專利名稱：白樹花多糖，其制備方法和以該化合物為活性成分的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開一種白樹花多糖，同時提供了其制備方法和以該化合物為活性成分的藥物組合物，屬于中藥有效成分提取物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
白樹花Polyporus albicans(Imaz.)Teng..＝Grifolia albicans Imaz.分類為子菌亞門，層菌綱，非褶菌目，多孔菌科，多孔菌屬(樹花屬)。文獻(xiàn)名白樹花(《中國的真菌》)，白多孔菌(《真菌名詞及名稱》)，別名白多孔菌。白樹花子實體可食用，具有極高營養(yǎng)價值。其同科真菌灰樹花的營養(yǎng)價值超過香菇。目前由于發(fā)現(xiàn)白樹花有很高的藥用價值，有研究從其子實體獲得乙醇提取物，對小白鼠艾氏癌，大白鼠吉田肉瘤有抑制作用。因而對其藥用價值正在深入研究。但用白樹花為原料，大量制備白樹花多糖，并制成藥物，用于在抗腫瘤、升高白細(xì)胞、增強(qiáng)免疫功能、降血糖、降血脂、抗胃潰瘍、保肝作用的醫(yī)學(xué)應(yīng)用未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種具有藥用價值的白樹花多糖。
本發(fā)明還提供了從白樹花或其菌絲體中提取上述物質(zhì)的制備方法，適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明進(jìn)一步提供了以活性白樹花多糖組分為主要藥物或與其他藥物組方用于在抗腫瘤、升高白細(xì)胞、增強(qiáng)免疫功能、降血糖、降血脂、抗胃潰瘍、保肝作用的藥物。
白樹花多糖是通過以下提取方法獲得的將白樹花或其菌絲體粉碎，加4～8倍水煎煮2～4小時，過濾取濾液，反復(fù)2～4次，合并濾液，濃縮至1200～1800ml，放置，冷卻至室溫，經(jīng)活性炭過柱2次，收集流出液，濃縮至800～1500ml，加4～6倍乙醇沉淀，放置18～24小時，過濾，并加適量乙醇洗脫，將所得沉淀減壓干燥(溫度65～75□，真空度0.085～0.095mPa)，即得白樹花多糖。
用酚硫酸法，在490nm紫外波長，以葡萄糖為對照品測得白樹花多糖含量為15～25％(純度為35～55％)。
經(jīng)過藥理學(xué)試驗篩選，上述化合物具有在抗腫瘤、升高白細(xì)胞、增強(qiáng)免疫功能、降血糖、降血脂、抗胃潰瘍、保肝作用的藥理活性。
按藥劑學(xué)方法，可以將本發(fā)明的白樹花多糖制備成多種臨床藥物劑型作為在抗腫瘤、升高白細(xì)胞、增強(qiáng)免疫功能、降血糖、降血脂、抗胃潰瘍、保肝作用的藥物，所說的藥劑是任何一種藥劑學(xué)上所說的劑型。
本發(fā)明的藥物組合物含有治療有效量的上述化合物為活性成分，以及含有一種或多種藥學(xué)上可以接受的載體。
上文的載體是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，包括稀釋劑、賦型劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體。
本發(fā)明可以組合物的形式通過口服、直腸、靜脈、肌肉注射或胃腸外給藥方式施用于這種治療的患者。按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備各種劑型如片劑、顆粒劑、沖劑、膠囊、栓劑、噴霧劑、緩釋劑和注射劑。也可使其活性成分與一種或多種載體或藥物混合，自成所需劑型。
本發(fā)明的藥物優(yōu)選含有1％-99％的白樹花多糖和99％-1％的賦型劑(包括其他配伍用的藥物)，優(yōu)選含有30％-80％的白樹花多糖和70％-20％的賦型劑(包括其他配伍用的藥物)，最好含有60％-70％的白樹花多糖和40％-30％的賦型劑(包括其他配伍用的藥物)。
下述的藥理實驗證實了白樹花多糖具有在抗腫瘤、升高白細(xì)胞、增強(qiáng)免疫功能、降血糖、降血脂、抗胃潰瘍、保肝作用等藥理活性白樹花多糖的藥理學(xué)作用摘要以荷S180瘤及H22瘤小鼠為模型，研究了白樹花多糖的體內(nèi)抗腫瘤作用。結(jié)果表明白樹花多糖不僅具有抗腫瘤作用，還能增強(qiáng)機(jī)體的免疫能力。另外，白樹花多糖還具有明顯的升高白細(xì)胞、降血糖、降血脂、抗胃潰瘍、保肝作用。
1材料1.1藥物白樹花多糖為白樹花中提取的多糖，為褐色粉末。批號20040601。注射用環(huán)磷酰胺為江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司產(chǎn)品，批號20040326。
1.2 S180和H22瘤株購自北京藥物研究所。
1.3動物昆明種小鼠，體重18～22g，雌雄各半，Wistar大鼠，體重160～180g，雌雄各半，購自長春高新醫(yī)學(xué)動物實驗研究中心，合格證編號為(吉)2003-0004。常規(guī)飼料，自由飲水。
2方法和結(jié)果2.1.對荷S180瘤及H22瘤小鼠腫瘤生長的影響無菌下取生長7日的S180和H22瘤株，按1∶4稀釋，接種在小鼠右側(cè)腋下0.2ml/只，第二日分組，分別灌胃10ml/kg蒸餾水，腹腔注射20mg/kg環(huán)磷酰胺，灌胃白樹花多糖。每日一次，連續(xù)10日。末次給藥后1小時，稱體重后，拉頸處死小鼠。取瘤稱重。結(jié)果見表1，2。結(jié)果表明，白樹花多糖200-800mg/kg·d對S180移植性小鼠腫瘤和H22移植性小鼠腫瘤生長有明顯的抑制作用。
表1白樹花多糖對荷S180小鼠的影響組別(mg/kg) 動物數(shù)腫瘤重(g)抑制率(％)(只)對照組- 102.68±0.48環(huán)磷酰胺 20 100.83±0.35*** 67.85白樹花多糖800101.59±0.39*** 42.15白樹花多糖400101.89±0.38*** 30.26白樹花多糖200102.35±0.9712.84與對照組比較***表示P＜0.001，**表示P＜0.01，*表示P＜0.05下同表2白樹花多糖對荷H22小鼠的影響組別(mg/kg) 動物數(shù) 腫瘤重(g)抑制率(％)(只)對照組- 10 2.35±0.55環(huán)磷酰胺 20 10 0.87±0.29***64.68白樹花多糖80010 1.4740.67** 38.56白樹花多糖40010 1.64±0.52** 32.64白樹花多糖20010 1.89±0.42 14.572.2.白樹花多糖對小鼠吞噬功能的影響取小鼠40只，隨機(jī)分4組，分別灌胃10ml/kg蒸餾水，人參皂苷50mg/kg，白樹花多糖粉1.2、0.6g/kg，每日灌胃一次，連續(xù)7日，末次給藥后1小時，各鼠尾靜脈注射一得閣墨汁(1∶4稀釋)10ml/kg，分別在2和15分鐘后，由眼靜脈取血0.05ml，置4ml0.1％碳酸鈉溶液中混勻，在625nm處比色。結(jié)果以吞噬指數(shù)表示。結(jié)果見表3。結(jié)果表明，白樹花多糖能夠顯著增強(qiáng)小鼠的吞噬功能。
表3白樹花多糖對吞噬功能小鼠的影響組別(mg/kg) 動物數(shù)(只)吞噬指數(shù) P正常對照組- 100.0425±0.008人參皂苷50 100.0525±0.014 ＜0.05白樹花多糖800100.0567±0.018 ＜0.05白樹花多糖400100.0528±0.014 ＜0.05白樹花多糖400100.0491±0.015 ＞0.052.3.對小鼠免疫器官的影響取未成年雄性小鼠，隨機(jī)分5組，分別灌胃10ml/kg蒸餾水和白樹花多糖1.2、0.6g/kg，每日一次，連續(xù)10日。末次給藥后1小時斷頭處死小鼠，取脾臟和胸腺稱重，并計算臟器指數(shù)。結(jié)果見表4。白樹花多糖灌胃給藥，可以增加未成年小鼠免疫器官胸腺和脾臟指數(shù)。
表4白樹花多糖對小鼠臟器指數(shù)的影響組別 動物數(shù) 脾臟指數(shù) 胸腺指數(shù)(mg/kg) (只)(mg/10g) (mg/10g)對組-10 61.5±17.7 68.6±10.9人參皂苷50 10 79.87±10.25** 89.65±11.1**白樹花多糖80010 75.84±10.34** 84.87±11.0**白樹花多糖40010 72.34±11.61* 80.24±10.54*白樹花多糖20010 67.6±11.6275.8±7.08*2.4對化療小鼠的升高白細(xì)胞作用除對照組外，模型組和給藥組小鼠腹腔注射5-氟尿嘧啶225mg/kg/d，連續(xù)14天。造模后，各組動物按表中所示劑量灌胃給藥，結(jié)果表明，白樹花多糖對化療小鼠具有明顯的升高白細(xì)胞作用。結(jié)果見表5。
表5白樹花多糖對化療小鼠升高白細(xì)胞作用(x±s，n＝10)WBC(109/L)組別 劑量(mg/kg)0d 3d 6d9d12d對照 8.4±1.15 8.5±0.34 8.3±0.38 8.7±0.62 9.2±0.48模型組 8.4±1.14 3.6±0.34***2.9±0.38***4.7±0.64***7.1±0.49*白樹花多糖800 8.6±0.68 7.1±0.87##5.9±0.47###8.2±0.36###9.9±0.38##400 8.7±0.72 6.1±0.59#5.5±0.59##7.2±0.30##8.8±0.31##200 8.6±0.68 5.2±0.82 4.8±0.45#7.1±0.35##7.8±0.35與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；與模型組比較#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001。
2.5抗胃潰瘍作用按表6分組給藥，于7天內(nèi)，每天灌胃一次，對照組灌胃等體積蒸餾水，末次給藥2h后，按文獻(xiàn)方法，用乙醚輕度麻醉大鼠，將大鼠四肢綁于鐵網(wǎng)上，頭朝下垂直放置16小時，處死大鼠，取胃，檢查大鼠應(yīng)激型潰瘍等級。結(jié)果見表6。白樹花多糖具有明顯的抗?jié)冏饔谩?br> 表6白樹花多糖的抗?jié)冏饔?x±s)組別 劑量(mg/kg)動物數(shù)(只)潰瘍等級(x±s)對照 104.85±0.65胃樂新1000 101.75±2.12***白樹花多糖800101.70±2.31***白樹花多糖400101.85±2.25***白樹花多糖200101.94±2.02**與對照比較，**P＜0.01，***P＜0.0012.6保肝作用取小鼠50只，隨機(jī)分5組，第一組為正常對照組，灌胃10ml/kg蒸餾水，第二組為模型組，灌胃10ml/kg蒸餾水，第三組為陽性藥組，灌胃給予復(fù)方益肝靈800mg/kg，第四、五組為白樹花多糖組，分別灌胃給予白樹花多糖粉400、800mg/kg，每日灌胃一次，連續(xù)7日，第六次給藥后，后四組分別腹腔注射0.01％CCL4花生油，禁食16小時，次日給藥后1小時，由眼靜脈采血，離心。取血清，用賴氏法測定谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量(根據(jù)北京中生生物工程高新技術(shù)公司試劑盒說明書上方法進(jìn)行)。結(jié)果見表7。
表7白樹花多糖對四氯化碳所致小鼠急性肝損傷的影響組別動物數(shù)(只) 谷丙轉(zhuǎn)氨酶含量(u/L) P(mg/kg)正常對照組- 10 43.7±7.75 ＜0.001模型組- 10 118.9±11.8
復(fù)方益肝靈80010 107.8±12.1 ＜0.05白樹花多糖80010 83.7±16.4＜0.001白樹花多糖40010 89.8±15.4＜0.01白樹花多糖40010 92.8±12.5＜0.05結(jié)果表明，白樹花多糖灌胃給藥，能對四氯化碳造成小鼠急性肝損害具有明顯的保護(hù)作用。
2.7降血脂作用將小鼠按表8所示分組給藥，每組動物雌雄各半，對照組和模型組灌胃蒸餾水10ml/kg。于7天內(nèi)每天灌胃一次，末次給藥1h后，模型組和給藥組按10ml/kg腹腔注射75％蛋黃生理鹽水溶液，對照組腹腔注射等體積生理鹽水，禁食16h后，再灌胃給藥一次，1h后，處死動物，取血，分離血清，按常規(guī)方法測總膽固醇TC、甘油三酯TG、低密度脂蛋白LDL-C，結(jié)果見表8。白樹花多糖高劑量可明顯降低高脂血癥小鼠總膽固醇TC、甘油三酯TG、低密度脂蛋白LDL-C水平。
表8.白樹花多糖對小鼠血脂的影響(x±s)組別 劑量 動物數(shù)甘油三酯總膽固醇低密度脂蛋白(mg/kg) (只) (mmol/L)(mmol/L)(mmol/L)對照組-100.45±0.08###2.42±0.56##0.43±0.06###模型組-100.94±0.04 3.85±0.58 0.98±0.04血脂康400 100.56±0.01###2.58±0.33##0.53±0.05###白樹花多糖800 100.52±0.03###2.45±0.32***0.48±0.05###白樹花多糖400 100.58±0.06#*2.68±0.45##0.56±0.08#**白樹花多糖200 100.61±0.05#*2.75±0.48##0.59±0.06**與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.0012.8降血糖作用除對照組外，模型組和給藥組小鼠尾靜脈注射四氧嘧啶70mg/kg/d，造成糖尿病模型后，各組動物按表中所示劑量灌胃給藥，10天后，處死動物，取血，用葡萄糖氧化酶法測定血糖，結(jié)果表明，白樹花多糖對糖尿病模型小鼠血糖升高具有明顯的降低作用。結(jié)果見表9。
表9白樹花多糖降血糖作用組別 動物數(shù)(只) 血糖(mmol/L) P(mg/kg)正常對照組-10 8.02±2.04 ＜0.001模型組-10 19.6±6.24消渴丸200 10 8.12±3.12 ＜0.001白樹花多糖800 10 8.64±3.24 ＜0.001白樹花多糖400 10 9.54±5.21 ＜0.001白樹花多糖400 10 10.21±5.42＜0.014結(jié)論白樹花多糖具有明顯的抗腫瘤、升高白細(xì)胞、增強(qiáng)免疫功能、降血糖、降血脂、抗胃潰瘍、保肝作用。
具體實施例方式通過以下實施例進(jìn)一步舉例描述本發(fā)明，并不以任何方式限制本發(fā)明，在不背離本發(fā)明的技術(shù)解決方案的前提下，對本發(fā)明所作的本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易實現(xiàn)的任何改動或改變都將落入本發(fā)明的權(quán)利要求范圍之內(nèi)。
實施例1將白樹花或其菌絲體1kg粉碎，加6倍水煎煮3小時，過濾取濾液，反復(fù)3次，合并濾液，濃縮至2000ml，放置，冷卻至室溫，經(jīng)活性炭過柱2次，收集流出液，濃縮至1000ml，加5倍乙醇沉淀，放置24小時，過濾，并加適量乙醇洗脫，將所得沉淀減壓干燥(溫度70℃，真空度0.090mPa)，即得白樹花多糖。用酚硫酸法，在490nm紫外波長，以葡萄糖為對照品測得白樹花多糖含量為20％(純度為45％)。
實施例2將白樹花或其菌絲體1kg粉碎，加6倍水煎煮3小時，過濾取濾液，反復(fù)3次，合并濾液，濃縮至2000ml，放置，冷卻至室溫，經(jīng)活性炭過柱2次，收集流出液，濃縮至1000ml，加5倍乙醇沉淀，放置24小時，過濾，并加適量乙醇洗脫，將所得沉淀減壓干燥(溫度70℃，真空度0.090mPa)，即得白樹花多糖。用酚硫酸法，在490nm紫外波長，，以葡萄糖為對照品測得白樹花多糖的多糖含量為25％(純度為55％)。配液后G4漏斗過濾，濾液分裝滅菌，制成注射劑。
實施例3白樹花多糖1kg，藥用淀粉0.5kg，用80％濃度的乙醇濕法制粒，整粒，干燥，裝1#膠囊，每粒0.2g。其它項目應(yīng)符合中華人民共和國藥典2000年版膠囊項下要求。
實施例4白樹花多糖1kg，藥用淀粉0.5kg，糊精1kg，50％濃度乙醇適量，制粒，整粒，干燥，壓片，每片0.2g。其它項目應(yīng)符合中華人民共和國藥典2000年版片劑項下要求。
權(quán)利要求
1.一種白樹花多糖，其特征在于由下述方法制備獲得將白樹花或其菌絲體粉碎，加4～8倍水煎煮2～4小時，過濾取濾液，反復(fù)2～4次，合并濾液，濃縮至1200～1800ml，放置，冷卻至室溫，經(jīng)活性炭過柱，收集流出液，濃縮至800～1500ml，加4～6倍乙醇沉淀，放置18～24小時，過濾，并加乙醇洗脫，將所得沉淀物減壓干燥，即得白樹花多糖。
2.白樹花多糖在抗腫瘤、升高白細(xì)胞、增強(qiáng)免疫功能、降血糖、降血脂、抗胃潰瘍、保肝作用藥物中的應(yīng)用。
3.用于抗腫瘤、升高白細(xì)胞、增強(qiáng)免疫功能、降血糖、降血脂、抗胃潰瘍、保肝作用的藥物組合物，其中含有治療有效量的白樹花多糖和藥學(xué)上可接受的載體。
4.根據(jù)權(quán)利要求2、3所述的藥物，其特征在于所說的藥劑是任何一種藥劑學(xué)上所說的劑型。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種白樹花多糖，并提供了其制備方法，將白樹花或其菌絲體粉碎，加水煎煮，過濾取濾液，合并濾液，濃縮，放置，冷卻至室溫，經(jīng)活性炭過柱2次，收集流出液，濃縮，加乙醇沉淀，放置，過濾，并加適量乙醇洗脫，將所得沉淀減壓干燥，即得白樹花多糖。同時提供了以白樹花多糖組分為主要藥物或與其他藥物組方，可用于抗腫瘤、升高白細(xì)胞、增強(qiáng)免疫功能、降血糖、降血脂、抗胃潰瘍、保肝作用。
文檔編號A61P3/00GK1634996SQ200410011308
公開日2005年7月6日 申請日期2004年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月8日
發(fā)明者徐凌, 陳曉光 申請人:徐凌