L)、DIPEA(95mL，0.546mol)和DMSO(41mL，0.728mol)。使用冰浴，將混合物冷卻到大約-10℃并用5分鐘間隔分4部分添加三氧化硫吡啶復(fù)合物(87g，0.546mol)。在-10℃攪拌反應(yīng)2小時(shí)。除去冰浴前，加水(0.5L)猝滅反應(yīng)。分離水層并用水(0.5L)和鹽水(0.5L)洗滌有機(jī)層然后用硫酸鎂干燥，并過(guò)濾得到標(biāo)題化合物，在沒(méi)有進(jìn)一步純化下使用它。
制備3聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-(芐基甲氨基)乙基]哌啶-4-基酯向含有DCM(0.5L)中的制備2的產(chǎn)物的2-L燒瓶中添加制備1的產(chǎn)物(30g，0.101mol)，接著添加三乙酰氧基氫硼化鈉(45g，0.202mol)。攪拌反應(yīng)混合物過(guò)夜然后在劇烈攪拌下添加1N鹽酸(0.5L)猝滅。觀察到三層并除去水層。用1N NaOH(0.5L)洗滌后，得到均勻的有機(jī)層，然后用飽和的NaCl水溶液(0.5L)洗滌、用硫酸鎂干燥、過(guò)濾并減壓除去溶劑。通過(guò)將它溶解在最少量的IPA中并將該溶液冷卻至0℃形成固體，來(lái)純化殘余物，收集固體并用冷的IPA洗滌，得到42.6g標(biāo)題化合物(95％收率)。MS m/z[M+H+]C28H33N3O2計(jì)算值，444.3；實(shí)測(cè)值，444.6。Rf＝3.51分鐘(10-70ACN:H2O，反相HPLC)。
制備4聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-甲氨基乙基)哌啶-4-基酯向帕爾氫化燒瓶中添加制備3的產(chǎn)物(40g，0.09mol)和EtOH(0.5L)。用氮?dú)鉀_洗燒瓶并與乙酸(20mL)一起添加活性炭上鈀(15g，10wt.％(干基)，37％wt/wt)。在氫氣氛(～50psi)下將混合物保持在帕爾氫化器上3小時(shí)。然后過(guò)濾混合物并用EtOH洗滌。濃縮濾液并將殘余物溶解在最少量的DCM中。緩慢加入乙酸異丙酯(10體積)形成固體，收集固體，得到22.0g標(biāo)題化合物(70％收率)。MS m/z[M+H+]C21H27N3O2計(jì)算值，354.2；實(shí)測(cè)值，354.3。Rf＝2.96分鐘(10-70ACN:H2O，反相HPLC)。
制備5聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[(4-甲?；郊柞；?甲氨基]-乙基}哌啶-4-基酯向三頸1-L燒瓶中添加4-羧基苯甲醛(4.77g，31.8mmol)、EDC(6.64g，34.7mmol)、HOBT(1.91g，31.8mmol)和DCM(200mL)。當(dāng)混合物均勻時(shí)，緩慢加入制備4的產(chǎn)物(10g，31.8mmol)在DCM(100mL)中的溶液。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物16小時(shí)然后用水(1×100mL)、1N HCl(5×60mL)、1N NaOH(1×100mL)鹽水(1×50mL)洗滌，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮得到12.6g標(biāo)題化合物(92％收率；85％基于HPLC的純度)。MS m/z[M+H+]C29H31N3O4計(jì)算值，486.2；實(shí)測(cè)值，486.4。Rf3.12分鐘(10-70ACN:H2O，反相HPLC)。
實(shí)施例1聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯 向三頸2-L燒瓶中添加異哌啶甲酰胺(5.99g，40.0mmol)、乙酸(2.57mL)、硫酸鈉(6.44g)和IPA(400mL)。用冰浴將反應(yīng)混合物冷卻到0-10℃并緩慢添加制備5的產(chǎn)物(11g，22.7mmol)在IPA(300mL)中的溶液。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物2小時(shí)然后冷卻到0-10℃。分次添加三乙酰氧基硼氫化鈉(15.16g，68.5mmol)并在室溫下攪拌該混合物16h。然后減壓下濃縮反應(yīng)混合物至體積為大約50mL，用1NHCl(200mL)酸化該混合物至pH 3。在室溫下攪拌得到的混合物1小時(shí)，然后用DCM(3×250mL)提取。用冰浴將水相冷卻到0-5℃并添加50％NaOH水溶液以調(diào)節(jié)混合物的pH至10。然后用乙酸異丙酯(3×300mL)提取該混合物，用水(100mL)、鹽水(2×50mL)洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮得到10.8g標(biāo)題化合物(80％收率。MS m/z[M+H+]C35H43N5O4計(jì)算值，598.3；實(shí)測(cè)值，598.6。Rf＝2.32分鐘(10-70ACN:H2O，反相HPLC)。
實(shí)施例1A使用下面的步驟，還制備了二磷酸鹽形式的聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯將5.0g實(shí)施例1的產(chǎn)物與80ml IPA∶ACN(1∶1)混合。添加4.0ml水并在攪拌下將混合物加熱到50℃，形成澄清溶液。在50℃向該溶液中滴加16ml 1M磷酸。在50℃攪拌得到的渾濁溶液5小時(shí)，然后在緩慢攪拌下讓其冷卻到室溫，過(guò)夜。過(guò)濾收集得到的晶體并風(fēng)干1小時(shí)，然后真空干燥18小時(shí)，得到標(biāo)題化合物的二磷酸鹽(5.8g，75％收率)，為白色結(jié)晶固體(98.3％通過(guò)HPLC的純度)。
實(shí)施例1B使用下面的步驟，還制備了單硫酸鹽形式的聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯。
將442mg實(shí)施例1的產(chǎn)物(0.739mmol的96％純物質(zhì))溶解在5ml H2O∶ACN(1∶1)中并緩慢加1.45ml的1N硫酸，同時(shí)監(jiān)測(cè)pH。將pH調(diào)節(jié)至大約pH 3.3。通過(guò)0.2微米濾器過(guò)濾澄清溶液、冷凍并凍干至干。將161g凍干的物質(zhì)溶解在8.77ml的IPA∶ACN(10∶1)中。通過(guò)將小瓶放置在預(yù)熱的70℃水浴1.5小時(shí)來(lái)加熱懸浮液。在5分鐘內(nèi)形成油滴。將加熱降低至60℃并再加熱混合物1.5小時(shí)，接著在50℃加熱40分鐘，在40℃加熱40分鐘，然后在30℃加熱45分鐘。關(guān)掉加熱并讓混合物緩慢地冷卻到室溫。第二天，在顯微鏡下觀察物質(zhì)并顯示針狀體和片。然后在40℃加熱該物質(zhì)2小時(shí)，在35℃加熱30分鐘，然后在30℃加熱30分鐘。關(guān)掉加熱并讓混合物緩慢地冷卻至室溫。然后過(guò)濾固體并使用真空泵干燥1小時(shí)，得到標(biāo)題化合物的單硫酸鹽(117mg，73％收率)。
實(shí)施例1C使用下面的步驟，還制備了草酸氫鹽形式的聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯。
將510mg實(shí)施例1的產(chǎn)物(0.853mmol的96％純物質(zhì))溶解在5ml H2O∶ACN(1∶1)中并緩慢加入1.7ml 1M草酸水溶液，同時(shí)監(jiān)測(cè)pH。將pH調(diào)節(jié)至大約pH 3.0。通過(guò)0.2微米濾器過(guò)濾澄清溶液、冷凍并凍干至干。將150mg凍干的物質(zhì)溶解在13.1ml 94％IPA/6％H2O。在預(yù)熱的60℃水浴中攪拌混合物2.5小時(shí)。關(guān)掉加熱并讓混合物冷卻至室溫。于4℃冷藏小瓶。6天后，觀察到油狀物質(zhì)，在瓶的側(cè)面出現(xiàn)的好象是晶體。然后讓小瓶達(dá)到室溫，此時(shí)加入晶種(如下合成)并讓其靜置16天。在這段時(shí)間內(nèi)，觀察到更多的晶體從溶液中析出。然后過(guò)濾固體并使用真空泵干燥14小時(shí)，得到標(biāo)題化合物的草酸氫鹽(105mg，70％收率)。
晶種合成將510mg實(shí)施例1的產(chǎn)物(0.853mmol 96％純物質(zhì))溶解在5mlH2O∶ACN(1∶1)中并緩慢加入1.7ml 1M草酸水溶液，同時(shí)監(jiān)測(cè)pH。將pH調(diào)節(jié)至大約pH 3.0。通過(guò)0.2微米濾器過(guò)濾澄清溶液、冷凍并凍干至干，得到草酸氫鹽。將31.5mg該草酸氫鹽溶解在2.76ml94％IPA/6％H2O中。在預(yù)熱的60℃水浴中攪拌混合物2.5小時(shí)。25分鐘后，所有的樣品為溶液。關(guān)掉加熱并讓混合物冷卻至室溫。第二天，出現(xiàn)少量的粘稠物質(zhì)。在4℃冷藏小瓶。4天后，粘稠的物質(zhì)還存在。小瓶在室溫下放置并在一個(gè)月后觀察。該物質(zhì)看起來(lái)是固體，并且在顯微鏡下觀察是結(jié)晶。然后過(guò)濾固體并使用真空泵干燥1小時(shí)，得到草酸氫鹽(20mg，63.5％收率)。
實(shí)施例1D使用下面的步驟，還制備了游離堿晶體形式的聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯。
使用輕微的加熱，將230mg實(shí)施例1的產(chǎn)物溶解在0.2mlH2O∶ACN(1∶1)中。然后在70℃水浴中加熱混合物2小時(shí)。關(guān)掉加熱并讓混合物冷卻至室溫，然后在4℃冷藏1小時(shí)。然后添加50μl水(油化出的)，接著添加40μl ACN，使樣品重新成溶液。在緩慢攪拌和室溫下添加晶種(如下所述合成)。晶體開(kāi)始形成，并在緩慢攪拌下讓混合物靜置過(guò)夜。第二天，應(yīng)用熱冷循環(huán)(30℃10分鐘，40℃10分鐘，然后50℃20分鐘)。關(guān)掉加熱并讓混合物冷卻到過(guò)夜，同時(shí)緩慢攪拌。第二天，應(yīng)用第二熱/冷循環(huán)(60℃1小時(shí)，在70℃觀察到溶解)。關(guān)掉加熱并讓混合物冷卻過(guò)夜，同時(shí)緩慢攪拌。第二天，出現(xiàn)晶體并應(yīng)用第三熱冷循環(huán)(60℃3小時(shí))。關(guān)掉加熱并讓混合物冷卻過(guò)夜，同時(shí)緩慢攪拌。第二天，應(yīng)用熱冷循環(huán)(60℃3小時(shí)，緩慢冷卻，然后60℃3小時(shí))。關(guān)掉加熱并讓混合物冷卻過(guò)夜，同時(shí)緩慢攪拌。3天后，過(guò)濾固體并放在高真空管道(line)中，以除去所有溶劑并得到標(biāo)題化合物的游離堿晶體。
晶種合成將109mg實(shí)施例1的產(chǎn)物溶解在0.56ml H2O∶ACN(1∶1)中。將懸浮液留在瓶中(上面寬松地放一蓋)以允許較緩慢的蒸發(fā)時(shí)間。將該瓶放置在氮?dú)饬鳝h(huán)境中，盡管氮?dú)獠皇怯糜谡舭l(fā)，只是用于環(huán)境。1天內(nèi)可見(jiàn)到沉淀，在顯微鏡下觀察到該沉淀是晶體。然后將固體放置在高真空管上，以除去所有溶劑得到游離堿晶體。定量回收率，97.8％通過(guò)HPLC純化。
實(shí)施例1E使用下面可替代的步驟，還制備了游離堿晶體形式的聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯。
將70mg實(shí)施例1的產(chǎn)物溶解在0.1mL ACN中。添加0.3mlMTBE后，溶液出現(xiàn)渾濁。添加另外50μl的ACN以使溶液(155mg/ml ACN∶MTBE＝1∶2)澄清。將混合物留在瓶中并蓋上蓋。到第二天出現(xiàn)固體。然后過(guò)濾固體并將其放在高真空管道中以除去所有溶劑并得到標(biāo)題化合物的游離堿晶體。
實(shí)施例2聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-苯甲?；鵠乙氨基}乙基)哌啶-4-基酯 使用實(shí)施例1的方法，并且在制備2中用N-芐基-N-乙基乙醇胺替換N-芐基-N-甲基乙醇胺，制備了標(biāo)題化合物。MS m/z[M+H+]C36H45N5O4計(jì)算值，612-3；實(shí)測(cè)值，612-6。
制備6聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-甲酯哌啶-1-基甲基)苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯
向三頸100ml燒瓶中添加甲基異哌啶甲酸酯(344mg，2.4mmol)、乙酸(136μl)、硫酸鈉(341mg)和IPA(20ml)。用冰浴將反應(yīng)混合物冷卻到0-10℃并緩慢添加制備5的產(chǎn)物(600mg，1.24mmol)在IPA(10ml)中的溶液。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物1小時(shí)然后冷卻到0-10℃。分次添加三乙酰氧基硼氫化鈉(763mg，3.6mmol)。在室溫?cái)嚢?6小時(shí)后，然后在減壓下濃縮反應(yīng)混合物至體積為大約5ml并且用DCM(50ml)稀釋。用0.5N HCl(2×30ml)、水(2×30mL)、鹽水(2×30ml)洗滌有機(jī)層，用硫酸鈉干燥、過(guò)濾并濃縮得到700mg標(biāo)題化合物。(92％收率。MS m/z[M+H+]C36H44N4O5計(jì)算值，612.8；實(shí)測(cè)值，613.5.)實(shí)施例3聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{甲基-[4-(4-甲基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]氨基}乙基)哌啶-4-基酯 向4ml小瓶中添加制備6的產(chǎn)物(61.2mg，0.1mmol)和甲胺(1ml，2M在MeOH中)。在60℃加熱反應(yīng)混合物72小時(shí)并通過(guò)制備型HPLC純化，得到46.9mg標(biāo)題化合物。(MS m/z[M+H+]C36H45N5O4計(jì)算值，611.8；實(shí)測(cè)值，612.4.)實(shí)施例4聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-乙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯
使用實(shí)施例3的步驟，并用乙胺(1ml，2M在EtOH中)替換甲胺(1ml，2M在MeOH中)，制備了17mg標(biāo)題化合物。(MS m/z[M+H+]C37H47N5O4計(jì)算值，625.8；實(shí)測(cè)值，626.4.)實(shí)施例5聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{甲基-[4-(4-丙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]氨基}乙基)哌啶-4-基酯 向4ml小瓶中添加制備6的產(chǎn)物(61.2mg，0.1mmol)和丙胺(1ml)。在60℃加熱反應(yīng)混合物24小時(shí)并通過(guò)制備型HPLC純化，得到39.5mg標(biāo)題化合物。(MS m/z[M+H+]C38H49N5O4計(jì)算值，639.8；實(shí)測(cè)值，640.4.)實(shí)施例6聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-異丙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯 使用實(shí)施例5的步驟，并用異丙胺(1ml)替換丙胺(1ml)，制備了27.8mg標(biāo)題化合物。(MS m/z[M+H+]C38H49N5O4計(jì)算值，639.8；實(shí)測(cè)值，640.4.)
制備7聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-Boc-氨基乙基)哌啶-4-基酯向含有DCM(0.43L)中的制備2的產(chǎn)物(25.4g，85.6mmol)的1-L燒瓶中，添加DIPEA(29.9mL，171.1mmol)和2-(Boc-氨基)乙基溴化物(21.8g，94.4mmol)。然后將反應(yīng)加熱至50℃過(guò)夜(～18小時(shí))。過(guò)夜后，然后將反應(yīng)冷卻到0℃以誘導(dǎo)產(chǎn)物沉淀。過(guò)濾并收集沉淀，得到標(biāo)題化合物，42％收率(15.8g)。MS m/z[M+H+]C25H33N3O4計(jì)算值，439.3；實(shí)測(cè)值，440.4。
制備8聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2氨基乙基)哌啶-4-基酯將制備7的產(chǎn)物(3.5g，8.1mmol)添加到1∶1 DCM∶TFA(50mL)中并允許反應(yīng)在室溫下攪拌30分鐘。完成后，用DCM(125mL)稀釋反應(yīng)并用1N NaOH(200mL)洗滌混合物。然后用水(200mL)、NaCl(飽和的)(200mL)洗滌有機(jī)層，用Na2SO4干燥，然后過(guò)濾。在減壓下除去溶劑。粗物質(zhì)足夠純，不需進(jìn)一步純化就可以使用。獲得標(biāo)題化合物，94％收率(2.6g，7.6mmol)。MS m/z[M+H+]C20H25N3O2計(jì)算值，339.2；實(shí)測(cè)值，339.6。
制備92-氟-4-甲酰基苯甲酸將攪拌的4-氰基-2-氟苯甲酸(2.5g，15.2mmol)在DCM(100mL)中的溶液冷卻到-78℃并向該溶液中滴加DIBAL(30mL，45.4mmol，25％在甲苯中)，由于H2放出要小心使用。允許該溶液在-78℃攪拌4小時(shí)。通過(guò)添加MeOH(10mL)猝滅反應(yīng)，由于H2放出要小心使用。然后用1N HCl(100mL)、水(100mL)、NaCl(飽和的)(100mL)洗滌有機(jī)層，用MgSO4干燥，然后過(guò)濾。在減壓下除去溶劑。粗物質(zhì)足夠純，不需進(jìn)一步純化就可以使用。獲得標(biāo)題化合物78％收率(2.0g，11.9mmol)。
實(shí)施例7聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-2-氟苯甲酰氨基]乙基}哌啶-4-基酯 使用實(shí)施例1的方法并且，在制備5中，用制備8的產(chǎn)物替換制備4的產(chǎn)物并且用制備9的產(chǎn)物替換4-羧基苯甲醛，制備了標(biāo)題化合物。MS m/z[M+H+]C34H40FN5O4計(jì)算值，601.7；實(shí)測(cè)值，602.2。
實(shí)施例8聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-2-氟苯甲酰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯 使用實(shí)施例1的方法并，在制備5中，用制備9的產(chǎn)物替換4-羧基苯甲醛，制備了標(biāo)題化合物。MS m/z[M+H+]C35H42FN5O4計(jì)算值，615.8；實(shí)測(cè)值，616.2制備10哌啶-4-羧酸二乙基酰胺向1-叔丁氧基羰基哌啶-4-羧酸(5g，22.0mmol)在DMF(100mL)中的攪拌的溶液中添加二乙胺(4.6mL，44mmol)、三乙胺(9.1mL，66.0mmol)、HOAt(22.0mL，0.5M在DMF中，22.0mmol)和最后添加EDCI(8.4g，44mmol)。允許該溶液在室溫下攪拌14小時(shí)。然后減壓除去溶劑。將混合物溶解在DCM(100mL)中。然后用水(100mL)、1N HCl(100mL)、NaCl(飽和的)(100mL)洗滌有機(jī)層，用MgSO4干燥，然后過(guò)濾。向有機(jī)層中添加TFA(33mL)。允許反應(yīng)在室溫下攪拌2小時(shí)。然后減壓除去溶劑。將混合物溶解在DCM(100mL)中。然后用1N NaOH(100mL)、水(100mL)、NaCl(飽和的)(100mL)洗滌有機(jī)層，用MgSO4干燥，然后過(guò)濾。在減壓下除去溶劑。粗物質(zhì)足夠純，不需進(jìn)一步純化就可以使用。獲得標(biāo)題化合物86％收率(3.5g，19.0mmol)。
實(shí)施例9聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[4-(4-二乙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-2-氟苯甲酰氨基]乙基}哌啶-4-基酯 使用實(shí)施例1的方法并且，在制備5中，用制備9的產(chǎn)物替換4-羧基苯甲醛并用制備8的產(chǎn)物替換制備4的產(chǎn)物并且，在實(shí)施例1中，用制備10的產(chǎn)物替換異哌啶甲酰胺，制備了標(biāo)題化合物。MS m/z[M+H+]C38H48FN5O4計(jì)算值，657.8；實(shí)測(cè)值，658.4。
實(shí)施例10聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-二乙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-2-氟苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯 使用實(shí)施例1的方法并且，在制備5中，用制備9的產(chǎn)物替換4-羧基苯甲醛并且，在實(shí)施例1中，用制備10的產(chǎn)物替換異哌啶甲酰胺，制備了標(biāo)題化合物。MS m/z[M+H+]C39H50FN5O4計(jì)算值，671.9；實(shí)測(cè)值，672.4。
實(shí)施例11聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-二乙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯 使用實(shí)施例1的方法但用制備10的產(chǎn)物替換異哌啶甲酰胺，制備了標(biāo)題化合物。MS m/z[M+H+]C39H51N5O4計(jì)算值，653.9；實(shí)測(cè)值，654.4。
實(shí)施例12聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(3-(S)-二乙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯 使用實(shí)施例1的方法但用哌啶-3-(S)-羧酸二乙基酰胺替換異哌啶甲酰胺，制備了標(biāo)題化合物。MS m/z[M+H+]C39H51N5O4計(jì)算值，653.9；實(shí)測(cè)值，654.4。
按照Chirality7(2)90-95(1995)完成了哌啶-3-(S)-羧酸二乙基酰胺的制備。
制備11N-{2-[4-(聯(lián)苯基-2-基氨甲酰氧基)哌啶-1-基]乙基}-
-2，5-二溴代-N-甲基對(duì)苯二酸(terephthalamic Acid)向含有在DMF(20mL)中的制備2的產(chǎn)物(2.5g，7.1mmol)的100mL燒瓶中添加2，5-二溴對(duì)苯二酸(6.88g，21.2mmol)，接著添加DIPEA(1.6mL，9.2mmol)和HATU(3.23g，8.5mol)。在室溫下攪拌黃色漿液3小時(shí)(反應(yīng)完成后所有物質(zhì)為溶液)。用DCM(200mL)稀釋反應(yīng)混合物。向該溶液中添加1N NaOH(150mL)和MeOH(添加最小量，以便使添加堿后觀察到的細(xì)白色沉淀溶解)。將溶液轉(zhuǎn)到分液漏斗中并棄去水層。用1N HCl(1×150mL)洗滌有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾并減壓除去溶劑，得到7g標(biāo)題化合物(＞100％收率，由于存在殘留的DMF)。在沒(méi)有進(jìn)一步純化的情況下使用該物質(zhì)。MS m/z[M+H+]C29H29Br2N3O5計(jì)算值，659.4；實(shí)測(cè)值，660.3。Rf＝3.39分鐘(2-90ACN:H2O，反相HPLC)。
制備12N-{2-[4-(聯(lián)苯基-2-基氨甲酰氧基)哌啶-1-基]乙基}--2，5-二溴代-N-甲基對(duì)苯二酸甲酯向含有制備11的產(chǎn)物(7.0g，10.6mmol)的100mL燒瓶中添加甲苯/MeOH(9∶1，70mL)的溶液。所有的固體物質(zhì)不溶解，所以添加另外3mL的MeOH。在冰浴上將溶液冷卻到0℃并通過(guò)注射器添加三甲基甲硅烷基重氮甲烷(2.0M己烷中的溶液，6.3mL，12.7mmol)。讓反應(yīng)混合物溫至室溫。攪拌2小時(shí)后，HPLC和MS分析顯示，反應(yīng)不完全。添加另外的三甲基甲硅烷基重氮甲烷(10.0mL)并在室溫下攪拌反應(yīng)70小時(shí)。盡管HPLC分析已顯示分析已顯示反應(yīng)不完全，但將乙酸(15mL)添加到反應(yīng)混合物中并在減壓下濃縮得到的溶液。通過(guò)硅膠色譜法，使用在DCM中的2％至5％MeOH作為洗脫劑，純化粗產(chǎn)物得到2.32g標(biāo)題化合物(49％收率)。MS m/z[M+H+]C30H31Br2N3O5計(jì)算值，673.4；實(shí)測(cè)值，674.3。Rf＝4.26分鐘(2-90ACN:H2O，反相HPLC)。
制備13聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-{2-[(2，5-二溴代-4-羥基甲基苯甲?；?-甲氨基]乙基}哌啶-4-基酯向含有制備12的產(chǎn)物(2.2g，3.3mmol)100mL燒瓶中添加THF(35mL)。使用冰浴，將混合物冷卻到大約0℃并通過(guò)注射器添加氫化鋰鋁(在THF中的1.0M溶液，6.6mL，6.6mmol)。在室溫下攪拌得到的漿液4h。通過(guò)添加1N NaOH(100mL)猝滅反應(yīng)。分離水層并用鹽水(50mL)洗滌有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮(80.2％通過(guò)HPLC純化)。通過(guò)制備型HPLC(20-40 ACN:H2O，反相HPLC)純化一部分粗產(chǎn)物，得到317mg的TFA鹽。將期望產(chǎn)物的TFA鹽分配在EtOAc(10mL)和飽和的碳酸氫鈉溶液(10mL)之間。用鹽水(5mL)洗滌有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮，得到223.6mg標(biāo)題化合物。MS m/z[M+H+]C29H31Br2N3O4計(jì)算值，645.4；實(shí)測(cè)值，646.3。Rf＝3.56分鐘(10-70 ACN:H2O，反相HPLC)。
制備14甲磺酸4-({2-[4-(聯(lián)苯基-2-基氨甲酰氧基)哌啶-1-基]乙基}甲基氨甲酰基)-2，5-二溴芐酯向含有制備13的產(chǎn)物(223.6mg，0.346mmol)的25mL燒瓶中添加DCM(10mL)，接著添加DIPEA(135.5uL，0.778mmol)和甲磺酰氯(41uL，0.528mmol)。在室溫下攪拌反應(yīng)30分鐘。然后向反應(yīng)混合物中添加飽和的碳酸氫鈉溶液(10mL)。棄取水層并用鹽水(5mL)洗滌有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在減壓下濃縮，得到229mg標(biāo)題化合物(91％收率)。MS m/z[M+H+]C30H33Br2N3O6S計(jì)算值，723.5；實(shí)測(cè)值，724.3。Rf＝3.77分鐘(10-70 ACN:H2O，反相HPLC)。
實(shí)施例13聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[2，5-二溴代-4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯
向含有制備14的產(chǎn)物(229mg，0.316mmol)的25mL燒瓶中添加異哌啶甲酰胺(48.7mg，0.380mmol)、DIPEA(110.2uL，0.633mmol)和ACN(4mL)。在室溫下在氮?dú)夥障聰嚢璺磻?yīng)混合物63小時(shí)，然后用DCM(15mL)稀釋反應(yīng)混合物并用飽和的碳酸氫鈉水溶液洗滌。使用1.0N HCl(2×10mL)，將產(chǎn)物提取到水層中。用DCM(2×15mL)洗滌水層并使用1.0N NaOH將pH調(diào)節(jié)到10-11。然后用DCM(3×20mL)提取混合物，用鹽水(10mL)洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮，得到標(biāo)題化合物，MS m/z[M+H+]C35H41Br2N5O4計(jì)算值，756.5；實(shí)測(cè)值，756.3。Rf＝2.65分鐘(10-70 ACN:H2O，反相HPLC)。
實(shí)施例14聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[4-(2-氨基甲?；?哌啶-1-基甲基)苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯 使用實(shí)施例1中描述的步驟，并替換合適的原料，制備了標(biāo)題化合物。MS m/z[M+H+]C35H43N5O4計(jì)算值，598.3；實(shí)測(cè)值，597.8。
實(shí)施例15聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨基甲酰基-哌啶-1-基甲基)-2-甲氧基苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯
向4-溴代-3-甲氧基-苯甲酸(15.0g，58mmol)在DMSO(150mL)的攪拌的溶液中添加NaHCO3(20.0g，230mmol)。將該溶液加熱到80℃達(dá)18小時(shí)。然后將反應(yīng)冷卻到室溫并減壓除去溶劑。然后將粗的反應(yīng)混合物溶解在DCM(200mL)中并用1N HCl(100mL)、水(100mL)、NaCl(飽和的)(100mL)洗滌，用MgSO4干燥，然后過(guò)濾。在減壓下除去溶劑。粗物質(zhì)足夠純，不需進(jìn)一步純化就可以使用。以79％收率(8.9g，45.8mmol)獲得產(chǎn)物，4-甲?；?3-甲氧基苯甲酸甲酯。
向4-甲?；?3-甲氧基-苯甲酸甲酯(5.0g，26mmol)在叔丁醇(200mL)中的攪拌的溶液中添加NaH2PO4-2H2O(3.6g，26mmol)、水(50mL)，2-甲基-2-丁烯(11mL，104mmol)并最后添加NaClO2(7.02g，78mmol)。允許反應(yīng)在室溫下攪拌4小時(shí)。然后減壓除去溶劑。然后將粗反應(yīng)混合物溶解在DCM(200mL)中并用1N NaOH(200mL)提取產(chǎn)物。用DCM(200mL)洗滌水層，然后用6N HCl(～40mL)中和并且用DCM(200mL)提取產(chǎn)物。然后用水(100mL)、NaCl(飽和的)(100mL)洗滌有機(jī)層，用MgSO4干燥，然后過(guò)濾。在減壓下除去溶劑。粗物質(zhì)足夠純，不需進(jìn)一步純化就可以使用。以47％收率(2.4g，12.3mmol)獲得了產(chǎn)物，2-甲氧基對(duì)苯二酸4-甲酯。
向2-甲氧基對(duì)苯二酸4-甲酯(450mg，2.1mmol)在DMF(10mL)中的攪拌的溶液中添加EDC(630mg，3.3mmol)、HOAt(2.4mL，1.18mmol，0.5M在DMF中)和DIPEA(1.3mL，7.05mmol)。當(dāng)混合物均勻時(shí)，緩慢加入制備4的產(chǎn)物(830mg，2.4mmol)的溶液。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物16小時(shí)然后用水(100mL)、1N HCl(100mL)、1N NaOH(100mL)、鹽水(100mL)洗滌，用MgSO4干燥、過(guò)濾并濃縮得到酯產(chǎn)物，收率為89％(1.04g，1.9mmol)。MS m/z[M+H+]C31H35N3O6計(jì)算值，545.6；實(shí)測(cè)值，546.6。
在0℃向該酯產(chǎn)物(1.0g，1.8mmol)在THF(100mL)的攪拌的溶液中添加甲醇(57μL，1.8mmol)，接著添加LiAlH4(1.8mL，1.8mmol，1.0M在THF中)。除去冰浴，并在室溫下攪拌反應(yīng)混合物1小時(shí)。用1N HC1(aq)在0℃猝滅反應(yīng)直到不形成更多的泡沫，繼續(xù)攪拌10分鐘。在減壓下除去溶劑。將粗反應(yīng)混合物溶解在DCM(100mL)中并用水(100mL)、NaCl(飽和的)(100mL)洗滌，用MgSO4干燥，然后過(guò)濾。在減壓下除去溶劑。粗物質(zhì)足夠純，不需進(jìn)一步純化就可以使用。以89％收率(831mg，1.6mmol)收到醇產(chǎn)物。MS m/z[M+H+]C30H35N3O5計(jì)算值，517.6；實(shí)測(cè)值，518.6。
在-15℃向在DCM(2.5mL)中的該醇產(chǎn)物(78mg，1.5mmol)的攪拌的溶液中添加DMSO(130μL，22.5mmol)、DIPEA(130μL，7.5mmol)。向該溶液中添加硫-三氧化物吡啶復(fù)合物(240mg，15mmol)。30分鐘后，用H2O(～3mL)猝滅反應(yīng)混合物。分離兩層，用MgSO4干燥有機(jī)層，過(guò)濾并在下面的反應(yīng)中直接使用該醛產(chǎn)物。
使用實(shí)施例1的方法，但用該醛產(chǎn)物替換制備5的產(chǎn)物，制備了標(biāo)題化合物。MS m/z[M+H+]C36H45N5O5計(jì)算值，627.3；實(shí)測(cè)值，628.2。
使用本文描述的方法并替換合適的原料，制備了下列化合物實(shí)施例16-聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)噻吩-2-羰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯。MS m/z[M+H+]C33H41N5O4S計(jì)算值，604.3；實(shí)測(cè)值604.2。
實(shí)施例17-聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-((R)-3-二乙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)噻吩-2-羰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯。MS m/z[M+H+]C37H49N5O4S計(jì)算值，660.4；實(shí)測(cè)值660.4。
實(shí)施例18-聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-((R)-3-二乙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)噻吩-2-羰基]氨基}乙基)哌啶-4-基酯。MS m/z[M+H+]C36H47N5O4S計(jì)算值，646.3；實(shí)測(cè)值646.4。
實(shí)施例19-聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)噻吩-2-羰基]氨基}乙基)哌啶-4-基酯。MS m/z[M+H+]C32H39N5O4S計(jì)算值，590.3；實(shí)測(cè)值590.2。
實(shí)施例20-聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-((R)-3-二乙基氨甲?；哙?1-基甲基)-1H-吡咯-2-羰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯。MSm/z[M+H+]C37H50N6O4計(jì)算值，643.4；實(shí)測(cè)值643.2。
實(shí)施例21-聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-1H-吡咯-2-羰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯。MS m/z[M+H+]C33H42N6O4計(jì)算值，587.3；實(shí)測(cè)值587.2。
實(shí)施例22-聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-((R)-3-二乙基氨甲?；哙?1-基甲基)呋喃-2-羰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯。MS m/z[M+H+]C37H49N5O5計(jì)算值，644.4；實(shí)測(cè)值644.4。
實(shí)施例23-聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-(4-二乙基氨基甲?；?哌啶-1-基甲基)呋喃-2-羰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯。MS m/z[M+H+]C37H49N5O5計(jì)算值，644.4；實(shí)測(cè)值644.4。
實(shí)施例24-聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)呋喃-2-羰基]-氨基}乙基)哌啶-4-基酯。MS m/z[M+H+]C32H39N5O5計(jì)算值，574.3；實(shí)測(cè)值574.2。
實(shí)施例25-聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-((R)-3-二乙基氨甲?；哙?1-基甲基)呋喃-2-羰基]氨基}乙基)哌啶-4-基酯。MS m/z[M+H+]C36H47N5O5計(jì)算值，630.4。
實(shí)施例26-聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-[2-({3-[4-(3-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯基]丙?；鶀甲氨基)乙基]哌啶-4-基酯。MS m/z[M+H+]C37H47N5O4計(jì)算值，626.4；實(shí)測(cè)值625.8。
實(shí)施例27-聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-[2-({3-[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯基]丙酰基}甲氨基)乙基]哌啶-4-基酯。MS m/z[M+H+]C37H47N5O4計(jì)算值，626.4；實(shí)測(cè)值625.8。
實(shí)施例28-聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{3-[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯基]丙酰氨基}乙基)哌啶-4-基酯。MS m/z[M+H+]C36H45N5O4計(jì)算值，612.4；實(shí)測(cè)值611.8。
實(shí)施例29-聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{3-[4-(4-二乙基氨甲?；哙?1-基甲基)苯基]丙酰氨基}乙基)哌啶-4-基酯。MS m/z[M+H+]C40H53N5O4計(jì)算值，668.4；實(shí)測(cè)值667.9。
實(shí)施例30-聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{3-[4-(3-二乙基氨甲?；哙?1-基甲基)苯基]丙酰氨基}乙基)哌啶-4-基酯。MS m/z[M+H+]C40H53N5O4計(jì)算值，668.4；實(shí)測(cè)值667.9。
使用本文描述的方法并替換合適的原料，可以制備下列化合物實(shí)施例31-聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[4-(4-氨基甲酰基-哌啶-1-基甲基)苯甲酰氨基]乙基}哌啶-4-基酯；實(shí)施例32-聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-2-氯代-苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；實(shí)施例33-聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-2-氯代-5-甲氧基苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；和實(shí)施例34-聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-({2-[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯基]乙?；鶀甲氨基)乙基]哌啶-4-基酯。
試驗(yàn)1放射配體結(jié)合試驗(yàn)A.從表達(dá)hM1、hM2、hM3和hM4毒蕈堿性受體亞型的細(xì)胞制備膜使分別地穩(wěn)定表達(dá)克隆的人hM1、hM2、hM3和hM4毒蕈堿性受體亞型的CHO細(xì)胞系在由HAM′s F-12組成的的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)至接近匯合，HAM′s F-12補(bǔ)充了10％FBS和250μg/mL遺傳霉素。使細(xì)胞在5％CO2，37℃培養(yǎng)箱中生長(zhǎng)并用在dPBS中的2mM EDTA提起。通過(guò)在650×g離心5分鐘收集細(xì)胞，并將細(xì)胞沉淀在-80℃冷凍儲(chǔ)存或立即制備膜。關(guān)于膜制備，將細(xì)胞沉淀再混懸在細(xì)胞溶解緩沖液中并用Polytron PT-2100組織破裂儀(Kinematica AG；20秒×2次破裂)勻漿。在4℃在40,000×g離心粗制膜15分鐘。然后將膜沉淀用再混懸緩沖液再混懸，并再次用Polytron組織破裂儀勻漿。通過(guò)在Lowry，O.等，Journal of Biochemistry，193265(1951)中描述的方法來(lái)測(cè)定膜懸浮液的蛋白質(zhì)濃度。將所有膜以等分樣在-80℃冷凍儲(chǔ)藏或立即使用。制備的hM5受體膜的等分樣直接購(gòu)自Perkin Elmer且儲(chǔ)存在-80℃直到使用。
B.對(duì)毒蕈堿性受體亞型hM1、hM2、hM3、hM4和hM5的放射配體結(jié)合試驗(yàn)在96孔微量滴定板中以100μl的總試驗(yàn)體積進(jìn)行放射配體結(jié)合試驗(yàn)。將穩(wěn)定表達(dá)hM1、hM2、hM3、hM4或hM5的毒蕈堿性亞型的CHO細(xì)胞膜稀釋在試驗(yàn)緩沖液中至下述特定的靶蛋白濃度(μg/孔)對(duì)于hM110μg，對(duì)于hM210-15μg，對(duì)于hM310-20μg，對(duì)于hM410-20μg以及對(duì)于hM510-12μg。在試驗(yàn)板加入之前，利用Polytron組織破裂儀短暫地勻化該膜(10秒)。測(cè)定放射配體KD值的飽和結(jié)合研究是利用0.001nM-20nM濃度的L-[N-甲基-3H]氯甲東莨菪堿([3H]-NMS)(TRK666，84.0Ci/mmol，Amersham Pharmacia Biotech，Buckinghamshire，England)進(jìn)行的。測(cè)定試驗(yàn)化合物Ki值的置換試驗(yàn)是用1nM[3H]-NMS和11個(gè)不同試驗(yàn)化合物濃度進(jìn)行的。首先將試驗(yàn)化合物溶解在稀釋緩沖液中至濃度為400μM，然后用稀釋緩沖液連續(xù)地稀釋5×至最終濃度為10pM至100μM。添加至試驗(yàn)板的順序和體積如下25μL放射配體，25μL稀釋的試驗(yàn)化合物和50μL膜。在37℃培養(yǎng)試驗(yàn)板60分鐘。通過(guò)用在1％BSA中預(yù)處理的GF/B玻璃纖維濾板(PerkinElmer Inc.，Wellesley，MA)快速過(guò)濾，終止結(jié)合反應(yīng)。用洗滌緩沖液(10mM HEPES)沖洗濾板三次以除去未結(jié)合的放射性。然后風(fēng)干該板，并向每孔中加入50μL Microscint-20液體閃爍液(PerkinElmer Inc.，Wellesley，MA)。然后在PerkinElmer Topcount液體閃爍計(jì)數(shù)儀(PerkinElmer Inc.，Wellesley，MA)中對(duì)該板計(jì)數(shù)。利用一位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)模型，用GraphPad Prism軟件包(GraphPadSoftware，Inc.，San Diego，CA)，通過(guò)非線性回歸分析來(lái)分析結(jié)合數(shù)據(jù)。利用Cheng-Prusoff方程式，從觀察到的IC50值和放射配體的KD值計(jì)算試驗(yàn)化合物的Ki值(Cheng Y；Prusoff W.H.BiochemicalPharmacology，22(23)3099-108(1973))。將Ki值轉(zhuǎn)化成pKi值以確定幾何平均數(shù)和95％置信區(qū)間。然后將這些概括性統(tǒng)計(jì)數(shù)字再轉(zhuǎn)化回成Ki值，用于數(shù)據(jù)報(bào)告。
在這一試驗(yàn)中，較低的Ki值表明試驗(yàn)化合物對(duì)受試的受體具有較高的結(jié)合親和性。例如，發(fā)現(xiàn)實(shí)施例1和2的化合物在這一試驗(yàn)中對(duì)于M3毒蕈堿性受體亞型具有小于約5nM的Ki值。例如，發(fā)現(xiàn)實(shí)施例1的化合物具有小于約5nMr Ki值。
試驗(yàn)2毒蕈堿性受體功能效力試驗(yàn)A. cAMP累積的激動(dòng)劑介導(dǎo)的抑制的阻滯在這一試驗(yàn)中，通過(guò)測(cè)量試驗(yàn)化合物阻滯在表達(dá)hM2受體的CHO-K1細(xì)胞中毛喉素-介導(dǎo)的cAMP累積的氧化震顫素抑制的能力，來(lái)測(cè)定受試化合物的功能效力。
按照生產(chǎn)商的用法說(shuō)明，利用有125I-cAMP的快速板(flashplate)腺苷酸環(huán)化酶激活試驗(yàn)系統(tǒng)(NEN SMP004B，PerkinElmer LifeSciences Inc.，Boston，MA)，以放射免疫測(cè)定格式進(jìn)行cAMP試驗(yàn)。
用dPBS沖洗細(xì)胞一次，并用如在上面細(xì)胞培養(yǎng)和膜制備部分中描述的胰蛋白酶-EDTA溶液(0.05％胰蛋白酶/0.53mM EDTA)提起細(xì)胞。通過(guò)在50mL dPBS中在650×g離心五分鐘來(lái)洗滌分離的細(xì)胞兩次。然后將細(xì)胞沉淀再混懸在10mL dPBS中，并用Coulter Z1二元粒子計(jì)數(shù)器(Beckman Coulter，F(xiàn)ullerton，CA)來(lái)計(jì)數(shù)細(xì)胞。在650×g再次離心該細(xì)胞五分鐘，并再混懸在刺激緩沖液中至分析濃度為每毫升1.6×106-2.8×106個(gè)細(xì)胞。
最初將受試化合物溶解在稀釋緩沖液(補(bǔ)充了1mg/mL BSA(0.1％)的dPBS)中至濃度為400μM，然后連續(xù)地用稀釋緩沖液稀釋至最終摩爾濃度為100μM至0.1nM。以相似的方式稀釋氧化震顫素。
為測(cè)定AC活性的氧化震顫素抑制作用，將25μL毛喉素(稀釋在dPBS中，最終濃度為25μM)、25μL稀釋的氧化震顫素和50μL細(xì)胞加入激動(dòng)劑試驗(yàn)孔。為測(cè)定受試化合物阻滯氧化震顫素抑制的AC活性的能力，將25μL毛喉素和氧化震顫素(稀釋在dPBS中，最終濃度分別為25μM和5μM)、25μL稀釋的受試化合物和50μL細(xì)胞加入剩余的試驗(yàn)孔。
將反應(yīng)物在37℃培養(yǎng)10分鐘并通過(guò)加入100μL冰冷的檢測(cè)緩沖液來(lái)停止反應(yīng)。密封板、在室溫培養(yǎng)過(guò)夜并在次日早晨在PerkinElmerTopCount液體閃爍計(jì)數(shù)儀(PerkinElmer Inc.，Wellesley，MA)上計(jì)數(shù)。基于觀察到的樣品的計(jì)數(shù)和如在生產(chǎn)商用戶(hù)手冊(cè)中描述的cAMP標(biāo)準(zhǔn)品，計(jì)算產(chǎn)生的cAMP的量(pmol/孔)。使用GraphPadPrism軟件包(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)，利用非線性回歸、一位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)方程式，通過(guò)非線性回歸分析來(lái)分析數(shù)據(jù)。使用Cheng-Prusoff方程式來(lái)計(jì)算Ki，分別利用氧化震顫素濃度-響應(yīng)曲線的EC50和氧化震顫素試驗(yàn)濃度作為KD和[L]。將Ki值轉(zhuǎn)化為pKi值，以測(cè)定幾何平均值和95％置信區(qū)間。然后將這些概述性的統(tǒng)計(jì)值轉(zhuǎn)回成Ki值，用于數(shù)據(jù)報(bào)告。
在這一試驗(yàn)中，較低的Ki值表明受試化合物在受試的受體上具有較高的功能活性。通常發(fā)現(xiàn)，在本試驗(yàn)中測(cè)試的本發(fā)明的典型化合物對(duì)于阻滯在表達(dá)hM2受體的CHO-K1細(xì)胞中毛喉素-介導(dǎo)的cAMP累積的氧化震顫素抑制，具有小于約10nM的Ki值。例如，發(fā)現(xiàn)實(shí)施例1的化合物具有小于約5nM的Ki值。
B.激動(dòng)劑介導(dǎo)的[35S]GTPγS結(jié)合的阻滯在第二個(gè)功能試驗(yàn)中，通過(guò)測(cè)量化合物在表達(dá)hM2受體的CHO-K1細(xì)胞中阻滯氧化震顫素刺激的[35S]GTPγS-結(jié)合的能力，來(lái)測(cè)定受試化合物的功能效力。
在使用時(shí)，解凍冷凍的膜，然后將其稀釋在每孔有5-10μg蛋白質(zhì)的最終靶組織濃度的試驗(yàn)緩沖液中。利用Polytron PT-2100組織破裂儀短暫地勻化膜，然后加入試驗(yàn)板。
在每個(gè)試驗(yàn)中，測(cè)定激動(dòng)劑氧化震顫素刺激[35S]GTPγS結(jié)合的EC90值(對(duì)于90％最大響應(yīng)的有效濃度)。
為測(cè)定試驗(yàn)化合物抑制氧化震顫素-刺激的[35S]GTPγS結(jié)合的能力，將下述物質(zhì)加入96孔板的每個(gè)孔中25μL有[35S]GTPγS(0.4nM)的試驗(yàn)緩沖液，25μL氧化震顫素(EC90)和GDP(3μM)，25μL稀釋的受試化合物和25μL表達(dá)hM2受體的CHO細(xì)胞膜。然后在37℃培養(yǎng)試驗(yàn)板60分鐘。利用PerkinElmer 96-孔收獲儀，用1％BSA預(yù)處理的GF/B濾器過(guò)濾試驗(yàn)板。用冰冷的沖洗緩沖液沖洗板3×3秒，然后空氣或真空干燥。將Microscint-20閃爍液(50μL)加入每個(gè)孔中，密封每個(gè)板，并在Topcounter(PerkinElmer)上計(jì)數(shù)放射性。用GraphPad Prism軟件包(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)，利用非線性回歸、一位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)方程式，通過(guò)非線性回歸分析來(lái)分析數(shù)據(jù)。使用Cheng-Prusoff方程式來(lái)計(jì)算Ki，分別利用試驗(yàn)化合物的濃度-響應(yīng)曲線的IC50值和試驗(yàn)中的氧化震顫素濃度作為KD和[L]，配體濃度。
在這一試驗(yàn)中，較低的Ki值表明受試化合物在受試的受體上具有較高的功能活性。通常發(fā)現(xiàn)在這一試驗(yàn)中受試的本發(fā)明的典型化合物對(duì)于在表達(dá)hM2受體的CHO-K1細(xì)胞中氧化震顫素-刺激的[35S]GTPγS結(jié)合的阻滯具有小于約10nM的Ki值。例如，發(fā)現(xiàn)實(shí)施例1的化合物具有小于約5nM的Ki值。
C.經(jīng)由FLIPR試驗(yàn)的激動(dòng)劑-介導(dǎo)的鈣釋放的阻滯與Gq蛋白偶聯(lián)的毒蕈堿性受體亞型(M1、M3和M5受體)，在激動(dòng)劑結(jié)合受體時(shí)激活磷脂酶C(PLC)通路。結(jié)果，活化的PLC水解磷脂酰肌醇二磷酸(PIP2)成二?；视?DAG)和磷脂酰-1，4，5-三磷酸(IP3)，其依次從細(xì)胞內(nèi)存儲(chǔ)處即內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和肌質(zhì)網(wǎng)產(chǎn)生鈣釋放。FLIPR(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)試驗(yàn)通過(guò)使用當(dāng)游離鈣結(jié)合時(shí)發(fā)熒光的鈣敏感性染料(Fluo-4AM，molecular Probes，Eugene，OR)，利用細(xì)胞內(nèi)鈣的這一增加。用FLIPR實(shí)時(shí)測(cè)定該熒光事件，其檢測(cè)到用人M1和M3以及黑猩猩M5受體克隆的單層細(xì)胞的熒光變化。通過(guò)拮抗劑抑制激動(dòng)劑介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)鈣增加的能力能測(cè)定拮抗劑效力。
對(duì)于FLIPR鈣刺激試驗(yàn)，在進(jìn)行試驗(yàn)前的晚上，將穩(wěn)定表達(dá)hM1、hM3和cM5受體的CHO細(xì)胞種入96-孔FLIPR板。通過(guò)用Cellwash(MTX Labsystems，Inc.)用FLIPR緩沖液(10mM HEPES，pH 7.4，2mM氯化鈣，2.5mM丙磺舒，在無(wú)鈣和鎂的HBSS中)洗滌接種的細(xì)胞兩次，以除去生長(zhǎng)培養(yǎng)基并留下50μL/孔的FLIPR緩沖液。然后用50μL/孔的4μM FLUO-4AM(制成2×溶液)在37℃，5％二氧化碳下培養(yǎng)細(xì)胞40分鐘。在染料培養(yǎng)期后，用FLIPR緩沖液洗滌細(xì)胞兩次，留下50μL/孔的最終體積。
為測(cè)定拮抗劑效力，首先測(cè)定氧化震顫素的細(xì)胞內(nèi)Ca2+釋放的劑量依賴(lài)性刺激，以使隨后可以測(cè)量在EC90濃度抗氧化震顫素刺激的拮抗劑效力。首先用化合物稀釋緩沖液培養(yǎng)細(xì)胞20分鐘，隨后加入激動(dòng)劑，這是通過(guò)FLIPR進(jìn)行的。按照在FLIPR測(cè)量和下面的數(shù)據(jù)還原部分中的詳細(xì)方法，結(jié)合公式ECF＝((F/100-F)^1/H)*EC50，產(chǎn)生氧化震顫素的EC90值。在刺激板中制備3×ECF的氧化震顫素濃度，以便將EC90濃度的氧化震顫素加入拮抗劑抑制試驗(yàn)板的每個(gè)孔中。
用于FLIPR的參數(shù)是曝光時(shí)長(zhǎng)為0.4秒，激光強(qiáng)度為0.5瓦特，激發(fā)波長(zhǎng)為488nm和發(fā)射波長(zhǎng)為550nm。通過(guò)在添加激動(dòng)劑前測(cè)量熒光變化10秒鐘來(lái)確定基線。在激動(dòng)劑刺激后，每0.5至1秒FLIPR連續(xù)地測(cè)量熒光變化1.5分鐘來(lái)捕捉最大熒光變化。
將熒光變化表示為每孔最大熒光減去基線熒光。利用S劑量-響應(yīng)的嵌入(built-in)模型，用GraphPad Prism(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)，通過(guò)非線性回歸，對(duì)藥物濃度的對(duì)數(shù)分析原始數(shù)據(jù)。按照Cheng-Prusoff方程式(Cheng & Prusoff，1973)，利用氧化震顫素EC50值作為KD和配體濃度的氧化震顫素EC90，通過(guò)Prism確定拮抗劑Ki值。
在這一試驗(yàn)中，較低的Ki值表明受試化合物在受試的受體上具有較高的功能活性。通常發(fā)現(xiàn)在本試驗(yàn)中測(cè)試的本發(fā)明的典型化合物對(duì)于阻滯在穩(wěn)定地表達(dá)hM3受體的CHO細(xì)胞中激動(dòng)劑介導(dǎo)的鈣釋放具有小于約10nM的Ki值。例如發(fā)現(xiàn)實(shí)施例1的化合物對(duì)于hM3受體具有小于約5nM的Ki值。
試驗(yàn)3乙酰膽堿誘導(dǎo)的支氣管收縮的豚鼠模型中支氣管保護(hù)作用的持續(xù)時(shí)間的測(cè)定采用本體內(nèi)試驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)顯示毒蕈堿性受體拮抗劑活性的受試化合物的支氣管保護(hù)作用。
通過(guò)籠子卡片單個(gè)地鑒定體重250至350g的6只雄性豚鼠(Duncan-Hartley(HsdPocDH)Harlan，Madison，WI)的組。在整個(gè)研究中，允許動(dòng)物自由獲得食物及水。
在全身體暴露給藥室(R&S Molds，San Carlos，CA)中經(jīng)10分鐘吸入給予試驗(yàn)化合物。安排給藥室，以便從中央總管能將氣霧劑同時(shí)遞送至6個(gè)單獨(dú)的室。將豚鼠暴露于受試化合物或載體(WFI)的氣霧劑中。這些氣霧劑產(chǎn)生自水溶液，例用LC Star霧化器裝置(Model 22F51，PARI Respiratory Equipment，Inc.Midlothian，VA)，在22psi的壓力下由氣體混合物(CO2＝5％，O2＝21％和N2＝74％)驅(qū)動(dòng)。在該操作壓力通過(guò)霧化器的氣體流量是大約3L/分鐘。通過(guò)正壓將產(chǎn)生的氣霧劑驅(qū)趕入室。在遞送氣霧化的溶液過(guò)程中不使用稀釋空氣。在10分鐘霧化期間，大約1.8mL的溶液被霧化。通過(guò)比較填充霧化器的霧化前和霧化后的重量，來(lái)重量分析地測(cè)量該值。
在給藥后1.5、24、48和72小時(shí)，利用全身體積掃描術(shù)評(píng)價(jià)經(jīng)由吸入給予的受試化合物的支氣管保護(hù)作用。
在肺評(píng)價(jià)開(kāi)始前四十五分鐘，用氯胺酮(43.75mg/kg)，甲苯噻嗪(3.50mg/kg)和乙酰丙嗪(1.05mg/kg)肌內(nèi)注射來(lái)麻醉每只豚鼠。在手術(shù)位置備皮并用70％乙醇清潔后，做頸腹面的2-3cm中線切口。然后分離頸靜脈并插入充滿鹽水的聚乙烯導(dǎo)管(PE-50，Becton Dickinson，Sparks，MD)以使得靜脈內(nèi)輸注在鹽水中的ACh(Sigma-Aldrich，St.Louis，Mo)。然后解剖使開(kāi)氣管游離并插入14G特氟隆管(#NE-014，Small Parts，Miami Lakes，F(xiàn)L)。如果需要，通過(guò)進(jìn)一步肌內(nèi)注射前面提及的麻醉混合物來(lái)維持麻醉。如果動(dòng)物對(duì)掐它的爪有反應(yīng)或如果呼吸速度大于100次呼吸/分鐘，則監(jiān)測(cè)和調(diào)節(jié)麻醉的深度。
一旦插管完成，就將動(dòng)物置于體積掃描器(#PLY3114，BuxcoElectronics，Inc.，Sharon，CT)中和插入食管壓力導(dǎo)管(PE-160，BectonDickinson，Sparks，MD)，以測(cè)量肺驅(qū)動(dòng)壓(壓力)。將特氟隆氣管導(dǎo)管連接至體積掃描器的開(kāi)口以使豚鼠能呼吸來(lái)自室外的空氣。然后密封室。使用加熱燈維持體溫，并利用10mL校準(zhǔn)注射器(#5520系列，Hans Rudolph，Kansas City，MO)用4mL空氣使豚鼠的肺膨脹3次，以確保下氣道不崩塌且該動(dòng)物不會(huì)通氣過(guò)度。
一旦測(cè)定順應(yīng)性基線值在0.3-0.9mL/cm H2O范圍內(nèi)，且阻力基線值在0.1-0.199cm H2O/mL/秒范圍內(nèi)，就開(kāi)始肺評(píng)價(jià)。Buxco肺測(cè)量計(jì)算機(jī)程序使得能夠收集和導(dǎo)出肺的值。
開(kāi)始這一程序啟動(dòng)了試驗(yàn)方案和數(shù)據(jù)收集。通過(guò)Buxco壓力傳導(dǎo)器測(cè)量隨每次呼吸在體積掃描器內(nèi)發(fā)生的體積隨時(shí)間的變化。通過(guò)整合隨時(shí)間變化的該信號(hào)，計(jì)算每次呼吸的流量測(cè)量值。通過(guò)Buxco(MAX 2270)前置放大器將該信號(hào)和利用Sensym壓力傳導(dǎo)器(#TRD4100)收集的肺驅(qū)動(dòng)壓力變化連接至數(shù)據(jù)收集界面(#’sSFT3400和SFT3813)。從這兩個(gè)輸入導(dǎo)出所有其它肺參數(shù)。
收集基線值5分鐘，之后用ACh攻擊豚鼠。從試驗(yàn)開(kāi)始以下述劑量和預(yù)定的時(shí)間從注射器泵(sp210iw，World Precision Instruments，Inc.，Sarasota，F(xiàn)L)靜脈內(nèi)輸注ACh(0.1mg/mL)1分鐘在第5分鐘1.9μg/分鐘，在第10分鐘3.8μg/分鐘，在第15分鐘7.5μg/分鐘，在第20分鐘15.0μg/分鐘，在第25分鐘30μg/分鐘和在第30分鐘60μg/分鐘。如果在每次ACh劑量后3分鐘阻力或順應(yīng)性不返回基線值，則從10mL校正注射器用4mL空氣膨脹豚鼠的肺3次。記錄的肺參數(shù)包括呼吸頻率(呼吸/分鐘)、順應(yīng)性(mL/cm H2O)和肺阻力(cm H2O/mL/秒)。一旦在該方案的第35分鐘完成肺功能測(cè)量，就從體積掃描器中移開(kāi)豚鼠和通過(guò)二氧化碳窒息來(lái)使豚鼠安樂(lè)死。
以下列方式中的一種或兩種來(lái)評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)(a)從“壓力變化”與“流量變化”的比值計(jì)算肺阻力(RL，cmH2O/mL/秒)。計(jì)算介質(zhì)和受試化合物組對(duì)ACh(60μg/min，IH)的RL響應(yīng)。計(jì)算在每個(gè)處理前時(shí)間在介質(zhì)處理動(dòng)物中的平均ACh響應(yīng)，并用來(lái)計(jì)算在相應(yīng)的處理前時(shí)間在每個(gè)受試化合物劑量下ACh響應(yīng)的抑制百分率。利用GraphPad Prism，用于Windows的3.00版(GraphPad Software，San Diego，California)使‘RL’的抑制劑量—響應(yīng)曲線與四參數(shù)邏輯方程擬合，估計(jì)支氣管保護(hù)ID50(抑制ACh(60μg/分鐘)支氣管收縮響應(yīng)50％所需的劑量)。使用的方程式如下Y＝Min+(Max-Min)/(1+10((logID50-x)*希爾斜率))其中X是劑量的對(duì)數(shù)，Y是響應(yīng)(ACh誘導(dǎo)的RL增加的抑制百分率)。Y在Min起始并漸進(jìn)靠近Max，具有S形狀。
(b)量PD2，其被定義為引起基線肺阻力加倍需要的ACh或組胺的量，使用下述方程式(衍生自臨床中用于計(jì)算PC20值的方程式，其被描述在American Thoracic Society.Guidelines for methacholine andexercise challenge testing-1999.Am J Respir Crit Care Med.161309-329(2000)中)，利用一系列ACh或組胺攻擊期間從流量和壓力衍生的肺阻力值來(lái)計(jì)算PD2=antilog[logC1+(logC2-logC1)(2R0-R1)R2-R1]]]>其中:
C1＝C2前的ACh或組胺的濃度C2＝導(dǎo)致肺阻力(RL)至少2倍增加的ACh或組胺的濃度R0＝基線RL值R1＝C1后的RL值R2＝C2后的RL值將有效劑量定義為將對(duì)50μg/mL劑量的ACh的支氣管收縮響應(yīng)限制為基線肺阻力的雙倍(PD2(50))的劑量。
利用雙尾-Students t-檢驗(yàn)進(jìn)行該數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。P值＜0.05被認(rèn)為顯著。
通常，優(yōu)選在本試驗(yàn)中在給藥后1.5小時(shí)對(duì)ACh誘導(dǎo)的支氣管收縮作用具有小于約200μg/mL的PD2(50)的試驗(yàn)化合物。例如，發(fā)現(xiàn)實(shí)施例1的化合物在給藥后1.5小時(shí)對(duì)ACh誘導(dǎo)的支氣管收縮作用具有小于約200μg/mL的PD2(50)。
試驗(yàn)4吸入豚鼠流涎試驗(yàn)使體重200-350g的豚鼠(Charles River，Wilmington，MA)在到達(dá)后適應(yīng)屋內(nèi)豚鼠居住地至少3天。在餡餅形狀的給藥室(R&Smolds，San Carlos，CA)中經(jīng)10分鐘時(shí)間吸入(IH)給予試驗(yàn)化合物或介質(zhì)。將試驗(yàn)溶液溶解在無(wú)菌水中并利用充滿5.0mL給藥溶液的霧化器給藥。將豚鼠限制在吸入室中30分鐘。在這一段時(shí)間內(nèi)，將豚鼠限制在大約110平方厘米的區(qū)域內(nèi)。這一空間對(duì)于動(dòng)物自由轉(zhuǎn)向，自己復(fù)位和允許理毛行為是足夠的。在適應(yīng)20分鐘后，使動(dòng)物暴露于從在22psi壓力下由房子空氣驅(qū)動(dòng)的LS Star Nebulizer Set(型號(hào)22F51，PARI Respiratory Equipment，Inc.Midlothian，VA)中產(chǎn)生的氣霧劑。在霧化完成時(shí)，在處理后1.5、6、12、24、48或72小時(shí)評(píng)價(jià)豚鼠。
在試驗(yàn)前一小時(shí)，以0.88mL/kg體積肌內(nèi)(IM)注射氯胺酮43.75mg/kg、甲苯噻嗪3.5mg/kg和乙酰丙嗪1.05mg/kg的混合物來(lái)麻醉豚鼠。將動(dòng)物的腹部朝上放在加熱(37℃)的毯子上，它們的頭在向下的斜坡上有20度的傾斜。將4-層2×2英寸紗布?jí)|(Nu-沙布通用棉球，Johnson and Johnson，Arlington，TX)塞入豚鼠嘴中。五分鐘后，給予毒蕈堿性激動(dòng)劑毛果蕓香堿(3.0mg/kg、SC)并立即丟掉紗布?jí)|并替換新的預(yù)先稱(chēng)重的紗布?jí)|。收集唾液10分鐘，在該點(diǎn)稱(chēng)重紗布?jí)|并用記錄的重量差來(lái)確定累積的唾液的量(用mg表示)。計(jì)算接受介質(zhì)和每個(gè)劑量試驗(yàn)化合物的動(dòng)物所收集的唾液的平均量。介質(zhì)組平均值被認(rèn)為是100％流涎。利用結(jié)果平均值(n＝3或更多)計(jì)算結(jié)果。利用雙因素ANOVA對(duì)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的每個(gè)劑量計(jì)算置信區(qū)間(95％)。該模型是在Rechter，″Estimation of antieholinergic drugeffects in Mice by antagonism against Pi1ocarpine-induced salivation″Ata Pharmacol Toxicol，24243-254(1996)中描述的方法的改進(jìn)形式。
計(jì)算在每個(gè)治療前時(shí)間，在介質(zhì)處理的動(dòng)物中唾液的平均重量，并用于計(jì)算每個(gè)劑量在相應(yīng)的治療前時(shí)間流涎的抑制百分率。利用Graph Pad Prism，Windows 3.00版(Graph Pad Software，San Diego，California)將抑制劑量響應(yīng)數(shù)據(jù)擬合成四參數(shù)邏輯方程式，以估計(jì)抗催涎ID50(抑制50％的毛果蕓香堿誘發(fā)的流涎所需的劑量)。采用的方程式如下Y＝Min+(Max-Min)/(1+10((logID50-x)*希爾斜率))其中X是劑量的對(duì)數(shù)，Y是響應(yīng)(流涎的抑制百分率)。Y在Min開(kāi)始且逐漸靠近Max，具有S形狀。
使用抗-催涎ID50與支氣管保護(hù)ID50的比值來(lái)計(jì)算試驗(yàn)化合物的表觀肺選擇性指數(shù)。通常，具有大于約5的表觀肺選擇性指數(shù)的化合物是優(yōu)選的。例如，在本試驗(yàn)中，實(shí)施例1的化合物具有大于約5的表觀肺選擇性指數(shù)。
試驗(yàn)5在神志清醒的豚鼠中醋甲膽堿-誘導(dǎo)的壓制反應(yīng)在這些研究中使用健康、成年、雄性Sprague-Dawley豚鼠(Harlan，Indianapolis，IN)，體重200至300g。在異氟醚(實(shí)現(xiàn))麻醉下，給動(dòng)物裝上頸總動(dòng)脈和頸靜脈導(dǎo)管(PE-50導(dǎo)管)。利用皮下通道使導(dǎo)管表面化至肩胛下區(qū)。所有外科手術(shù)切口用4-0 Ethicon絲線縫合并且用肝素(1000單位/mL)固定。在手術(shù)結(jié)束時(shí)每只動(dòng)物被給予鹽水(3mL，SC)以及丁丙諾非(0.05mg/kg，IM)。在返回到它們居住的房間前，讓動(dòng)物依靠加熱墊恢復(fù)。
外科手術(shù)后大約18至20小時(shí)，動(dòng)物稱(chēng)重并將每只動(dòng)物上的頸動(dòng)脈導(dǎo)管連接到轉(zhuǎn)導(dǎo)器上，記錄動(dòng)脈壓。使用Biopac MP-100獲得系統(tǒng)(Acquisition System)記錄動(dòng)脈壓和心率。讓動(dòng)物適應(yīng)和穩(wěn)定20分鐘時(shí)間。
用MCh(0.3mg/kg，IV)攻擊每只動(dòng)物，通過(guò)用頸靜脈管給予MCh并監(jiān)測(cè)心血管反應(yīng)10分鐘。然后把動(dòng)物放到全身體給藥室中，該給藥室與含有試驗(yàn)化合物溶液或媒介物溶液的霧化器連接。使用可吸入空氣和5％二氧化碳的氣體混合物使溶液霧化10分鐘，流速為3升/分鐘。從全身體室中移出動(dòng)物并使它們返回到各自的籠中。在給藥后1.5和24小時(shí)后，再用MCh(0.3mg/kg，IV)攻擊動(dòng)物并測(cè)定血液動(dòng)力學(xué)響應(yīng)。此后，用戊巴比妥鈉(150mg/kg，IV)使動(dòng)物安樂(lè)死。
MCh引起平均動(dòng)脈壓(MAP)下降和心率降低(心動(dòng)過(guò)緩)。測(cè)量每次MCh攻擊(IH給藥之前和之后)的MAP從基線的最大下降(壓制反應(yīng))。心動(dòng)過(guò)緩效應(yīng)不用于分析，因?yàn)檫@些反應(yīng)不是很強(qiáng)并且不可重復(fù)。將處理對(duì)MCh響應(yīng)的效應(yīng)表示為對(duì)照壓制反應(yīng)的％抑制(平均值+/-SEM)。用post-hoc檢驗(yàn)使用兩因素ANOVA檢驗(yàn)處理和處理前時(shí)間的效應(yīng)。在吸入給予媒介物后1.5和24小時(shí)，對(duì)MCh的壓制反應(yīng)相對(duì)未變。
使用抗降壓ID50與支氣管保護(hù)ID50的比計(jì)算試驗(yàn)化合物的表觀肺選擇性。一般說(shuō)來(lái)，優(yōu)選具有大于5的表觀肺選擇性指數(shù)的化合物。例如，在本試驗(yàn)中，實(shí)施例1的化合物具有大于5的表觀肺選擇性指數(shù)。
盡管已參照本發(fā)明的特定方面或?qū)嵤┓桨该枋隽吮景l(fā)明，但是本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員將理解，在不偏離本發(fā)明的真實(shí)精神和范圍下，可以進(jìn)行不同的變化或者用等同方案替換。另外，在可適用的專(zhuān)利法和細(xì)則允許的程度上，在相同程度上通過(guò)參考將本文中引用的所有出版物、專(zhuān)利和專(zhuān)利申請(qǐng)以其全部并入，如同通過(guò)參考已單個(gè)地將每個(gè)文件并入本文。
權(quán)利要求
1.式I的化合物；或者其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物或立體異構(gòu)體 其中a是0或1至5的整數(shù)；每個(gè)R1獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)環(huán)烷基、氰基、鹵素、-OR1a、-C(O)OR1b、-SR1c、-S(O)R1d、-S(O)2R1e、-NR1fR1g、-NR1hS(O)2R1i和-NR1jC(O)R1k；其中R1a、R1b、R1c、R1d、R1e、R1f、R1g、R1h、R1i、R1j和R1k中的每一個(gè)獨(dú)立地是氫、(1-4C)烷基或苯基(1-4C)烷基；b是0或1至4的整數(shù)；每個(gè)R2獨(dú)立地選自(1-4C)烷基、(2-4C)烯基、(2-4C)炔基、(3-6C)環(huán)烷基、氰基、鹵素、-OR2a、-C(O)OR2b、-SR2c、-S(O)R2d、-S(O)2R2e、-NR2fR2g、-NR2hS(O)2R2i和-NR2jC(O)R2k；其中R2a、R2b、R2c、R2d、R2e、R2f、R2g、R2h、R2i、R2j和R2k中的每一個(gè)獨(dú)立地是氫、(1-4C)烷基或苯基(1-4C)烷基；W代表O或NWa，其中Wa是氫或(1-4C)烷基；c是0或1至5的整數(shù)；每個(gè)R3獨(dú)立地表示(1-4C)烷基或者兩個(gè)R3基團(tuán)連接在一起形成(1-3C)亞烷基、(2-3C)亞烯基或環(huán)氧乙烷-2，3-二基；m是0或1；R4選自氫、(1-4C)烷基和(3-4C)環(huán)烷基；s是0、1或2；Ar1表示亞苯基或(3-5C)亞雜芳基，含有1或2個(gè)獨(dú)立地選自氧、氮或硫的雜原子；其中亞苯基或亞雜芳基被(R5)q取代，其中q是0或1至4的整數(shù)并且每個(gè)R5獨(dú)立地選自鹵素、羥基、(1-4C)烷基或(1-4C)烷氧基；t是0、1或2；n是0或1至3的整數(shù)；d是0或1至4的整數(shù)；每個(gè)R6獨(dú)立地表示氟或(1-4C)烷基；p是0或1；并且R7和R8獨(dú)立地是氫或(1-4C)烷基；其中R1、R1a-1k、R2、R2a-2k、R3、R5、R6、R7和R8中的每個(gè)烷基和烷氧基任選地被1至5個(gè)氟取代基取代。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中a、b和c各表示0。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中W表示O。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中m是0，s是0并且t是1。
5.權(quán)利要求1的化合物，其中-CONR7R8處于對(duì)位位置，d是0并且n是2。
6.權(quán)利要求1的化合物，其中Ar1表示苯-1，3-亞基、苯-1，4-亞基、2，4-亞噻吩基或2，5-亞噻吩基；其中亞苯基或亞噻吩基任選被一個(gè)或者兩個(gè)R5取代基取代。
7.權(quán)利要求6的化合物，其中Ar1表示苯-1，4-亞基或2，4-亞噻吩基，其任選被一個(gè)或者兩個(gè)R5取代基取代。
8.權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)的化合物，其中R4選自氫、甲基和乙基。
9.權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)的化合物，其中R7選自氫、甲基、乙基、正-丙基和異丙基；并且R8是氫。
10.權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)的化合物，其中R7和R8是乙基。
11.權(quán)利要求1的化合物其中a、b和c各表示0；W表示O；m是0；s是0；t是1；Ar1表示苯-1，4-亞基，其任選被一個(gè)或者兩個(gè)R5取代基取代；d是0；n是2，-CONR7R8處于對(duì)位位置；并且R8是氫。
12.權(quán)利要求11的化合物，其中R5獨(dú)立地選自鹵素、(1-4C)烷基或(1-4C)烷氧基，其中每個(gè)烷基和烷氧基任選被1至3個(gè)氟取代基取代。
13.權(quán)利要求1的化合物，它選自聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲?；鵠乙氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{甲基-[4-(4-甲基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲?；鵠氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-乙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{甲基-[4-(4-丙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲?；鵠氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-異丙基氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-2-氟苯甲酰氨基]乙基}哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[2，5-二溴代-4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-2-氟苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[4-(4-二乙氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-2-氟苯甲酰氨基]乙基}哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-二乙氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-2-氟苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-二乙氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(3-(S)-二乙氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[4-(2-氨基甲?；?哌啶-1-基甲基)苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨基甲?；?哌啶-1-基甲基)-2-甲氧基苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)噻吩-2-羰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-((R)-3-二乙氨基甲酰哌啶-1-基甲基)噻吩-2-羰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-((R)-3-乙氨基甲酰哌啶-1-基甲基)噻吩-2-羰基]氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)噻吩-2-羰基]氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-((R)-3-二乙氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-1H-吡咯-2-羰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-1H-吡咯-2-羰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-((R)-3-二乙氨基甲酰哌啶-1-基甲基)呋喃-2-羰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-(4-二乙氨基甲?；?哌啶-1-基甲基)呋喃-2-羰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)呋喃-2-羰基]-氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{[5-((R)-3-二乙氨基甲酰哌啶-1-基甲基)呋喃-2-羰基]氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-[2-({3-[4-(3-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯基]丙?；鶀甲氨基)乙基]哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-[2-({3-[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯基]丙?；鶀甲氨基)乙基]哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{3-[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯基]丙酰氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{3-[4-(4-二乙氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯基]丙酰氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基-氨基甲酸1-(2-{3-[4-(3-二乙氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯基]丙酰氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-{2-[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲酰氨基]乙基}哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-2-氯代-苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)-2-氯代-5-甲氧基苯甲?；鵠甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯；和聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-[2-({2-[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯基]乙酰基}甲氨基)乙基]哌啶-4-基酯；或者它們的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。
14.權(quán)利要求13的化合物，它選自聯(lián)苯基-2-基氨基甲酸1-(2-{[4-(4-氨基甲酰哌啶-1-基甲基)苯甲酰基]甲氨基}乙基)哌啶-4-基酯或者它們的藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑合物。
15.藥物組合物，它包含藥學(xué)上可接受的載體和治療有效量的權(quán)利要求1至14任一項(xiàng)的化合物。
16.權(quán)利要求15的藥物組合物，其中該組合物還包含治療有效量的選自β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑、甾體抗炎劑、磷酸二酯酶-4抑制劑和它們的組合的藥劑。
17.權(quán)利要求16的藥物組合物，其中該組合物包含治療有效量的β2腎上腺素能受體激動(dòng)劑和甾體抗炎劑。
18.制備權(quán)利要求1至14任一項(xiàng)的化合物的方法，該方法包括(a)使式II的化合物 或其鹽，與式III的化合物反應(yīng) 其中Z1表示離去基團(tuán)；或者(b)使式IV的化合物 IV與式V的化合物 或其反應(yīng)性衍生物偶聯(lián)；或者(c)使式VI的化合物 其中Z2表示離去基團(tuán)；與式VII的化合物反應(yīng) 或者(d)使式II的化合物與式VIII的化合物 在還原劑的存在下反應(yīng)；或者(e)使式IX的化合物 與式VII的化合物在還原劑的存在下反應(yīng)；或者(f)使式XVIII的化合物 其中R’是H、-CH3或-CH2CH3，與式XIX的化合物反應(yīng)NHR7R8XIX產(chǎn)生式I的化合物。
19.權(quán)利要求18的方法，它還包括形成式I化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。
20.通過(guò)權(quán)利要求18或19的方法制備的產(chǎn)品。
21.研究包含毒蕈堿性受體的生物系統(tǒng)或樣品的方法，該方法包括(a)使所述生物系統(tǒng)或樣品與權(quán)利要求1至14任一項(xiàng)的化合物接觸；并且(b)測(cè)定所述化合物對(duì)所述生物系統(tǒng)或樣品產(chǎn)生的效應(yīng)。
22.用于治療中或作為藥物的權(quán)利要求1至14任一項(xiàng)的化合物。
23.用于治療肺疾病的權(quán)利要求1至14任一項(xiàng)的化合物。
24.用于拮抗哺乳動(dòng)物中毒蕈堿性受體的權(quán)利要求1至14任一項(xiàng)的化合物。
25.含有權(quán)利要求1至14任一項(xiàng)的化合物的藥物。
26.權(quán)利要求1至14任一項(xiàng)的化合物用于制備藥物的用途。
27.權(quán)利要求26的用途，其中所述藥物用于治療肺疾病。
28.權(quán)利要求26的用途，其中所述藥物用于拮抗哺乳動(dòng)物中的毒蕈堿性受體。
全文摘要
本發(fā)明提供了式I的化合物，其中a、b、c、d、m、n、p、s、t、W、Ar
文檔編號(hào)A61K31/4545GK1930125SQ200580007636
公開(kāi)日2007年3月14日 申請(qǐng)日期2005年3月10日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月11日
發(fā)明者M·瑪曼, 季玉華, 穆永琪, C·休斯菲爾德, 李莉 申請(qǐng)人:施萬(wàn)制藥