專利名稱：銀葉樹的三萜類活性部位及其制法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及采用天然產(chǎn)物化學(xué)技術(shù)，從梧桐科銀葉樹屬真紅樹植物銀葉樹Heritiera littoralis D.中提取得到的三萜類活性部位，制備工藝及其用途。
背景技術(shù)：
以海洋天然產(chǎn)物研究為基礎(chǔ)，同時結(jié)合活性篩選從海洋生物中發(fā)現(xiàn)活性良好的先導(dǎo)化合物是創(chuàng)新藥物開發(fā)的源泉。目前國內(nèi)外各研發(fā)單位及政府機(jī)構(gòu)都非常重視天然來源的先導(dǎo)化合物的研究及其知識產(chǎn)權(quán)保護(hù)。
本發(fā)明涉及采用乙酸乙酯萃取、常壓硅膠柱層析法，從梧桐科銀葉樹屬真紅樹植物銀葉樹Heritiera littoralis D.中制備得到一個三萜類活性部位，該部位主要由7個三萜類化合物組成，即木栓酮(friedelin，I)，蒲公英萜醇(taraxerol，II)，29-羥甲基-木栓酮(29-hydroxymethyl-friedelin，III)，齊墩果酸(oleanolicacid，IV)，樺木酸(betulinic acid，V)，3-羥基-30-去甲基-20-酮基-28-羽扇豆酸(3-hydroxy-30-nor-20-oxo-28-lupanoic acid，VI)，3，4-開環(huán)木栓酮(3，4-secofriedelin，VII)。其中化合物III-VII為首次從銀葉樹屬植物中分離得到。該活性部位的抗老年癡呆癥活性屬首次發(fā)現(xiàn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是從梧桐科銀葉樹屬真紅樹植物銀葉樹Heritiera littoralis D.中提取得到的三萜類活性部位。
1、銀葉樹三萜類活性部位的主要化合物采用乙酸乙酯萃取、常壓硅膠柱層析法，從梧桐科銀葉樹屬真紅樹植物銀葉樹Heritiera littoralis D.中制備得到一個三萜類活性部位，該部位主要由7個三萜類化合物組成，這7個化合物分別是木栓酮，無色針晶，分子式為C30H50O；蒲公英萜醇，無色晶體，分子式為C30H50O；29-羥甲基-木栓酮，無色針晶，分子式為C30H50O2；齊墩果酸，無色針晶，分子式為C30H50O3；樺木酸，白色粉末，分子式為C30H51O3；3-羥基-30-去甲基-20-酮基-28-羽扇豆酸，白色粉末，分子式為C29H46O4；3，4-開環(huán)木栓酮白色粉末，分子式為C30H52O2，其中化合物III-VII為首次從銀葉樹屬植物中分離得到。
化合物III-VII結(jié)構(gòu)式如下 結(jié)構(gòu)鑒定(1)化合物III由EI-MS知此化合物的[M]+為442，結(jié)合13C NMR譜和DEPT譜給出其分子式C30H50O2。氫譜中，在δH0.70～1.50區(qū)域出現(xiàn)了7個典型的五環(huán)三萜的甲基單峰信號；δH3.23處有一個亞甲基信號，暗示此化合物中的一個甲基上的氫可能被羥基取代。碳譜中，和木栓酮的碳譜數(shù)據(jù)相比較，兩者的三萜骨架碳幾乎相同，只是有幾個碳信號不同δC25.8(一個甲基)，δC27.8(一個亞甲基)，δC29.7(一個亞甲基)，δC33.1(一個季碳)，δC41.9(一個次甲基)，δC74.7(一個亞甲基)，這些信號跟木栓酮的相比，表明該化合物多了一個羥基取代，而引起周圍一些相關(guān)碳的化學(xué)位移。通過化學(xué)位移的比較，結(jié)合EI-MS，推斷該化合物為29-羥甲基-木栓酮(29-hydroxymethyl-friedelin)。經(jīng)CA檢索該化合物為首次從銀葉樹屬植物中分離得到。
(2)化合物IV由EI-MS知此化合物的[M]+為458，結(jié)合13C NMR譜和DEPT譜給出其分子式C30H50O3。氫譜中，在δH0.70～1.50區(qū)域出現(xiàn)了8個甲基的單峰信號，δH5.28處有一個烯氫信號，暗示此化合物含有一個不飽和雙鍵，從這些信號可推斷此化合物是一個典型的齊墩果烷型三萜。碳譜中，δC183.4表明該化合物含有一個羰基，δC143.6和δC122.6再次證實(shí)了此化合物含有一個雙鍵，δC79.1表明該化合物含有一個羥基。結(jié)合碳譜、氫譜數(shù)據(jù)，以及EI-MS可推斷該化合物為齊墩果酸(oleanolic acid)。齊墩果酸在很多植物中都分離得到，根據(jù)CA資料顯示，該化合物為首次從銀葉樹屬植物中分離得到。
(3)化合物V由EI-MS知此化合物的[M]+為456，結(jié)合13C NMR譜和DEPT譜給出其分子式C30H48O3。氫譜中，在δH0.75～1.80區(qū)域出現(xiàn)了6個甲基的單峰信號，δH4.91處有一個烯氫信號，從這些信號可推斷此化合物是一個典型的羽扇豆烷型三萜。碳譜中，δC179.0表明該化合物含有一個羰基，δC151.4和δC109.9顯示該化合物含有一個環(huán)外雙鍵，δC78.1表明該化合物含有一個羥基。結(jié)合碳譜、氫譜數(shù)據(jù)，以及EI-MS可推斷該化合物為樺木酸(betulinic acid)。樺木酸在很多陸生植物中都分離得到，根據(jù)CA資料顯示，該化合物為首次從銀葉樹屬植物中分離得到。
(4)化合物VI由EI-MS知此化合物的[M]+為458，結(jié)合13C NMR譜和DEPT譜給出其分子式C29H46O4。氫譜中，在δH0.70～1.50區(qū)域出現(xiàn)了6個甲基的單峰信號，δH2.18處有一個明顯的亞甲基信號。碳譜中，跟化合物V(樺木酸)相比較，發(fā)現(xiàn)二者比較相似，只是該化合物只顯示29個碳信號，其δC212.2暗示該化合物含有一個環(huán)外酮基，δC181.2表明該化合物含有一個羰基，δC79.0表明該化合物含有一個羥基，而環(huán)外雙鍵的信號消失，推測該化合物可能是降了一個碳的羽扇豆烷型三萜。通過二維核磁實(shí)驗(yàn)證實(shí)，該化合物C-20位為一個環(huán)外酮基，其它碳骨架與樺木酸一致，由此引起一些相關(guān)碳的化學(xué)位移(見表1)。由EI-MS和碳譜、氫譜數(shù)據(jù)，以及相關(guān)二維核磁實(shí)驗(yàn)推斷該化合物為3-羥基-30-去甲基-20-酮基-28-羽扇豆酸(3-hydroxy-30-nor-20-oxo-28-lupanoic acid)，此化合物為首次從銀葉樹屬植物中分離得到。
(5)化合物VII由EI-MS知此化合物的[M]+為444，結(jié)合13C NMR譜和DEPT譜給出其分子式C30H52O2。氫譜中，在δH0.75～1.50區(qū)域出現(xiàn)了8個甲基的單峰信號，δH2.39處有一個明顯的亞甲基信號。碳譜中，與化合物I木栓酮相比較，發(fā)現(xiàn)二者比較相似，只是有些碳信號的化學(xué)位移發(fā)生了較大改變δC179.1表明該化合物含有一個羰基，δC7.60顯示的甲基信號暗示在木栓酮的3位酮基可能開環(huán)，致使23位木栓酮的典型甲基信號δC6.8向低場位移了0.8個ppm。根據(jù)DEPT譜，該化合物有12個亞甲基，3個次甲基信號，而木栓酮是11個亞甲基，4個次甲基信號，論證了該化合物在3位形成的開環(huán)結(jié)構(gòu)。根據(jù)EI-MS，結(jié)合氫譜、碳譜數(shù)據(jù)及DEPT譜，可推斷該化合物為3，4-開環(huán)木栓酮(3，4-seco friedelin)。此化合物為首次從銀葉樹屬植物中分離得到。
2、銀葉樹三萜類活性部位的制備方法本發(fā)明所述的銀葉樹三萜類活性部位的制法，是以銀葉樹樹皮為原料，粉碎后用95％和50％乙醇各回流提取3次，減壓濃縮后得乙醇提取物。乙醇提取物用蒸餾水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓濃縮得各萃取部位。乙酸乙酯部位經(jīng)硅膠柱層析、Sephadex LH-20柱層析得到各個化合物。具體步驟按照實(shí)施例。
3、銀葉樹三萜類活性部位的活性與用途本發(fā)明所述的該活性部位具有抗老年癡呆癥、抗腫瘤及抗肝炎的作用。
實(shí)施例銀葉樹樹皮(10.0kg)烘干(50～60℃)粉碎，95％、50％工業(yè)酒精回流提取(80℃)各3次，每次3小時，減壓濃縮，水浴風(fēng)干，分別得到干膏1.1kg、1.2kg，再分別用1～2倍體積的蒸餾水混懸(超聲波勻碎)，然后依次用石油醚(3次)、乙酸乙酯(5次)、正丁醇(5次)萃取，得到石油醚萃取物0.5g、0.2g，乙酸乙酯萃取物41g、23g，正丁醇萃取物200g、168g。銀葉樹樹皮的乙酸乙酯萃取合并部位(64g)經(jīng)正相硅膠(100-200目)柱層析，氯仿-甲醇(CHCl3∶CH3OH＝100∶0～99∶1～98∶2～40∶1～30∶1～20∶1～10∶1～5∶1～3∶1～2∶1～1∶1～0∶100)12個系統(tǒng)梯度洗脫，其中，流分Fr.5-6經(jīng)重結(jié)晶(氯仿)，得到化合物I；Fr.8-10經(jīng)硅膠(200-300目)柱層析，石油醚∶乙酸乙酯(8∶1)洗脫及Sephadex LH-20(氯仿∶甲醇＝1∶1)純化得化合物II、III、IV；Fr.11-14經(jīng)硅膠(200-300目)柱層析，氯仿∶甲醇(10∶1)洗脫得化合物V；Fr.16-19經(jīng)硅膠(200-300目)柱層析，氯仿∶甲醇(8.5∶1)洗脫及Sephadex LH-20(丙酮)純化得化合物VI、VII。
表1Table 113CNMR spectral data of compounds I-VII(125MHz)碳序號III IIIIV V VI VII1 22.3t38.2t 22.2t 38.4t 39.5t 38.6t 21.0t2 41.5t27.5t 41.5t 27.2t 28.3t 27.3t 37.4t3 213.1s 79.5d 213.1s 79.0d 78.1d 78.9d 179.1s4 58.2d39.4s 58.2d 38.7s 37.6s 38.8s 29.7t5 42.1s55.9d 42.1s 55.2d 56.8d 55.2d 39.1s6 41.3t19.2t 41.3t 18.3t 18.8t 18.2t 39.6t7 18.2t35.5t 18.2t 32.6t 34.8t 34.2t 18.1t8 53.1d39.2s 53.4d 38.8s 41.1s 40.6s 53.0d9 37.4s49.2d 37.4s 47.7d 51.9d 50.3d 37.4s1059.5d38.0s 59.5d 37.1s 37.5s 37.2s 59.8d1135.6t17.9t 35.6t 22.9t 21.2t 20.8t 35.3t1230.5t30.1t 30.6t 122.6d 26.1t 27.2t 30.2t1339.7s36.3s 39.9s 143.6s 39.5d 37.5d 38.9s1438.3s158.5s 38.2s 41.6s 42.9s 42.2s 37.8s1532.4t117.3d 32.7t 27.7t 31.2d 29.7t 32.3t1636.0t37.1t 35.8t 23.4t 32.9d 31.4t 36.0t1730.0s38.5s 30.5s 46.5s 47.8s 56.2s 30.0s1842.8d49.7d 41.9d 41.0d 50.7d 49.2d 42.8d1935.3t41.7t 29.7t 45.9t 48.7d 51.2d 35.2t2028.2s29.3s 33.1s 30.7s 151.4s 212.0s 28.2s2132.8t34.0t 27.8t 33.8t 30.3t 28.2t 32.9t2239.3t33.5t 39.9t 32.4t 38.6t 36.7t 39.3t236.8q 28.4q 6.8q 28.1q 26.1q 15.3q 7.6q2414.7q15.9q 14.7q 15.5q 16.4q 28.0q 19.4q2517.9q15.8q 17.9q 15.3q 16.4q 16.0q 17.9q2620.2q30.2q 20.8q 17.1q 16.3q 15.9q 20.2q2718.7q26.3q 18.2q 25.9q 14.9q 14.7q 18.8q2832.1q30.3q 32.1q 183.4s 179.0s 181.2q 32.1q2935.0q33.8q 74.7t 33.1q 109.9t 30.0q 35.0q3031.8q21.7q 25.8q 23.6q 19.5q 31.9q注化合物V(C5D5N)，化合物I-IV、VI-VII(CDCl3)
權(quán)利要求
1.一種銀葉樹的三萜類活性部位，是從梧桐科銀葉樹屬真紅樹植物銀葉樹.中提取得到的三萜類活性部位，這個活性部位由7個三萜類化合物組成，這7個化合物分別是木栓酮，無色針晶，分子式為C30H50O；蒲公英萜醇，無色晶體，分子式為C30H50O；29-羥甲基-木栓酮，無色針晶，分子式為C30H50O2；齊墩果酸，無色針晶，分子式為C30H50O3；樺木酸，白色粉末，分子式為C30H51O3；3-羥基-30-去甲基-20-酮基-28-羽扇豆酸，白色粉末，分子式為C29H46O4；3，4-開環(huán)木栓酮白色粉末，分子式為C30H52O2，其特征在于該活性部位，包括由其中化合物III-VII的化合物組成，化合物III-VII的結(jié)構(gòu)式如下 IIIIV V R＝CH2VI R＝0 VII
2.一種制備權(quán)利要求1中所述的銀葉樹的三萜類活性部位的方法，其特征在于該制法是利用色譜分離技術(shù)從梧桐科銀葉樹屬植物銀葉樹樹皮中，分離提取得到權(quán)利要求1中所述的三萜類活性部位，具體制法包括如下步驟以銀葉樹樹皮為原料，粉碎后用95％和50％乙醇各熱提取3次，減壓濃縮后得乙醇提取物；乙醇提取物用蒸餾水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓濃縮得各萃取部位；乙酸乙酯部位經(jīng)硅膠柱層析、Sephadex LH-20柱層析得到各三萜類化合物。
3.權(quán)利要求1中所述的銀葉樹的三萜類活性部位的用途，其特征在于該活性部位有抗老年癡呆、抗腫瘤及抗肝炎的作用。
全文摘要
本發(fā)明涉及從梧桐科(Sterculiaceae)銀葉樹屬(Heritiera)植物銀葉樹(Heritiera littoralis D.)中分離得到一個三萜類活性部位，及其制法和用途。本發(fā)明利用色譜分離技術(shù)從梧桐科銀葉樹屬植物銀葉樹中分離得到一個三萜類活性部位，該活性部位包括7個三萜類化合物，這7個化合物分別是木栓酮，蒲公英萜醇；29－羥甲基－木栓酮；齊墩果酸；樺木酸；3－羥基－30－去甲基－20－酮基－28－羽扇豆酸；3，4－開環(huán)木栓酮。其中化合物III－VII為首次從銀葉樹屬植物中分離得到。提供化合物III－VII的結(jié)構(gòu)式。本發(fā)明所述的活性部位有抗老年癡呆癥、抗腫瘤及抗肝炎的作用。
文檔編號A61P35/00GK1580071SQ20041002723
公開日2005年2月16日 申請日期2004年5月19日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月19日
發(fā)明者田艷, 張偲, 吳軍, 黃建設(shè) 申請人:中國科學(xué)院南海海洋研究所