專利名稱：一種能增強畜禽免疫功能的獸藥的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種獸藥，特別是一種能增強畜禽免疫功能的獸藥。
背景技術(shù)：
隨著我國畜牧養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，畜禽傳染病已成為困擾畜牧業(yè)的一大難題。畜禽免疫失敗、免疫力低下，常導致畜禽疾病復雜多變，特別是幼齡畜禽發(fā)病率和死亡率逐年增加。老病未除新病又不斷出現(xiàn)，如雞的傳染性法氏囊病和豬的圓環(huán)病毒病均可使機體的免疫系統(tǒng)遭到破壞，導致機體反復發(fā)病反復治療反復感染，用藥量增加，提高了養(yǎng)殖業(yè)的成本。單一感染越來越少，混合感染的疾病越來越多。畜禽消化道疾病也不斷發(fā)生，引起飼料利用率降低，生長緩慢，料耗增加，出欄時間延長。如雞的球蟲病導致雞的腸道損傷出血下痢，引起雞的腸炎和免疫力下降。雖然使用其他藥物能使該病得到了控制和改善，但治標不治本，只能控制病情，復發(fā)率較高且導致藥物殘留，嚴重影響了肉蛋食品的質(zhì)量和衛(wèi)生。腸炎(病毒性、細菌性、霉菌性、寄生蟲性)是動物的常發(fā)病、多發(fā)病，用于治療單純性腸炎的藥物很多，也多有很好的療效，但動物的腸炎常常反復發(fā)作或混合發(fā)作，造成畜禽腸道損傷嚴重，加之反復使用抗生素也是治療效果不佳，病程冗長，甚至愈后不良，對畜牧業(yè)造成巨大損失。目前，用于腸道損傷修復的藥物很少見到，僅有一些腸道粘膜保護劑的應(yīng)用，但其療效并不明顯。因此，尋找和制備具有提高免疫功能、縮短療程、降低藥物的毒副作用和藥物殘留的獸藥產(chǎn)品十分必要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種能增強畜禽免疫功能的獸藥，它采用既治標又治本的方法，利用生化制劑增強機體免疫力，它具有療效高、無耐藥性、無配伍禁忌、無毒、無殘留，符合國際獸藥潮流。
本發(fā)明的技術(shù)方案是一種能增強畜禽免疫功能的獸藥，其特征是它是每1000ml含α-甘露聚糖肽500-5000mg的溶液。
所述的溶液是將優(yōu)選α-溶血性鏈球菌33#菌種進行太空搭載，經(jīng)過太空誘變精心選育的優(yōu)良菌珠作為生產(chǎn)菌種，經(jīng)一級發(fā)酵和二級發(fā)酵，生產(chǎn)甘露聚糖肽發(fā)酵液，將發(fā)酵液提純過濾后，加適量香精、矯味劑溶解配制，攪拌均勻后再過濾，灌裝封口，熱壓滅菌后的發(fā)酵原液。
所述的溶液中含每1000ml含黃芪多糖10-20g。
所述的溶液中每1000ml含左旋咪唑1.25-37.5g。
本發(fā)明的特點是由于本發(fā)明在α-溶血鏈球菌生長規(guī)律的基礎(chǔ)上，選定較合適生長時期的菌種，采用平皿生長的菌落、浸入其它物質(zhì)中的菌懸液、帶菌的砂土等方法，于2002年3月25日搭載“神舟三號”宇宙飛船。在太空軌道(近地點高度200公里、遠地點高度350公里)進行了6天零18小時的在軌飛行。太空的特殊條件主要體現(xiàn)為微重力、高真空、高輻射、交變磁場等特殊環(huán)境。在外層空間飛行的菌種被置于一個與地球上的生態(tài)環(huán)境完全不同的環(huán)境中，主要包括來自磁場俘獲的電子、質(zhì)子及低能重粒子；來自銀河系的宇宙射線如質(zhì)子、粒子及更重的高能重粒子；來自太陽磁暴的質(zhì)子及重粒子等。這些粒子作用于微生物細胞核中的DNA雙鏈結(jié)構(gòu)，可導致雙鏈斷裂。微重力、高真空環(huán)境可使DNA的堿基序列發(fā)生重組，即基因組的重組和變異。變異后產(chǎn)生的新菌株，其形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化反應(yīng)、代謝產(chǎn)物、遺傳性狀及蛋白表達、中試生產(chǎn)指標等均會發(fā)生不同程度的變化。在宇宙飛船返回地面后，經(jīng)過進一步篩選，僅優(yōu)選出其中0.2％的正變異且遺傳特性穩(wěn)定的菌株，經(jīng)培育制成生產(chǎn)菌種。這種經(jīng)航天搭載誘變后選育出的菌種已經(jīng)在在2003年12月29日由中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，編號為CGMCCNo.1082。(見附頁)特別是α-溶血鏈球菌D33菌株經(jīng)太空搭載誘變，地面上的篩選、分離和純化后，選育出發(fā)酵單位更高、所分泌的甘露聚糖肽含量更高的高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)菌株T33株。實驗及中試生產(chǎn)結(jié)果表明，經(jīng)空間誘變后的新型太空菌種在遺傳特性上穩(wěn)定，有較強的生產(chǎn)適應(yīng)性，由其發(fā)酵產(chǎn)生的甘露聚糖肽含量提高，發(fā)酵含量比對照組產(chǎn)物含量平均高出三倍以上，發(fā)酵周期大大縮短。該菌株經(jīng)培養(yǎng)、發(fā)酵、提純及精制等高科技手段制備而成的口服液對治療畜禽的消化道疾病有顯著療效。
藥理及作用機理α-甘露聚糖肽進入腸道以后被水解為兩部分，即甘露聚糖(低聚甘露糖)和堿性多肽。因為低聚甘露糖難以被胃腸吸收并且可以促進腸道內(nèi)有益菌(雙歧桿菌和乳酸菌)的生長繁殖，所以水解后生成的低聚甘露糖會直接進入大腸被有益菌利用。α-甘露聚糖肽即通過這兩種水解產(chǎn)物發(fā)生作用。
甘露聚糖分子中含有磷酸成分。研究表明甘露聚糖中的磷酸含量較高時，對結(jié)合病原菌是不利的，但對免疫調(diào)節(jié)功能則是重要的。試驗證明低聚甘露糖對巨嗜細胞和單核細胞有積極影響，增強其吞噬作用；提高血清中溶菌酶水平；刺激腫瘤壞死因子數(shù)(TNF)、白細胞介素(IL)、干擾素(IFN)和NO水平升高。TNF能抑制腫瘤細胞；IL和IFN是具有免疫活性的內(nèi)源性肽，兩者都可以激活或調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答中心；NO由巨嗜細胞產(chǎn)生，而NO具有直接殺傷腫瘤細胞的作用。
降低霉菌毒素的免疫抑制作用。
霉菌毒素由需氧菌產(chǎn)生，可以產(chǎn)生很強的毒副作用，是動物營養(yǎng)的最大挑戰(zhàn)之一，而低聚甘露糖或者分解后可以產(chǎn)生低聚甘露糖的物質(zhì)可以很好的結(jié)合霉菌毒素。Diaz(1999)在奶牛精料混合物中添加500g/T的甘露聚糖可以使奶中的黃曲霉素水平下降，從而減少霉菌素對人和動物的毒副作用，降低霉菌素的免疫抑制作用。
肽不僅是機體蛋白質(zhì)代謝的底物，而且還具有其他重要的生物學作用。α-甘露聚糖肽水解產(chǎn)生的堿性多肽能作用于革蘭氏陽性菌細胞成分-肽聚糖，切斷連接N-乙肽葡胺和N-乙肽胞壁酸的聚糖鏈，喪失其堅韌性，細菌發(fā)生低滲透型的裂解，從而殺傷細菌。肽還有促進巨嗜細胞的吞噬作用，促進淋巴細胞和脾細胞的增殖作用，從而增強機體免疫力。
黃芪多糖可促進機體的抗體生成，使抗體形成細胞數(shù)(即溶血空斑數(shù))和溶血測定值顯著增加，使血清免疫球蛋白IgA、IgM、lgG水平(包括抗體分泌細胞及T、B淋巴細胞和NK細胞)明顯增高。黃芪多糖能增加體內(nèi)巨噬細胞數(shù)量，增強巨噬細胞吞噬功能。黃芪多糖還能促進體內(nèi)淋巴細胞轉(zhuǎn)化，提高白細胞滲出干擾素的能力，提高免疫球蛋白的含量，抑制病毒的繁殖。
左旋咪唑主要作用于T淋巴細胞，同時誘生干擾素，增強單核細胞的趨化和吞噬作用，激活巨噬細胞，調(diào)控B細胞產(chǎn)生抗體的作用。
本發(fā)明增強肉雞免疫力試驗1.試驗地點、時間西北農(nóng)林科技大學教學實驗基地，2004年7-8月。
2.試驗動物及分組種雞場自繁AA肉雞，健雛7200只，共4棟雞舍，每棟雞舍作為一個試驗組，前3組在疫苗接種前3天和免疫后3天，分別飲用α-甘露聚糖肽溶液(含量為每1000ml∶500mg)，α-甘露聚糖肽(含量為每1000ml∶500g)+黃芪多糖溶液含量為每1000ml∶10g，α-甘露聚糖肽(含量為每1000ml∶500g)+左旋咪唑溶液含量為每1000ml∶1.25g，并依次名為A、B、C組，第4組只做上述疫苗的常規(guī)免疫，為D組。
3.飼養(yǎng)管理各組均按統(tǒng)一供應(yīng)的飼料，按相同標準飼養(yǎng)飲喂飼養(yǎng)管理。
4.疫苗免疫方案實驗雞群的四個實驗組肉雞在7日齡同時進行新城疫VI系疫苗飲水免疫，劑量為市售標示劑量，即每只1頭份。同一試驗雞群，14日齡均用禽流感重組雞痘病毒載體活疫苗(H5亞型滅活疫苗)同時注射免疫，免疫劑量為市售標示劑量，即每只1頭份。
5.抗體檢測方案與方法(1)新城疫(ND)免疫抗體監(jiān)測4個組在新城疫免疫后每隔3天每組隨機抽樣20只采血，連續(xù)二次采樣，按農(nóng)業(yè)部實驗技術(shù)操作規(guī)范進行新城疫血凝抑制抗體(HI)檢測。
(2)禽流感抗體檢測4個組在14日齡免疫后每隔3天每組隨機抽樣20只采血，連續(xù)二次采樣，按農(nóng)業(yè)部實驗技術(shù)操作規(guī)范進行禽流感血凝抑制抗體(HI)檢測。
6.試驗結(jié)果與分析表1.新城疫血凝抑制抗體(HI)抗體檢測結(jié)果


表2.禽流感血凝抑制抗體(HI)抗體檢測結(jié)果

由以上的實驗結(jié)果可以看出，雞只飲用α-甘露聚糖肽溶液，α-甘露聚糖肽復方黃芪多糖溶液，α-甘露聚糖肽復方左旋咪唑溶液均可明顯提高新城疫和禽流感血凝抑制抗體(HI)滴度，與對照組相比在免疫后的前三天即能產(chǎn)生較高的抗體水平，并持續(xù)升高。三個試驗組中以復方溶液效果好，在復方溶液中，以α-甘露聚糖肽復方黃芪多糖溶液的效果最為顯著。
7.結(jié)論(1)本發(fā)明使機體抗體上升快速，產(chǎn)生抗體滴度高，抗體較為均勻且維持較高的水平，其免疫增效作用明顯。
(2)本發(fā)明可用于預防病毒病新城疫、禽流感感染的配合用藥，提高治療效果，縮短療程，減少損失。
(3)可用于這些突發(fā)性、危害嚴重疾病的預防治療，特別是在臨床發(fā)病后的緊急免疫接種用藥上意義重大，推廣應(yīng)用價值很高。
經(jīng)大量的研究實驗表明，經(jīng)太空搭載菌種生產(chǎn)出的口服液具有1.顯著的免疫增效作用本發(fā)明可有效激活畜禽免疫系統(tǒng)的機能及其對抗原的反應(yīng)能力，提高畜禽機體的抗體水平和免疫力。
2.本發(fā)明既可提高腸道粘膜組織SIgA、IgM等物質(zhì)，又可增加大量細胞生長因子，促進腸道粘膜損傷的主動修復，防止病原侵襲。
3.本發(fā)明無藥殘，符合國家要求生產(chǎn)健康動物源性食品的產(chǎn)業(yè)方向，可以在養(yǎng)雞生產(chǎn)上大力推廣。
適用動物蛋雞、肉雞、鴨、肉鴿、魚及水產(chǎn)類、豬、牛、羊、狗、貓等。
應(yīng)用范圍1.本發(fā)明作為畜禽的預防用藥，配合畜禽疫苗接種，可顯著提高抗體水平，增強畜禽的抵抗力。
2.可用于配合治療畜禽病毒性疾病，如雞新城疫、禽流感等，用本發(fā)明配合治療，可明顯縮短療程。
具體實施例方式
優(yōu)選α-溶血性鏈球菌33#菌種進行太空搭載，經(jīng)過太空誘變精心選育的α-溶血性鏈球菌33#菌珠作為生產(chǎn)菌種，經(jīng)一級發(fā)酵和二級發(fā)酵，生產(chǎn)甘露聚糖肽發(fā)酵液，將發(fā)酵液提純過濾后，加適量香精、矯味劑溶解配制，攪拌均勻后再過濾，灌裝封口，熱壓滅菌105-121℃，20-30分鐘，經(jīng)燈檢合格后包裝入庫，檢驗合格后最終生產(chǎn)出太空誘變菌種生產(chǎn)的本發(fā)明(α-甘露聚糖肽)。
①太空菌種制備以經(jīng)過空間誘變育種精心選育的α-溶血鏈球菌作為生產(chǎn)菌種。
A.斜面種子培養(yǎng)基牛肉膏0.2-0.8％，酵母膏0.2-0.8％，蛋白胨0.3-0.8％，葡萄糖0.1-0.8％，氯化鈉0.2-0.6％，瓊脂1-5％，綿羊血5-10％；pH 7.2-7.4；斜面種子培養(yǎng)基滅菌溫度105-125℃，時間30分鐘，蒸汽壓力0.11-0.13Mpa；啟封菌種冷凍管，用無菌肉湯培養(yǎng)基稀釋，在無菌條件下接入血斜面，接種后置30℃恒溫培養(yǎng)24-30小時；B.肉湯種子培養(yǎng)基牛肉膏0.2-0.8％，酵母膏0.2-0.8％，蛋白胨0.3-0.8％，葡萄糖0.1-0.8％，氯化鈉0.2-0.6％；pH 7.0-7.4；肉湯種子培養(yǎng)基滅菌溫度105-125℃，時間30分鐘，蒸汽壓力0.11-0.13Mpa；將培養(yǎng)好的斜面菌種在無菌條件下按1-9％接種量接入肉湯種子培養(yǎng)基內(nèi)，25-40℃恒溫培養(yǎng)10-30小時。
②發(fā)酵過程所述發(fā)酵過程用發(fā)酵培養(yǎng)基；牛肉膏0.2-0.8％，酵母膏0.2-0.8％，蛋白胨0.3-0.8％，葡萄糖0.1-0.9％，氯化鈉0.2-0.6％；發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌溫度105-125℃，時間30分鐘，蒸汽壓力0.11-0.13Mpa；A.一級發(fā)酵罐將優(yōu)良的肉湯菌種在無菌條件下按1-10％接種量接入一級種子罐，在25-40℃恒溫培養(yǎng)10-50小時，罐壓不超過0.02Mpa，通氣量以能翻動培養(yǎng)液為宜；B.二級發(fā)酵罐將一級發(fā)酵培養(yǎng)液在無菌條件下按2-20％接種量接入發(fā)酵罐，在25-40℃恒溫培養(yǎng)50-100小時，罐壓不超過0.02Mpa；滅活放罐，滅活采用加溫使發(fā)酵液溫度達到70-120℃，保溫20-60分鐘，冷卻靜置。
③提純過程發(fā)酵液進行濃縮，使?jié)饪s液體積與發(fā)酵液體積比控制在1∶15-1∶35，控制pH 7.0-7.4，加珍珠巖1-2.0％及活性炭2-4％，攪拌10-20分鐘，過濾和抽濾提純。
④配制經(jīng)提純后的甘露聚糖肽發(fā)酵液加0.01-0.015％香精(桔子香精、檸檬香精)、0.01-0.08％矯味劑(糖精鈉、蛋白糖)溶解攪勻，加純化水配制成含量為≥0.5mg/ml，pH 4.0-6.0的配制液。
⑤灌裝封口、滅菌將配制液按100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶、1000ml/瓶、2000ml/瓶、5000ml/瓶、10000ml/瓶、20000ml/瓶的不同包裝規(guī)格進行灌裝，封口，熱壓滅菌105-121℃，20-30分鐘后，用亮蘭色液抽真空檢漏，真空壓力-0.078-0.08Mpa。
⑥燈檢、包裝對滅菌后的α-甘露聚糖肽進行燈檢，檢查每瓶內(nèi)不得有異物并挑凈蘭瓶。貼標簽、裝箱入庫。
⑦檢驗按α-甘露聚糖肽的質(zhì)量標準進行檢驗，合格后投入市場。
實施例1取太空誘變菌種生產(chǎn)的含量為0.5mg/ml，pH 4.0-6.0的甘露聚糖肽溶液1000ml，加入活性炭0.25g，攪勻，過濾，加入糖精鈉0.1g，加入香精0.1ml，攪勻，灌裝封口制成分別為100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶、1000ml/瓶、2000ml/瓶、5000ml/瓶、10000ml/瓶、20000ml/瓶的不同包裝規(guī)格的α-甘露聚糖肽，經(jīng)流通蒸汽滅菌121℃，30分鐘，燈檢，包裝，檢驗合格后投入市場，具體操做如上所述。
實施例2取太空誘變菌種生產(chǎn)的含量為3mg/ml，pH 4.0-6.0的甘露聚糖肽溶液1000ml，加入活性炭0.25g，攪勻，過濾，加入蛋白糖0.5g，加入香精0.1ml，攪勻，灌裝封口制成分別為100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶、1000ml/瓶、2000ml/瓶、5000ml/瓶、10000ml/瓶、20000ml/瓶的不同包裝規(guī)格的α-甘露聚糖肽，經(jīng)流通蒸汽滅菌121℃，30分鐘，燈檢，包裝，檢驗合格后投入市場。
實施例3取太空誘變菌種生產(chǎn)的含量為5mg/ml，pH 4.0-6.0的甘露聚糖肽溶液1000ml，加入活性炭0.25g，攪勻，過濾，加入蛋白糖0.5g，攪勻，灌裝封口制成分別為100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶、1000ml/瓶、2000ml/瓶、5000ml/瓶、10000ml/瓶、20000ml/瓶的不同包裝規(guī)格的α-甘露聚糖肽，經(jīng)流通蒸汽滅菌121℃，30分鐘，燈檢，包裝，檢驗合格后投入市場。
實施例4取空誘變菌種生產(chǎn)的含量為0.5mg/ml，pH 4.0-6.0的甘露聚糖肽溶液1000ml，加入活性炭0.25g，攪勻，過濾，加入糖精鈉0.1g，加入香精0.12ml，攪勻加純化水配制成含量為0.5mg/ml，pH 4.0-6.0的配制液。取市售黃芪多糖原料藥10g。按上述配方所列添加量無菌操作加入本發(fā)明的甘露聚糖肽配制液中混合均勻。灌裝封口制成分別為100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶、1000ml/瓶、2000ml/瓶、5000ml/瓶、10000ml/瓶、20000ml/瓶的不同包裝規(guī)格的α-甘露聚糖肽，經(jīng)流通蒸汽滅菌121℃，30分鐘，燈檢，取市售黃芪多糖原料藥按每1000ml溶液10g添加量，經(jīng)γ-射線照射，無菌操作加入。檢驗合格后投入市場，具體生產(chǎn)工藝如上所述制成溶液。
實施例5與實施例4操作過程相同，所不同的是取太空誘變菌種生產(chǎn)的含量為3mg/ml，pH 4.0-6.0的甘露聚糖肽溶液1000ml，黃芪多糖為15g。
實施例6與實施例4操作過程相同，所不同的是取太空誘變菌種生產(chǎn)的含量為5mg/ml，pH 4.0-6.0的甘露聚糖肽溶液1000ml，黃芪多糖為20g。
實施例7取太空誘變菌種生產(chǎn)的含量為0.5mg/ml，pH 4.0-6.0的甘露聚糖肽溶液1000ml，加入活性炭0.25g，攪勻，過濾，加入蛋白糖0.5g，加入香精0.1ml，攪勻，灌裝封口制成分別為100ml/瓶、250ml/瓶、500ml/瓶、1000ml/瓶、2000ml/瓶、5000ml/瓶、10000ml/瓶、20000ml/瓶的不同包裝規(guī)格的α-甘露聚糖肽，經(jīng)流通蒸汽滅菌121℃，30分鐘，燈檢，取市售左旋咪唑原料藥按每1000ml溶液1.25g添加量，經(jīng)γ-射線照射，無菌操作加入。檢驗合格后投入市場，具體生產(chǎn)工藝如上所述制成溶液。
實施例8與實施例7操作過程相同，所不同的是取太空誘變菌種生產(chǎn)的含量為3mg/ml，pH 4.0-6.0的甘露聚糖肽溶液1000ml，左旋咪唑為13g。
實施例9與實施例7操作過程相同，所不同的是取太空誘變菌種生產(chǎn)的含量為5mg/ml，pH 4.0-6.0的甘露聚糖肽溶液1000ml，左旋咪唑為37.5g。
權(quán)利要求
1.一種能增強畜禽免疫功能的獸藥，其特征是它是每1000ml含α-甘露聚糖肽500-5000mg的溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種能增強畜禽免疫功能的獸藥，其特征是所述的溶液是將優(yōu)選α-溶血性鏈球菌33#菌種進行太空搭載，經(jīng)過太空誘變精心選育的優(yōu)良菌珠作為生產(chǎn)菌種，經(jīng)一級發(fā)酵和二級發(fā)酵，生產(chǎn)甘露聚糖肽發(fā)酵液，將發(fā)酵液提純過濾后，加適量香精、矯味劑溶解配制，攪拌均勻后再過濾，灌裝封口，熱壓滅菌后的發(fā)酵原液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種能增強畜禽免疫功能的獸藥，其特征是所述的溶液中含黃芪多糖10-20g。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種能增強畜禽免疫功能的獸藥，其特征是所述的溶液中每1000ml含左旋咪唑1.25-37.5g。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種獸藥，特別是一種能增強畜禽免疫功能的獸藥。它是每1000ml含α－甘露聚糖肽500－5000mg的溶液；所述的溶液是將優(yōu)選α－溶血性鏈球菌33#菌種進行太空搭載，經(jīng)過太空誘變精心選育的優(yōu)良菌珠作為生產(chǎn)菌種，經(jīng)—級發(fā)酵和二級發(fā)酵，生產(chǎn)甘露聚糖肽發(fā)酵液，將發(fā)酵液提純過濾后，加適量香精、矯味劑溶解配制，攪拌均勻后再過濾，灌裝封口，熱壓滅菌后的發(fā)酵原液；所述的溶液中含黃芪多糖1－20g。它采用既治標又治本的方法，利用生化制劑增強機體免疫力，它具有療效高、無耐藥性、無配伍禁忌、無毒、無殘留，符合國際獸藥潮流。
文檔編號A61P37/04GK1827167SQ20051002278
公開日2006年9月6日 申請日期2005年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月31日
發(fā)明者趙恒 申請人:趙恒