專利名稱：作為類香草醇受體配位體的經(jīng)取代的嘧啶－4－基胺類似物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于經(jīng)取代的嘧啶-4-基胺類似物，所述類似物為辣椒素(capsaicin)受體調(diào)節(jié)劑，及關(guān)于使用所述化合物治療與辣椒素受體活化作用相關(guān)的疾病。本發(fā)明進(jìn)一步關(guān)于使用所述化合物作為檢測與定位辣椒素受體的探針。
背景技術(shù)：
痛覺或傷害性刺激是由稱為“傷害性受體”的一群特定感覺神經(jīng)元的神經(jīng)末梢所傳介。各種物理及化學(xué)刺激誘會(huì)發(fā)哺乳動(dòng)物所述神經(jīng)元的活化，從而導(dǎo)致潛在傷害刺激的辨識。但是，不適當(dāng)或過度活化傷害性受體會(huì)產(chǎn)生引致衰弱的急性或慢性疼痛。
神經(jīng)病理性疼痛包含缺乏刺激下的疼痛訊息傳遞，并典型地是由對神經(jīng)系統(tǒng)的傷害所引起。多數(shù)情形下，所述疼痛的發(fā)生，視為是因初始傷害末梢系統(tǒng)(例如，經(jīng)由直接傷害或全身性疾病)后，引發(fā)末梢及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的敏化作用。神經(jīng)病理性疼痛典型地為灼熱、刺痛且強(qiáng)度不退，有時(shí)比誘發(fā)疼痛的初始傷害或疾病過程更會(huì)引致衰弱。
神經(jīng)性疼痛的現(xiàn)行療法大多效果不是很有效。鴉片劑，例如嗎啡，為有效的止痛劑，但由于例如身體上的成癮與退癮性質(zhì)、以及壓抑呼吸、情緒變化、與伴隨便秘的小腸蠕動(dòng)降低、惡心、嘔吐、及內(nèi)分泌與自律神經(jīng)系統(tǒng)失調(diào)等不利副作用而使其有效性受限。此外，神經(jīng)病理性疼痛對已知鴉片劑止痛療法常沒有反應(yīng)或只有部分反應(yīng)。使用N-甲基-D-天門冬胺酸鹽拮抗劑克他命(ketamine)或α(2)-腎上腺素功能促效劑氯壓啶(clonidine)的療法可降低急性或慢性疼痛，使鴉片劑用量得以減少，但所述制劑由于副作用常令人很難忍受。
使用辣椒素的局部療法已用來治療包括神經(jīng)病理性疼痛的慢性與急性疼痛。辣椒素衍生自茄科植物(包括嗆辣紅椒)的辛辣物質(zhì)，對傳達(dá)疼痛的小直徑傳入神經(jīng)纖維(A-Δ與C纖維)視為似乎具有選擇性作用。辣椒素反應(yīng)特征為持續(xù)活化末梢組織中的傷害性受體，最終使末梢傷害性受體對一或多個(gè)刺激去敏化。從動(dòng)物研究得知，辣椒素似乎藉由打開鈣與鈉的陽離子選擇通道而觸發(fā)C纖維細(xì)胞膜的去極化作用。
享有與辣椒素相同類香草醇(vanilloid)基團(tuán)的結(jié)構(gòu)類似物也引起類似的反應(yīng)。所述類似物的一種為樹膠脂毒素(resiniferatoxin，RTX)，其是大戟屬(Euphorbia)植物的天然產(chǎn)物。類香草醇受體(VR)一詞是用來敘述辣椒素與所述相關(guān)刺激化合物在神經(jīng)元細(xì)胞膜的識別部位。辣椒素反應(yīng)受到另一辣椒素類似物例如，辣椒氮呼(capazepine)的競爭性抑制(因而受到拮抗)，也受到非選擇性陽離子通道封阻劑釕紅的抑制。所述拮抗劑僅以適度親和力與VR結(jié)合(通常Ki值不低于140μM)。
自背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞克隆大鼠及人類的類香草醇受體。經(jīng)鑒定出的第一類香草醇受體稱為類香草醇受體類型1(VR1)，本文中“VR1”與“辣椒素受體”等詞可交換使用，以指稱具有此類型的大鼠及/或人類、以及同系哺乳類受體。利用缺乏此受體的小鼠所表現(xiàn)出的無類香草醇引致的疼痛行為與對熱及發(fā)炎傷害的弱反應(yīng)，已證實(shí)VR1在痛覺上的角色。VR1為非選擇性陽離子通道，其開放閾值因高溫、低pH、及辣椒素受體促效劑而降低。例如，該通道通常在高于約45℃的溫度下開放。打開辣椒素受體通道后，通常接著從表達(dá)該受體的神經(jīng)元及其它鄰近神經(jīng)元釋出發(fā)炎肽，進(jìn)一步增加疼痛反應(yīng)。辣椒素受體受到辣椒素初始活化后，即經(jīng)由cAMP依賴型蛋白激酶的磷酸化進(jìn)行快速去敏化作用。
VR1促效劑類香草醇化合物由于具備使末梢組織中傷害性受體去敏化的能力，因此已用作局部麻醉劑。然而，促效劑的應(yīng)用可能引起灼燒痛，因而使其治療用途受限。近來，據(jù)報(bào)告指出，VR1拮抗劑，包括非類香草醇化合物，也用于治療疼痛(見2002年1月31日公開的PCT國際申請案公開案號WO 02/08221)。
因此，希望得到能與VR1作用而不會(huì)引起VR1促效劑類香草醇化合物的初始疼痛感的化合物，所述這種化合物能用于治療包括神經(jīng)病理性疼痛的慢性與急性疼痛。特別是希望得到所述受體的拮抗劑以用于治療疼痛，以及例如暴露在催淚瓦斯、癢等疾病及例如尿失禁與膀胱過動(dòng)等尿道癥狀。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)了這些需求，并且具有其它優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了能調(diào)節(jié)，優(yōu)選能抑制VR1活化的化合物。在某些方面，本發(fā)明提供了經(jīng)取代的嘧啶-4-基胺類似物，其具有通式I所示結(jié)構(gòu) 通式I或所述化合物藥學(xué)上可接受的形式。在通式I中X為CRx或N；Y為CRy或N；Rx為氫、鹵素、硝基、任選經(jīng)取代的C1-C6烷基、氨基、氰基、任選經(jīng)取代的C1-C6烷基磺?；?、任選經(jīng)取代的單或二(C1-C6烷基)磺酰氨基、或者任選經(jīng)取代的單或二(C1-C6烷基)氨基；Ry為氫或任選經(jīng)取代的C1-C6烷基；A1-A5獨(dú)立地為CH、CRa或N，且A1-A5中是N的不多于三個(gè)；B1-B5獨(dú)立地為CH、CRb或N，且B1-B5中是N的不多于三個(gè)；Ra與Rb在每種情況下獨(dú)立地選自鹵素、羥基、氨基、氰基、-COOH、任選經(jīng)取代的C1-C6烷基、任選經(jīng)取代的C3-C7環(huán)烷基、任選經(jīng)取代的C1-C6烷氧基、任選經(jīng)取代的C2-C6烷基醚、任選經(jīng)取代的C2-C6烷?；?、任選經(jīng)取代的C3-C6烷酮、任選經(jīng)取代的C1-C6鹵代烷基、任選經(jīng)取代的C1-C6鹵代烷氧基、任選經(jīng)取代的單或二(C1-C6烷基)氨基、任選經(jīng)取代的C1-C6烷基磺酰基、任選經(jīng)取代的單或二(C1-C6烷基)磺酰氨基或任選經(jīng)取代的單與二(C1-C6烷基)胺羰基；R3選自(i)氫、鹵素或氰基；以及(ii)C1-C6烷基及具有下面通式的基團(tuán)
或 其中，L為鍵或C1-C6亞烷基；M為鍵或C1-C6亞烷基；R5與R6是(a)獨(dú)立地選自氫、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C3-C8環(huán)烷基或與L結(jié)合形成5至7元雜環(huán)烷基的基團(tuán)；或(b)結(jié)合形成5至7元雜環(huán)烷基；以及R7為氫、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C3-C8環(huán)烷基、C2-C6烷?；?、或與M結(jié)合形成5至7元雜環(huán)烷基的基團(tuán)；其中，每一(ii)經(jīng)0至3個(gè)取代基所取代，所述取代基獨(dú)立地選自下述基團(tuán)鹵素、氰基、氨基、羥基、任選經(jīng)取代的C1-C6烷基、任選經(jīng)取代的C3-C8環(huán)烷基、任選經(jīng)取代的C2-C6烷基醚、任選經(jīng)取代的C1-C6烷氧基、任選經(jīng)取代的C2-C6烷酰基、任選經(jīng)取代的C1-C6鹵代烷基或任選經(jīng)取代的單或二(C1-C6烷基)氨基。
在某些方面，如本發(fā)明所述的VR1調(diào)節(jié)劑在辣椒素受體結(jié)合試驗(yàn)中，呈現(xiàn)不大于1微摩爾濃度、100納摩爾濃度、50納摩爾濃度、10納摩爾濃度或1納摩爾濃度的Ki值，和/或在測定辣椒素受體拮抗劑活性試驗(yàn)中，具有不大于1微摩爾濃度、100納摩爾濃度、50納摩爾濃度、10納摩爾濃度或1納摩爾濃度的EC50或IC50值。
在某些具體例中，如本發(fā)明所述的VR1調(diào)節(jié)劑是VR1拮抗劑，并且在辣椒素受體活化的體外試驗(yàn)中沒有呈現(xiàn)可檢測的促效劑活性。
在某些方面，如本發(fā)明所述的VR1調(diào)節(jié)劑用可檢測的標(biāo)記物(例如，放射性標(biāo)記或熒光接合)予以標(biāo)記。
在某些方面，如本發(fā)明所述的VR1調(diào)節(jié)劑及其藥學(xué)上可接受的形式，用可檢測的標(biāo)記物(例如，放射性標(biāo)記或熒光接合)予以標(biāo)記。
在其它方面，本發(fā)明進(jìn)一步提供藥學(xué)組合物，所述組合物包含有至少一種如本發(fā)明所述的VR1調(diào)節(jié)劑(即，如本發(fā)明所提供的化合物或該化合物藥學(xué)上可接受的形式)，并結(jié)合有生理上可接受的載體或賦形劑。
又在一些方面，本發(fā)明提供了減少細(xì)胞性辣椒素受體的鈣傳導(dǎo)的方法，所述方法包括使表達(dá)辣椒素受體的細(xì)胞(例如，神經(jīng)元細(xì)胞)與至少一種如本文所述的VR1調(diào)節(jié)劑的辣椒素受體調(diào)節(jié)量接觸。所述接觸可發(fā)生在體內(nèi)或體外。
本發(fā)明進(jìn)一步提供抑制類香草醇配位體與辣椒素受體結(jié)合的方法。在某些所述方面中，所述抑制在體外發(fā)生。所述方法包括在可檢測地抑制類香草醇配位體與辣椒素受體結(jié)合的條件與足夠用量下，使辣椒素受體與至少一種如本文所述的VR1調(diào)節(jié)劑接觸。在其它所述方面，辣椒素受體是在患者活體內(nèi)。所述方法包括在體外，在可檢測地抑制類香草醇配位體與表達(dá)克隆的辣椒素受體的細(xì)胞結(jié)合的足夠用量下，使患者的表達(dá)辣椒素受體的細(xì)胞與至少一種如本發(fā)明所述的VR1調(diào)節(jié)劑接觸，從而抑制類香草醇配位體與患者的辣椒素受體結(jié)合。
本發(fā)明進(jìn)一步提供患者對辣椒素受體調(diào)節(jié)敏感的治療方法，所述方法包括向患者給藥至少一種辣椒素受體調(diào)節(jié)量的如本發(fā)明所述的VR1調(diào)節(jié)劑。
在其它方面，本發(fā)明提供了治療患者疼痛的方法，該方法包括向患有疼痛的患者給藥辣椒素受體調(diào)節(jié)量的至少一種如本發(fā)明所述的VR1調(diào)節(jié)劑。
本發(fā)明進(jìn)一步提供治療患者癢、尿失禁、膀胱過動(dòng)、咳嗽和/或打嗝的方法，所述方法包括向患有一或多種前述狀況的患者給藥至少一種如本發(fā)明所述的辣椒素受體調(diào)節(jié)量的VR1調(diào)節(jié)劑。
本發(fā)明進(jìn)一步提供促進(jìn)肥胖患者減重的方法，所述方法包括向肥胖患者給藥至少一種如本發(fā)明所述的VR1調(diào)節(jié)劑的辣椒素受體體調(diào)節(jié)量。
又在一些方面，本發(fā)明提供了測定試樣中是否有辣椒素受體存在的方法，所述方法包括(a)在容許VR1調(diào)節(jié)劑與辣椒素受體結(jié)合的條件下，使樣品與如本發(fā)明所述的VR1調(diào)節(jié)劑接觸；以及(b)檢測與辣椒素受體結(jié)合的VR1調(diào)節(jié)劑含量。
本發(fā)明也提供經(jīng)包裝的藥學(xué)制劑，其包括(a)裝在容器中的如本發(fā)明所述的藥學(xué)組合物；及(b)使用所述組合物治療對辣椒素受體調(diào)節(jié)作用敏感的一或多種疾病(如，疼痛、癢、尿失禁、膀胱過動(dòng)、咳嗽打嗝和/或肥胖癥)的說明書。
在另一方面，本發(fā)明提供了制備本發(fā)明公開的化合物(包括中間產(chǎn)物)的方法。
參照下文詳細(xì)說明后，將更明白本發(fā)明上述及其它方面。
詳細(xì)說明如上文所述，本發(fā)明提供了經(jīng)取代的嘧啶-4-基胺類似物，所述類似物為辣椒素受體調(diào)節(jié)劑。所述調(diào)節(jié)劑可在體外或體內(nèi)使用，以調(diào)節(jié)各種背景的辣椒素受體活性。
術(shù)語本發(fā)明中化合物通常使用標(biāo)準(zhǔn)命名法予以敘述。對于具有不對稱中心的化合物，應(yīng)了解(除非另行指明)所有光學(xué)異構(gòu)物及其混合物均涵蓋在內(nèi)。此外，具有碳-碳雙鍵的化合物可以Z和E形式存在，除非另行指明，否則化合物的所有異構(gòu)物形式均涵蓋于本發(fā)明范圍內(nèi)。當(dāng)化合物以多種互變異構(gòu)物存在時(shí)，引用的化合物并不限制為任一特定的互變異構(gòu)物，而是涵蓋所有互變異構(gòu)物形式。某些化合物在本發(fā)明中通過使用包含變量(例如，R3、A1、X)的通式予以敘述。除非另行指明，否則通式中的每一變量與任何其它變量獨(dú)立地進(jìn)行界定；在化學(xué)式中出現(xiàn)一次以上的任何變量，每次出現(xiàn)時(shí)均各自獨(dú)立地界定。
本發(fā)明所用“經(jīng)取代的嘧啶-4-基胺類似物”一詞涵蓋所有通式I化合物，以及本發(fā)明所提供的其它通式的化合物。換句話說，核心環(huán) 為吡啶基、嘧啶基或三嗪基(即 或 ，每一基團(tuán)任選經(jīng)如本發(fā)明所述所取代)的化合物特定地包括在嘧啶-4-基胺類似物的定義內(nèi)。在特點(diǎn)實(shí)施例中，核心結(jié)構(gòu)優(yōu)選為 本發(fā)明引用的化合物的“藥學(xué)上可接受的形式”為所述化合物藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、溶劑合物、結(jié)晶型、多態(tài)異構(gòu)物(polymorphs)、螯合物、非共價(jià)鍵復(fù)合物、酯、籠形化合物、及該化合物的前物。如本發(fā)明所述，藥學(xué)上可接受的鹽，是在本領(lǐng)域中通常被認(rèn)為適用于與人類或動(dòng)物組織接觸而無過度毒性、刺激性、過敏反應(yīng)、或其它問題或并發(fā)癥的酸或堿鹽。所述鹽包括堿殘基如胺類的無機(jī)與有機(jī)酸鹽，以及酸殘基如羧酸類的堿金鹽或有機(jī)鹽。特定的藥學(xué)上的鹽包括但不限于，例如鹽酸、磷酸、氫溴酸、蘋果酸、乙醇酸、反丁烯二酸、硫酸、胺磺酸、對氨基苯磺酸、甲酸、甲苯磺酸、甲磺酸、苯磺酸、乙烷二磺酸、2-羥基乙磺酸、硝酸、苯甲酸、2-乙酰氧基苯甲酸、檸檬酸、酒石酸、乳酸、硬脂酸、水楊酸、麩胺酸、抗壞血酸、雙羥萘酸(pamoic)、琥珀酸、順丁烯二酸、丙酸、羥基順丁烯二酸、氫碘酸、苯基乙酸、烷酸例如乙酸、HOOC-(CH2)n-COOH(其中n為0至4)等酸的鹽。同樣地，藥學(xué)上可接受的陽離子包括但不限于，鈉、鉀、鈣、鋁、鋰與銨。在此技術(shù)領(lǐng)域具有通常知識者可進(jìn)一步認(rèn)知，本發(fā)明所提供化合物的藥學(xué)上可接受的鹽，包括在Remington’s Pharmaceutical Sciences，第17版，1418頁(賓州Easton市Mack Publishing Company出版，1985年)所列舉的那些。通常，藥學(xué)上可接受的酸或堿鹽能以任何已知的化學(xué)方法從含有堿性或酸性基團(tuán)的母化合物予以合成。簡單地說，所述鹽能通過使所述化合物的游離酸或堿形式與化學(xué)計(jì)量的適當(dāng)堿或酸在水或有機(jī)溶劑或二者的混合物中反應(yīng)予以制備。通常，優(yōu)選使用非水溶液介質(zhì)，例如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈。
“前物”是一種化合物，其可能不完全滿足本發(fā)明所提供化合物的結(jié)構(gòu)需求，但在向患者給藥后，可經(jīng)體內(nèi)經(jīng)修飾產(chǎn)生通式I或本發(fā)明所提供的其它通式的化合物。例如，前物可為如本發(fā)明所提供化合物的?；苌?。前物包括這樣的化合物，其中所述化合物中的羥基、氨基或硫氫基與任何基團(tuán)鍵結(jié)，在向哺乳類受試者給藥后，這些鍵分別裂解形成游離羥基、氨基或硫氫基基團(tuán)。前物的實(shí)例包括但不限于，本發(fā)明所提供化合物中的醇與胺官能基的乙酸酯、甲酸酯及苯甲酸酯衍生物。本發(fā)明所提供化合物的前物可通過修飾存在該化合物中的官能基予以制備，采用的方式是這些修飾經(jīng)裂解后可獲得母化合物。
本發(fā)明所用的“烷基”一詞是指直鏈或支鏈的飽和脂族烴。烷基基團(tuán)包括具1至8個(gè)碳原子(C1-C8烷基)、1至6個(gè)碳原子(C1-C6烷基)、及1至4個(gè)碳原子(C1-C4烷基)的基團(tuán)，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、二級丁基、叔丁基、戊基、2-戊基、異戊基、新戊基、己基、2-己基、3-己基及3-甲基戊基。“亞烷基”一詞是指二共價(jià)鍵烷基。即，亞烷基是與另外二個(gè)殘基鍵結(jié)的烷基，例如，二氯甲烷(Cl-CH2-Cl)中的一個(gè)碳的亞甲基。
同樣地，“烯基”是指直鏈或支鏈烯烴基團(tuán)。烯基包括分別具有2至8個(gè)、2至6個(gè)或2至4個(gè)碳原子的C2-C8烯基、C2-C6烯基及C2-C4烯基，例如乙烯基、烯丙基或異丙烯基?！叭不笔侵钢辨溁蛑ф溝N基團(tuán)，并具有一或多個(gè)不飽和碳-碳鍵，且其中至少一個(gè)不飽和鍵為三鍵。炔基基團(tuán)包括分別具有2至8個(gè)、2至6個(gè)或2至4個(gè)碳原子的C2-C8炔基、C2-C6炔基及C2-C4炔基。
“環(huán)烷基”為其所有環(huán)元均為碳的飽和環(huán)狀基團(tuán)，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基及環(huán)己基。某些環(huán)烷基基團(tuán)為C3-C7環(huán)烷基，其中該環(huán)含有3至7個(gè)環(huán)元。
本發(fā)明所用“烷氧基”一詞，是指經(jīng)由氧橋連接的如上所述的烷基。烷氧基包括分別具有1至6個(gè)或1至4個(gè)碳原子的C1-C6烷氧基及C1-C4烷氧基。特定的烷氧基基團(tuán)為甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、2-戊氧基、3-戊氧基、異戊氧基、新戊氧基、己氧基、2-己氧基、3-己氧基或3-甲基戊氧基。
“烷基磺?；笔侵妇哂型ㄊ?(SO2)-烷基的基團(tuán)，其中，硫原子為鍵結(jié)處。烷基磺?；ǚ謩e具有1至6個(gè)或1至4個(gè)碳原子的C1-C6烷磺?；駽1-C4烷磺酰基。甲基磺?；鶠榇硇缘耐榛酋；?。
“烷基磺酰氨基”是指具有通式-(SO2)-N(R)2的基團(tuán)，其中硫原子為鍵結(jié)點(diǎn)，每一個(gè)R獨(dú)立地為氫或烷基?！皢位蚨?C1-C6烷基)磺酰氨基”是指其中一個(gè)R為C1-C6烷基，另一個(gè)R為氫或獨(dú)立選自C1-C6烷基的基團(tuán)。
“烷?；币辉~是指呈線型或支鏈排列的?；?例如，-(C＝O)-烷基)。烷?；鶊F(tuán)包括分別具有2至8個(gè)、2至6個(gè)或2至4個(gè)碳原子的C2-C8烷?；?、C2-C6烷酰基或C2-C4烷?；鶊F(tuán)?！癈1烷酰基”是指-(C＝O)-H，其(與C2-C8烷?；?被「C1-C8烷?；挂辉~所涵蓋。乙?；鶠镃2烷?；?。
“烷酮”為酮基，其中碳原子呈線型或支鏈烷基排列。“C3-C8烷酮’、“C3-C6烷酮”與“C3-C4烷酮”分別是指具有3至8、6或4個(gè)碳原子的烷酮。舉例而言，C3烷酮基團(tuán)的結(jié)構(gòu)式為-CH2-(C＝O)-CH3。
同樣地，“烷基醚”是指線型或支鏈醚取代基。烷基醚包括分別具有2至8、6或4個(gè)碳原子的C2-C8烷基醚、C2-C6烷基醚及C2-C4烷基醚基團(tuán)。舉例而言，C2烷基醚基團(tuán)的結(jié)構(gòu)式為-CH2-O-CH3。
“烷氨基”是指結(jié)構(gòu)通式為-NH-烷基或-N(烷基)(烷基)的仲或叔胺，其中各烷基可相同或不同。所述基團(tuán)包括，例如，單及二(C1-C6烷基)氨基基團(tuán)，其中各烷基可相同或不同，且得含有1至6個(gè)碳原子，以及單或二(C1-C4烷基)氨基。
“氨基羰基”一詞是指酰氨基(也即，-(C＝O)NH2)。「單或二(C1-C6烷基)氨基羰基」是指一或兩個(gè)氫原子經(jīng)C1-C6烷基置換的氨基羰基。當(dāng)兩個(gè)氫原子均經(jīng)如此置換時(shí)，所述的C1-C6烷基可相同或不同。
“鹵素”一詞是指氟、氯、溴及碘。
“鹵代烷基”為經(jīng)1或多個(gè)鹵原子取代的支鏈或直鏈烷基(例如，“C1-C6鹵代烷基’具有1至6個(gè)碳原子)。鹵代烷基實(shí)例包括但不限于，單、二或三氟甲基；單、二或三氯甲基；單、二、三、四或五氟乙基；單、二、三、四或五氯乙基；及1，2，2，2-四氟-1-三氟甲基-乙基。典型的鹵代烷基為三氟甲基及二氟甲基?！胞u代烷氧基”一詞是指經(jīng)由氧橋連接的如上文所界定的鹵代烷基?！癈1-C6鹵代烷氧基”具有1至6個(gè)碳原子。
不是介于兩個(gè)字母或符號間的破折號(-)用于指示取代基的連接點(diǎn)。例如，-CONH2是經(jīng)由碳原子連接。
本發(fā)明所用“雜原子”一詞是指氧、硫或氮。
“雜環(huán)烷基”為包括飽和或部分飽和的雜環(huán)狀環(huán)的基團(tuán)(也即，一或多個(gè)環(huán)原子為雜原子，其余環(huán)原子為碳)。典型地，雜環(huán)狀環(huán)具有1至4個(gè)雜原子；在某些實(shí)例中，每一雜環(huán)狀環(huán)具有1或2個(gè)雜原子。各雜環(huán)狀環(huán)通常含有3至8個(gè)環(huán)元(某些實(shí)例中，列舉出具有5至7個(gè)環(huán)元的環(huán))。雜環(huán)可任選地在氮和/或碳原子位置經(jīng)各種如本發(fā)明所述的取代基取代。雜環(huán)烷基包括，例如，全氫吖庚因基(azocinyl)、吖辛因基(azocinyl)、苯并異噻唑基、二噻嗪(dithiazinyl)、咪唑啉基、咪唑啶基、嗎啉基、哌嗪基、哌啶基、吡啶烷酮基、吡咯烷基、吡咯烷酮基、吡咯啉基、四氫哌喃基、硫二氮嗪基、硫二氮唑基、硫代嗎啉基及其中硫原子經(jīng)氧化的變體、三氮嗪基，及經(jīng)如本發(fā)明所述的取代基所取代的前述任何基團(tuán)。
本發(fā)明所用“取代基”一詞，是指與所關(guān)注分子的原子共價(jià)結(jié)合的分子基團(tuán)。舉例而言，“環(huán)取代基”為例如鹵素、烷基、鹵代烷基或與環(huán)元原子(優(yōu)選為碳或氮原子)共價(jià)結(jié)合的其它本發(fā)明論及的基團(tuán)?！叭〈币辉~是指以如上所述的取代基置換分子結(jié)構(gòu)中的氫原子，且未超出該指定原子的價(jià)數(shù)，并且能由該取代產(chǎn)生具化學(xué)穩(wěn)定性的化合物(也即，能進(jìn)行分離、鑒定、及測試生物活性的化合物)。
“任選經(jīng)取代”的基團(tuán)為未經(jīng)取代或在一或多個(gè)可用位置(典型地在1、2、3、4或5個(gè)位置)經(jīng)氫以外的一或多個(gè)適當(dāng)基團(tuán)(可相同或不同)所取代的基團(tuán)。所述適當(dāng)取代基包括，例如，羥基、鹵素、氰基、硝基、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C1-C8烷氧基、C2-C8烷基醚、C3-C8烷酮、C1-C8烷硫基、氨基、單或二(C1-C8烷基)氨基、鹵代C1-C8烷基、鹵代C1-C8烷氧基、C1-C8烷?；?、C2-C8烷酰氧基、C1-C8烷氧羰基、-COOH、-CHNH2、單或二(C1-C8烷基)氨基羰基、-SO2NH2，和/或單或二(C1-C8烷基)磺酰氨基，以及碳環(huán)與雜環(huán)基團(tuán)。任選經(jīng)取代也以“經(jīng)0至X個(gè)取代基所取代”一詞表示，其中X為可能取代基的最大個(gè)數(shù)。某些任選經(jīng)取代的基團(tuán)是經(jīng)0至2、3或4個(gè)獨(dú)立選定的取代基所取代(也即，未經(jīng)取代或以達(dá)所述最大個(gè)數(shù)的取代基所取代)。
“VR1”與“辣椒素受體”等詞可交換使用，是指1型類香草醇受體。除非另行指定，否則所述名詞涵蓋大鼠及人類VR1受體(例如，GenBank寄存編號AF327067、AJ277028及NM 018727；特定人類VR1 cDNAs的序列提供在美國專利案6,482,611的SEQ ID NOs1-3，所編碼的氨基酸序列示于SEQ ID NOs4與5)，以及在其它物種中發(fā)現(xiàn)的同系物。
“VR1調(diào)節(jié)劑”，在本發(fā)明中也稱為“調(diào)節(jié)劑”，是調(diào)節(jié)VR1活化作用和/或調(diào)節(jié)由VR1傳介的訊息傳導(dǎo)作用的化合物。詳言地說，本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑為通式I化合物及通式I化合物藥學(xué)上可接受的形式。VR1調(diào)節(jié)劑可為VR1促效劑或拮抗劑。若VR1的Ki小于1微摩爾濃度，優(yōu)選為小于100納摩爾濃度、10納摩爾濃度或1納摩爾濃度，則調(diào)節(jié)劑是以‘高親和力”結(jié)合的。本發(fā)明實(shí)施例5提供測定VR1的Ki值的代表性試驗(yàn)。
如果調(diào)節(jié)劑能檢測地抑制類香草醇配位體與VR1的結(jié)合和/或抑制由VR1介導(dǎo)的訊息傳導(dǎo)作用(例如，使用實(shí)施例6提供的代表性試驗(yàn))，則所述調(diào)節(jié)劑為“拮抗劑”。一般而言，所述拮抗劑在實(shí)施例6提供的試驗(yàn)中，能以小于1微摩爾濃度，優(yōu)選以小于100納摩爾濃度，更優(yōu)選以小于10納摩爾濃度或1納摩爾濃度的IC50值，抑制VR1的活化作用。VR1拮抗劑包括中性拮抗劑及反促效劑。某些實(shí)施例中，本發(fā)明提供的辣椒素受體拮抗劑不是類香草醇。
VR1的“反促效劑”為在添加的類香草醇配位體不存在下，能使VR1的活性減少至其基礎(chǔ)活性量以下的化合物。VR1的反促效劑也能抑制類香草醇配位體在VR1的活性，和/或也能抑制類香草醇配位體與VR1的結(jié)合?；衔飳︻愊悴荽寂湮惑w與VR1結(jié)合的抑制能力可通過結(jié)合試驗(yàn)予以測定，例如實(shí)施例5提供的結(jié)合試驗(yàn)。VR1基礎(chǔ)活性，以及由于VR1拮抗劑存在下VR1活性的減少，均可由鈣移動(dòng)試驗(yàn)予以測定，例如實(shí)施例6的試驗(yàn)。
VR1的“中性拮抗劑”為能抑制類香草醇配位體在VR1活性，但不顯著地改變該受體基礎(chǔ)活性的化合物(即，在類香草醇配位體不存在下進(jìn)行的如實(shí)例6所述的鈣移動(dòng)試驗(yàn)中，VR1活性的減少不大于10％，更優(yōu)選為不大于5％，又優(yōu)選為不大于2％；最優(yōu)選為沒有檢測出活性減少)。VR1的中性拮抗劑可抑制類香草醇配位體與VR1的結(jié)合。
本發(fā)明所用的“辣椒素受體促效劑”或“VR1促效劑”，是指能提升所述受體的活性至其基礎(chǔ)活性量以上(也即，增進(jìn)VR1活化作用和/或增進(jìn)由VR1介導(dǎo)的訊息傳導(dǎo))的化合物。辣椒素受體促效劑活性可通過實(shí)施例6提供的代表性試驗(yàn)予以鑒定。通常，所述促效劑在實(shí)施例6提供的試驗(yàn)中具有小于1微摩爾濃度，優(yōu)選為小于100納摩爾濃度，更優(yōu)選為小于10納摩爾濃度的EC50值。在某些實(shí)施例中，本發(fā)明提供的辣椒素受體促效劑不是類香草醇。
“類香草醇”是含有苯環(huán)的辣椒素或任何辣椒素類似物，其苯環(huán)上帶有與相鄰環(huán)碳原子(其中一個(gè)碳原子是位于與該苯環(huán)結(jié)合的第三個(gè)基團(tuán)連接點(diǎn)的對位)結(jié)合的兩個(gè)氧原子。類香草醇若以不大于10μM的Ki(以如本發(fā)明所述方式測定)與VR1結(jié)合，則為“類香草醇配位體”。類香草醇配位體促效劑包括辣椒素、歐瓦尼、N-花生四烯?；?多巴胺及樹膠脂毒素。類香草醇配位體拮抗劑包括辣椒氮呼及碘-樹膠脂毒素。
“辣椒素受體調(diào)節(jié)劑量”是指向患者給藥后，使VR1調(diào)節(jié)劑在患者辣椒受體處的濃度達(dá)到足以改變活體外類香草醇配位體與VR1結(jié)合的量(用實(shí)施例5提供的測定方法)，和/或能改變VR1介導(dǎo)的訊號傳導(dǎo)的量(用實(shí)施例6提供的測定方法)。辣椒素受體可出現(xiàn)在例如，體液(例如，血液、血漿、血清、腦脊髓液、關(guān)節(jié)液、淋巴、細(xì)胞性腸液、淚液或尿液)中。
“治療有效量”是指向患者給藥后，足以使患者從所治療的疾病中產(chǎn)生可檢測出癥狀緩和的量。所述緩和可使用任何適當(dāng)準(zhǔn)則予以檢測，包括一或多種癥狀(例如疼痛)的緩解。
“患者”是以本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑治療的任何個(gè)體。患者包括人類，以及其它動(dòng)物例如伴侶動(dòng)物(例如，狗與貓)及家畜。患者可能經(jīng)受對辣椒素受體調(diào)節(jié)具敏感狀況的一或多種癥狀(例如，疼痛、暴露于類香草醇配位體、癢、尿失禁、膀胱過動(dòng)、呼吸性疾病、咳嗽和/或打嗝)，或可能并無所述癥狀(也即，為預(yù)防性治療)。
VR1調(diào)節(jié)劑如上所述，本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑可用于多種情況，包括治療疼痛(例如，神經(jīng)性或末梢神經(jīng)介導(dǎo)的疼痛)；暴露在辣椒素下；暴露在酸、熱、光、催淚瓦斯空氣污染物下、辣椒噴霧劑或相關(guān)制劑下；呼吸性癥狀例如氣喘或慢性哽塞性肺疾；癢；尿失禁或膀胱過動(dòng)；咳嗽或打嗝；和/或肥胖癥。VR1也得使用于活體外試驗(yàn)(例如，受體活性試驗(yàn))，作為檢測與定位VR1的探針，以及作為配位體結(jié)合及由VR1介導(dǎo)的訊息傳導(dǎo)試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)物。
本發(fā)明所提供的VR1調(diào)節(jié)劑為經(jīng)取代的嘧啶-4-基胺類似物，在納摩爾(也即，次微摩爾濃度)，優(yōu)選為在次納摩爾濃度，更優(yōu)選為在100微微摩爾(picomolar)、20微微摩爾、10微微摩爾或5微微摩爾以下濃度下，可檢測出調(diào)節(jié)辣椒素與VR1的結(jié)合。所述調(diào)節(jié)劑較佳為非類香草醇。某些優(yōu)選的調(diào)節(jié)劑為VR1拮抗劑，并且在實(shí)施例6敘述的試驗(yàn)中未有可檢測的促效劑活性。優(yōu)選的VR1調(diào)節(jié)劑可進(jìn)一步以高親和力與VR1結(jié)合，且實(shí)質(zhì)上未抑制人類上皮細(xì)胞生長因子(EGF)受體酪胺酸激酶的活性。
某些具體實(shí)施方案中，具有通式I的VR1調(diào)節(jié)劑進(jìn)一步滿足通式II 通式II或其藥學(xué)上可接受的形式，其中X為CRx或N；Rx為氫、鹵素、硝基、C1-C6烷基、氨基、氰基、C1-C6烷磺酰基、單或二(C1-C6烷基)磺酰氨基、或者單或二(C1-C6烷基)氨基；A1為CH或N；A2、A3與A4獨(dú)立地為CH、CRa或N，且A1至A4中是N的不多于二個(gè)；B1與B5獨(dú)立地為CH或N；B2、B3與B4獨(dú)立地為CH或CRb，且B2、B3與B4中至少一個(gè)為CRb；Ra與Rb在每種情況下獨(dú)立地選自鹵素、羥基、氨基、氰基、-COOH、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烷基醚、C2-C6烷?；?、C3-C6烷酮、C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基、單或二(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基磺?；?、單或二(C1-C6烷基)磺酰氨基或單與二(C1-C6烷基)氨基羰基；R2為C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、C1-C6鹵代烷基或C1-C6烷基磺酰基；及R3是選自(i)氰基；以及(ii)C1-C6烷基及具有下面通式的基團(tuán)
或 其中，L為鍵或C1-C6亞烷基；M為鍵或C1-C6亞烷基；R5與R6是(a)獨(dú)立地選自氫、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C3-C8環(huán)烷基或與L結(jié)合形成5至7元雜環(huán)烷基的基團(tuán)，且R5與R6至少一個(gè)不為氫；或(b)結(jié)合形成5至7元雜環(huán)烷基；以及R7為氫、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C3-C8環(huán)烷基、C2-C6烷?；?、或與M結(jié)合形成5至7元雜環(huán)烷基的基團(tuán)；其中，每一(ii)經(jīng)0至3個(gè)取代基所取代，所述取代基獨(dú)立地選自下述基團(tuán)鹵素、氰基、氨基、羥基、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷基、以及單與二(C1-C6烷基)氨基。
通式II中，表示如下的基團(tuán) 通常為經(jīng)取代的苯基、吡啶基或嘧啶基，取代基是在B2、B3和/或B4位置。在具有通式II的化合物中，其B2、B3與B4中的一或二個(gè)為CRb，以及每一Rb獨(dú)立地選自鹵素、氨基、氰基、-COOH、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基、C1-C6烷基磺?；騿位蚨?C1-C6烷基)磺酰氨基。在一些所述化合物中B2為CRb。在另一些所述化合物中，B2、B3與B4中的一個(gè)且只有一個(gè)為CRb，而Rb為氟、氯、氰基、甲基、甲氧基、三氟甲氧基、乙氧基、或三氟甲基。又在具有通式II的化合物中，至少一Rb為C1-C4烷氧基。
通式II中的R3通常為氰基、C1-C6烷基或如上所述的含氮或含氧基團(tuán)。某些所述化合物中，R3為C1-C6烷基。其它所述化合物中，R3為C2-C6烷基醚、吡咯烷基、嗎啉基、哌啶基、哌嗪基、或全氫吖庚因基基，且每一基團(tuán)經(jīng)0至3個(gè)取代基所取代，所述取代基獨(dú)立選自鹵素、氰基、氨基、羥基或C1-C4烷基。
通式II中，如下表示的基團(tuán) 通常為經(jīng)取代的苯基、吡啶基或嘧啶基，在連結(jié)點(diǎn)(也即，R2)的對位位置有一取代基。R2為C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、C1-C6鹵代烷基或C1-C6烷磺?；?；在某些化合物中，R2為C1-C4烷基、C3-C7環(huán)烷基或C1-C4鹵代烷基。A2、A3與A4中的一或多個(gè)可為(但非必要的)經(jīng)取代的碳。在A2、A3與A4位置上的任何取代基獨(dú)立地選自Ra。在某些通式II化合物中，每一Ra獨(dú)立選自氨基、氰基、鹵素、C1-C6鹵代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷氧基、C1-C6烷基磺?；騿位蚨?C1-C6烷基)磺酰氨基。例如，在一些所述化合物中，A1與A2為CH，A3與A4獨(dú)立地為CH或CRa。又在另一些化合物中，每一A1、A2、A3與A4均為CH。
通式II中的X通常為CRx或N。在某些化合物中，X為CRx。代表性的Rx基團(tuán)包括，例如，氫、鹵素、硝基、甲基磺?；?、甲基、乙基或氨基。
某些具有通式II的化合物進(jìn)一步滿足次通式IIa 通式IIa其中B1與B5獨(dú)立地為CH或N；B2、B3與B4獨(dú)立地為CH或CRb，其中，每一個(gè)Rb獨(dú)立地選自鹵素、氨基、氰基、-COOH、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6烷基磺酰基或單或二(C1-C6烷基)磺酰氨基；以及R3為C1-C4烷基、C2-C6烷基醚、單或二(C1-C6烷基)氨基、吡咯烷基、嗎啉基、哌啶基、哌嗪基，且每一基團(tuán)經(jīng)0至2個(gè)取代基所取代，所述取代基獨(dú)立選自鹵素、氨基、羥基、C1-C4烷基、氰基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷基或單或二(C1-C6烷基)氨基。
在通式Iia的某些化合物中，B2是經(jīng)鹵素、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷氧基、或C1-C6鹵代烷基取代的碳；以及R2是叔丁基或三氟甲基。
通式II代表性的化合物包括但不限制于(4-叔丁基-苯基)-[4-異丁氧甲基-6-(3-甲氧基-苯基)-[1，3，5]三嗪-2-基]胺、(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-甲氧基-苯基)-2，5-二甲基-嘧啶-4-基]胺、(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-甲氧基-苯基)-5-甲基-2-嗎啉-4-基-嗎啉基-4-基]胺、[6-(3-甲氧基-苯基)-2，5-二甲基-嘧啶-4-基]-(4-三氟甲基-苯基)胺、[6-(3-甲氧基-苯基)-5-甲基-2-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基]-(4-三氟甲基-苯基)胺或(4-叔丁基-苯基)-[5-甲烷磺?；?6-(3-甲氧基-苯基)-2-甲基-嘧啶-4-基]胺。
在某些實(shí)施方案中，具有通式I的VR1調(diào)節(jié)劑進(jìn)一步滿足通式III 通式III或其藥學(xué)上可接受的形式，其中Rx為鹵素、C1-C6烷基、氨基、硝基、氰基、C1-C6烷磺?；位蚨?C1-C6烷基)磺酰氨基、或者單或二(C1-C6烷基)氨基；Y為CRy或N；Ry為氫或C1-C4烷基；A1、A2、A3與A4獨(dú)立地為CH或N；B1為CH、CRb或N；B3與B4獨(dú)立地為CH或CRb；B5為CH或N；Rb在每種情況下都獨(dú)立地選自鹵素、羥基、氨基、氰基、-COOH、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烷基醚、C2-C6烷酰基、C3-C6烷酮、C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基、單或二(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷磺酰基、單或二(C1-C6烷基)磺酰氨基或單或二(C1-C6烷基)氨基羰基；
R2為鹵素、氨基、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基、C1-C6烷磺酰基、或者單或二(C1-C6烷基)磺酰氨基；R4為鹵素、氰基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、或C1-C6鹵代烷氧基；R3是選自(i)氫、鹵素或氰基；以及(ii)C1-C6烷基及具有下面通式的基團(tuán) 或 其中，L為鍵或C1-C6亞烷基；M為鍵或C1-C6亞烷基；R5與R6是(a)獨(dú)立地選自氫、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C3-C8環(huán)烷基或與L結(jié)合形成5至7元雜環(huán)烷基的基團(tuán)，且R5與R6至少一個(gè)不為氫；或(b)結(jié)合形成5至7元雜環(huán)烷基；以及R7為氫、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C3-C8環(huán)烷基、C2-C6烷?；⒒蚺cL結(jié)合形成5至7元雜環(huán)烷基的基團(tuán)；其中，每一(ii)是經(jīng)0至3個(gè)取代基所取代，所述取代基獨(dú)立地選自下述基團(tuán)鹵素、氰基、氨基、羥基、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷基、以及單與二(C1-C6烷基)氨基。
在通式III的某些化合物中，一或多個(gè)變量如下所示Rx為鹵素、硝基、甲基磺?；?、甲基、乙基、或氨基；A1為N或CH；A2、A3與A4每一均為CH；B1為CH或N；R2為C1-C4烷基、C3-C7環(huán)烷基或C1-C4鹵代烷基；R3為氫或C1-C6烷基；每一Ra獨(dú)立地選自氨基、氰基、鹵素、C1-C6鹵代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷氧基、C1-C6烷基磺?；騿位蚨?C1-C6烷基)磺酰氨基；和/或Y為N。
在通式III的某些化合物中，R4為鹵素、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、或C1-C4鹵代烷氧基。代表性的R4基團(tuán)包括，例如，C1-C2烷氧基或C1-C2鹵代烷氧基。在某些實(shí)施方案中，若R4為C1-C6烷氧基，則B3與B4中至少一個(gè)不為經(jīng)C1-C6烷氧基所取代的碳。
某些通式III的化合物進(jìn)一步滿足通式IIIa 通式IIIa其中R2為C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4鹵代烷氧基、C1-C4烷磺?；?、或者單或二(C1-C4烷基)磺酰氨基；R3為氫、鹵素、C1-C4烷基、單或二(C1-C6烷基)氨基、吡咯烷基、嗎啉基、哌啶基、或哌嗪基，且每一基團(tuán)經(jīng)0至2個(gè)取代基所取代，所述取代基獨(dú)立選自鹵素、氨基、羥基、C1-C4烷基、氰基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷基或單或二(C1-C6烷基)氨基；R4為氫、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或C1-C4鹵代烷氧基；以及B1與B5獨(dú)立地為CH或N。
在某些式IIIa的某些化合物中，R4為C1-C2烷氧基或C1-C2鹵代烷氧基；及R2為叔丁基或三氟甲基。
通式IIIa代表性的化合物包括，但不限制于2-[6-(3-甲氧基-苯基)-5-硝基-嘧啶-4-基氨基]酚；2-[6-(3-甲氧基-苯基)-5-硝基-嘧啶-4-基氨基]-5-三氟甲基酚；(4-叔丁基-苯基)-[5-乙基-6-(3-甲氧基-苯基)嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[5-甲烷磺?；?6-(3-甲氧基-苯基)-2-甲基-嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-甲氧基-苯基)-2，5-二甲基-嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-甲氧基-苯基)-5-甲基-2-嗎啉-4-基嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-甲氧基-苯基)-5甲基-嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(5-甲氧基-吡啶-3-基]-5-甲基-嘧啶-4-基]胺；[5-乙基-6-(3-甲氧基-苯基)嘧啶-4-基]-(4-三氟甲基-苯基)胺；[6-(3-甲氧基-苯基)-2，5-二甲基-嘧啶-4-基]-(4-三氟甲基-苯基)胺；[6-(3-甲氧基-苯基)-5-甲基-2-嗎啉-4-基嘧啶-4-基]-(4-三氟甲基-苯基)胺；6-(3-甲氧基-苯基)-N4-(4-三氟甲基-苯基)嘧啶-4，5-二胺；N4-(4-環(huán)己基-苯基)-6-(3-甲氧基-苯基)嘧啶-4，5-二胺；以及N4-(4-叔丁基-苯基)-6-(3-甲氧基-苯基)嘧啶-4，5-二胺。
在某些實(shí)施方案中，通式I的VR1調(diào)節(jié)劑進(jìn)一步滿足通式IV 通式IV或其藥學(xué)上可接受的形式，其中Rx為氫、鹵素、C1-C6烷基、氨基、硝基、C1-C6烷磺酰基、單或二(C1-C6烷基)磺酰氨基、或者單或二(C1-C6烷基)氨基；A1、A2、A3與A4獨(dú)立地為CH或N；B1至B5獨(dú)立地為CH、CRb或N；且B1至B5中有一個(gè)且僅有一個(gè)為CRb；Rb為鹵素、羥基、氨基、氰基、-COOH、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烷基醚、C2-C6烷?；?、C3-C6烷酮、C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基、單或二(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基磺酰基、單或二(C1-C6烷基)磺酰氨基、或者單或二(C1-C6烷基)氨基羰基；R2為鹵素、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基、C1-C6烷基磺酰基、或者單或二(C1-C6烷基)磺酰氨基；以及R3是選自(i)氫、鹵素或氰基；以及(ii)C1-C6烷基或具有下面通式的基團(tuán) 或 其中，L為鍵或C1-C6亞烷基；M為鍵或C1-C6亞烷基；
R5與R6是(a)獨(dú)立地選自氫、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C3-C8環(huán)烷基或與L結(jié)合形成5至7元雜環(huán)烷基的基團(tuán)，且R5與R6至少一個(gè)不為氫；或(b)結(jié)合形成5至7元雜環(huán)烷基；以及R7為氫、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C3-C8環(huán)烷基、C2-C6烷酰基、或與M結(jié)合形成5至7元雜環(huán)烷基的基團(tuán)；其中，每一(ii)經(jīng)0至3個(gè)取代基所取代，所述取代基獨(dú)立地選自下述基團(tuán)的鹵素、氰基、氨基、羥基、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷基、或單或二(C1-C6烷基)氨基。
某些式IV化合物的一或多個(gè)變量是如下所示Rx為氫、鹵素、硝基、甲基、乙基、甲磺?；⒒虬被?；Rb為氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或C1-C4鹵代烷氧基；R2為C1-C4烷基、C3-C7環(huán)烷基或C1-C4鹵代烷基；R3為氫；或C1-C6烷基、氨基、單或二(C1-C4烷基)氨基、吡咯烷基、嗎啉基、哌啶基、哌嗪、或全氫吖庚因基基，且每一基團(tuán)經(jīng)0至3個(gè)取代基所取代，所述取代基獨(dú)立選自鹵素、氰基、氨基、羥基或C1-C4烷基；和/或B1與B5獨(dú)立地為CH或N。
通式IV代表性的化合物包括，但不限制于2-[6-(3-甲氧基-苯基)-5-硝基-嘧啶-4-基氨基]-5三氟甲基-酚；2-[6-(3-甲氧基-苯基)-5-硝基-嘧啶-4-基氨基]-酚；-叔丁基-苯基)-(6-間甲苯基嘧啶-4-基)胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(2-甲氧基-苯基)嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(2-三氟甲基-苯基)嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-乙氧基-苯基)嘧啶-4-基]胺；6-(3-甲氧基-苯基)-N4-(4-三氟甲基-苯基)嘧啶-4，5-二胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-氟-苯基)嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-甲氧基-苯基)嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-三氟甲氧基-苯基)嘧啶-4-基]胺、(4-叔丁基-苯基)-[6-(4-氯-苯基)嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[5-甲烷磺?；?6-(3-甲氧基-苯基)-2-甲基-嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(4-甲氧基-苯基)嘧啶-4-基]胺或N4-(4-環(huán)己基-苯基)-6-(3-甲氧基-苯基)嘧啶-4，5-二胺。
在某些實(shí)施例中，具有通式I的VR1調(diào)節(jié)劑進(jìn)一步滿足通式V 通式V或其藥學(xué)上可接受的形式，其中Rx為鹵素、C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷基磺?；位蚨?C1-C6烷基)磺酰氨基、或者單或二(C1-C6烷基)氨基；Y為CRy或N；Ry為氫或C1-C4烷基；A1至A4獨(dú)立地為CH、CRa或N；B1、B2、B3、B4與B5獨(dú)立地為CH、CRb或N；Ra與Rb在每種情況下都獨(dú)立地選自鹵素、羥基、氨基、氰基、-COOH、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烷基醚、C2-C6烷?；?、C3-C6烷酮、C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基、單或二(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基磺酰基、單或二(C1-C6烷基)磺酰氨基、或者單或二(C1-C6烷基)氨基羰基；R2為鹵素、羥基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、C2-C6烷基醚、C2-C6烷?；3-C6烷酮、C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基、單或二(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基磺?；?、單或二(C1-C6烷基)磺酰氨基、或者單或二(C1-C6烷基)氨基羰基；以及R3是選自(i)氫、鹵素或氰基；以及(ii)C1-C6烷基及具有下面通式的基團(tuán) 或 其中，L為鍵或C1-C6亞烷基；R5與R6是(a)獨(dú)立地選自氫、C1-C6烷基、C1-C6烯基或C3-C8環(huán)烷基；或
(b)結(jié)合形成5至7元雜環(huán)烷基；且如果L為C1-C6烷基，則R5及R6結(jié)合形成雜環(huán)烷基；M為鍵或C1-C6亞烷基；以及R7為氫、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C3-C8環(huán)烷基、C2-C6烷?；?、或與M結(jié)合形成5至7元雜環(huán)烷基的基團(tuán)；其中，每一(ii)經(jīng)0至3個(gè)取代基所取代，所述取代基獨(dú)立地選自下述基團(tuán)鹵素、氰基、氨基、羥基、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷基或單或二(C1-C6烷基)氨基。
通式V的某些化合物中的一或多個(gè)變量如下所示Rx為氫、甲基、乙基、硝基、甲磺酰基、或氨基；Y為N；A1與A3獨(dú)立地為CH或N；每一Rb獨(dú)立地為氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或C1-C4鹵代烷氧基；R2為鹵素、氨基、氰基、C1-C4烷基、C3-C7環(huán)烷基或C1-C4鹵代烷基；和/或R3為氫，或C1-C4烷基醚或N-嗎啉基。
代表性的通式V化合物包括，但不限制于(4-叔丁基-苯基)-[5-乙基-6-(3-甲氧基-苯基)嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[5-甲烷磺酰基-6-(3-甲氧基-苯基)-2-甲基-嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-甲氧基-苯基)-2，5-二甲基-嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-甲氧基-苯基)-5-甲基-2-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-甲氧基-苯基)-5-甲基-嘧啶-4-基]胺、(4-叔丁基-苯基)-[6-(5-甲氧吡啶-3-基)-5-甲基-嘧啶-4-基]胺；[5-乙基-6-(3-甲氧基-苯基)嘧啶-4-基]-(4-三氟甲基-苯基)胺；[6-(3-甲氧基-苯基)-2，5-二甲基-嘧啶-4-基]-(4-三氟甲基-苯基)胺；[6-(3-甲氧基-苯基)-5-甲基-2-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基]-(4-三氟甲基-苯基)胺；2-[6-(3-甲氧基-苯基)-5-硝基-嘧啶-4-基氨基]-5-三氟甲基酚、2-[6-(3-甲氧基-苯基)-5-硝基-嘧啶-4-基氨基]酚；6-(3-甲氧基-苯基)-N4-(4-三氟甲基-苯基)-嘧啶-4，5-二胺；N4-(4-環(huán)己基-苯基)-6-(3-甲氧基-苯基)嘧啶-4，5-二胺；或N4-(4-叔丁基-苯基)-6-(3-甲氧基-苯基)嘧啶-4，5-二胺。
在某些實(shí)施方案中，具有通式I的VR1調(diào)節(jié)劑進(jìn)一步滿足通式VI
通式VI或其藥學(xué)上可接受的形式，其中X為CRx或N；Rx為氫、鹵素、C1-C6烷基、氰基、氨基、硝基、C1-C6烷基磺?；位蚨?C1-C6烷基)磺酰氨基、或者單或二(C1-C6烷基)氨基；A1與A3獨(dú)立地為CH或N；A2與A4獨(dú)立地為CH、CRa或N；B1、B2、B3、B4與B5獨(dú)立地為CH、CRb或N；Ra與Rb在每種情況下都獨(dú)立地選自鹵素、羥基、氨基、氰基、-COOH、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烷基醚、C2-C6烷酰基、C3-C6烷酮、C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基、單或二(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷磺?；?、單或二(C1-C6烷基)磺酰氨基、或者單或二(C1-C6烷基)氨基羰基；R2為羥基、氰基、C2-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、C2-C6烷基醚、C2-C6烷?；?、C3-C6烷酮、C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基、單或二(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷磺?；?、單或二(C1-C6烷基)磺酰氨基、或者單或二(C1-C6烷基)氨基羰基；以及R3為C1-C6烷基。
在通式VI的某些化合物中的一或多個(gè)變量如下所示X為CRx；且Rx為氫、鹵素、甲基、乙基、硝基、甲磺?；?、或氨基；每一Rb獨(dú)立地為氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、或C1-C4鹵代烷氧基；B1與B5獨(dú)立地為CH或N；B2、B3與B4中至少一個(gè)為CRb；至少一Rb為C1-C4烷氧基；R2為異丙基、叔丁基、三氟甲基、或環(huán)己基；以和/或R3為甲基。
通式VI代表性的化合物包括，但不限制于(4-叔丁基-苯基)-[5-甲烷磺?；?6-(3-甲氧基-苯基)-2-甲基-嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-甲氧基-苯基)-2，5-二甲基-嘧啶-4-基]胺；及[6-(3-甲氧基-苯基)-2，5-二甲基-嘧啶-4-基]-(4-三氟甲基-苯基)胺。
本發(fā)明所提供的代表性化合物包括，但不限定于，在實(shí)施例1至3中專門描述的那些。顯然地，本發(fā)明所述的特定化合物僅作為說明代表，而非用以限制本發(fā)明范圍。再者，如上所述，本發(fā)明的所有化合物可以游離的堿或其藥學(xué)上可接受的形式存在，例如水合物或藥學(xué)上可接受的酸加成鹽類。
如使用體外VR1配位體結(jié)合試驗(yàn)和/或功能性試驗(yàn)(例如鈣移動(dòng)試驗(yàn)、背根神經(jīng)節(jié)試驗(yàn)或體內(nèi)疼痛緩解試驗(yàn))所測定的那樣，本發(fā)明提供的經(jīng)取代的嘧啶-4-基胺類似物可檢測地改變(調(diào)節(jié))VR1活性。本發(fā)明中有關(guān)“VR1配位體結(jié)合試驗(yàn)”，意欲參照例如實(shí)施例5所提供的標(biāo)準(zhǔn)活體外受體結(jié)合試驗(yàn)；“鈣移動(dòng)試驗(yàn)”(在本發(fā)明中也稱為“訊息傳導(dǎo)試驗(yàn)”)可如依實(shí)施例6所述進(jìn)行。簡單而言，為了評估對VR1的結(jié)合，可進(jìn)行競爭性結(jié)合試驗(yàn)，在所述試驗(yàn)中將VR1制劑與經(jīng)標(biāo)記(例如，125I或3H)的要與VR1(例如，辣椒素受體促效劑如RTX)結(jié)合的化合以及未標(biāo)示的測試化合物一起培養(yǎng)。在本發(fā)明提供的試驗(yàn)中，所用VR1優(yōu)選為哺乳類的VR1，更優(yōu)選為人類或大鼠的VR1。受體可經(jīng)重組表達(dá)或自然表達(dá)。例如，VR1制劑可得自重組表現(xiàn)人類VR1的HEK293或CHO細(xì)胞的細(xì)胞膜制劑。與可檢測地調(diào)節(jié)類香草醇配位體與VR1結(jié)合的化合物一起培養(yǎng)會(huì)造成與VR1制劑結(jié)合的標(biāo)記量相對于化合物不存在下結(jié)合的標(biāo)記量的降低或增加。如本發(fā)明所述，所述這種降低或增加可用于測定VR1的Ki。一般而言，優(yōu)選的化合物能降低與VR1制劑結(jié)合的標(biāo)記量。
如上所述，在某些實(shí)施例中，作為VR1拮抗劑的化合物為優(yōu)選的。所述化合物的IC50值，可使用如實(shí)施例6所提供的體外VR1介導(dǎo)的鈣移動(dòng)試驗(yàn)予以測定。簡而言之，使表現(xiàn)辣椒素受體的細(xì)胞與所關(guān)注的化合物及細(xì)胞內(nèi)鈣濃度指示劑(例如，細(xì)胞膜滲透鈣敏感染料如Fluo-3或Fura-2(例如，二者均可購自Molecular Probes公司，Eugene，OR)，它們與Ca++結(jié)合時(shí)，均產(chǎn)生熒光訊號)接觸。此接觸優(yōu)選利用使細(xì)胞在包含化合物和/或溶于溶液中的指示劑的緩沖液或培養(yǎng)基中培養(yǎng)一或多次來進(jìn)行。將所述接觸維持足夠長的時(shí)間，以容許染料進(jìn)入細(xì)胞中(例如，1至2小時(shí))。將細(xì)胞洗滌或過濾以去除過量染料，然后與濃度一般等于EC50濃度的類香草醇受體促效劑(例如，辣椒素、RTX或歐瓦尼)接觸，接著測定熒光反應(yīng)。當(dāng)接觸促效劑的細(xì)胞與VR1拮抗劑化合物接觸時(shí)，與測試化合物不存在下與促效劑接觸的細(xì)胞相比，其熒光反應(yīng)通常減少至少20％，優(yōu)選為至少50％及更優(yōu)選為至少80％。本發(fā)明所提供VR1拮抗劑的IC50值，優(yōu)選為小于1微摩爾濃度、小于100納摩爾濃度、小于10納摩爾濃度或小于1納摩爾濃度。
在其它實(shí)施例中，辣椒素受體促效劑的化合物為優(yōu)選的。辣椒素受體促效劑活性通?？赏ㄟ^實(shí)施例6所述予以測定。當(dāng)細(xì)胞與1微摩爾濃度的VR1促效劑化合物接觸時(shí)，其熒光反應(yīng)通常較細(xì)胞與100納摩爾濃度辣椒素接觸時(shí)所觀察到的增加，增加至少30％。本發(fā)明所提供得VR1促效劑的EC50值優(yōu)選為小于1微摩爾濃度、小于100納摩爾濃度或小于10納摩爾濃度。
或者，VR1的調(diào)節(jié)活性也可使用如實(shí)施例9所提供的經(jīng)培養(yǎng)的背根神經(jīng)節(jié)試驗(yàn)，和/或如實(shí)施例10所提供的活體內(nèi)疼痛緩解試驗(yàn)予以評估。本發(fā)明提供的化合物優(yōu)選為在本發(fā)明提供的一或多個(gè)功能性試驗(yàn)中對VR1活性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的特定影響的化合物。
在某些實(shí)施例中，本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑實(shí)質(zhì)上不能調(diào)節(jié)配位體與其它細(xì)胞表面受體(例如，人類上皮細(xì)胞生長因子受體酪胺酸激酶或煙堿酸乙酰膽堿受體)的結(jié)合。換句話說，所述調(diào)節(jié)劑實(shí)質(zhì)上不能抑制細(xì)胞表面受體活性，例如人類上皮細(xì)胞生長因子受體酪胺酸激酶或煙堿酸乙酰膽堿受體(例如，此受體的IC50或IC40較佳為大于1微摩爾濃度，最佳為大于10微摩爾濃度)。優(yōu)選地，調(diào)節(jié)劑在0.5微摩爾濃度、1微摩爾濃度或更優(yōu)選為10微摩爾濃度下，不能可檢測地抑制人類上皮細(xì)胞生長因子受體活性或煙堿酸乙酰膽堿受體活性。測定細(xì)胞表面受體活性的試驗(yàn)為市售可購得，包括購自Panvera公司(威斯康辛Madison市)的酪胺酸激酶試驗(yàn)測試套組。
本發(fā)明提供的優(yōu)選的VR1調(diào)節(jié)劑為非鎮(zhèn)靜性。換句話說，在測定疼痛緩解的動(dòng)物模式(例如，本發(fā)明實(shí)施例10提供的模式)中足以提供止痛的最小劑量的兩倍的VR1調(diào)節(jié)劑劑量在動(dòng)物模式鎮(zhèn)靜試驗(yàn)中(使用Fitzgerald等人，Toxicology 49(2-3)433-9(1988)敘述的方法)只引起短暫(例如，持續(xù)不超過疼痛緩解持續(xù)的時(shí)間的1/2)，或優(yōu)選為無統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的鎮(zhèn)靜作用。優(yōu)選地，足以提供止痛的最小劑量的五倍劑量不會(huì)產(chǎn)生統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的鎮(zhèn)靜作用。更優(yōu)選地，本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑在小于25mg/kg(優(yōu)選為小于10mg/kg)的靜脈內(nèi)劑量，或小于140mg/kg(優(yōu)選為小于50mg/kg，更優(yōu)選為小于30mg/kg)的口服劑量，都不能產(chǎn)生鎮(zhèn)靜作用。
若有需要，可對本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑進(jìn)行某些藥理性質(zhì)評估，包括但不限定于，口服生物利用度(優(yōu)選的化合物為可口服生物利用的，并且口服利用的程度為在口服劑量為140mg/kg，優(yōu)選為小于50mg/kg，更優(yōu)選為小于30mg/kg，又更優(yōu)選為小于10mg/kg，尚又更優(yōu)選為小于1mg/kg，及最優(yōu)選為小于0.1mg/kg的口服劑量下就可得到所述化合物的有效治療濃度)、毒性(優(yōu)選的VR1調(diào)節(jié)劑是在向患者給藥時(shí)辣椒素受體調(diào)節(jié)量不具毒性)、副作用(優(yōu)選的VR1調(diào)節(jié)劑是在向患者給藥時(shí)，所述化合物的治療有效量會(huì)產(chǎn)生與寬慰劑類似的副作用)、血清蛋白結(jié)合作用及體外與體內(nèi)半衰期(優(yōu)選的VR1調(diào)節(jié)劑具有的體外半衰期與Q.I.D.給藥，優(yōu)選為T.I.D.給藥，更優(yōu)選為B.I.D.給藥，及最優(yōu)選為一天給藥一次的體內(nèi)半衰期相等)。此外，血腦障壁的差異滲透性對于用于治療疼痛的VR1調(diào)節(jié)劑而言可能符合所需，其利用調(diào)節(jié)CNS VR1活性使得如上所述的口服總每日劑量提供所述調(diào)節(jié)作用至治療有效的程度，同時(shí)用于治療末梢神經(jīng)介導(dǎo)的疼痛的VR1調(diào)節(jié)劑在腦中的低含量可能是優(yōu)選的(也即，所述劑量不會(huì)提供足以顯著地調(diào)節(jié)VR1活性的化合物在腦(例如，腦脊髓液)中的含量)?？墒褂么隧?xiàng)技術(shù)中悉知的常規(guī)試驗(yàn)來評估上述性質(zhì)，及鑒定特別用途的優(yōu)異化合物。例如，用于預(yù)測生物利用度的試驗(yàn)，包括越過人類單層腸細(xì)胞(包括Caco-2單層細(xì)胞)的運(yùn)送。化合物在人體的血腦障壁的滲透性可由給藥該化合物(例如，經(jīng)由靜脈)的實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物的所述化合物在腦中的含量予以預(yù)測。血清蛋白結(jié)合可通過蛋白結(jié)合試驗(yàn)進(jìn)行預(yù)測?；衔锇胨テ谂c所需劑量頻率成反比。化合物的活體外半衰期可通過本發(fā)明實(shí)施例7敘述的微粒體半衰期試驗(yàn)予以預(yù)測。
如上所述，本發(fā)明提供的優(yōu)選VR1的調(diào)節(jié)劑不具毒性。一般而言，應(yīng)了解本發(fā)明所用的“不具毒性”一詞為相對意義，是指由美國食品藥物管理局(FDA)認(rèn)可的給藥哺乳動(dòng)物(優(yōu)選為人類)用，或與已建立的準(zhǔn)則一致，F(xiàn)DA易認(rèn)可的給藥哺乳動(dòng)物(優(yōu)選為人類)用的任何物質(zhì)。此外，高度優(yōu)選的不具毒性的化合物滿足一或多個(gè)下述準(zhǔn)則(1)基本上不抑制細(xì)胞ATP的產(chǎn)生；(2)不顯著延長心臟QT間隔；(3)基本上不引起肝臟擴(kuò)大；或(4)不引起肝臟酶的大量釋放。
本發(fā)明所用“基本上不抑制細(xì)胞ATP的產(chǎn)生”的VR1調(diào)節(jié)劑，是滿足本發(fā)明實(shí)施例8所制訂的準(zhǔn)則的化合物。換句話說，如實(shí)施例8所述，使用100μM所述化合物處理細(xì)胞時(shí)，與未處理的細(xì)胞中檢出的ATP量相比，處理的細(xì)胞呈現(xiàn)出至少50％的ATP量。在更高度優(yōu)選的實(shí)施例中，所述細(xì)胞檢出的ATP量為未處理細(xì)胞的至少80％。
“不顯著延長心臟QT間隔”的VR1調(diào)節(jié)劑是在給藥產(chǎn)生治療效果的體內(nèi)濃度的最小劑量的兩倍后，對天竺鼠、迷你豬或狗不造成統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的延長心臟QT間隔(如心電圖所測定)的化合物。在某些優(yōu)選具體實(shí)例中，經(jīng)非腸道給藥或經(jīng)口給藥0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、40或50mg/kg的劑量不會(huì)造成統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的延長心臟QT間隔。所謂“統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著”意指當(dāng)使用統(tǒng)計(jì)顯著性的標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)試驗(yàn)，例如學(xué)生T試驗(yàn)(student’s T test)測定時(shí)，在p＜0.1或更優(yōu)選在p＜0.5的顯著水準(zhǔn)下，與對照組結(jié)果不同。
若以產(chǎn)生治療效果的體內(nèi)濃度的最小劑量兩倍來每日治療實(shí)驗(yàn)室嚙齒類動(dòng)物(例如，小鼠或大鼠)5至10天后，其造成肝臟對體重比的增加不大于相配對照組的100％，則稱該VR1調(diào)節(jié)劑“基本上不引起肝臟擴(kuò)大”。在更高度優(yōu)選的實(shí)施例中，相對于相配對照組，所述劑量不引起大于75％或50％的肝臟擴(kuò)大。若用于非嚙齒類哺乳動(dòng)物(例如，狗)，則所述劑量相對于相配對照組，必須不造成肝臟對體重比的增加大于50％，優(yōu)選為不大于25％，更優(yōu)選為不大于10％。所述試驗(yàn)中的優(yōu)選劑量包括經(jīng)非腸道給藥或經(jīng)口服給藥0.01、0.05、0.1、0.5、1、5、10、40或50mg/kg。
同樣地，如果給藥能產(chǎn)生治療效果的體內(nèi)濃度的最小劑量的兩倍是，與相配的模擬處理對照組相比，VR1調(diào)節(jié)劑沒有提高實(shí)驗(yàn)室嚙齒類動(dòng)物的ALT、LDH或AST在血清中的含量100％以上，則稱該VR1調(diào)節(jié)劑“不促進(jìn)肝臟酶的大量釋放”。在更高度優(yōu)選的實(shí)施例中，相對于相配對照組，所述劑量不提高所述血清含量的75％以上或50％以上。或者，如果在活體外肝細(xì)胞試驗(yàn)中，相等于所述化合物的最小體內(nèi)治療濃度兩倍的濃度(在活體外與肝細(xì)胞接觸及培養(yǎng)的培養(yǎng)基或其它所述溶液中)不引起任何所述肝臟酶可檢測地釋放進(jìn)入培養(yǎng)基中以至于高于相配模擬處理的對照組細(xì)胞培養(yǎng)基中觀察到的基線量以上，則稱該VR1調(diào)節(jié)劑“不促進(jìn)肝臟酶的大量釋放”。在更高度優(yōu)選的實(shí)施例中，當(dāng)所述化合物濃度為該化合物最小活體內(nèi)治療濃度時(shí)的五倍，優(yōu)選為十倍時(shí)，仍無任何所述肝臟酶可檢測的釋放到培養(yǎng)基中以至于超過基線量。
在其它實(shí)施例中，某些優(yōu)選的VR1調(diào)節(jié)劑在等于最小治療有效的體內(nèi)濃度時(shí)，不抑制或誘發(fā)微粒體細(xì)胞色素P450酶活性，例如CYP1A2活性、CYP2A6活性、CYP2C9活性、CYP2C19活性、CYP2D6活性、CYP2E1活性或CYP3A4活性。
某些優(yōu)選的VR1調(diào)節(jié)劑在等于最小治療有效的活體內(nèi)濃度時(shí)不具基因破壞性(clastogenic)(例如，如使用小鼠紅血球前身細(xì)胞(erythrocyteprecursor cell)的微核試驗(yàn)、Ames微核試驗(yàn)、螺旋微核試驗(yàn)等所測定)。在其它實(shí)施例中，在所述濃度下，某些優(yōu)選的VR1調(diào)節(jié)劑不誘發(fā)同源染色單體交換(例如，在中國倉鼠卵巢細(xì)胞中)。
為了檢測目的，如下文更具細(xì)節(jié)的討論，本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑可進(jìn)行同位素標(biāo)記或放射標(biāo)記。例如，通過式I至III列舉的化合物，可有一或多個(gè)原子，以原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)與一般自然界發(fā)現(xiàn)的原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)不同的相同元素的原子置換。能出現(xiàn)在本發(fā)明所提供的化合物中的同位素實(shí)例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟及氯的同位素，例如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F及36Cl。此外，以重同位素例如氘(也即，2H)置換，由于代謝穩(wěn)定性較高，例如體內(nèi)半衰期增加或劑量需求減少，所以能提供某些治療優(yōu)點(diǎn)，因此，在一些情形下優(yōu)選使用。
VR1調(diào)節(jié)劑制備經(jīng)取代的嘧啶-4-基胺類似物通?？墒褂贸Ｒ?guī)合成方法予以制備。起始物質(zhì)可自供貨商例如Sigma-Aldrich公司(密蘇里St.Louis市)購得，或可使用已建立的流程由市售的前體合成。舉例而言，可使用與下文任何圖式1至4所示的相同合成途徑，以及有機(jī)化學(xué)合成技藝中已知的合成方法，或在此項(xiàng)技術(shù)領(lǐng)域具有通常知識者所知的所述合成方法的變化形式。下文圖式中的各變量是參照與本發(fā)明所提供化合物的說明中一致的任何基團(tuán)。
下文圖式中，“催化劑”是指合適的過渡金屬催化劑，例如但不限定于四(三苯膦)鈀(0)、三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)(tris(dibenzylideneacetone)dipalladium(0))或乙酸鈀(II)。此外，催化劑系統(tǒng)可包含單芽配位體(monodentate)或螯合配位體，例如但不限定于2，2’-雙(二苯基膦基)-1，1’-聯(lián)萘、2，2’-雙(二環(huán)己基膦基)二苯醚、2-(二環(huán)己基膦基)聯(lián)苯、及三-叔丁基膦，也得包含堿例如K3PO4、Na2CO3或叔丁醇鉀或鈉。過渡金屬催化的反應(yīng)能使用各種惰性溶劑，包含但不限定于甲苯、二噁烷、二甲基甲酰胺(DMF)、N-甲基吡咯啶酮、乙二醇、二甲醚、二乙二醇二甲醚及乙腈，在常溫或高溫下進(jìn)行。通常使用的試劑/催化劑配對包括芳基硼酸/鈀(0)(Suzuki反應(yīng)；Miyaura andSuzuki(1995)Chemical Reviews 952457)與芳基三烷基錫烷/鈀(0)(Stille反應(yīng)；T.N.Mitchell，(1992)Synthesis 9803-815)、芳基鋅/鈀(0)與芳基格利那(Grignard)/鎳(II)。
以下圖式所用的其它定義為Ar 可任選經(jīng)取代的芳香族6元環(huán)BINAP (消旋性)-2，2’-雙(二苯基膦基)-1，1’-聯(lián)萘基Pd2(dba)3三(二亞芐基丙酮)二鈀封端撒PhNEt2二乙基-苯基-胺，本發(fā)明中也稱為N，N-二乙基苯胺或二乙基苯胺t-BuOK 叔丁醇鉀圖式1
圖式2 圖式3
在某些實(shí)施例中，VR1調(diào)節(jié)劑可含有一或多個(gè)不對稱碳原子，使得該化合物能以不同的立體異構(gòu)物形式存在。例如，所述形式能為消旋性或具光學(xué)活性的形式。如上文所述，所有立體異構(gòu)物均涵蓋在本發(fā)明范圍內(nèi)。然而，一般可能期望獲得單一鏡像異構(gòu)物(也即，具光學(xué)活性的形式)。制備單一鏡像異構(gòu)物的常規(guī)方法包括不對稱合成及消旋性異構(gòu)物的拆分。例如，消旋性異構(gòu)物的拆分能通過已知方法，諸如拆分劑存在下的結(jié)晶法，或使用例如手性高效液相(HPLC)管柱的層析法而達(dá)成。
化合物的放射性標(biāo)記可通過使用含有至少一個(gè)原子為放射性同位素的前體進(jìn)行其合成。各放射性同位素優(yōu)選為碳(例如，14C)、氫(例如，3H)、硫(例如，35S)、或碘(例如，125I)。以氚標(biāo)記的化合物也可經(jīng)由氚化乙酸中的鉑催化交換、氚化三氟乙酸中的酸催化交換、或以該化合物為基質(zhì)的使用氚氣的異相催化交換予以催化制備。此外，如果適當(dāng)，則某些前體可與氚氣進(jìn)行氚-鹵素交換、進(jìn)行不飽和鍵的氚氣還原、或使用硼氚化鈉進(jìn)行還原。放射性標(biāo)記化合物的制備也可向?qū)＞诤铣煞派湫詷?biāo)記探針化合物的放射性同位素供貨商訂購而便利地得到。
藥學(xué)組合物本發(fā)明也提供包含一或多種VR1調(diào)節(jié)劑、以及至少一種生理上可接受載體或賦形劑的藥學(xué)組合物。藥學(xué)組合物可包含，例如一或多種水、緩沖劑(例如，中性緩沖鹽液或磷酸鹽緩沖鹽液)、乙醇、礦物油、植物油、二甲亞砜(DMSO)、碳水化合物(例如，葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖)、甘露糖醇、蛋白質(zhì)、佐劑、多肽或氨基酸(例如甘胺酸)、抗氧化劑、螯合劑(例如EDTA)或谷光甘肽、和/或防腐劑。此外，本發(fā)明提供的藥學(xué)組合物中可(但并非需要)包含其它活性成分。
藥學(xué)組合物可進(jìn)行配制以供任何適當(dāng)給藥方式的用途，所述給藥方式包括例如局部、經(jīng)口、經(jīng)鼻、經(jīng)直腸或非腸道給藥。本發(fā)明所用非腸道的一詞，包括皮下、皮內(nèi)、血管(例如，靜脈)、肌內(nèi)、脊髓、顱內(nèi)、椎管內(nèi)、及腹腔內(nèi)注射，以及任何類似的注射或灌注技術(shù)。某些具體例中，以適用于口服用途的組合物為優(yōu)選。所述組合物包括，例如錠劑、片劑、菱形錠劑、水性或油性懸浮液、分散性粉劑或粒劑、乳液、硬或軟膠囊、或糖漿或酊劑(elixier)。又在其它具體例中，本發(fā)明組合物可配制成凍干物。對某些癥狀(例如，于治療諸如灼傷或癢等皮膚癥狀)而言，以供局部給藥的制劑為優(yōu)選。治療尿失禁及膀胱過動(dòng)時(shí)，以供直接給藥至膀胱(膀胱內(nèi)給藥)的制劑為優(yōu)選。
進(jìn)行口服給藥的組合物可進(jìn)一步包含一或多種成分，例如甜味劑、調(diào)味劑、著色劑和/或防腐劑，以提供具有良好口味的制劑。錠劑中含有活性成分，并摻合有適用于制造錠劑的生理上可接受的賦形劑。所述賦形劑包括，例如，惰性稀釋劑(例如，碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉)、造粒劑及崩解劑(例如，玉米淀粉或海藻酸)、黏合劑(例如，淀粉、明膠或阿拉伯膠)及潤滑劑(例如，硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石粉)。錠劑可不用包覆或得利用已知技術(shù)包覆以延緩于胃腸道內(nèi)的崩解與吸收，從而提供較長時(shí)間的持續(xù)作用。例如，可使用時(shí)間延緩物質(zhì)諸如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
供口服用途的制劑也可制成硬明膠膠囊形式，其中的活性成分與惰性固體稀釋劑(例如，碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土)混合；或制成軟明膠膠囊形式，其中的活性成分是與水或油介質(zhì)(例如，花生油、液態(tài)石蠟或橄欖油)混合。
水性懸浮液含有活性物質(zhì)，并摻有適用于制造水性懸浮液的賦形劑。所述賦形劑包括懸浮劑(例如，羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙甲基纖維素、海藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃耆膠與阿拉伯膠)；及分散劑或潤濕劑(例如，天然存在的磷脂類例如卵磷脂、環(huán)氧化物與脂肪酸的縮合產(chǎn)物例如硬脂酸聚氧伸乙酯、環(huán)氧乙烷與長鏈脂族醇的縮合產(chǎn)物例如十七伸乙基氧鯨蠟醇、環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸及己糖醇的部分酯的縮合產(chǎn)物例如聚氧伸乙基山梨糖醇單油酸酯、或環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸及己糖醇酐的部分酯的縮合產(chǎn)物例如聚伸乙基山梨聚糖單油酸酯)。水性懸浮液也可包含一或多種防腐劑例如對羥苯甲酸乙酯或?qū)αu苯甲酸正丙酯、一或多種著色劑、一或多種調(diào)味劑、及一或多種甜味劑例如蔗糖或糖精。
油性懸浮液可通過在植物油(例如，花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油)或礦物油例如液態(tài)石蠟中懸浮活性成分進(jìn)行配制。油性懸浮液可含有增稠劑例如蜜蠟、硬石蠟或鯨蠟醇?？商砑尤缟衔乃龅哪切┨鹞秳┖?或調(diào)味劑以提供美味的口服制劑。所述懸浮液可通過添加抗氧化劑(例如抗壞血酸)予以保存。
適用于通過添加水來制備水性懸浮液的分散性粉劑及粒劑是由活性成分摻合分散劑或潤濕劑、懸浮劑與一或多種防腐劑所制成。適當(dāng)?shù)姆稚┗驖櫇駝┘皯腋┰谏衔闹幸延欣?。也可存在其它賦形劑，例如甜味劑、調(diào)味劑與著色劑。
藥學(xué)組合物也可配制成水包油型乳液。油相可為植物油(例如，橄欖油或花生油)、礦物油(例如，液態(tài)石蠟)、或其混合物。適當(dāng)?shù)娜榛瘎┌ㄌ烊淮嬖诘哪z類(例如，阿拉伯膠或黃耆膠)、天然存在的磷脂類(例如，黃豆卵磷脂、及衍生自脂肪酸與己糖醇的酯或部分酯類)、酐類(例如山梨聚糖單油酸酯)、及衍生自脂肪酸與己糖醇的部分酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物(例如，聚氧伸乙基山梨聚糖單油酸酯)。乳液也得包含一或多種甜味劑和/或調(diào)味劑。
糖漿與酊劑可與甜味劑例如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖一起配制。所述制劑也可包含一或多種緩和劑、防腐劑、調(diào)味劑和/或著色劑。
供局部給藥的制劑典型地包含結(jié)合活性劑的局部載體，含或不含另外任選的成分。適當(dāng)?shù)木植枯d體及另外成分為此項(xiàng)技術(shù)中所悉知的，并且顯見地，載體的選擇取決于特定的物理形態(tài)及傳送方式。局部載體包括水；有機(jī)溶劑例如醇類(例如，乙醇或異丙醇)或甘油；二醇類(例如，丁二醇、異戊二醇或丙二醇)；脂族醇類(例如，羊毛脂)；水與有機(jī)溶劑的混合物及有機(jī)溶劑(例如醇)與甘油的混合物；脂質(zhì)為基底的物質(zhì)例如脂肪酸、?；视皖?包括油類例如礦物油，及天然或合成來源的脂肪)、磷酸甘油酯類、神經(jīng)鞘脂質(zhì)類及蠟類；蛋白質(zhì)為基底的物質(zhì)例如膠原蛋白及明膠；硅酮為基底的物質(zhì)(非揮發(fā)性與揮發(fā)性二者)；及烴為基底的物質(zhì)例如微囊海綿及聚合物基質(zhì)。組合物可進(jìn)一步包含一或多種適于改善所用制劑穩(wěn)定性或有效性的成分，例如穩(wěn)定劑、懸浮劑、乳化劑、黏度調(diào)整劑、膠凝劑、防腐劑、抗氧化劑、皮膚滲透增強(qiáng)劑、保濕劑及持續(xù)釋放物質(zhì)。所述成分的實(shí)例如Martindale--TheExtra Pharmacopoeia(倫敦Pharmaceutical Press出版，1993年)及Martin編著Remington’s Pharmaceutical Sciences中所述。制劑可包括微膠囊，例如羥甲基纖維素或明膠-微膠囊、微脂粒、白蛋白微球體、微乳液、納米粒子或納米膠囊。
局部制劑可制備成多種物理形態(tài)，包括例如固體、糊劑、乳霜、泡沫劑、洗劑、凝膠、粉劑、水溶液、及乳液。所述藥學(xué)上可接受形式的物理外觀及黏度是由制劑中乳化劑及黏度調(diào)整劑的存在與否及用量多少所控制的。固體通常堅(jiān)實(shí)且不具傾瀉性，通常配制成棒狀或條狀、或微粒狀；固體可為不透明或透明的，任選地可含有溶劑、乳化劑、保濕劑、軟化劑、芳香劑、染料/著色劑、防腐劑、及增加或加強(qiáng)最終產(chǎn)物效力的其它活性成分。乳霜及洗劑往往相似，主要是黏度不同；洗劑及乳霜均可為不透明、半透明或透明的，并常含有乳化劑、溶劑、黏度調(diào)整劑、以及保濕劑、軟化劑、芳香劑、染料/著色劑、防腐劑、及增加或加強(qiáng)最終產(chǎn)物效力的其它活性成分。凝膠能制備成具有很寬范圍的黏度，從濃稠或高黏度至稀薄或低黏度。像洗劑與乳霜一樣，這些制劑也可含有溶劑、乳化劑、保濕劑、軟化劑、芳香劑、染料/著色劑、防腐劑、及增加或加強(qiáng)最終產(chǎn)物效力的其它活性成分。液體比乳霜、乳液、或膠體稀薄，通常不含乳化劑。液體的局部制劑常含有溶劑、乳化劑、保濕劑、軟化劑、芳香劑、染料/著色劑、防腐劑、及增加或加強(qiáng)最終產(chǎn)物效力的其它活性成分。
適用于局部制劑用的乳化劑包括但不限定于離子性乳化劑、鯨蠟基硬脂酰醇、非離子性乳化劑例如聚氧伸乙基油基醚(polyoxyethyleneoleyl ether)、PEG-40硬脂酸酯、聚氧亞乙基鯨蠟基硬脂酰醇(ceteareth)-12、聚氧亞乙基鯨蠟基硬脂酰醇-20、聚氧亞乙基鯨蠟基硬脂酰醇-30、聚氧亞乙基鯨蠟基硬脂酰醇、PEG-100硬脂酸酯、及硬脂酸甘油酯。合適的黏度調(diào)整劑包括但不限定于保護(hù)性膠體或非離子性膠類(例如羥乙基纖維素、黃原膠、硅酸鋁鎂、硅石、微晶蠟、蜜蠟、石蠟、及棕櫚酸鯨蠟酯)。膠體組合物可通過添加膠凝劑例如幾丁聚糖、甲基纖維素、乙基纖維素、聚乙烯醇、聚季鹽類(polyquaterniums)、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙甲基纖維素、卡波姆(carbomer)、或氨化的甘草酸而制成。合適的界面活性劑包括但不限定于非離子、兩性、離子及陰離子界面活性劑。舉例而言，可在局部制劑中使用一或多種下列界面活性劑二甲基聚硅氧烷共聚醇(dimethicone copolyol)、聚山梨糖醇酯20、聚山梨糖醇酯40、聚山梨糖醇酯60、聚山梨糖醇酯80、月桂酰胺DEA、椰油酰胺DEA與椰油酰胺MEA、油基三甲銨內(nèi)酯、椰油酰胺丙基磷脂基PG-二硬脂氯(PG-dimonium chloride)、及月桂醇硫酸銨?？傻姆栏瘎┌ǖ幌薅ㄓ冢刮⑸飫?例如對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、山梨酸、苯甲酸、與甲醛)，以及物理穩(wěn)定劑與抗氧化劑(例如維生素E、抗壞血酸鈉/抗壞血酸及沒食子酸丙酯)。合適的保濕劑包括但不限定于，乳酸與其它羥基酸及其鹽、甘油、丙二醇、與丁二醇。合適的軟化劑包括羊毛脂醇、羊毛脂、羊毛脂衍生物、膽固醇、礦脂、新戊酸異硬脂酯礦物油。合適的芳香劑與著色劑包括但不限定于，F(xiàn)D&C紅色40號、FD&C黃色5號。其它可加入到局部制劑中的合適的另外成分包括但不限定于磨蝕劑、吸收劑、抗結(jié)塊劑、抗起泡劑、抗靜電劑、收斂劑(例如，金縷梅、醇與草本萃取物例如洋甘菊萃取物)、黏合劑/賦形劑、緩沖劑、螯合劑、薄膜形成劑、調(diào)理劑、推進(jìn)劑、遮光劑、pH調(diào)整劑及保護(hù)劑。
適用于凝膠制劑的局部載體實(shí)例為羥丙基纖維素(2.1％)；70/30異丙醇/水(90.9％)；丙二醇(5.1％)；及聚山梨糖醇酯80(1.9％)。適用于泡沫劑制劑的局部載體實(shí)例為鯨蠟醇(1.1％)；硬脂醇(0.5％)；季鹽52(0.1％)；丙二醇(2.0％)；乙醇95 PGF3(61.05％)；去離子水(30.05％)；P75烴推進(jìn)劑(4.30％)。所有百分比均為重量％。
典型的局部組合物的施藥方式包括使用手指的施敷法；使用物理施敷器(例如布、面紙、紗布、棉棒或刷子)的施敷法；噴霧法(包括水氣、氣溶液或泡沫噴霧法)；點(diǎn)滴器施敷法；淋灑；浸漬；及潤濕法。也可使用經(jīng)控制的釋放載體。
藥學(xué)組合物可制備成無菌注射用水性或油質(zhì)懸浮液。根據(jù)所用載體與濃度，調(diào)節(jié)劑能懸浮或溶解于載體中。這種組合物可使用例如那些以上所述的適當(dāng)分散劑、潤濕劑和/或懸浮劑，根據(jù)已知技術(shù)予以配制。所述的可接受的載體與溶劑可為水、1，3-丁二醇、林格氏溶液(Ringer’s solution)及等張氯化鈉溶液。此外，可使用無菌的固定油類作為溶劑或懸浮介質(zhì)。為了實(shí)現(xiàn)此目的，可使用任何溫和的固定油，包括合成的單或二甘油酯。此外，在注射用組合物的制備中可使用脂肪酸例如油酸；佐劑例如局部麻醉劑、防腐劑和/或緩沖劑能溶于載體中。
調(diào)節(jié)劑也可配制成栓劑(例如，供直腸給藥用)。所述組合物可通過將藥物與適當(dāng)?shù)臒o刺激性賦形劑混合而制得。所述賦形劑在常溫時(shí)為固體，在直腸溫度下為液體，因而在直腸中融化而釋出藥物。適當(dāng)?shù)馁x形劑包括，例如，可可脂及聚乙二醇類。
藥學(xué)組合物可配制成持續(xù)釋放型制劑(也即，給藥后緩慢釋放調(diào)節(jié)劑的如膠囊的制劑)。所述制劑通?？墒褂靡阎夹g(shù)予以制備，并利用例如，口服、直腸或皮下植入，或在靶位植入來給藥。所述制劑所使用的載體為生物兼容性的，也可為生物降解性的；優(yōu)選地，所述制劑能提供相當(dāng)固定的調(diào)節(jié)劑釋放量。持續(xù)釋放型制劑的調(diào)節(jié)劑含量取決于，例如，植入位置、釋放率與預(yù)期持續(xù)釋放時(shí)間、及所治療或預(yù)防的癥狀性質(zhì)。
除了上述給藥模式外或與上述給藥模式聯(lián)合使用，也可方便地將調(diào)節(jié)劑添加在食物或飲用水(例如，供給藥非人類動(dòng)物包括伴侶動(dòng)物(例如，狗與貓)及家畜用)中。可配制動(dòng)物飼料與飲用水，從而使動(dòng)物隨其膳食一起攝入適量組合物。也可方便地將組合物制成預(yù)混物，供添加在飼料或飲用水中。
調(diào)節(jié)劑通常以辣椒素受體調(diào)節(jié)量投用，優(yōu)選為以治療有效量投用。優(yōu)選的全身性劑量為每天每千克體重不高于50mg(例如，每天每kg體重約0.001mg至約50mg)，其中口服劑量通常比靜脈劑量高約5至20倍(例如，每天每千克體重0.01至40mg)。
可與載體物質(zhì)組合以產(chǎn)生單一劑量單位的活性成分用量依賴于例如所治療患者及具體給藥模式而不同。劑量單位通常含有介于約10微克與約500mg間的活性成分。最適劑量可使用此項(xiàng)技術(shù)中已知的常規(guī)測試法及程序予以建立。
藥學(xué)組合物可加以包裝，以供治療對VR1調(diào)節(jié)敏感的癥狀(例如，對暴露于類香草醇配位體、疼痛、癢、肥胖癥或尿失禁的治療)。經(jīng)包裝的藥學(xué)組合物可包含，裝有如本發(fā)明所述的至少一種VR1調(diào)節(jié)劑有效量的容器，及指示所含組合物用于治療患者對VR1調(diào)節(jié)有敏感癥狀的說明書(例如，標(biāo)簽)。
使用方法本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑可于活體外及活體內(nèi)的多種情況下用于改變辣椒素受體的活性和/或活化作用。在某些方面，VR1拮抗劑可用于抑制類香草醇配位體促效劑(諸如辣椒素和/或RTX)在體外或體內(nèi)與辣椒素受體的結(jié)合。一般而言，所述方法包括在溶于水性溶液中的類香草醇配位體存在下，或在適于該配位體與辣椒素受體結(jié)合的條件下，使辣椒素受體與本發(fā)明提供的一或多種VR1調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)量接觸的步驟。辣椒素受體可存在于溶液或懸浮液中(例如，分離的細(xì)胞膜或細(xì)胞制品中)，或者在培養(yǎng)或分離的細(xì)胞中。在某些實(shí)施例中，辣椒素受體由存在患者中的神經(jīng)元細(xì)胞所表達(dá)，且水性溶液為體液。優(yōu)選地，向動(dòng)物給藥一或多種VR1調(diào)節(jié)劑的量，以使該VR1調(diào)節(jié)劑類似物在該動(dòng)物至少一種體液中的治療有效濃度為1或小于1微摩爾濃度；優(yōu)選為500或小于500納摩爾濃度；更佳為100或小于100納摩爾濃度、50或小于50納摩爾濃度、20或小于20納摩爾濃度，或者10或小于10納摩爾濃度。例如，可以小于20mg/kg體重，優(yōu)選為小于5mg/kg體重，一些情形下為小于1mg/kg體重的劑量，給藥所述化合物。
本發(fā)明也提供調(diào)節(jié)，優(yōu)選為減少，細(xì)胞性辣椒素受體訊息傳導(dǎo)活性(也即，鈣傳導(dǎo))的方法。所述調(diào)節(jié)可通過使辣椒素受體(于體外或體內(nèi))與本發(fā)明所提供的辣椒素受體調(diào)節(jié)量的一或多種VR1調(diào)節(jié)劑，在適合該調(diào)節(jié)劑與受體結(jié)合的條件下接觸而達(dá)成。該受體可存在于溶液或懸浮液中、培養(yǎng)或分離的細(xì)胞制品中或患者的細(xì)胞中。例如，該細(xì)胞得為于動(dòng)物活體內(nèi)進(jìn)行活體內(nèi)接觸的神經(jīng)元細(xì)胞?；蛘?，該細(xì)胞可為在動(dòng)物活體內(nèi)進(jìn)行活體內(nèi)接觸的上皮細(xì)胞，例如膀胱上皮細(xì)胞(泌尿上皮細(xì)胞)或氣管上皮細(xì)胞。訊息傳導(dǎo)活性的調(diào)節(jié)可通過檢測對鈣離子傳導(dǎo)(也稱為鈣移動(dòng)或通量)的影響予以評估?；蛘?，可通過檢測以本發(fā)明所提供的一或多種VR1調(diào)節(jié)劑治療患者，通過癥狀(例如，疼痛、灼燒感、氣管收縮、炎癥、咳嗽、打嗝、癢、尿失禁或膀胱過動(dòng))的改變予以評估。
本發(fā)明所提供VR1調(diào)節(jié)劑，優(yōu)選為以口服或局部給藥方式給藥至患者(例如，人類)，并且當(dāng)調(diào)節(jié)VR1訊息傳導(dǎo)活性時(shí)，是存在于該患者的至少一種體液中。用于所述方法的優(yōu)選VR1調(diào)節(jié)劑在體液(例如血液)中是以1或小于1納摩爾濃度，優(yōu)選為100或小于100微微摩爾濃度，更優(yōu)選為20或小于20微微摩爾濃度進(jìn)行體外VR1訊息傳導(dǎo)活性調(diào)節(jié)；以1或小于微摩爾濃度，500或小于500納摩爾濃度，或者100或小于100納摩爾濃度進(jìn)行體內(nèi)VR1訊息傳導(dǎo)活性調(diào)節(jié)。
本發(fā)明進(jìn)一步提供治療對VR1調(diào)節(jié)敏感的方法。在本發(fā)明內(nèi)容中，“治療”一詞涵蓋改善疾病的治療及癥狀的治療，可為預(yù)防性的(也即，在癥狀發(fā)作前，用以預(yù)防、延緩或減輕癥狀嚴(yán)重性)或治療性的(也即，在癥狀發(fā)作后，用以減輕癥狀嚴(yán)重性和/或持續(xù)性)。如果癥狀的特征為辣椒素受體活性不適當(dāng)，而與類香草醇配位體局部存在的量無關(guān)，和/或如果辣椒素受體活性調(diào)節(jié)會(huì)帶來狀況或癥狀緩解，則稱該癥狀為“對VR1調(diào)節(jié)有敏感”。所述癥狀包括，例如，在下文要詳述的由暴露在VR1活化刺激下引起的癥狀、疼痛、呼吸性疾病(諸如氣喘及慢性哽塞性肺疾)、癢、尿失禁、膀胱過動(dòng)、咳嗽、打嗝、及肥胖癥。所述癥狀可使用此項(xiàng)技術(shù)中已建立的準(zhǔn)則予以診斷及檢測?；颊呖砂ㄈ祟?、馴養(yǎng)的伴侶動(dòng)物及家畜，使用劑量則如上所述。
治療方法可隨所用化合物及欲治療的特定狀況而不同。然而，對大部分疾病的治療，優(yōu)選以每天4次或4次以下的給藥頻率。通常，更優(yōu)選以每天2次劑量的療法，尤其優(yōu)選以一天用藥一次。治療急性疼痛時(shí)需要采用迅速達(dá)到有效濃度的單一劑量。然而，對任何特別患者的具體劑量標(biāo)準(zhǔn)及治療方法取決于包括所用的特定化合物活性、患者年齡、體重、一般健康情形、性別、飲食、給藥時(shí)間、給藥途徑、及排泄率、藥物組合及進(jìn)行治療的特定疾病的嚴(yán)重性。通常，優(yōu)選能足以提供有效治療的最小劑量。一般可采用適于所治療或預(yù)防狀況的醫(yī)學(xué)或獸醫(yī)學(xué)準(zhǔn)則來檢測患者的治療效果。
經(jīng)受暴露在辣椒素受體活化刺激下引起的癥狀的患者包括因熱、光、催淚瓦斯或酸而灼傷的個(gè)體，及那些黏膜暴露(例如，經(jīng)由攝取、吸入或眼睛接觸)在辣椒素(例如，由于辣椒或辣椒噴霧劑)或相關(guān)刺激物下(例如酸、催淚瓦斯或大氣污染物)的個(gè)體。引起的癥狀(可使用本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑，尤其是拮抗劑治療)包括，例如，疼痛、氣管收縮及炎癥。
可使用本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑治療的疼痛可為急性或慢性疼痛，包括但不限定于由末梢神經(jīng)介導(dǎo)的疼痛(尤其是神經(jīng)痛)。本發(fā)明提供的化合物可用于治療，例如，乳房切除后疼痛癥候群、殘肢痛、幻覺肢體痛、口腔神經(jīng)痛、牙痛、假牙痛、帶狀皰疹后神經(jīng)痛、糖尿病神經(jīng)病變、反射性交感神經(jīng)失養(yǎng)癥(RSD)、三叉神經(jīng)痛、骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、纖維肌痛、吉蘭-拜瑞癥候群(Guillain-Barre Syndrome)、感覺異常性股痛、口腔灼熱癥候群和/或兩側(cè)性末梢神經(jīng)病變。其它神經(jīng)痛癥狀包括灼熱痛(反射性交感神經(jīng)失養(yǎng)癥-RDS，僅次于末梢神經(jīng)傷害)、神經(jīng)炎(包括，例如，坐骨神經(jīng)炎、末梢神經(jīng)炎、多神經(jīng)炎、視神經(jīng)炎、熱病后神經(jīng)炎、移動(dòng)性神經(jīng)炎、分節(jié)性神經(jīng)炎及宮保氏神經(jīng)炎(Gombault’s neuritis))、神經(jīng)細(xì)胞炎、神經(jīng)痛(例如，上文所述者、頸臂神經(jīng)痛、顱部神經(jīng)痛、膝狀神經(jīng)痛、舌咽神經(jīng)痛、偏頭性神經(jīng)痛、自發(fā)性神經(jīng)痛、肋間神經(jīng)痛、乳房神經(jīng)痛、下頷關(guān)節(jié)神經(jīng)痛、摩頓氏神經(jīng)痛(Morton’s neuralgia)、鼻睫神經(jīng)痛、枕骨神經(jīng)痛、紅斑性肢痛癥、史路德氏神經(jīng)痛(Sluder’s neuralgia)、蝶腭神經(jīng)痛、眶上神經(jīng)痛及翼管神經(jīng)痛)、與手術(shù)相關(guān)的疼痛、肌肉與骨骼疼痛、與艾滋病(AIDS)相關(guān)的神經(jīng)病變、與多發(fā)性(MS)相關(guān)的神經(jīng)病變、及與脊椎神經(jīng)受傷相關(guān)的疼痛。頭痛，包括涉及末梢神經(jīng)活性的頭痛，例如竇性、叢發(fā)性(也即，偏頭性神經(jīng)痛)及一些壓力性頭痛與偏頭痛，也可如本發(fā)明所述予以治療。例如，偏頭痛可在患者一感受到偏頭痛前即給藥本發(fā)明所提供化合物來加以預(yù)防。能如本發(fā)明所述加以治療的進(jìn)一步疼痛癥狀，包括“口腔灼熱癥候群”、產(chǎn)痛、恰得氏疼痛癥(Charcot’s pains)、腸氣疼痛、經(jīng)痛、急性與慢性背痛(例如，下背痛)、痔痛、消化不良痛、心絞痛、神經(jīng)根疼痛、同位性疼痛及異位性疼痛-包括與癌癥有關(guān)的疼痛(例如，骨癌患者)、與暴露于毒液(例如，由于遭蛇咬、蜘蛛咬、或蟲叮)有關(guān)的疼痛(及炎癥)、及與外傷有關(guān)的疼痛(例如，手術(shù)后疼痛、由傷口、瘀傷與骨折引起的疼痛、及灼傷痛)?？扇绫景l(fā)明所述給予治療的其它疼痛包括與炎性腸疾相關(guān)的疼痛、腸激躁癥候群和/或炎性腸疾。
在某些方面，本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑可用于治療機(jī)械性疼痛。本發(fā)明所用“機(jī)械性疼痛”一詞，是指頭痛以外的非神經(jīng)痛或因暴露在熱、冷或外在化學(xué)品刺激下引起的疼痛。機(jī)械性疼痛包括物理外傷(熱或化學(xué)品灼燒，或其它暴露于有毒化學(xué)品的發(fā)癢和/或疼痛除外)諸如手術(shù)后疼痛及因傷口、瘀傷與骨折引起的疼痛；牙痛；假牙痛；神經(jīng)根疼痛；骨關(guān)節(jié)炎；風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；肌纖維痛；感覺異常性股痛；背痛；與癌癥相關(guān)的疼痛；心絞痛；腕隧道癥候群；及由骨折、生產(chǎn)、痔瘡、腸氣、消化不良、及月經(jīng)引起的疼痛。
可加以治療的發(fā)癢癥狀包括牛皮癬搔癢、因血液透析引起的癢、過水搔癢癥、及與陰道前庭炎、接觸性皮膚炎、蟲咬及皮膚過敏相關(guān)的癢?？扇绫景l(fā)明所述進(jìn)行治療的尿道癥狀包括尿失禁(包括滿溢性尿失禁、急迫性尿失禁及壓力性尿失禁)、以及膀胱過動(dòng)或不穩(wěn)定的膀胱癥狀(包括源自脊椎的迫尿肌過度反射及膀胱過敏癥)。在某些所述治療方法中，VR1調(diào)節(jié)劑是經(jīng)由導(dǎo)管或類似裝置給藥的，將VR1調(diào)節(jié)劑直接注入膀胱中。本發(fā)明提供的化合物也可作為止咳劑(以預(yù)防、緩和或壓制咳嗽)、用于治療打嗝、及促進(jìn)肥胖患者的減重。
在其它方面，本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑可用于治療涉及發(fā)炎成分癥狀的組合療法。所述癥狀包括，例如，已知具有發(fā)炎成分的自體免疫失調(diào)與病理性自體免疫反應(yīng)包括，但不限定于，關(guān)節(jié)炎(尤其是風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎)、牛皮癬、克隆氏病癥(Crohn’s disease)、紅斑狼瘡癥、腸激躁癥候群、組織移植排斥、及移植器官的超急性排斥。其它所述癥狀包括外傷(例如，頭或脊椎神經(jīng)的傷害)、心血管與腦血管疾病及某些感染病癥。
在所述組合療法中，VR1調(diào)節(jié)劑是與抗炎劑一起給藥患者。VR1調(diào)節(jié)劑與抗炎劑可存于相同的藥學(xué)組合物中，或可以以任一順序分開給藥?？寡讋┌?，例如，非類固醇抗炎性藥物(NSAIDs)、非專一性及環(huán)氧酶-2(COX-2)專一性環(huán)氧酶酶抑制劑、金化合物、皮質(zhì)類固醇類、胺甲喋呤、癌癥細(xì)胞壞死因子(TNF)受體拮抗劑、抗-TNFα抗體、抗-C5抗體、及介白素-1(IL-1)受體拮抗劑。NSAIDs的實(shí)例包括但不限定于異丁苯丙酸(例如，ADVILTM、MOTRINTM)、氟聯(lián)苯丙酸(ANSAIDTM)、甲氧萘基丙酸或甲氧萘基丙酸鈉(例如，NAPROSYN、ANAPROX、ALEVETM)、雙氯芬酸(diclofenac)(例如，CATAFLAMTM、VOLTARENTM)、雙氯芬酸鈉與米索前列醇(misoprostol)(例如，ARTHROTECTM)的組合、舒林酸(sulindac)(CLINORILTM)、二苯噁唑基丙酸(oxaprozin)(DAYPROTM)、二氟苯水楊酸(DOLOBIDTM)、匹若西卡(piroxicam)(FELDENETM)、吲哚美沙辛(indomethacin)(INDOCINTM)、伊托多雷(etodolac)(LODINETM)、菲諾洛芬鈣(fenoprofencalcium)(NALFONTM)、酮布洛芬(ketoprofen)(例如，ORUDISTM、ORUVAILTM)、甲氧萘基丁酮鈉(sodium nabumetone)(RELAFENTM)、柳酸磺胺吡啶(sulfasalazine)(AZULFIDINETM)、托美丁鈉(tolmetin sodium)(TOLECTINTM)和羥基氯喹啉(hydroxychloroquine)(PLAQUENILTM)。特定的NSAIDs類別由抑制環(huán)氧酶(COX)的化合物組成，例如塞利昔布(celecoxib)(CELEBREXTM)與羅非昔布(rofecoxib)(VIOXXTM)。NSAIDs進(jìn)一步包含水楊酸鹽例如乙酰基水楊酸或阿司匹靈、水楊酸鈉、膽堿與水楊酸鎂類(TRILISATETM)和雙水楊酯(salsalate)(DISALCIDTM)、以及皮質(zhì)類固醇類例如得體松(cortisone)(CORTONETM乙酸鹽)、地塞米松(dexamethasone)(例如，DECADRONTM)、甲基氫化潑尼松(methylprednisolone)(MEDROLTM)、氫化潑尼松(PRELONETM)、氫化潑尼松磷酸鈉(PEDIAPREDTM)、與潑尼松(prednisone)(例如，PREDNICEN-MTM、DELTASONETM、STERAPREDTM)。
在所述組合療法中，VR1調(diào)節(jié)劑的適當(dāng)劑量通常如上所述。抗炎劑給藥劑量及方法，例如，Physician’s Desk Reference中制造商的指示中進(jìn)行了描述。在某些具體例中，VR1調(diào)節(jié)劑與抗炎劑的組合給藥會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生治療效果所需抗炎劑劑量的減少。因此，優(yōu)選地，在本發(fā)明的組合或組合治療方法中，抗炎劑的劑量小于制造商建議的未與VR1拮抗劑組合一起給藥的抗炎劑最大劑量。更優(yōu)選地，該劑量小于廠商建議的未與VR1拮抗劑組合一起給藥的抗炎劑最大劑量的3/4，又更優(yōu)選地為小于1/2，及非常優(yōu)選地為，小于1/4，最優(yōu)選地為小于該最大劑量的10％。顯見地，在達(dá)到期望效果的所需組合中VR1拮抗劑成分的劑量也同樣地受該組合中抗炎劑成分的劑量與效力影響。
在某些優(yōu)選實(shí)施例中，VR1調(diào)節(jié)劑與抗炎劑的組合給藥是通過在相同包裝盒中包裝一或多種VR1調(diào)節(jié)劑與一或多種抗炎劑而達(dá)成的。VR1調(diào)節(jié)劑與抗炎劑可分別包裝在該包裝盒的分別容器中；或者一或多種VR1調(diào)節(jié)劑與一或多種抗炎劑混合成混合物裝在相同容器中。優(yōu)選的混合物是配制成供口服用(例如，呈丸劑、膠囊、錠劑等)。在某些實(shí)施例中，所述包裝含印有標(biāo)記的卷標(biāo)，該卷標(biāo)說明所述一或多種VR1調(diào)節(jié)劑及一或多種抗炎劑是一起用于治療炎性疼痛癥狀。高度優(yōu)選的組合為其中抗炎劑包含至少一種COX-2專一性環(huán)氧酶抑制劑，例如瓦第昔布(valdecoxib)(BEXTRA)、蘭拉昔布(lumiracoxib)(PREXIGETM)、依托昔布(etoricoxib)(ARCOXIA)、塞利昔布(celecoxib)(CELEBREX)和/或羅非昔布(rofecoxib)(VIOXX)。
又在某些方面，本發(fā)明提供的VR1調(diào)節(jié)劑可與一或多種額外疼痛緩解藥物組合使用。某些所述藥物也為如上所列舉的抗炎劑。其它所述藥物為麻醉止痛劑，其典型地作用在一或多種類鴉片劑受體亞型(例如，μ、κ和/或δ)上，優(yōu)選是作為促效劑或部分促效劑。所述止痛劑包括鴉片劑、鴉片劑衍生物及類鴉片劑，以及其藥學(xué)上可接受的鹽與水合物。優(yōu)選實(shí)施例中，麻醉止痛劑的詳細(xì)實(shí)例包括阿芬旦尼(alfentanyl)、阿法普魯汀(alphaprodine)、安尼勒立汀(anileridine)、培集屈密特(bezitramide)、丁基原啡因(buprenorphine)、可待因(codeine)、二乙酰基二氫嗎啡、二乙酰基嗎啡、二氫可待因、氰二苯丙基苯基吡啶羧酸乙酯(diphenoxylate)、乙基嗎啡、芬太尼(fentanyl)、海洛英、二氫可待因酮(hydrocodone)、二氫嗎啡酮(hydromorphone)、異美沙冬(isomethadone)、左旋甲基嗎泛(levomethorphan)、羥甲左嗎南(levorphane)、左旋碼泛(levorphane)、麥啶(meperidine)、美他唑新(metazocine)、美沙酮(methadone)、美索芬(methorphan)、美托酮(metopon)、嗎啡、鴉片萃取物、鴉片流體萃取物、鴉片粉劑、鴉片粒劑、粗鴉片、鴉片酊、羥氫可待因酮(oxycodone)、羥二氫嗎啡酮(oxymorphone)、復(fù)方樟腦酊(paregoric)、潘他唑新(pentazocine)、配西汀(pethidine)、吩那唑新(phenazocine)、匹密諾汀(piminodine)、丙氧吩(propoxyphene)、消旋甲基嗎泛(recemethorphan)、消旋嗎泛(racemorphan)、蒂巴因(thebaine)、及前述制劑藥學(xué)上可接受的鹽與水合物。
麻醉止痛劑的其它實(shí)例包括乙酰托啡因(acetorphine)、乙?；淇纱?、乙酰美沙多(acetylmethadol)、丙烯普魯汀(allylprodine)、阿法乙酰美沙多、阿法美普魯汀(alphameprodine)、阿法美沙多、苯才西汀(benzethidine)、芐基嗎啡、貝他乙酰美沙多(betacetylmethadol)、貝他美普魯汀(betameprodine)、貝他美沙多、貝他普魯汀、美妥芬諾(butorphonol)、克羅尼他凈(clonitazene)、甲基溴可待因、N-氧化可待因、賽普諾啡(cyprenorphine)、二氫脫氧嗎啡(desomorphine)、右旋嗎拉密特(dextromoramide)、狄安普魯密特(diampromide)、二乙基二噻吩基丁烯胺(diethylthiambutene)、二氫嗎啡、狄門諾沙多(dimenoxadol)、狄美菲坦諾(dimepheptanol)、二甲基二噻吩丁烯胺、嗎苯丁酯(dioxaphetylbutyrate)、狄匹潘濃(dipipanone)、托蒂巴醇(drotebanol)、乙醇、甲基乙基二噻吩丁烯胺、愛托失立汀(etonitazene)、愛托芬(etorphine)、愛托失立汀(etoxeridine)、佛萊西汀(furethidine)、羥二氫嗎啡(hydromorphinol)、羥基配西汀(hydroxypethidine)、羥苯基哌啶丙酮(ketobemidone)、左旋嗎拉密特(levomoramide)、左旋吩納西嗎泛(levophenacylmorphan)、甲基脫氧嗎啡、甲基二氫嗎啡、嗎啡里汀(morpheridine)、嗎啡甲基溴化物、甲基磺胺嗎啡、N-氧化嗎啡、密羅啡因(myrophin)、那諾松(naloxone)、那拜芬(nalbuyphine)、那提喝松(naltyhexone)、煙堿?？纱?nicocodeine)、煙堿酰嗎啡、去甲基乙酰美沙多(noracymethadol)、左旋原嗎泛(norlevorphanol)、原美沙多(normethadone)、原嗎啡(normorphine)、原匹潘濃(norpipanone)、戊唑凱因(pentazocaine)、芬那多松(phenadoxone)、吩喃普魯密特(phenampromide)、吩諾嗎泛(phenomorphan)、吩諾配立汀(phenoperidine)、匹立屈密特(piritramide)、福得汀(pholcodine)、普魯庚唑英(proheptazoine)、普魯配立汀(properidine)、普魯匹蘭(propiran)、外消旋嗎密特(racemoramide)、蒂巴康(thebacon)、屈美配立汀(trimeperidine)、及其藥學(xué)上可接受的鹽與水合物。
進(jìn)一步詳細(xì)的代表性麻醉止痛劑包括，例如TALWINNx與DEMEROL(二者均可購自紐約市Sanofi Winthrop Pharmaceuticals公司)；LEVO-DROMORAN；BUPRENEX(維吉尼亞州Richmond，Reckitt & Coleman Pharmaceuticals公司)；MSIR(康是狄克州Norwalk，Purdue Pharma L.P.公司)；DILAUDID(紐澤西州MountOlive，Knoll Pharmaceutical公司)；SUBLIMAZE；SUFENTA(紐澤西州Titusville，Janssen Pharmaceutica公司)；PERCOCET、NUBAIN與NUMORPHAN(均可購自賓州Chadds Ford，Endo Pharmaceuticals公司)；HYDROSTATIR、MS/S與MS/L(均可購自肯塔基州Florence，Richwood Pharmaceutical公司)、ORAMORPHSR與ROXICODONE(二者均可購自俄亥俄州Columbus，RoxanneLaboratories)及STADOL(紐約市Bristol-Myers Squibb公司)。又進(jìn)一步的麻醉止痛劑包括CB-2受體促效劑，例如AM1241，及與α2δ次單元結(jié)合的化合物，例如紐若丁(Neurontin)(加巴噴丁(Gabapentin))與普瑞加巴林(pregabalin)。
在所述組合療法中，VR1調(diào)節(jié)劑的適當(dāng)劑量通常如上所述。其它疼痛緩解藥物的給藥劑量及方法在，例如，Physician’s Desk Reference中的制造商指示中進(jìn)行描述。在某些實(shí)施例中，VR1調(diào)節(jié)劑與一或多種另外的疼痛緩解藥物的組合給藥會(huì)使產(chǎn)生治療效果所需的各治療劑的劑量減少(例如，制劑中一或二種的劑量可小于制造商建議或上文列舉最大劑量的3/4，小于1/2，小于1/4，或小于該最大劑量的10％)。在某些優(yōu)選具體例中，VR1調(diào)節(jié)劑與一或多種另外的疼痛緩解藥物的組合給藥，是如上所述通過在相同包裝盒中包裝一或多種VR1調(diào)節(jié)劑與一或多種另外的疼痛緩解藥物而達(dá)成。
作為VR1促效劑的調(diào)節(jié)劑可進(jìn)一步用于，例如，群眾控制(作為催淚瓦斯的代用品)、私人保護(hù)(例如，噴霧配制劑)，或經(jīng)由辣椒素受體去敏化作用作為治療疼痛、癢、尿失禁或膀胱過動(dòng)的藥學(xué)制劑。一般而言，用于群眾控制或私人保護(hù)的化合物是根據(jù)已知催淚瓦斯或辣椒噴霧劑技術(shù)加以配制及使用的。
在其它方面，本發(fā)明為本發(fā)明提供的化合物提供多種非藥學(xué)上的體外及體內(nèi)用途。例如，所述化合物可予以標(biāo)記來作為辣椒素受體(在例如細(xì)胞制品或組織切片、制劑、或其片段的試樣中)檢測與定位用的探針。本發(fā)明提供的化合物可在受體活性試驗(yàn)中作為陽性對照組用、作為測定候選劑與辣椒素受體結(jié)合能力的標(biāo)準(zhǔn)、或者作為正子射出斷層掃描術(shù)(PET)成像用或單光子發(fā)射計(jì)算機(jī)斷層掃描術(shù)(SPET)用的放射性追蹤劑。所述方法能用于鑒定活體中的辣椒素受體。例如，VR1調(diào)節(jié)劑可使用任何各種已知技術(shù)予以標(biāo)記(例如，以放射性核種例如氚進(jìn)行放射性標(biāo)記，如本發(fā)明所述)，及以適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)時(shí)間(例如，由首先進(jìn)行結(jié)合時(shí)間試驗(yàn)而加以決定)與試樣一起培養(yǎng)。培養(yǎng)后，去除未結(jié)合的化合物(例如，利用洗滌)，使用適用于所用標(biāo)記的任何方法檢測已結(jié)合化合物(例如，進(jìn)行放射性標(biāo)記化合物的自動(dòng)放射照相術(shù)或閃爍計(jì)數(shù)；可使用光譜分析法檢測發(fā)光基團(tuán)及熒光基團(tuán))。作為對照組，含有標(biāo)記化合物及較大量(例如，10倍量)未標(biāo)記化合物的相配試樣可以用相同方法進(jìn)行制備。與對照組相比，較大量的可檢測標(biāo)記殘留在測試試樣中說明試樣中有辣椒素受體。檢測試驗(yàn)，包括在培養(yǎng)的細(xì)胞或組織的辣椒素受體的受體自動(dòng)放射照相術(shù)(受體制圖)，可根據(jù)Kuhar在CurrentProtocols in Pharmacology(紐約John Wiley & Sons出版，1998)中8.1.1至8.1.9章節(jié)所述方式進(jìn)行。
本發(fā)明提供的調(diào)節(jié)劑也可用于各種已知的細(xì)胞分離方法中。例如，調(diào)節(jié)劑可連結(jié)至組織培養(yǎng)盤或其它支撐體的內(nèi)側(cè)表面，作為供固定的親和性配位體，從而分離體外的辣椒素受體(例如，分離受體表現(xiàn)細(xì)胞)。在優(yōu)選實(shí)施例中，是使連結(jié)在熒光標(biāo)記(例如，熒光素(fluorescein))的調(diào)節(jié)劑與細(xì)胞接觸，然后利用熒光激發(fā)細(xì)胞分選儀(FACS，也稱流式細(xì)胞儀)進(jìn)行分析(或分離)。
以下提供的實(shí)施例意在說明而非用以限制本發(fā)明。除非另行指出，否則所有試劑與溶劑均為標(biāo)準(zhǔn)商用級，使用時(shí)未進(jìn)一步純化。通過采用常規(guī)修飾可對起始物質(zhì)進(jìn)行各種變化，也可使用另外的步驟來產(chǎn)生本發(fā)明所提供的其它化合物。
實(shí)施例實(shí)施例1[4-叔丁基-苯基][6-(3-甲氧基-苯基)嘧啶-4-基]胺的制備本實(shí)施例說明代表性的經(jīng)取代的嘧啶4-基胺類似物[4-叔丁基-苯基]-[6-(3-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]胺的制備。
1.1-(6-氯嘧啶-4-基)-3-甲氧苯 將4，6-二氯嘧啶(5g，33.5mmol)、3-甲氧基-苯基硼酸(5.17g，34.0mmol)、三(三苯膦)鈀(0)(1.4g，1.1mmol)、在甲苯(150mL)的2M碳酸鉀(35mL)的混合物，在氮?dú)猸h(huán)境下，在80℃加熱8小時(shí)。然后冷卻反應(yīng)混合物并分離各層。以乙酸乙酯(3×100mL)萃取水溶液層，然后用4M NaOH(100mL)、水(100mL)及鹽水(100mL)洗滌并合的有機(jī)層。接著以MgSO4干燥有機(jī)層后，在減壓下進(jìn)行濃縮。用急驟色層分析法(流動(dòng)相為75％己烷/25％乙醚)的硅膠管柱，純化濃縮后的殘留物，得到標(biāo)題化合物。
2.[4-叔丁基-苯基]-[6-(3-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]胺 在氮?dú)庀?，依次?-叔丁基苯胺(30mg，0.2mmol)及叔丁醇鉀(45mg，0.4mmol)加至1-(6-氯嘧啶-4-基)-3-甲氧苯(44mg，0.2mmol)、三(二亞芐基丙酮)二鈀(0)(18mg，0.02mmol)及于甲苯(2mL)的BINAP(17mg，0.02mmol)的溶液中。然后于90℃攪拌8小時(shí)，用氯化銨水溶液稀釋后，以乙酸乙酯(3×10mL)萃取。接著以MgSO4干燥并合的有機(jī)層后，在減壓下進(jìn)行濃縮。用急驟色層分析法(流動(dòng)相為50％己烷/50％乙醚)的硅膠管柱，純化濃縮后的殘留物，得標(biāo)題化合物。以氫核磁共振光譜儀(400MHz1H NMR(CDCl3))測得數(shù)據(jù)如下1.35(s，9H)，3.84(s，3H)，7.00(d，1H)，7.18(s，1H)，7.28-7.48(m，7H)，7.54(s，1H)，8.74(s，1H)。
實(shí)施例2其它代表性的嘧啶-4-基胺類似物的合成A.[4-叔丁基-苯基]-[6-(3-甲氧基苯基)-5-甲基-2-嗎啉-4-基嘧啶-4-基]胺1.5-甲基-2-嗎啉-4-基嘧啶-4，6-二醇 將溶于甲醇的甲醇鈉(15mL，45mmol)、嗎啉基甲醛溴化氫(morpholinoformamidine hydrobromide)(6.3g，30mmol)及甲基丙二酸二乙酯(5.22g，30mmol)的混合物在50℃加熱2小時(shí)。冷卻后，在減壓下濃縮。將濃縮后白色膠狀物溶于水中后，并以濃硫酸酸化。用過濾法收集產(chǎn)生的白色固體，經(jīng)水洗滌后并以空氣干燥就得到標(biāo)題化合物。
2.4-(4，6-二氯-5-甲基嘧啶-2-基)嗎啉 將5-甲基-2-嗎啉-4-基嘧啶-4，6-二醇(3.57g，17mmol)、N，N-二乙基苯胺(4.37g，35mmol)及氧氯化磷(phosphorus oxychloride)(25mL)的混合物于90℃加熱2小時(shí)。通過蒸發(fā)法將過量的氧氯化磷移除后，加入水(100mL)，并以乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并的有機(jī)層用1M鹽酸(100mL)、水(100mL)、鹽水(100mL)洗滌后，用MgSO4干燥，于減壓下濃縮，得到標(biāo)題化合物，該化合物使用時(shí)不用進(jìn)一步純化。
3.1-(6-氯-5-甲基-2-嗎啉-4-基嘧啶-4-基)-3-甲氧苯 將4-(4，6-二氯-5-甲基-嘧啶-2-基)嗎啉(372mg，1.5mmol)、3-甲氧基-苯基硼酸(243mg，1.6毫摩爾)、四(三苯膦)鈀(0)(75mg)、于甲苯(10mL)的2M碳酸鉀(1.5mL)的混合物，在氮?dú)猸h(huán)境下，在80℃加熱3小時(shí)。冷卻反應(yīng)混合物并分離各層。以乙酸乙酯(3×10mL)萃取水溶液層，然后用4M NaOH(10mL)、水(10mL)及鹽水(10mL)洗滌合并的有機(jī)層。以MgSO4干燥有機(jī)層后，于減壓下進(jìn)行濃縮。用急驟色層分析法(流動(dòng)相為75％己烷/25％乙醚)的硅膠管柱，純化濃縮后的殘留物，得到標(biāo)題化合物。
4.[4-叔丁基-苯基]-[6-(3-甲氧基苯基)-5-甲基-2-嗎啉-4基嘧啶-4-基]胺
在氮?dú)庀拢来螌?-叔丁基苯胺(30mg，0.2mmol)及叔丁醇鉀(45mg，0.4mmol)加至1-(6-氯-5-甲基-2-嗎啉-4-基嘧啶-4-基)-3-甲氧苯(64mg，0.2mmol)、三二亞芐基丙酮)二鈀(0)(18mg，0.02mmol)及在甲苯(2mL)的BINAP(17mg，0.02mmol)的溶液中。然后在90℃攪拌8小時(shí)，用氯化銨水溶液稀釋后，以乙酸乙酯(3×10mL)萃取。以MgSO4干燥并合的有機(jī)層后，在減壓下進(jìn)行濃縮。用急驟色層分析法(流動(dòng)相為65％己烷/35％乙醚)的硅膠管柱，純化濃縮后的殘留物，得標(biāo)題化合物(。以氫核磁共振光譜儀(400MHz1H NMR(CDCl3))測得數(shù)據(jù)如下1.35(s，9H)，2.12(s，3H)，3.76(brs，8H)，3.84(s，3H)，6.40(s，1H)，6.96(dd，1H)，7.08(m，2H)，7.35(m，1H)，7.38(d，2H)，7.56(d，2H)。
B.(4-叔丁基-苯基)-[4-異丁氧甲基-6-(3-甲氧基-苯基)-[1，3，5]三嗪-2-基]胺1.2-氯-4-氯甲基-6-(3-甲氧基-苯基)-[1，3，5]嗪 將3-甲氧基-N，N-二甲基芐酰胺(2.39g，0.0133mol)溶于乙腈中，取POCl3(3mL)加至此澄清無色溶液中。接著將(N-氰基)-2-氯乙脒(1.57g，0.0133mol)一次全部加入，在室溫?cái)嚢杌旌衔?6小時(shí)。在減壓下除去溶劑，在乙酸乙酯與水相NaHCO3間分溶。用Na2SO4干燥有機(jī)層后，在減壓下進(jìn)行濃縮。將所得粗產(chǎn)物用急驟管柱進(jìn)行色層分析(流動(dòng)相為15％乙酸乙酯/己烷)以分離純化產(chǎn)物。
2.(4-叔丁基-苯基)-[4-氯甲基-6-(3-甲氧基-苯基)-[1，3，5]三嗪-2-基]胺
將2-氯-4-氯甲基-6-(3-甲氧基-苯基)-[1，3，5]三嗪(500mg，1.85mmol)溶于乙腈后，加入4-叔丁基苯胺(331mg，2.22mmol)。在80℃加熱混合物直至用薄層色層分析法(展開劑為15％乙酸乙酯/己烷)檢測不再有可見的起始物質(zhì)為止。然后在減壓下除去溶劑，在乙酸乙酯與水相NaHCO3水溶液間分溶。用Na2SO4干燥有機(jī)層，在減壓下進(jìn)行濃縮。將所得粗產(chǎn)物用急驟管柱進(jìn)行色層分析(流動(dòng)相為己烷至10％乙酸乙酯/己烷)以分離無色泡沫狀純化的產(chǎn)物。
3.(4-叔丁基-苯基)-[4-異丁氧甲基-6-(3-甲氧基-苯基)-[1，3，5]嗪-2-基]胺 將(4-叔丁基-苯基)-[4-氯甲基-6-(3-甲氧基-苯基)-[1，3，5]三嗪-2-基]胺(210mg，0.548mmol)溶于四氫呋喃(THF)與異丁醇(761μL，8.23mmol)的混合溶液，然后小心地邊攪拌邊加入NaH(60％懸浮于油中，219mg，5.48mmol)。當(dāng)冒氣停止后，加熱此混合物至60℃達(dá)1小時(shí)。然后緩慢地將水加至反應(yīng)中，以終止反應(yīng)，以乙酸乙酯萃取。用Na2SO4干燥乙酸乙酯層后，于減壓下進(jìn)行濃縮。用急驟管柱層析法(流動(dòng)相為己烷至10％乙酸乙酯/己烷)純化，得到澄清無色油狀的所欲產(chǎn)物。
實(shí)施例3其它代表性的經(jīng)取代的嘧啶-4-基胺類似物通過使用常規(guī)的修飾法可對起始物質(zhì)進(jìn)行各種變化，也可使用其它步驟來生產(chǎn)本發(fā)明提供的其它化合物。表I所列的化合物即是使用所述方法制備的。在標(biāo)明“IC50”字段的列中的“*”表示如實(shí)施例6所述測定的IC50為1微摩爾濃度或更少(也即，細(xì)胞暴露在IC50辣椒素所產(chǎn)生的熒光反應(yīng)減少至50％時(shí)所需該化合物的濃度為1微摩爾濃度或更少)。用“MS”字段標(biāo)明的列中的質(zhì)譜數(shù)據(jù)為電噴灑質(zhì)譜(Electospray MS)數(shù)據(jù)，是在15或30伏特(V)圓錐形電壓的正離子模式中，通過使用配備有Waters 600型馬達(dá)、Waters 996型光電二極管數(shù)組檢測器、Gilson215自動(dòng)采樣器及Gilson 841微注射器的微質(zhì)量飛行時(shí)間式LCT(Micromass Time-of-Flight LCT)得到的。用MassLynx(加拿大多倫多，Advanced Chemistry Development公司)4.0版軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)收集與分析。將1mL體積的試樣注射至50×4.6mm的Chromolit SpeedRODC18管柱，然后用兩相的線性梯度沖提液以6mL/min流動(dòng)速率沖提。在220至340納米(nm)紫外光范圍內(nèi)用全吸收計(jì)數(shù)(total absorbancecount)檢測試樣。沖提條件為移動(dòng)相A-95/5/0.05水/甲醇/四氟乙酸(TFA)；移動(dòng)相B-5/95/0.025水/甲醇/TFA。
梯度時(shí)間(分鐘)％B0100.5 1001.2 1001.21 10注射與注射間的周期為2分鐘。
表1代表性的經(jīng)取代的嘧啶-4-基胺類似物





實(shí)施例4VR1-轉(zhuǎn)感染細(xì)胞與細(xì)胞膜制劑此實(shí)施例說明用于辣椒素結(jié)合性分析法(實(shí)施例5)的VR1-轉(zhuǎn)感染細(xì)胞與含有VR1膜制劑的制法。
取人類辣椒素受體全長的的cDNA序列(美國專利案號6,482,611的SEQ ID NO1、2或3)次克隆至質(zhì)體pBK-CMV(加州La Jolla，Stratagene公司)上以供在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中重組表達(dá)。
采用標(biāo)準(zhǔn)方法，使人類胚胎腎臟(HEK293)細(xì)胞經(jīng)編碼全長度人類辣椒素受體的pBK-CMV表現(xiàn)構(gòu)筑體進(jìn)行轉(zhuǎn)感染。在含G418(400微克/mL)的培養(yǎng)基中篩選轉(zhuǎn)感染的細(xì)胞兩周，以得到一群安定的轉(zhuǎn)感染細(xì)胞。經(jīng)由限制稀釋法，自所述群細(xì)胞中分離出獨(dú)立的無性繁殖系，這樣就得到了可安定無性繁殖的細(xì)胞株，供下一個(gè)試驗(yàn)使用。
進(jìn)行放射性配位體結(jié)合性試驗(yàn)時(shí)，先將細(xì)胞接種至T175細(xì)胞培養(yǎng)燒瓶內(nèi)不含抗生素的培養(yǎng)基中，生長至約90％融合度(confluency)。燒瓶隨后經(jīng)PBS(磷酸鹽緩沖液)洗滌，并在含5mM EDTA的PBS中收集細(xì)胞。細(xì)胞經(jīng)溫和離心集結(jié)成塊，然后保存在-80℃，直至進(jìn)行試驗(yàn)為止。
取先前冷凍的細(xì)胞，利用組織均質(zhì)器助勻于冰冷HEPES均質(zhì)緩沖液中(5mM KCl 5、5.8mM NaCl、0.75mM CaCl2、2mM MgCl2、320mM蔗糖與10mM HEPES pH 7.4)。組織均質(zhì)液先在1000xg(4℃)下離心10分鐘以除去核部分及細(xì)胞碎片，然后取第一次離心的上澄液再在35,000xg(4℃)下離心30分鐘，得到部份純化的膜部份。先將膜再懸浮于HEPES均質(zhì)緩沖液中后再進(jìn)行試驗(yàn)。取一份膜均質(zhì)液，利用Bradford方法(BIO-RAD蛋白質(zhì)試驗(yàn)套組，#500-0001，加州Hercules，BIO-RAD公司)測定蛋白質(zhì)濃度。
實(shí)施例5辣椒素受體結(jié)合性試驗(yàn)本實(shí)施例說明辣椒素受體結(jié)合性的代表性試驗(yàn)，此試驗(yàn)得用于測定化合物對辣椒素(VR1)受體的結(jié)合親和性。與[3H]樹脂毒素(RTX)的結(jié)合性試驗(yàn)基本上是依Szallasi與Blumberg(1992)J.Pharmacol.Exp.Ter.262883-888中說明的方法進(jìn)行。此方法中，當(dāng)結(jié)合反應(yīng)結(jié)束后，非專一性的RTX結(jié)合會(huì)因添加牛α1酸醣蛋白(每支試管100微克)而降低。
RTX(37Ci/mmol)是從馬里蘭州費(fèi)得利克國家癌癥研究所-費(fèi)得利克癌癥研究與發(fā)展中心(National Cancer Institute-Frederick CancerResearch and Development Center)的化學(xué)合成與分析實(shí)驗(yàn)室合成得到的。[3H]RTX也可商業(yè)上購得(例如，紐澤西州Piscataway，AmershamPharmacia Biotech公司)。
取實(shí)施例4的膜均質(zhì)液如上所述進(jìn)行離心，并再懸浮在均質(zhì)緩沖液中至蛋白質(zhì)濃度為333μg/mL。在冰上制備結(jié)合性試驗(yàn)的混合物，該混合物中包含[3H]RTX(比活性2200mCi/mL)、2μl非放射活性試驗(yàn)化合物、0.25mg/mL牛血清白蛋白(Cohn部份V)、與5×104至1×105VR1-轉(zhuǎn)感染細(xì)胞。使用上述冰冷的HEPES均質(zhì)緩沖液(pH 7.4)調(diào)整最終體積至500μl(用于競爭結(jié)合性試驗(yàn)法)或1,000μl(用于飽和結(jié)合性試驗(yàn)法)。非專一性結(jié)合的定義為在1μM非放射活性RTX(加州San Diego，Alexis公司)存在下的結(jié)合性。分析飽和結(jié)合性時(shí)，[3H]RTX的添加濃度范圍為7-1,000pM，稀釋1至2次。典型操作法為每條飽和結(jié)合性曲線收集11個(gè)濃度點(diǎn)。
競爭結(jié)合性試驗(yàn)法是在60pM[3H]RTX及不同濃度測試化合物存在下進(jìn)行。將試驗(yàn)混合物移至37℃水浴中開始進(jìn)行結(jié)合反應(yīng)，培養(yǎng)60分鐘后，使試管在冰上冷卻，中止反應(yīng)。以WALLA玻璃纖維濾紙(馬里蘭州Gaithersburg，PERKIN-ELMER公司)(使用前先在1.0％聚亞乙基亞胺(PEI)浸泡2小時(shí))過濾分離與膜結(jié)合的RTX及游離的RTX，及任何與α1酸醣蛋白結(jié)合的RTX。將濾紙干燥過夜后，添加WALLACBETA SCINT閃爍計(jì)數(shù)液，于WALLAC 1205 BETA PLATE計(jì)數(shù)器上計(jì)數(shù)。
平衡結(jié)合性參數(shù)的決定是通過代入變構(gòu)性希爾公式(allosteric Hillequation)，以計(jì)算機(jī)程序FIT P(密蘇里州Ferguson，Biosoft公司)輔助計(jì)算數(shù)據(jù)(如Szallasi等人(1993)J.Pharmacol.Exp.Ther.266678-683中所說明)。本發(fā)明所提供化合物在此試驗(yàn)法中對辣椒素受體的Ki值小于1μM、100nM、50nM、25nM、10nM或1nM。
實(shí)施例6鈣離子移動(dòng)試驗(yàn)本實(shí)施例說明用于評估測試化合物的促效劑與拮抗劑活性的代表性鈣離子移動(dòng)試驗(yàn)。
將經(jīng)表達(dá)的質(zhì)體轉(zhuǎn)染(如實(shí)施例4所述)并由此能表達(dá)人類辣椒素受體的細(xì)胞接種至FALCON黑邊、透明底板的96孔板中(#3904，紐澤西州Franklin Lakes，ECTON-DICKINSON公司)，生長至融合度為70至90％。然后排空96孔板中的培養(yǎng)基，在每一孔中加入FLUO-3AM鈣敏感性染料(奧勒岡州Eugene，Molecular Probes公司)(染料液1mgFLUO-3 AM、440μLDMSO與440μl20％普羅尼克酸(pluronic acid)的DMSO溶液，在克氏-林格氏(Krebs-Ringer)HEPES(KRH)緩沖液(25mM HEPES、5mM KCl、0.96mM NaH2PO4、1mM MgSO4、2mMCaCl2、5mM葡萄糖、1mM羧苯磺胺(probenecid)，pH 7.4)中稀釋1∶250，每孔中有50μl稀釋溶液)。以鋁箔覆蓋該96孔板，在37℃含5％ CO2環(huán)境下培養(yǎng)1至2小時(shí)。培養(yǎng)后，排空該96孔板中的染料，以KRH緩沖液洗滌細(xì)胞一次，再懸浮于KRH緩沖液中。
為了測定試驗(yàn)化合物對促效或拮抗細(xì)胞中表達(dá)辣椒素受體對辣椒或其它類香草醇促效劑的鈣離子移動(dòng)反應(yīng)的能力，首先測定促效劑辣椒素的EC50。在如上所述制備的每一孔細(xì)胞中，另外加入20μlKRH緩沖液與1μlDMSO。通過FLIPR儀器自動(dòng)取出100μl含辣椒素的KRH緩沖液加至各孔中。通過FLUOROSKAN ASCENT(馬薩諸塞州Franklin，Labsystems公司)或FLIPR(熒光顯影板讀取系統(tǒng)，加州Sunnyvale，Molecular Devices公司)儀器以檢測辣椒素所誘發(fā)的鈣離子移動(dòng)。以施用促效劑后30至60秒間得到的數(shù)據(jù)，用最終辣椒素濃度為1nM至3nM繪制8點(diǎn)濃度反應(yīng)曲線。用KALEIDAGRAPH軟件(賓州Reading，Synergy Software公司)將數(shù)據(jù)代入公式y(tǒng)＝a*(1/(1+(b/x)c))以決定對反應(yīng)有誘發(fā)作用的50％濃度(EC50)。此公式中，y為最高熒光訊號，x為促效劑或拮抗劑(本案例中為辣椒素)濃度，a為Emax；b相當(dāng)于EC50值，c為希爾是數(shù)(Hill coefficient)。
促效劑活性測定將試驗(yàn)化合物溶于DMSO，以KRH緩沖液稀釋，然后即刻加至如上所述制備的細(xì)胞中。100nM辣椒素(約EC90濃度)也加至相同的96孔板內(nèi)細(xì)胞中，作為陽性對照組。測試孔中的試驗(yàn)化合物最終濃度介于0.1nM至5μM之間。
通過測定表現(xiàn)辣椒素受體的細(xì)胞的熒光反應(yīng)(由該化合物所誘發(fā)，為化合物濃度的函數(shù))決定試驗(yàn)化合物作為辣椒素受體促效劑的能力。如上所述將此數(shù)據(jù)代入公式中得到EC50，該EC50通常小于1μM，優(yōu)選為小于100nM，更優(yōu)選為小于10nM。每一試驗(yàn)化合物的效力程度也通過計(jì)算由試驗(yàn)化合物的濃度(典型為1μM)所誘發(fā)的反應(yīng)相對于由100nM辣椒素所誘發(fā)的反應(yīng)而獲得。此數(shù)值稱為訊號百分比(POS)，是由下列公式計(jì)算而得POS＝100×試驗(yàn)化合物反應(yīng)/100nM辣椒素反應(yīng)。
此分析提供了對試驗(yàn)化合物作為人類辣椒素受體促效劑的能力與功效二者的定量評估。人類辣椒素受體促效劑通常以小于100μM的濃度，或者優(yōu)選為小于1μM的濃度，或者最優(yōu)選為小于10nM的濃度誘發(fā)出可測得的反應(yīng)。對人類辣椒素受體的功效程度在1μM濃度時(shí)優(yōu)選為大于30POS，更優(yōu)選為大于80POS。某些促效劑本質(zhì)上無拮抗劑活性，這一點(diǎn)是由在如下所述的試驗(yàn)中，在低于4nM的化合物濃度，更優(yōu)選為低于10μM的濃度，最優(yōu)選為低于或等于100μM的濃度時(shí)沒有可檢測的拮抗劑活性所證實(shí)的。
拮抗劑活性測定將試驗(yàn)化合物溶于DMSO后，以20微升KRH緩沖液稀釋，使試驗(yàn)化合物在試驗(yàn)孔中的最終濃度介于1μM與5μM間，然后加至以如上所述制備的細(xì)胞中。將含制備細(xì)胞及試驗(yàn)化合物的96孔板在室溫下暗室培養(yǎng)0.5至6小時(shí)。注意不能連續(xù)培養(yǎng)超過6小時(shí)。在即將測定熒光反應(yīng)前，用FLIPR儀器自動(dòng)添加100微升含辣椒素的KRH緩沖液(辣椒素濃度為如上所述測得EC50濃度的2倍)至96孔板的每一孔中，使最終試樣體積為200微升，最終辣椒素濃度等于EC50。測驗(yàn)孔中試驗(yàn)化合物的最終濃度為介于1μM與5μM之間。與相對應(yīng)的控制組(也即，無試驗(yàn)化合物存在時(shí)，以兩倍于EC50濃度的辣椒素處理細(xì)胞)比較，辣椒素受體拮抗劑在10mmol濃度或更低濃度，優(yōu)選為1mmol濃度或更低濃度時(shí)，使此反應(yīng)下降至少約20％，優(yōu)選為至少約50％，最優(yōu)選為至少約80％。相對于辣椒素存在下且無拮抗劑時(shí)觀察到的反應(yīng)，造成下降50％時(shí)所需拮抗劑濃度為該拮抗劑的IC50，優(yōu)選為小于1μM、100nM、10nM或1nM。
某些優(yōu)選的VR1調(diào)節(jié)劑為本質(zhì)上無促效劑活性的拮抗劑，這一點(diǎn)是由如上所述的試驗(yàn)中，在低于4nM的化合物濃度，更優(yōu)選為低于10μM的濃度，最優(yōu)選為低于或等于100μM的濃度時(shí)，沒有可檢測的促效劑活性所證實(shí)的。
實(shí)施例7活體外微粒體半衰期此實(shí)施例說明采用代表性肝微粒體半衰期分析法，評估化合物半衰期值(t1/2值)。
叢聚的人類肝微粒體是得自XenoTech公司(堪薩斯州KansasCity)。所述肝微粒體也可從In Vitro Technologies公司(馬里蘭州Baltimore)或Tissue Transformation Technologies公司(紐澤西州Edison)獲得。制備6個(gè)試驗(yàn)反應(yīng)，每一反應(yīng)含25微升微粒體、5μl100μM試驗(yàn)化合物溶液與399μl0.1M磷酸鹽緩沖液(19mL0.1M NaH2PO4、81mL0.1M Na2HPO4，用H3PO4調(diào)至pH7.4)。制備第7個(gè)反應(yīng)作為陽性對照組，其含有25μl微粒體、399μl0.1M磷酸鹽緩沖液與5μl100μM已知代謝性質(zhì)的化合物溶液(例如，戴阿瑞盼(DIAZEPAM)或克羅拉平(CLOZAPINE))。反應(yīng)在39℃預(yù)培養(yǎng)10分鐘。
輔因子混合物的制備為取16.2mgNADP與45.4mg葡萄糖-6-磷酸鹽在4mL 100mM MgCl2中稀釋。葡萄糖-6-磷酸鹽脫氫酶溶液由214.3微升葡萄糖-6-磷酸鹽脫氫酶懸浮液(印第安納州Indianapolis，Roche Molecular Biochemicals公司)在1285.7微升蒸餾水中稀釋而制得。將71微升起始反應(yīng)混合物(3mL輔因子混合物、1.2mL葡萄糖-6-磷酸鹽脫氫酶溶液)加至6個(gè)試驗(yàn)反應(yīng)中的5個(gè)以及陽性對照組中。將71μl100mM MgCl2加至第6個(gè)試驗(yàn)反應(yīng)中，作為陰性對照組。在各時(shí)間點(diǎn)(0、1、3、5、與10分鐘)，取75μl各反應(yīng)混合物滴加至96孔含有75μl冰冷乙腈的深孔板中。將試樣渦轉(zhuǎn)混合，以轉(zhuǎn)速3500rpm離心10分鐘(Sorval T 6000D離心機(jī)，H1000B轉(zhuǎn)子)。自各反應(yīng)中取出75μl上澄液移至96孔板中，各孔含有150μl0.5μM已知液相層析質(zhì)譜(LCMS)圖形(內(nèi)標(biāo)準(zhǔn))的化合物溶液。每一試樣進(jìn)行LCMS分析以AUC測定，未代謝的試驗(yàn)化合物的量，繪出化合物濃度對時(shí)間的關(guān)系圖，外插就得到試驗(yàn)化合物的t1/2值。
本發(fā)明所提供的優(yōu)選化合物在人類肝微粒體體外表現(xiàn)出大于10分鐘至小于4小時(shí)的t1/2值，優(yōu)選為介于30分鐘與1小時(shí)間。
實(shí)施例8MDCK毒性分析此實(shí)施例說明采用Madin Darby犬腎臟(MDCK)細(xì)胞的細(xì)胞毒性分析法評估化合物毒性。
在具透明底板的96孔板(康是狄克州Meriden，PACKARD公司)的各孔中加入1μl試驗(yàn)化合物，從而使分析法中化合物最終濃度為10微摩爾濃度、100微摩爾濃度或200微摩爾濃度。對照組孔中則加入無試驗(yàn)化合物的溶劑。
將MDCK細(xì)胞，ATCC no.CCL-34(維吉尼亞州Manassas，美國菌種培養(yǎng)收集處(American Type Culture Collection))，依ATCC生產(chǎn)數(shù)據(jù)頁的指示，維持在無菌狀況。取融合的MDCK細(xì)胞經(jīng)胰蛋白酶處理，收集后，使用溫?zé)?37℃)培養(yǎng)基(VITACELL伊格氏最低必需培養(yǎng)基(Minimum Essential Medium Eagle)，ATCC目錄#30-2003)稀釋至濃度為0.1×106個(gè)細(xì)胞/mL。將100μl己稀釋細(xì)胞加至各孔中，但其中5個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線對照組孔中，改加入100μl無細(xì)胞的溫?zé)崤囵B(yǎng)基。96孔板隨后在37℃，95％O2、5％CO2中恒定振蕩培養(yǎng)2小時(shí)。培養(yǎng)后，每孔中加入50μl哺乳動(dòng)物細(xì)胞溶胞液(使用康是狄克州Meriden，PACKARD公司的ATP-LITE-M發(fā)光ATP檢測劑套組)，孔上覆蓋PACKARDTOPSEAL貼紙，然后在適合的振蕩器上，以轉(zhuǎn)速約700rpm振蕩2分鐘。
相對于未處理的細(xì)胞，引起毒性的化合物將降低ATP生成。ATP-LITE-M發(fā)光ATP檢測套組通常依據(jù)制造商的指示使用，以測定處理與未處理MDCK細(xì)胞中ATP的生成。使PACKARD ATP-LITE-M試劑平衡至室溫。一旦平衡后，即取冷凍干燥的受質(zhì)溶液在5.5mL受質(zhì)緩沖液(來自檢測套組)中再組成。冷凍干燥的ATP標(biāo)準(zhǔn)溶液在去離子水中再組成，形成10mM母液。關(guān)于5個(gè)對照組孔，將10微升經(jīng)連續(xù)稀釋的PACKARD標(biāo)準(zhǔn)物加至每一標(biāo)準(zhǔn)曲線對照組孔中，使各連續(xù)孔的最終濃度為200nM、100nM、50nM、25nM與12.5nM。在所有孔中均添加PACKARD受質(zhì)溶液(50微升)，然后加蓋，使孔板在合適的振蕩器上以轉(zhuǎn)速約700rpm振蕩2分鐘。將白色PACKARD貼紙黏在各孔板底部，用金屬箔包裹孔板，使試樣保持在黑暗中10分鐘。然后在22℃以發(fā)光計(jì)數(shù)器(例如，PACKARD TOPCOUNT微板閃爍與發(fā)光計(jì)數(shù)器或TECAN SPECTRAFLUOR PLUS)測定發(fā)光度，并由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算ATP含量。比較經(jīng)試驗(yàn)化合物處理的細(xì)胞中的ATP含量與未經(jīng)處理細(xì)胞中所測得的ATP含量。經(jīng)10μM優(yōu)選試驗(yàn)化合物處理的細(xì)胞中，ATP含量為未處理細(xì)胞的至少80％，優(yōu)選為至少90％。當(dāng)試驗(yàn)化合物使用100μM濃度時(shí)，經(jīng)優(yōu)選試驗(yàn)化合物處理的細(xì)胞中，檢測出的ATP含量為未處理細(xì)胞的至少50％，優(yōu)選為至少80％。
實(shí)施例9背根神經(jīng)節(jié)(DRG)細(xì)胞試驗(yàn)此實(shí)施例說明用于評估化合物的VR1拮抗劑或促效劑活性的代表性背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞試驗(yàn)法。
采用標(biāo)準(zhǔn)方法(Aguayo與White Brain Research 57061-61(1992年))，自新生老鼠切下DRG，解離及培養(yǎng)。培養(yǎng)48小時(shí)后，洗滌細(xì)胞一次，然后與鈣敏感性染料Fluo-4 AM(2.5至10微克/mL；購自德州Austin，TefLabs)培養(yǎng)30至60分鐘，接著再洗滌細(xì)胞一次。用熒光計(jì)測定Fluo-4熒光的變化，以檢測細(xì)胞外鈣濃度因添加辣椒素至細(xì)胞中而導(dǎo)致與VR1有關(guān)的增加。收集60至180秒的數(shù)據(jù)，以決定最高熒光訊號。
關(guān)于拮抗劑分析，將化合物以各種不同濃度加至細(xì)胞中。然后繪出熒光訊號為化合物濃度函數(shù)的關(guān)系圖，以判別達(dá)到抑制50％辣椒素活化反應(yīng)時(shí)所需的濃度，或IC50。辣椒素受體拮抗劑的IC50優(yōu)選為小于1微摩爾濃度、100納摩爾濃度、10納摩爾濃度或1納摩爾濃度。
關(guān)于促效劑分析，將化合物以各種不同濃度加至細(xì)胞中且未加入辣椒素。用熒光計(jì)測定Fluo-4熒光的變化，以檢測細(xì)胞外鈣濃度因化合物為辣椒素受體促效劑導(dǎo)致與VR1有關(guān)的增加。EC50或達(dá)到辣椒素活化反應(yīng)最大訊號50％時(shí)所需的濃度優(yōu)選為小于1微摩爾濃度、小于100納摩爾濃度或小于10納摩爾濃度。
實(shí)施例10測定疼痛緩解的動(dòng)物模式此實(shí)施例說明評估化合物所提供緩解疼痛程度的代表性方法。
A.疼痛緩解試驗(yàn)下列方法得用于評估疼痛緩解。
機(jī)械性異常疼痛基本上是依Chaplan等人J.Neurosci.Methods 5355-63(1994年)及Tal與Eliav Pain 64(3)511-518(1998年)中說明的方法評估機(jī)械性異常疼痛(對無害刺激產(chǎn)生的異常反應(yīng))。取一系列不同剛度的凡弗瑞(vonFrey)絲線(典型為一系列8至14種絲線)，施加在后腳足底表面，其力量恰足使絲線彎曲。絲線保持此位置不超過3秒鐘，或直到大鼠出現(xiàn)陽性異常疼痛反應(yīng)為止。陽性異常疼痛反應(yīng)，包括舉起經(jīng)處理的后腳后立即舔或搖動(dòng)該腳足。采用狄克森上下分析法(Dixon up-downmethod)決定各絲線的施加順序與頻率。使用此系列中的中等絲線開始試驗(yàn)，隨后依向上或向下順序連續(xù)施用，分別依開始時(shí)所使用絲線是否出現(xiàn)陰性或陽性反應(yīng)而定。
若接受所述化合物處理的大老鼠相較于未處理對照組或媒劑處理組大鼠，需要使用較高剛度的凡弗瑞絲線才引起陽性異常疼痛反應(yīng)時(shí)，則活命該化合物可有效逆轉(zhuǎn)或預(yù)防類似機(jī)械性異常疼痛的癥狀。或者，或此外，可在給藥化合物前及后測試動(dòng)物的慢性疼痛。此試驗(yàn)法中，相較于處理前誘發(fā)反應(yīng)時(shí)所需絲線，或未經(jīng)處理或經(jīng)媒劑處理且也具慢性疼痛的動(dòng)物所需絲線，有效化合物使處理后誘發(fā)反應(yīng)所需絲線剛度提高。試驗(yàn)化合物是在疼痛發(fā)作前或后給藥。當(dāng)試驗(yàn)化合物在疼痛發(fā)作后給藥時(shí)，則在給藥后10分鐘至3小時(shí)進(jìn)行試驗(yàn)。
機(jī)械性痛覺過敏基本上是依Koch等人Analgesia 2(3)157-164(1996年)說明的方法測定機(jī)械性痛覺過敏(對疼痛刺激的反應(yīng)過度)。將大鼠置于有溫?zé)岫嗫捉饘俚匕宓膫€(gè)別籠內(nèi)。在任一只后腳足底表面溫和針刺后，測定后腳抽回的時(shí)間期(也即，動(dòng)物將其后腳放回地板前保持后腳舉起的時(shí)間)。
若化合物使后腳抽回的時(shí)間期縮短達(dá)統(tǒng)計(jì)顯著性時(shí)，則該化合物會(huì)降低機(jī)械性痛覺過敏。試驗(yàn)化合物可在疼痛發(fā)作前或后給藥。當(dāng)試驗(yàn)化合物在疼痛發(fā)作后給藥時(shí)，則在給藥后10分鐘至3小時(shí)進(jìn)行試驗(yàn)。
熱痛覺過敏基本上是依Hargreaves等人說明于Pain.32(1)77-88(1988年)中的方法測定熱痛覺過敏(對有害熱刺激的反應(yīng)過度)。簡單地說，在動(dòng)物任一只后腳的足底表面施加恒定的輻射熱源。抽回后腳的時(shí)間(也即，動(dòng)物移動(dòng)后腳前的加熱時(shí)間期)，或稱為熱閾值或潛伏期，即決定動(dòng)物后腳對熱的敏感性。
若化合物使后腳抽回的時(shí)間期增加達(dá)統(tǒng)計(jì)顯著性時(shí)(也即，出現(xiàn)反應(yīng)的熱閾值或潛伏期加長)，則該化合物降低熱痛覺過敏。試驗(yàn)化合物可在疼痛發(fā)作前或后給藥。當(dāng)試驗(yàn)化合物在疼痛發(fā)作后給藥時(shí)，則在給藥后10分鐘至3小時(shí)進(jìn)行試驗(yàn)。
B.疼痛模式可采用下列任一種方法誘發(fā)疼痛，以測定化合物的止痛效力。一般而言，采用雄性SD大鼠及下列至少一種模式時(shí)，本發(fā)明所提供化合物以上述至少一種試驗(yàn)法測定，使疼痛于統(tǒng)計(jì)上產(chǎn)生顯著的減少。
急性發(fā)炎疼痛模式急性發(fā)炎疼痛基本上是依Field等人說明于Br.J.Pharmacol.121(8)1513-1522(1997年)中的角叉菜膠(carrageenan)模式所誘發(fā)。取100至200μl的1至2％角叉菜膠溶液注射至大鼠后腳。注射后3至4小時(shí)，依以上所述方法測定動(dòng)物對熱及機(jī)械性刺激的敏感性。試驗(yàn)前或注射角叉菜膠前，對動(dòng)物給藥試驗(yàn)化合物(0.01至50微克/kg)。化合物能以口服或以任何非經(jīng)腸途徑、或局部給藥至腳部的方式給藥。此模式中緩解疼痛的化合物，于機(jī)械性異常疼痛和/或熱痛覺過敏，產(chǎn)生統(tǒng)計(jì)上顯著的減少。
慢性發(fā)炎疼痛模式采用下列一種方法誘發(fā)慢性發(fā)炎疼痛1.基本上是依Bertorelli等人說明于Br.J.Pharmacol.128(6)1252-1258(1999年)的方法，及Stein等人說明于Pharmacol.Biochem.Behav.31(2)455-51(1998年)的方法，將200μl完全弗洛伊德氏輔劑(Complete Freund′s Adjuvant，CFA)(0.1mg熱殺死并干燥的結(jié)核菌(M.Tuberculosis))注射至大鼠后腳100微升注入足背，100微升注入足底表面。
2.基本上是依Abbadie等人說明于J Neurosci.14(10)5865-5871(1994年)的方法，在大鼠的脛骨-跗骨關(guān)節(jié)注射150μlCFA(1.5mg)。
采以上任一方法注射CFA前，先取得各試驗(yàn)動(dòng)物后腳對機(jī)械及熱刺激的個(gè)別敏感度底線。
注射CFA后，以如上所述方法測試大鼠的熱痛覺過敏、機(jī)械性異常疼痛與機(jī)械性痛覺過敏。為了確使癥狀發(fā)展出來，注射CFA后第5、6與7天時(shí)才開始進(jìn)行大鼠試驗(yàn)。第7天時(shí)，以試驗(yàn)化合物、嗎啡或媒劑處理動(dòng)物。以口服劑量為1至5mg/kg的嗎啡作為合適的陽性對照組。典型采用的試驗(yàn)化合物劑量為0.01至50mg/kg?；衔锬茉谠囼?yàn)前以單一劑量給藥，或在試驗(yàn)前每天給藥1、2或3次，進(jìn)行數(shù)天。藥物以口服或以任何非腸道途徑、或局部給藥方式給藥至動(dòng)物。
所得結(jié)果以最高可能效力百分比(MPE)表示。0％MPE定義成媒劑的止痛效力，100％MPE定義成動(dòng)物恢進(jìn)一步至注射CFA前的底線敏感度。此模式中緩解疼痛的化合物產(chǎn)生的MPE至少為30％。
慢性神經(jīng)病變性疼痛模式慢性神經(jīng)病變性疼痛基本上是依Bennett與Xie說明于Pain3387-107(1988年)中的方法，采用慢性收縮傷害(CCI)處理大鼠坐骨神經(jīng)而誘發(fā)。麻醉大鼠(例如，經(jīng)腹膜內(nèi)使用劑量50至65mg/kg的戊巴比妥(pentobarbital)及依需要增加的其它劑量)。將各后腳側(cè)面刮干凈及消毒。采用無菌技術(shù)，切開后腳側(cè)面中股。將股二頭肌切成鈍端，曝露出坐骨神經(jīng)。在每只動(dòng)物的其中一只后腳上，依約1至2毫米的間隔，將四條結(jié)扎線松弛地結(jié)扎于坐骨神經(jīng)周圍。另一只腳的坐骨神經(jīng)則沒有結(jié)扎且不處理。隨后蓋上肌肉，使用傷口夾或縫合線縫合皮膚。如以上所述評估大鼠的機(jī)械性異常疼痛、機(jī)械性痛覺過敏與熱痛覺過敏。
當(dāng)給藥方式(0.01至50mg/kg，口服、非經(jīng)腸方式或局部給藥)為，在即將試驗(yàn)前給藥單一劑量，或試驗(yàn)前每天給藥1、2或3次，進(jìn)行數(shù)天時(shí)，此模式中緩解疼痛的化合物，對機(jī)械性異常疼痛、機(jī)械性痛覺過敏和/或熱痛覺過敏產(chǎn)生統(tǒng)計(jì)上顯著的減少。
權(quán)利要求
1.一種具有下面通式的化合物 或其藥學(xué)上可接受的形式，其中X為CRx或N；Rx為氫、鹵素、硝基、C1-C6烷基、氨基、氰基、C1-C6烷磺?；位蚨?C1-C6烷基)磺酰氨基、或者單或二(C1-C6烷基)氨基；A1為CH或N；A2、A3與A4獨(dú)立地為CH、CRa或N，且A1-A4中為N者不多于二個(gè)；B1與B5獨(dú)立地為CH或N；B2、B3與B4獨(dú)立地為CH或CRb，且B2、B3與B4中至少一者為CRb；Ra與Rb在每種情況下獨(dú)立地選自鹵素、羥基、氨基、氰基、-COOH、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烷基醚、C2-C6烷?；?、C3-C6烷酮、C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基、單或二(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基磺?；位蚨?C1-C6烷基)磺酰氨基或單或二(C1-C6烷基)氨基羰基；R2是為C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、C1-C6鹵代烷基或C1-C6烷基磺?；?；及R3選自(i)氰基；或(ii)C1-C6烷基及具有下面通式的基團(tuán) 或 其中，L為鍵或C1-C6亞烷基；M為鍵或C1-C6亞烷基；R5與R6是(a)獨(dú)立地選自氫、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C3-C8環(huán)烷基或與L結(jié)合形成5至7元雜環(huán)烷基的基團(tuán)，且R5與R6至少一個(gè)不為氫；或(b)結(jié)合形成5至7元雜環(huán)烷基；及R7為氫、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C3-C8環(huán)烷基、C2-C6烷?；?、或與M結(jié)合形成5至7元雜環(huán)烷基的基團(tuán)；其中，每一(ii)經(jīng)0至3個(gè)取代基所取代，所述取代基獨(dú)立地選自下述基團(tuán)鹵素、氰基、氨基、羥基、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷基或單或二(C1-C6烷基)氨基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，B2、B3與B4中的一個(gè)或二個(gè)為CRb，并且其中每一Rb獨(dú)立地選自鹵素、氨基、氰基、-COOH、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基、C1-C6烷基磺?；騿位蚨?C1-C6烷基)磺酰氨基。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，B2為CRb。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，B2、B3與B4中的一個(gè)為CRb，且Rb選自氟、氯、氰基、甲基、甲氧基、三氟甲氧基、乙氧基或三氟甲基。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，至少一個(gè)Rb為C1-C4烷氧基。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，R3為C1-C6烷基。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，R3為C2-C6烷基醚、吡咯烷基、嗎啉基、哌啶基、哌嗪基或全氫吖庚因基，每一個(gè)經(jīng)0至3個(gè)取代基取代，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、氰基、氨基、羥基或C1-C4烷基。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，R2為C1-C4烷基、C3-C7環(huán)烷基或C1-C4鹵代烷基。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，每一Ra獨(dú)立選自氨基、氰基、鹵素、C1-C6鹵代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷氧基、C1-C6烷基磺?；騿位蚨?C1-C6烷基)磺酰氨基。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，A1與A2為CH，A3與A4獨(dú)立地為CH或CRa。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，A1、A2、A3和A4均為CH。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-11任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，X為CRx，且Rx為氫、鹵素、硝基、甲基磺酰基、甲基、乙基或氨基。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，Rx為鹵素、硝基、甲磺?；⒓谆?、乙基或氨基。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，所述化合物具下面通式結(jié)構(gòu) 其中B1與B5獨(dú)立地為CH或N；B2、B3和B4獨(dú)立地為CH或CRb，其中，每一個(gè)Rb獨(dú)立地選自鹵素、氨基、氰基、-COOH、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6烷基磺?；騿位蚨?C1-C6烷基)磺酰氨基；以及R3為C1-C4烷基、C2-C6烷基醚、單或二(C1-C6烷基)氨基、吡咯烷基、嗎啉基、哌啶基或哌嗪基，且每一基團(tuán)經(jīng)0至2個(gè)取代基所取代，所述取代基獨(dú)立選自鹵素、氨基、羥基、C1-C4烷基、氰基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷基或單或二(C1-C6烷基)氨基。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的化合物，其中，B2是經(jīng)鹵素、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷氧基或C1-C6鹵代烷基取代的碳；以及R2是叔丁基或三氟甲基。
16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，所述化合物為(4-叔丁基-苯基)-[4-異丁氧甲基-6-(3-甲氧基-苯基)-[1，3，5]三嗪-2-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-甲氧基-苯基)-2，5-二甲基-嘧啶-4-基]胺；4-叔丁基-苯基)-[6-(3-甲氧基-苯基)-5-甲基-2-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基]胺；[6-(3-甲氧基-苯基)-2，5-二甲基-嘧啶-4-基]-(4-三氟甲基-苯基)胺；[6-(3-甲氧基-苯基)-5-甲基-2-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基]-(4-三氟甲基-苯基)胺；或(4-叔丁基-苯基)-[5-甲烷磺酰基-6-(3-甲氧基-苯基)-2-甲基-嘧啶-4-基]胺。
17.一種具有下面通式的化合物 或其藥學(xué)上可接受的形式，其中Rx為鹵素、C1-C6烷基、氨基、硝基、氰基、C1-C6烷基磺?；?、單或二(C1-C6烷基)磺酰氨基、或者單或二(C1-C6烷基)氨基；Y為CRy或N；Ry為氫或C1-C4烷基；A1、A2、A3與A4獨(dú)立地為CH或N；B1為CH、CRb或N；B3與B4獨(dú)立地為CH或CRb；B5為CH或N；Rb在每種情況下都獨(dú)立地選自鹵素、羥基、氨基、氰基、-COOH、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烷基醚、C2-C6烷?；?、C3-C6烷酮、C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基、單或二(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基磺?；位蚨?C1-C6烷基)磺酰氨基或單或二(C1-C6烷基)氨基羰基；R2為鹵素、氨基、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基、C1-C6烷基磺?；蛘邌位蚨?C1-C6烷基)磺酰氨基；R4為鹵素、氰基、氨基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基或C1-C6鹵代烷氧基；R3選自(i)氫、鹵素或氰基；或(ii)C1-C6烷基或具有下面通式的基團(tuán) 或 其中，L為鍵或C1-C6亞烷基；M為鍵或C1-C6亞烷基；R5與R6是(a)獨(dú)立地選自氫、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C3-C8環(huán)烷基或與L結(jié)合形成5至7元雜環(huán)烷基的基團(tuán)，且R5與R6至少一個(gè)不為氫；或(b)結(jié)合形成5-至7-元雜環(huán)烷基；以及R7為氫、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C3-C8環(huán)烷基、C2-C6烷?；?、或與L結(jié)合形成5-至7-元雜環(huán)烷基的基團(tuán)；其中，每一(ii)經(jīng)0至3個(gè)取代基所取代，所述取代基獨(dú)立地選自下述基團(tuán)鹵素、氰基、氨基、羥基、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷基或者單或二(C1-C6烷基)氨基。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，Rx為鹵素、硝基、甲基磺?；⒓谆?、乙基或氨基。
19.根據(jù)權(quán)利要求17或18所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，R4為鹵素、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或C1-C4鹵代烷氧基。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，R4為C1-C2烷氧基或C1-C2鹵代烷氧基。
21.根據(jù)權(quán)利要求17-20任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，B1為CH或N。
22.根據(jù)權(quán)利要求17-20任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，如果R4為C1-C6烷氧基，則B3與B4中至少一個(gè)不為經(jīng)C1-C6烷氧基所取代的碳。
23.根據(jù)權(quán)利要求17-22任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，R3為氫。
24.根據(jù)權(quán)利要求17-22任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，R3為C1-C6烷基。
25.根據(jù)權(quán)利要求17-24任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，R2為C1-C4烷基、C3-C7環(huán)烷基或C1-C4鹵代烷基。
26.根據(jù)權(quán)利要求17-25項(xiàng)中任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，每一Ra獨(dú)立地選自氨基、氰基、鹵素、C1-C6鹵代烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷氧基、C1-C6烷基磺酰基或單或二(C1-C6烷基)磺酰氨基。
27.根據(jù)權(quán)利要求17-25任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，A1為N或CH，A2、A3與A4每一個(gè)都為CH。
28根據(jù)權(quán)利要求17-27任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，Y為N。
29.根據(jù)權(quán)利要求17所述的化合物，所述化合物具具下面通式結(jié)構(gòu) 其中R2為C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、C1-C4鹵代烷基、C1-C4鹵代烷氧基、C1-C4烷基磺?；⒒蛘邌位蚨?C1-C4烷基)磺酰氨基；R3為氫、鹵素、C1-C4烷基、單或二(C1-C6烷基)氨基、吡咯烷基、嗎啉基、哌啶基或哌嗪基，且每一基團(tuán)經(jīng)0至2個(gè)取代基所取代，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、氨基、羥基、C1-C4烷基、氰基、C1-C4烷氧基、C1-C4鹵代烷基或單或二(C1-C6烷基)氨基；R4為氫、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或C1-C4鹵代烷氧基；并且B1與B5獨(dú)立地為CH或N。
30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的化合物，其中R4為C1-C2烷氧基或C1-C2鹵代烷氧基；以及R2為叔丁基或三氟甲基。
31.根據(jù)權(quán)利要求17所述的化合物，其中，該化合物為2-[6-(3-甲氧基-苯基)-5-硝基-嘧啶-4-基氨基]酚；2-[6-(3-甲氧基-苯基)-5-硝基-嘧啶-4-基氨基]-5-三氟甲基酚；(4-叔丁基-苯基)-[5-乙基-6-(3-甲氧基-苯基)嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[5-甲烷磺?；?6-(3-甲氧基-苯基)-2-甲基-嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-甲氧基-苯基)-2，5-二甲基-嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-甲氧基-苯基)-5-甲基-2-嗎啉-4-基嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-甲氧基-苯基)-5-甲基-嘧啶-4-基]-胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(5-甲氧基-嘧啶-3-基)-5-甲基-嘧啶-4-基]胺；[5-乙基-6-(3-甲氧基-苯基)-嘧啶-4-基]-(4-三氟甲基-苯基)胺；[6-(3-甲氧基-苯基)-2，5-二甲基-嘧啶-4-基]-(4-三氟甲基-苯基)胺；[6-(3-甲氧基-苯基)-5-甲基-2-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基]-(4-三氟甲基-苯基)胺；6-(3-甲氧基-苯基)-N4-(4-三氟甲基-苯基)-嘧啶-4，5-二胺；N4-(4-環(huán)己基-苯基)-6-(3-甲氧基-苯基)嘧啶-4，5-二胺；或N4-(4-叔丁基-苯基)-6-(3-甲氧基-苯基)-嘧啶-4，5-二胺。
32.一種具有下面通式的化合物 或其藥學(xué)上可接受的形式，其中Rx為氫、鹵素、C1-C6烷基、氨基、硝基、C1-C6烷基磺?；?、單或二(C1-C6烷基)磺酰氨基或單或二(C1-C6烷基)氨基；A1、A2、A3與A4獨(dú)立地為CH或N；B1-B5獨(dú)立地為CH、CRb或N；且B1至B5中有一個(gè)且僅有一個(gè)為CRb；Rb為鹵素、羥基、氨基、氰基、-COOH、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烷基醚、C2-C6烷?；3-C6烷酮、C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基、單或二(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基磺?；?、單或二(C1-C6烷基)磺酰氨基、或者單或二(C1-C6烷基)氨基羰基；R2為鹵素、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基、C1-C6烷基磺?；?、或者單或二(C1-C6烷基)磺酰氨基；以及R3選自(i)氫、鹵素或氰基；或(ii)C1-C6烷基及具有下面通式的基團(tuán) 或 其中，L為鍵或C1-C6亞烷基；及M為鍵或C1-C6亞烷基；R5與R6是(a)獨(dú)立地選自氫、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C3-C8環(huán)烷基、及與L結(jié)合形成5至7元雜環(huán)烷基的基團(tuán)，且R5與R6至少一個(gè)不為氫；或(b)結(jié)合形成5至7元雜環(huán)烷基；以及R7為氫、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C3-C8環(huán)烷基、C2-C6烷酰基、或與M結(jié)合形成5至7元雜環(huán)烷基的基團(tuán)；其中，每一(ii)經(jīng)0至3個(gè)取代基所取代，所述取代基獨(dú)立地選自下述基團(tuán)的鹵素、氰基、氨基、羥基、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷基或單或二(C1-C6烷基)氨基。
33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，Rx為氫、鹵素、硝基、甲基、乙基、甲基磺?；?、或氨基。
34.根據(jù)權(quán)利要求32或33所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，Rb為氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、或C1-C4鹵代烷氧基。
35.根據(jù)權(quán)利要求32-34任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，R2為C1-C4烷基、C3-C7環(huán)烷基或C1-C4鹵代烷基。
36.根據(jù)權(quán)利要求32-35任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，R3為氫。
37.如權(quán)利要求32-36任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，R3為或C1-C6烷基、氨基、單或二(C1-C4烷基)氨基、吡咯烷基、嗎啉基、哌啶基、哌嗪基、或全氫吖庚因基，且每一基團(tuán)經(jīng)0至3個(gè)取代基所取代，所述取代基獨(dú)立地選自鹵素、氰基、氨基、羥基、或C1-C4烷基。
38.根據(jù)權(quán)利要求32-37項(xiàng)中任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，B1與B5獨(dú)立地為CH或N。
39.根據(jù)權(quán)利要求32所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，該化合物為2-[6-(3-甲氧基-苯基)-5-硝基-嘧啶-4-基氨基]-5三氟甲基-酚；2-[6-(3-甲氧基-苯基)-5-硝基-嘧啶-4-基氨基]酚；(4-叔丁基-苯基)-(6-間甲苯基-嘧啶-4-基)胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(2-甲氧基-苯基)-嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(2-三氟甲基-苯基)-嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-乙氧基-苯基)-嘧啶-4-基]胺；6-(3-甲氧基-苯基)-N4-(4-三氟甲基-苯基)-嘧啶-4，5-二胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-氟-苯基)嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-甲氧基-苯基)-嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-三氟甲氧基-苯基)-嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(4-氯-苯基)-嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[5-甲烷磺?；?6-(3-甲氧基-苯基)-2-甲基-嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(4-甲氧基-苯基)-嘧啶-4-基]胺；或N4-(4-環(huán)己基-苯基)-6-(3-甲氧基-苯基)-嘧啶-4，5-二胺。
41.一種具有下面通式的化合物 或其藥學(xué)上可接受的形式，其中Rx為鹵素、C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷基磺?；?、單或二(C1-C6烷基)磺酰氨基、或者單或二(C1-C6烷基)氨基；Y為CRy或N；Ry為氫或C1-C4烷基；A1至A4獨(dú)立地為CH、CRa或N；B1、B2、B3、B4與B5獨(dú)立地為CH、CRb或N；Ra與Rb在每種情況獨(dú)立地選自鹵素、羥基、氨基、氰基、-COOH、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烷基醚、C2-C6烷?；?、C3-C6烷酮、C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基、單或二(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基磺?；位蚨?C1-C6烷基)磺酰氨基或單或二(C1-C6烷基)氨基羰基；R2為鹵素、羥基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、C2-C6烷基醚、C2-C6烷?；3-C6烷酮、C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基、單或二(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基磺酰基、單或二(C1-C6烷基)磺酰氨基、或者單或二(C1-C6烷基)氨基羰基；以及R3是選自(i)氫、鹵素或氰基；或(ii)C1-C6烷基及具有下面通式的基團(tuán) 或 其中，L為鍵或C1-C6亞烷基；R5與R6是(a)獨(dú)立地選自氫、C1-C6烷基、C1-C6烯基或C3-C8環(huán)烷基；或(b)結(jié)合形成5至7元雜環(huán)烷基；且若L為C1-C6烷基，則R5及R6結(jié)合形成雜環(huán)烷基；M為鍵或C1-C6亞烷基；以及R7為氫、C1-C6烷基、C1-C6烯基、C3-C8環(huán)烷基、C2-C6烷?；?、或與M結(jié)合形成5至7元雜環(huán)烷基的基團(tuán)；其中，每一(ii)經(jīng)0至3個(gè)取代基所取代，所述取代基獨(dú)立地選自下述基團(tuán)鹵素、氰基、氨基、羥基、C1-C6烷基、C3-C8環(huán)烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6鹵代烷基或單與二(C1-C6烷基)氨基。
42.根據(jù)權(quán)利要求40所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，Rx為鹵素、甲基、乙基、硝基、甲基磺?；⒒虬被?。
43.根據(jù)權(quán)利要求40或41所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，Y為N。
44.根據(jù)權(quán)利要求40-42任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，A1與A3獨(dú)立地為CH或N。
45.根據(jù)權(quán)利要求40-43任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，每一Rb獨(dú)立地為氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、或C1-C4鹵代烷氧基。
46.根據(jù)權(quán)利要求40-44任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，R2為鹵素、氨基、氰基、C1-C4烷基、C3-C7環(huán)烷基或C1-C4鹵代烷基。
47.根據(jù)權(quán)利要求40-45任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，R3為氫、C1-C4烷基醚或嗎啉代基。
48.根據(jù)權(quán)利要求40所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，該化合物為(4-叔丁基-苯基)-[5-乙基-6-(3-甲氧基-苯基)-嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[5-甲烷磺酰基-6-(3-甲氧基-苯基)-2-甲基-嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-甲氧基-苯基)-2，5-二甲基-嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-甲氧基-苯基)-5-甲基-2-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-甲氧基-苯基)-5-甲基-嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(5-甲氧基-吡啶-3-基)-5-甲基-嘧啶-4-基]胺；[5-乙基-6-(3-甲氧基-苯基)-嘧啶-4-基]-(4-三氟甲基-苯基)胺；[6-(3-甲氧基-苯基)-2，5-二甲基-嘧啶-4-基]-(4-三氟甲基-苯基)胺；[6-(3-甲氧基-苯基)-5-甲基-2-嗎啉-4-基-嘧啶-4-基]-(4-三氟甲基-苯基)胺；2-[6-(3-甲氧基-苯基)-5-硝基-嘧啶-4-基氨基]-5-三氟甲基-酚；2-[6-(3-甲氧基-苯基)-5-硝基-嘧啶-4-基氨基]-酚；6-(3-甲氧基-苯基)-N4-(4-三氟甲基-苯基)-嘧啶-4，5-二胺；N4-(4-環(huán)己基-苯基)-6-(3-甲氧基-苯基)-嘧啶-4，5-二胺；或N4-(4-叔丁基-苯基)-6-(3-甲氧基-苯基)嘧啶-4，5-二胺。
49.一種具有下面通式的化合物 或其藥學(xué)上可接受的形式，其中X為CRx或N；Rx為氫、鹵素、C1-C6烷基、氰基、氨基、硝基、C1-C6烷基磺?；?、單或二(C1-C6烷基)磺酰氨基、或者單或二(C1-C6烷基)氨基；A1與A3獨(dú)立地為CH或N；A2與A4獨(dú)立地為CH、CRa或N；B1、B2、B3、B4與B5獨(dú)立地為CH、CRb或N；Ra與Rb在每種情況下獨(dú)立地選自鹵素、羥基、氨基、氰基、-COOH、C1-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、C1-C6烷氧基、C2-C6烷基醚、C2-C6烷?；3-C6烷酮、C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基、單或二(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基磺?；?、單或二(C1-C6烷基)磺酰氨基或單或二(C1-C6烷基)氨基羰基；R2為羥基、氰基、C2-C6烷基、C3-C7環(huán)烷基、C2-C6烷基醚、C2-C6烷酰基、C3-C6烷酮、C1-C6鹵代烷基、C1-C6鹵代烷氧基、單或二(C1-C6烷基)氨基、C1-C6烷基磺酰基、單或二(C1-C6烷基)磺酰氨基、或者單或二(C1-C6烷基)氨基羰基；以及R3為C1-C6烷基。
50.根據(jù)權(quán)利要求48所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，X為CRx，且Rx為氫、鹵素、甲基、乙基、硝基、甲磺?；?、或氨基。
51.根據(jù)權(quán)利要求48或49所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，每一Rb獨(dú)立地為氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、或C1-C4鹵代烷氧基。
52.根據(jù)權(quán)利要求50所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，B1與B5獨(dú)立地為CH或N；B2、B3與B4中至少一個(gè)為CRb；以及至少一個(gè)Rb為C1-C4烷氧基。
53.根據(jù)權(quán)利要求48-51任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，R2為異丙基、叔丁基、三氟甲基、或環(huán)己基。
54.根據(jù)權(quán)利要求48-52任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，R3為甲基。
55.根據(jù)權(quán)利要求48所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，該化合物為(4-叔丁基-苯基)-[5-甲烷磺?；?6-(3-甲氧基-苯基)-2-甲基-嘧啶-4-基]胺；(4-叔丁基-苯基)-[6-(3-甲氧基-苯基)-2，5-二甲基-嘧啶-4-基]胺；或[6-(3-甲氧基-苯基)-2，5-二甲基-嘧啶-4-基]-(4-三氟甲基-苯基)胺。
56.根據(jù)權(quán)利要求1-48任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，所述化合物在辣椒素受體促效性的體外試驗(yàn)中未顯示出可檢測的促效活性。
57.根據(jù)權(quán)利要求1-48任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，所述化合物在辣椒素受體鈣移動(dòng)試驗(yàn)中，具有1微摩爾濃度或更小濃度的IC50值。
58.根據(jù)權(quán)利要求1-48任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，該化合物在辣椒素受體鈣移動(dòng)試驗(yàn)中具有100納摩爾濃度或小于100納摩爾濃度的IC50值。
59.根據(jù)權(quán)利要求1-48項(xiàng)中任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，該化合物在辣椒素受體鈣移動(dòng)試驗(yàn)中，具有10納摩爾濃度或更小濃度的IC50值。
60.一種藥學(xué)組合物，所述組合物包含如權(quán)利要求1至48項(xiàng)中任一所述的至少一種化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，并與生理上可接受的載體或賦形劑結(jié)合。
61.根據(jù)權(quán)利要求59所述的藥學(xué)組合物，其中，將所述組合物配制成可注射液體、噴霧劑、乳霜、凝膠、錠劑、膠囊、液漿或經(jīng)皮貼片。
62.一種降低細(xì)胞辣椒素受體鈣傳導(dǎo)的方法，所述方法包括使表達(dá)辣椒素受體的細(xì)胞與如權(quán)利要求1-48任一所述的至少一種化合物或其藥學(xué)上可接受的形式接觸，以降低所述辣椒素受體的鈣傳導(dǎo)。
63.根據(jù)權(quán)利要求61所述的方法，其中，所述細(xì)胞是在動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行接觸。
64.根據(jù)權(quán)利要求62所述的方法，其中，所述細(xì)胞為神經(jīng)元細(xì)胞。
65.根據(jù)權(quán)利要求61所述的方法，其中，所述細(xì)胞為泌尿上皮細(xì)胞。
66.根據(jù)權(quán)利要求62所述的方法，其中，在接觸期間，所述化合物或其藥學(xué)上可接受的形式是存在于該動(dòng)物的體液中。
67.根據(jù)權(quán)利要求62所述的方法，其中，所述化合物或其藥學(xué)上可接受的形式在該動(dòng)物血液中的濃度為1微摩爾濃度或更低。
68.根據(jù)權(quán)利要求66所述的方法，其中，所述化合物在該動(dòng)物血液中的濃度為500納摩爾或更低。
69.根據(jù)權(quán)利要求67所述的方法，其中，所述化合物在該動(dòng)物血液中的濃度為100納摩爾或更低。
70.根據(jù)權(quán)利要求62所述的方法，其中，所述動(dòng)物為人類。
71.根據(jù)權(quán)利要求62所述的方法，其中，所述化合物或其藥學(xué)上可接受的形式是經(jīng)口給藥。
72.一種在體外抑制類香草醇配位體與辣椒素受體結(jié)合的方法，該方法包括使辣椒素受體與如權(quán)利要求1至48項(xiàng)中任一所述的至少一種化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，在足以充分檢測地抑制類香草醇配位體與所述辣椒素受體結(jié)合的用量下接觸。
73.一種在患者體內(nèi)抑制類香草醇配位體與辣椒素受體結(jié)合的方法，該方法包括使表達(dá)辣椒素受體的細(xì)胞與如權(quán)利要求1至48項(xiàng)中任一所述的至少一種化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，在足以在體外檢測地抑制類香草醇配位體與表達(dá)克隆的辣椒素受體的細(xì)胞結(jié)合的用量下接觸，以抑制所述患者體內(nèi)類香草醇配位體與所述辣椒素受體結(jié)合。
74.根據(jù)權(quán)利要求72所述的方法，其中，所述化合物在所述患者血液中存在的濃度為1微摩爾濃度或更低。
75.一種治療患者對辣椒素受體調(diào)節(jié)作用有反應(yīng)的病癥的方法，所述方法包括對患者給藥如權(quán)利要求1至48項(xiàng)中任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式的辣椒素受體調(diào)節(jié)量，以減輕所述患者病癥。
76.根據(jù)權(quán)利要求74所述的方法，其中，所述患者是患有(i)暴露在辣椒素；(ii)因暴露到熱下引起的灼傷或刺激；(iii)因暴露到光下引起的灼傷或刺激；(iv)因暴露在催淚氣體、空氣污染物下或因辣椒噴霧引起的灼傷、氣管收縮或刺激；或(v)因暴露在酸下引起的灼傷或刺激。
77.根據(jù)權(quán)利要求74所述的方法，其中，所述病癥為氣喘或慢性阻塞性肺疾。
78.一種治療患者疼痛的方法，所述方法包括對患有疼痛的患者給藥如權(quán)利要求1、17或33項(xiàng)中任一所述的至少一種化合物或其藥學(xué)上可接受的形式的辣椒素受體調(diào)節(jié)量，以減輕患者疼痛。
79.根據(jù)權(quán)利要求77所述的方法，其中，所述化合物在所述患者血液中的濃度為1微摩爾濃度或更低。
80.根據(jù)權(quán)利要求78所述的方法，其中，所述化合物在所述患者血液中的濃度為500納摩爾或更低。
81.根據(jù)權(quán)利要求78所述的方法，其中，所述化合物在所述患者血液中的濃度為100納摩爾或更低。
82.如權(quán)利要求77所述的方法，其中，所述患者是患有神經(jīng)病理性疼痛。
83.根據(jù)權(quán)利要求77所述的方法，其中，所述疼痛與選自下列的病癥有關(guān)乳房切除后疼痛癥候群、殘肢痛、幻覺肢體痛、口腔神經(jīng)痛、牙痛、帶狀皰疹后神經(jīng)痛、糖尿病神經(jīng)病變、反射性交感神經(jīng)失養(yǎng)癥、三叉神經(jīng)痛、骨關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、纖維肌痛、吉蘭-拜瑞癥候群、感覺異常性股痛、口腔灼熱癥候群、兩側(cè)性周邊神經(jīng)病變、灼熱痛、神經(jīng)炎、神經(jīng)細(xì)胞炎、神經(jīng)痛、與艾滋病相關(guān)的神經(jīng)病變、與多發(fā)性相關(guān)的神經(jīng)病變、與脊椎神經(jīng)受傷相關(guān)的疼痛、與手術(shù)相關(guān)的疼痛、肌肉骨骼疼痛、背痛、頭痛、偏頭痛、心絞痛、產(chǎn)痛、痔痛、消化不良痛、恰得氏疼痛癥、腸氣疼痛、經(jīng)痛、癌癥、暴露于毒液、腸激躁癥候群、炎性腸疾及創(chuàng)傷。
84.根據(jù)權(quán)利要求77所述的方法，其中，所述患者為人類。
85.一種治療患者發(fā)癢的方法，所述方法包括對患者給藥如權(quán)利要求1至48項(xiàng)中任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式的辣椒素受體調(diào)節(jié)量，以減輕患者發(fā)癢。
86.一種治療患者咳嗽或打嗝的方法，所述方法包括對患者給藥如權(quán)利要求1至48項(xiàng)中任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式的辣椒素受體調(diào)節(jié)量，以減輕該患者咳嗽或打嗝。
87.一種治療患者尿失禁或膀胱過動(dòng)的方法，所述方法包括對患者給藥如權(quán)利要求1至48項(xiàng)中任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式的辣椒素受體調(diào)節(jié)量，以減輕該患者尿失禁或膀胱過動(dòng)。
88.一種促進(jìn)肥胖患者減重的方法，所述方法包括對患者投予如權(quán)利要求1至48項(xiàng)中任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式的辣椒素受體調(diào)節(jié)量，以促進(jìn)該患者減重。
89.根據(jù)權(quán)利要求1至48項(xiàng)中任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，其中，所述化合物或其藥學(xué)上可接受的形式是有放射性標(biāo)記的。
90.一種測定試樣中是否含有辣椒素受體的方法，所述方法包括下述步驟(a)使試樣與如權(quán)利要求1至48項(xiàng)中任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式，在使所述化合物與辣椒素受體結(jié)合的條件下接觸；以及(b)檢測所述化合物與所述辣椒素受體的結(jié)合量，以測定所述試樣中是否含有所述辣椒素受體。
91.根據(jù)權(quán)利要求89所述的方法，其中，所述化合物為如權(quán)利要求88所述的有放射性標(biāo)記的化合物，且其中所述測定步驟包括(i)將未結(jié)合的化合物與已結(jié)合的化合物分離；以及(ii)檢測該試樣中是否含有已結(jié)合的化合物。
92.一種包裝的藥學(xué)制劑，所述制劑包括(a)裝在容器中的如權(quán)利要求59所述的藥學(xué)組合物；以及(b)使用所述組合物治療疼痛的說明書。
93.一種包裝的藥學(xué)制劑，所述制劑包括(a)裝在容器中的如權(quán)利要求59所述的藥學(xué)組合物；以及(b)使用所述組合物治療咳嗽或打嗝的說明書。
94.一種包裝的藥學(xué)制劑，所述制劑包括(a)裝在容器中的如權(quán)利要求59所述的藥學(xué)組合物；以及(b)使用所述組合物治療肥胖的說明書。
95.一種包裝的藥學(xué)制劑，所述制劑包括(a)裝在容器中的如權(quán)利要求59所述的藥學(xué)組合物；以及(b)使用所述組合物治療尿失禁或膀胱過動(dòng)的說明書。
96.一種如權(quán)利要求1至48項(xiàng)中任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的形式在制備用于治療對辣椒素受體調(diào)節(jié)作用敏感的病癥的藥物中的用途。
97.根據(jù)權(quán)利要求95所述的用途，其中，所述病癥為疼痛、氣喘、慢性阻塞性肺疾、咳嗽、打嗝、肥胖、尿失禁、膀胱過動(dòng)、暴露到辣椒素、因暴露在熱下引起的灼傷或刺激、因暴露在光下引起的灼傷或刺激、因暴露在到催淚氣體、空氣污染物下或辣椒噴霧引起的灼傷、氣管收縮或刺激、或因暴露在酸下引起的灼傷或刺激。
全文摘要
本發(fā)明涉及經(jīng)取代的嘧啶－4－基胺類似物，所述類似物具下面通式(I)結(jié)構(gòu)，通式中各變數(shù)如說明書中所述。所述化合物為用于調(diào)節(jié)體內(nèi)或體外特定受體活性的配位體，特別用于治療與人類、伴侶動(dòng)物及家畜的病理受體活化作用相關(guān)的狀況。本發(fā)明也涉及藥學(xué)組合物及使用所述化合物治療所述病癥的方法，及使用所述配位體進(jìn)行受體定位研究的方法。
文檔編號A61K31/505GK1823048SQ200480020429
公開日2006年8月23日 申請日期2004年7月15日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月15日
發(fā)明者C·A·布盧姆, H·布里爾曼, K·J·霍杰茨 申請人:神經(jīng)能質(zhì)公司