專利名稱：用于出生后荷爾蒙替代品的油乳狀液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有荷爾蒙的油乳狀液(類脂乳狀液)的制備方法，由該方法制備的等滲乳狀液，和本發(fā)明乳狀液在制備靜脈給藥藥物中的用途，尤其是用于早產(chǎn)兒出生后荷爾蒙替代品和治療中風(fēng)后的神經(jīng)損害。
背景技術(shù)：
懷孕期間，17-β-雌二醇(雌激素)和黃體酮(孕激素)的血漿水平增高至100倍。雌激素和黃體酮合成的增加特別有助于懷孕。通過在懷孕過程中不同時間檢查臍血，可以發(fā)現(xiàn)胎兒也經(jīng)處于這些很高的血漿水平環(huán)境中。事實表明胎兒各種器官的發(fā)育，如肺、骨骼和腦的發(fā)育，都依賴于雌激素和黃體酮。懷孕40星期以后正常分娩，其后在新生兒和母親體內(nèi)的雌激素和黃體酮都迅速降低。認(rèn)為荷爾蒙水平的降低是分娩后婦女抑郁的原因之一。
在德意志聯(lián)邦共和國，6～7％的新生兒為早產(chǎn)兒，即出生日早于37周末的懷孕期。如此，在胎兒的發(fā)育過程中，雌激素和黃體酮的血漿水平更早地迅速降低，后果導(dǎo)致仍然不成熟的器官。直至今天，非常小早產(chǎn)兒(出生體重小于1000g)不成熟的肺功能仍是經(jīng)常導(dǎo)致新生兒死亡的原因。對之前早產(chǎn)兒的跟蹤研究也表明，從長期來看其神經(jīng)的發(fā)育受到不利的影響。
Trotter等人在Ulm大學(xué)的兒童醫(yī)院對30個早產(chǎn)兒進(jìn)行的研究(發(fā)表于J.Clin.Endocrinol.Metab.84，4531～4355(1999))表明保持較高的雌激素和黃體酮的血漿水平對早產(chǎn)兒有利。連續(xù)地給早產(chǎn)兒靜脈內(nèi)給藥含有荷爾蒙17-β-雌二醇和黃體酮的類脂乳狀液，其含量足以保持在如子宮內(nèi)的血漿水平。發(fā)現(xiàn)這些早產(chǎn)兒表現(xiàn)出更好的中線骨礦化。另外還發(fā)現(xiàn)，荷爾蒙治療的早產(chǎn)兒在28天大時，不太經(jīng)常需要供給另外的氧氣。這歸功于更好的肺部發(fā)育。靜脈內(nèi)給藥性激素平均3周的時間。
在上述研究中，荷爾蒙雌激素和黃體酮的醇溶液加入到Pharmacia& Upjohn公司生產(chǎn)的以商品名Intralipid銷售的類脂乳狀液中，并以此形式給服。Intralipid的油相由形式為長鏈的三酸甘油酯的100％的豆油組成。
更精確的化學(xué)分析表明在性激素荷爾蒙和Intralipid的混合物中存在相當(dāng)多的未知物。例如，根本不清楚甾類化合物和Intralipid的混合物是否物理穩(wěn)定。但是放射性標(biāo)記荷爾蒙試驗表明所用的荷爾蒙相當(dāng)一部分吸附在輸注系統(tǒng)和導(dǎo)管的表面。這必然使嬰兒靜脈內(nèi)給服的荷爾蒙的利用率出現(xiàn)問題和不確定性。
另外，在上述的研究過程中發(fā)現(xiàn)，給藥相當(dāng)大量的含荷爾蒙油乳狀液，使早產(chǎn)嬰兒血漿中荷爾蒙的水平相對較低。因此，為達(dá)到所需的血清水平，目前只能給早產(chǎn)的嬰兒給服相對大量的油乳狀液。這些大量的油乳狀液導(dǎo)致早產(chǎn)兒體內(nèi)不需要的油和液體負(fù)荷。另外，給早產(chǎn)兒給服醇組合物不是優(yōu)選的治療方法。
另外，在初步研究中被治療的早產(chǎn)兒在15個月大時進(jìn)行的檢測表明，其神經(jīng)的發(fā)育受到負(fù)面影響(發(fā)表于J.Clin.Endocrinol.Metab.86，601-603(2001))。
在理論上用荷爾蒙經(jīng)表皮的治療是可能的，但是因為發(fā)育的原因僅能在出生后2～3周開始。
目前得到的結(jié)果表明荷爾蒙治療對目標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)有正面的影響，即肺的成熟和發(fā)育、神經(jīng)的發(fā)育和骨骼的礦化，即全面促進(jìn)早產(chǎn)兒的成熟。另外，通過以靜脈內(nèi)可耐受的劑量將油提供給通過腸道食物給藥往往很困難的不成熟的器官，非腸道給藥的類脂乳狀液也起碼起營養(yǎng)的作用。
此外，Alkayed等人在Stroke 31，161(2003)中，報道對中風(fēng)患者皮下給藥雌激素和黃體酮也有正面的影響。
因此，本發(fā)明的目的是提供可非腸道給藥的油乳狀液，與上述現(xiàn)有技術(shù)相比，其能在早產(chǎn)兒血液中富集盡可能高的荷爾蒙(有效率)，同時具有最小的油和容積負(fù)荷。
出人意料地發(fā)現(xiàn)，非腸道給藥在乳化之前將荷爾蒙溶于油相制備的含有雌激素和黃體酮的油乳狀液，與給藥荷爾蒙直接加入的乳狀液相比，能得到明顯更高的血清水平。


圖1表明用不同乳狀液治療的早產(chǎn)兒在各個檢測時間(1、3、7、14天)雌二醇的血漿水平。
圖2表明用不同乳狀液治療的早產(chǎn)兒在各個檢測時間(1、3、7、14天)黃體酮的血漿水平。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及制備用于非腸道給藥、優(yōu)選靜脈給藥的含有雌激素和黃體酮的等滲乳狀液的方法，包括以下步驟(A)將荷爾蒙雌激素和黃體酮的至少一種溶解于油相；并(B)在乳化劑的存在下，將油相乳化于水相中。
本發(fā)明的另一實施方式涉及靜脈應(yīng)用的含有荷爾蒙的等滲乳狀液，其可通過上述方法制得。在優(yōu)選的實施方式中，乳狀液中雌激素和黃體酮的比例為2∶1～200∶1。
本發(fā)明的O/W乳狀液適于非腸道給藥，特別是靜脈給藥。因此，本發(fā)明第三個實施方式涉及上述等滲油乳狀液在非腸道給藥中的用途，尤其是在早產(chǎn)兒出生后荷爾蒙替代品中的用途。
根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“油”和“類脂”具有相同的意思并可互換使用。這類物質(zhì)包括，具體地說，三酸甘油脂、偏甘油酯和脂肪酸殘余物及其混合物。
本發(fā)明的油乳狀液特別適于制備用于雌激素和黃體酮非腸道給藥藥劑的方法，優(yōu)選用于早產(chǎn)兒出生后荷爾蒙替代品的藥劑的制備方法。
其它的實施方式見從所附的權(quán)利要求。
出生后雌激素和黃體酮替代品的目的是保持子宮內(nèi)血漿水平(子宮中的血漿水平)。為保證出生后子宮內(nèi)血漿水平的偏差盡可能地低，希望在開始使用替代品后盡可能快地達(dá)到這種水平。
荷爾蒙替代品不僅適用于人類的早產(chǎn)兒，而且同樣適用于動物，優(yōu)選哺乳動物。
與現(xiàn)有技術(shù)的油乳狀液相比，本發(fā)明的油乳狀液具有明顯提高的荷爾蒙利用率。
與現(xiàn)有技術(shù)的乳狀液相比，本發(fā)明的油乳狀液使荷爾蒙水平更快地提高，雌激素最終濃度更高，同時容積和油的負(fù)荷更小。
另外，與現(xiàn)有技術(shù)的荷爾蒙醇溶液相比，本發(fā)明的油乳狀液具有改進(jìn)的穩(wěn)定性。
本發(fā)明油乳狀液制備方法關(guān)鍵的步驟為在用水相乳化油相之前，將荷爾蒙雌二醇和黃體酮溶解于油相。通常，這兩種荷爾蒙都溶解于油相。在本發(fā)明的另一實施方式中，僅將一種荷爾蒙，優(yōu)選雌激素溶于油相中，而黃體酮加入水相和/或加入成品乳狀液。
本發(fā)明所用的荷爾蒙為子宮內(nèi)也存在的那些。特別地，在卵泡激素(雌激素)和黃體荷爾蒙(黃體酮)之間要加以區(qū)別。
本發(fā)明中特別重要的卵泡激素為雌酮、17-β-雌二醇和雌三醇及其衍生物。因為17-β-雌二醇的高雌激素活性，其對于本發(fā)明中特別重要。
本發(fā)明所用的雌激素為孕烯醇酮、黃體酮、安宮黃體酮及其藥物可接受的衍生物，本發(fā)明優(yōu)選采用黃體酮。
本發(fā)明的一個實施方式涉及雌酮和孕烯醇酮和/或黃體酮的組合物，另一個是雌激素三醇和孕烯醇酮和/或黃體酮的組合物?？蛇x擇地，特別優(yōu)選的實施方式涉及17-β-雌二醇和/或孕烯醇酮和/或黃體酮的組合物，特別是與黃體酮的組合物。在兩個可選擇的方式中，可另外包括安宮黃體酮，或用安宮黃體酮代替孕烯醇酮和/或黃體酮。因此，根據(jù)本發(fā)明可以結(jié)合兩種以上荷爾蒙。
本發(fā)明的類脂乳狀液的荷爾蒙濃度，在因此使用時，能使早產(chǎn)兒體內(nèi)的血漿水平如所預(yù)期的與在子宮內(nèi)水平一樣。因此，本發(fā)明的類脂乳狀液基于組合物總量(母體乳狀液)包括0.005～0.5wt％、優(yōu)選0.01～0.2wt％、更優(yōu)選0.05～0.1wt％的至少一種雌激素，和0.05～5wt％、優(yōu)選0.1～2wt％、更優(yōu)選0.5～1wt％的至少一種孕激素。
乳狀液中孕激素和雌激素的比為2∶1～200∶1，優(yōu)選5∶1～50∶1，更優(yōu)選10∶1～20∶1。
如果需要，母體乳狀液可以用適量的水稀釋，優(yōu)選高達(dá)4倍量的水，以更好地定量給油乳狀液。
本發(fā)明的類脂乳狀液優(yōu)選由植物油(如紅花油、豆油)和/或源自動物的油制備。因此，其可含有植物油和/或中等鏈三酸甘油酯(MCT)和/或源自海洋的油(如魚油)。這些類脂乳狀液是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的現(xiàn)有技術(shù)。
植物油，特別是豆油和紅花油的特征在于高含量的ω-6系列不飽和脂肪酸(主要是亞油酸、18∶2ω-6)，而ω-3脂肪酸(實際上特指α亞麻酸，18∶3ω-3)的含量很低。
中等鏈三酸甘油酯(MCT)的鏈長為C6～C14，特別優(yōu)選C8～C10。
與油乳狀液一起給藥的中等鏈三酸甘油酯(MCT)主要作為能量源。中等鏈三酸甘油酯不含任何不飽和脂肪酸，因此不含ω-6和ω-3脂肪酸。
冷水魚魚油的特征在于高含量的不飽和脂肪酸(主要二十碳五烯酸、EPA、20∶5ω-3和二十二碳六烯酸、DHA、22∶6ω-3)，而其它ω-6脂肪酸的含量較低。合適的魚油是那些如可大量工業(yè)得到的冷水魚油。魚油通常含有12～22個碳原子的脂肪酸的三甘油酯。特別優(yōu)選的是高度純化的魚油濃縮物，例如得自沙丁魚油、鮭魚油、鯡魚油和/或鯖魚油。
因此，本發(fā)明的一個實施方式涉及基于植物油和/或MCT的油乳狀液。該乳狀液可任選地含有魚油。
本發(fā)明油組合物中植物油的含量基于油組合物至少為50～100wt％，優(yōu)選70～100wt％，更優(yōu)選90～100wt％。
不飽和脂肪酸，特別是ω-3系列的有益效果是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，如在EP-A-0 311 091和DE-A-19 648 566中有記載。本發(fā)明中，使用富含不飽和脂肪酸的油是有利的。
母體乳狀液中油的總量，基于水性油乳狀液為1～30wt％，優(yōu)選10～20wt％。
除了蒸餾水，等滲油乳狀液還可含有常規(guī)的助劑和/或添加劑，如乳化劑、輔助乳化劑、穩(wěn)定劑、抗氧化劑和等滲化添加劑。
生理上可接受的乳化劑，如源自動物或植物的磷酯用作乳化劑。特別優(yōu)選的是純化的卵磷脂、尤其是卵的卵磷脂或其片段或相應(yīng)的磷脂。乳化劑的含量，基于乳狀液總量為0.6～1.5wt％，優(yōu)選1.2wt％。
另外，堿性的C16～C20長鏈脂肪酸鹽可用作輔助乳化劑。特別優(yōu)選鈉鹽?；谌闋钜旱目偭?，輔助乳化劑的濃度為0.005～0.1wt％，優(yōu)選0.01～0.5wt％。
為穩(wěn)定和等滲化，本發(fā)明的乳狀液可含有1.0～8wt％，優(yōu)選2.0～6.0wt％，更優(yōu)選2.2～2.6wt％的穩(wěn)定或等滲添加劑，如多羥基醇。優(yōu)選丙三醇、葡萄糖或木糖醇，特別優(yōu)選丙三醇。
本發(fā)明的油乳狀液可包含，作為抗氧化劑因此以免形成過氧化物的，生育酚或生理上可接受的生育酚酯，如乙酸α-生育酚酯，基于100g油，其量為10～1000mg，優(yōu)選25～200mg。
當(dāng)然，不用具有任何副作用或?qū)е虏荒托缘奶砑觿?。具體地說，果糖和山梨糖醇能引起不耐性因此不適用于本發(fā)明。此外，本發(fā)明的油乳狀液不含任何防腐劑，如芐醇。
本發(fā)明的油乳狀液通常為水包油(O/W)乳狀液，其中外部連續(xù)相由蒸餾水組成以適于非腸道給藥使用。
有利的是油乳狀液的pH為6.0～9.0，優(yōu)選6.5～8.5。
可用已知的方法制備本發(fā)明的等滲水性類脂乳狀液。常用的方法是首先混合油、乳化劑和其它助劑及其添加劑，然后在加入水的同時分散。水可任選地含有其它水溶性組分(如，丙三醇)。如此所得乳狀液的微滴尺寸仍為約10μm。必須通過進(jìn)一步的均質(zhì)化，如高壓均質(zhì)器進(jìn)一步降低微滴的平均尺寸。非腸道，尤其是靜脈應(yīng)用優(yōu)選的平均微粒直徑為0.5μm～150nm，更優(yōu)選1μm～100nm。另外，溶液可進(jìn)行消毒并且具有至少18個月的存儲穩(wěn)定性。
本發(fā)明的等滲油乳狀液除了用于非腸道、尤其是靜脈給藥雌激素和孕激素，和在可選擇的實施方式中，用于制備為此目的的藥劑之外，還發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的油乳狀液能減少人類和動物、優(yōu)選哺乳動物大腦神經(jīng)細(xì)胞的死亡，因為本發(fā)明的油乳狀液也可用于制備治療中風(fēng)(中風(fēng))后神經(jīng)損傷的藥劑。本發(fā)明的油乳狀液也可用于預(yù)防。此時優(yōu)選口服。
本發(fā)明的等滲油乳狀液可用于早產(chǎn)兒荷爾蒙替代的方法和治療中風(fēng)后的神經(jīng)損傷。
以下的實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不用于限制本發(fā)明。
實施例含荷爾蒙油乳狀液的制備荷爾蒙雌二醇和黃體酮在氮?dú)舛栊苑諊腥苡诩訜岬郊s70℃的油中，任選加入生育酚(＝溶液I)。通過Ultra-Terrux細(xì)胞勻漿器(Jahnke& Kunkle)將乳化劑(＝源自卵的磷脂)分散于丙三醇水溶液中(＝組分II)。通過Ultra-Terrux細(xì)胞勻漿器將溶液I加入組分II中。通過加入油酸鈉，將所得O/W乳狀液的pH值調(diào)節(jié)到約8.5，隨后在壓力至少為400Kg/cm2的高壓均化器中均化。
裝入合適質(zhì)量的玻璃小瓶后，用已知的方法加熱消毒乳狀液。得到消毒的穩(wěn)定O/W乳狀液，其中類脂微滴的平均油微滴尺寸小于0.5μm，存儲穩(wěn)定性至少為18個月。
表I

含荷爾蒙油乳狀液的應(yīng)用用現(xiàn)有技術(shù)的荷爾蒙乳狀液治療12位患者的患者組(＜29周的早產(chǎn)兒，出生體重小于1000g)。他們用由用等滲生理鹽水稀釋到5％油含量的20wt％的Intralipid(Pharmacia & Upjohn，Germany)與0.15mg/ml結(jié)晶17β-雌二醇和1.4mg/ml黃體酮的乙醇溶液混合組成的荷爾蒙乳狀液進(jìn)行治療。
初始給藥為連續(xù)地以15ml/Kg/天的劑量靜脈(i.v.)給藥。乳狀液中荷爾蒙和液體的含量都可以改變。這導(dǎo)致最大的液體負(fù)荷為25.8ml/Kg/天，中間值為18.8。
目前進(jìn)行的荷爾蒙替代品對作為目標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)的28天時額外需氧量影響的隨機(jī)雙盲研究中，78個早產(chǎn)兒康復(fù)。再此次研究中，使用了本發(fā)明的荷爾蒙乳狀液(根據(jù)制備實施例1，用注射用水稀釋到油含量5％)或安慰劑(不含荷爾蒙的乳狀液，油含量5％)。已經(jīng)得到52位患者雌二醇和黃體酮血漿水平的結(jié)果。不用解盲具體說明，就可從血漿水平看出25位患者用含有荷爾蒙的乳狀液治療(真正治療的組)。所有的患者都連續(xù)地以15ml/Kg/天i.v.給服本發(fā)明的乳狀液。于此，可得到平均的荷爾蒙劑量為雌二醇2.47mg/Kg/天，黃體酮22.5mg/Kg/天。
兩個組都測定在連續(xù)地荷爾蒙供應(yīng)下1(24小時)、3、7和14天大時雌二醇和黃體酮的血漿水平。研究結(jié)果列于下表表2

*)中間值表2表示兩組早產(chǎn)兒直到14天時中間值劑量的雌二醇和黃體酮。兩種乳狀液得到類似的高荷爾蒙供應(yīng)。但是本發(fā)明的乳狀液以15ml/Kg/天連續(xù)給藥，現(xiàn)有技術(shù)乳狀液以中間值18.8ml/Kg/天(最小-最大11.4～25.8ml/Kg/天)給藥。
用本發(fā)明的乳狀液，可以對早產(chǎn)兒實現(xiàn)明顯更高的雌二醇血漿水平(P＝0.00038)。但是，當(dāng)考慮到整個14天時，沒有發(fā)現(xiàn)黃體酮血漿水平明顯的不同。用不同乳狀液治療的早產(chǎn)兒的血漿濃度在各自測量時間(1、3、7、14天)(圖1和2)彼此對比。發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的乳狀液在24小后能得到雌二醇和黃體酮明顯更高的血漿水平。在3、7和14天，用本發(fā)明乳狀液得到的雌二醇血漿水平中間值總是高于用現(xiàn)有技術(shù)乳狀液得到的。用本發(fā)明乳狀液，分別占所有情形91％和46％能實現(xiàn)或超過所需低限的雌二醇血漿水平(2000pg/ml)和黃體酮(300ng/ml)，而現(xiàn)有技術(shù)的乳狀液所有情況中僅有64％和43％分別能實現(xiàn)或超過。
24小時以后，本發(fā)明的乳狀液與現(xiàn)有技術(shù)乳狀液相比，兩種荷爾蒙的血漿水平都明顯更高，這是對盡可能快地達(dá)到子宮內(nèi)血漿水平的目標(biāo)而作出的進(jìn)步。
綜上所述，得到的數(shù)據(jù)表明如由早產(chǎn)兒體內(nèi)所達(dá)到的血漿水平所測量，雌二醇和黃體酮具有改進(jìn)的利用率。因此，與相應(yīng)的通過混合荷爾蒙與成品乳狀液制備的現(xiàn)有技術(shù)乳狀液相比，本發(fā)明的乳狀液更適合應(yīng)用于早產(chǎn)兒。
權(quán)利要求
1.一種制備用于靜脈給藥、含有雌激素和孕激素的等滲油乳狀液的方法，包括以下步驟(A)在油相中溶解荷爾蒙雌激素和孕激素的至少一種，和(B)在乳化劑的存在下，將油相乳化于水相。
2.一種用于靜脈給藥的含有荷爾蒙的包括雌激素和孕激素的等滲油乳狀液，通過權(quán)利要求1所述的方法制備。
3.如權(quán)利要求2的用于靜脈給藥的含有荷爾蒙的等滲油乳狀液，包括比例為2∶1～200∶1的孕激素和雌激素。
4.如權(quán)利要求2或3的油乳狀液，其特征在于基于組合物總量，乳狀液含有1～60wt％的雌激素和1～50wt％的孕激素。
5.如權(quán)利要求2～4任一項的油乳狀液，其特征在于所述的雌激素為雌二醇，所述的孕激素為黃體酮。
6.如權(quán)利要求2～5任一項的油乳狀液，其特征在于所述的油相包括中等鏈三酸甘油酯(MCT)，其鏈長為6～12個碳原子，優(yōu)選8～10個碳原子。
7.如權(quán)利要求2～6任一項的油乳狀液，其特征在于基于組合物總量，含有高達(dá)1.5wt％的乳化劑。
8.如權(quán)利要求2～7任一項的等滲油乳狀液在制備靜脈給藥的用于早產(chǎn)兒出生后荷爾蒙替代品的雌激素和孕激素藥劑中的用途
9.如權(quán)利要求2～7任一項的等滲油乳狀液在制備治療中風(fēng)后神經(jīng)損傷藥劑中的用途。
10.一種通過使用如權(quán)利要求2～7任一項的等滲油乳狀液，作為早產(chǎn)兒荷爾蒙替代品的方法。
11.一種通過使用如權(quán)利要求2～7任一項的等滲油乳狀液治療中風(fēng)后神經(jīng)損傷的方法。
全文摘要
本發(fā)明涉及制備含荷爾蒙油乳狀液(類脂乳狀液)的方法，由此方法制得的等滲油乳狀液，及本發(fā)明的乳狀液在制備靜脈給藥的藥劑中的用途，尤其是用于早產(chǎn)兒出生后荷爾蒙替代品和中風(fēng)后神經(jīng)損傷的治療。
文檔編號A61K31/57GK1809339SQ200480017077
公開日2006年7月26日 申請日期2004年6月15日 優(yōu)先權(quán)日2003年6月18日
發(fā)明者索尼婭·布勒默, 約爾格·內(nèi)納, 弗蘭克·波蘭德 申請人:B·布朗·梅爾松根有限公司