專利名稱：抗人免疫缺陷病毒的單鏈脫氧核苷酸的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了抗病毒的單鏈脫氧核苷酸，尤其是抗人免疫缺陷病毒(HIV)的單鏈脫氧核苷酸，該脫氧核苷酸能夠抑制HIV在人外周血單個核細(xì)胞中的復(fù)制，因而對HIV感染和由其引發(fā)的艾滋病有治療作用。本發(fā)明還提供了能夠抑制HIV在人外周血單個核細(xì)胞中復(fù)制的脫氧核苷酸的具體序列。
背景技術(shù)：
截至2003年12月，全球有4000萬人感染艾滋病(Onyinye I.Iweala.HIV diagnostic testsan overview.Contraception，2004，(70)141-147.)。艾滋病，也稱獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)，是由人類免疫缺陷病毒(HIV)引起的一種的傳染性疾病。
病毒是一類體積微小，結(jié)構(gòu)相對簡單，只能在活細(xì)胞內(nèi)以復(fù)制方式增殖的非細(xì)胞型微生物。病毒的結(jié)構(gòu)包括核酸、殼粒和包膜。病毒的核酸，即病毒的基因組是病毒的核心，決定病毒遺傳、變異和復(fù)制。殼粒和胞膜起到保護(hù)病毒核心的作用，并具有抗原性。根據(jù)病毒核酸的類型，將病毒分為DNA病毒、RNA病毒。DNA病毒包括雙鏈DNA病毒和單鏈DNA病毒；RNA病毒包括單正鏈RNA病毒、單負(fù)鏈RNA病毒和雙鏈RNA病毒及逆轉(zhuǎn)錄病毒。DNA病毒包括但不限于乙型肝炎病毒、TTV病毒、腺病毒、乳頭瘤病毒、帶狀皰疹病毒、天花病毒和牛痘病毒等。RNA病毒包括但不限于流感病毒、豬瘟病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、庚型肝炎病毒、狂犬病毒、埃博拉病毒、腸道病毒和人免疫缺陷病毒等。
人類免疫缺陷病毒呈圓形，直徑100nm-120nm，電鏡下可見一致密的圓錐狀核心，內(nèi)含病毒RNA分子和酶(逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶和蛋白酶)，病毒外層囊膜為雙層脂質(zhì)蛋白膜，其中嵌有的gp120蛋白和gp41蛋白，它們分別組成了病毒的刺突和跨膜蛋白。囊膜內(nèi)面為P17蛋白構(gòu)成的衣殼。病毒中心由核心蛋白(P24)和病毒RNA組成。
HIV基因組長約9.2kb，含gag、pol、env 3個結(jié)構(gòu)基因和至少6個調(diào)控基因(Tat Rev、Nef、Vif、VPU、Vpr)并在基因組的5′端和3′端各含長末端重復(fù)序列。gag基因編碼病毒核心蛋白質(zhì)如，p24、p9、p6、p17蛋白等；pol基因編碼多種酶類，包括逆轉(zhuǎn)錄酶等；env基因編碼大的病毒前體糖蛋白gp160，gp160在翻譯后被降解為gp120和gp41(STANLEY A.SCHWARTZ AND MADHAVAN P.N.NAIR.Current Concepts in Human Immunodeficiency VirusInfection and AIDS.CLINICAL AND DIAGNOSTIC LABORATORY IMMUNOLOGY，May 1999，p.295-305.)。
在感染HIV后的數(shù)周內(nèi)，感染者會出現(xiàn)由HIV引起的病毒血癥，與此同時，多數(shù)感染者會發(fā)生HIV特異性免疫反應(yīng)，反應(yīng)的結(jié)果是HIV病毒血癥的減輕。之后，典型的感染者會進(jìn)入一個穩(wěn)定的無癥狀期，此期可持續(xù)數(shù)年或更長的時間。在此期，患者的HIV病毒血癥較輕，CD4+細(xì)胞數(shù)無明顯的減少，這主要是由于HIV的復(fù)制與清除，感染CD4+細(xì)胞的破壞與補(bǔ)充處于動態(tài)平衡之中(STANLEY A.SCHWARTZ AND MADHAVAN P.N.NAIR.CurrentConcepts in Human Immunodeficiency Virus Infection and AIDS.CLINICAL ANDDIAGNOSTIC LABORATORY IMMUNOLOGY，May 1999，p.295-305.)。隨著時間的推移，若外周血的HIV水平持續(xù)升高，HIV感染者就會進(jìn)行性出現(xiàn)艾滋病的表現(xiàn)。
研制出抗HIV的藥物和制劑是艾滋病治療的關(guān)鍵，而抗艾滋病藥物的治療效果評價的方法是選擇抗艾滋病藥物的重點。艾滋病毒感染的檢測主要有病毒核酸、p24抗原和抗HIV抗體檢測。外周血HIV的水平是判定HIV感染者的疾病進(jìn)展和治療效果的重要指標(biāo)。HIV p24抗原和HIV RNA的定量檢測是檢測人外周血HIV的重要方法(STANLEY A.SCHWARTZ ANDMADHAVAN P.N.NAIR.Current Concepts in Human Immunodeficiency Virus Infectionand AIDS.CLINICAL AND DIAGNOSTIC LABORATORY IMMUNOLOGY，May 1999，p.295-305.)。
p24是由HIV病毒的結(jié)構(gòu)基因gag所編碼的HIV的核心蛋白(Iweala OI.HIV diagnostictestsan overview.Contraception2004，Aug；70(2)141-7.)。有研究表明，抗病毒藥物能夠降低血液中p24抗原的水平，因此，血液中p24抗原的水平是評價抗病毒制劑抗病毒效果的一個非常有用的標(biāo)志物(Spector，S.A.，et al.The antiviral effect of zidovudine andribavirin in clinical trials and the use of p24 antigen levels as a virologic marker.J.Infect.Dis.1989，159822-828.；Burgisser，P.，et al.Performance of fivedifferent assays for the quantification of viral load in persons infected with varioussubtypes of HIV-1.J.Acquir.Immune Defic.Syndr.2000，23138-144)。
p24可出現(xiàn)在從HIV感染者分離的血清中，采用酶免疫試劑盒可在約20％的無癥狀HIV感染者和40-50％的艾滋病患者中檢出p24抗原。HIV感染的體外培養(yǎng)細(xì)胞可釋放p24到上清中，p24的釋放是HIV復(fù)制的指標(biāo)，釋放的量和病毒的復(fù)制成正比。HIV復(fù)制受到抑制，p24的含量降低。
因此，本發(fā)明利用HIV感染的人外周血單個和細(xì)胞(PBMC)向培養(yǎng)上清中釋放的p24水平來檢測單鏈脫氧核苷酸抗HIV病毒的活性。
本發(fā)明中所述的單鏈脫氧核苷酸可經(jīng)多種化學(xué)修飾。這些化學(xué)修飾包括但不限于磷酸骨架修飾、糖環(huán)修飾和堿基修飾。磷酸骨架的修飾可以是硫代修飾。硫代修飾是指核苷酸片段中磷酸二酯鍵中的非橋氧原子被硫原子取代(Ekambar R.Kandimalla et al.Mixed backboneantisense oligonucleotidesdesign，biochemical and biological properties ofoligorucleotides containing 2 -5-ribo-and3-5-deoxyribonucleotide segments.Nucleic Acids Research，1997，25(2)370-378)，這種取代可發(fā)生脫氧核苷酸部分或全部的磷酸二酯鍵。磷酸骨架的修飾可以是通過形成其它類型的磷酸脂鍵實現(xiàn)，這些磷酸脂包括但不限于甲基磷酸酯、硒代磷酸酯、甲硼基磷酸酯和雙硫代磷酸酯(英文文獻(xiàn))。糖環(huán)修飾可以是對戊糖的2′位進(jìn)行修飾。戊糖的2′位修飾包括但不限于甲氧基、甲氧乙氧基、丙烯氧基和氟代修飾(Ernst Urban，Christian R.Noe.Structural modifications ofantisense oligonucleotides.Il Farmaco.2003，58243_258)。堿基修飾主要指單鏈脫氧核苷酸中包含稀有堿基(Xiaolan Chen，Nancy Dudgeon，Long Shen and Jui H.Wang.DrugDiscovery Target，2005，10(8)587-593.)，稀有堿基是指除A、G、C、U外的一些堿基，包括雙氫尿嘧啶(DHU)、假尿嘧啶(ψ，pseudouridine)和甲基化的嘌呤(mG，mA)等。一般的嘧啶核苷以雜環(huán)上N-1與糖環(huán)的C-1’連成糖苷鍵，假尿嘧啶核苷則用雜環(huán)上的C-5與糖環(huán)的C-1’相連。
單鏈脫氧核苷酸堿基的添加是指在本發(fā)明所提供的單鏈脫氧核苷酸的一端或兩端添加了1到10個堿基所形成的單鏈脫氧核苷酸。兩端的刪切是指在本發(fā)明所提供的單鏈脫氧核苷酸的一端或兩端刪切一個或數(shù)個堿基所形成的單鏈脫氧核苷酸。
單鏈脫氧核苷酸堿基的改變是指將本發(fā)明所提供的單鏈脫氧核苷酸的堿基改變形成的單鏈脫氧核苷酸。公式所能推出的序列指的是根據(jù)本發(fā)明中所總結(jié)的單鏈脫氧核苷酸的公式所推導(dǎo)出的單鏈脫氧核苷酸的序列。
單鏈脫氧核苷酸包括但不限于附序列表所示的序列和實施例2所出示的序列及其根據(jù)實施例2所示公式所能推出的序列。
本發(fā)明發(fā)現(xiàn)刺激人PBMC的培養(yǎng)上清能夠抑制HIV感染的PBMC細(xì)胞分泌p24抗原，因此，本發(fā)明的單鏈脫氧核苷酸能夠抑制HIV病毒的復(fù)制，對艾滋病具有治療作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的之一是提供人工合成的單鏈脫氧核苷酸，這些單鏈脫氧核苷酸可用于治療病毒感染性疾病，這些疾病包括但不限于由HIV感染引起的艾滋病。
本發(fā)明的目的之二是提供用任何單鏈脫氧核苷酸治療病毒感染性疾病的技術(shù)方法和技術(shù)設(shè)想，這些病毒感染性疾病包括但不限于由HIV感染引起的艾滋病。
本發(fā)明的目的之三是提供對病毒感染性疾病有治療作用的單鏈脫氧核苷酸的序列，這些單鏈脫氧核苷酸的磷酸二酯鍵可以被部分硫化或全部硫化，這些單鏈脫氧核苷酸可以經(jīng)化學(xué)修飾。這些單鏈脫氧核苷酸是兩端和中間可加上/入或改動堿基所產(chǎn)生的結(jié)構(gòu)的核心結(jié)構(gòu)。這些病毒感染性疾病包括但不限于由HIV感染引起的艾滋病。
下面結(jié)合具體的制備實施例和生物學(xué)效果實施例，并參照附圖
進(jìn)一步詳細(xì)地描述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例只是為了舉例說明本發(fā)明，而非以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
實施例在如下實施例中，未詳細(xì)描述的各種過程和方法是本領(lǐng)域中公知的常規(guī)方法，例如合成采用固相亞磷酰胺三酯法。
在如下實施例中，所用試劑的來源、商品名和/或有必要列出其組成成分者，均只標(biāo)明一次。在其后所用相同試劑如無特殊說明，不在贅述上述內(nèi)容。
實施例1、單鏈脫氧核苷酸的合成采用固相亞磷酰胺三酯法合成DNA片段，此方法具有高效、快速等優(yōu)點，已在DNA化學(xué)合成中廣泛使用。
DNA化學(xué)合成不同于酶促的DNA合成，酶促的DNA合成過程是從5’→3’方向延伸，而DNA化學(xué)合成是由3’端開始。具體的反應(yīng)步驟如下一、脫保護(hù)基用三氯乙酸脫去連結(jié)在CPG(Controlled Pore Glass)上的核苷酸的保護(hù)基團(tuán)DMT(二甲氧基三苯甲基)，獲得游離的5’-羥基端，以供下一步縮合反應(yīng)使用。
二、活化將亞磷酰胺保護(hù)的核苷酸單體與四氮唑活化劑混合并進(jìn)入合成柱，形成亞磷酰胺四唑活性中間體(其3’-端已被活化，但5’-端仍受DMT保護(hù))，此中間體將與GPG上的已脫保護(hù)基的核苷酸發(fā)生縮合反應(yīng)。
三、連接亞磷酰胺四唑活性中間體遇到CPG上已脫保護(hù)基的核苷酸時，將與其5’-羥基發(fā)生親合反應(yīng)，縮合并脫去四唑，此時合成的寡核苷酸鏈向前延長一個堿基。
四、封閉縮合反應(yīng)后為了防止連在CPG上的未參與反應(yīng)的5’-羥基在隨后的循環(huán)反應(yīng)中被延伸，常通過乙?；瘉矸忾]此端羥基，一般乙?；噭┦怯靡宜狒蚇-甲基咪唑等混合形成的。
五、氧化縮合反應(yīng)時核苷酸單體是通過亞磷酯鍵與連在CPG上的寡核苷酸連接，而亞磷酯鍵不穩(wěn)定，易被酸、堿水解，此時常用碘的四氫呋喃溶液將亞磷酰轉(zhuǎn)化為磷酸三酯，從而得到穩(wěn)定的寡核苷酸。
經(jīng)過以上五個步驟后，一個脫氧核苷酸就被連到CPG的核苷酸上，同樣再用三氯乙酸脫去新連上的脫氧核苷酸5’-羥基上的保護(hù)基團(tuán)PMT后，重復(fù)以上的活化、連接、封閉、氧化過程即可得到一個DNA片段粗品。最后對其進(jìn)行切割、脫保護(hù)基(一般對A、C堿基采用苯甲?；Ｗo(hù)；G堿基用異丁?；Ｗo(hù)；T堿基不必保護(hù)；亞磷酸用腈乙基保護(hù))、純化(常用的有HAP，PAGE，HPLC，C18，OPC等方法)、定量等合成后處理即可得到符合實驗要求的寡核苷酸片段。
實施例2、序列設(shè)計設(shè)計序列如下1、符合(G)n(L)n X1X2CGY1Y2(M)n(G)N公式的人工合成的單鏈脫氧核苷酸(X1＝A，T，G；X2＝A，T；Y1＝A，T；Y2＝A，T，C；L，M＝A，T，C，G；n為0-6)1. 5’-ggggTCgTTCgTCgTTgggggg-3’2. 5’-ggggATAACgTTgCgggggg-3’3. 5’-ggggTgCAACgTTCAgggggg-3’4. 5’-ggggTCCTACgTAggAgggggg-3’5. 5’-ggggTCCATgACgTTCCTgAAgggggg-3’6. 5’-gggggACgTCgCCggggggg-3’7. 5’-ggATCCgTACgCATgggggg-3’
8. 5′-gggggAATCgATTCgggggg-3′9. 5′-gggATgCATCgATgCATCgggggg-3′10. 5′-ggTgCgACgTCgCAgggggg-3′11. 5′-gggACgTACgTCgggggg-3′12. 5′-gggggATCgACgTCgATCgggggg-3’13. 5′-ggCgATCgATCgATCggggggg-3′14. 5’-ggggTCgATCgATCgAgggggg-3′15. 5’-ggTCgCgATCgCgAgggggg-3’16. 5’-ggGGTCAACGTTGAgggggG-3’17. 5’-gTCgTTTTCgTCgACgAATTgggggggg-3’18. 5’-gTCgTTATCgTTTTTTCgTAgggggg-3’19. 5’-ggCgTTAACgACgggggg-3’20. 5’-gTCggCACgCgACgggggg-3’21. 5’-ggTgCgACgTCgCAgggggg-3’22. 5’-gTCTATTTTgTACgTACgTgggg-3’23. 5’-gACgTCgACgTCgACgTCAggggg-3’24. 5’-ggggTCgATCgTTgCTAgCgggggg-3’25. 5’-gggggACgTTATCgTATTggggggg-3’26. 5’-ggggTCgTCgTTTgTCgTgTgTCgTTgggggg-3’27. 5’-ACgATCgATCgATCgggggg-3’28. 5’-AgACgTCTAACgTCggggg-3’29. 5’-ggggTgCTggCCgTCgTTgggggg-3’30. 5’-ggggTCgTTgCCgTCgggggg-3’31. 5’-ACCggTATCgATgCCggTgggggg-3’32. 5’-TTCgTTgCATCgATgCATCgTTgggggg-3’2、符合(G)n(L)nCG(XY)nCG(M)n(G)n公式的人工合成的單鏈脫氧核苷酸(X＝A，T；Y＝A，T；L，M＝A，T，C，G；n為0-6)33. 5’-ggggACgATACgTCggggggg-3’34. 5’-ggggACgATATCgATgggggg-3’35. 5′-ggACgATCgATCgTgggggg-3′36. 5′-TCggggACgATCgTCgggggg-3′37. 5′-gggggATCgATATCgATCgggggg-3′38. 5′-ggATCgATCgATCgATgggggg-3′39. 5′-ggTgCATCgATCgATgCAgggggg-3′40. 5′-ggTgCATCgTACgATgCAgggggg-3′41. 5’-ggTgCgATCgATCgCAgggggg-3′42. 5’-gggggggTCgATCgATgggggg-3’43. 5’-ggggTCgTCgAACgTTgggggg-3’44. 5’-TgTCgTTCCTTgTCgTT-3’45. 5’-TTCgCTTCgCTTTTCgCTTCgCTT-3’-3’46. 5’ACCgCCAAggAgAAgCCgCAggAggg-3’47. 5’-TACAACggCgAggAATACC-3’48. 5’-gTACAACggCgAggAATACCT-3’49. 5’-ACCgTCgTTgCCgTCggCCC-3’50. 5’-TgCTggCCgTCgTT-3’
51. 5’-gTCggCACgCgACg-3’52. 5’-gTCggCACgCgACgCCCCCC-3’53. 5’-TCCCgCTggACgTT-3’54. 5’-TTACCggTTAACgTTggCCggCC-3’55. 5’-ACCggTTAACgTTgTCCCCgggg-3’56. 5’-CgTTgACgATCgTCCCATggCggg-3’57. 5’-TCTgCggCCTTCgTCg-3’58. 5’-TAgTAACCggTCCggCgCCCCC-3’59. 5’-TTgCAgCgCTgCCggTggg-3’60. 5’-CggCCCATCgAgggCgACggC-3’61. 5’-TCATCgACTCTCgAgCgTTC-3’62. 5’-ATCgTCgACTCTCgTgTTCTC-3’63. 5’-TgCAgCTTgCTgCTTgCTgCTTC-3’64. 5’-ggTgCgACgTCgCAgATgAT-3’65. 5’-ggTCgAACgTTCgAgATgAT-3’66. 5’-gggggCgTCgTTTTCgTCgACgAATT-3’67. 5’-actcgagacgcccgttgatagctt-3’68. 5’-AACgTTggCgTCgACgTCAgCgCC-3’69. 5’-gACgTCgACgTTgACgCT-3’70. 5’-ggCgTTAACgTTAgCgCT-3’71. 5’-AgCgCTAgCgCTgACgTT-3’72. 5’-CTAgACgTTCAAgCgTT-3’73. 5’-gACgATCgTCgACgATCgTC-3’74. 5’-gTCgTTCgTAgTCgACTACgAgTT-3’75. 5’-AAAAgACgTCgACgTCgACgTCTTTT-3’76. 5’-TgCgACgATCgTCgCACgATCggAT-3’77. 5’-TgCgACgTCgCACAgCgT-3’3、符合(TCG)n(L)nCG(M)n(G)n公式的人工合成的單鏈脫氧核苷酸(L，M＝A，T，C，G；n為0-6)78. 5’-TCgTTgCCgTCgg-3’79. 5’-TCgTTgCCgTCggg-3’80. 5’-TCgTTgCCgTCgggg-3’81. 5’-TCgTTgCCgTCggggg-3’82. 5’-TCgTTgCCgTCgggggg-3’83. 5’-TCgTTgCCgTCggggggg-3’84. 5’-TCgTTgCCgTCgggggggg-3’85. 5’-TCgTTgCCgTCggggggggg-3’86. 5′-TCgTCgggTgCATCgATgCAgggggg-3′87. 5’-TCgTCgggTgCAACgTTgCAgggggg-3’88. 5’-TCgTCgggTgCgTCgACgCAgggggg-3’89. 5’-TCgTCgggTgCgATCgCAgggggg-3’90. 5’-TCgTCgggTgCgACgATCgTCgCAgggggg-3’91. 5’-TCgTCgTgCgACgTCgCAgggggg-3’92. 5’-TCgTCgCAgAACgTTCTgggggg-3’93. 5’-TCgTgCgACgTCgCAgggggg-3’
94. 5’-TCgTgCgACgATCgTCgCAgggggg-3’95. 5’-TCgTATgCATCgATgCATAgggAgg-3’96. 5’-TCgTgCATCgATgCAgggggg-3’97. 5’-TCgAAACgTTTCgggggg-3’98. 5’-TCggACgATCgTCgggggg-3’99. 5’-TCgAgCgATCgCTCgAgggggg-3’100.5’-TCgTCgCTTTgTCgTTgggg-3’101.5’-TCgTCgTTTTgTCgTTgggg-3’102.5’-TCgTCgggTgCgACgTCgCAg-3’103.5’-TCgTCgggTgCgACgTCgCAgg-3’104.5’-TCgTCgggTgCgACgTCgCAggg-3’105.5’-TCgTCgggTgCgACgTCgCAgggg-3’106.5’-TCgTCgggTgCgACgTCgCAggggg-3’107.5’-TCgTCgggTgCgACgTCgCAgggggg-3’108.5’-TCgTCgggTgCgACgATCgTCgggggg-3’109.5’-TCgTCgTTTgCATCgATgCAggggggg-3’110.5’-TCgTCgTTTTgACgATCgTCgggggg-3’111.5’-TCgTTCggggTgCCg-3’112.5’-TCgTTCggggTACCgATgggg-3’113.5’-TCgTTgCgCTCCCATgCCgggggg-3’114.5’-TCgTCgTTTCgTCgTTgggg-3’115.5’-TCgTTgTCgTTTCgCTgCCggCggggg-3’116.5’-TgCTTgggTggCAgCTgCCAgggggg-3’117.5’-TgCTgCTTTgCTgCTTgggg-3’118.5’-AACgTTCgACgTCgAACggggggg-3’119.5’-AACgACgACgTTggggg-3’4、符合(TCG)n(L)nX1X2CG(M)n公式的人工合成的單鏈脫氧核苷酸(X1＝A，T，G；X2＝A，T；L，M＝A，T，C，G；n為0-6)120.5’-TCgTAACgTTgTTTTTAACgTT-3’121.5’-TCgTCgTATACgACgATCgTT-3’122.5’-TCgTCgTTTgCgTTgTCgTT-3’123.5’-TCCTgTCgTTTTgTCgTT-3’124.5’-TCgTCgTTgTCgTTCgCT-3’125.5’-TCgTCgTTACCgATgACgTCgCCgT-3’126.5’-TCgTCgTTTgCATCgATgCAgTCgTCgTT-3’127.5’-TCgCCTCgTCgCCTTCgAgC-3’g-3’128.5’-TCgTgTgCgTgCCgTTggg-3’T-3’129.5’-TCgTCgAgggCgCCggTgAC-3’130.5’-TCgTCgCCggTgggggTgTg-3’131.5’-TCgTCgTACgCAATTgTCTT-3’132.5’-TCgCCCACCggTgggggggg-3’133.5’-TCgTCgCAgACCggTCTgggg-3’134.5’-TCgTCgCggCCggCgCCCCC-3’135.5’-TCgTCgCggCCgCgAggggg-3’
136.5’-TCgAggACAAgATTCTCgTgC-3’137.5’-TCgAggACAAgATTCTCgTgCAggCC-3’138.5’-TCgTgCAggCCAACgAggCCg-3’139.5’-TCgTTgCCgTCggCCC-3’140.5’-TCggCACgCgACgTgCTggCCgTCgTTTCC-3’141.5’-TCgTTgCCgTCggCCCCCCCCC-3’142.5’-TCgTTgCCgTCggCCCCCC-3’143.5’-TCgTTgCCgTCggCCCCC-3’144.5’-TCgTTgCCgTCggCCCC-3’145.5’-TCgTTgCCgTCggCCCCCCC-3’146.5’-TCgAggACAAgATTCTCgT-3’147.5’-TCggCACgCgACgTgCTggCCgTCgTT-3’148.5’-TCgTCgCgCCgTCACgggggg-3’149.5’-TCgTgTgCgTgCCgTTggg-3’150.5’-TCgTCgCCgTTgggCggg-3’151.5’-TCgTCgACgTCgTTgggCggg-3’152.5’-TCgCAgTTgTCgTAACgTTgggCggg-3’153.5’-TCgTCgTTggTATgTT-3’154.5’-TCgTCgTCgTCgTTgTCgTT-3’155.5’-TCgTCgTCgTCgTTgTCgTTgggg-3’156.5’-TCgTTCggggTgCCg-3’157.5’-TCgTTCggggTAACgATT-3’158.5’-TCgTTCggggTAACgTT-3’159.5’-TCgTTCggggTACCgAT-3’160.5’-TCgTACggCCgCCgTACggCggg-3’161.5’-TCgCgTCgACTCCCCTCgAgggg-3’162.5’-TCgTCgTCgACTCgTggTCggggg-3’163.5’-TCgggCgCCCgATCgggggg-3’164.5’-TCgTCggTCTTTCgAAATT-3’165.5’-TCgTgACgTCCTCgAgTT-3’166.5’-TCgTCTTTCgACTCgTTCTC-3’167.5’-TCgTCgTTTTgCgTTCTC-3’168.5’-TCgACTTTCgTCgTTCTgTT-3’169.5’-TCgTCgTTTCgTCgTTCTC-3’170.5’-tcgtcgggtgcgacgtcgca-3’171.5’-TCgTTCTCgACTCgTTCTC-3’172.5’-TCgACgTTCgTCgTTCgTCgTTC-3’173.5’-TCgTCgACgTCgTTCgTTCTC-3’174.5’-TCgTgCgACgTCgCAgATgAT-3’175.5’-TCgTCgAgCgCTCgATCggAT-3’176.5’-TCgTCgTTTCgTAgTCgTTgACgTCggg-3’177.5’-TCgTCggACgTTTTCCgACgTTCT-3’178.5’-TCgTCgTTTTCgTCgTTTTCgTCgTT-3’179.5’-TCgTCgTTTgTCgTgTgTCgTT-3；180.5’-TCgTCgTTggTCggggTCgTTggggTCgTT-3’181.5’-TCgTCgTTTCgTCTCTCgTT-3’
182.5’-TCgTCgTTTTgCTgCgTCgTT-3’183.5’-TCgAgCgTTTTCgCTCgAATT-3’4、包含TTCGTCG的序列公式的人工合成的單鏈脫氧核苷酸184.5’-TTCgTCgTTTgATCgATgTTCgTTgggggg-3’185.5’-TTCgTCgTTgTgATCgATgggggg-3’-3’186.5’-TATCgATgTTTTCgTCgTCgTTgggggg-3’187.5’-TCgACTTTCgTCgTTCTgTT-3’188.5’-TCgTCgTTTCgTCgTTCTC-3’189.5’-TCgACgTTCgTCgTTCgTCgTTC-3’190.5’-TCgTCgTTTTCgTCgTTTTCgTCgTT-3’在實施例3，4，5中應(yīng)用的單鏈脫氧核苷酸(Oligo)的序列如下所示Oligo1 Seq No895’-TCgTCgggTgCgATCgCAgggggg-3’O1igo2 seq No925’-TCgTCgCAgAACgTTCTgggggg-3’Oligo4 seq No955’-TCgTATgCATCgATgCATAgggAgg-3’Oligo3 seq No 1745’-TCgTgCgACgTCgCAgATgAT-3’Oligo5 seq No 1645’-TCgTCggTCTTTCgAAATT-3’Oligo6 seq No365′-TCggggACgATCgTCgggggg-3′Oligo7 seq No 1725’-TCgACgTTCgTCgTTCgTCgTTC-3’Oligo8 seq No 1735’-TCgTCgACgTCgTTCgTTCTC-3’Oligo9 seq No985’-TCggACgATCgTCgggggg-3’Oligo10 seq No 995’-TCgAgCgATCgCTCgAgggggg-3’Oligo11 seq No 1075’-TCgTCgggTgCgACgTCgCAgggggg-3’Oligo12 seq No 1705’-TCgTCgggTgCgACgTCgCA-3’Oligo13 seq No 1025’-TCgTCgggTgCgACgTCgCAg-3’Oligo14 seq No 1035’-TCgTCgggTgCgACgTCgCAgg-3’Oligo15 seq No 1045’-TCgTCgggTgCgACgTCgCAggg-3’Oligo16 seq No 1055’-TCgTCgggTgCgACgTCgCAgggg-3’Oligo17 seq No 1065’-TCgTCgggTgCgACgTCgCAggggg-3’Oligo18 seq No35’-ggggTgCAACgTTCAgggggg-3’Oligo19 seq No15’-ggggTCgTTCgTCgTTgggggg-3’Oligo20 seq No 665’-gggggCgTCgTTTTCgTCgACgAATT-3’實施例3、單鏈脫氧核苷酸的抗HIV作用1.人外周血單個核細(xì)胞的分離儀器設(shè)備和器材低溫冰箱、二氧化碳孵箱、超凈工作臺、倒置顯微鏡、液氮罐、蒸餾水器、真空泵、細(xì)胞培養(yǎng)瓶、濾菌器、濾過瓶、各種規(guī)格的吸管、加樣器、滴管、血球計數(shù)板、水平式離心機(jī)等。
試劑和材料肝素抗凝的人全血購自長春市中心血站。聚蔗糖-泛影葡胺比重1.077±0.001，購自北京鼎國生物技術(shù)有限公司。RPMI1640培養(yǎng)液L-谷氨酰胺的RPMI1640(GIBCOBRL)10.4克，碳酸氫鈉2.0克，慶大霉素10萬單位，加三蒸水至1000毫升。0.22微米的濾膜抽濾除菌、分裝。
方法用聚蔗糖-泛影葡胺淋巴細(xì)胞分層液分離人外周血的單個核細(xì)胞(PBMC)。分層液與肝素抗凝外周血的體積比約為1∶2。水平離心(1,000×g，20min)。用吸管吸取含hPBMC的細(xì)胞層，置入另離心管中。加入等體積的無血清培養(yǎng)液。1,000×g離心15min，棄上清。重復(fù)洗滌兩次。棄上清，用2ml培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，并進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。
2.人外周血單個核細(xì)胞的培養(yǎng)用含10％胎牛血清、1％的青鏈霉素(GIBCO)、1％谷氨酰胺(GIBCO)和每毫升10個單位的白介素2(NIH AIDS Research and Reference ReagentProgram)的RPMI培養(yǎng)PBMC，細(xì)胞濃度為10×106個細(xì)胞/毫升。
3.HIVHIV系用轉(zhuǎn)染HIV的宿主細(xì)胞制備(NIH AIDS Research and Reference ReagentProgram)，轉(zhuǎn)染后48小時收獲病毒，用直徑為0.22μm的濾膜進(jìn)行過濾，并儲存于-80℃。
4.單鏈脫氧核苷酸抗HIV實驗在96孔板中，加入PBMC，每個樣品設(shè)三復(fù)孔。用單鏈脫氧核苷酸(6μg/ml)刺激PBMC 2天后，加入HIV病毒感染PBMC，孵育6小時后，洗滌細(xì)胞3次，于第5天測定培養(yǎng)上清中p24抗原的水平。設(shè)不加單鏈脫氧核苷酸的對照孔。
5.酶聯(lián)免疫吸附測定法測定HIV p24抗原水平p24多克隆抗體包被酶標(biāo)板，多克隆抗體與p24抗原結(jié)合，p24抗原與抗p24的單克隆抗體結(jié)合，抗p24的單克隆抗體結(jié)合有堿性磷酸酶，加入聯(lián)苯二氨后產(chǎn)生顏色。p24抗原是用去污劑裂解病毒顆粒獲得的。
具體的測定步驟向酶標(biāo)板每孔中加入100μl稀釋后的p24多克隆抗體，4℃包被過夜。
用PBS洗滌酶標(biāo)板三次。
向酶標(biāo)板每孔中加入300μl封閉液(1％BSA)。
密封室溫放置2h。
用PBS洗滌酶標(biāo)板三次。
向酶標(biāo)板每孔中加入100μl稀釋后的待測樣品。
密封室溫放置2h。
用PBS洗滌酶標(biāo)板三次。
向酶標(biāo)板每孔中加入100μl稀釋后結(jié)合有堿性磷酸酶的抗p24的單克隆抗體。
密封室溫放置2h。
用PBS洗滌酶標(biāo)板三次向酶標(biāo)板每孔中加入100μl底物液密封室溫避光放置向酶標(biāo)板每孔中加入50μl終止液。
利用酶標(biāo)儀檢測樣品在A405的吸收值。
利用測定結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行結(jié)果計算。
6結(jié)果加入不同單鏈脫氧核苷酸的培養(yǎng)上清中，p24抗原的水平見表1所示。結(jié)果表明加入單鏈脫氧核苷酸后，HIV病毒分泌的p24抗原濃度顯著下降。
7結(jié)論本發(fā)明的單鏈脫氧核苷酸能夠抑制HIV病毒的復(fù)制，因此，本發(fā)明提供的單鏈脫氧核苷酸具有抗病毒活性，這些病毒包括但不限于HIV，本本發(fā)明提供的單鏈脫氧核苷酸對病毒感染性疾病有治療作用，這些病毒感染性疾病包括但不限于由HIV感染引起的艾滋病。
表1加入不同的Oligo p24抗原產(chǎn)生的水平

序列表<110>OrganizationName長春華普生物技術(shù)有限公司<120>Title抗人免疫缺陷病毒的單鏈脫氧核苷酸<210>1<211>22<212>DNA<213>Artificial<400>1ggggtcgttc gtcgttgggg gg 22<210>2<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>2ggggataacg ttgcgggggg 20<210>3<211>21<212>DNA<213>Artificial<400>3ggggtgcaac gttcaggggg g21<210>4<211>22<212>DNA<213>Artificial<400>4ggggtcctac gtaggagggg gg 22<210>5<211>27<212>DNA<213>Artificial<400>5ggggtccatg acgttcctga agggggg 27<210>6<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>6gggggacgtc gccggggggg 20
<210>7<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>7ggatccgtac gcatgggggg 20<210>8<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>8gggggaatcg attcgggggg 20<210>9<211>24<212>DNA<213>Artificial<400>9gggatgcatc gatgcatcgg gggg 24<210>10<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>10ggtgcgacggt cgcagggggg 20<210>11<211>18<212>DNA<213>Artificial<400>11gggacgtacg tcgggggg18<210>12<211>24<212>DNA<213>Artificial<400>12gggggatcga cgtcgatcgg gggg 24<210>13<211>22<212>DNA
<213>Artificial<400>13ggcgatcgat cgatcggggg gg 22<210>14<211>22<212>DNA<213>Artificial<400>14ggggtcgatc gatcgagggg gg 22<210>15<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>15ggtcgcgatc gcgagggggg 20<210>16<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>16ggggtcaaacg ttgagggggg 20<210>17<211>28<212>DNA<213>Artificial<400>17gtcgttttcg tcgacgaatt gggggggg 28<210>18<211>26<212>DNA<213>Artificial<400>18gtcgttatcg ttttttcgta gggggg 26<210>19<211>18<212>DNA<213>Artificial<400>19ggcgttaacg acgggggg18
<210>20<211>19<212>DNA<213>Artificial<400>20gtcggcacgc gacgggggg 19<210>21<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>21ggtgcgacgt cgcagggggg 20<210>22<211>23<212>DNA<213>Artificial<400>22gtctattttg tacgtacgtg ggg 23<210>23<211>24<212>DNA<213>Artificial<400>23gacgtcgacg tcgacgtcaggggg 24<210>24<211>25<212>DNA<213>Artificial<400>24ggggtcgatc gttgctagcg ggggg25<210>25<211>25<212>DNA<213>Artificial<400>25gggggacgtt atcgtattgg ggggg25<210>26<211>32<212>DNA<213>Artificial
<400>26ggggtcgtcg tttgtcgtgt gtcgttgggg gg32<210>27<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>27acgatcgatc gatcgggggg 20<210>28<211>19<212>DNA<213>Artificial<400>28agacgtctaa cgtcggggg 19<210>29<211>24<212>DNA<213>Artificial<400>29ggggtgctgg ccgtcgttgg gggg 24<210>30<211>21<212>DNA<213>Artificial<400>30ggggtcgttg ccgtcggggg g21<210>31<211>24<212>DNA<213>Artificial<400>31accggtatcg atgccggtgg gggg 24<210>32<211>28<212>DNA<213>Artificial<400>32ttcgttgcatcgatgcatcg ttgggggg 28<210>33
<211>21<212>DNA<213>Artificial<400>33ggggacgata cgtcgggggg g21<210>34<211>21<212>DNA<213>Artificial<400>34ggggacgata tcgatggggg g21<210>35<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>35ggacgatcga tcgtgggggg 20<210>36<211>21<212>DNA<213>Artificial<400>36tcggggacga tcgtcggggg g21<210>37<211>24<212>DNA<213>Artifici al<400>37gggggatcga tatcgatcgg gggg 24<210>38<211>22<212>DNA<213>Artificial<400>38ggatcgatcg atcgatgggg gg 22<210>39<211>24<212>DNA<213>Artifici al<400>39
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<212>DNA<213>Artificial<400>92tcgtcgcaga acgttctggg ggg 23<210>93<211>21<212>DNA<213>Artificial<400>93tcgtgcgacg tcgcaggggg g21<210>94<211>25<212>DNA<213>Artificial<400>94tcgtgcgacg atcgtcgcag ggggg25<210>95<211>25<212>DNA<213>Artificial<400>95tcgtatgcat cgatgcatag ggagg25<210>96<211>21<212>DNA<213>Artificial<400>96tcgtgcatcg atgcaggggg g21<210>97<211>18<212>DNA<213>Artificial<400>97tcgaaacgtt tcgggggg18<210>98<211>19<212>DNA<213>Artificial<400>98tcggacgatc gtcgggggg 19
<210>99<211>22<212>DNA<213>Artificial<400>99tcgagcgatc gctcgagggg gg 22<210>100<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>100tcgtcgcttt gtcgttgggg 20<210>101<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>101tcgtcgtttt gtcgttgggg 20<210>102<211>21<212>DNA<213>Artificial<400>102tcgtcgggtg cgacgtcgca g21<210>103<211>22<212>DNA<213>Artificial<400>103tcgtcgggtg cgacgtcgca gg 22<210>104<211>23<212>DNA<213>Artificial<400>104tcgtcgggtg cgacgtcgca ggg 23<210>105<211>24<212>DNA
<213>Artificial<400>105tcgtcgggtg cgacgtcgca gggg 24<210>106<211>25<212>DNA<213>Artificial<400>106tcgtcggggtg cgacgtcgca ggggg 25<210>107<211>26<212>DNA<213>Artificial<400>107tcgtcgggtg cgacgtcgca gggggg 26<210>108<211>27<212>DNA<213>Artificial<400>108tcgtcgggtg cgacgatcgt cgggggg 27<210>109<211>27<212>DNA<213>Artificial<400>109tcgtcgtttg catcgatgca ggggggg 27<210>110<211>26<212>DNA<213>Artificial<400>110tcgtcgtttt gacgatcgtc gggggg 26<210>111<211>15<212>DNA<213>Artificial<400>111tcgttcgggg tgccg 15
<210>112<211>21<212>DNA<213>Artificial<400>112tcgttcgggg taccgatggg g21<210>113<211>24<212>DNA<213>Artificial<400>113tcgttgcgct cccatgccgg gggg 24<210>114<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>114tcgtcgtttc gtcgttgggg 20<210>115<211>27<212>DNA<213>Artificial<400>115tcgttgtcgt ttcgctgccg gcggggg 27<210>116<211>26<212>DNA<213>Artificial<400>116tgcttgggtg gcagctgcca gggggg 26<210>117<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>117tgctgctttg ctgcttgggg 20<210>118<211>24<212>DNA<213>Artificial
<400>118aacgttcgac gtcgaacggg gggg 24<210>119<211>17<212>DNA<213>Artificial<400>119aacgacgacg ttggggg 17<210>120<211>22<212>DNA<213>Artificial<400>120tcgtaacgtt gtttttaacg tt 22<210>121<211>21<212>DNA<213>Artificial<400>121tcgtcgtata cgacgatcgt t21<210>122<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>122tcgtcgtttg cgttgtcgtt 20<210>123<211>18<212>DNA<213>Artificial<400>123tcctgtcgtt ttgtcgtt18<210>124<211>18<212>DNA<213>Artificial<400>124tcgtcgttgt cgttcgct18<210>125
<211>25<212>DNA<213>Artificial<400>125tcgtcgttac cgatgacgtc gccgt 25<210>126<211>29<212>DNA<213>Artificial<400>126tcgtcgtttg catcgatgca gtcgtcgtt 29<210>127<211>21<212>DNA<213>Artificial<400>127tcgcctcgtc gccttcgagc g 21<210>128<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>128tcgtgtgcgt gccgttgggt 20<210>129<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>129tcgtcgaggg cgccggtgac 20<210>130<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>130tcgtcgccgg tgggggtgtg 20<210>131<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>131
tcgtcgtacg caattgtctt 20<210>132<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>132tcgcccaccg gtgggggggg 20<210>133<211>21<212>DNA<213>Artificial<400>133tcgtcgcaga ccggtctggg g21<210>134<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>134tcgtcgcggc cggcgccccc 20<210>135<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>135tcgtcgcggc cgcgaggggg 20<210>136<211>21<212>DNA<213>Artificial<400>136tcgaggacaa gattctcgtg c21<210>137<211>26<212>DNA<213>Artificial<400>137tcgaggacaa gattctcgtg caggcc 26<210>138<211>21
<212>DNA<213>Artificial<400>138tcgtgcaggc caacgaggcc g21<210>139<211>16<212>DNA<213>Artificial<400>139tcgttgccgt cggccc 16<210>140<211>30<212>DNA<213>Artificial<400>140tcggcacgcg acgtgctggc cgtcgtttcc 30<210>141<211>22<212>DNA<213>Artificial<400>141tcgttgccgt cggccccccc cc 22<210>142<211>19<212>DNA<213>Artificial<400>142tcgttgccgt cggcccccc 19<210>143<211>18<212>DNA<213>Artificial<400>143tcgttgccgt cggccccc18<210>144<211>17<212>DNA<213>Artificial<400>144tcgttgccgt cggcccc 17
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<213>Artificial<400>151tcgtcgacgt cgttgggcgg g21<210>152<211>26<212>DNA<213>Artificial<400>152tcgcagttgt cgtaacgttg ggcggg 26<210>153<211>16<212>DNA<213>Artificial<400>153tcgtcgttgg tatgtt 16<210>154<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>154tcgtcgtcgt cgttgtcgtt 20<210>155<211>24<212>DNA<213>Artificial<400>155tcgtcgtcgt cgttgtcgtt gggg 24<210>156<211>15<212>DNA<213>Artificial<400>156tcgttcgggg tgccg 15<210>157<211>18<212>DNA<213>Artificial<400>157tcgttcgggg taacgatt18
<210>158<211>17<212>DNA<213>Artificial<400>158tcgttcgggg taacgtt 17<210>159<211>17<212>DNA<213>Artificial<400>159tcgttcgggg taccgat 17<210>160<211>23<212>DNA<213>Artificial<400>160tcgtacggcc gccgtacggc ggg 23<210>161<211>23<212>DNA<213>Artificial<400>161tcgcgtcgac tcccctcgag ggg 23<210>162<211>24<212>DNA<213>Artificial<400>162tcgtcgtcga ctcgtggtcg gggg 24<210>163<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>163tcgggcgccc gatcgggggg 20<210>164<211>19<212>DNA<213>Artificial
<400>164tcgtcggtct ttcgaaatt 19<210>165<211>18<212>DNA<213>Artificial<400>165tcgtgacgtc ctcgagtt18<210>166<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>166tcgtctttcg actcgttctc 20<210>167<211>18<212>DNA<213>Artificial<400>167tcgtcgtttt gcgttctc18<210>168<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>168tcgactttcg tcgttctgtt 20<210>169<211>19<212>DNA<213>Artificial<400>169tcgtcgtttc gtcgttctc 19<210>170<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>170tcgtcgtcgt cgttgtcgtt 20<210>171
<211>19<212>DNA<213>Artificial<400>171tcgttctcga ctcgttctc 19<210>172<211>23<212>DNA<213>Artificial<400>172tcgacgttcg tcgttcgtcg ttc 23<210>173<211>21<212>DNA<213>Artificial<400>173tcgtcgacgt cgttcgttct c21<210>174<211>21<212>DNA<213>Artificial<400>174tcgtgcgacg tcgcagatga t21<210>175<211>21<212>DNA<213>Artificial<400>175tcgtcgagcg ctcgatcgga t21<210>176<211>28<212>DNA<213>Artificial<400>176tcgtcgtttc gtagtcgttg acgtcggg 28<210>177<211>24<212>DNA<213>Artificial<400>177
tcgtcggacg ttttccgacg ttct 24<210>178<211>26<212>DNA<213>Artificial<400>178tcgtcgtttt cgtcgttttc gtcgtt 26<210>179<211>22<212>DNA<213>Artificial<400>179tcgtcgtttg tcgtgtgtcg tt 22<210>180<211>30<212>DNA<213>Artificial<400>180tcgtcgttgg tcggggtcgt tggggtcgtt 30<210>181<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>181tcgtcgtttcg gtctctcgtt 20<210>182<211>21<212>DNA<213>Artificial<400>182tcgtcgtttt gctgcgtcgtt 21<210>183<211>21<212>DNA<213>Artificial<400>183tcgagcgttt tcgctcgaat t21<210>184<211>30
<212>DNA<213>Artificial<400>184ttcgtcgttt gatcgatgtt cgttgggggg 30<210>185<211>24<212>DNA<213>Artificial<400>185ttcgtcgttg tgatcgatgg gggg 24<210>186<211>28<212>DNA<213>Artificial<400>186tatcgatgtt ttcgtcgtcg ttgggggg 28<210>187<211>20<212>DNA<213>Artificial<400>187tcgactttcg tcgttctgtt 20<210>188<211>19<212>DNA<213>Artificial<400>188tcgtcgtttc gtcgttctc 19<210>189<211>23<212>DNA<213>Artificial<400>189tcgacgttcg tcgttcgtcg ttc 23<210>190<211>26<212>DNA<213>Artificial<400>190tcgtcgtttt cgtcgttttc gtcgtt 2權(quán)利要求
1.單鏈脫氧核苷酸是單鏈的DNA分子，其長度為6-50個堿基。
2.按照權(quán)利要求1所述的單鏈脫氧核苷酸，其磷酸二酯鍵可以是非硫化、部分硫化或完全硫化的，也可以是其它形式的磷酸二酯鍵。
3.按照權(quán)利要求1-2所述的單鏈脫氧核苷酸包括但不限于附序列表所示的序列和根據(jù)實施例2所出示的序列及其由實施例2所示公式所能推出的序列。
4.單鏈脫氧核苷酸包括但不限于實施例中Oligo1-20所示的序列。
5.按照權(quán)利要求1-4所述的單鏈脫氧核苷酸，其結(jié)構(gòu)可以是經(jīng)化學(xué)修飾的。
6.按照權(quán)利要求1-4所述的單鏈脫氧核苷酸，其結(jié)構(gòu)可以是其它相關(guān)單鏈脫氧核苷酸的核心結(jié)構(gòu)。
7.按照權(quán)利要求1-4所述的單鏈脫氧核苷酸以及以其為核心結(jié)構(gòu)的改變或添加了一到數(shù)個堿基的單鏈脫氧核苷酸。
8.按照權(quán)利要求1-4所述的單鏈脫氧核苷酸以及以其為核心結(jié)構(gòu)的在兩端添加了1到10個堿基的單鏈脫氧核苷酸。
9.按照權(quán)利要求1-4所述的單鏈脫氧核苷酸以及以其為核心結(jié)構(gòu)的在兩端刪切數(shù)個堿基的單鏈脫氧核苷酸。
10.按照權(quán)利要求1-9中任一項所述的單鏈脫氧核苷酸，它們能夠抑制病毒在人外周血單個核細(xì)胞中復(fù)制。
11.按照權(quán)利要求1-9中任一項所述的單鏈脫氧核苷酸，它們能夠抑制DNA病毒在人外周血單個核細(xì)胞中復(fù)制。
12.按照權(quán)利要求1-9中任一項所述的單鏈脫氧核苷酸，它們能夠抑制RNA病毒在人外周血單個核細(xì)胞中復(fù)制。
13.按照權(quán)利要求1-9中任一項所述的單鏈脫氧核苷酸，它們能夠抑制逆轉(zhuǎn)錄病毒在人外周血單個核細(xì)胞中復(fù)制。
14.按照權(quán)利要求1-9中任一項所述的單鏈脫氧核苷酸，它們能夠抑制人免疫缺陷病毒在人外周血單個核細(xì)胞中的復(fù)制。
15.按照權(quán)利要求1-9中任一項所述的單鏈脫氧核苷酸，它們能夠治療病毒感染性疾病。
16.按照權(quán)利要求1-9中任一項所述的單鏈脫氧核苷酸，它們能夠治療DNA病毒感染性疾病。
17.按照權(quán)利要求1-9中任一項所述的單鏈脫氧核苷酸，它們能夠治療RNA病毒感染性疾病。
18.按照權(quán)利要求1-9中任一項所述的單鏈脫氧核苷酸，它們能夠治療逆轉(zhuǎn)錄病毒感染性疾病。
19.按照權(quán)利要求1-9中任一項所述的單鏈脫氧核苷酸，它們能夠治療艾滋病。
20.任何單鏈脫氧核苷酸治療病毒感染性疾病的技術(shù)方法和技術(shù)設(shè)想。
21.任何單鏈脫氧核苷酸治療DNA病毒感染性疾病的技術(shù)方法和技術(shù)設(shè)想。
22.用任何單鏈脫氧核苷酸治療RNA病毒感染性疾病的技術(shù)方法和技術(shù)設(shè)想。
23.用任何單鏈脫氧核苷酸治療逆轉(zhuǎn)錄病毒感染性疾病的技術(shù)方法和技術(shù)設(shè)想。
24.用任何單鏈脫氧核苷酸治療HIV病毒感染性疾病的技術(shù)方法和技術(shù)設(shè)想。
全文摘要
本發(fā)明提供了一批抗人免疫缺陷病毒的單鏈脫氧核苷酸，該脫氧核苷酸能夠抑制HIV在人外周血單個核細(xì)胞中的復(fù)制，因而對HIV感染和艾滋病有治療作用。
文檔編號A61P31/18GK1904046SQ20051008556
公開日2007年1月31日 申請日期2005年7月28日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月28日
發(fā)明者王麗穎, 包木勝, 于永利 申請人:長春華普生物技術(shù)有限公司