專利名稱：一種納米血塞通注射制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種納米血塞通注射制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
納米中藥主要是指運(yùn)用納米技術(shù)制造的，粒徑小于100nm的中藥有效成分、有效部位、原藥及復(fù)方制劑。生物機(jī)體對(duì)藥物的吸收、代謝是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，中藥制劑產(chǎn)生的藥理效應(yīng)不能僅僅歸之于藥物特有的化學(xué)組成還與該制劑的物理狀態(tài)密切相關(guān)。因此，改變藥物制劑地物理狀態(tài)是新藥研制的一種有效方法。在改變物理狀態(tài)方面，改變藥物的單元尺寸是十分有效的。當(dāng)顆粒尺寸進(jìn)入納米量級(jí)時(shí)由于量子尺寸效應(yīng)和表面效應(yīng)，納米粒子呈現(xiàn)出新奇的物理化學(xué)和生物學(xué)特性。這就是應(yīng)用納米技術(shù)于中藥研究可能使藥物活性和生物利用度提高乃至產(chǎn)生新的特性依據(jù)所在。
納米中藥的制備是研究納米中藥最基礎(chǔ)的，也是最重要的問(wèn)題。將納米技術(shù)引入中藥的研究時(shí)，必須考慮中藥組方的多樣性、中藥成分的復(fù)雜性，例如中藥單味藥可分為礦物藥、植物藥、動(dòng)物藥和菌物藥等，中藥的有效部位和有效成分又包括無(wú)機(jī)化合物和有機(jī)化合物、水溶性成分和脂溶性成分等。因此，針對(duì)不同的藥物，在進(jìn)行納米化時(shí)必須采用不同的技術(shù)路線。納米中藥與中藥新制劑關(guān)系十分密切，如何在中藥理論的指導(dǎo)下進(jìn)行納米中藥新制劑的研究，將中藥制成高效、速效、長(zhǎng)效、計(jì)量小、低毒、服用方便的現(xiàn)代制劑，也是進(jìn)行中藥納米化時(shí)必須考慮的問(wèn)題。
目前，納米技術(shù)在中藥研究中存在的問(wèn)題也不能忽視的。第一，納米中藥的制備困難我國(guó)雖已制備一些納米級(jí)的中藥，可是由于中藥品種繁多，成分復(fù)雜，不同的成分由于其作用部位、作用機(jī)制及作用緩急的不同而要求其粒徑大小、載體成分及給藥劑量均有可能不同。同時(shí)納米中藥應(yīng)該有它自己的一套質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，使其生產(chǎn)規(guī)范化。第二，納米中藥的毒副作用藥物制成納米微粒，其物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)均發(fā)生了顯著的變化，這些變化對(duì)人體是否有毒副反應(yīng)均未有有關(guān)的研究報(bào)道。但由于納米材料的特殊性，除了可穿透皮膚，還會(huì)進(jìn)入細(xì)胞器內(nèi)，是否會(huì)直接參與或作為催化劑擾亂機(jī)體正常的化學(xué)反應(yīng)，均未見(jiàn)有關(guān)報(bào)道。此外，納米中藥還可以通過(guò)機(jī)體的屏障系統(tǒng)，那它是否會(huì)影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)，精子的生成及其活力、胎兒的發(fā)育等，這些問(wèn)題均無(wú)法回避。第三，中藥在納米級(jí)粉碎后，納米微粒表面積變大，由于納米微粒表面的活性使他們很容易團(tuán)聚在一起，這給納米微粒的收集及其藥效的穩(wěn)定性帶來(lái)很大的困難。第四，成本提高由于現(xiàn)有技術(shù)水平及設(shè)備的限制，造成納米中藥在制備中的花費(fèi)比傳統(tǒng)中藥的制備要高出不少。
現(xiàn)代中藥的研究就是要在繼承中藥傳統(tǒng)的基礎(chǔ)上，充分利用現(xiàn)代科技手段，使中藥具有先進(jìn)的生產(chǎn)工藝和現(xiàn)代劑型，做到“有效、安全、可控”，將納米技術(shù)應(yīng)用于中藥領(lǐng)域是現(xiàn)代中藥發(fā)展的重要方向之一。納米中藥一般不是簡(jiǎn)單地將中藥材進(jìn)行粉碎至納米量級(jí)，而是針對(duì)組成中藥方劑的某味藥的有效部位甚至是有效成分進(jìn)行納米技術(shù)加工處理，賦予傳統(tǒng)中藥以新的功能，如提高生物利用度，增強(qiáng)靶向性；降低毒副作用；呈現(xiàn)新的藥效，拓寬原藥的適應(yīng)證；豐富中藥的劑型選擇；減少用藥量，節(jié)省中藥資源等。
同傳統(tǒng)中藥相比，納米中藥具有以下特點(diǎn)①提高了藥物的利用度，減少用藥量。②增強(qiáng)藥物的靶向性。③具有緩釋功能，將中藥納米粒進(jìn)行一定的表面修飾后，可能使中藥具有緩釋作用。④呈現(xiàn)新的藥效，拓寬原藥適應(yīng)癥，中藥加工至納米尺寸時(shí)，由于其量子尺寸等效應(yīng)導(dǎo)致其物理、化學(xué)特性的改變，從而可使中藥呈現(xiàn)出新功能。⑤豐富中藥的劑型選擇，提升傳統(tǒng)給藥途徑。
徐輝碧等檢索了1998年～2000年美國(guó)專利中涉及納米科技的專利，發(fā)現(xiàn)該類專利與生物醫(yī)學(xué)相關(guān)的專利占總數(shù)的80％以上，楊孟君在2001年一年內(nèi)申請(qǐng)了940多件納米中藥的專利，但其申請(qǐng)的大部分都是中藥原料藥進(jìn)行納米粉碎，其專利實(shí)用性不強(qiáng)。
目前納米中藥的研究主要集中于利用納米技術(shù)對(duì)少數(shù)成分比較明確的單體有效成分進(jìn)行納米處理制成納米制劑，或?qū)⒃纤幹苯臃鬯槌杉{米級(jí)，對(duì)大部分中藥的納米制劑研究還很少，主要是因?yàn)橹兴幱行С煞趾陀行Р课惶貏e是中藥復(fù)方中有效部位本身就是一個(gè)“黑匣子”，中藥中真正起藥理作用的有效成分或有效部位研究本身就是一個(gè)難題，而且由于中藥成分比較復(fù)雜，所以將其制備成納米制劑需要克服的困難較多，因此，中藥納米制劑及技術(shù)是醫(yī)藥科研工作者的重要研究課題。
三七總皂苷是三七蘆頭按一定工藝提制的總皂苷，具有活血祛瘀、通脈活絡(luò)的功能，用于治療心腦血管系統(tǒng)疾病，腦血管病后遺癥等。以三七總皂苷為有效成分的注射制劑有血塞通注射液[部頒標(biāo)準(zhǔn)19冊(cè)]和血塞通粉針(商品名絡(luò)泰)，自上市以來(lái)，在臨床上雖然取得了一定的治療效果，但是存在一個(gè)很大的問(wèn)題，即藥物透過(guò)血腦屏障的量很小，很難達(dá)到有效的血藥濃度，所以治療效果并不是很理想。所以，如何提高現(xiàn)有血塞通注射制劑的療效，成了人們急待解決的問(wèn)題。
在專利檢索中未發(fā)現(xiàn)有關(guān)納米血塞通注射制劑的任何報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
為了提高現(xiàn)有血塞通注射制劑的療效，本發(fā)明研究人員經(jīng)過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)，研制出一種納米血塞通注射制劑。藥理實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明納米血塞通注射制劑能很好的透過(guò)血腦屏障，具有緩釋作用，療效比現(xiàn)有血塞通注射制劑有顯著提高；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明納米注射制劑分散性好、包封率高、載藥量大；安全性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明具有很好的注射給藥安全性。
本發(fā)明的一個(gè)目的是公開(kāi)一種納米血塞通注射制劑。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是公開(kāi)上述納米血塞通注射制劑的制備方法。
本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)
一、制備方法
(1)主藥混懸液的制備
處方為三七總皂苷1重量份、載體7-10重量份；
方法一將三七總皂苷藥粉、脂質(zhì)和乳化劑，在通氮?dú)鈼l件下加熱至80±5℃，得到組分A；將甘油和poloxamer188的水溶液，加熱至與組分A相同的溫度，得到組分B；在攪拌條件下將組分A加入到組分B中，制成粗乳，在80±5℃通氮?dú)鈼l件下用高壓乳勻機(jī)載在41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮?dú)夥盅b后，迅速冷卻，即得。
方法二稱取脂質(zhì)加入三七總皂苷，加熱熔融作為油相；稱取乳化劑，加少量吐溫-80，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相；將油相緩慢加入水相中，持續(xù)攪拌1小時(shí)后超聲分散，室溫，頻率45-50Hz，超聲時(shí)間5-8分鐘，即得。
方法三取三七總皂苷，脂質(zhì)和丙酮適量加入容器中，超聲使充分溶解，加入乳化劑，微熱使溶成有機(jī)相；另取乳化劑溶于適量水中，構(gòu)成水相；將有機(jī)相在(1000r/min)攪拌下注入75±2℃水相中，繼續(xù)加熱攪拌4小時(shí)，使有機(jī)溶媒完全蒸發(fā)并使體系濃縮，將所得的半透明體系攪拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的水相中，繼續(xù)攪拌2小時(shí)，即得。
方法四取三七總皂苷，溶于50％-80％乙醇中；將脂質(zhì)的一種或多種溶于烷烴，混合攪拌均勻；將乙醇溶解物和烷烴溶解物混合，放入旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)儀，控制壓力0.1-0.2個(gè)大氣壓，去除有機(jī)溶劑至盡，將蒸餾物放入密閉容器中進(jìn)行超聲處理，即得。
方法五將三七總皂苷藥粉與載體，同無(wú)水乙醇混合，搖勻，得油相；pH值為6的0.5％Pluronic F68的水溶液，為水相；在將兩相保持溫度為20℃，按油相∶水相為1∶4(v/v)，將油相通過(guò)硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過(guò)濾，即得。
(2)制劑的制備
水針制劑的制備將上述主藥混懸液加入適量注射用水和穩(wěn)定劑，調(diào)pH值為5.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成每支5ml的水針制劑。
輸液制劑的制備將上述主藥混懸液加入適量注射用水和穩(wěn)定劑，加入氯化鈉或葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為5.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成每瓶100ml的輸液制劑。
粉針制劑的制備將上述主藥混懸液加入適量注射用水，再加入水溶性注射用藥用輔料，調(diào)pH值為5.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，干燥，制備成粉針制劑。
上述制備方法中，其中固體脂質(zhì)納米粒中的載體包括脂質(zhì)、乳化劑、助乳化劑；納米囊中的載體為聚氰基丙烯酸烷酯、聚乳酸、聚丙交酯-乙交酯、殼聚糖、明膠中的一種或幾種。
上述制備方法中，其中脂質(zhì)為脂肪酸甘油酯類(包括三硬脂酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三窬酸甘油酯、Witepsol W35、Witepsol H35、Witepsol H42、單硬脂酸甘油酯)、脂肪酸類(如硬脂酸、棕櫚酸)中的一種或幾種；乳化劑為磷脂(包括大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂及磷脂酰膽堿等)；泊洛沙姆、聚山梨醇(吐溫-80等)、甘油中的一種或幾種為助乳化劑。
上述制備方法中所述的穩(wěn)定劑為聚乙烯吡咯烷酮。
上述制備方法中所述的水溶性注射用藥用輔料選自甘露醇、右旋糖苷、果糖、葡聚糖、乳糖中的一種或幾種。
二、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)考察
標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)《中國(guó)藥典》2005年版附錄XIX E“微囊、微球與脂質(zhì)體制劑指導(dǎo)原則”中的方法。H-7000型透射電鏡儀(日本Hitachi公司)；Zetamaster光子相關(guān)光譜儀(英國(guó)Malvern公司)；LC-10A高效液相色譜儀(日本島津)；TGL-18G型臺(tái)式高速離心機(jī)；5批本發(fā)明納米血塞通注射制劑由廣東天之驕藥物開(kāi)發(fā)有限公司提供。
1、形態(tài)觀察及粒徑
將5批本發(fā)明納米血塞通注射制劑在透射電鏡下進(jìn)行形態(tài)觀察，可見(jiàn)呈圓球體，大小較均勻，表面光滑，無(wú)粘連。根據(jù)光學(xué)顯微照片測(cè)定了500個(gè)，平均粒徑為55±12nm，最大粒徑為84nm，最小粒徑為22nm，且粒徑分布符合正態(tài)分布規(guī)律。
2、包封率和載藥量測(cè)定
采用薄層色譜法進(jìn)行含量測(cè)定。
用下述公式計(jì)算包封率和載藥量
包封率(％)＝(投藥量-游離藥物量)/投藥量×100％；
載藥量(％)＝(投藥量-游離藥物量)/納米藥物的重量×100％。
結(jié)果5批本發(fā)明納米血塞通注射制劑中三七總皂苷包封率為86.5-93.4％，載藥量為8.0-12.0％。
由上述實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出，本發(fā)明納米血塞通注射制劑中三七總皂苷為0.8-1.2重量份、載體為8.8-9.2重量份。
3、穩(wěn)定性考察
將本發(fā)明納米血塞通注射制劑分別置于小瓶?jī)?nèi)，密封。于冰箱(3-5℃)、室溫(20-25℃)和37℃(RH75％)的環(huán)境中放置，于0、1、2和3月觀測(cè)納米藥物的外觀、大小、再分散性等。
結(jié)果平均粒徑和顏色均未見(jiàn)明顯變化，不同條件下的藥物再分散性保持良好，無(wú)聚合現(xiàn)象的發(fā)生。結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
三、藥理實(shí)施例
三七總皂苷為市售的同一批，標(biāo)準(zhǔn)符合[許海琴，等。常用天然提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)參考手冊(cè)。化學(xué)工業(yè)出版社，2003，109]三七總皂苷項(xiàng)下的各項(xiàng)規(guī)定，其中三七總皂苷的含量為95.2％。陽(yáng)性對(duì)照藥血塞通注射液(100mg/支)按照[部頒標(biāo)準(zhǔn)19冊(cè)]中血塞通注射液項(xiàng)下的制法制備而成，本發(fā)明納米血塞通注射制劑(100mg/支)按照上述的方法制備而成。均由廣東天之驕藥物開(kāi)發(fā)有限公司提供。
1、腦脊液中藥物濃度的測(cè)定
取新西蘭家兔6只，體重約2.5kg，雌雄不限，分為2組，即血塞通注射液組和本發(fā)明納米血塞通注射制劑組。靜脈注射給藥，于給藥后不同時(shí)間抽取0.5ml腦脊液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，取樣時(shí)間分別為注射藥物后的5min、10min、20min、30min、60min，120min。取腦脊液0.25ml加適量溶劑混懸15min后，靜置15min，以10000r/min離心1min，取上清液20μl進(jìn)樣，用高效液相色譜法測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 腦脊液中藥物濃度的測(cè)定
注1為血塞通注射液，2為本發(fā)明納米血塞通注射制劑；“-”表示檢測(cè)不出。
由以上實(shí)驗(yàn)可以看出，本發(fā)明納米血塞通注射制劑通過(guò)血腦屏障的藥物量比現(xiàn)有血塞通注射制劑有顯著提高，說(shuō)明本發(fā)明納米血塞通注射制劑透過(guò)血腦屏障的藥物量明顯增加，提高了腦組織中的血藥濃度，因而會(huì)提高治療效果；實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)同時(shí)表明，本發(fā)明納米血塞通注射制劑在組織中具有很好的緩釋作用，因而本發(fā)明納米血塞通注射制劑可以減少給藥次數(shù)。
2、對(duì)大鼠血栓形成的影響
體重300-400g的大白鼠30只，隨機(jī)分成3組，即對(duì)照組、血塞通注射液組、本發(fā)明納米血塞通注射制劑組。每組10只，給藥劑量均為500mg/kg，尾靜脈注射給藥，對(duì)照組給予等體積的生理鹽水。連續(xù)給藥5天，末次給藥后半小時(shí)將大白鼠麻醉(戊巴比妥鈉30-40mg/kg，ip)，仰臥位固定，分離氣管，插入一塑料套管，并分離右頸總動(dòng)脈及左頸外靜脈，在聚乙烯管的中段放入一根長(zhǎng)6厘米的絲線，以肝素生理鹽水溶液，充滿聚乙烯管，當(dāng)聚乙烯管的一端插入左頸外靜脈后，由聚乙烯管準(zhǔn)確的注入肝素抗凝，然后再將聚乙烯管的另一端插入右頸總動(dòng)脈，打開(kāi)動(dòng)脈夾，血液從右頸總動(dòng)脈流至聚乙烯管，返回左頸外靜脈，開(kāi)放血流15分鐘后斷血流，迅速取出絲線稱重，總重量減去絲線重量即得血栓重量。將空白組和另外三組給藥組的動(dòng)物血栓濕重進(jìn)行記錄，進(jìn)行計(jì)算。結(jié)果見(jiàn)表3。
表3 對(duì)血栓形成的影響(X)
注與對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與血塞通注射液組比較#P＜0.05。
3、對(duì)小鼠缺氧耐力的影響實(shí)驗(yàn)
取健康昆明種小鼠30只，體重20-24g。即對(duì)照組、血塞通注射液組、本發(fā)明納米血塞通注射制劑組。每組10只，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)。給藥劑量均為600mg/kg，尾靜脈注射給藥，對(duì)照組給生理鹽水，1次/天，連續(xù)5天。于末次給藥后0.5小時(shí)，將小鼠分別置于體積為150ml磨口瓶中，內(nèi)放15g鈉石灰，密閉觀察其存活時(shí)間。結(jié)果見(jiàn)表4。
表4 對(duì)小鼠常壓缺氧的影響(X±S)
注與對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與血塞通注射液組比較#P＜0.05。
4、對(duì)小鼠心肌缺氧的保護(hù)作用實(shí)驗(yàn)
取健康昆明種小鼠30只，體重18-22g，即對(duì)照組、血塞通注射液組、本發(fā)明納米血塞通注射制劑組。每組雌雄各半，分籠飼養(yǎng)。給藥劑量均為600mg/kg，尾靜脈注射給藥，對(duì)照組給生理鹽水，1次/天，連續(xù)5天。于末次給藥后半小時(shí)用烏拉坦1.2g/kg腹腔注射麻醉，背部固定，分離氣管，以動(dòng)脈夾夾閉氣管，用心電儀觀察心電，并用秒表記下小鼠夾閉氣管后至心電消失的時(shí)間。結(jié)果見(jiàn)表5。
表5 對(duì)小鼠心肌缺氧的影響(X±S)
注與對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與血塞通注射液組比較#P＜0.05。
由上述實(shí)驗(yàn)可以看出，本發(fā)明納米血塞通注射制劑比現(xiàn)有血塞通注射液有更好的藥理作用。
四、安全性評(píng)價(jià)
1、血管刺激性考察
取健康大耳家兔3只，將動(dòng)物固定于兔箱內(nèi)，用酒精將皮膚消毒后，于右側(cè)耳緣靜脈處注射本發(fā)明納米血塞通注射制劑，于另一側(cè)對(duì)應(yīng)部位注射同一體積的等滲葡萄糖水作為對(duì)照。每日注射1次，連續(xù)3次，觀察兔耳緣靜脈反應(yīng)。于末次給藥24h后將兔放血處死，取下兩耳，用10％甲醛溶液浸泡，距注射部位1-4cm處，解剖取出靜脈，做組織切片檢查，觀察注射部位的反應(yīng)。
結(jié)果試驗(yàn)過(guò)程中，肉眼觀察兩耳靜脈注射部位處，未見(jiàn)紅腫、熱等刺激表現(xiàn)。表明給藥組切片部位組織形態(tài)無(wú)明顯差異，未見(jiàn)本品毒性所致的病理形態(tài)學(xué)改變(血管結(jié)構(gòu)正常，無(wú)內(nèi)皮細(xì)胞損傷，無(wú)血栓形成及其他病理性變化)。
2、溶血毒性考察
2％紅細(xì)胞混懸液的制備取兔耳緣靜脈取血10-20ml，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖10分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血。加10倍量的生理鹽水溶液，搖勻，離心，除去上清液，沉淀的紅細(xì)胞再用生理鹽水溶液洗滌2-3次，至上清液不呈紅色時(shí)為止。將所得的紅細(xì)胞用用生理鹽水配成濃度為2％的混懸液，即得。
試驗(yàn)方法取試管6支，按下表中的配比量依次加入2％紅細(xì)胞混懸液和生理鹽水溶液，混勻，于37℃恒溫箱中放置30分鐘，分別加入不同量的藥液(以第6管為空白對(duì)照)，搖勻后，置37℃恒溫箱中，開(kāi)始每隔15分鐘觀察1次，1小時(shí)后，每隔1小時(shí)觀察1次，共觀察2小時(shí)。
表6 溶血試驗(yàn)設(shè)計(jì)
結(jié)果以第3試管為準(zhǔn)，各管均未染有紅色，顯微鏡下觀察未見(jiàn)有紅細(xì)胞破裂，說(shuō)明本品不溶血，安全性好。
3、急性毒性實(shí)驗(yàn)
取健康小鼠40只，體重18-22g，，雌雄各半。分為血塞通注射液組、本發(fā)明納米血塞通注射制劑組，尾靜脈給藥，給藥劑量按照人給藥劑量的50倍，按照體表面積換算成小鼠給藥劑量，每天給藥1次，連續(xù)7天，觀察小鼠死亡情況，記錄數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表7。
表7 小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)
通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明納米血塞通注射制劑具有很好的安全性。
五、制備實(shí)施例
實(shí)施例1
將三七總皂苷藥粉1kg、三硬脂酸甘油酯3kg和大豆卵磷脂2kg，在通氮?dú)鈼l件下加熱至80℃，得到組分A；將甘油2.5kg和poloxamer188 2.5kg的水溶液，加熱至與組分A相同的溫度，得到組分B；在攪拌條件下將組分A加入到組分B中，制成粗乳，在80℃通氮?dú)鈼l件下用高壓乳勻機(jī)在41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮?dú)夥盅b后，迅速冷卻，即得主藥混懸液；
實(shí)施例2
將三七總皂苷藥粉1kg、單硬脂酸甘油酯5kg和蛋黃卵磷脂1kg，在通氮?dú)鈼l件下加熱至85℃，得到組分A；將甘油0.5kg和poloxamer188 1.0kg的水溶液，加熱至與組分A相同的溫度，得到組分B；在攪拌條件下將組分A加入到組分B中，制成粗乳，在85℃通氮?dú)鈼l件下用高壓乳勻機(jī)在41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮?dú)夥盅b后，迅速冷卻，即得主藥混懸液；
實(shí)施例3
將三七總皂苷藥粉1kg、硬脂酸2kg和磷脂酰膽堿3kg，在通氮?dú)鈼l件下加熱至82℃，得到組分A；將甘油2kg和poloxamer188 2kg的水溶液，加熱至與組分A相同的溫度，得到組分B；在攪拌條件下將組分A加入到組分B中，制成粗乳，在82℃通氮?dú)鈼l件下用高壓乳勻機(jī)在41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮?dú)夥盅b后，迅速冷卻，即得主藥混懸液；
實(shí)施例4
將三七總皂苷藥粉1kg、三月桂酸甘油酯4kg和蛋黃卵磷脂2kg，在通氮?dú)鈼l件下加熱至84℃，得到組分A；將甘油1.5kg和poloxamer188 0.5kg的水溶液，加熱至與組分A相同的溫度，得到組分B；在攪拌條件下將組分A加入到組分B中，制成粗乳，在84℃通氮?dú)鈼l件下用高壓乳勻機(jī)在41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮?dú)夥盅b后，迅速冷卻，即得主藥混懸液；
實(shí)施例5
將三七總皂苷藥粉1kg與聚氰基丙烯酸烷酯5kg、聚乳酸5kg，同無(wú)水乙醇混合，搖勻，得油相；pH值為6的0.5％Pluronic F68的水溶液，為水相；在將兩相保持溫度為20℃，按油相∶水相為1∶4(v/v)，將油相通過(guò)硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過(guò)濾，即得主藥混懸液。
實(shí)施例6
將三七總皂苷藥粉1kg與聚丙交酯—乙交酯8kg，同無(wú)水乙醇混合，搖勻，得油相；pH值為6的0.5％Pluronic F68的水溶液，為水相；在將兩相保持溫度為20℃，按油相∶水相為1∶4(v/v)，將油相通過(guò)硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過(guò)濾，即得主藥混懸液。
實(shí)施例7
將三七總皂苷藥粉1kg與殼聚糖6kg、明膠3kg，同無(wú)水乙醇混合，搖勻，得油相；pH值為6的0.5％Pluronic F68的水溶液，為水相；在將兩相保持溫度為20℃，按油相∶水相為1∶4(v/v)，將油相通過(guò)硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過(guò)濾，即得主藥混懸液。
實(shí)施例8
將三七總皂苷藥粉1kg與聚乳酸2kg、聚丙交酯—乙交酯5kg，同無(wú)水乙醇混合，搖勻，得油相；pH值為6的0.5％Pluronic F68的水溶液，為水相；在將兩相保持溫度為20℃，按油相∶水相為1∶4(v/v)，將油相通過(guò)硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過(guò)濾，即得主藥混懸液。
實(shí)施例9
稱取Witepsol H35 6kg加入三七總皂苷1kg，加熱熔融作為油相；稱取大豆卵磷脂3kg，加少量吐溫-80 1kg，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相；再將油相緩慢加入水相中，持續(xù)攪拌1小時(shí)后超聲分散，室溫，頻率45-50Hz，超聲時(shí)間5-8分鐘，即得主藥混懸液。
實(shí)施例10
取三七總皂苷1kg，三月桂酸甘油酯6kg和丙酮適量加入容器中，超聲使充分溶解，加入蛋黃卵磷脂2kg，微熱使溶成有機(jī)相；另取蛋黃卵磷脂1kg溶于適量水中，構(gòu)成水相；將有機(jī)相在(1000r/min)攪拌下注入75±2℃水相中，繼續(xù)加熱攪拌4小時(shí)，使有機(jī)溶媒完全蒸發(fā)并使體系濃縮，將所得的半透明體系攪拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的水相中，繼續(xù)攪拌2小時(shí)，即得主藥混懸液。
實(shí)施例11
取三七總皂苷1kg，溶于50％乙醇中；將硬脂酸10kg溶于正己烷，混合攪拌均勻；將乙醇溶解物和烷烴溶解物混合，放入旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)儀，控制壓力0.1個(gè)大氣壓，去除有機(jī)溶劑至盡，將蒸餾物放入密閉容器中進(jìn)行超聲處理，即得主藥混懸液。
實(shí)施例12
取三七總皂苷1kg，溶于80％乙醇中；將三月桂酸甘油酯8kg溶于正己烷，混合攪拌均勻；將乙醇溶解物和烷烴溶解物混合，放入旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)儀，控制壓力0.2個(gè)大氣壓，去除有機(jī)溶劑至盡，將蒸餾物放入密閉容器中進(jìn)行超聲處理，即得主藥混懸液。
實(shí)施例13
取三七總皂苷1kg，溶于60％乙醇中；將單硬脂酸甘油酯9kg溶于正己烷，混合攪拌均勻；將乙醇溶解物和烷烴溶解物混合，放入旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)儀，控制壓力0.15個(gè)大氣壓，去除有機(jī)溶劑至盡，將蒸餾物放入密閉容器中進(jìn)行超聲處理，即得主藥混懸液。
實(shí)施例14
將上述主藥混懸液加入適量注射用水和穩(wěn)定劑聚乙烯吡咯烷酮，調(diào)pH值為5.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成每支5ml的水針制劑10000支。
實(shí)施例15
將上述主藥混懸液加入適量注射用水和穩(wěn)定劑聚乙烯吡咯烷酮，加入氯化鈉調(diào)等滲，調(diào)pH值為7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成每瓶100ml的輸液制劑10000瓶。
實(shí)施例16
將上述主藥混懸液加入適量注射用水，再加入甘露醇，調(diào)pH值為6.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，干燥，制備成粉針制劑10000支。
實(shí)施例17
將上述主藥混懸液加入適量注射用水，再加入右旋糖苷，調(diào)pH值為5.5，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成凍干粉針制劑10000支。
實(shí)施例18
將上述主藥混懸液加入適量注射用水和聚乙烯吡咯烷酮，調(diào)pH值為6.5，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成每支5ml的水針制劑10000支。
實(shí)施例19
將上述主藥混懸液加入適量注射用水和聚乙烯吡咯烷酮，加入葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為5.8，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成每瓶100ml的輸液制劑10000瓶。
實(shí)施例20
將上述主藥混懸液加入適量注射用水，再加入果糖，調(diào)pH值為6.2，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，干燥，制備成粉針制劑10000支。
實(shí)施例21
將上述主藥混懸液加入適量注射用水，再加入葡聚糖、乳糖，調(diào)pH值為6.7，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，冷凍干燥，制備成凍干粉針制劑10000支。
權(quán)利要求
1、一種納米血塞通注射制劑，其特征在于它是將三七總皂苷配以載體制成納米級(jí)的主藥混懸液得到的注射制劑，其中三七總皂苷0.8-1.2重量份、載體8.8-9.2重量份。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米血塞通注射制劑，其特征在于所述的納米級(jí)為22nm-84nm。
3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的納米血塞通注射制劑，其特征在于，其制備方法為
(1)主藥混懸液是用下述五種方法中的任何一種制備而成
處方為三七總皂苷1重量份、載體7-10重量份；
方法一將三七總皂苷藥粉、脂質(zhì)和乳化劑，在通氮?dú)鈼l件下加熱至80±5℃，得到組分A；將甘油和poloxamer188的水溶液，加熱至與組分A相同的溫度，得到組分B；在攪拌條件下將組分A加入到組分B中，制成粗乳，在80±5℃通氮?dú)鈼l件下用高壓乳勻機(jī)載在41.4MPa壓力下乳勻5次，充氮?dú)夥盅b后，迅速冷卻，即得。
方法二稱取脂質(zhì)加入三七總皂苷，加熱熔融作為油相；稱取乳化劑，加少量吐溫-80，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相；將油相緩慢加入水相中，持續(xù)攪拌1小時(shí)后超聲分散，室溫，頻率45-50Hz，超聲時(shí)間5-8分鐘，即得。
方法三取三七總皂苷，脂質(zhì)和丙酮適量加入容器中，超聲使充分溶解，加入乳化劑，微熱使溶成有機(jī)相；另取乳化劑溶于適量水中，構(gòu)成水相；將有機(jī)相在1000r/min攪拌下注入75±2℃水相中，繼續(xù)加熱攪拌4小時(shí)，使有機(jī)溶媒完全蒸發(fā)并使體系濃縮，將所得的半透明體系攪拌下1000r/min快速溶解于0-2℃的水相中，繼續(xù)攪拌2小時(shí)，即得。
方法四取三七總皂苷，溶于50％-80％乙醇中；將脂質(zhì)的一種或多種溶于烷烴，混合攪拌均勻；將乙醇溶解物和烷烴溶解物混合，放入旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)儀，控制壓力0.1-0.2個(gè)大氣壓，去除有機(jī)溶劑至盡，將蒸餾物放入密閉容器中進(jìn)行超聲處理，即得。
方法五將三七總皂苷藥粉與載體，同無(wú)水乙醇混合，搖勻，得油相；pH值為6的0.5％Pluronic F68的水溶液，為水相；在將兩相保持溫度為20℃，按油相∶水相體積比為1∶4，將油相通過(guò)硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用9-15μm玻砂漏斗過(guò)濾，即得。
(2)制劑的制備
水針制劑的制備將上述主藥混懸液加入適量注射用水和穩(wěn)定劑，調(diào)pH值為5.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成每支5ml的水針制劑；
輸液制劑的制備將上述主藥混懸液加入適量注射用水和穩(wěn)定劑，加入氯化鈉或葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為5.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，滅菌，制備成每瓶100ml的輸液制劑；
粉針制劑的制備將上述主藥混懸液加入適量注射用水，再加入水溶性注射用藥用輔料，調(diào)pH值為5.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，干燥，制備成粉針制劑。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種納米血塞通注射制劑及其制備方法；藥理實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明納米血塞通注射制劑能很好的透過(guò)血腦屏障，具有緩釋作用，且療效比現(xiàn)有注射制劑有顯著提高；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)考察實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明制劑分散性好、包封率高、載藥量大；安全性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明具有很好的注射給藥安全性。
文檔編號(hào)A61P7/02GK1879638SQ200510077200
公開(kāi)日2006年12月20日 申請(qǐng)日期2005年6月17日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月17日
發(fā)明者張晴龍 申請(qǐng)人:張晴龍