專利名稱：具抗癌活性的霞草提取物和制備方法及其在制藥中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥提取物，更具體地說，本發(fā)明涉及一種從石竹科石頭花屬植物霞草Gypsophila oldhamiana Miq.的根中提取的有效部位，本發(fā)明還涉及該藥物提取物地制備方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
隨著醫(yī)學(xué)的進(jìn)步，惡性腫瘤---癌癥，成為常見且嚴(yán)重威脅人類生命及生活質(zhì)量的主要疾病之一，目前中藥用于腫瘤治療時(shí)分為兩類，一類為治療類用藥，如某些復(fù)方，但存在成分不明，機(jī)理不清楚，效價(jià)不高等缺點(diǎn)，甚至有的復(fù)方中含有巨毒成分，容易產(chǎn)生嚴(yán)重的毒副作用；另一類為治療腫瘤藥中的輔助用藥，用以減輕放、化療副作用，但不具備直接治療腫瘤的作用。
霞草為石竹科石頭花屬植物霞草Gypsophila oldhamiana Miq.的根別名長蕊石頭花[1]，酸螞昨菜、山馬生菜、山掃帚菜，主產(chǎn)于山東、山西、陜西、寧夏、內(nèi)蒙古、甘肅、新疆、河北、黑龍江等地。該植物為我國民間常用草藥，《中藥大辭典》收載，有些地區(qū)作為銀柴胡的代用品入藥。該藥性甘、微寒，具有清熱涼血、活血散瘀、消腫止痛、化腐生肌等功效。主要治療虛勞肌熱、骨蒸、陰虛久瘧、小兒疳熱等疾患，同時(shí)還可用于跌打損傷、骨拆、外傷等。歐洲的植物化學(xué)家對(duì)該植物進(jìn)行過一些研究，分得三萜、三萜皂甙、黃酮、甾醇、多糖、有機(jī)酸等化合物。藥理實(shí)驗(yàn)研究表明，霞草中提取的三萜皂甙，給家兔在形成動(dòng)脈粥樣硬化的同時(shí)或以后每天內(nèi)服，可降低血清膽甾醇濃度，使膽甾醇/腦磷脂系數(shù)降低，使主動(dòng)脈類脂質(zhì)含量降低。有人認(rèn)為皂甙可作用于血漿脂蛋白，阻止膽甾醇的酯化及其在血管壁的沉積，也有人認(rèn)為可以阻止膽甾醇從腸道吸收。有文獻(xiàn)報(bào)道絲石竹皂甙、九糖甙沒有抗菌效果，酶解后除去羧基上的甙鍵，去5個(gè)糖，生成次皂甙具有顯著的抗菌作用。國內(nèi)對(duì)該植物研究較少，化學(xué)成分及藥理作用方面的研究均未見報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種高效低毒的具有抗癌活性及抗病毒活性的霞草提取物。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是，提供一種具有抗癌活性及抗病毒活性的霞草提取物的制備方法。
本發(fā)明還有一個(gè)目的是，提供具有抗癌活性及抗病毒活性的霞草提取物在制備治療癌癥及抗病毒藥物中的新用途。
本發(fā)明的解決方案是從中藥霞草根中提取一種具有抗癌、抗病毒活性的霞草提取物，該提取物中含有皂苷，其含量在5％以上。
本發(fā)明所述的抗癌、抗病毒活性的霞草提取物的提取方法，包括以下主要步驟
1、霞草粗提物的制取
(1)、取霞草根自然干燥后粉碎；
(2)、用溶劑提?。凰f的溶劑它選自丙酮、醇類水或水醇混合溶劑，所說的醇類為甲醇、乙醇、異丙醇等短鏈醇。
(3)、提取液減壓濃縮得提取物浸膏，即為霞草粗提物，該粗提物中含有5％-30％的皂苷；
該霞草粗提物也可以按以下方法來提取
A、粉碎的霞草根用水提?。?br>
B、提取液濃縮成相對(duì)密度1.04～1.34的稠浸膏；
C、稠浸膏中加入乙醇至乙醇濃度為40～95％；
D、靜置，取上清液濃縮成浸膏，即為霞草粗提物。
2、霞草粗提物的精制
(1)、將霞草粗提物加水制成水混懸液；
(2)、過大孔樹脂柱，這里所用的大孔樹脂孔為中低極性大孔樹脂.先用水或1-10％低濃度的乙醇或甲醇溶液洗脫，除去極性溶劑中的雜質(zhì)；
(3)、再用20％以上的高濃度乙醇或甲醇洗脫；
(4)、收集高濃度醇洗脫液，蒸餾回收溶劑，干燥、制得含皂苷的精制霞草提取物，該提取物中含有30％以上的皂苷。
3、含皂苷霞草提取物的純化
上述經(jīng)精制后的霞草提取物，進(jìn)一步用有機(jī)溶劑進(jìn)行純化可制得更高純度的霞草提取物，其中皂苷含量可達(dá)到80％以上，這里所說的有機(jī)溶劑它選自正丁醇、醋酸乙酯、丙酮-乙醚的混合溶劑、氯仿-甲醇-水的混合溶劑或石油醚。
總之，用本發(fā)明提供的提取方法，根據(jù)需要可以制備得到皂苷含量在5％以上或10％以上或30％以上或50％以上或80％以上，具抗癌、抗病毒活性的霞草提取物。
申請(qǐng)人進(jìn)一步用本發(fā)明的霞草提取物進(jìn)行了急毒和藥效試驗(yàn)，觀察了霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)對(duì)荷瘤動(dòng)物用藥后腫瘤生長影響，對(duì)霞草提取物進(jìn)行抗腫瘤藥效學(xué)研究。并對(duì)霞草提取物進(jìn)行了體外抗病實(shí)驗(yàn)。
試驗(yàn)一霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)在體外對(duì)10種人癌細(xì)胞的細(xì)胞毒作用觀察。
本發(fā)明采用10種人癌細(xì)胞株，其中包括Bel-7402(肝癌)，BGC-823(胃癌)，MCF-7(乳腺癌)，HCT-8(結(jié)腸癌)，A2780(卵巢癌)，KB(口腔上皮細(xì)胞癌)，Hela(宮頸癌)，PC-3M(前列腺癌轉(zhuǎn)移株)，A549(肺腺癌)，KeTr3(腎癌)，用MTT法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
將細(xì)胞培養(yǎng)在含10％小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中，內(nèi)含青霉素100U/ml，鏈霉素100μg/ml，于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)。
0.3％胰酶0.6ml消化貼壁的腫瘤細(xì)胞，含10％小牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液配制細(xì)胞懸液，濃度為1×104細(xì)胞/ml。于96孔培養(yǎng)板內(nèi)每孔接種100μl(含1000個(gè)腫瘤細(xì)胞)，37℃培養(yǎng)24小時(shí)。給藥組加入含有不同濃度藥物，每藥設(shè)3個(gè)劑量組，分別為50μg/ml，5μg/ml，0.5μg/ml，每組設(shè)三個(gè)平行孔，每孔加藥100μl。對(duì)照組加入與藥等體積的溶劑。置37℃，5％CO2溫箱中培養(yǎng)4天后棄去培養(yǎng)液，每孔加入200μl 0.2％MTT溶液(RPMI 1640配制)。37℃孵育4小時(shí)，棄去上清，每孔加入DMSO 150μl溶解Formazan顆粒，輕度振蕩后，用酶標(biāo)儀，在參考波長450nm、檢測(cè)波長570nm條件下測(cè)定光密度值(OD)。
結(jié)果計(jì)算以溶劑對(duì)照處理的腫瘤細(xì)胞為對(duì)照組，求藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率。
以藥物的不同濃度及對(duì)細(xì)胞的抑制率作圖可得到劑量反應(yīng)曲線，從中求出藥物的半數(shù)抑制濃度(IC50)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1
表1.霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)在體外對(duì)人腫瘤細(xì)胞生長的影響
續(xù)表1
霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)對(duì)A2780，KB，PC-3M，A549，KeTr3五種人癌細(xì)胞株有一定的細(xì)胞毒作用；對(duì)Bel-7402，BGC-823，HCT-8，MCF-7，Hela五種人癌細(xì)胞株未見明顯細(xì)胞毒作用。
試驗(yàn)二霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)對(duì)小鼠移植性腫瘤生長的抑制作用，觀察霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)對(duì)荷瘤動(dòng)物用藥后腫瘤生長的影響，對(duì)該藥進(jìn)行抗腫瘤藥效學(xué)研究。
一、霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)對(duì)小鼠Lewis肺癌生長的抑制作用
選用C57BL/6小鼠，18-22g，雄性，將腫瘤生長良好、全身狀況較好的荷瘤動(dòng)物處死，無菌條件下取出瘤塊，剪碎，用玻璃研磨器加生理鹽水(1∶3)磨成勻漿，于每鼠腋窩皮下接種瘤液0.2ml。
接種后24小時(shí)，將動(dòng)物按體重隨機(jī)分組，每組10只。設(shè)空白對(duì)照組，環(huán)磷酰胺陽性藥對(duì)照組，霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)給藥組劑量為50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg。環(huán)磷酰胺腹腔注射一次60mg/kg。霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)灌胃給藥20ml/kg，每天一次，連續(xù)給藥10天。末次給藥后24小時(shí)，頸椎脫臼處死動(dòng)物，分別稱體重及瘤重，計(jì)算腫瘤抑制率，進(jìn)行療效評(píng)價(jià)并將各組結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。療效評(píng)價(jià)公式
結(jié)果見表2霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)50mg/kg組的抑瘤率為18.3％(P＞0.05)；100mg/kg組的抑瘤率為38.3％(P＜0.05)；200mg/kg組的抑瘤率為41.9％(P＜0.05)。
結(jié)果表明，霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)對(duì)小鼠Lewis肺癌生長有一定的抑制作用，并呈一定的劑量效應(yīng)關(guān)系。
二、霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)對(duì)小鼠宮頸癌U14的抑瘤作用
選用昆明種小鼠，18-22g，雌性，將接種后7天的荷瘤動(dòng)物頸椎脫臼處死。無菌條件下取出腹水，用生理鹽水稀釋，于每鼠腋窩皮下接種瘤液0.2ml。
接種后24小時(shí)，將動(dòng)物按體重隨機(jī)分組，每組10只。設(shè)空白對(duì)照組，環(huán)磷酰胺陽性藥對(duì)照組，霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)給藥組劑量為50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg。環(huán)磷酰胺腹腔注射一次60mg/kg。霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)灌胃給藥20ml/kg，每天一次，連續(xù)給藥10天。末次給藥后24小時(shí)，頸椎脫臼處死動(dòng)物，分別稱體重及瘤重，計(jì)算腫瘤抑制率，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。療效評(píng)價(jià)公式
結(jié)果見表3。霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)50mg/kg組的抑瘤率為6.8％(P＞0.05)；100mg/kg組的抑瘤率為31.1％(P＜0.05)；200mg/kg組的抑瘤率為36.5％(P＜0.05)。
結(jié)果表明，中、大劑量組對(duì)小鼠宮頸癌U14生長有一定的抑制作用，并呈一定的劑量效應(yīng)關(guān)系。
三、霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)對(duì)小鼠肝癌H22的抑瘤作用
選用昆明種小鼠，18-22g，雄性，將接種后7天的荷瘤動(dòng)物頸椎脫臼處死。無菌條件下取出腹水，用生理鹽水稀釋，于每鼠腋窩皮下接種瘤液0.2ml。
接種后24小時(shí)，將動(dòng)物按體重隨機(jī)分組，每組10只。設(shè)空白對(duì)照組，環(huán)磷酰胺陽性藥對(duì)照組，霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)給藥組劑量為50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg。環(huán)磷酰胺腹腔注射一次60mg/kg。霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)灌胃給藥20ml/kg，每天一次，連續(xù)給藥10天。末次給藥后24小時(shí)，頸椎脫臼處死動(dòng)物，分別稱體重及瘤重，計(jì)算腫瘤抑制率，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。療效評(píng)價(jià)公式
結(jié)果見表4。霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)50mg/kg組的抑瘤率為15.3％(P＞0.05)；100mg/kg組的抑瘤率為43.7％(P＜0.01)；200mg/kg組的抑瘤率為47.7％(P＜0.01)。
結(jié)果表明霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)對(duì)小鼠肝癌H22生長有一定的抑制作用，并呈一定的劑量效應(yīng)關(guān)系。
總之，在本實(shí)驗(yàn)條件下，霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)對(duì)小鼠Lewis肺癌、宮頸癌U14、肝癌H22均具有一定的生長抑制作用，說明霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)具有一定的抗腫瘤活性。
表2.霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)對(duì)小鼠Lewis肺癌生長的影響
表3.霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)對(duì)小鼠宮頸癌U14生長的影響
表4.霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)對(duì)小鼠肝癌H22生長的影響
試驗(yàn)三、霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所腫瘤藥理室)
1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br>
觀察霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響。
2、實(shí)驗(yàn)材料
受試藥物由山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所提供，實(shí)驗(yàn)時(shí)用雙蒸水配制成實(shí)驗(yàn)所需濃度。
動(dòng)物C57BL/6小鼠由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所繁育場(chǎng)提供，合格證號(hào)SCXK京2000-0006號(hào)。。
3、方法
選用C57BL/6小鼠，將接種后10-14天。腫瘤生長良好的荷瘤動(dòng)物處死，無菌條件下取出瘤塊，稱重、剪碎、研磨、過濾，勻漿以生理鹽水1∶3稀釋，于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腋窩下以每鼠0.2ml瘤液接種。接種次日，將動(dòng)物按體重隨機(jī)分為4組，每組10只。設(shè)陰性對(duì)照組，SJY 50、100、200mg/kg三個(gè)劑量給藥組。灌胃給藥體積為20ml/kg，每日1次，連續(xù)給藥8天。末次給藥后24小時(shí)，頸椎脫臼處死動(dòng)物。無菌條件下取出脾臟，分別在篩網(wǎng)上研磨、離心、計(jì)數(shù)單個(gè)細(xì)胞，配成終濃度為2.5×106個(gè)細(xì)胞/ml，分別加入96孔板中，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照孔。置37℃ 5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)，培養(yǎng)結(jié)束前6小時(shí)向每孔加入[3H]-TdR，終濃度為1μCi/孔。多頭收集器將細(xì)胞收集于玻璃纖維濾紙上，烤干，放入加有4ml閃爍液的測(cè)量瓶中，液閃儀上測(cè)定每個(gè)樣品的cpm值。
4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
結(jié)果見表5。
表5.霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的影響
實(shí)驗(yàn)結(jié)果各組淋巴細(xì)胞增殖無明顯差別。
5、結(jié)論
結(jié)果顯示霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)在荷瘤小鼠未見增強(qiáng)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化能力的作用。
試驗(yàn)四、霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)對(duì)荷瘤小鼠廓清能力的影響(中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所腫瘤藥理室)
1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br>
觀察霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)對(duì)小鼠廓清功能的影響。
2、實(shí)驗(yàn)材料
受試藥物由山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所提供，實(shí)驗(yàn)時(shí)用雙蒸水配制成實(shí)驗(yàn)所需濃度。
動(dòng)物昆明種小鼠由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所繁育場(chǎng)提供，合格證號(hào)SCXK京2000-0006號(hào)。
3、實(shí)驗(yàn)方法
接種肝癌H22昆明小鼠40只，隨機(jī)分為4組，每組10只。設(shè)空白對(duì)照組，樣品劑量為50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg。樣品灌胃給藥20ml/kg，每天一次，連續(xù)給藥10天。末次給藥后24小時(shí)，小鼠尾靜脈注射0.5％剛果紅(0.1ml/10g體重)，于注射后1分鐘及5分鐘，眼眶后靜脈叢取血，離心取血清。吸25μl血清，加2.5ml生理鹽水(pH10)，于510nm比色測(cè)吸光度，計(jì)算廓清指數(shù)k。處死小鼠，取脾臟及胸腺，計(jì)算臟器系數(shù)。比較上述各組間差別。
4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
結(jié)果見表6。
表6.霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)對(duì)小鼠廓清能力的影響a廓清指數(shù)
b臟器系數(shù)
實(shí)驗(yàn)結(jié)果三個(gè)劑量組的廓清指數(shù)及脾臟和胸腺指數(shù)與空白對(duì)照組相比均無顯著性差別。
試驗(yàn)五霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)對(duì)10mg·kg-1環(huán)磷酰胺致小鼠SI80肉瘤抑瘤作用的增效作用。
小鼠購進(jìn)后適應(yīng)性飼養(yǎng)24h，禁食12h，左腋下無菌接種由生理鹽水稀釋的小鼠S180腹水液(含瘤細(xì)胞5×106/mL)0.2mL/只，接種后24h，按性別、體重隨機(jī)分組給藥。分組為NS對(duì)照組24只(♀♂各12只)，20mg·kg-1環(huán)磷酰胺SC組12只(♀♂各6只)，10mg·kg-1環(huán)磷酰胺SC組12只(♀♂各6只)，10mg·kg-1環(huán)磷酰胺加100mg·kg-1、200mg·kg-1、400mg·kg-1霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)各1組，每組12只(均為♀♂各6只)，每日給藥一次，連續(xù)給藥9天，末次給藥24h后，脫頸處死小鼠，剝離瘤體，GB-303電子天平稱瘤體重，t檢驗(yàn)比較各組瘤重，并按(NS對(duì)照組瘤重-給藥組瘤重)/NS對(duì)照組瘤重，計(jì)算各藥物組的抑瘤率，試驗(yàn)連續(xù)重復(fù)三次，結(jié)果見表7。
表7霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)對(duì)10mg·kg-1環(huán)磷酰胺致小鼠S180肉瘤抑瘤作用的增效作用
注與NS對(duì)照組比較“*”P＜0.05，“**”P＜0.01，“***”P＜0.001；與10mg·kg-1環(huán)磷酰胺組比“△”P＜0.05。
實(shí)驗(yàn)提示給予荷瘤小鼠霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)100-400mg·kg-1，其抑瘤率分別為100mg·kg-125.35-27.78；200mg·kg-135.71-37.40；400mg·kg-139.68-45.07。可以明顯提高10mg·kg-1環(huán)磷酰胺對(duì)小鼠S180肉瘤的抑瘤作用，表現(xiàn)出明顯的化療協(xié)同作用。說明本品與化療藥物同用可以增加化療藥物的抑瘤作用。
含有上述具有抗癌活性的中藥提取物，它還可作為癌癥治療過程中配合化療、放療的輔助用藥及手術(shù)后治療用藥。
試驗(yàn)六霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)體外抗HSV-1、HSV-2病毒作用的研究。
為觀察其抗病毒作用，我們對(duì)霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)進(jìn)行了體外抗病毒實(shí)驗(yàn)。用病毒滴定(TCID50)、藥物對(duì)細(xì)胞毒性測(cè)定(TD50)及藥物對(duì)細(xì)胞性測(cè)定(TD50)等方法研究了霞草提取物的細(xì)胞毒性及抗病作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)對(duì)細(xì)胞毒性測(cè)定及殺傷作用見表6；抗病毒HSV-1、HSV-2作用及保護(hù)指數(shù)(PI)見表7、表8。藥物抗病毒作用的病毒感染量為100TCID50
表8.不同濃度藥物對(duì)Hela細(xì)胞的殺傷率(％)及TD50
表9.霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)抗HSV-1病毒作用(ED50)及保護(hù)指數(shù)(PI)
藥物名稱TD50 ED50 PI(＝TD50/ED50)
霞草2 0.15700.000375418.6
病毒唑 0.09920.000625158
表10.霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)抗HSV-2病毒作用(ED50)及保護(hù)指數(shù)(PI)
藥物名稱TD50 ED50 PI(＝TD50/ED50)
霞草提取物(以皂 0.202 0.00075 269.3
苷計(jì)100％)
病毒唑 0.09920.000125793.6
根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果藥物抗HSV-1和/或HSV-2保護(hù)指數(shù)大于100者，定為有效。其中陽性對(duì)照藥及霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)的保護(hù)指數(shù)對(duì)HSV-1、HSV-2均超過100，說明陽性對(duì)照藥病毒唑符合實(shí)驗(yàn)要求。霞草提取物(以皂苷計(jì)100％)對(duì)兩種病毒有良好的抑制作用。
通過以上實(shí)驗(yàn)證明，霞草提取物的較好的抗癌、抗病毒活性，毒副作用小，從而確認(rèn)霞草提取物可以用于制備治療癌癥的藥物組合物，在所述藥物組合物中含有具抗癌活性的霞草提取物，以及藥學(xué)上可以接受的載體。實(shí)驗(yàn)還證明了霞草提取物也可以用于制備抗病毒藥物組合物。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是很明顯的，本發(fā)明從霞草根中提取的含苷提取物，工藝合理，經(jīng)提取、精制而得到的含皂苷提取物，其中皂苷含量在50％以上，經(jīng)進(jìn)一步純化最終可以得到皂苷含量100的霞草提取物。經(jīng)藥效學(xué)與毒理學(xué)試驗(yàn)證明，本發(fā)明霞草提取物具有較好的抗癌、抗病毒活性，毒副作用較小，有效成分明顯，即其中的皂苷，且皂苷含量越高，其他雜質(zhì)越少、可減少服用量，在一定程度上可以減少副作用，有利于保護(hù)藥物的安全性和有效性。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
實(shí)施例一
取霞草10kg，加水90kg，煮沸提取3小時(shí)，濾過，濾液備用，藥渣再加水90kg煮沸提取3小時(shí)，濾過，合并兩次濾液，將合并后的濾液濃縮噴霧干燥即得含有皂苷5％的霞草提取物，即得皂苷含量為5％的具有抗癌活性及抗病毒活性的中藥提取物。將本提取物加水配成相對(duì)密度1.09的稀浸膏，將此稀浸膏過大孔吸附樹脂，先用水洗至無色，將此水洗脫液棄去，再用40％甲醇洗脫至無色，收集此40％乙醇洗脫液，將回收乙醇后的洗脫液濃縮成相對(duì)密度1.16的稠浸膏，將此稠浸膏噴霧干燥，得到含皂苷30％的霞草提取物，即得皂苷含量為30％的具有抗癌活性及抗病毒活性的中藥提取物。
實(shí)施例二
取霞草10kg，加水80kg，煮沸提取2小時(shí)，濾過，濾液備用，藥渣再加水90kg煮沸提取4小時(shí)，濾過，合并兩次濾液，將合并后的濾液濃縮成相對(duì)密度1.26的稀浸膏，加入乙醇至乙醇含量40％，靜置16小時(shí)，取上清液，將此上清液回收乙醇，成相對(duì)密度為1.12的浸膏，將此稀浸膏過大孔吸附樹脂，先用水洗至無色，將此水洗脫液棄去，再用85％乙醇洗脫至無色，收集此85％乙醇洗脫液，將回收乙醇后的洗脫液濃縮成相對(duì)密度1.16的稠浸膏，將此稠浸膏噴霧干燥，得到含皂苷50％的霞草提取物，即得皂苷含量為50％的具有抗癌活性及抗病毒活性的中藥提取物。在此皂苷含量為50％的具有抗癌活性及抗病毒活性的中藥提取物中加4倍水，加熱溶解加入正丁醇萃取3次，每次正丁醇的量與水的量相當(dāng)，合并萃取液，將合并后的萃取液回收正丁醇后干燥，可得皂苷為90％的有抗癌活性及抗病毒活性的中藥提取物。
實(shí)施例三
取霞草10kg，加水100kg，煮沸提取8小時(shí)，濾過，濾液備用，藥渣再加水80kg煮沸提取8小時(shí)，濾過，合并兩次濾液，將合并后的濾液濃縮成相對(duì)密度1.06的稀浸膏，加入乙醇至乙醇含量95％，靜置24小時(shí)，取上清液，將此上清液回收乙醇，成相對(duì)密度為1.05的浸膏，將此稀浸膏過大孔吸附樹脂，先用10％乙醇洗至無色，將此乙醇洗脫液棄去，再用50％乙醇洗脫至無色，收集此50％乙醇洗脫液，將回收乙醇后的洗脫液濃縮成相對(duì)密度1.20的稠浸膏，將此稠浸膏減壓干燥，得到含皂苷70％的霞草提取物，即得皂苷含量為70％的具有抗癌活性及抗病毒活性的中藥提取物。
實(shí)施例四
取霞草10kg，加1％乙醇100kg，煮沸提取5小時(shí)，濾過，濾液備用，藥渣再加1％的乙醇80kg煮沸提取5小時(shí)，濾過，合并兩次濾液，將合并后的濾液濃縮成相對(duì)密度1.06的稀浸膏，將此稀浸膏過大孔吸附樹脂，先用1％乙醇洗至無色，將此乙醇洗脫液棄去，再用95％乙醇洗脫至無色，收集此95％乙醇洗脫液，將回收乙醇后的洗脫液濃縮成相對(duì)密度1.18的稠浸膏，將此稠浸膏冷凍干燥，得到含皂苷30％的霞草提取物，即得皂苷含量為30％的具有抗癌活性及抗病毒活性的中藥提取物。在此皂苷含量30％的具有抗癌活性及抗病毒活性的中藥提取物中加入2倍的水，加熱使溶解，再加入24倍的丙酮，靜置24小時(shí)，收集析出物，晾干，得到含皂苷90％的霞草提取物，即得皂苷含量90％的具有抗癌活性及抗病毒活性的中藥提取物。
實(shí)施例五
取霞草10kg，加乙醇80kg，煮沸提取10小時(shí)，濾過，濾液備用，藥渣再加乙醇80kg煮沸提取10小時(shí)，濾過，合并兩次濾液，將合并后的濾液濃縮至無醇味，干燥得到含皂苷大于40％的霞草提取物，即得皂苷含量為40％的具有抗癌活性及抗病毒活性的中藥提取物。次提取物加水稀釋成相對(duì)密度1.06的稀浸膏，將此稀浸膏過大孔吸附樹脂，先用水洗至無色，將此水洗脫液棄去，再用40％乙醇洗脫至無色，收集此40％乙醇洗脫液，將回收乙醇后的洗脫液濃縮成相對(duì)密度1.30的稠浸膏，將此稠浸膏烘干，得到含皂苷80％的霞草提取物，即得皂苷含量為80％的具有抗癌活性及抗病毒活性的中藥提取物。
實(shí)施例六
取霞草10kg，加50％甲醇100kg，煮沸提取5小時(shí)，濾過，濾液備用，藥渣再加50％的甲醇80kg煮沸提取8小時(shí)，濾過，合并兩次濾液，將合并后的濾液濃縮成相對(duì)密度1.06的稀浸膏，將此稀浸膏過大孔吸附樹脂，先用1％甲醇洗至無色，將此甲醇洗脫液棄去，再用40％甲醇洗脫至無色，收集此40％甲醇洗脫液，將回收甲醇后的洗脫液濃縮成相對(duì)密度1.16的稠浸膏，將此稠浸膏冷凍干燥，得到含皂苷40％的霞草提取物，即得皂苷含量為40％的具有抗癌活性及抗病毒活性的中藥提取物。在此皂苷含量40％的具有抗癌活性及抗病毒活性的中藥提取物中加入2倍的水，加熱使溶解，加入醋酸乙酯萃取3次，每次醋酸乙酯的量與水的量相當(dāng)，合并萃取液，將合并后的萃取液回收醋酸乙酯后烘干，得到含皂苷75％的霞草提取物，即得皂苷含量為75％的具有抗癌活性及抗病毒活性的中藥提取物。
實(shí)施例七
取霞草10kg，加甲醇120kg，煮沸提取3小時(shí)，濾過，濾液備用，藥渣再加甲醇80kg煮沸提取3小時(shí)，濾過，合并兩次濾液，將合并后的濾液回收甲醇濃縮成相對(duì)密度1.26的稠浸膏，烘干即得含皂苷50％的霞草提取物，即得皂苷含量為50％的具有抗癌活性及抗病毒活性的中藥提取物。將此提取物加水稀釋成相對(duì)密度1.06的混合物，過大孔吸附樹脂，先用水洗至無色，將此水洗脫液棄去，再用80％甲醇洗脫至無色，收集此80％甲醇洗脫液，將回收甲醇后的洗脫液濃縮成相對(duì)密度1.21的稠浸膏，將此稠浸膏噴霧干燥，得到含皂苷80％的霞草提取物，即得皂苷含量為80％的具有抗癌活性及抗病毒活性的中藥提取物。在此皂苷含量80％的具有抗癌活性及抗病毒活性的中藥提取物中加入4倍的水，加熱使溶解，加入正丁醇萃取3次，每次正丁醇的量與水的量相當(dāng)，合并萃取液，將合并后的萃取液回收正丁醇后烘干，得到含皂苷100％的霞草提取物，即得皂苷含量為100％的具有抗癌活性及抗病毒活性的中藥提取物。
權(quán)利要求
1、一種具抗癌、抗病毒活性的霞草提取物，其特征在于其中含有5％以上的皂苷。
2、依照權(quán)利要求1所述的具抗癌、抗病毒活性的霞草提取物，其特征在于所述的含皂苷的提取物中，皂苷的含量在10％以上。
3、依照權(quán)利要求2所述的具抗癌、抗病毒活性的霞草提取物，其特征在于所述的含皂苷的提取物中，皂苷的含量在30％以上。
4、依照權(quán)利要求3所述的具抗癌、抗病毒活性的霞草提取物，其特征在于所述的含皂苷的提取物中，皂苷的含量在50％以上。
5、依照權(quán)利要求4所述的具抗癌、抗病毒活性的霞草提取物，其特征在于所述的含皂苷的提取物中，皂苷的含量在80％以上。
6、依照權(quán)利要求1所述的具抗癌、抗病毒活性的霞草提取物的提取方法，其特征在于包括以下步驟
6-1、霞草粗提物的制取
6-1-1、取霞草根自然干燥后粉碎；
6-1-2、用溶劑提??；
6-1-3、提取液減壓濃縮得提取物浸膏，即得霞草粗提物；
6-2、霞草粗提物精制
6-2-1、將霞草粗提物加水制成水混懸液；
6-2-2、過大孔樹脂柱，先用水或1～10％低濃度的乙醇或甲醇洗脫，除去極性溶劑中的雜質(zhì)；
6-2-3、再用20％以上高濃度的乙醇或甲醇洗脫；
6-2-4、收集高濃度醇洗脫液，回收溶劑，干燥，制得含皂苷的霞草提取物；
6-3、含皂苷霞草提取物的純化
用有機(jī)溶劑對(duì)含皂苷霞草提取物進(jìn)行純化；所說的有機(jī)溶劑它選自正丁醇、醋酸乙酯、丙酮-乙醚、氯仿-甲醇-水或石油醚。
7、依照權(quán)利要求6所述的霞草提取物的提取方法，其特征在于在6-1-2步驟中所說的溶劑它選自丙酮、醇類、水或水醇混合溶劑；所說的醇類為甲醇、乙醇、異丙醇等短鏈醇。
8、依照權(quán)利要求6所述的霞草提取物的提取方法，其特征在于所說的霞草粗提物的提取方法包括以下步驟
8-1、用水提取粉碎的霞草根；
8-2、提取液濃縮成相對(duì)密度1.04～1.34的稠浸膏；
8-3、稠浸膏中加入乙醇至乙醇濃度為40～95％；
8-4、靜置，取上清液濃縮成浸膏，即為霞草粗提物。
9、依照權(quán)利要求1或2或3或4或5所述的含皂苷的霞草粗提取物在制備治療癌癥藥物組合物中的用途，其中所述的藥物組合物中含有抗癌活性的霞草提取物，以及藥學(xué)上可以接受的載體。
10、依照權(quán)利要求1或2或3或4或5所述的含皂苷的霞草提取物在制備抗病毒藥物組合物中的用途，其中所述的藥物組合物中含有具抗病毒活性的霞草提取物，以及藥學(xué)上可以接受的載體。
全文摘要
本發(fā)明從霞草(Gypsophila oldhamiana Miq.)根中提取的霞草提取物，經(jīng)提取、精制，其中皂苷含量在5％以上，經(jīng)進(jìn)一步純化最終可得到皂苷含量100％的霞草提取物，工藝合理，操作簡便。經(jīng)藥效學(xué)及毒理學(xué)試驗(yàn)證明，本發(fā)明霞草提取物具有較好的抗癌、抗病毒作用，可用于制備抗癌藥物及抗病毒藥物組合物。該提取物制成的藥物，毒副作用較小，其有效成分明確，服用劑量較少，在一定程度上也可減小毒副作用，更有利于保證藥物的安全性和有效性。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1723951SQ20051004430
公開日2006年1月25日 申請(qǐng)日期2005年7月22日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月22日
發(fā)明者仲英, 左春旭, 劉魯, 王元書, 孫敬勇, 謝硯英, 王菊 申請(qǐng)人:山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所