專利名稱：冷凍式巴氏涂片檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種冷凍式巴氏涂片檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
目前，傳統(tǒng)巴氏涂片技術(shù)的應(yīng)用已有近50年，為世界范圍內(nèi)宮頸癌的防治作出了極其重要的貢獻(xiàn)。它采用的方法是應(yīng)用棉簽及刮板等采樣器在宮頸處采集細(xì)胞樣本，直接涂沫于玻片上并及時(shí)固定后直接進(jìn)行染色。雖然其簡便快捷，成本低廉。但該其仍存在以下缺點(diǎn)1)、細(xì)胞收集不全面，涂片細(xì)胞重疊，應(yīng)用高濃度乙醇或乙醇乙醚混合固定液固定后細(xì)胞收縮明顯，粘液變性固化，染色過程中染色劑不易穿透粘液變性膜，致使粘液包裹的細(xì)胞著色不良，核漿染色欠佳，尤其是涂片較厚，細(xì)胞重疊顯著的區(qū)域細(xì)胞分辨很差，嚴(yán)重影響觀察，易造成漏診誤診；2)、當(dāng)固定的細(xì)胞未能及時(shí)染色處理則細(xì)胞容易變形，后續(xù)染色效果將受到嚴(yán)重影響。為此，雖然醫(yī)學(xué)專家相繼發(fā)明了多種細(xì)胞學(xué)改良技術(shù)，對(duì)于解決傳統(tǒng)巴氏涂片部分缺陷具有一定作用，如TCT、LCT、LPT等技術(shù)，但這些技術(shù)操作復(fù)雜，需要具備特殊設(shè)備及專用耗材，成本高昂，難于普遍推廣，實(shí)際應(yīng)用中具有很大的局限，特別是在進(jìn)行大批量細(xì)胞涂片時(shí)，上述技術(shù)缺陷表現(xiàn)得更為突出。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種成本低廉，細(xì)胞著色良好，操作簡單，實(shí)用性強(qiáng)的冷凍式巴氏涂片檢測(cè)方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案是冷凍式巴氏涂片檢測(cè)方法，包括以下步驟
a)、先用細(xì)胞專用的采樣器在宮頸處采集細(xì)胞樣本；b)、然后將采樣器采集的細(xì)胞樣本涂沫于潔凈的玻片上；c)、再把上述涂沫有細(xì)胞樣本的玻片放置于醋酸乙醇混合固定液中，待玻片上的細(xì)胞樣本被固定后，取出；d)、將上述取出的玻片上的細(xì)胞樣本沉浸于細(xì)胞變性恢復(fù)液中1-5分鐘，取出；e)、再將上述玻片放入冷凍器中冷凍，使細(xì)胞樣本內(nèi)滲入的水份形成冰晶；f)、最后，將經(jīng)冷凍處理的帶細(xì)胞樣本的玻片取出，并在常溫下直接進(jìn)行HE染色或巴氏涂片染色、鏡下觀察診斷。
所述醋酸乙醇混合固定液為含0.1％-5％醋酸的醋酸乙醇混合液。
所述玻片放置于醋酸乙醇混合固定液中15至30分鐘或以上。
所述玻片放入冷凍器內(nèi)冷凍30分鐘以上。
所述冷凍器是電冰箱。
所述變性恢復(fù)液是濃度在0.1％-10％之間的醋酸液。
本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明的冷凍式巴氏涂片檢測(cè)方法，1)、由于經(jīng)固定的帶細(xì)胞的玻片經(jīng)變性恢復(fù)液處理，并在低溫下(零度以下)冰箱內(nèi)速凍，細(xì)胞各成分滲透性明顯增強(qiáng)，因而經(jīng)過上述處理后，附有細(xì)胞的玻片直接進(jìn)入染色劑內(nèi)染色，細(xì)胞著色顯著改善，核漿及細(xì)胞各成分清晰，細(xì)胞與細(xì)胞之間境界清楚，分辨較佳，核漿著色分明，顯著地改善了傳統(tǒng)巴氏涂片細(xì)胞染色不佳的狀態(tài)，即使涂片具有一定的重疊，細(xì)胞的輪角仍然清晰可辨，特別適用于大批量婦檢時(shí)由于細(xì)胞玻片未能及時(shí)處理而長時(shí)間干燥留置后玻片細(xì)胞的修復(fù)處理，對(duì)恢復(fù)變性細(xì)胞形態(tài)及保持良好的染色效果起到重要作用；2)、而使用該技術(shù)無需特殊設(shè)備及耗材，其成本低廉，操作簡單，實(shí)用性強(qiáng)，利于全面推廣，具有很強(qiáng)的應(yīng)用價(jià)值。
具體實(shí)施例方式
冷凍式巴氏涂片檢測(cè)方法，包括以下步驟a)、先用細(xì)胞專用的采樣器在宮頸處采集細(xì)胞樣本；b)、然后將采樣器采集的細(xì)胞樣本涂沫于潔凈的玻片上；c)、再把上述涂沫有細(xì)胞樣本的玻片放置于醋酸乙醇混合固定液中，待玻片上的細(xì)胞樣本被固定后，取出；d)、將上述取出的玻片上的細(xì)胞樣本沉浸于細(xì)胞變性恢復(fù)液中1-5分鐘，取出；e)、再將上述玻片放入冷凍器中冷凍，使細(xì)胞樣本內(nèi)滲入的水份形成冰晶；f)、最后，將經(jīng)冷凍處理的帶細(xì)胞樣本的玻片取出，并在常溫下直接進(jìn)行HE染色或巴氏涂片染色、鏡下觀察診斷。
而醋酸乙醇混合固定液是采用含0.1％-5％以上的醋酸乙醇混合液。玻片放置于醋酸乙醇混合固定液中15至30分鐘或以上。
而經(jīng)細(xì)胞變性恢復(fù)液沉浸玻片再放入冷凍器內(nèi)冷凍30分鐘以上。所述冷凍器是電冰箱。所述變性恢復(fù)液是濃度在0.1％-10％之間的醋酸液，該液體較易穿透變性的粘液及細(xì)胞膜及細(xì)胞核內(nèi)，達(dá)到進(jìn)一步固定，增強(qiáng)粘液及細(xì)胞的滲透性，起到冰凍膨脹性裁體的作用而恢復(fù)細(xì)胞的形態(tài)和促進(jìn)細(xì)胞染色，有利于對(duì)細(xì)胞形態(tài)的觀察。
技術(shù)的原理經(jīng)過醋酸乙醇混合固定液固定后的粘液及細(xì)胞，在這些固定液的作用下起到保持細(xì)胞活時(shí)的良好形態(tài)，其粘液內(nèi)的蛋白分子發(fā)生構(gòu)變，形成一層較為致密的膜狀物粘附并包裹于細(xì)胞的周圍，細(xì)胞固定后細(xì)胞內(nèi)的各種成分亦發(fā)生形態(tài)同步性濃縮構(gòu)變，盡管起到相對(duì)保持細(xì)胞形態(tài)的作用，但細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)成分收縮明顯，變形的粘液分子發(fā)生絞連，致密地封閉在細(xì)胞的周圍，經(jīng)醋酸乙醇混合液固定的細(xì)胞玻片或干燥變性的細(xì)胞玻片經(jīng)變性恢復(fù)液進(jìn)一步處理后，由于變性恢復(fù)液本身具有較強(qiáng)的滲透作用而迅速進(jìn)入粘液及細(xì)胞內(nèi)，在低溫下(零度以下)冰箱內(nèi)速凍，應(yīng)用水性液體在冰體狀態(tài)下體積機(jī)械性膨脹擴(kuò)張的原理，滲透入粘液及細(xì)胞內(nèi)的液體在冷凍狀態(tài)下形成冰晶，在細(xì)胞內(nèi)膨脹直至細(xì)胞膜達(dá)到張力自限時(shí)恢復(fù)細(xì)胞生活時(shí)的形態(tài)及體積，粘液內(nèi)浸入變性恢復(fù)液后在冷凍狀態(tài)下冰晶膨脹于具有一定程度變性絞連的糖蛋白粘液分子之間，致使絞連分子解開絞合，各種細(xì)胞及細(xì)胞成分以及粘液分子布散于恢復(fù)液形成的冰晶之間，形態(tài)上粘液變得松散稀薄，粘液分子與細(xì)胞之間黏附松解，細(xì)胞各成分滲透性明顯增強(qiáng)。經(jīng)過上述處理后，附有細(xì)胞的玻片直接進(jìn)入染色劑內(nèi)染色，細(xì)胞著色顯著改善，核漿及細(xì)胞各成分清晰，細(xì)胞與細(xì)胞之間境界清楚，分辨較佳，核漿著色分明，顯著地改善了傳統(tǒng)巴氏涂片細(xì)胞染色不佳的狀態(tài)，即使涂片具有一定的重疊，但細(xì)胞的輪角仍然清晰可辨，特別適用于大批量婦檢時(shí)由于細(xì)胞玻片未能及時(shí)處理而長時(shí)間干燥留置后玻片細(xì)胞的修復(fù)處理，對(duì)恢復(fù)變性細(xì)胞形態(tài)及保持良好的染色效果起到重要作用。
權(quán)利要求
1.冷凍式巴氏涂片檢測(cè)方法，其特征是，包括以下步驟a)、先用細(xì)胞專用的采樣器在宮頸處采集細(xì)胞樣本；b)、然后將采樣器采集的細(xì)胞樣本涂沫于潔凈的玻片上；c)、再把上述涂沫有細(xì)胞樣本的玻片放置于醋酸乙醇混合固定液中，待玻片上的細(xì)胞樣本被固定后，取出；d)、將上述取出的玻片上的細(xì)胞樣本沉浸于細(xì)胞變性恢復(fù)液中1-5分鐘，取出；e)、再將上述玻片放入冷凍器中冷凍，使細(xì)胞樣本內(nèi)滲入的水份形成冰晶；f)、最后，將經(jīng)冷凍處理的帶細(xì)胞樣本的玻片取出，并在常溫下直接進(jìn)行HE染色或巴氏涂片染色、鏡下觀察診斷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述冷凍式巴氏涂片檢測(cè)方法，其特征是，所述醋酸乙醇混合固定液的濃度為含0.1％-5％醋酸的醋酸乙醇混合液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述冷凍式巴氏涂片檢測(cè)方法，其特征是，所述玻片放置于醋酸乙醇混合固定液中15至30分鐘或以上。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述冷凍式巴氏涂片檢測(cè)方法，其特征是，所述玻片放入冷凍器內(nèi)冷凍30分鐘以上。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述冷凍式巴氏涂片檢測(cè)方法，其特征是，所述冷凍器是電冰箱。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述冷凍式巴氏涂片檢測(cè)方法，其特征是，所述變性恢復(fù)液是濃度在0.1％-10％之間的醋酸液。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種冷凍式巴氏涂片檢測(cè)方法，其包括以下步驟a)先用細(xì)胞專用的采樣器在宮頸處采集細(xì)胞樣本；b)然后將采樣器采集的細(xì)胞樣本涂沫于潔凈的玻片上；c)再把上述涂沫有細(xì)胞樣本的玻片放置于醋酸乙醇混合固定液中，待玻片上的細(xì)胞樣本被固定后，取出；d)將上述取出的玻片上的細(xì)胞樣本沉浸于細(xì)胞變性恢復(fù)液中1－5分鐘，取出；e)再將上述玻片放入冷凍器中冷凍，使細(xì)胞樣本內(nèi)滲入的水分形成冰晶；f)最后，將經(jīng)冷凍處理的帶細(xì)胞樣本的玻片取出，并在常溫下直接進(jìn)行HE染色或巴氏涂片染色、鏡下觀察診斷，因而具有成本低廉，細(xì)胞著色良好，操作簡單，實(shí)用性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61B10/00GK1854709SQ20051003432
公開日2006年11月1日 申請(qǐng)日期2005年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月29日
發(fā)明者毛榮軍 申請(qǐng)人:佛山市順德區(qū)桂洲醫(yī)院