專利名稱：一種治療心血管疾病的藥物的制備方法及其質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物的制備方法及其質(zhì)量控制方法，特別是涉及一種治療心血管疾病的藥物的制備方法及其質(zhì)量控制方法，屬醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
二十世紀(jì)中葉以來(lái)，心血管疾病日益成為主要死亡原因，心血管疾病為目前發(fā)病率很高、用藥量很大的一類中老年人常發(fā)病，隨著人口的老齡化及飲食習(xí)慣的影響，該類疾病發(fā)病率有不斷升高趨勢(shì)。近年來(lái)，心血管疾病藥物的年銷售量一直名列中藥銷售量的前三位。新藥的研發(fā)工作者也給心血管疾病更多關(guān)注，但長(zhǎng)期以來(lái)，市場(chǎng)上起效迅速，療效穩(wěn)定，毒副作用小的中藥制劑還是非常少，本發(fā)明以此為切入點(diǎn)，對(duì)藥效明確的中藥復(fù)方制劑丹七片進(jìn)行了二次開(kāi)發(fā)，將其開(kāi)發(fā)成為有效部位凍干粉針劑。
丹七片為《部頒標(biāo)準(zhǔn)》收載品種，用于臨床治療冠心病、心絞痛。但該品種以粗提物制成制劑，服用量大、崩解度差、無(wú)完善的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、產(chǎn)品有效成分的含量差異較大，導(dǎo)致療效不穩(wěn)定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供丹參提取物和三七提取物的最佳配比；本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供一種丹參提取物的制備方法；本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提供一種丹七凍干粉針的質(zhì)量控制方法。
本發(fā)明目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。
取丹參提取物和三七提取物，按照1∶5的比例將其混合，得到一種藥物組合物，然后按藥劑學(xué)常規(guī)方法，制成臨床可接受的各種劑型，包括但不限于如下劑型當(dāng)中的一種片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、混懸劑、滴丸、口服液體制劑等。
所述丹參提取物可以是丹參總酚酸；所述的三七提取物可以是三七總皂苷。
所述的藥物組合物，其中含丹參提取物以丹酚酸B鎂鹽計(jì)，為10-16.67％(g/g)；含三七提取物以人參皂苷Rg1計(jì)，為40-83.33％；含丹酚酸B鎂鹽為8-15％(g/g)，人參皂苷Rg120-30％，R14-10％，Re2-5％，Rb120-40％。
其中所述的丹參提取物是經(jīng)如下制備方法制備而成丹參去雜質(zhì)，加6～8倍量去離子水80℃加熱提取2～3次，每次0.5～2小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，60℃以下減壓濃縮，冷卻至室溫后，加95％乙醇至含醇量達(dá)60-80％，靜置12h，濾過(guò)，回收乙醇，通過(guò)生藥量與樹(shù)脂比例為1∶3-1∶8的大孔吸附樹(shù)脂AB-8，用去離子水洗至流出液無(wú)糖反應(yīng)，繼續(xù)用30-60％乙醇洗脫，待色帶下來(lái)收集洗脫液，直至洗脫液加三氯化鐵、鐵氰化鉀試劑變綠并無(wú)沉淀為止；將洗脫液于60℃以下濃縮，噴霧干燥，即得丹參提取物。
取按上述比例關(guān)系得到的含丹參提取物和三七提取物的組合物，加注射用水使溶解，加0.1％活性炭，40℃攪拌15分鐘，冷卻至室溫后，先用濾紙板濾過(guò)，再用0.2μm微孔濾膜濾過(guò)，加注射用水稀釋，罐裝，每支4ml，冷凍干燥，可制得本發(fā)明注射用丹七凍干粉針劑。
本發(fā)明注射用丹七凍干粉針的質(zhì)量控制方法包括如下指紋圖譜照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VI D)測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速1.0ml/min；柱溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；以乙腈-0.1％磷酸為流動(dòng)相，按下述梯度洗脫條件進(jìn)行梯度洗脫，運(yùn)行60min0-6分鐘時(shí)，乙腈的比例由17％升至19％，0.1％磷酸水溶液的比例由83％降至81％；6-25分鐘，乙腈由19％升到20％，0.1％磷酸水溶液由81％降為80％；25-30分鐘，保持乙腈-0.1％磷酸水溶液以20∶80的比例進(jìn)行洗脫；從30-55分鐘，乙腈的比例由20％增加至40％，0.1％磷酸水溶液的比例則由80％降至60％；從55-60分鐘，保持乙腈-0.1％磷酸水溶液以40∶60的比例進(jìn)行洗脫；丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品溶液的制備取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，用甲醇配制成每1ml含0.25mg的溶液，0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得；供試品溶液的制備取本發(fā)明凍干粉末90mg，至50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄60分鐘的色譜圖，即得；供試品指紋圖譜(見(jiàn)

圖1)共有14個(gè)共有峰，其中峰10號(hào)為丹酚酸B鎂鹽的色譜峰，這十四個(gè)峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.095，2號(hào)峰0.163，3號(hào)峰0.433，4號(hào)峰0.577，5號(hào)峰0.615，6號(hào)峰0.654，7號(hào)峰0.714，8號(hào)峰0.860，9號(hào)峰0.909，10號(hào)峰1，11號(hào)峰1.073，12號(hào)峰1.185，13號(hào)峰1.485，14號(hào)峰1.618；部分共有峰的峰形描述4、5、6號(hào)峰相連，且4、5號(hào)峰峰高遞增，8、9號(hào)峰相連，10、11號(hào)峰相連，柱效低時(shí)11號(hào)峰可能會(huì)部分包含在10號(hào)峰內(nèi)，13號(hào)峰前有一小肩峰。
本發(fā)明注射用丹七凍干粉針的質(zhì)量控制方法還包括含量測(cè)定中的一種或幾種A、丹參提取物的含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄V A紫外分光光度法測(cè)定；對(duì)照品溶液的制備稱取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，加水制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取本發(fā)明凍干粉末9mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液，以水為空白，在288nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；粉針每1支按干燥品計(jì)算，含丹參提取物以丹酚酸B鎂鹽(C36H28MgO16)計(jì)應(yīng)不低于48mg；B、三七提取物的含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄V A紫外分光光度法測(cè)定；對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1對(duì)照品適量，加甲醇制成每ml中含人參皂苷Rg11mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取本發(fā)明凍干粉末，加入甲醇制成每ml含1.8mg溶液，作為供試品溶液；測(cè)定法量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各100μl分置于10ml具塞試管中，水浴揮干溶劑，加入新配制的5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，于60℃水浴中保溫15min，立即置冰水中冷卻5min，加冰醋酸5ml，搖勻，放置10min，以試劑空白作參比，照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄V A)，在545nm波長(zhǎng)處立即測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；粉針每1支含三七提取物以人參皂苷Rg1計(jì)應(yīng)不低于210mg；C、丹酚酸B鎂鹽的含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VI D高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)288nm；理論板數(shù)按丹酚酸B鎂鹽峰計(jì)算，應(yīng)不低于3000；對(duì)照品溶液的制備稱取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取本發(fā)明凍干粉末約90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含丹酚酸B鎂鹽(C36H28MgO16)應(yīng)不少于30mg；D、人參皂苷Rg1的含量測(cè)定照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VI D)測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；對(duì)照品溶液的制備稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取本發(fā)明凍干粉末約90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含人參皂苷Rg1應(yīng)不少于75mg。
E、人參皂苷R1的含量測(cè)定照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VI D)測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；對(duì)照品溶液的制備稱取人參皂苷R1對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取本發(fā)明凍干粉末約90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含人參皂苷R1應(yīng)不少于15mg；F、人參皂苷Re的含量測(cè)定照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VI D)測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；對(duì)照品溶液的制備稱取人參皂苷Re對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取本發(fā)明凍干粉末約90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含人參皂苷Re應(yīng)不少于8mg；G、人參皂苷Rb1的含量測(cè)定照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VI D)測(cè)定；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；對(duì)照品溶液的制備稱取人參皂苷Rb1對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取本發(fā)明凍干粉末約90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；
測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含人參皂苷Rb1應(yīng)不少于75mg。
經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明中丹參提取物和三七提取物按1∶5的比例混合后制備成各種制劑的療效要優(yōu)于按其他配比關(guān)系如2∶3、1∶3等制備成各種制劑的療效。
一般凍干粉針的制備根據(jù)藥物的性質(zhì)常需加入一定量的支持劑和助溶劑，而本發(fā)明凍干粉針劑含有皂苷類成分，具有支持劑的作用，在凍干初試中，其骨架搭得較好，很容易凍干，使凍干粉針呈較好的疏松狀態(tài)，所以不再另加支持劑；而丹參提取物與三七提取物水溶性皆較好成藥物，也不需加入助溶劑。
本發(fā)明凍干粉針劑與原制劑比較，具有以下特點(diǎn)生產(chǎn)工藝成熟、穩(wěn)定，確保了產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定；靜脈給藥，療效更好，起效更快；中藥復(fù)方有效部位制劑，純度大大提高，有效部位含量達(dá)到80％以上，提高了藥物的安全性；分別對(duì)中間體、成品的有效部位和單體化合物進(jìn)行了含量測(cè)定，同時(shí)建立了指紋圖譜檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，有效地控制產(chǎn)品的質(zhì)量，確保產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定、一致。
尤其是本發(fā)明提供了凍干粉針劑的質(zhì)量控制方法，建立了指紋圖譜，不僅產(chǎn)品質(zhì)量更加穩(wěn)定，而且療效大大提高，為廣大冠心病患者提供一種療效確切、安全、穩(wěn)定的藥物。
本發(fā)明凍干粉針的主要有效成分為酚酸類化合物和皂苷類化合物，其中丹酚酸B鎂鹽為酚酸類化合物的主要有效成分，同時(shí)也是特征性成分，故選擇丹酚酸B鎂鹽作為對(duì)照。本發(fā)明研究發(fā)現(xiàn)硅膠薄層板對(duì)其具有良好的分離效果，并且展開(kāi)劑以氯仿—乙酸乙酯—苯—甲酸—甲醇(1.5∶2∶1∶1∶0.1)為佳，各成分能得到較好分離，2％FeCl3溶液顯污綠色，斑點(diǎn)清晰，陰性無(wú)干擾。
指紋圖譜檢測(cè)方法的選擇上，由于本發(fā)明凍干粉針?biāo)牡し铀犷惓煞址N類較多，分離較困難。經(jīng)研究，采用高效液相色譜法，能將本品的成分進(jìn)行較好的分離，易于測(cè)定，因此選用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定。
檢測(cè)波長(zhǎng)方面，采用DAD全波長(zhǎng)檢測(cè)器對(duì)檢測(cè)波長(zhǎng)進(jìn)行了考察，在203nm波長(zhǎng)處，各色譜峰有較好的紫外吸收，因此，選擇該波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)；取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品及成品分別加水配制成一定濃度的溶液，于紫外分光光度計(jì)上200-400nm掃描，二者均在203nm處有較大吸收，因此，選用203nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。
以丹參、三七為原料的制劑及其相關(guān)制劑的年銷售量在25億～30億左右，由于本發(fā)明丹參凍干粉針劑具有療效確切、起效快、安全性高、質(zhì)量穩(wěn)定，有很好的市場(chǎng)前景。
下面實(shí)驗(yàn)例用于進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。
實(shí)驗(yàn)例1溶血與凝聚實(shí)驗(yàn)2％紅細(xì)胞混懸液的制備家兔耳中動(dòng)脈取血5ml，用玻璃棒攪動(dòng)10分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血，加約10倍量的生理氯化鈉溶液，搖勻，離心(2000轉(zhuǎn)/min，15min)，棄去上清液，如法處理3次，上清液不顯紅色；將所得紅血球用生理氯化鈉溶液配成2％的混懸液(V/V)，備用。
試驗(yàn)方法取試管6支，在試管中加入2％紅細(xì)胞混懸液及生理鹽水，混勻，在37℃恒溫孵育30min后，分別加入不同量的藥液(取本發(fā)明凍干粉針1支，加水100ml溶解)，第6管為對(duì)照管(不加藥液)，混勻，置37℃恒溫箱中。觀察15、30、45、60、120min溶液變化。以第3試管為準(zhǔn)，在2小時(shí)內(nèi)不得產(chǎn)生溶血和紅細(xì)胞凝聚現(xiàn)象。
表1 溶液配比

表2 試驗(yàn)結(jié)果

注-無(wú)溶血、無(wú)凝聚試驗(yàn)結(jié)果(見(jiàn)表2)表明，連續(xù)觀察2小時(shí)后，所檢三批樣品，溶液離心(2000轉(zhuǎn)/min，15min)后上清液均透明無(wú)色，振搖后無(wú)凝聚，與對(duì)照管比較無(wú)異常。見(jiàn)表3。
表3 三批中試產(chǎn)品的溶血與凝聚、澄明度、不溶性微粒檢查結(jié)果

結(jié)論本發(fā)明凍干粉針溶液無(wú)溶血現(xiàn)象，亦未誘發(fā)紅細(xì)胞凝聚。
實(shí)驗(yàn)例2指紋圖譜的方法學(xué)研究穩(wěn)定性試驗(yàn)取批號(hào)為040225的樣品，按供試品溶液制備方法制備，分別在0、1、2、3、4小時(shí)檢測(cè)指紋圖。結(jié)果表明各色譜峰的保留時(shí)間和峰形基本一致，沒(méi)有明顯的變化，經(jīng)指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件評(píng)價(jià)，其相似度＞95％，符合指紋圖的要求。
精密度試驗(yàn)取批號(hào)為040225的樣品，按供試品溶液制備方法制備，連續(xù)進(jìn)針5次，檢測(cè)指紋圖。結(jié)果表明各色譜峰的保留時(shí)間和峰形基本一致，經(jīng)指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件評(píng)價(jià)，其相似度＞95％，符合指紋圖的要求。
重現(xiàn)性試驗(yàn)取批號(hào)為040301的樣品5份，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備供試品，檢測(cè)指紋圖。結(jié)果表明各色譜峰的保留時(shí)間和峰形基本一致，經(jīng)指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件評(píng)價(jià)，其相似度＞95％，符合指紋圖的要求。
實(shí)驗(yàn)例3指紋圖譜及各項(xiàng)技術(shù)參數(shù)的研究(1)指紋圖的選擇我們對(duì)10批代表性供試品指紋圖的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了分析、比較(使用“計(jì)算機(jī)輔助相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)”軟件)，提取得到共有模式指紋圖，選擇與共有模式指紋圖相似度最高的供試品指紋圖譜為典型的指紋圖譜，作為對(duì)照指紋圖譜(見(jiàn)圖1)。
(2)共有指紋峰根據(jù)10批代表性供試品指紋圖的檢測(cè)結(jié)果，取每批供試品指紋圖中都出現(xiàn)的典型色譜峰作為共有指紋峰，共14個(gè)共有峰，其中峰10號(hào)為參照物丹酚酸B鎂鹽的色譜峰。
部分共有峰的峰形描述4、5、6號(hào)峰相連，且4、5號(hào)峰峰高遞增，8、9號(hào)峰相連，10、11號(hào)峰相連，柱效低時(shí)11號(hào)峰可能會(huì)部分包含在10號(hào)峰內(nèi)，13號(hào)峰前有一小肩峰。
(3)10批中試產(chǎn)品的指紋圖譜相似度檢測(cè)按供試品指紋圖譜檢測(cè)方法，對(duì)10批中試產(chǎn)品的指紋圖譜進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果10批供試品指紋圖與共有模式比較的相似度均大于90％，故本發(fā)明凍干粉針成品的指紋圖譜相似度可定為不低于90％。
實(shí)驗(yàn)例4藥材、中間體、成品三者之間指紋圖譜的相關(guān)性分析丹參藥材供試品的制備取丹參粉末(過(guò)40目篩)0.25g，精密稱定，加8倍量去離子水80℃加熱提取1小時(shí)，濾過(guò)，濾液備用，藥渣再加6倍量去離子水80℃加熱提取1次，1小時(shí)，濾過(guò)。合并兩次濾液，60℃以下減壓濃縮至干，冷卻至室溫后加80％乙醇7.5ml，攪拌均勻后，靜置12h，濾過(guò)，濾液加80％乙醇稀釋定容至10ml，搖勻，作為供試品溶液。
丹參中間體供試品的制備取丹參提取物粉末30mg，至100ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。
三七中間體供試品的制備取三七提取物粉末15mg，至10ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。
成品供試品的制備取本發(fā)明凍干粉末90mg，精密稱定，置50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。
丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品溶液的制備取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品適量，用甲醇配制成每1ml含0.25mg的溶液，0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。
測(cè)定法按成品指紋圖譜的測(cè)定方法測(cè)定。
結(jié)果分析從成品指紋圖譜中可看出，色譜峰中，色譜峰1～5、7、10～12來(lái)源于丹參，色譜峰6、8、9、13、14來(lái)源于三七，其中色譜峰13可能混有丹參的成分。
實(shí)驗(yàn)例5三七提取物的含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄V A紫外分光光度法測(cè)定。
儀器與試劑人參皂苷Rg1對(duì)照品中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)0703-200119。
所有其他試劑和藥品均為分析純。
儀器型號(hào)島津UV-2401紫外分光光度計(jì)測(cè)定方法的選擇本發(fā)明凍干粉針主要含有皂苷類成分，該類化合物紫外吸收為末端吸收，與一些常用的有機(jī)溶劑的截止波長(zhǎng)接近，影響測(cè)定，故利用皂苷的某些顯色反應(yīng)，產(chǎn)生顏色后在可見(jiàn)光區(qū)運(yùn)用比色法測(cè)定三七提取物的含量。
對(duì)照品的選擇人參皂苷Rg1是三七提取物的主要有效成分之一，因此選擇人參皂苷Rg1作為含量測(cè)定的對(duì)照品。
測(cè)定波長(zhǎng)的選擇將人參皂苷Rg1對(duì)照品制成每1ml含1mg的溶液，按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下顯色方法顯色后，在400-900nm范圍內(nèi)掃描，在545nm處有最大吸收波長(zhǎng)，因此選擇545nm作為本品的測(cè)定波長(zhǎng)。
方法學(xué)考察標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品適量，加甲醇制成每1ml含0.276mg的對(duì)照品溶液。精密量取100、300、500、600、700μl分置于10ml具塞試管中，水浴揮干溶劑，加入新配制的5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，于60℃水浴中保溫15min，立即置冰水中冷卻5min，加冰醋酸5ml，搖勻，放置10min，以試劑空白作參比，照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄V A)，在545nm波長(zhǎng)處立即測(cè)定吸收度，結(jié)果見(jiàn)表4。各濃度(C)相應(yīng)的吸收度經(jīng)統(tǒng)計(jì)處理，求得回歸方程為A＝0.0318C+0.0899，r＝0.999。人參皂苷Rg1的線性范圍27.6-193.2μg。
表4 三七提取物標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)

精密度考察精密吸取對(duì)照品溶液100μl，按照含量測(cè)定方法連續(xù)5次測(cè)定其吸收度，結(jié)果表明儀器精密度較好(見(jiàn)表5)
表5 精密度試驗(yàn)結(jié)果

穩(wěn)定性考察取同一供試品溶液，分別在0、5、10、15、20分鐘進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明樣品在20分鐘內(nèi)穩(wěn)定(見(jiàn)表6)。
表6 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

重現(xiàn)性試驗(yàn)分別稱取同一批號(hào)供試品5份，按供試品溶液的制備方法制備供試品，測(cè)定吸收度，計(jì)算含量，結(jié)果表明方法重現(xiàn)性好(見(jiàn)表7)。
表7 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

加樣回收試驗(yàn)精密量取人參皂苷Rg1對(duì)照品溶液50μl共5份分置于10ml具塞試管中，加入供試品溶液50μl，按含量測(cè)定方法測(cè)定，計(jì)算含量和回收率，結(jié)果表明本發(fā)明所述含量測(cè)定方法可行(見(jiàn)表8)。
表8 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)例6人參皂苷Rg1的含量測(cè)定含量測(cè)定照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VI D)測(cè)定。
儀器與試劑高效液相色譜儀Agilent 1100；Agilent 1100化學(xué)工作站；紫外檢測(cè)器VWD G1314A；人參皂苷Rg1對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)0703-200119)；乙腈為色譜純(Georgetown.ont.Canada)；水為雙蒸水(自制)；磷酸為分析純(天津市天河化學(xué)試劑廠)。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.1％磷酸水溶液(20∶80)為流動(dòng)相，流速1.1ml/min，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)203nm，在此色譜條件下，供試品色譜中人參皂苷Rg1色譜峰分離效果較好。
檢測(cè)波長(zhǎng)的確定取人參皂苷Rg1對(duì)照品及成品分別加水配制成一定濃度的溶液，于紫外分光光度計(jì)上200-400nm掃描，二者最大吸收波長(zhǎng)均為203nm，因此，選用203nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。
實(shí)驗(yàn)例7丹參提取物與三七提取物配比篩選動(dòng)物隨機(jī)分為4組模型組，丹參三七1∶5(32mg/kg)組，丹參三七1∶3(32mg/kg)組，丹參三七2∶3(32mg/kg)組，藥物以生理鹽水溶至所需濃度，給藥體積為3ml/kg，給藥途徑為十二指腸。
動(dòng)物以戊巴比妥鈉腹腔麻醉(45mg/kg)，仰位固定，切開(kāi)氣管，插入氣管插管，接呼吸機(jī)(SC-3型，上海醫(yī)療設(shè)備廠)行人工呼吸(32次/分，呼吸比值1∶3)；開(kāi)胸，斷3-5肋，打開(kāi)心包膜，暴露心臟，于冠狀動(dòng)脈左前降支根部穿線(0號(hào)縫合線)，備結(jié)扎用；分離十二指腸，給入受試藥物后關(guān)腹；穿線后穩(wěn)定10分鐘，將一塑料凹管與血管并列，結(jié)扎(無(wú)明顯染色斑塊者淘汰)，40分鐘后，沿凹槽剪斷結(jié)扎線，使前降支實(shí)現(xiàn)再灌注；縫合胸壁，恢復(fù)自主呼吸。
打開(kāi)結(jié)扎2小時(shí)后結(jié)束試驗(yàn)，心臟結(jié)扎線以下橫切5片，N-BT染色，采用多媒體彩色病理圖文分析系統(tǒng)(MPIAS-500)，以固定象距測(cè)量總心肌面積及梗塞心肌面積，觀察心肌梗塞程度；結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理(t檢驗(yàn))，結(jié)果見(jiàn)表9。
表9 丹參∶三七1∶5、1∶3、2∶3(32mg/kg)組對(duì)心肌梗塞程度的影響(X±SD)

*、**與模型組比較P＜0.05、P＜0.01。
結(jié)果表明，模型組梗塞區(qū)占心室及心臟百分比分別為29.8％及25.5％；1∶5組心肌梗塞程度明顯減輕，梗塞面積減小，梗塞區(qū)重量減輕，梗塞區(qū)占心室及心臟百分比降低，與模型組比較均有顯著性差異(P＜0.01)；1∶3組及2∶3組梗塞區(qū)占心室及心臟百分比降低，與模型組比較均有顯著性差異(P＜0.05)。表明，1∶5組作用最強(qiáng)。
實(shí)驗(yàn)例8丹七粉針劑對(duì)缺血再灌注所致心肌梗塞的影響將動(dòng)物隨機(jī)分為7組假手術(shù)組(取血清作正常對(duì)照)，模型組，丹參注射液1.6g/kg組，丹七粉針劑20、10、5mg提取物/kg組。藥物以生理鹽水溶至所需濃度，給藥體積為3ml/kg，給藥途徑為靜脈。
動(dòng)物以戊巴比妥鈉腹腔麻醉(45mg/kg)，仰位固定，以PlowerLab/8sp生理記錄儀監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)心電圖；切開(kāi)氣管，插入氣管插管，接呼吸機(jī)(SC-3型，上海醫(yī)療設(shè)備廠)行人工呼吸(32次/分，呼吸比值1∶3)；開(kāi)胸，斷3～5肋，打開(kāi)心包膜，暴露心臟，于冠狀動(dòng)脈左前降支根部穿線(0號(hào)縫合線)，備結(jié)扎用；分離股靜脈準(zhǔn)備給藥；穿線后穩(wěn)定10分鐘，將一塑料凹管與血管并列，結(jié)扎(無(wú)ST段及T波改變者淘汰)，給入受試藥物后關(guān)腹；40分鐘后，沿凹槽剪斷結(jié)扎線，使前降支實(shí)現(xiàn)再灌注；縫合胸壁，恢復(fù)自主呼吸。
打開(kāi)結(jié)扎2小時(shí)后，腹主動(dòng)脈取血，比色法測(cè)定血清SOD、MDA含量；心臟結(jié)扎線以下橫切5片，N-BT染色，采用多媒體彩色病理圖文分析系統(tǒng)(MPIAS-500)，以固定象距測(cè)量總心肌面積及梗塞心肌面積，觀察心肌梗塞程度；結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理(t檢驗(yàn))，結(jié)果見(jiàn)表10。
表10 丹七粉針劑對(duì)心肌梗塞程度的影響(X±SD)

**與模型組比較P＜0.01.
試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，模型組梗塞區(qū)占心室及心臟百分比分別為32.4％及27.3％；丹七三個(gè)劑量組梗塞面積減小，梗塞區(qū)占心室及心臟百分比降低，與模型組比較有顯著性差異(P＜0.01)。表明丹七粉針劑可明顯減輕心肌梗塞程度，梗塞面積減小，梗塞區(qū)重量減輕，梗塞區(qū)占心室及心臟百分比降低，對(duì)心肌缺血再灌注損傷有明確的保護(hù)作用。
說(shuō)明書(shū)附圖
圖1指紋圖譜實(shí)施例1丹參提取物的制備丹參(100kg)去雜質(zhì)，截切成0.5cm左右小段，加8倍量去離子水80℃加熱提取1小時(shí)，濾過(guò)，濾液備用，藥渣再加6倍量去離子水80℃加熱提取2次，每次0.5小時(shí)，濾過(guò)；合并三次濾液，60℃以下減壓濃縮至相對(duì)密度為1.28-1.30(50℃)，冷卻至室溫后加95％乙醇至含醇量達(dá)80％，靜置12h，濾過(guò)，回收乙醇，并濃縮至相對(duì)密度為1.28-1.30(50℃)，通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂AB-8(生藥量與樹(shù)脂比例為1∶4)，用去離子水洗至流出液無(wú)糖反應(yīng)，繼續(xù)用40％乙醇洗脫，待色帶下來(lái)收集洗脫液，直至洗脫液加三氯化鐵、鐵氰化鉀試劑變綠并無(wú)沉淀為止。將洗脫液于60℃以下，濃縮至相對(duì)密度為1.28-1.30(50℃)，噴霧干燥，即得丹參提取物(1000g)。
實(shí)施例2丹七凍干粉針劑的制備丹參總酚酸 120g三七總皂苷 600g注射用水 8000ml制成2000支取丹參總酚酸和三七總皂苷，加一定量的注射用水使溶解，加入0.1％活性炭，40℃攪拌15分鐘，冷卻至室溫后，先用濾紙板濾過(guò)，再用0.2μm微孔濾膜濾過(guò)，加注射用水稀釋至8000ml，灌裝，每支4ml，冷凍干燥，即得2000支粉針。
經(jīng)測(cè)定，測(cè)得每支凍干粉針劑中丹酚酸B鎂鹽含量為12.73％；人參皂苷R1含量為5.87％，人參皂苷Re含量為3.60％，人參皂苷Rb1含量為20.68％，人參皂苷Rg1含量為23.89％。
實(shí)施例3 丹七凍干粉針劑的制備丹參提取物120g三七提取物600g注射用水 8000ml制成2000支取丹參提取物和三七提取物，加一定量的注射用水使溶解，加入0.1％活性炭，40℃攪拌15分鐘，冷卻至室溫后，先用濾紙板濾過(guò)，再用0.2μm微孔濾膜濾過(guò)，加注射用水稀釋至8000ml，灌裝，每支4ml，冷凍干燥，即得2000支粉針。
經(jīng)測(cè)定，測(cè)得每支凍干粉針劑中丹酚酸B鎂鹽含量為11.97％；人參皂苷R1含量為5.26％，人參皂苷Re含量為3.78％，人參皂苷Rb1含量為20.15％，人參皂苷Rg1含量為23.10％；丹參總酚酸含量為15.84％，三七總皂苷含量為78.12％。
實(shí)施例4丹七注射液的制備丹參提取物60g三七提取物300g甲硫氨酸 10g注射用水 2000ml制成1000支取按實(shí)施例1的方法制備的丹參提取物和三七提取物及甲硫氨酸，加適量注射用水使溶解，加0.1％活性炭，40℃攪拌15分鐘，冷卻至室溫后，先用濾紙板濾過(guò)，再用0.2μm微孔濾膜濾過(guò)，加注射用水稀釋至2000ml，灌封，每支2ml，滅菌，即得。
經(jīng)測(cè)定，測(cè)得每支注射液中丹酚酸B鎂鹽含量為11.78％；人參皂苷R1含量為5.63％，人參皂苷Re含量為3.56％，人參皂苷Rb1含量為20.32％，人參皂苷Rg1含量為23.46％；丹參總酚酸含量為15.88％，三七總皂苷含量為77.91％。
實(shí)施例5本發(fā)明膠囊劑的制備丹參提取物60g三七提取物300g硬脂酸鎂 3.6g制成1000粒取丹參提取物和三七提取物混勻，加入1％的硬脂酸鎂，混勻后灌裝膠囊，得膠囊900粒，一日兩次，每次1粒。
經(jīng)測(cè)定，測(cè)得每粒膠囊中丹酚酸B鎂鹽含量為11.97％；人參皂苷R1含量為5.26％，人參皂苷Re含量為3.78％，人參皂苷Rb1含量為20.15％，人參皂苷Rg1含量為23.10％；丹參總酚酸含量為15.84％，三七總皂苷含量為78.12％。
實(shí)施例6本發(fā)明丸劑的制備丹參提取物60g三七提取物300g去離子水 適量制成3000粒取丹參提取物和三七提取物混勻，以水為潤(rùn)濕劑，用泛丸法制成3000粒，一日2次，每次3粒。
經(jīng)測(cè)定，測(cè)得每粒丸劑中丹酚酸B鎂鹽含量為12.73％；人參皂苷R1含量為5.87％，人參皂苷Re含量為3.60％，人參皂苷Rb1含量為20.68％，人參皂苷Rg1含量為23.89％；丹參總酚酸含量為16.01％，三七總皂苷含量為77.92％。
實(shí)施例7本發(fā)明顆粒劑的制備丹參提取物120g三七提取物600g5％聚乙烯吡咯烷酮的醇溶液 適量制成1000袋取丹參提取物和三七提取物混勻，以5％聚乙烯吡咯烷酮的醇溶液制軟材，14目篩制粒，干燥制得顆粒劑460袋，每袋1g，一日兩次，每次1袋。
實(shí)施例8本發(fā)明滴丸的制備丹參提取物120g三七提取物600g聚乙二醇6000 1875g制成1000袋聚乙二醇6000置水浴上完全熔融，加入丹參提取物和三七提取物，攪拌使溶解，保持80℃滴入15℃液體石蠟中成丸，制備成滴丸750袋，每袋5.0克，一日兩次，每次1袋。
實(shí)施例9本發(fā)明片劑的制備丹參提取物120g三七提取物600g淀粉 150g5％聚乙烯吡咯烷酮的醇溶液 適量硬脂酸鎂 1％制成1000片取丹參提取物與淀粉混勻，再和三七提取物混勻，以5％聚乙烯吡咯烷酮的醇溶液制軟材，16目篩制粒，干燥后整粒，加入1％的硬脂酸鎂，混勻壓片。一日2次，每次1片。
實(shí)施例10本發(fā)明口服液的制備丹參提取物 120g三七提取物 600g甜葉菊素 2g去離子水 10000ml制成1000支將丹參提取物、三七提取物和甜葉菊素，溶于去離子水中制備成口服液10000ml，灌裝，每支10ml。每天2次，每次1支。
施施例11注射用丹七凍干粉針指紋圖譜的測(cè)定照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VI D)測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速1.0ml/min；柱溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；以乙腈為流動(dòng)相C，以0.1％磷酸為流動(dòng)相D，按下述梯度洗脫條件進(jìn)行梯度洗脫，運(yùn)行60min0-6分鐘時(shí)，乙腈的比例由17％升至19％，0.1％磷酸水溶液的比例由83％降至81％；6-25分鐘，乙腈由19％升到20％，0.1％磷酸水溶液由81％降為80％；25-30分鐘，保持乙腈-0.1％磷酸水溶液以20∶80的比例進(jìn)行洗脫；從30-55分鐘，乙腈的比例由20％增加至40％，0.1％磷酸水溶液的比例則由80％降至60％；從55-60分鐘，保持乙腈-0.1％磷酸水溶液以40∶60的比例進(jìn)行洗脫。
丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品溶液的制備取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，用甲醇配制成每1ml含0.25mg的溶液，0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得；供試品溶液的制備取丹七凍干粉末90mg，至50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄60分鐘的色譜圖，即得；對(duì)照指紋圖譜見(jiàn)圖1。
共有峰供試品指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜應(yīng)在相應(yīng)保留時(shí)間處出現(xiàn)相同色譜峰，兩者相似度不低于90％；供試品指紋圖譜共有14個(gè)共有峰，其中峰10號(hào)為參照物丹酚酸B鎂鹽的色譜峰；這十四個(gè)峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.095，2號(hào)峰0.163，3號(hào)峰0.433，4號(hào)峰0.577，5號(hào)峰0.615，6號(hào)峰0.654，7號(hào)峰0.714，8號(hào)峰0.860，9號(hào)峰0.909，10號(hào)峰1，11號(hào)峰1.073，12號(hào)峰1.185，13號(hào)峰1.485，14號(hào)峰1.618；其中4、5、6號(hào)峰相連，且4、5號(hào)峰峰高遞增，8、9號(hào)峰相連，10、11號(hào)峰相連，柱效低時(shí)11號(hào)峰可能會(huì)部分包含在10號(hào)峰內(nèi)，13號(hào)峰前有一小肩峰。
實(shí)施例12注射用丹七凍干粉針的含量測(cè)定A、丹參提取物的含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄V A紫外分光光度法測(cè)定；對(duì)照品溶液的制備稱取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，加水制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取丹七凍干粉末約9mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液，以水為空白，在288nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；粉針每1支按干燥品計(jì)算，含丹參提取物以丹酚酸B鎂鹽(C36H28MgO16)計(jì)應(yīng)不低于48mg
B、三七提取物的含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄V A紫外分光光度法測(cè)定；對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1對(duì)照品，加甲醇制成每ml中含人參皂苷Rg11mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取丹七凍干粉末，加入甲醇制成每ml含1.8mg溶液，作為供試品溶液；測(cè)定法量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各100μl分置于10ml具塞試管中，水浴揮干溶劑，加入新配制的5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，于60℃水浴中保溫15min，立即置冰水中冷卻5min，加冰醋酸5ml，搖勻，放置10min，以試劑空白作參比，照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄V A)，在545nm波長(zhǎng)處立即測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；粉針每1支含三七提取物以人參皂苷Rg1計(jì)應(yīng)不低于210mg；C、丹酚酸B鎂鹽的含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VI D高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)288nm；理論板數(shù)按丹酚酸B鎂鹽峰計(jì)算，應(yīng)不低于3000；對(duì)照品溶液的制備稱取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取丹七凍干粉末約90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含丹酚酸B鎂鹽(C36H28MgO16)應(yīng)不少于30mg；D、人參皂苷Rg1的含量測(cè)定照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VI D)測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；對(duì)照品溶液的制備稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取丹七凍干粉末約90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含人參皂苷Rg1應(yīng)不少于75mg。
實(shí)施例13注射用丹七凍干粉針的含量測(cè)定A、丹參提取物的含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄V A紫外分光光度法測(cè)定；對(duì)照品溶液的制備稱取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，加水制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取丹七凍干粉末約9mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液，以水為空白，在288nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；粉針每1支按干燥品計(jì)算，含丹參提取物以丹酚酸B鎂鹽(C36H28MgO16)計(jì)應(yīng)不低于48mg；B、三七提取物的含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄V A紫外分光光度法測(cè)定；對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1對(duì)照品，加甲醇制成每ml中含人參皂苷Rg11mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取丹七凍干粉末，加入甲醇制成每ml含1.8mg溶液，作為供試品溶液；測(cè)定法量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各100μl分置于10ml具塞試管中，水浴揮干溶劑，加入新配制的5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，于60℃水浴中保溫15min，立即置冰水中冷卻5min，加冰醋酸5ml，搖勻，放置10min，以試劑空白作參比，照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄V A)，在545nm波長(zhǎng)處立即測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；粉針每1支含三七提取物以人參皂苷Rg1計(jì)應(yīng)不低于210mg；
C、丹酚酸B鎂鹽的含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VI D高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)288nm；理論板數(shù)按丹酚酸B鎂鹽峰計(jì)算，應(yīng)不低于3000；對(duì)照品溶液的制備稱取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取丹七凍干粉末針約90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含丹酚酸B鎂鹽(C36H28MgO16)應(yīng)不少于30mg；E、人參皂苷R1的含量測(cè)定照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VI D)測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；對(duì)照品溶液的制備稱取人參皂苷R1對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取丹七凍干粉末約90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含人參皂苷R1應(yīng)不少于15mg。
實(shí)施例14注射用丹七凍干粉針的含量測(cè)定A、丹參提取物的含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄V A紫外分光光度法測(cè)定；對(duì)照品溶液的制備稱取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，加水制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取丹七凍干粉末約9mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液，以水為空白，在288nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；粉針每1支按干燥品計(jì)算，含丹參提取物以丹酚酸B鎂鹽(C36H28MgO16)計(jì)應(yīng)不低于48mg；B、三七提取物的含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄V A紫外分光光度法測(cè)定；對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1對(duì)照品，加甲醇制成每ml中含人參皂苷Rg11mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備量取丹七凍干粉末，加入甲醇制成每ml含1.8mg溶液，作為供試品溶液；測(cè)定法量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各100μl分置于10ml具塞試管中，水浴揮干溶劑，加入新配制的5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，于60℃水浴中保溫15min，立即置冰水中冷卻5min，加冰醋酸5ml，搖勻，放置10min，以試劑空白作參比，照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄V A)，在545nm波長(zhǎng)處立即測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；粉針每1支含三七提取物以人參皂苷Rg1計(jì)應(yīng)不低于210mg；C、丹酚酸B鎂鹽的含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VI D高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)288nm；理論板數(shù)按丹酚酸B鎂鹽峰計(jì)算，應(yīng)不低于3000；對(duì)照品溶液的制備稱取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取丹七凍干粉末約90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含丹酚酸B鎂鹽(C36H28MgO16)應(yīng)不少于30mg；
F、人參皂苷Re的含量測(cè)定照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VI D)測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；對(duì)照品溶液的制備稱取人參皂苷Re對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取丹七凍干粉末約90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含人參皂苷Re應(yīng)不少于8mg。
實(shí)施例15注射用丹七凍干粉針的含量測(cè)定A、丹參提取物的含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄V A紫外分光光度法測(cè)定；對(duì)照品溶液的制備稱取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，加水制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取丹七凍干粉末約90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液，以水為空白，在288nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；粉針每1支按干燥品計(jì)算，含丹參提取物以丹酚酸B鎂鹽(C36H28MgO16)計(jì)應(yīng)不低于48mg；B、三七提取物的含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄V A紫外分光光度法測(cè)定；對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1對(duì)照品，加甲醇制成每ml中含人參皂苷Rg11mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取丹七凍干粉末，加入甲醇制成每ml含1.8mg溶液，作為供試品溶液；測(cè)定法量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各100μl分置于10ml具塞試管中，水浴揮干溶劑，加入新配制的5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，于60℃水浴中保溫15min，立即置冰水中冷卻5min，加冰醋酸5ml，搖勻，放置10min，以試劑空白作參比，照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄V A)，在545nm波長(zhǎng)處立即測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；粉針每1支含三七提取物以人參皂苷Rg1計(jì)應(yīng)不低于210mg；C、丹酚酸B鎂鹽的含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VI D高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)288nm；理論板數(shù)按丹酚酸B鎂鹽峰計(jì)算，應(yīng)不低于3000；對(duì)照品溶液的制備稱取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取丹七凍干粉末約90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含丹酚酸B鎂鹽(C36H28MgO16)應(yīng)不少于30mg；G、人參皂苷Rb1的含量測(cè)定照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VI D)測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；對(duì)照品溶液的制備稱取人參皂苷Rb1對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取丹七凍干粉末約90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含人參皂苷Rb1應(yīng)不少于75mg。
實(shí)施例16注射用丹七凍干粉針的質(zhì)量控制方法
指紋圖譜照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VI D)測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速1.0ml/min；柱溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；以乙腈-0.1％磷酸為流動(dòng)相，按下述梯度洗脫條件進(jìn)行梯度洗脫，運(yùn)行60min；0-6分鐘時(shí)，乙腈的比例由17％升至19％，0.1％磷酸水溶液的比例由83％降至81％；6-25分鐘，乙腈由19％升到20％，0.1％磷酸水溶液由81％降為80％；25-30分鐘，保持乙腈-0.1％磷酸水溶液以20∶80的比例進(jìn)行洗脫；從30-55分鐘，乙腈的比例由20％增加至40％，0.1％磷酸水溶液的比例則由80％降至60％；從55-60分鐘，保持乙腈-0.1％磷酸水溶液以40∶60的比例進(jìn)行洗脫；丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品溶液的制備取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，用甲醇配制成每1ml含0.25mg的溶液，0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得；供試品溶液的制備取丹七凍干粉末90mg，至50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄60分鐘的色譜圖，即得；對(duì)照指紋圖譜見(jiàn)圖1。
供試品指紋圖譜共有14個(gè)共有峰，其中峰10號(hào)為丹酚酸B鎂鹽的色譜峰，這十四個(gè)峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.095，2號(hào)峰0.163，3號(hào)峰0.433，4號(hào)峰0.577，5號(hào)峰0.615，6號(hào)峰0.654，7號(hào)峰0.714，8號(hào)峰0.860，9號(hào)峰0.909，10號(hào)峰1，11號(hào)峰1.073，12號(hào)峰1.185，13號(hào)峰1.485，14號(hào)峰1.618；部分共有峰的峰形描述4、5、6號(hào)峰相連，且4、5號(hào)峰峰高遞增，8、9號(hào)峰相連，10、11號(hào)峰相連，柱效低時(shí)11號(hào)峰可能會(huì)部分包含在10號(hào)峰內(nèi)，13號(hào)峰前有一小肩峰。
含量測(cè)定A、丹參提取物的含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄V A紫外分光光度法測(cè)定；對(duì)照品溶液的制備稱取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，加水制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取丹七凍干粉末9mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液，以水為空白，在288nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；粉針每1支按干燥品計(jì)算，含丹參提取物以丹酚酸B鎂鹽(C36H28MgO16)計(jì)應(yīng)不低于48mg；B、三七提取物的含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄V A紫外分光光度法測(cè)定；對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1對(duì)照品適量，加甲醇制成每ml中含人參皂苷Rg11mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取丹七凍干粉末，加入甲醇制成每ml含1.8mg溶液，作為供試品溶液；測(cè)定法量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各100μl分置于10ml具塞試管中，水浴揮干溶劑，加入新配制的5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，于60℃水浴中保溫15min，立即置冰水中冷卻5min，加冰醋酸5ml，搖勻，放置10min，以試劑空白作參比，照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版一部附錄V A)，在545nm波長(zhǎng)處立即測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；粉針每1支含三七提取物以人參皂苷Rg1計(jì)應(yīng)不低于210mg；C、丹酚酸B鎂鹽的含量測(cè)定照《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VI D高效液相色譜法測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)288nm；理論板數(shù)按丹酚酸B鎂鹽峰計(jì)算，應(yīng)不低于3000；對(duì)照品溶液的制備稱取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取丹七凍干粉末約90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含丹酚酸B鎂鹽(C36H28MgO16)應(yīng)不少于30mg；D、人參皂苷Rg1的含量測(cè)定照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2000年版一部附錄VI D)測(cè)定；色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；對(duì)照品溶液的制備稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取丹七凍干粉末約90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含人參皂苷Rg1應(yīng)不少于75mg。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于所述的組合物是由丹參提取物與三七提取物按1∶5的比例組合而成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述的丹參提取物是指丹參總酚酸；所述的三七提取物是指三七總皂苷。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該組合物含丹參提取物以丹酚酸B鎂鹽計(jì)，為10-16.67％；含三七提取物以人參皂苷Rg1計(jì)，為40-83.33％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該組合物含丹酚酸B鎂鹽為8-15％；人參皂苷Rg120-30％，R14-10％，Re 2-5％，Rb120-40％。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、2、3或4所述的藥物組合物，其特征在于加入輔料，制備成臨床可接受的劑型片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、混懸劑、滴丸、口服液體制劑、凍干粉針劑。
6.一種凍干粉針劑，其特征在于是由如下方法制備而成按1∶5的比例取丹參提取物和三七提取物，加注射用水使溶解，加0.1％活性炭，40℃攪拌15分鐘，冷卻至室溫后，先用濾紙板濾過(guò)，再用0.2μm微孔濾膜濾過(guò)，加注射用水稀釋，罐裝，每支4ml，冷凍干燥，即得。
7.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的藥物組合物，其特征在于其中丹參提取物是由如下方法制備而成丹參去雜質(zhì)，加6～8倍量去離子水80℃加熱提取2～3次，每次0.5～2小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，60℃以下減壓濃縮，冷卻至室溫后，加95％乙醇至含醇量達(dá)60-80％，靜置12h，濾過(guò)，回收乙醇，通過(guò)生藥量與樹(shù)脂比例為1∶3-1∶8的大孔吸附樹(shù)脂AB-8，用去離子水洗至流出液無(wú)糖反應(yīng)，繼續(xù)用30-60％乙醇洗脫，待色帶下來(lái)收集洗脫液，直至洗脫液加三氯化鐵、鐵氰化鉀試劑變綠并無(wú)沉淀為止；將洗脫液于60℃以下濃縮，噴霧干燥，即得丹參提取物。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特征在于其中丹參提取物是由如下方法制備而成丹參去雜質(zhì)，加8倍量去離子水80℃加熱提取1小時(shí)，濾過(guò)，濾液備用，藥渣再加6倍量去離子水80℃加熱提取2次，每次0.5小時(shí)，濾過(guò)，合并三次濾液，60℃以下減壓濃縮，冷卻至室溫后加95％乙醇至含醇量達(dá)80％，靜置12h，濾過(guò)，回收乙醇，通過(guò)生藥量與樹(shù)脂比例為1∶4的大孔吸附樹(shù)脂AB-8，用去離子水洗至流出液無(wú)糖反應(yīng)，繼續(xù)用40％乙醇洗脫，待色帶下來(lái)收集洗脫液，直至洗脫液加三氯化鐵、鐵氰化鉀試劑變綠并無(wú)沉淀為止；將洗脫液于60℃以下，濃縮至50℃時(shí)相對(duì)密度為1.28-1.30，噴霧干燥，即得丹參提取物。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種凍干粉針劑指紋圖譜的的測(cè)定方法，其特征于該方法包括下列步驟照高效液相色譜法測(cè)定；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速1.0ml/min；柱溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；以乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相，按下述梯度洗脫條件進(jìn)行梯度洗脫，運(yùn)行60min
0-6分鐘時(shí)，乙腈的比例由17％升至19％，0.1％磷酸水溶液的比例由83％降至81％；6-25分鐘，乙腈由19％升到20％，0.1％磷酸水溶液由81％降為80％；25-30分鐘，保持乙腈-0.1％磷酸水溶液以20∶80的比例進(jìn)行洗脫；從30-55分鐘，乙腈的比例由20％增加至40％，0.1％磷酸水溶液的比例則由80％降至60％；從55-60分鐘，保持乙腈-0.1％磷酸水溶液以40∶60的比例進(jìn)行洗脫；丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品溶液的制備取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，用甲醇配制成每1ml含0.25mg的溶液，0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得；供試品溶液的制備取凍干粉針90mg，至50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄60分鐘的色譜圖，即得。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種凍干粉針劑的指紋圖譜測(cè)定方法，其特征在于該方法中供試品指紋圖譜共有14個(gè)共有峰，其中10號(hào)峰為參照物丹酚酸B鎂鹽的色譜峰；這十四個(gè)峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.095，2號(hào)峰0.163，3號(hào)峰0.433，4號(hào)峰0.577，5號(hào)峰0.615，6號(hào)峰0.654，7號(hào)峰0.714，8號(hào)峰0.860，9號(hào)峰0.909，10號(hào)峰1，11號(hào)峰1.073，12號(hào)峰1.185，13號(hào)峰1.485，14號(hào)峰1.618；其中4、5、6號(hào)峰相連，且4、5號(hào)峰峰高遞增，8、9號(hào)峰相連，10、11號(hào)峰相連，柱效低時(shí)11號(hào)峰可能會(huì)部分包含在10號(hào)峰內(nèi)，13號(hào)峰前有一小肩峰。
11.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種凍干粉針劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法含有如下含量測(cè)定方法A.丹參提取物的含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備稱取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，加水制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取凍干粉針9mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液，以水為空白，在288nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；粉針每1支按干燥品計(jì)算，含丹參提取物以丹酚酸B鎂鹽計(jì)應(yīng)不低于48mg；B.三七提取物的含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1對(duì)照品，加甲醇制成每ml中含人參皂苷Rg11mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取凍干粉針，加入甲醇制成每ml含1.8mg溶液，作為供試品溶液；測(cè)定法量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各100μl分置于10ml具塞試管中，水浴揮干溶劑，加入新配制的5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，于60℃水浴中保溫15min，立即置冰水中冷卻5min，加冰醋酸5ml，搖勻，放置10min，以試劑空白作參比，照分光光度法，在545nm波長(zhǎng)處立即測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；粉針每1支含三七提取物以人參皂苷Rg1計(jì)應(yīng)不低于210mg；C.丹酚酸B鎂鹽的含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)288nm；理論板數(shù)按丹酚酸B鎂鹽峰計(jì)算，應(yīng)不低于3000；對(duì)照品溶液的制備稱取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取凍干粉針90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含丹酚酸B鎂鹽應(yīng)不少于30mg；D.人參皂苷Rg1的含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；對(duì)照品溶液的制備稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取凍干粉針90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含人參皂苷Rg1應(yīng)不少于75mg。
12.如權(quán)利要求6所述的一種凍干粉針劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法含有如下含量測(cè)定方法A.丹參提取物的含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備稱取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，加水制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取凍干粉針9mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液，以水為空白，在288nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；粉針每1支按干燥品計(jì)算，含丹參提取物以丹酚酸B鎂鹽計(jì)應(yīng)不低于48mg；B.三七提取物的含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1對(duì)照品，加甲醇制成每ml中含人參皂苷Rg11mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取凍干粉針，加入甲醇制成每ml含1.8mg溶液，作為供試品溶液；測(cè)定法量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各100μl分置于10ml具塞試管中，水浴揮干溶劑，加入新配制的5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，于60℃水浴中保溫15min，立即置冰水中冷卻5min，加冰醋酸5ml，搖勻，放置10min，以試劑空白作參比，照分光光度法，在545nm波長(zhǎng)處立即測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；粉針每1支含三七提取物以人參皂苷Rg1計(jì)應(yīng)不低于210mg；C.丹酚酸B鎂鹽的含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)288nm；理論板數(shù)按丹酚酸B鎂鹽峰計(jì)算，應(yīng)不低于3000；對(duì)照品溶液的制備稱取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取凍干粉針90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含丹酚酸B鎂鹽應(yīng)不少于30mg；E.人參皂苷R1的含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；對(duì)照品溶液的制備稱取人參皂苷R1對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取凍干粉針90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含人參皂苷R1應(yīng)不少于15mg。
13.如權(quán)利要求6所述的一種凍干粉針劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法含有如下含量測(cè)定方法A.丹參提取物的含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備稱取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，加水制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取凍干粉針9mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液，以水為空白，在288nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；粉針每1支按干燥品計(jì)算，含丹參提取物以丹酚酸B鎂鹽計(jì)應(yīng)不低于48mg；B.三七提取物的含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1對(duì)照品，加甲醇制成每ml中含人參皂苷Rg11mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取凍干粉針，加入甲醇制成每ml含1.8mg溶液，作為供試品溶液；測(cè)定法量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各100μl分置于10ml具塞試管中，水浴揮干溶劑，加入新配制的5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，于60℃水浴中保溫15min，立即置冰水中冷卻5min，加冰醋酸5ml，搖勻，放置10min，以試劑空白作參比，照分光光度法，在545nm波長(zhǎng)處立即測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；粉針每1支含三七提取物以人參皂苷Rg1計(jì)應(yīng)不低于210mg；C.丹酚酸B鎂鹽的含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)288nm；理論板數(shù)按丹酚酸B鎂鹽峰計(jì)算，應(yīng)不低于3000；對(duì)照品溶液的制備稱取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取凍干粉針90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含丹酚酸B鎂鹽應(yīng)不少于30mg；F.人參皂苷Re的含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；對(duì)照品溶液的制備稱取人參皂苷Re對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取凍干粉針90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含人參皂苷Re應(yīng)不少于8mg。
14.如權(quán)利要求6所述的一種凍干粉針劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法含有如下含量測(cè)定方法A.丹參提取物的含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備稱取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，加水制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取凍干粉針9mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液，以水為空白，在288nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；粉針每1支按干燥品計(jì)算，含丹參提取物以丹酚酸B鎂鹽計(jì)應(yīng)不低于48mg；B.三七提取物的含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1對(duì)照品，加甲醇制成每ml中含人參皂苷Rg11mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取凍干粉針，加入甲醇制成每ml含1.8mg溶液，作為供試品溶液；測(cè)定法量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各100μl分置于10ml具塞試管中，水浴揮干溶劑，加入新配制的5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，于60℃水浴中保溫15min，立即置冰水中冷卻5min，加冰醋酸5ml，搖勻，放置10min，以試劑空白作參比，照分光光度法，在545nm波長(zhǎng)處立即測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；粉針每1支含三七提取物以人參皂苷Rg1計(jì)應(yīng)不低于210mg；C.丹酚酸B鎂鹽的含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)288nm；理論板數(shù)按丹酚酸B鎂鹽峰計(jì)算，應(yīng)不低于3000；對(duì)照品溶液的制備稱取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取凍干粉針90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含丹酚酸B鎂鹽應(yīng)不少于30mg；G.人參皂苷Rb1的含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；對(duì)照品溶液的制備稱取人參皂苷Rb1對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取凍干粉針90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含人參皂苷Rb1應(yīng)不少于75mg。
15.如權(quán)利要求6所述的一種凍干粉針劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法為指紋圖譜照高效液相色譜法測(cè)定；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速1.0ml/min；柱溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；以乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相，按下述梯度洗脫條件進(jìn)行梯度洗脫，運(yùn)行60min
0-6分鐘時(shí)，乙腈的比例由17％升至19％，0.1％磷酸水溶液的比例由83％降至81％；6-25分鐘，乙腈由19％升到20％，0.1％磷酸水溶液由81％降為80％；25-30分鐘，保持乙腈-0.1％磷酸水溶液以20∶80的比例進(jìn)行洗脫；從30-55分鐘，乙腈的比例由20％增加至40％，0.1％磷酸水溶液的比例則由80％降至60％；從55-60分鐘，保持乙腈-0.1％磷酸水溶液以40∶60的比例進(jìn)行洗脫；丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品溶液的制備取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，用甲醇配制成每1ml含0.25mg的溶液，0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得；供試品溶液的制備稱取凍干粉針90mg，至50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，即得；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄60分鐘的色譜圖，即得；供試品指紋圖譜共有14個(gè)共有峰，其中10號(hào)峰為參照物丹酚酸B鎂鹽的色譜峰；這十四個(gè)峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.095，2號(hào)峰0.163，3號(hào)峰0.433，4號(hào)峰0.577，5號(hào)峰0.615，6號(hào)峰0.654，7號(hào)峰0.714，8號(hào)峰0.860，9號(hào)峰0.909，10號(hào)峰1，11號(hào)峰1.073，12號(hào)峰1.185，13號(hào)峰1.485，14號(hào)峰1.618；其中4、5、6號(hào)峰相連，且4、5號(hào)峰峰高遞增，8、9號(hào)峰相連，10、11號(hào)峰相連，柱效低時(shí)11號(hào)峰可能會(huì)部分包含在10號(hào)峰內(nèi)，13號(hào)峰前有一小肩峰；含量測(cè)定A.丹參提取物的含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備稱取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，加水制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取凍干粉針9mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液，以水為空白，在288nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；粉針每1支按干燥品計(jì)算，含丹參提取物以丹酚酸B鎂鹽計(jì)應(yīng)不低于48mg；B.三七提取物的含量測(cè)定對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1對(duì)照品，加甲醇制成每ml中含人參皂苷Rg11mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取凍干粉針，加入甲醇制成每ml含1.8mg溶液，作為供試品溶液；測(cè)定法量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各100μl分置于10ml具塞試管中，水浴揮干溶劑，加入新配制的5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，于60℃水浴中保溫15min，立即置冰水中冷卻5min，加冰醋酸5ml，搖勻，放置10min，以試劑空白作參比，照分光光度法，在545nm波長(zhǎng)處立即測(cè)定吸收度，計(jì)算，即得；粉針每1支含三七提取物以人參皂苷Rg1計(jì)應(yīng)不低于210mg；C.丹酚酸B鎂鹽的含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)288nm；理論板數(shù)按丹酚酸B鎂鹽峰計(jì)算，應(yīng)不低于3000；對(duì)照品溶液的制備稱取丹酚酸B鎂鹽對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.25mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取凍干粉針90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含丹酚酸B鎂鹽應(yīng)不少于30mg；D.人參皂苷Rg1的含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以比例為20∶80的乙腈-0.1％磷酸水溶液為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)203nm；對(duì)照品溶液的制備稱取人參皂苷Rg1對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備稱取凍干粉針90mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液；測(cè)定法分別吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；粉針每1支含人參皂苷Rg1應(yīng)不少于75mg。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種治療心血管疾病的藥物組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法。本發(fā)明是將丹參提取物與三七提取物以最佳配比1∶5的比例混合后制成各種制劑，本發(fā)明還涉及從中藥丹參中提取丹參提取物的方法；同時(shí)提供了本發(fā)明凍干粉針劑的質(zhì)量控制方法，分別對(duì)中間體、成品的有效部位和單體化合物進(jìn)行了含量測(cè)定，建立了指紋圖譜檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，能有效地控制產(chǎn)品的質(zhì)量，保證產(chǎn)品的質(zhì)量安全、穩(wěn)定、一致。
文檔編號(hào)A61K36/25GK1726959SQ20041007010
公開(kāi)日2006年2月1日 申請(qǐng)日期2004年7月30日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月30日
發(fā)明者屠鵬飛, 吳婉瑩, 趙晶麗, 姜勇, 張彤梅 申請(qǐng)人:北京華醫(yī)神農(nóng)醫(yī)藥科技有限公司