專利名稱：一種抗病毒的中藥復(fù)方制劑及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗病毒的中藥復(fù)方制劑，具體來(lái)說(shuō)是以古方“銀翹馬勃散”為基礎(chǔ)采用現(xiàn)代工藝方法制備的藥物，抗病毒實(shí)驗(yàn)證明該藥物具有明顯的抗病毒作用。本發(fā)明還涉及到該藥物的制備方法，以及在制備抗病毒、尤其是上呼吸道病毒和“非典”病毒感染的藥物中的新用途。
背景技術(shù)：
祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中所指的溫病，是感受四時(shí)各種溫?zé)峄驖駸岫拘八鸬亩喾N急性熱病的總稱。在濕溫中，喉阻咽痛是早期的癥狀，中醫(yī)學(xué)中又謂急乳蛾，亦相當(dāng)于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的急性扁桃體炎。急性扁桃體炎是臨床上的一個(gè)常見(jiàn)病、多發(fā)病，好發(fā)于兒童及青少年，據(jù)流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)顯示，兒童時(shí)期常見(jiàn)病中有約60％為呼吸道疾病，而其中約80％即為急性扁桃體炎。西醫(yī)治療急性扁桃體炎主要是用抗菌素加對(duì)癥治療，這種治療方法極易造成抗菌素濫用和發(fā)生一些不良反應(yīng)。祖國(guó)醫(yī)學(xué)在治療溫病時(shí)，常采用清熱解毒，泄肺利咽法，取得滿意療效。清·吳瑭著《溫病條辨》記載的古方——銀翹馬勃散對(duì)治療急性扁桃體炎有顯著療效，原文記載為“濕溫喉阻咽痛，銀翹馬勃散主之”。銀翹馬勃散由連翹、牛蒡子、金銀花、射干、馬勃組成，功效清熱解毒，泄肺利咽，醫(yī)家多用其治療濕溫喉阻咽痛或外感風(fēng)熱、熱毒所致咽喉紅腫疼痛諸證有良效。安氏用銀翹馬勃散制成沖劑，治療急性扁桃體炎和急性化膿性扁桃體炎329例，痊愈232例(70.52％)，好轉(zhuǎn)9例(27.05％)，無(wú)效8例(2.43％)，總有效率97.4％[中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志1995；15(7)]。蔡氏用銀翹馬勃散加減治療急性扁桃體炎36例，顯效21例(58.3％)，有效13例(36.1％)，無(wú)效2例(5.6％)，總有效率為94.4％[江西中醫(yī)藥，2001；32(5)]。鄧氏用銀翹馬勃散治療小兒急性扁桃體炎60例，痊愈51例(85.0％)，有效7例(11.7％)，無(wú)效例(3.3％)，總有效率為96.7％[江西中醫(yī)藥，2000；31(6)]。雖然本方在臨床上用于治療急性扁桃體炎有明顯的療效，但該方劑的傳統(tǒng)劑型是水煎劑，其質(zhì)量不能控制，保存性能低，病人需按醫(yī)囑煎煮服用大量的水煎劑，服用量大特別是兒童服藥多有不方便，服用口感差，限制了其應(yīng)用，也不適應(yīng)市場(chǎng)需求。
另一方面，據(jù)調(diào)研，目前“國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)”中收載有59個(gè)治療急、慢性扁桃體炎及咽炎的中成藥，但僅有雙黃連注射劑明確其具有抗病毒功效，只占1.7％，而其它中成藥都沒(méi)有明確提具有“抗病毒”功效，這大都是因?yàn)槿狈λ幮W(xué)資料證明。當(dāng)然也沒(méi)有人用實(shí)驗(yàn)方法證明用這些方劑制成的中成藥具有明顯的抗病毒作用，因此在臨床上使用說(shuō)明書(shū)中只能提其具有清熱解毒，泄肺利咽的功效，不能用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的語(yǔ)言標(biāo)明其具有“抗病毒”作用。這樣也局限了在臨床使用時(shí)的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了克服上述“銀翹馬勃散”傳統(tǒng)中藥名方湯劑的缺點(diǎn)，為喉阻咽痛患者提供一種安全有效、質(zhì)量可控、服用方便的中成藥制劑。同時(shí)用藥理實(shí)驗(yàn)的方法，證明本發(fā)明藥具有“抗病毒”作用，明確增加本發(fā)明藥的“抗病毒”臨床使用范圍。另一個(gè)目的是提供本發(fā)明藥的制備方法及其新用途。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明制劑是由下述重量份的原料藥制備而成的連翹10～50份 牛蒡子6～30份金銀花5～25份射干3～15份馬勃1～10份在本發(fā)明制劑中，其原料藥還可加入蘆根5～20份。
上述原料藥的優(yōu)選重量比范圍是連翹15～40份 牛蒡子9～24份金銀花10～20份 射干5～12份馬勃3～8份 蘆根7～15份上述原料藥的重量比范圍優(yōu)選連翹25份牛蒡子15份金銀花12.48份射干7.52份馬勃7.52份上述原料藥的重量比范圍還優(yōu)選連翹30份牛蒡子18份金銀花15份 射干9份 馬勃6份蘆根10份本發(fā)明制劑的制備方法如下(1)、取各原料藥，加1～20倍量水，加熱提取3次，每次0.5～3小時(shí)，合并3次水提液，濾過(guò)，濾液濃縮；(2)、加95％乙醇調(diào)醇含量為30～75％，放置，離心；(3)、取上清液加β-環(huán)糊精包結(jié)，攪勻后減壓回收溶劑并濃縮至相對(duì)密度為1.04～1.60的清膏，離心出β-環(huán)糊精包結(jié)物，干燥，粉碎，過(guò)80目篩；(4)、將上述干燥物，按常規(guī)方法制成藥劑學(xué)上可接受的各種劑型。
本發(fā)明制劑的劑型，包括例如顆粒劑、膠囊劑、片劑、口服液、丸劑、混懸劑、滴丸劑、微丸劑、口含片、膠丸、軟膠囊、分散片、溶液劑、氣霧劑、噴霧劑、巴布劑或貼劑等。
在上述制備工藝中濃縮方法可以是常壓下濃縮，也可以是減壓濃縮，減壓濃縮條件為0.01～0.09MPA，40～90℃；回收溶劑方法可以是常壓回收，也可以是減壓回收，減壓回收溶劑的條件為0.01～0.09MPA，30～80℃；干燥方法可以是接觸干燥、氣流干燥、隧道式烘箱干燥、真空(減壓)干燥、沸騰干燥、噴霧干燥、冷凍干燥、遠(yuǎn)紅外干燥、微波干燥。
本發(fā)明制劑的制備方法優(yōu)選取原料藥射干、牛蒡子、馬勃、金銀花和連翹，加10倍量水，90-95℃加熱提取三次，每次1h，合并水提液，濾過(guò)，濾液80℃以下濃縮冷卻至40℃得相對(duì)密度為1.06-1.07的清膏；加乙醇調(diào)含醇量達(dá)50％，攪勻，放置過(guò)夜，離心；取上清液加入β-環(huán)糊精，攪勻，70℃，0.07Mpa條件下減壓回收乙醇，并濃縮至相對(duì)密度為1.10-1.15的藥液，靜置過(guò)夜，離心，上清液待用；沉淀于70-80℃烘干，粉碎，過(guò)80目篩，加入蔗糖粉，混勻，與上清液一步制成顆粒，制成顆粒的工藝參數(shù)為進(jìn)風(fēng)口溫度80℃，出風(fēng)口溫度50℃，整粒，分裝，即得。
本方五味藥，連翹、銀花為君藥，牛蒡子、馬勃為臣藥，射干為使藥，其中馬勃為真菌藥材，以孢子體入藥，性質(zhì)與其它五味不同。因此，考慮馬勃單提，由于馬勃無(wú)特征成分，主要采用干膏得率為指標(biāo)，結(jié)合干膏的色澤、氣味、溶化性等確定最佳條件。其余五味，連翹有效成分之一為連翹苷，銀花主要有效成分為綠原酸，牛蒡子含牛蒡子苷，射干含黃酮類化合物等。通過(guò)測(cè)定揮發(fā)油量、總黃酮、綠原酸、連翹苷、牛蒡子苷等指標(biāo)成分，計(jì)算轉(zhuǎn)移率，比較水蒸氣蒸餾法、乙醇回流法、乙醇滲漉法、水提取法等提取方法，結(jié)合干膏的得率、色澤、溶化性等因素，綜合評(píng)價(jià)選定最佳提取工藝。
水蒸氣蒸餾法連翹60g、銀花30g按中國(guó)藥典2000年版揮發(fā)油提取方法提取揮發(fā)油，提取時(shí)間5-10小時(shí)，濾過(guò)，藥液備用。藥渣與牛蒡子36g、射干18g、馬勃18g，6-14倍水煎煮3次，每次0.5-2h，濾過(guò)，合并濾液，濃縮到1∶1，加9 5％乙醇，調(diào)含醇量至50-70％，攪勻，靜置過(guò)夜，離心，濾過(guò)，取濾液，合并提取液，減壓回收乙醇，減壓干燥，得干膏粉20.95g。
乙醇回流法稱取連翹30g、銀花15g、牛蒡子18g、射干9g、馬勃18g混勻，共三份，分別加入6-14倍量的50％-70％乙醇回流提取3次，每次0.5-2h，合并三次濾液，減壓回收溶劑后減壓干燥、粉碎得干膏粉，稱重。分別稱取適量干膏粉，依法測(cè)定上述指標(biāo)，結(jié)果見(jiàn)表1。
乙醇滲漉法稱取連翹30g、銀花15g、牛蒡子18g、射干9g、馬勃18g粗粉，混勻，裝入滲漉筒中，加入50％-70％乙醇，依法進(jìn)行滲漉，收集滲漉液至色淡(體積約為藥材重的15倍)，分別回收乙醇，減壓干燥粉碎得干膏粉。分別取出適量干膏粉依法進(jìn)行上述指標(biāo)測(cè)定，本發(fā)明提取工藝稱取連翹30g、銀花15g、牛蒡子18g、射干9g，加6-14倍量水，60-95℃加熱提取三次，每次0.5-2h，合并水提液，濾過(guò)，濾液濃縮離心，取離心液與馬勃浸取液合并減壓干燥得干膏粉。
本發(fā)明制劑的優(yōu)選工藝為加10倍量水，90-95℃加熱提取三次，每次1h，合并水提液，濾過(guò)，濾液80℃以下濃縮冷卻至40℃得相對(duì)密度為1.06-1.07的清膏；加乙醇調(diào)含醇量達(dá)50％，攪勻，放置過(guò)夜，離心；取上清液加入β-環(huán)糊精適量，攪勻，70℃，0.07Mpa條件下減壓回收乙醇，并濃縮至相對(duì)密度為1.10-1.15的藥液，靜置過(guò)夜，離心，上清液待用；沉淀于70-80℃烘干，粉碎，過(guò)80目篩，加入糖粉適量，混勻，與上清液一步制成顆粒，制成顆粒的工藝參數(shù)為進(jìn)風(fēng)口溫度80℃，出風(fēng)口溫度50℃，整粒，分裝，即得。
表1各提取方法比較揮發(fā)油綠原酸牛蒡子苷連翹苷黃酮g干膏g 溶化量mg(轉(zhuǎn)移mg(轉(zhuǎn)移mg(轉(zhuǎn)移 (轉(zhuǎn)移色澤(得率) 性ml(％) 率)率) 率) 率)藥材 579.00 2066.40114.009.6g(182g) (100％) (100％)(100％) (100％)水蒸氣 0.50 20.97 177.90 1293.5143.14 4.77 棕褐+蒸餾法(0.55)(11.52％ (30.72％) (62.60％) (31.84％) (49.69％ 色) )乙醇回 18.20 179.84 730.90 35.06 4.34 深褐++流法(20.00％ (62.12％) (70.74％) (61.50％) (90.41％ 色) )乙醇滲 16.12 218.86 856.4239.27 4.52 深褐+漉法(17.71％ (75.60％) (82.89％) (68.89％) (94.42％ 色) )
本發(fā)明 15.2 4.37棕色 -189.68774.0838.82提取工 (16.70％ (91.04％(65.52％) (74.92％) (68.10％)藝 ) )注-溶化，無(wú)焦屑；+溶化，微量焦屑；++溶化，少量焦屑。
綜合評(píng)價(jià)各項(xiàng)指標(biāo)，確定本發(fā)明提取工藝為最優(yōu)工藝。
分離與純化方法目前中藥制劑制備過(guò)程常用的分離純化方法為過(guò)濾、離心、超濾、天然沉淀劑法、大孔樹(shù)脂吸附解吸法、醇沉淀等方法。為得到較為科學(xué)的分離純化工藝，選擇方法1醇沉淀法，方法2天然沉淀劑法，方法3超濾法，方法4離心法這4種方法進(jìn)行比較研究，以選擇適合的分離與純化方法。
結(jié)果分取以上4種工藝得到的干膏粉約0.2g，進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2表2 不同分離純化工藝結(jié)果總黃酮干膏g 綠原酸mg牛蒡子苷mg 連翹苷mg方法(g)(n＝3-5) 外觀性狀(得率) (轉(zhuǎn)移率)(轉(zhuǎn)移率) (轉(zhuǎn)移率)(轉(zhuǎn)移率)藥材 289.50 1033.20 57.00 4.8(91g (100％) (100％) (100％)(100％))1 10.46 171.90 590.35 30.33 3.64棕色，較不易吸潮(11.49％)(59.38％) (57.14％) (53.21％) (75.83％)2 15.50 197.70 647.45 35.69 4.19棕色，極易吸潮(17.03％)(68.29％) (62.66％) (62.61％) (87.29％)3 13.19 185.19 633.47 34.16 4.17棕色，極易吸潮(14.49％)(63.97％) (61.31％) (59.93％) (86.88％)4 15.60 191.70 770.50 36.63 4.37棕色，極易吸潮(17.14％)(66.22％) (74.57％) (64.26％) (91.04％)分離、純化方法研究結(jié)果醇沉淀法降低干膏得率，但有效成份轉(zhuǎn)移率略低，考慮工業(yè)化的適用性，所以選定方法1。
通過(guò)提取方法和分離、純化方法研究比較最終確定本發(fā)明制法，按此制法的工藝重復(fù)二次試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3。
表3分離、純化方法研究比較干膏克綠原酸毫克 牛蒡子苷毫克連翹苷毫克 總黃酮克工藝(得率)(轉(zhuǎn)移率)(轉(zhuǎn)移率) (轉(zhuǎn)移率) (轉(zhuǎn)移率)藥材 289.50(100％) 1033.20(100％)57.00(100％) 4.80(100％)13.64(14.99％ 187.07(64.62％ 746.07(72.21％29.36(51.50％樣1 3.58(74.58％)) ) ) )13.73(15.09％ 191.65(66.20％ 738.74(71.50％28.44(49.90％樣2 3.49(72.71％)) ) ) )13.68(15.04％ 742.35(71.85％28.90(50.70％平均 188.87(65.24) 3.54(73.75％)) ) )由表可見(jiàn)，本發(fā)明制法重現(xiàn)性好，能適應(yīng)工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明藥物的有益效果表現(xiàn)在經(jīng)藥效學(xué)試驗(yàn)證明，本發(fā)明藥物具有明顯的抗病毒、抗炎、抑菌作用。尤其是可用于用于抗上呼吸道病毒和“非典”病毒。具體試驗(yàn)如下1、抗病毒作用經(jīng)體內(nèi)(小鼠)和體外(細(xì)胞)系列試驗(yàn)證明銀馬抗病毒藥物具有明顯的抗呼吸道病毒的作用，與陽(yáng)性對(duì)照藥雙黃連口服液和利巴韋林試驗(yàn)結(jié)果近似。經(jīng)體外抑制“非典”病毒的藥效篩選試驗(yàn)，采用CPE法，其治療指數(shù)為2。
(1)、本發(fā)明藥物體外抗呼吸道病毒藥效試驗(yàn)①、抗流感甲3型病毒試驗(yàn)在狗腎傳代細(xì)胞(MDCK細(xì)胞)內(nèi)對(duì)藥物毒性進(jìn)行試驗(yàn)，陽(yáng)性對(duì)照藥雙黃連口服液和利巴韋林。結(jié)果見(jiàn)表4。
表4銀馬抗病毒藥物抗流感甲3型病毒試驗(yàn)結(jié)果

②、抗Ad3病毒試驗(yàn)在人肺癌傳代細(xì)胞(293細(xì)胞)和人宮頸癌細(xì)胞(Hela細(xì)胞)內(nèi)對(duì)藥物毒性進(jìn)行試驗(yàn)，陽(yáng)性對(duì)照藥雙黃連口服液和利巴韋林。結(jié)果見(jiàn)表5。
表5 銀馬抗病毒藥物抗Ad3病毒試驗(yàn)結(jié)果

③、抗RSV病毒試驗(yàn)在非洲綠猴腎細(xì)胞(Vero細(xì)胞)和人咽癌上皮細(xì)胞(Hep-2細(xì)胞)內(nèi)對(duì)藥物毒性進(jìn)行試驗(yàn)，陽(yáng)性對(duì)照藥雙黃連口服液和利巴韋林。結(jié)果見(jiàn)表6。
表6 銀馬抗病毒藥物抗RSV病毒試驗(yàn)結(jié)果

(2)、本發(fā)明藥物體內(nèi)抗流感病毒藥效試驗(yàn)①、給予流感病毒后，觀察14天根據(jù)各組小鼠死亡數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果，陽(yáng)性對(duì)照藥雙黃連口服液和利巴韋林。結(jié)果見(jiàn)表7。
表7 銀馬抗病毒藥物體內(nèi)抗流感病毒試驗(yàn)結(jié)果(以死亡率為指標(biāo))

*依據(jù)保護(hù)率計(jì)算②、給予流感病毒后，觀察14天根據(jù)各組小鼠延長(zhǎng)生命率為指標(biāo)統(tǒng)計(jì)結(jié)果，陽(yáng)性對(duì)照藥雙黃連口服液和利巴韋林。結(jié)果見(jiàn)表8表8銀馬抗病毒藥物體內(nèi)抗流感病毒試驗(yàn)結(jié)果(以延長(zhǎng)生命率為指標(biāo))

*依據(jù)保護(hù)率計(jì)算
③給予流感病毒后，以病變鼠肺懸浮液接種雞胚，檢出病毒性肺炎為指標(biāo)統(tǒng)計(jì)結(jié)果，陽(yáng)性對(duì)照藥雙黃連口服液和利巴韋林。結(jié)果見(jiàn)表9。
表9銀馬抗病毒藥物體內(nèi)抗流感病毒試驗(yàn)結(jié)果(以病變鼠肺懸浮液接種雞胚，檢出病毒性肺炎為指標(biāo))

*依病毒性肺炎減少率計(jì)算(3)、體外抑制“非典”病毒的藥效篩選試驗(yàn)，進(jìn)行了銀馬抗病毒藥物在非洲綠猴腎傳代細(xì)胞(VERO E6細(xì)胞)培養(yǎng)內(nèi)對(duì)冠狀病毒04號(hào)的抑制作用的實(shí)驗(yàn)，方法和結(jié)果如下試驗(yàn)方法預(yù)備試驗(yàn)①銀馬抗病毒藥物對(duì)VERO E6細(xì)胞的毒性測(cè)定VERO E6細(xì)胞以40萬(wàn)/ml濃度接種96孔培養(yǎng)板，37℃，5％CO2培養(yǎng)24小時(shí)，加入驗(yàn)證藥物，受試物銀馬抗病毒藥物倍比稀釋為6000μg/ml∽11.7μg/ml，陽(yáng)性對(duì)照藥物更昔洛韋稀釋為6000μg/ml∽11 7μg/ml，每濃度接種3孔，每孔100μl，同時(shí)設(shè)正常細(xì)胞對(duì)照，37℃，5％CO2培養(yǎng)6天，每天在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化(CPE)，以25％以下形態(tài)變化為(+)，26∽50％為(++)，51∽75％為(+++)，76∽1 00％為(++++)，用Reed-Muench法計(jì)算藥物半數(shù)中毒濃度(TD50)和最大無(wú)毒濃度(TD0)。②在VERO E6細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)對(duì)冠狀病毒04號(hào)(“非典”病人血清04號(hào)標(biāo)本，由佑安醫(yī)院提供)的分離和毒力進(jìn)行測(cè)定VERO E6細(xì)胞以每毫升40萬(wàn)濃度接種96試管，37℃，5％CO2培養(yǎng)24小時(shí)，棄掉培養(yǎng)液，每管加入“非典”病人血清0.2ml，37℃轉(zhuǎn)鼓培養(yǎng)5∽7天。細(xì)胞出現(xiàn)CPE變化后，采用PCR的方法檢測(cè)冠狀病毒，04號(hào)標(biāo)本PCR陽(yáng)性，確定為冠狀病毒分離株。用終末稀釋法純化病毒2次，PCR檢測(cè)冠狀病毒仍為陽(yáng)性，經(jīng)免疫熒光法測(cè)定雙份“非典”病人血清，IgM陽(yáng)性，IgG4倍升高，確定為冠狀病毒。采用病毒CPE法測(cè)定其效價(jià)。病毒CPE法VERO E6細(xì)胞以每毫升40萬(wàn)濃度接種96培養(yǎng)板，37℃，5％CO2培養(yǎng)24小時(shí)，加入病毒液，病毒稀釋10-1∽10-6，6個(gè)濃度，每濃度接種3孔，每孔100μl，設(shè)正常細(xì)胞對(duì)照，37℃，5％CO2培養(yǎng)5∽7天，每24小時(shí)在倒置顯微鏡下觀察記錄細(xì)胞形態(tài)變化(CPE)以25％以下形態(tài)變化為(+)，26∽50％為(++)，51∽75％為(+++)，76∽100％為(++++)，用Reed-Mueneh法計(jì)算病毒半數(shù)感染濃度TCID50。
正式實(shí)驗(yàn)銀馬抗病毒藥物在VERO E6細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)對(duì)冠狀病毒04號(hào)的抑制作用VERO E6細(xì)胞以每毫升40萬(wàn)濃度接種96孔培養(yǎng)板，37℃，5％CO2培養(yǎng)24小時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)至單層，棄掉培養(yǎng)液，加入100TCID50的冠狀病毒液，同時(shí)設(shè)正常細(xì)胞對(duì)照和病毒對(duì)照。置37℃，5％CO2吸附2小時(shí)后，棄病毒液，加入不同濃度的銀馬抗病毒藥物，藥物選用對(duì)細(xì)胞的最大無(wú)毒濃度(TD0)2倍稀釋10個(gè)濃度即1500μg/ml∽2.93μg/ml，陽(yáng)性對(duì)照藥物更昔洛韋為2倍稀釋10個(gè)濃度即6000μg/ml∽11.7μg/ml，將稀釋的藥物分別加入細(xì)胞孔內(nèi)，每濃度3孔，同時(shí)設(shè)正常細(xì)胞對(duì)照和病毒對(duì)照。置37℃，5％CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)5∽7天，逐日在倒置顯微鏡下觀察病毒CPR，以病毒對(duì)照出現(xiàn)+++-++++時(shí)結(jié)束試驗(yàn)，用Reed-Muench法計(jì)算藥物的半數(shù)有效濃度(IC50)和治療指數(shù)(TI)，試驗(yàn)重復(fù)三次。
結(jié)果銀馬抗病毒藥物對(duì)VERO E6細(xì)胞的毒性作用，最大無(wú)毒濃度(TD0)為1500±0μg/ml，半數(shù)中毒濃度(TD50)為3000±0μg/ml；對(duì)照藥更昔洛韋最大無(wú)毒濃度(TD0)為＞6000±0μg/ml，半數(shù)中毒濃度(TD50)為＞6000±0μg/ml。
銀馬抗病毒藥物在VERO E6細(xì)胞內(nèi)培養(yǎng)，對(duì)冠狀病毒04號(hào)的抑制作用，CPE法藥物半數(shù)有效濃度(IC50)為375±0μg/ml，最小有效濃度(MIC)為750±0μg/ml；對(duì)照藥更昔洛韋CPE法藥物半數(shù)有效濃度(IC50)為11.7±0μg/ml，最小有效濃度(MIC)為23.44±0μg/ml。
抗“非典”病毒試驗(yàn)結(jié)果表明，銀馬抗病毒藥物的在VERO E6細(xì)胞內(nèi)對(duì)冠狀病毒04號(hào)的抑制作用比對(duì)照藥更昔洛韋要弱，只有對(duì)照藥的三十二分之一，但由于其還具有清熱解毒、抗炎抑菌等藥理作用，對(duì)治療“非典”有著輔助作用。
2、抗炎作用
(1)、銀馬抗病毒藥物對(duì)小鼠二甲苯所致耳廓炎癥的影響銀馬抗病毒藥物9.1、18.2g/kg和雙黃連口服液12.0ml/kg組給藥后均能顯著和非常顯著抑制由二甲苯所致耳廓炎癥，與水組比較差異有顯著性意義和非常顯著性意義(P＜0.05或P＜0.01)見(jiàn)表10。
表10 銀馬抗病毒藥物對(duì)小鼠二甲苯所致耳廓炎癥的影響(X±SD)組 別 劑量(g/kg) 動(dòng)物數(shù)(只) 炎癥腫脹度(mg)腫脹抑制率(％)水 組10 8.2±3.3銀馬抗病毒藥物9.1 10 4.0±3.7*51.2銀馬抗病毒藥物18.210 3.2±2.1**61.0銀馬抗病毒藥物36.410 5.4±3.4 34.1雙黃連口服液 12.0ml/kg 10 4.0±3.1**51.2與水組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
(2)、銀馬抗病毒藥物對(duì)大鼠瓊脂肉芽腫的影響銀馬抗病毒藥物4.55和9.1g/kg與雙黃連口服液6ml/kg可顯著和非常顯著抑制由瓊脂所致的肉芽腫，其與水組比較具有顯著性差異和非常顯著性差異(P＜0.05和P＜0.01)見(jiàn)表11。
表11銀馬抗病毒顆粒對(duì)大鼠瓊脂肉芽腫的作用(X±SD)組 別 動(dòng)物數(shù)(只) 劑量(g/kg) 瓊脂肉芽腫濕重(g)水 組 101.47±0.23銀馬抗病毒藥物 104.551.23±0.26*銀馬抗病毒藥物 109.101.13±0.25**銀馬抗病毒藥物 1018.21.32±0.36雙黃連口服液106ml/kg 1.13±0.38*與生理鹽水組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
3、銀馬抗病毒藥物對(duì)內(nèi)毒素致發(fā)熱家兔體溫的影響銀馬抗病毒藥物3.64g/kg用藥后僅在0.5h時(shí)顯著可抑制內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱，與水組比較(P＜0.05)；而7.28g/kg則在0.5、1、1.5、2h四個(gè)時(shí)間段都可顯著和非常顯著抑制由內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱，與水組比較(P＜0.05和P＜0.01)。而阿斯匹林組除上述四個(gè)時(shí)間段外在2.5h也可顯著抑制由內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱，與水組比較(P＜0.05)見(jiàn)表12。
表12 銀馬抗病毒顆粒對(duì)內(nèi)毒素致熱家兔體溫的影響(X±SD)(n＝7)劑量 給藥后不同時(shí)間體溫變化值(℃)組別(g/kg) 0.5h 1h 1.5h 2h 2.5h 3h1.16±1.49± 1.48± 1.14± 0.75± 0.66±水組0.38 0.50 0.50 0.340.48 0.44銀馬抗病0.58± 1.16±1.04± 0.59± 0.59± 0.61±3.64毒藥物 0.45*0.54 0.33 0.580.36 0.58銀馬抗病0.59±0.93±0.83± 0.52± 0.33± 0.27±7.28毒藥物 0.28**0.38-0.28**0.29**0.33 0.39阿斯0.59±0.91±0.79± 0.56± 0.34± 0.31±0.1匹林0.49*0.33*0.23**0.23**0.11*0.31與生理鹽水組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
4、體外抑菌試驗(yàn)銀馬抗病毒藥物對(duì)所試菌種均有不同程度的抑菌作用，對(duì)金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌、甲型鏈球菌的最小抑菌濃度(MIC)為0.125g/ml。對(duì)綠膿桿菌、肺炎雙球菌的最小抑菌濃度(MIC)為0.25g/ml見(jiàn)表13。
表13銀馬抗病毒顆粒的最小抑菌濃度(g/ml)試驗(yàn)菌銀馬抗病毒藥物稀釋倍數(shù)金黃色葡萄菌 0.1251∶8乙型溶血性鏈球菌 0.1251∶8甲型鏈球菌0.1251∶8綠膿桿菌 0.25 1∶4肺炎雙球菌0.25 1∶45、銀馬抗病毒藥物體內(nèi)抑菌試驗(yàn)銀馬抗病毒藥物18.2g/kg與頭孢拉啶0.30g/kg對(duì)金黃色葡萄球菌的臨床致病菌有較強(qiáng)的保護(hù)作用，與水組比較具有顯著性差異(P＜0.05)見(jiàn)表14。
表14 銀馬抗病毒藥物體內(nèi)抑菌試驗(yàn)動(dòng)物數(shù)組 別劑量(g/kg) 存活(只)死亡(只) 死亡率(％)(只)水 組20 1 19 95銀馬抗病毒藥物20 9.10 5 15 75銀馬抗病毒藥物20 18.2 7 13 65*銀馬抗病毒藥物20 36.4 3 17 85頭孢拉啶 20 0.30 9 11 55*與水組比較*P＜0.05。
6、銀馬抗病毒藥物對(duì)小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響銀馬抗病毒藥物18.2g/kg與36.4g/kg與雙黃連6.0ml/kg能顯著和非常顯著抑制小鼠耳腫脹，與模型組比較具有顯著性差異和非常顯著性差異(P＜0.05和P＜0.01)見(jiàn)表15。
表15 銀馬抗病毒藥物對(duì)小鼠遲發(fā)性超敏反應(yīng)的影響(X±SD)組別劑量(g/kg) 動(dòng)物數(shù)(只) 兩耳重量差值(mg)正常組 10 1.3±1.16模型組 10 8.4±4.22ΔΔΔ銀馬抗病毒藥物 9.1 10 7.1±2.38銀馬抗病毒藥物 18.2 10 4.7±3.33*銀馬抗病毒藥物 36.4 10 3.3±2.58**雙黃連口服液 6.0ml/kg 10 4.6±3.20*與正常組比較ΔΔΔP＜0.01，與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
7、銀馬抗病毒藥物的鎮(zhèn)痛作用(1)小鼠熱板法試驗(yàn)銀馬抗病毒藥物36.4克·公斤-1在30分鐘時(shí)可明顯提高小鼠熱板法痛閾的作用，與水組比較有顯著性差異(P＜0.05)見(jiàn)表16。
表16 銀馬抗病毒顆粒對(duì)小鼠熱板法痛閾值的影響(X±SD)動(dòng)物給藥后痛閾值劑量組別數(shù) 給藥前(g/kg)30 60 90120(只)15.7±11.5±13.3± 16.5± 17.5±生理鹽水105.02 2.95 6.20 8.45 12.9銀馬抗病毒 16.2±13.7± 13.8±13.9±13.5±10 9.10藥物 5.20 4.20 6.26 10.2 6.25銀馬抗病毒 16.2±13.4± 13.3±15.7±15.4±10 18.2藥物 4843.37 7.18 6.90 7.26銀馬抗病毒 16.5±17.9± 15.4±18.3±16.1±10 36.4藥物 7.51 9.42*11.9 12.8 8.68阿斯匹 15.7± 19.1± 19.6±20.8±21.5±10 0.30林 5.56 6.26**4.24*5.27 4.70與生理鹽水組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
(2)扭體法試驗(yàn)銀馬抗病毒藥物三個(gè)劑量組給藥后雖然扭體次數(shù)比水組少，但與水組比較均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)見(jiàn)表17。
表17銀馬抗病毒藥物對(duì)醋酸引起小鼠扭體反應(yīng)的影響(X±SD)組 別劑量(g/kg)動(dòng)物數(shù)(只) 扭體次數(shù)(次/15分鐘)水 組 11 15.1±11.3銀馬抗病毒藥物 9.10 11 10.6±8.87銀馬抗病毒藥物 18.2 11 11.9±9.99銀馬抗病毒藥物 36.4 11 12.2±9.53阿 斯 匹 林 0.30 11 6.27±5.12*與水組比較*P＜0.05。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1按下列配比稱取原料藥連翹30份 牛蒡子18份金銀花15份射干9份 馬勃6份 蘆根10份(1)、以上六味原料藥加10倍量水，加熱提取3次，每次1小時(shí)，合并3次水提液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮；(2)、加95％乙醇調(diào)醇含量為50％，放置，離心；(3)、取上清液加β-環(huán)糊精包結(jié)，攪勻后減壓回收溶劑并濃縮至相對(duì)密度1.10-1.15，離心出β-環(huán)糊精包結(jié)物，干燥，粉碎，過(guò)80目篩，加糖粉，與清液一步制粒，包裝，即得本發(fā)明藥物顆粒劑。
實(shí)施例2按下列配比稱取原料藥連翹25份牛蒡子15份 金銀花12.48份射干7.52份 馬勃7.52份 蘆根6份步驟(1)和(2)同實(shí)施例1，然后按常規(guī)工藝制備成膠囊。
實(shí)施例3按下列配比稱取原料藥連翹30份牛蒡子18份金銀花15份射干9份 馬勃6份 蘆根10份步驟(1)和(2)同實(shí)施例1，然后上清液減壓回收乙醇，濃縮，真空干燥，粉碎，加入適量淀粉制粒，壓片成片劑。
實(shí)施例4按下列配比稱取原料藥連翹30份牛蒡子18份金銀花15份射干9份 馬勃6份 蘆根10份步驟(1)和(2)同實(shí)施例1，然后上清液減壓回收乙醇，調(diào)節(jié)PH值為7.2，加水至適量，制成口服液。
實(shí)施例5按下列配比稱取原料藥連翹30份 牛蒡子18份 金銀花15份射干9份 馬勃6份 蘆根10份步驟(1)和(2)同實(shí)施例1，然后上清液減壓回收乙醇，濃縮，真空干燥，粉碎成細(xì)粉，加煉蜜適量，制成濃縮丸。
權(quán)利要求
1.一種抗病毒的中藥復(fù)方制劑，其特征在于該制劑是由下述重量份的原料藥按下述方法制成的連翹10～50份牛蒡子6～30份金銀花5～25份射干3～15份 馬勃1～10份(1)、取上述原料藥，加1～20倍量水，加熱提取3次，每次0.5～3小時(shí)，合并3次水提液，濾過(guò)，濾液濃縮；(2)、加95％乙醇調(diào)醇含量為30～75％，放置，離心；(3)、取上清液加β-環(huán)糊精包結(jié)，攪勻后減壓回收溶劑并濃縮至相對(duì)密度1.04～1.60，離心出β-環(huán)糊精包結(jié)物，干燥，粉碎，過(guò)80目篩；(4)、將上述干燥物，按常規(guī)方法制成藥劑學(xué)上可接受的各種劑型。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其特征在于所述原料藥的重量配比為連翹25份牛蒡子15份金銀花12.48份射干7.52份馬勃7.52份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其特征在于其中的原料藥還可加入蘆根5～20份。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其特征在于所述原料藥的重量配比為連翹15～40份牛蒡子9～24份金銀花10～20份射干5～12份馬勃3～8份 蘆根7～15份。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制劑，其特征在于所述原料藥的重量配比為連翹30份牛蒡子18份金銀花15份射干9份馬勃6份蘆根10份。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的制劑，其特征在于所述制劑的劑型是顆粒劑、膠囊劑、片劑、口服液、丸劑、混懸劑、滴丸劑、微丸劑、口含片、膠丸、軟膠囊、分散片、溶液劑、氣霧劑、噴霧劑、巴布劑、或貼劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制劑，其特征在于所述的劑型是顆粒劑。
8.權(quán)利要求7所述的制劑的制備方法，其特征在于包括下列步驟(1)、取各原料藥，加10倍量水，加熱提取3次，每次1小時(shí)，合并3次水提液，濾過(guò)，濾液濃縮；(2)、加95％乙醇調(diào)醇含量為50％，放置，離心；(3)、取上清液加β-環(huán)糊精包結(jié)，攪勻后回收溶劑并濃縮至相對(duì)密度1.10～1.15，離心出β-環(huán)糊精包結(jié)物，干燥，粉碎，過(guò)80目篩，加糖粉，與清液一步制粒，包裝，即得。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于其中的濃縮方法是常壓下濃縮。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于其中的濃縮方法是減壓濃縮，減壓濃縮條件為0.01～0.09MPA，40～90℃。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的制備方法，其特征在于減壓濃縮的條件是70℃，0.07MPA。
12.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于其中的回收溶劑方法為常壓回收。
13.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于其中的回收溶劑方法是減壓回收，減壓回收溶劑的條件為0.01～0.09MPA，30～80℃。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的制備方法，其特征在于所說(shuō)的減壓回收溶劑的條件是80℃以下、0.07MPA。
15.根據(jù)權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于其中的干燥方法為接觸干燥、氣流干燥、隧道式烘箱干燥、真空減壓干燥、沸騰干燥、噴霧干燥、冷凍干燥、遠(yuǎn)紅外干燥、或微波干燥。
16.權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于所說(shuō)的干燥方法是70-80℃烘干。
17.權(quán)利要求1-5任一所述的抗病毒復(fù)方制劑在制備抗病毒感染藥物中的應(yīng)用。
18.權(quán)利要求1-5任一所述的抗病毒復(fù)方制劑在制備抗呼吸道病毒感染藥物中的應(yīng)用。
19.權(quán)利要求1-5任一所述的抗病毒復(fù)方制劑在制備抗“非典”病毒感染輔助藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種抗病毒的中藥復(fù)方制劑，它是以連翹、牛蒡子、金銀花、射干、馬勃、蘆根為原料藥。本發(fā)明藥物處方是以古方“銀翹馬勃散”為基礎(chǔ)，采用現(xiàn)代工藝方法制備的藥物。可以制備成任何一種藥劑學(xué)上可接受的劑型。本發(fā)明還涉及到該藥物的制備方法和新用途。本發(fā)明藥物的有益效果表現(xiàn)在試驗(yàn)證明，本發(fā)明藥物具有明顯的抗病毒作用。經(jīng)體內(nèi)(小鼠)和體外(細(xì)胞)系列試驗(yàn)證明其具有明顯的抗呼吸道病毒的作用，與雙黃連口服液和利巴韋林試驗(yàn)結(jié)果近似；經(jīng)體外抑制“非典”病毒的試驗(yàn)表明，其在VERO E6細(xì)胞內(nèi)對(duì)冠狀病毒04號(hào)的抑制作用比更昔洛韋要弱，只有對(duì)照藥的三十二分之一。因其還具有清熱解毒、抗炎、抑菌等藥理作用，對(duì)“非典”具有輔助治療作用。
文檔編號(hào)A61P31/00GK1650993SQ20041010084
公開(kāi)日2005年8月10日 申請(qǐng)日期2004年12月7日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月10日
發(fā)明者余華, 鐘小群, 張愛(ài)華, 方鋁, 李玉云, 張俊明, 翁秀英 申請(qǐng)人:江西省藥物研究所