專利名稱：一種水、油兩溶性o－殼聚糖衍生物及其制備和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物及其制備和應(yīng)用。屬于水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物的制備和應(yīng)用技術(shù)。
背景技術(shù)：
殼聚糖，這種自然界中迄今發(fā)現(xiàn)的唯一堿性多糖，已被證明對(duì)于脂肪具有明顯的吸附作用，并開始被應(yīng)用于最新的減肥藥物中。在日本殼聚糖減肥藥品發(fā)展迅猛，已有成為減肥藥主流的趨勢(shì)。日本厚生省1985年撥款60億日元給一些醫(yī)科大學(xué)，作為甲殼素基礎(chǔ)研究和應(yīng)用開發(fā)的費(fèi)用。日本的幾丁聚糖保健品“救多善”，1996年進(jìn)入中國(guó)市場(chǎng)，一年就從中國(guó)拿回10億人民幣，折合143億日元，是厚生省當(dāng)年撥款的2.3倍。1999年，《健康產(chǎn)業(yè)新聞》對(duì)全日本70家食品店鋪和藥品店鋪調(diào)查了主要暢銷的減肥食品材料，在藥店系統(tǒng)中位居第一的就是殼聚糖減肥藥。
但是殼聚糖作為聚陽(yáng)離子化合物，一般不能與中性油發(fā)生吸附反應(yīng)，對(duì)脂肪物質(zhì)在胃中會(huì)分解的膽固醇、甾醇、甘油三酸酯等中性油吸附能力不強(qiáng)；而且由于殼聚糖與脂肪不能互溶，極大的限制了殼聚糖與脂肪及脂肪酸的相互作用；再者由于殼聚糖在腸道環(huán)境中為不溶解狀態(tài)，降低了對(duì)脂肪酸的吸附效率；最后單純使用殼聚糖會(huì)引起便秘等副作用。因此人們開始通過對(duì)殼聚糖進(jìn)行改性，提高其溶解性，使用其衍生物來提高吸附油脂的效率，考察其可能潛在的分子水平的減肥機(jī)理。本發(fā)明專利涉及的一種水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物作為減肥藥物的方法尚未見任何報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物及其制備和應(yīng)用，該水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物易于制取，用于大鼠減肥具有明顯效果。
本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案加以實(shí)現(xiàn)的所述的水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物是以殼聚糖為原材料，合成出的殼聚糖環(huán)碳6位-OH上取代的衍生物，包括O-乙胺羥乙基殼聚糖和O-2’-羥丙基-N，N-二甲基十八烷基氯化銨殼聚糖，其結(jié)構(gòu)特征是
其中R＝-CH2OCH2CH2NH2， 該水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物粘均分子量是5萬-100萬，脫乙酰化度大于80％，碳6位O取代度為0.5-0.8，熱分解溫度為220～300℃。既能溶于水，溶解度≥3g/100ml；又能溶于乙醇、二甲基亞砜、二甲基甲酰胺等有機(jī)溶劑，溶解度≥1g/100ml。
上述水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物的制備方法，其特征在于包括以下過程采用γ射線輻射降解得到的分子量介于5萬-60萬之間的殼聚糖，在含有5％(v/v)水的6mlN，N-二甲基甲酰胺中，與3倍重量的鄰苯二甲酸反應(yīng)；殼聚糖吡喃環(huán)當(dāng)量取代反應(yīng)物摩爾當(dāng)量比為1∶1.5的氯乙醇和氯乙胺鹽酸鹽、N，N二甲基十八叔胺鹽酸鹽與環(huán)氧氯丙烷的反應(yīng)產(chǎn)物，在異丙醇介質(zhì)反應(yīng)，使用一水合肼(N2H4.H2O)和氫氧化鈉水溶液對(duì)N-鄰苯二甲?；M(jìn)行脫除，產(chǎn)品經(jīng)丙酮沉析、精制后得到水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物。
上述水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物的應(yīng)用，其特征在于將該水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物添加到飼料中喂養(yǎng)大鼠，對(duì)大鼠的肥胖具有明顯的治療和預(yù)防作用1)將這種水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物，添加到動(dòng)物基礎(chǔ)飼料(合成飼料)中，水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物與飼料的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2.5-7.5％，用來喂養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)性肥胖大鼠(在基礎(chǔ)飼料的基礎(chǔ)上增加全蛋粉、豬油、膽固醇、奶粉及白糖配制出高脂飼料，以此連續(xù)喂養(yǎng)6周形成營(yíng)養(yǎng)性肥胖大鼠模型；將70只肥胖動(dòng)物按照體重隨機(jī)分為7組，每組10只。)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明自第四周開始水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物各劑量組大鼠體重的下降趨勢(shì)逐漸突出，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物添加組大鼠體重明顯降低，高劑量組大鼠分別比對(duì)照組下降18～35％，體脂含量下降40～80％，差異具有顯著性(P＜0.01)；動(dòng)物的肝/體比同時(shí)明顯下降，各劑量組肝臟膽固醇和脂肪含量均明顯低于喂飼基礎(chǔ)飼料的對(duì)照組(P＜0.05)，肝臟膽固醇含量下將40～60％，肝臟脂肪含量下降30～40％；營(yíng)養(yǎng)性肥胖大鼠糞便中脂肪含量明顯增加，高劑量組大鼠糞脂含量與對(duì)照相比增加20～40％(P＜0.01)；肥胖對(duì)照組大鼠肝細(xì)胞呈嚴(yán)重的脂肪變性，肝細(xì)胞漿內(nèi)見多量大小不等的脂肪空泡，許多小的脂肪空泡融合形成大的脂滴，而水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物添加組大鼠肝細(xì)胞水變性減輕，肝竇狹窄不明顯，部分胞漿內(nèi)仍可見脂肪空泡形成，其中高劑量添加組肝細(xì)胞未見水變性，肝竇恢復(fù)正常，細(xì)胞漿內(nèi)僅見少許脂滴，脂肪變性程度明顯減輕。
2)將這種水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物，添加到高脂飼料中，添加水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物與飼料的重量比為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)5％，用來喂養(yǎng)清潔級(jí)SD雄性大鼠(體重60～70g，按體重將動(dòng)物隨機(jī)分為4組，每組10只)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明第3周時(shí)肥胖模型組大鼠體重明顯高于正常對(duì)照組(P＜0.01)，從第5周開始水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物添加組大鼠體重均明顯低于模型組(P＜0.01)，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)添加組大鼠體重增量比模型組低30～40％；肝膽固醇含量與高脂飼料組大鼠相比下降幅度超過50％，其水平與基礎(chǔ)飼料組相當(dāng)；水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物具有降低血糖、升高血清胰島素水平的作用，與高脂飼料組相比較，殼聚糖能夠降低體內(nèi)瘦素的水平；水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物均能促進(jìn)脂肪由糞便的排出，與高脂飼料組相比增加35～50％(P＜0.01)。
本發(fā)明制備的水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物通過對(duì)殼聚糖進(jìn)行改性，增強(qiáng)其在水或油中的溶解能力和對(duì)脂肪、膽固醇等的吸附能力；加之殼聚糖的刺激性、急性毒牲、亞急性毒性、慢性毒性和過敏性通過實(shí)驗(yàn)證明是合格的，使其更適宜作為健康、綠色、源于自然的減肥藥物。其中，水溶性使殼聚糖更容易和膽汁酸結(jié)合并全部排出體外，為了保持膽汁酸正常含量就必須在肝臟中將膽固醇轉(zhuǎn)化膽汁酸，其結(jié)果是血液中的膽固醇含量必然下降，從而使其具有顯著地減肥功能；油溶性使殼聚糖對(duì)油脂不是簡(jiǎn)單的吸附，而是使其溶解于水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物之中，即可極大程度的提高殼聚糖對(duì)于油脂的吸收效率。本發(fā)明殼聚糖減肥產(chǎn)品具有天然、無毒、減肥效果明顯而又對(duì)人體無副作用等優(yōu)點(diǎn)，既可用于肥胖病癥的治療又可以用于肥胖的預(yù)防。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例一、O-乙胺羥乙基殼聚糖的制備1.殼聚糖的輻射降解分子量108萬、脫乙?；?5％的殼聚糖由Co60輻射源，經(jīng)60kGy輻射劑量的照射，獲得分子量10萬～20萬、脫乙?；?6％的殼聚糖低聚物A。
2.O-乙胺羥乙基殼聚糖的制備①N-鄰苯二甲酰殼聚糖的制備0.83g鄰苯二甲酸溶液溶于含有6ml體積比為5％水的N，N-二甲基甲酰胺中，加入0.3g殼聚糖，在氮?dú)庀聰嚢璨⒓訜嶂?20℃。反應(yīng)8小時(shí)后，淡棕色混合物冷卻至室溫，然后倒入冰水。過濾后，將沉淀用150ml甲醇洗滌1小時(shí)，干燥得到0.444g淡棕色粉末物質(zhì)B。
②O-羥乙基殼聚糖的制備稱取5gB，加入25ml的50wt％NaOH溶液攪拌均勻，然后置于冰柜中在-18℃放置48小時(shí)。解凍后，擠壓出多余的NaOH，然后加入10ml異丙醇，攪拌均勻后，緩慢加入50ml的氯乙醇，在80℃反應(yīng)24h后，用乙醇洗滌，過濾，干燥得到白色固體粉末C。
③O-乙胺羥乙基殼聚糖的制備稱取5gC，攪拌下加入50ml異丙醇和50ml42％wtNaOH水溶液混合液，然后加入8.5g的氯乙胺鹽酸鹽，在30～80℃反應(yīng)8～24h后，用1M HCl調(diào)節(jié)pH至中性。丙酮洗滌過濾，使用氫氧化鈉水溶液和一水合肼(N2H4.H2O)脫除氨基保護(hù)，干燥得到白色固體粉末。
實(shí)施例二、O-2’-羥丙基-N，N-二甲基十八烷基氯化銨殼聚糖的制備1.殼聚糖的輻射降解按實(shí)施例一中第一步進(jìn)行2.N，N二甲基十八叔胺殼聚糖的制備①N-鄰苯二甲酰殼聚糖的制備按實(shí)施例一中第二步中第一過程進(jìn)行②N，N二甲基十八叔胺鹽酸鹽的合成配制0.1mol/l的稀鹽酸，用恒壓漏斗滴加入5.95gN，N二甲基十八叔胺中，控制體系PH值為4～11，在常溫水浴中攪拌反應(yīng)約2小時(shí)，而后冷凍干燥的乳白色霜狀鹽酸鹽C。
③鹽酸鹽與環(huán)氧氯丙烷反應(yīng)將3.3gC中滴加環(huán)氧氯丙烷1ml，常溫水浴反應(yīng)6～24小時(shí)，得淺黃色蠟狀固體D。
④O-2’-羥丙基-N，N-二甲基十八烷基氯化銨殼聚糖的制備在1.12B中加入100ml42％wt的NaOH溶液，，攪拌均勻，而后加入10ml異丙醇，緩慢、分批加入上步反應(yīng)所得淺黃色蠟狀固體4.26g，加熱反應(yīng)12～48小時(shí)。用稀鹽酸中和，分別用甲醇、乙醇過濾、洗滌，使用氫氧化鈉水溶液和一水合肼(N2H4.H2O)脫除氨基保護(hù)，干燥得到灰色粉末。
實(shí)施例三、水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物對(duì)肥胖大鼠的治療作用1.飼料配制及營(yíng)養(yǎng)性肥胖模型的建立選用合成飼料作為動(dòng)物基礎(chǔ)飼料，在基礎(chǔ)飼料的基礎(chǔ)上增加了全蛋粉、豬油、膽固醇、奶粉及白糖等來調(diào)整飼料中能量、膽固醇及脂肪的含量，配制出了高脂飼料，連續(xù)喂養(yǎng)6周形成營(yíng)養(yǎng)性肥胖大鼠模型。
2.動(dòng)物分組及研究方法待模型構(gòu)建成功之后，將70只肥胖動(dòng)物按照體重隨機(jī)分為7組，每組10只。各組喂飼的飼料如下①肥胖鼠對(duì)照組(C組)喂基礎(chǔ)飼料；②O-乙胺羥乙基殼聚糖(EAHECS)減肥實(shí)驗(yàn)組(TA1-3)TA1組基礎(chǔ)飼料+2.5％EAHECS，TA2基礎(chǔ)飼料+5％EAHECS，TA3基礎(chǔ)飼料+7.5％EAHECS；③O-2’-羥丙基-N，N-二甲基十八烷基氯化銨殼聚糖(DMOACS)減肥實(shí)驗(yàn)組(TB1-3)TB1組基礎(chǔ)飼料+2.5％DMOACS，TB2組基礎(chǔ)飼料+5％DMOACS，TB3組基礎(chǔ)飼料+7.5％DMOACS。
動(dòng)物采用不銹鋼鼠籠單籠飼養(yǎng)，自由飲水、統(tǒng)一食量，以便控制能量攝入。每周稱一次體重，試驗(yàn)結(jié)束前一周用代謝籠收集實(shí)驗(yàn)動(dòng)物72h的糞便，用于測(cè)定糞便中的脂肪含量。6周末隔夜禁食，解剖大鼠在相同部位切取部分肝臟用于檢測(cè)肝臟脂肪及膽固醇含量；取腎周及睪周脂肪墊，稱重用于計(jì)算體脂含量；將心、主動(dòng)脈弓及部分肝葉置于中性福爾馬林固定液中待做病理檢查。
3.對(duì)營(yíng)養(yǎng)性肥胖大鼠體重及體脂含量的降低作用本次試驗(yàn)正常對(duì)照組與肥胖模型組分別給予基礎(chǔ)飼料和高脂飼料6周后，試驗(yàn)結(jié)果顯示肥胖模型組的體重增量達(dá)到了正常對(duì)照組的1.96倍，證明肥胖大鼠模型的建立比較成功。
表1反映了各組間動(dòng)物體重的動(dòng)態(tài)變化，實(shí)驗(yàn)初始時(shí)各組間大鼠體重比較接近，自第四周開始?xì)ぞ厶歉鲃┝拷M大鼠體重的下降趨勢(shì)逐漸突出，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)殼聚糖添加組大鼠體重明顯降低，EAHECS和DMOACS高劑量組大鼠分別比對(duì)照組低90.22g、80.51g，差異具有顯著性(P＜0.01)。
表1 Chitosan對(duì)大鼠體重及體脂含量的影響(x±s)分 N大鼠體重(g) 體脂含量組 W1W4W6 (％)C10 369.12±34.76 349.45±30.67366.95±24.82 1.0714±0.3520TA1 10 375.08±31.69 347.13±23.79343.07±22.07*0.7336±0.5103TA2 9 382.33±51.71 338.43±37.06323.88±26.47**0.4377±0.2171**TA3 10 371.66±30.37 307.69±27.01**276.73±31.74**0.2291±0.1184**TB1 10 370.07±27.43 343.38±31.82348.47±24.05 0.8424±0.2555TB2 10 368.48±33.69 342.05±21.54339.48±15.50*0.7224±0.1938TB3 7 369.19±32.41 307.47±39.19**285.44±38.76**0.4678±0.1632***與Control組相比P＜0.05，**與Control組相比P＜0.014.對(duì)營(yíng)養(yǎng)性肥胖大鼠肝臟的影響隨著兩種水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物添加劑量的增加，動(dòng)物的肝/體比明顯下降，同時(shí)可見各個(gè)劑量組肝臟膽固醇和脂肪含量均明顯低于喂飼基礎(chǔ)飼料的對(duì)照組(P＜0.05)，且隨著殼聚糖添加劑量越高，這種降低作用更為明顯，EAHECS和DMOACS殼聚糖高劑量添加組與對(duì)照組大鼠相比肝臟膽固醇含量下將幅度分別達(dá)到44％、52％，肝臟脂肪含量下降36％和33％(表2)。
5.對(duì)營(yíng)養(yǎng)性肥胖大鼠糞便中脂肪含量的影響采用索氏提取的方法測(cè)定糞便中脂肪含量，結(jié)果顯示EAHECS殼聚糖高劑量組大鼠糞脂含量與對(duì)照相比增加38％，DMOACS殼聚糖組增加25％，P＜0.01，差異具有顯著性。與對(duì)照組相比中、低劑量的殼聚糖添加組糞脂含量也有所增加但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
表2 大鼠肝/體比與肝臟脂肪含量情況(x±s)
分組 N 肝/體比(％)肝臟膽固醇含量(μg) 肝臟脂肪含量(％)C10 3.1191±0.2619 347.47±66.720.055±0.014TA1 10 2.8745±0.3276*289.60±48.93*0.039±0.003*TA2 92.7432±0.2301**236.82±32.83*0.044±0.006TA3 10 2.6364±0.1994**194.40±29.27**0.035±0.009*TB1 10 2.9190±0.1857 264.60±21.53*0.038±0.009*TB2 10 2.8799±0.2200 213.86±31.84*0.036±0.010*TB3 72.8329±0.2212*166.70±38.42**0.037±0.005**與Control組相比P＜0.05，**與Control組相比P＜0.016.病理學(xué)檢查結(jié)果實(shí)驗(yàn)中對(duì)肝臟、心臟及主動(dòng)脈弓進(jìn)行了病理學(xué)檢查，結(jié)果顯示各組大鼠心臟和主動(dòng)脈弓大體正常、均未見脂肪浸潤(rùn)。不同劑量殼聚糖添加組肝臟脂肪變性的程度如下表表3 大鼠肝臟病理學(xué)檢測(cè)結(jié)果C TA1 TA2 TA3 TB1 TB2 TB3心肌脂肪沉積情況- - - - - --主動(dòng)脈弓脂肪沉積- - - - - --肝臟脂肪變性程度++++++ + ++++肥胖對(duì)照組大鼠肝細(xì)胞呈嚴(yán)重的脂肪變性，肝細(xì)胞漿內(nèi)見多量大小不等的脂肪空泡，許多小的脂肪空泡融合形成大的脂滴，擠壓細(xì)胞核。EAHECS殼聚糖和DMOACS殼聚糖低劑量組病變程度大致相同，肝細(xì)胞彌漫性水變性，肝竇狹窄，肝細(xì)胞脂肪變性的程度較肥胖組輕，部分肝細(xì)胞內(nèi)見脂肪空泡；中等劑量組肝細(xì)胞水變性減輕，肝竇狹窄不明顯，胞漿內(nèi)仍可見脂肪空泡形成，以中等大小脂滴為主；高劑量添加組肝細(xì)胞未見水變性，肝竇恢復(fù)正常，細(xì)胞漿內(nèi)僅見少許脂滴，脂肪變性程度較中、低劑量組明顯減輕。
實(shí)施例四、水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物對(duì)大鼠肥胖的預(yù)防作用1.動(dòng)物分組及研究方法清潔級(jí)SD雄性大鼠40只，體重(60～70g)，按體重將動(dòng)物隨機(jī)分為4組，每組10只。正常對(duì)照組(C組)喂基礎(chǔ)飼料，肥胖模型組(F組)喂高脂飼料，預(yù)防A組(PA組)喂高脂飼料+5％EAHECS；預(yù)防B組(PB組)喂高脂飼料+5％DMOACS。
動(dòng)物單籠飼養(yǎng)，自由飲水，限制攝食，使每只大鼠平均攝食量相同，以便控制能量攝入。每周稱一次體重，試驗(yàn)結(jié)束前一周用代謝籠收集實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的糞便，用于測(cè)定糞便中的脂肪含量。連續(xù)飼養(yǎng)6周后，解剖大鼠在相同部位切取部分肝臟用于檢測(cè)肝臟脂肪及膽固醇含量；取腎周及睪周脂肪墊，稱重用于計(jì)算體脂含量。
2.對(duì)大鼠體重、體脂含量的影響實(shí)驗(yàn)初始時(shí)各組間大鼠體重差異不具有顯著性；至第3周時(shí)肥胖模型組大鼠體重明顯高于正常對(duì)照組，差異具有顯著性(P＜0.01)；從第5周開始可見EAHECS和DMOACS殼聚糖添加組大鼠體重均明顯低于模型組，差異具有顯著性(P＜0.01)，至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)這種差異更為顯著；肥胖模型組大鼠體重增長(zhǎng)速度明顯快于其他三組，整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間兩種殼聚糖添加組大鼠體重增量分別比模型組低37％和33％(表5)。
表4 各組間大鼠體重的變化及體脂含量(x±s)組 例體重(g)體脂含量(％)別 數(shù)W1 W3 W5 W6C 10 103.5±15.37 172.02±8.53d211.18±19.67d212.15±16.82d0.42±0.26dF 890.73±9.33 193.44±15.84b311.20±23.96b349.11±32.44b0.95±0.21bPA 10 104.53±15.33 207.37±13.43bc249.25±13.2bd267.74±14.03bd0.74±0.20bPB 10 102.52±16.14 200.74±17.6b246.05±18.59bd274.93±16.25bd0.82±0.24ba與基礎(chǔ)飼料組相比P＜0.05，b與基礎(chǔ)飼料組相比P＜0.01；c與高脂飼料組相比P＜0.05，d與高脂飼料組相比P＜0.013.對(duì)大鼠肝臟脂肪和膽固醇的影響高脂飼料組大鼠肝臟脂肪和膽固醇含量分別為(11.06±3.03)％、(136.20±33.87)g，顯著高于僅喂飼基礎(chǔ)飼料的對(duì)照組(3.11±1.44)％、(48.00±27.99)g。EAHECS添加組大鼠肝臟脂肪及膽固醇含量分別為(5.94±1.26)％、(58.15±27.14)g，DMOACS添加組大鼠肝臟脂肪及膽固醇含量分別為(7.11±2.90)％、(46.06±18.88)g?？梢妰山M肝膽固醇含量與高脂飼料組大鼠相比下降幅度超過50％，其水平與基礎(chǔ)飼料組相當(dāng)。
4.對(duì)大鼠血糖、胰島素和瘦素水平的影響EAHECS和DMOACS殼聚糖具有降低血糖、升高血清和胰島素水平的作用；與高脂飼料組相比較，殼聚糖能夠降低體內(nèi)瘦素的水平(表5)。
表5 chitosan對(duì)大鼠血糖、胰島素及瘦素水平的影響組別 例數(shù) 血糖(mmol/l) Insulin(mmol/l)Leptin(ng/ml)C 104.97±0.67 39.15±4.052.89±0.74F 8 5.27±0.56 33.55±8.992.91±0.33PA104.70±0.32*39.506.51 2.77±0.97PB105.00±0.48 34.08±4.982.87±0.39*與高脂組飼料組比較P＜0.05，**與高脂飼料組比較P＜0.015.對(duì)大鼠糞脂水平的影響從外觀看來，與喂飼基礎(chǔ)飼料的對(duì)照組比較高脂飼料組和殼聚糖添加組大鼠糞便顏色發(fā)白，質(zhì)地稀軟。通過經(jīng)典的索氏提取法測(cè)定各組大鼠糞便中總脂肪含量，發(fā)現(xiàn)EAHECS和DMOACS殼聚糖均能促進(jìn)脂肪由糞便的排出，與高脂飼料組相比分別增加34％和46％，P＜0.01，差異具有顯著性。
權(quán)利要求
1.一種水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物，它是以殼聚糖為原材料，合成出的殼聚糖環(huán)碳6位-OH上取代的衍生物，包括O-乙胺羥乙基殼聚糖和O-2’-羥丙基-N，N-二甲基十八烷基氯化銨殼聚糖，其結(jié)構(gòu)特征是 其中R＝-CH2OCH2CH2NH2， 該殼聚糖衍生物粘均分子量是5萬-100萬，脫乙?；却笥?0％，碳6位O取代度為0.5-0.8，熱分解溫度為220～300℃。既能溶于水，溶解度≥3g/100ml；又能溶于乙醇、二甲基亞砜、二甲基甲酰胺等有機(jī)溶劑，溶解度≥1g/100ml。
2.一種按權(quán)利要求1所述的水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物的制備方法，其特征在于包括以下過程采用γ射線輻射降解得到的分子量介于5萬-60萬之間的殼聚糖，在含有體積百分比為5％水的6mlN，N-二甲基甲酰胺中，與3倍重量的鄰苯二甲酸反應(yīng)；殼聚糖吡喃環(huán)當(dāng)量與取代反應(yīng)物的摩爾當(dāng)量比為1∶1.5的氯乙醇和氯乙胺鹽酸鹽、N，N二甲基十八叔胺鹽酸鹽與環(huán)氧氯丙烷的反應(yīng)產(chǎn)物，在異丙醇介質(zhì)反應(yīng)，使用一水合肼和氫氧化鈉水溶液對(duì)N-鄰苯二甲?；M(jìn)行脫除，產(chǎn)品經(jīng)丙酮沉析、精制后得到水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖。
3.一種按權(quán)利要求1所述的水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖作為減肥藥物的應(yīng)用，其特征在于該水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖添加到飼料中喂養(yǎng)肥胖大鼠，對(duì)大鼠的肥胖具有明顯的治療和預(yù)防作用；1)將該水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖添加到動(dòng)物基礎(chǔ)飼料中，添加質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2.5-7.5％，用來喂養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)性肥胖大鼠實(shí)驗(yàn)6周后大鼠體重明顯降低，比對(duì)照組下降18～35％，體脂含量下降40～80％；動(dòng)物的肝/體比同時(shí)明顯下降，肝臟膽固醇含量下將40～60％，肝臟脂肪含量下降30～40％；營(yíng)養(yǎng)性肥胖大鼠糞便中脂肪含量明顯增加，高劑量組大鼠糞脂含量與對(duì)照相比增加20～40％；肥胖對(duì)照組大鼠肝細(xì)胞呈嚴(yán)重的脂肪變性，而殼聚糖衍生物高劑量添加組大鼠肝細(xì)胞未見水變性，肝竇恢復(fù)正常，細(xì)胞漿內(nèi)僅見少許脂滴，脂肪變性程度明顯減輕；2)將這種水、油兩溶性O(shè)-殼聚糖衍生物，添加到高脂飼料中，添加質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為5％，用來喂養(yǎng)清潔級(jí)SD雄性大鼠實(shí)驗(yàn)6周后添加組大鼠體重增量比模型組低30～40％；肝膽固醇含量與高脂飼料組大鼠相比下降幅度超過50％，其水平與基礎(chǔ)飼料組相當(dāng)；殼聚糖衍生物具有降低血糖、升高血清胰島素水平的作用，與高脂飼料組相比較，殼聚糖能夠降低體內(nèi)瘦素的水平；殼聚糖衍生物均能促進(jìn)脂肪由糞便的排出，與高脂飼料組相比增加35～50％。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種水、油兩溶性O(shè)－殼聚糖衍生物及其制備和應(yīng)用，屬于殼聚糖衍生物的制備與應(yīng)用技術(shù)。所述的水、油兩溶性O(shè)－殼聚糖衍生物是以殼聚糖為原材料，合成出的殼聚糖環(huán)碳6位－OH上取代的衍生物，包括O－乙胺羥乙基殼聚糖和O－2’－羥丙基－N，N－二甲基十八烷基氯化銨殼聚糖；其制備是N－鄰苯二甲酰殼聚糖與氯乙醇、氯乙胺鹽酸鹽以及N，N二甲基十八叔胺鹽酸鹽與環(huán)氧氯丙烷的反應(yīng)產(chǎn)物，在異丙醇介質(zhì)反應(yīng)，得到的水、油兩溶性O(shè)－殼聚糖衍生物。將這種水、油兩溶性O(shè)－殼聚糖衍生物，添加到動(dòng)物飼料中，其添加質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為2.5－7.5％喂養(yǎng)大鼠，對(duì)大鼠的肥胖具有明顯的治療和預(yù)防作用。本發(fā)明殼聚糖減肥產(chǎn)品具有天然、無毒、減肥效果明顯而又對(duì)人體無副作用等優(yōu)點(diǎn)，既可用于肥胖病癥的治療又可以用于肥胖的預(yù)防。
文檔編號(hào)A61P3/04GK1594365SQ200410019959
公開日2005年3月16日 申請(qǐng)日期2004年7月12日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月12日
發(fā)明者劉曉非, 莊旭品, 姚炳佳, 姚康德 申請(qǐng)人:天津大學(xué)