專利名稱：苦碟子注射液的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥的技術(shù)領(lǐng)域，具體是涉及一種苦碟子注射液的質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
苦碟子注射液是現(xiàn)代中藥制劑，以抱莖苦荬菜為原料制成，具有活血止痛、清熱祛瘀，擴張冠狀血管，改善心肌血氧供應(yīng)，增加纖維蛋白溶解酶活性，抑制血栓形成的功效，用于冠心病、心絞痛、腦血栓、腦梗塞等的注射液，目前臨床上還用于治療眼底疾病、惡性腫瘤、病毒性肺炎、病毒性肝炎、視神經(jīng)萎縮、糖尿病并發(fā)癥、脈管炎、頸椎病等疾病。苦碟子注射液在保證產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定可控安全的基礎(chǔ)之上，不斷地更新發(fā)展，為了更好的控制該制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性，更好地指導(dǎo)生產(chǎn)，使工藝控制更加嚴(yán)格合理，使消費者能全面認(rèn)識產(chǎn)品質(zhì)量，需要研究、控制該注射液質(zhì)量的方法。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種苦碟子注射液的質(zhì)量控制方法，這種方法向相關(guān)的生產(chǎn)、檢測機構(gòu)提供了檢測的指標(biāo)、檢測的手段、技術(shù)方法等等；以便更好地控制該制劑的質(zhì)量，保證用藥的安全性，能夠更好地指導(dǎo)生產(chǎn)，使生產(chǎn)工藝控制更加嚴(yán)格合理，使消費者能全面認(rèn)識產(chǎn)品質(zhì)地。
本發(fā)明這樣構(gòu)成苦碟子注射液的質(zhì)量控制方法，主要包括性狀、鑒別、檢查、指紋圖譜、含量測定等項目，它涉及以苦碟子藥材或其提取物制成的中藥注射液或含各種有效部位使用的注射液的質(zhì)量控制方法，該質(zhì)量控制方法是將苦碟子對照藥材、總黃酮、木樨草素苷、腺苷、倍半萜內(nèi)酯、總香豆素、三萜皂苷作為該中藥注射液的質(zhì)量控制的檢測指標(biāo)。
上述的質(zhì)量控制指標(biāo)的檢測指標(biāo)可優(yōu)選為將腺苷、木樨草素及其苷、總黃酮、苦碟子對照藥材作為該中藥注射液的鑒別方法的檢測指標(biāo)。
上述的質(zhì)量控制指標(biāo)的檢測指標(biāo)可優(yōu)選為將苦碟子對照藥材、總黃酮、木樨草素苷、腺苷、倍半萜內(nèi)酯、總香豆素、三萜皂苷作為該中藥注射劑的含量測定方法的檢測指標(biāo)。
上述的質(zhì)量控制指標(biāo)的檢測指標(biāo)可優(yōu)選為將腺苷、木樨草素及其苷、總黃酮、苦碟子對照藥材、倍半萜內(nèi)酯作為該中藥注射劑的指紋圖譜研究的檢測指標(biāo)。
上述的苦碟子注射液的性狀為淺棕黃色至棕黃色的澄明液體。
在本發(fā)明所述的一種苦碟子注射液的質(zhì)量控制方法中，對于苦碟子的鑒別技術(shù)，可采用下述方法1采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30ul之間某一體積，以苦碟子對照藥材，以腺苷作為對照品，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，展開劑可以為氯仿、異丙醇、丙酮、水、甲醇、甲酸、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、氨水、正丁醇中的至少一種按照常規(guī)的一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以2～30％硫酸乙醇、或噴以1～10％茚三酮乙醇等溶液顯色的方法。
2采用高效液相色譜法，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，一般使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水、甲醇、磷酸中的至少一種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，以苦碟子對照藥材、腺苷、術(shù)樨草素苷作為對照品，檢測波長在200～500nm范圍內(nèi)。
本發(fā)明所述的一種苦碟子注射液的質(zhì)量控制方法中，所述的檢查包括pH值、裝量差異、澄明度、無菌、不溶性微粒、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、樹脂、草醋鹽、硫酸鹽、鈣鹽、鉀離子、重金屬、砷鹽、農(nóng)藥殘留等全部項目或部分項目，具體檢測方法與當(dāng)時現(xiàn)行版的中國藥典附錄收載的保持一致，鉀離子、重金屬、砷鹽的檢測方法還包括以微波消解法處理樣品，進(jìn)而采用原子吸收法、等離子發(fā)射光譜或電感耦合等離子質(zhì)譜(ICP-MS)法進(jìn)行測定的方法；藥品中的技術(shù)要求為(1)pH值在2～10之間；(2)重金屬不得過百萬分之二十(3)砷鹽不得過百萬分之二；(4)有機氯農(nóng)藥殘留總量不得過百萬分之一；(5)硫酸鹽按中國藥典附錄檢查與標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液1ml制成的對照液比較，不得更濃(0.005％)；(6)鈣鹽取本品2ml，加草酸銨試液1ml，搖勻，放置10分鐘，不得出現(xiàn)渾濁。
在本發(fā)明所述的一種苦碟子注射液的質(zhì)量控制方法中對于指紋圖譜，采用高效液相色譜法，樣品前處理包括直接取樣，可采取(1)以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、乙腈、水、0.1～10％的冰醋酸、庚烷磺酸鈉、二甲基甲烷0.4％磷酸中的至少一種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，以梯度或等度洗脫的方法分離，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)，以腺苷、木樨草素及其苷、總黃酮、苦碟子對照藥材及其提取物中全部或部分品種作為特征指紋峰或內(nèi)標(biāo)物峰。
(2)使用C18類型填料的色譜柱，以A為0.4％磷酸溶液，B為乙睛為流動相，以梯度洗脫的方法分離，檢測波長為348nm，以木樨草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷作為特征指紋峰或內(nèi)標(biāo)物峰。
本發(fā)明所述的一種苦碟子注射液的質(zhì)量控制方法中，對于含量測定采用下述方法1以可見紫外分光光度法測定本品中的總黃酮含量，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，測定波長為400～600nm中某一波長，一般采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法或?qū)φ掌贩y定，常用對照品為蘆丁、木樨草素及其苷。對于含量測定也可以可見紫外光分光光度法測定本品中的總香豆素含量，樣品。
2以高效液相色譜法測定本品中的腺苷及木樨草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷含量，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮等方法，測定波長為200～600nm中某一波長，一般采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法或?qū)φ掌贩y定。
3采用液相色譜法測定本品中的木樨草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷，樣品前處理為直接取樣，使用C18類型填料的色譜柱，以乙腈、0.4％磷酸溶液在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，檢測波長為48nm。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明選取的指標(biāo)成分是產(chǎn)品的重要有效活性成分，對控制藥品質(zhì)量是十分必要的，作為含量控制的指標(biāo)很理想。本申請人為了要從源頭抓起產(chǎn)品質(zhì)量，在固定中藥材品種、產(chǎn)地和采收期的前提下，制定中藥材、有效部位或中間體、注射劑的指紋圖譜。
為證明利用本發(fā)明提供的質(zhì)量控制方法能更好地控制一種苦碟子注射液的產(chǎn)品質(zhì)量，得到的藥物具有有效的效果，申請人進(jìn)行了一系列實驗；實驗例1不同產(chǎn)地和采收期藥材測定結(jié)果批次木樨草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷含量(％)0305010.1310305020.130
0305030.1690305100.0850305110.1410305120.1150306010.2130306020.1650306030.2210306040.152上述研究結(jié)果表明重視藥材產(chǎn)地及采收期，對于保證和提高藥材質(zhì)量具有重要意義，對于控制成品療效至關(guān)重要。
實驗例2指紋圖譜的研究1、流動相的選擇研究過程中分別考察了(1)乙腈-水(梯度洗脫)(2)A為0.4％磷酸，B為乙腈(梯度洗脫)二種流動相系統(tǒng)。結(jié)果顯示流動相(1)條件下，峰拖尾嚴(yán)重，出峰不完全；流動相(2)條件下，峰形較好，出峰完全且分布均勻，故而被選用。
2、檢測波長的確定分別考察了在不同波段典型波長300、325、348、356下的色譜峰情況，結(jié)果顯示，在348nm下色譜峰較多，峰形較好，故最終選用348nm作為檢測波長。
3、指紋圖譜的建立及分析按上述色譜條件，分別對10批苦碟子注射液進(jìn)行測定，考察10批樣品液相色譜的一致性。從圖譜看，9min以前有2個小峰，在制劑、原料的各批數(shù)據(jù)中差異很大，占全譜量很小，故在色譜峰處理上，對9min以前的區(qū)域不進(jìn)行積分和計算?？疾?0批樣品的色譜圖，找出其相對穩(wěn)定的共有峰，以木犀草素峰為參照峰(6號峰)，其他峰以阿拉伯?dāng)?shù)字按順序標(biāo)定，苦碟子注射液共標(biāo)定8個峰。以參照峰的相對保留時間和相對峰面積比值為1，計算各共有指紋峰的相對保留時間和占總峰面積5％以上的峰面積的比值。以相對保留時間的平均值，作為各自標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相對保留時間，以平均值的±10％作為相對保留時間允許變動范圍。
根據(jù)《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求(暫行)》的規(guī)定，本指紋圖譜中，只有1號，6號，7號峰單峰面積占總峰面積的百分比可能超過20％，三者占總峰面積之和的百分比超過80％。6號峰以10批樣品相對峰面積比值的平均值作為標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的比值，以平均值的±25％確定其允許范圍，為0.23-0.37。
4、相關(guān)性分析苦碟子注射液及其原料苦碟子藥材二者指紋圖譜的峰形和整體特征相關(guān)性較好。
5、指紋圖譜的相似度分析運用藥典會提供的指紋圖譜相似度評價軟件，將各指紋圖譜及其積分?jǐn)?shù)據(jù)經(jīng)軟件計算處理，結(jié)果苦碟子注射液10批樣品的指紋圖譜均具有較好的相似度，相似度均大于0.9。
6、指紋圖譜及各項技術(shù)參數(shù)根據(jù)10批苦碟子注射液HPLC譜給出的相關(guān)參數(shù)，比較供試品譜圖，其中8個峰是各批樣品所共有的，因此確定這8個峰為共有指紋峰。在共有指紋峰中，只有1號、6號和7號峰的峰面積大于總峰面積的10％，故只考慮這三個峰的峰面積比值，其余各共有峰均按其相對保留時間定性。
苦碟子注射液指紋圖譜技術(shù)參數(shù)共有峰的峰號(相對保留時間)1(9.719)，2(10.281)，3(10.846)，4(18.368)，5(23.302)，6(24.240)，7(24.413)，8(29.545)。
結(jié)果顯示，藥材、成品間有良好的相關(guān)性，本申請人研究的苦碟子注射液指紋圖譜能很好的控制產(chǎn)品質(zhì)量。
(四)具體的實施方式本發(fā)明的實施例1一種苦碟子注射液的質(zhì)量控制方法，主要包括性狀、鑒別、檢查、指紋圖譜、含量測定項目。
1、性狀該中藥注射液為淺棕黃色至棕黃色的澄明液體。
2、鑒別對于腺苷的鑒別采用薄層色譜法，使用硅膠GF254薄層板，點樣量為5ul，以腺苷作為對照品，直接取樣，展開劑為氯仿、醋酸乙酯、異丙醇、氨水、水按照常規(guī)比例配制而成，檢視條件為紫外下檢視的方法。
3、檢查包括pH值、裝量差異、澄明度、無菌、不溶性微粒、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、樹脂、草酸鹽、鈣鹽、硫酸鹽、鉀離子、重金屬、砷鹽、農(nóng)藥殘留等全部項目或部分項目，具體檢測方法與當(dāng)時現(xiàn)行版的中國藥典附錄收載的保持一致，鉀離子、重金屬、砷鹽的檢測方法還包括以微波消解法處理樣品，進(jìn)而采用原子吸收法、等離子發(fā)射光譜或電感耦合等離子質(zhì)譜法進(jìn)行測定的方法；藥品中的技術(shù)要求為(1)pH值在2～10之間；(2)重金屬不得過百萬分之二十(3)砷鹽不得過百萬分之二；(4)有機氯農(nóng)藥殘留總量不得過百萬分之一；(5)硫酸鹽按中國藥典附錄檢查與標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液1ml制成的對照液比較，不得更濃(0.005％)；(6)鈣鹽取本品2ml，加草酸銨試液1ml，搖勻，放置10分鐘，不得出現(xiàn)渾濁。
4、指紋圖譜采用高效液相色譜法，樣品前處理包括直接取樣，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙腈、0.4％磷酸溶液在合適比例條件下為流動相，以梯度洗脫的方法分離，檢測波長在348nm范圍內(nèi)，以木樨草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷作為特征指紋峰或內(nèi)標(biāo)物峰。指紋圖譜和洗脫梯度如下苦碟子注射液指紋圖譜梯度洗脫表
5、含量測定方法1以可見紫外分光光度法測定本品中的總黃酮含量，樣品前處理包括直接取樣以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，測定波長為505nm，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法或?qū)φ掌贩y定，常用對照品為蘆丁或木樨草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷，每10ml含總黃酮不得少于4.0mg。
方法2對于含量測定也可以以液相法測定本品中的腺苷含量，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水、0.4％磷酸中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相測定波長為260nm，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法或?qū)φ掌贩y定，每10ml含總黃酮不得少于0.025mg。
方法3以高效液相色譜法測定本品中的木樨草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷。樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙腈、0.4％磷酸中的一種或一種以上品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，以木樨草素苷作為對照品，檢測波長在348nm范圍內(nèi)，每10ml含木樨草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷不得少于0.60mg。
權(quán)利要求
1.一種苦碟子注射液的質(zhì)量控制方法，主要包括性狀、鑒別、檢查、指紋圖譜、含量測定項目，其特征在于它是將苦碟子對照藥材、總黃酮、木樨草素苷、腺苷、倍半萜內(nèi)酯、總香豆素、三萜皂苷作為該中藥注射液的質(zhì)量控制的檢測指標(biāo)。
2.按照權(quán)利要求1所述的苦碟子注射液的質(zhì)量控制方法，其特征在于腺苷、木樨草素及其苷、總黃酮、苦碟子對照藥材作為該中藥注射液的鑒別方法、含量測定方法和指紋圖譜研究的檢測指標(biāo)。
3.按照權(quán)利要求1所述的苦碟子注射液的質(zhì)量控制方法，其特征在于該中藥注射液為淺棕黃色至棕黃色的澄明液體。
4.按照權(quán)利要求1或2所述的苦碟子注射液的質(zhì)量控制方法，其特征在于對于苦碟子的鑒別方法采用薄層色譜法，一般使用硅膠G或硅膠GF254或硅膠H為薄層板，點樣量為0.5～30ul之間某一體積，以苦碟子對照藥材、腺苷作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，展開劑可以為氯仿或丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的至少一種按照常規(guī)一定比例配制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣熏后再置紫外光燈下檢視、或噴以2～30％硫酸乙醇、或噴以1～10％茚三酮乙醇等溶液顯色的方法。
5.按照權(quán)利要求1或2所述的苦碟子注射液的質(zhì)量控制方法，其特征在于對于苦碟子的鑒別方法采用高效液相色譜法，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙腈、水、甲醇、磷酸中的至少一種品種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，以苦碟子對照藥材、腺苷、木樨草素苷作為對照品，檢測波長在200～500nm范圍內(nèi)。
6.按照權(quán)利要求1、2或3所述的苦碟子注射液的質(zhì)量控制方法，其特征在于對于檢查包括pH值、裝量差異、澄明度、無菌、不溶性微粒、蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)、樹脂、草酸鹽、鉀離子、重金屬、砷鹽、農(nóng)藥殘留、鈣鹽、硫酸鹽等全部項目或部分項目，具體檢測方法與現(xiàn)行版的中國藥典附錄收載的保持一致，鉀離子、重金屬、砷鹽的檢測方法還包括以微波消解法處理樣品，進(jìn)而采用原子吸收法、等離子發(fā)射光譜或電感耦合等離子質(zhì)譜法進(jìn)行測定的方法；苦碟子注射液中的技術(shù)要求為(1)pH值在2～10之間，(2)重金屬不超過百萬分之二十，(3)砷鹽不超過百萬分之二，(4)有機氯農(nóng)藥殘留總量不超過百萬分之一。
7.按照權(quán)利要求1或2所述的苦碟子注射液的質(zhì)量控制方法，其特征在于對于指紋圖譜采用高效液相色譜法，樣品前處理包括直接取樣以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以甲醇、乙腈、水、0.1～10％的冰醋酸、庚烷磺酸鈉、二甲基甲烷、0.4％磷酸中的至少一種溶劑在常規(guī)的合適比例條件下為流動相，以梯度或等度洗脫的方法分離，檢測波長在200～600nm范圍內(nèi)，以總黃酮、木樨草素苷、腺苷、倍半萜內(nèi)酯、總香豆素、三萜皂苷中全部或部分成分作為特征指紋峰或內(nèi)標(biāo)物峰。
8.按照權(quán)利要求1或2所述的苦碟子注射液的質(zhì)量控制方法，其特征在于對于含量測定以可見紫外分光光度法測定本品中的總黃酮含量，樣品前處理包括直接取樣或以醋酸乙酯、氯仿、二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮的方法，測定波長為400～600nm中某一波長，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法或?qū)φ掌贩y定，常用對照品為蘆丁、木樨草素及其苷；對于含量測定也可以以可見紫外分光光度法測定本品中的總香豆素含量，樣品前處理包括直接取樣、以醋酸乙酯或氯仿或二氯甲烷或正丁醇提取后再濃縮方法，測定波長為400～600nm中某一波長，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法或?qū)φ掌贩y定。
9.按照權(quán)利要求1或2所述的苦碟子注射液的質(zhì)量控制方法，其特征在于對于腺苷的鑒別采用薄層色譜法，使用硅膠GF254薄層板，點樣量為5ul，以腺苷作為對照品，直接取樣，展開劑為氯仿、醋酸乙酯、異丙醇、氨水、水按照常規(guī)比例配制而成，檢視條件為紫外下檢視的方法。
10.按照權(quán)利要求1或2所述的苦碟子注射液的質(zhì)量控制方法，其特征在于對于指紋圖譜采用液相色譜法，樣品前處理為直接取樣，使用C18類型填料的色譜柱，以0.4％磷酸溶液，或乙睛為流動相，以梯度洗脫的方法分離，檢測波長為348nm，以木樨草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷作為特征指紋峰或內(nèi)標(biāo)物峰。
全文摘要
一種苦碟子注射液的質(zhì)量控制方法，主要包括性狀、鑒別、檢查、指紋圖譜、含量測定項目，其特征在于它是將苦碟子對照藥材、總黃酮、木樨草素苷、腺苷、倍半萜內(nèi)酯、總香豆素、三萜皂苷作為該中藥注射液的質(zhì)量控制的檢測指標(biāo)。本發(fā)明使藥材、成品間有良好的相關(guān)性，本申請人研究的苦碟子注射液指紋圖譜能很好的控制產(chǎn)品質(zhì)量。
文檔編號A61K9/08GK1762406SQ20051004738
公開日2006年4月26日 申請日期2005年10月11日 優(yōu)先權(quán)日2005年10月11日
發(fā)明者馬占之, 李志強, 王尊來, 田越琳, 王學(xué)東 申請人:沈陽雙鼎制藥有限公司