專利名稱：簡(jiǎn)易薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種細(xì)胞學(xué)檢查方法，尤其是涉及可用于婦科體檢、宮頸癌普查及篩查人群中宮頸癌前病變的簡(jiǎn)易薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查方法。
背景技術(shù)：
全世界每年有50萬宮頸癌新發(fā)病例，中國(guó)占1/4并呈上升及年輕化趨勢(shì)。而宮頸癌是人體唯一可以通過篩查早期診斷，查出癌前病變(上皮內(nèi)腫瘤，intraepilialneoplasia)，100％治愈的惡性腫瘤。因此，研究出一種方法簡(jiǎn)便，成本低廉，準(zhǔn)確性、特異性、敏感性高的薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查方法用于普查和體檢，具有重要的臨床意義及應(yīng)用價(jià)值。
傳統(tǒng)的普通巴氏涂片檢查有15％～20％的漏診率，由于取材和制片方法的不同，有80％的細(xì)胞可能被丟失[2]，涂片不均、細(xì)胞堆積、粘液和紅細(xì)胞的影響，造成病變細(xì)胞和病原體不能充分顯示，出現(xiàn)假陰性。而液基細(xì)胞學(xué)檢查是目前國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的陽性檢出率最高、漏診率最低、細(xì)胞涂片質(zhì)量最好、病變成分保存完全的檢查方法。但該方法所采用的設(shè)備和試劑、耗材均較昂貴，在普通醫(yī)院開展起來較難，更不適用于大批量普查和體檢。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種簡(jiǎn)易薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查方法，它主要是通過采用液基細(xì)胞保存液及液基細(xì)胞處理液來實(shí)現(xiàn)的。該方法步驟少、效果好、陽性檢出率高、漏診率低、成本低廉，適用于廣大基層醫(yī)院開展婦科體檢及宮頸癌普查，達(dá)到了有效篩查人群中宮頸癌前病變的目的。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下簡(jiǎn)易薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查方法，其特征在于包括如下步驟A、用宮頸管細(xì)胞刷及刮板采樣后，將收集到細(xì)胞的細(xì)胞刷置于加有液基細(xì)胞保存液的試管中振蕩1分鐘；B、從步驟A的試管中取出細(xì)胞刷，加入基液細(xì)胞處理液4ml振蕩1分鐘，再置于離心機(jī)中以500～800轉(zhuǎn)/分離心3～5分鐘；C、取棄步驟B試管中的上清液，振蕩數(shù)秒鐘，用加樣槍吸取試管中沉淀物樣本(盡量避開絮狀物)，按同一方向涂于清潔載玻片上，并形成薄片，置烤箱內(nèi)5分鐘烘干；D、將烘干后的薄片標(biāo)本用95％(v/v)的乙醇浸泡或噴霧固定5～15分鐘；E、將步驟D固定后的標(biāo)本用自來水洗滌后進(jìn)行巴氏染色或HE染色。
本發(fā)明所述的液基細(xì)胞保存液為2％(v/v)的冰醋酸與1.91％～2.11％(g/v)的苯酚的混合液。
所述液基細(xì)胞保存液的配制方法為取21ml液化酚加蒸餾水1280ml配制成苯酚濃度為1.91％～2.11％(g/v)的苯酚溶液后，再加入26ml冰醋酸，即得濃度為2％(v/v)的冰醋酸和濃度為1.91％～2.11％(g/v)的苯酚混合液。
本發(fā)明所述的液基細(xì)胞處理液為0.8％～1％(v/v)的堿性乙二胺四乙酸二鈉，pH8～8.5。
所述液基細(xì)胞處理液的配制方法為取乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)1g溶于100ml蒸餾水中，再加入8％的氫氧化鈉溶液，將溶液的pH調(diào)至8～8.5即得。
本發(fā)明步驟C所形成的薄片為直徑2cm×4cm的橢圓形區(qū)域。
本發(fā)明簡(jiǎn)易薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查方法的理論依據(jù)1、取樣采用宮頸管細(xì)胞刷及刮板，能全面收集宮頸外口腺鱗移行區(qū)及宮頸管細(xì)胞。
2、液基細(xì)胞保存液根據(jù)子宮頸的病理、生理特點(diǎn)，所取樣本中可能含有粘液和紅細(xì)胞，粘液影響細(xì)胞展開和覆蓋病變細(xì)胞，紅細(xì)胞稀釋病變細(xì)胞干擾閱片。本法使用1.5％～2％(v/v)冰醋酸破壞、溶解紅細(xì)胞，快速滲透到細(xì)胞及各種病原體內(nèi)，對(duì)細(xì)胞和病原體的核蛋白起凝固作用，固定細(xì)胞核及滅活各種病原體；1.91％～2.11％(g/v)苯酚作為防腐殺菌劑，能有效地殺滅霉菌、細(xì)菌、病毒等病原體，保護(hù)工作環(huán)境及工作人員健康。因此本發(fā)明保存液巧妙地應(yīng)用了冰醋酸和苯酚只凝固核蛋白，而不會(huì)凝固細(xì)胞質(zhì)蛋白的作用，避免了上皮細(xì)胞的相互粘附堆積，有利于保存細(xì)胞固定細(xì)胞核。所制標(biāo)本保存2周細(xì)胞無形態(tài)變化。
3、液基細(xì)胞處理液子宮頸粘液是一種糖蛋白，具有蛋白質(zhì)的特性，在水溶液中能緩慢溶解。使用堿性乙二胺四乙酸二鈉可解除細(xì)胞間聯(lián)結(jié)，分散細(xì)胞，溶解纖維蛋白和血紅蛋白等蛋白質(zhì)微粒，使涂片背景清晰透明、細(xì)胞分散、分布均勻。同時(shí)，該堿性溶液還起到中和保存液中的酸，使pH保持在7左右，有利于染色，保證染色效果的作用。
本發(fā)明的有益效果表現(xiàn)在
1、采用宮頸管細(xì)胞刷及刮板，能夠最大限度地在宮頸外口、腺鱗移行區(qū)及宮頸管部位準(zhǔn)確全面地取中病變細(xì)胞，并完全地保留標(biāo)本，防止丟失。
2、細(xì)胞在液基中，經(jīng)振蕩器充分振蕩，病變細(xì)胞均勻分布，隨機(jī)取樣涂片，提高病變細(xì)胞的檢出率。
3、在制片過程中巧妙地應(yīng)用了冰醋酸和苯酚只凝固核蛋白，而對(duì)細(xì)胞蛋白質(zhì)不凝固的作用，不會(huì)導(dǎo)致上皮細(xì)胞相互粘附堆積，不凝固粘液，不需要作繁瑣的處理，能保證細(xì)胞形態(tài)完好，不變性，細(xì)胞展開良好，粘液和紅細(xì)胞能有效祛除，涂片背景清潔干凈，便于輕松閱片，易于識(shí)別病變細(xì)胞，從而提高病變細(xì)胞的陽性檢出率，減少漏診。
4、本發(fā)明成本低廉，方法簡(jiǎn)便，易于普及推廣，適用于基層醫(yī)院開展細(xì)胞學(xué)檢查。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1方法步驟1、婦科醫(yī)師使用刮板刮取樣本洗入液基細(xì)胞保存液中，同時(shí)使用宮頸管細(xì)胞刷，插入宮頸管外口，按順時(shí)針旋轉(zhuǎn)7～10圈后取出，將細(xì)胞刷插入加有4ml液基細(xì)胞保存液的試管中不取出，送檢。液基細(xì)胞學(xué)保存液為2％(V/V)的冰醋酸與2％(g/V)的苯酚混合溶液。
2、病理醫(yī)師將盛標(biāo)本的試管置震蕩器上振蕩1分鐘，充分洗滌后棄取細(xì)胞刷，加入4ml 1％的堿性乙二胺四乙酸二鈉水溶液)，振蕩1分鐘，500～800轉(zhuǎn)/分離心3～5分鐘，取棄上清液，用加樣槍吸取沉淀物樣本，吸取時(shí)盡量避開絮狀物，按同一方向涂于清潔載玻片上，涂成直徑2cm×4cm的橢圓形區(qū)域。即涂成肉眼可見的半透明稍微混濁的薄片，置烤箱內(nèi)5分鐘烘干。再用95％乙醇浸泡或噴霧固定5～15分鐘，自來水洗數(shù)次后巴氏染色或HE染色。
實(shí)施例2對(duì)比試驗(yàn)經(jīng)數(shù)百例臨床研究，其敏感性為91.6％，陰性預(yù)測(cè)值達(dá)到98.7％。陽性檢出率高于普通巴氏涂片(p＜0.05)因此適用于大批量婦科普查、體檢和基層醫(yī)院的細(xì)胞學(xué)檢查，其低廉的收費(fèi)可降低患者負(fù)擔(dān)。見表1、表2。
表1 209例簡(jiǎn)易液基細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)果與普通巴氏涂片檢查結(jié)果比較

表2 涂片質(zhì)量比較

權(quán)利要求
1.簡(jiǎn)易薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查方法，其特征在于包括如下步驟A、用宮頸管細(xì)胞刷及刮板采樣后，將收集到細(xì)胞的細(xì)胞刷置于加有液基細(xì)胞保存液的試管中振蕩1分鐘；B、從步驟A的試管中取出細(xì)胞刷，加入基液細(xì)胞處理液振蕩1分鐘，再置于離心機(jī)中以500～800轉(zhuǎn)/分離心3～5分鐘；C、取棄步驟B試管中的上清液，用加樣槍吸取試管中沉淀物樣本，按同一方向涂于清潔載玻片上，并形成薄片，置烤箱內(nèi)5分鐘烘干；D、將烘干后的薄片標(biāo)本用95％的乙醇浸泡或噴霧固定5～15分鐘；E、將步驟D固定后的標(biāo)本用自來水洗滌后進(jìn)行巴氏染色或HE染色。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的簡(jiǎn)易薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查方法，其特征在于所述的液基細(xì)胞保存液為2％的冰醋酸與1.91％～2.11％的苯酚的混合液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的簡(jiǎn)易薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查方法，其特征在于所述液基細(xì)胞保存液的配制方法為取21ml液化酚加蒸餾水1280ml配制成苯酚濃度為1.91％～2.11％的苯酚溶液后，再加入26ml冰醋酸，即得濃度為2％的冰醋酸和濃度為1.91％～2.11％的苯酚混合液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的簡(jiǎn)易薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查方法，其特征在于所述的液基細(xì)胞處理液為0.8％～1％、pH8～8.5的堿性乙二胺四乙酸二鈉。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種適用于婦科體檢、宮頸癌普查及篩查人群中宮頸癌前病變的簡(jiǎn)易薄層液基細(xì)胞學(xué)檢查方法，步驟包括用宮頸管細(xì)胞刷及刮板收集樣本、樣本置于液基細(xì)胞保存液中、加入基液細(xì)胞處理液、振蕩、離心分離、取棄上清液、加樣槍吸取沉淀物樣本、涂片、薄片烘干、95％的乙醇浸泡或噴霧固定、洗滌、染色。本發(fā)明方法簡(jiǎn)便、步驟少、陽性檢出率高、漏診率低、成本低廉，能有效清除子宮頸細(xì)胞學(xué)檢查標(biāo)本中的紅細(xì)胞、粘液等干擾成分，制片效果優(yōu)良。
文檔編號(hào)C12Q1/02GK1967196SQ20061002185
公開日2007年5月23日 申請(qǐng)日期2006年9月14日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月14日
發(fā)明者邱瑞成 申請(qǐng)人:綿竹市人民醫(yī)院