專利名稱：一種毛冬青凍干粉針劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種毛冬青凍干粉針劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
毛冬青為冬青科植物毛冬青的干燥根，是我國(guó)南方常用中藥，具有活血通脈、消腫止痛、清熱解毒之功效，臨床上廣泛用于治療冠心病、心絞痛和脈管炎等疾病。文獻(xiàn)報(bào)道，毛冬青中所含的黃酮類化合物是主要有效成分。已上市的有毛冬青片、毛冬青膠囊和毛冬青注射液，其中所含的主要有效成分均為黃酮類化合物。片劑、膠囊劑、注射液(WS3-B-3786-98)和復(fù)方毛冬青注射液(CN93114604，用于治療各種病毒性疾病)制備方法中對(duì)毛冬青均采用水提醇沉方法進(jìn)行提取，除雜的各步由于沉淀的吸附、包裹，對(duì)于有效成分的損失很大。申請(qǐng)?zhí)枮镃N00127593的專利申請(qǐng)文獻(xiàn)中雖然經(jīng)過處理使得制成的提取物中總黃酮和總皂苷的含量大于或等于50％，但是用于治療勃起功能障礙等癥。對(duì)于心血管疾病的治療來說，其中所含的總皂苷為非活性成分，應(yīng)該除去不要。而且大量皂苷的存在，限制了藥物不能用于靜脈注射，因?yàn)樵碥湛梢允辜t細(xì)胞破裂，造成溶血或紅細(xì)胞凝聚(即凝血)的現(xiàn)象，給機(jī)體帶來嚴(yán)重的危害。注射液對(duì)穩(wěn)定性要求高，在攜帶、儲(chǔ)藏、運(yùn)輸時(shí)容易破碎，帶來許多麻煩。
在資料檢索中未發(fā)現(xiàn)有關(guān)毛冬青凍干粉針劑的任何報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是公開一種富含活性成分、療效好、副作用小、方便使用的可用于肌內(nèi)注射或靜脈注射的毛冬青凍干粉針制劑。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述凍干粉針制劑的制備方法。
毛冬青中除含有有效成分總黃酮外，還含有大量的鞣質(zhì)。鞣質(zhì)若不去除，會(huì)在注射時(shí)使患者有疼痛的感覺，使病人難于接受。但是鞣質(zhì)和黃酮都含有羥基，性質(zhì)相似，若用普通的除去鞣質(zhì)的方法，在除去鞣質(zhì)的同時(shí)，使黃酮類有效成分損失很多。鞣質(zhì)的分子量普遍較大，而黃酮類化合物的分子量較小，利用超濾法，選擇合適的分子篩可以除去大部分的鞣質(zhì)而對(duì)黃酮類化合物幾乎沒有損失。毛冬青提取物經(jīng)聚酰胺柱吸附，用水洗脫后，柱上吸附的主要是黃酮類化合物和皂苷類化合物，利用聚酰胺對(duì)黃酮類化合物和皂苷類化合物的吸附能力的不同，選用合適的洗脫溶劑可以除去大量的皂苷類成分。然后再用堿液洗脫，最終得到以總黃酮為有效部位的提取物。
本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)。
一、制備方法(1)原料藥的處方為毛冬青1.2-2.0重量份；(2)取毛冬青藥材，粉碎，用6-12倍量的水提取1-3次，每次1-2小時(shí)，合并提取液過濾，濾液濃縮至溶液∶藥材為1∶1，靜置，過濾，濾液以10000-20000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的聚酰胺柱，先用4-6倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用乙醇溶液洗脫至Molisch反應(yīng)為陰性，棄去稀乙醇洗脫液，再換用堿性水溶液洗脫，收集堿洗脫液，用酸調(diào)pH值為中性，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到毛冬青水提物2.0-4.5重量份。
(3)取上述毛冬青水提物加注射用水溶解，濾過，加入凍干賦型劑2.5-5.0重量份，加注射用水至規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值至5.0-6.5，灌裝，冷凍干燥，即得。
二、制劑含量測(cè)定含量測(cè)定方法采用毛冬青注射液(WS3-B-3786-98)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定項(xiàng)下的方法進(jìn)行測(cè)定。編號(hào)1毛冬青注射液(廣東省博羅先鋒藥業(yè)集團(tuán)有限公司)；編號(hào)2毛冬青注射液(按照CN00127593的專利申請(qǐng)文獻(xiàn)方法制備)；編號(hào)3本發(fā)明毛冬青凍干粉針劑，由北京乾露春科技有限公司提供。結(jié)果見表1。
表1 制劑中總黃酮(以無水蘆丁計(jì))含量測(cè)定編號(hào)樣品含量(mg/支)批次1231 41.3 53.7 60.52 40.6 50.2 57.73 38.7 52.8 59.6以上含量測(cè)定結(jié)果說明，本發(fā)明的毛冬青凍干粉針劑的有效成分總黃酮的含量明顯高于編號(hào)1的毛冬青注射液(WS3-B-3786-98)的含量，也高于編號(hào)2的毛冬青注射液(按照CN00127593的專利申請(qǐng)文獻(xiàn)方法制備)。說明本發(fā)明的制備方法更加合理，更加科學(xué)，更具有實(shí)用性。
三、提取物含量測(cè)定含量測(cè)定方法采用毛冬青注射液(WS3-B-3786-98)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定項(xiàng)下的方法進(jìn)行測(cè)定。1號(hào)提取物(按照毛冬青注射液(WS3-B-3786-98)中的制法所得)；2號(hào)提取物(按照CN00127593的專利申請(qǐng)文獻(xiàn)方法制備)；3號(hào)提取物(按照本發(fā)明的方法制備)，由北京乾露春科技有限公司提供。結(jié)果見表2。
表2 提取物中總黃酮(以無水蘆丁計(jì))含量測(cè)定編號(hào)樣品含量(％)批次123124.2 43.5 55.7226.6 44.2 53.8325.3 41.8 52.4以上含量測(cè)定結(jié)果說明，本發(fā)明的制備方法得到的提取物中的有效成分總黃酮含量明顯高于1號(hào)提取物(按照毛冬青注射液(WS3-B-3786-98)中的制法所得)和2號(hào)提取物(按照CN00127593的專利申請(qǐng)文獻(xiàn)方法制備)。說明本發(fā)明的制備方法更加合理，更加科學(xué)，更具有實(shí)用性。
四、溶血實(shí)驗(yàn)編號(hào)1毛冬青注射液(按照CN00127593的專利申請(qǐng)文獻(xiàn)方法制備)；編號(hào)2本發(fā)明毛冬青凍干粉針劑，由北京乾露春科技有限公司提供。
取編號(hào)1和編號(hào)2的相同濃度的生理鹽水稀釋液各0.3ml，加生理鹽水2.2ml與2％兔紅細(xì)胞生理鹽水混懸液2.5ml，搖勻，置于37℃的恒溫水浴中，觀察1小時(shí)。結(jié)果見表3。
表3 溶血實(shí)驗(yàn)結(jié)果編號(hào)現(xiàn)象1 +2 -注+表示有溶血現(xiàn)象；-表示無溶血現(xiàn)象。
以上溶血實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，本發(fā)明的凍干粉針劑的制備方法去除了其中的非活性的皂苷類成分，不會(huì)對(duì)人體造成溶血和凝血現(xiàn)象。所用本發(fā)明不僅可用于肌內(nèi)注射，還可用于靜脈注射。
五、藥理實(shí)施例以下藥理實(shí)驗(yàn)所用陽(yáng)性對(duì)照藥毛冬青注射液(按照CN00127593的專利申請(qǐng)文獻(xiàn)方法制備)和本發(fā)明毛冬青凍干粉針劑均由北京乾露春科技有限公司提供。
1.對(duì)小鼠缺氧耐力的影響實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)方法取健康昆明種小鼠30只，體重20～24g。隨機(jī)分成對(duì)照組，毛冬青注射液組、本發(fā)明毛冬青凍干粉針劑組。每組10只，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)。以人常規(guī)治療劑量折算為小鼠的劑量。折算公式為待測(cè)動(dòng)物試用劑量＝已知?jiǎng)游锝o藥量×待測(cè)動(dòng)物的體表面積比值/已知?jiǎng)游锏捏w表面積比值。對(duì)照組給生理鹽水，1次/天，連續(xù)7d。于末次給藥后1h，將小鼠分別置于體積為150ml磨口瓶中，內(nèi)放15g鈉石灰，密閉觀察其存活時(shí)間。結(jié)果見表4。
表4 對(duì)小鼠常壓缺氧的影響(X±SD)組別鼠數(shù)(只) 平均存活時(shí)間(min)對(duì)照組 1015.61±3.76毛冬青注射液組 1029.77±3.26*本發(fā)明毛冬青凍干粉針劑組1035.13±3.82*#注與對(duì)照組比較*P＜0.01；與毛冬青注射液組比較#P＜0.05。
本發(fā)明毛冬青凍干粉針劑和毛冬青注射液均能提高小鼠常壓缺氧耐力，平均存活時(shí)間比對(duì)照組顯著延長(zhǎng)(P＜0.01)；本發(fā)明毛冬青凍干粉針劑和毛冬青注射液相比，平均存活時(shí)間也有差異(P＜0.05)。說明本發(fā)明毛冬青凍干粉針劑的藥理作用強(qiáng)于毛冬青注射液。
2.對(duì)大鼠體內(nèi)血栓形成的影響將大鼠隨機(jī)分成3組，每組10只，分別為生理鹽水對(duì)照組、毛冬青注射液組、本發(fā)明凍干粉針劑組。將各組動(dòng)物給藥(生理鹽水組給予等體積的生理鹽水)，每日1次，連續(xù)給藥7天，末次給藥后1小時(shí)，將大鼠用10％水合氯醛，按0.3g/kg體重麻醉后固定，分離左頸總動(dòng)脈，在血栓儀上以2mA電流刺激血管7min后，記錄血栓形成時(shí)間。結(jié)果見表5。
表5 對(duì)大鼠體內(nèi)血栓形成的影響(X±SD)組別鼠數(shù)(只) 血栓形成時(shí)間(min)對(duì)照組 10640.78±95.22毛冬青注射液組 10774.24±82.16*本發(fā)明毛冬青凍干粉針劑組10827.38±76.44*#注與對(duì)照組比較*P＜0.01；與毛冬青注射液組比較#P＜0.05本發(fā)明毛冬青凍干粉針劑和毛冬青注射液都能延長(zhǎng)大鼠體內(nèi)血栓的形成(P＜0.01)；本發(fā)明毛冬青凍干粉針劑和毛冬青注射液相比，延長(zhǎng)時(shí)間也有差異(P＜0.05)。說明本發(fā)明毛冬青凍干粉針劑的藥理作用強(qiáng)于毛冬青注射液。
3.對(duì)垂體后葉素所致大鼠缺血性心電圖T波的影響取體重250～300g Wistar大鼠30只，雌雄各半，隨機(jī)分為3組，每組10只，連續(xù)ip.給藥7d。各組動(dòng)物于末次給藥30min后，腹腔注射25％烏拉坦0.4ml/100g麻醉，仰臥固定，標(biāo)準(zhǔn)電壓1mv＝15mm，走紙速度50mm/s，記錄II導(dǎo)聯(lián)心電圖。舌下靜脈注射垂體后葉素0.75u/kg于5s內(nèi)注射完。每30s記錄一次心電圖。大鼠靜脈注射垂體后葉素1min內(nèi)，大多數(shù)表現(xiàn)為心率減慢，T波高聳，ST段抬高等變化。分別觀察用藥前后30s、1min及50min上T波增殖的變化。結(jié)果見表6。
表6 對(duì)垂體后葉素所致大鼠缺血性心電圖T波的影響。
鼠數(shù) T波增值(mV)組別(只) 30s1min 5min生理鹽水組 10 0.35±0.16 0.26±0.140.18±0.027毛冬青注射液組 10 0.23±0.08*0.16±0.07*0.087±0.016*本發(fā)明毛冬青凍干粉針劑組10 0.20±0.07*# 0.12±0.06*#0.068±0.014*#注與對(duì)照組比較*P＜0.01與毛冬青注射液組比較#P＜0.05本發(fā)明毛冬青凍干粉針劑和毛冬青注射液均能顯著降低30s、1min及5min時(shí)的T波增殖(P＜0.01)；本發(fā)明毛冬青凍干粉針劑和毛冬青注射液相比，降低的程度也有差異(P＜0.05)。說明本發(fā)明毛冬青凍干粉針劑的藥理作用強(qiáng)于毛冬青注射液。
六、制備實(shí)施例實(shí)施例1(1)原料藥的處方為毛冬青20kg；(2)取毛冬青藥材，粉碎，用12倍量的水提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液過濾，濾液濃縮至溶液∶藥材為1∶1，靜置，過濾，濾液以20000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的聚酰胺柱，先用4倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用60％乙醇溶液洗脫至Molisch反應(yīng)為陰性，棄去乙醇洗脫液，再換用pH值為11.0的氫氧化鈉水溶液洗脫，收集堿洗脫液，用鹽酸調(diào)pH值為中性，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到毛冬青水提物450g。
(3)取上述毛冬青水提物加注射用水溶解，濾過，加入聚乙烯吡咯烷酮和葡萄糖250g，加注射用水至規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值至6.5，灌裝，冷凍干燥，即得毛冬青凍干粉針劑1000支。
實(shí)施例2(1)原料藥的處方為毛冬青12kg；(2)取毛冬青藥材，粉碎，用6倍量的水提取1次，每次1小時(shí)，合并提取液過濾，濾液濃縮至溶液∶藥材為1∶1，靜置，過濾，濾液以10000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的聚酰胺柱，先用6倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用40％乙醇溶液洗脫至Molisch反應(yīng)為陰性，棄去乙醇洗脫液，再換用pH值為8.5的碳酸鈉水溶液洗脫，收集堿洗脫液，用硫酸調(diào)pH值為中性，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到毛冬青水提物200g。
(3)取上述毛冬青水提物加注射用水溶解，濾過，加入甘露醇、果糖和乳糖500g，加注射用水至規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值至5.0，灌裝，冷凍干燥，即得毛冬青凍干粉針劑1000支。
實(shí)施例3(1)原料藥的處方為毛冬青16kg；(2)取毛冬青藥材，粉碎，用10倍量的水提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液過濾，濾液濃縮至溶液∶藥材為1∶1，靜置，過濾，濾液以15000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的聚酰胺柱，先用5倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用50％乙醇溶液洗脫至Molisch反應(yīng)為陰性，棄去乙醇洗脫液，再換用pH值為9.0的氫氧化鉀水溶液洗脫，收集堿洗脫液，用醋酸調(diào)pH值為中性，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到毛冬青水提物350g。
(3)取上述毛冬青水提物加注射用水溶解，濾過，加入聚乙烯吡咯烷酮350g，加注射用水至規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值至6.0，灌裝，冷凍干燥，即得毛冬青凍干粉針劑1000支。
實(shí)施例4(1)原料藥的處方為毛冬青14kg；(2)取毛冬青藥材，粉碎，用8倍量的水提取3次，每次1小時(shí)，合并提取液過濾，濾液濃縮至溶液∶藥材為1∶1，靜置，過濾，濾液以12000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的聚酰胺柱，先用4倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用45％乙醇溶液洗脫至Molisch反應(yīng)為陰性，棄去乙醇洗脫液，再換用pH值為9.5的碳酸氫鈉水溶液洗脫，收集堿洗脫液，用磷酸調(diào)pH值為中性，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到毛冬青水提物270g。
(3)取上述毛冬青水提物加注射用水溶解，濾過，加入右旋果糖和乳糖430g，加注射用水至規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值至5.5，灌裝，冷凍干燥，即得毛冬青凍干粉針劑1000支。
實(shí)施例5(1)原料藥的處方為毛冬青18kg；(2)取毛冬青藥材，粉碎，用9倍量的水提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液過濾，濾液濃縮至溶液∶藥材為1∶1，靜置，過濾，濾液以18000轉(zhuǎn)份的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的聚酰胺柱，先用5倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用47％乙醇溶液洗脫至Molisch反應(yīng)為陰性，棄去乙醇洗脫液，再換用pH值為10.5的碳酸鉀水溶液洗脫，收集堿洗脫液，用冰醋酸調(diào)pH值為中性，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到毛冬青水提物410g。
(3)取上述毛冬青水提物加注射用水溶解，濾過，加入甘露醇和葡聚糖290g，加注射用水至規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值至6.2，灌裝，冷凍干燥，即得毛冬青凍干粉針劑1000支。
實(shí)施例6(1)原料藥的處方為毛冬青17kg；(2)取毛冬青藥材，粉碎，用8倍量的水提取3次，每次1小時(shí)，合并提取液過濾，濾液濃縮至溶液∶藥材為1∶1，靜置，過濾，濾液以16000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的聚酰胺柱，先用6倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用55％乙醇溶液洗脫至Molisch反應(yīng)為陰性，棄去乙醇洗脫液，再換用pH值為10.0的氫氧化鉀和碳酸氫鈉水溶液洗脫，收集堿洗脫液，用鹽酸調(diào)pH值為中性，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到毛冬青水提物385g。
(3)取上述毛冬青水提物加注射用水溶解，濾過，加入葡萄糖和果糖315g，加注射用水至規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值至5.7，灌裝，冷凍干燥，即得毛冬青凍干粉針劑1000支。
本發(fā)明一次1支，一日1-2次。
權(quán)利要求
1.一種毛冬青凍干粉針劑，其特征在于它是由毛冬青水提物2.0-4.5重量份和藥用輔料2.5-5.0重量份組成；其中毛冬青水提物中有效部位總黃酮的重量百分含量大于或等于50％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的毛冬青凍干粉針劑，其中藥用輔料為凍干賦型劑，它是甘露醇、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、葡萄糖、果糖、右旋果糖和乳糖中的一種、兩種或幾種的混合物。
3.一種毛冬青凍干粉針劑的制備方法，其特征包括以下步驟(1)原料藥的處方為毛冬青1.2-2.0重量份；(2)取毛冬青藥材，粉碎，用6-12倍量的水提取1-3次，每次1-2小時(shí)，合并提取液過濾，濾液濃縮至溶液∶藥材為1∶1，靜置，過濾，濾液以10000-20000轉(zhuǎn)/分的速度離心，離心液用截留分子量為5000的超濾膜超濾，濾液過已處理好的聚酰胺柱，先用4-6倍柱體積的水洗脫，棄去水液，再用乙醇溶液洗脫至Molisch反應(yīng)為陰性，棄去稀乙醇洗脫液，再換用堿性水溶液洗脫，收集堿洗脫液，用酸調(diào)pH值為中性，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到毛冬青水提物；(3)取上述毛冬青水提物加注射用水溶解，濾過，加入凍干賦型劑，加注射用水至規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值至5.0-6.5，灌裝，冷凍干燥，即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，其中洗脫聚酰胺柱的乙醇溶液的濃度為40％-60％。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，其中洗脫聚酰胺柱的乙醇溶液的濃度為45％-50％。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于其中堿性水溶液為氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉中的一種或幾種的混合物的水溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，其中堿性水溶液的pH值為8.5-11.0。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，其中堿性水溶液的pH值為9.0-10.0。
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于其中所述的酸為鹽酸、硫酸、磷酸、醋酸、冰醋酸中的一種或幾種的混合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種毛冬青凍干粉針劑及其制備方法。它是由毛冬青中提取的總黃酮有效部位以及藥用輔料組成的?？傸S酮有效部位采用水提、超濾、聚酰胺柱除雜的方法獲得，占到了毛冬青提取物中的50％以上。本發(fā)明既可以用于肌內(nèi)注射，也可用于靜脈注射。含量測(cè)定結(jié)果和藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，本發(fā)明有效成分含量更高，藥理作用更強(qiáng)，具有很好的預(yù)防和治療心血管疾病的作用。
文檔編號(hào)A61P9/14GK1628832SQ20041007408
公開日2005年6月22日 申請(qǐng)日期2004年9月3日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月3日
發(fā)明者張平 申請(qǐng)人:張平