專(zhuān)利名稱(chēng)：抗破傷風(fēng)免疫血漿及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物制品原料及其制備方法。具體涉及一種用于生產(chǎn)注射用人破傷風(fēng)免疫球蛋白的特異性免疫血漿及其制備方法。
背景技術(shù)：
破傷風(fēng)主要是由于破傷風(fēng)桿菌通過(guò)破損的皮膚和黏膜(如傷口、骨折、燒傷、木刺或銹針刺傷等)而侵入人體，并在傷口深部缺氧環(huán)境中生長(zhǎng)繁殖，產(chǎn)生大量破傷風(fēng)桿菌外毒素作用于神經(jīng)系統(tǒng)，引起的全身特異性感染。此類(lèi)破傷風(fēng)也叫傷后破傷風(fēng)，其潛伏期不規(guī)律，一般5～10天，個(gè)別達(dá)20天以上，通常創(chuàng)傷部位越靠近神經(jīng)中樞，潛伏期愈短，病情也愈重；此外還有一種特殊的破傷風(fēng)——新生兒破傷風(fēng)，是由于新生兒斷臍所致，俗稱(chēng)臍風(fēng)、撮口，因其常在斷臍后7日左右發(fā)病，故又稱(chēng)“七日風(fēng)”。
破傷風(fēng)桿菌是一種革蘭氏陽(yáng)性厭氧芽孢桿菌，廣泛存在于土壤和草食動(dòng)物的糞便中，對(duì)環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。與其他病原菌不同，破傷風(fēng)桿菌或其產(chǎn)生的外毒素在傷口均不產(chǎn)生明顯的病理改變，它是通過(guò)分泌外毒素并擴(kuò)散至全身而導(dǎo)致發(fā)病，其外毒素對(duì)神經(jīng)有特別的親和力，經(jīng)吸收后分布于脊髓、腦干等處。因其產(chǎn)生的外毒素毒力強(qiáng)，發(fā)作快而易危及生命，因此必須及時(shí)治療。馬血清破傷風(fēng)抗毒素(Tetanus Antitoxin，TAT)和人破傷風(fēng)免疫球蛋白(Human TetanusImmunglobulin，TIG)能預(yù)防創(chuàng)傷后破傷風(fēng)的發(fā)生，在給患者注射后，患者體內(nèi)立即獲得了抗破傷風(fēng)的抗體，能特異的中和破傷風(fēng)毒素，使其失去毒性作用。
馬血清破傷風(fēng)抗毒素是采集經(jīng)破傷風(fēng)類(lèi)毒素免疫馬所得的血漿，經(jīng)胃酶消化后純化制成的液體抗毒素球蛋白制劑。人類(lèi)應(yīng)用馬血清抗毒素防治破傷風(fēng)歷史已近百年，在我國(guó)使用也長(zhǎng)達(dá)半個(gè)多世紀(jì)，該方法成功挽救了無(wú)數(shù)人的生命，但馬血清蛋白對(duì)人體有很強(qiáng)的過(guò)敏原性，故馬血清抗毒素常常引起下列兩類(lèi)過(guò)敏反應(yīng)一是過(guò)敏性休克，即注射過(guò)程或注射后數(shù)分鐘至一小時(shí)內(nèi)，患者突然感到胸悶、氣急、脈搏細(xì)速、血壓下降，發(fā)冷，直至神志昏迷。重者搶救不及，可迅速死亡。此系I型過(guò)敏反應(yīng)，即人體曾注射或接觸過(guò)馬血清；二是血清病(Serum Sikness)，即注射TAT后1-2周出現(xiàn)蕁麻疹、發(fā)熱、淋巴結(jié)腫大，臉部浮腫，偶有蛋白尿、嘔吐及關(guān)節(jié)疼痛等。有的可延時(shí)很長(zhǎng)，可能發(fā)展成過(guò)敏性腦炎及其他神經(jīng)炎。此系III型過(guò)敏反應(yīng)。因此使用TAT時(shí)必須作皮試，皮試陰性者，注射時(shí)仍有可能發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)。大量臨床資料表明，TAT引起過(guò)敏反應(yīng)率為5％-30％，其中約1/10萬(wàn)的致死率。為此，上世紀(jì)60年代歐美各國(guó)相繼研制出TIG用于臨床，并逐漸取代TAT。
人破傷風(fēng)免疫球蛋白是采集經(jīng)乙肝疫苗免疫后再經(jīng)破傷風(fēng)類(lèi)毒素(Tetanus Toxoid，Td)免疫的供血漿者中具有高效價(jià)破傷風(fēng)抗體的血漿，經(jīng)低溫乙醇分離法提純，并經(jīng)病毒滅活處理的特異免疫球蛋白，用于防治破傷風(fēng)。目前，人破傷風(fēng)免疫球蛋白已廣乏應(yīng)用于臨床并逐漸取代TAT。由于TIG是人源性產(chǎn)品，人體接種后不會(huì)發(fā)生超敏反應(yīng)，作用安全，在體內(nèi)留存時(shí)間長(zhǎng)，預(yù)防和治療效果都優(yōu)于馬血清。該類(lèi)產(chǎn)品尤其適用于對(duì)馬血清嚴(yán)重過(guò)敏者。
作為人破傷風(fēng)免疫球蛋白生產(chǎn)原料的破傷風(fēng)免疫血漿，尤其是高效價(jià)的免疫血漿無(wú)疑處于舉足輕重的地位。由于免疫程序不盡合理、病毒滅活工藝落后加上血源安全性得不到保障等原因，導(dǎo)致國(guó)內(nèi)破傷風(fēng)免疫血漿大多存在效價(jià)低、安全性難以保證等諸多不足，優(yōu)質(zhì)破傷風(fēng)免疫血漿的生產(chǎn)能力十分有限，已成為了制約破傷風(fēng)人免疫球蛋白產(chǎn)量的主要瓶頸。
在血漿的病毒滅活方面，目前國(guó)內(nèi)血液制品廠(chǎng)家大多采用以下幾種，然而單一滅活法均不能得到令人滿(mǎn)意的效果比如BMM膜法能有效除去絕大部分病毒，但其在處理大分子量樣品時(shí)易堵塞，并且不能保證完全去除B19病毒，缺乏經(jīng)濟(jì)實(shí)用性；干熱處理法能有效滅活脂包膜和非脂包膜病毒，但對(duì)B19病毒無(wú)效，并且在溫度控制和產(chǎn)品質(zhì)量方面有很高要求；酸孵放法也僅適用于丙種球蛋白。S/D法對(duì)脂包膜病毒的滅活很有效，相對(duì)來(lái)說(shuō)滅活病毒效果較徹底，但近年有報(bào)道只用S/D方法進(jìn)行病毒滅活處理的血液制品可傳播甲型肝炎，因該法對(duì)非包膜病毒無(wú)效。而紫外照射法能有效滅活非脂包膜病毒，我們將S/D法與紫外照射法進(jìn)行有機(jī)結(jié)合，取得了十分滿(mǎn)意的效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)國(guó)內(nèi)現(xiàn)有抗破傷風(fēng)免疫血漿效價(jià)低、非脂包膜病毒難以完全除去等不足提供一種效價(jià)高、安全性好的抗破傷風(fēng)免疫血漿，及該血漿的制備方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案是一種用于生產(chǎn)人破傷風(fēng)免疫球蛋白的免疫血漿抗破傷風(fēng)抗體效價(jià)≥12國(guó)際單位/毫升(IU/ml)；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT賴(lài)氏法)≤25單位；破傷風(fēng)表面抗原(使用敏感度為1ng/ml以下的試劑盒檢測(cè))陰性；梅毒檢查陰性；HIV-1、HIV-2抗體測(cè)定陰性；HCV抗體測(cè)定陰性；血漿蛋白含量≥6％(g/ml)。
一種抗破傷風(fēng)免疫血漿的制備方法，按單采血漿技術(shù)規(guī)程進(jìn)行，選擇身體健康、符合國(guó)家單采血漿獻(xiàn)漿標(biāo)準(zhǔn)的獻(xiàn)血員，經(jīng)乙型肝炎疫苗免疫后，再以破傷風(fēng)類(lèi)毒素進(jìn)行免疫，其免疫程序?yàn)槭状巫⑸淦苽L(fēng)類(lèi)毒素0.5ml，間歇6-8周再進(jìn)行第二次注射0.5ml，待被免疫獻(xiàn)血員體內(nèi)抗抗破傷風(fēng)抗體達(dá)12IU/ml以上時(shí)，按照衛(wèi)生部頒發(fā)的“單采血漿術(shù)規(guī)程”對(duì)獻(xiàn)血員實(shí)行血漿單采術(shù)。采用S/D病毒滅活法與紫外照射法相結(jié)合的方式對(duì)血漿進(jìn)行滅菌，無(wú)菌塑料血袋分裝，采集6小時(shí)內(nèi)-20℃以下速凍，并在-10℃下儲(chǔ)存。按照2005版藥典三部中對(duì)血液制品原料血漿規(guī)程對(duì)上述產(chǎn)品進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)。所有指標(biāo)全部合格后才在規(guī)定溫度下運(yùn)往生產(chǎn)廠(chǎng)家。
所使用的破傷風(fēng)類(lèi)毒素的效價(jià)≥2.5IU/支。
本發(fā)明的抗破傷風(fēng)免疫血漿具有如下優(yōu)點(diǎn)1.對(duì)血源信息全部采用計(jì)算機(jī)管理，公司與單采血漿站進(jìn)行了微機(jī)聯(lián)網(wǎng)，在掌握各個(gè)獻(xiàn)血員具體情況的基礎(chǔ)上制定出合理的免疫程序及血漿采集周期，與國(guó)內(nèi)外同類(lèi)產(chǎn)品比較，該原料血漿中具有免疫球蛋白效價(jià)高，單個(gè)獻(xiàn)漿員可獻(xiàn)漿時(shí)間長(zhǎng)，總體獻(xiàn)漿量大等特點(diǎn)，免疫群體90％以上破傷風(fēng)免疫球蛋白效價(jià)高于12IU/ml，持續(xù)時(shí)間超過(guò)18個(gè)月，其混合破傷風(fēng)特免血漿的效價(jià)平均可達(dá)到20IU/ml以上。
2.單采血漿站均采用全套進(jìn)口的美國(guó)HAEMONETICS公司的PCS全自動(dòng)單采血漿機(jī)和先進(jìn)檢測(cè)儀器。原料血漿經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的檢測(cè)程序后進(jìn)行無(wú)菌分裝，能很好地保證血漿質(zhì)量。
3.我們?cè)诒容^了S/D病毒滅活法、BMM膜法、干熱處理法與紫外線(xiàn)/光敏物質(zhì)滅活法的優(yōu)缺點(diǎn)后，制定出了改良S/D病毒滅活方法，采用有機(jī)溶劑和表面活性劑進(jìn)行協(xié)同處理，并結(jié)合紫外線(xiàn)照射法，能有效除去有傳染HIV，HBV和HCV等脂包膜病毒及HAV和B19等非脂包膜病毒。此方法具有溫和、生產(chǎn)程序較簡(jiǎn)單、技術(shù)容易掌握的優(yōu)點(diǎn)，而且對(duì)血漿制品不會(huì)產(chǎn)生任何不良影響，保持了血漿成份的天然屬性。多次小試及中試證明該工藝基本穩(wěn)定，S/D殘留量達(dá)到國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品的各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)已達(dá)到甚至超過(guò)OctapharmaAG公司同類(lèi)產(chǎn)品。
4、該發(fā)明生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，便于推廣應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式
1、按單采血漿技術(shù)規(guī)程進(jìn)行，選擇身體健康、符合國(guó)家單采血漿獻(xiàn)漿標(biāo)準(zhǔn)的獻(xiàn)血員，經(jīng)乙型肝炎疫苗免疫后，再以破傷風(fēng)類(lèi)毒素進(jìn)行免疫，其免疫程序?yàn)槭状巫⑸淦苽L(fēng)類(lèi)毒素0.5ml，隔5周后再注射0.5ml。
2、待被免疫獻(xiàn)血員體內(nèi)抗破傷風(fēng)抗體達(dá)12IU/ml以上時(shí)，采用美國(guó)HAEMONETICS公司的PCS全自動(dòng)單采血漿機(jī)完成采漿，每次每人份采漿500-600ml，在此過(guò)程中加入4％注射用枸櫞酸鈉(C6H5Na3O7·2H2O)作抗凝劑，所用抗凝劑無(wú)菌無(wú)熱源且不含防腐劑的，pH7.2-7.6。在10～20℃進(jìn)行離心分出血漿，將紅細(xì)胞還輸給獻(xiàn)血員。由此得到抗破傷風(fēng)免疫血漿，獻(xiàn)血員體內(nèi)破傷風(fēng)抗體的含量越高，所采集的免疫血漿質(zhì)量越好。
3、在無(wú)菌凈化室內(nèi)采用改良S/D病毒滅活法對(duì)血漿進(jìn)行滅菌采用有機(jī)溶劑和表面活性劑進(jìn)行協(xié)同處理，用于滅活血漿制品中的脂包膜病毒如HIV，HBV和HCV等，結(jié)合紫外照射法以滅活血漿制品中的非脂包膜病毒如HAV，B19等4、采用無(wú)菌、無(wú)熱原塑料血袋分裝，采集6小時(shí)內(nèi)-20℃以下速凍，并在-10℃下儲(chǔ)存。按照2005版藥典三部中對(duì)血液制品原料血漿規(guī)程對(duì)上述產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，本發(fā)明的原料血漿能達(dá)到以下指標(biāo)外觀(guān)淡黃色或黃色，無(wú)纖維蛋白析出，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT賴(lài)氏法)≤25單位；破傷風(fēng)表面抗原(使用敏感度為1ng/ml以下的試劑盒檢測(cè))陰性；梅毒檢查陰性；HIV-1、HIV-2抗體測(cè)定陰性；HCV抗體測(cè)定陰性。血漿蛋白含量≥6％(g/ml)；抗破傷風(fēng)抗體效價(jià)≥12IU/ml，液體血漿在2-8℃運(yùn)輸，冰凍血漿于-15℃下運(yùn)輸。
權(quán)利要求
1.一種從健康獻(xiàn)漿員體內(nèi)采得的抗破傷風(fēng)免疫血漿，其特征在于所述血漿中抗破傷風(fēng)抗體含量在12國(guó)際單位/毫升以上。
2.一種抗破傷風(fēng)免疫血漿的制備方法，其特征在于用破傷風(fēng)類(lèi)毒素免疫健康獻(xiàn)漿員，待獻(xiàn)漿員體內(nèi)抗破傷風(fēng)抗體達(dá)到12國(guó)際單位/毫升以上時(shí)對(duì)獻(xiàn)漿員實(shí)行血漿單采術(shù)，采用S/D病毒滅活法與紫外照射法相結(jié)合的方式對(duì)血漿進(jìn)行滅菌，無(wú)菌塑料血袋分裝，采集6小時(shí)內(nèi)-20℃下速凍，并在-10℃下儲(chǔ)存。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗破傷風(fēng)免疫血漿的制備方法，其特征在于破傷風(fēng)類(lèi)毒素的免疫程序?yàn)槭状巫⑸淦苽L(fēng)類(lèi)毒素0.5ml，隔4周后再注射0.5ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗破傷風(fēng)免疫血漿的制備方法，其特征在于所采用的病毒滅活方法為S/D病毒滅活法與紫外照射法相結(jié)合，該方法能有效除去HIV、HBV及HCV等脂包膜病毒和HAV、B19等非脂包膜病毒。此方法對(duì)血漿制品不會(huì)產(chǎn)生任何不良影響，保持了血漿成份的天然屬性。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種抗破傷風(fēng)免疫血漿及其該免疫血漿的制備方法。通過(guò)對(duì)健康獻(xiàn)漿員進(jìn)行破傷風(fēng)類(lèi)毒素免疫，待獻(xiàn)血員體內(nèi)抗體達(dá)每毫升12國(guó)際單位以上時(shí)，對(duì)獻(xiàn)漿員施行血漿單采術(shù)。采得的免疫血漿經(jīng)常規(guī)檢測(cè)后凍存。用本發(fā)明方法制得的免疫血漿具有高效價(jià)、高特異性、高度安全以及在人體內(nèi)持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)等優(yōu)勢(shì)，延長(zhǎng)了傷者的被保護(hù)期，增加了免疫預(yù)防效果。
文檔編號(hào)A61P31/04GK1748710SQ200510032060
公開(kāi)日2006年3月22日 申請(qǐng)日期2005年8月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月29日
發(fā)明者鄭程遠(yuǎn), 周祖岳, 李少波, 周松華 申請(qǐng)人:湖南綠十字景達(dá)生物原料有限公司