專利名稱：α－C－苯基－N－叔丁基硝酮的新型兩親衍生物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及由α-C-苯基-N-叔丁基硝酮衍生的新型化合物，它們的制備方法和它們用于制備用于預防或治療與氧化應激有關的疾病的藥物的用途。
與氧化應激和含氧自由基物質(zhì)形成有關的病理狀況已由CroosC.E.，Arch，Intern.Med.(1987)107，526-545和Anderson K.M.，EllsG.，Bonomi P.，Harris J.E.，Medical Hypotheses(1999)52，53-57列出。
它們的數(shù)目很大這個類型的70多種病理狀況在這一列舉中被提到，具體地，其包括免疫和炎癥性疾病、缺血—再灌注綜合征、動脈粥樣硬化、阿爾茨海默氏病和帕金森氏病、紫外線和離子輻射引起的損傷、某些形式的化學致癌作用和細胞老化。
機體中自然產(chǎn)生一些含氧和含氮自由基物質(zhì)(ROS和RNS)，它們由某些特定的酶如可溶性超氧化物歧化酶(sSOD)來調(diào)節(jié)。捕獲這些反應性極強的自由基物質(zhì)是至關重要的，因為它們在細胞內(nèi)引起不可逆的損傷。雖然這些自由基物質(zhì)的正常產(chǎn)生易被細胞調(diào)節(jié)，然而與外部的氧化應激(炎癥性休克和缺血—再灌注綜合征等)或遺傳性缺陷(具體地為線粒體異常)相關的自由基的過量產(chǎn)生則引起細胞的快速破壞。于是對人體或動物體來說，處理這一大量流入的自由基就變得不可能。
細胞內(nèi)存在幾種防御氧化應激的機制，這些機制能在氧化級聯(lián)中的不同水平發(fā)揮作用。這種氧化級聯(lián)一般由與線粒體中分子氧的部分還原(典型的缺血再灌注綜合征)相關的超氧自由基過量產(chǎn)生引發(fā)。這種超氧自由基能歧化成過氧化氫。這兩種物質(zhì)通過Fenton反應并在亞鐵的存在下，能產(chǎn)生羥基自由基，羥基自由基具有非?？焖偾曳翘禺愋缘嘏c細胞的任何成分如脂質(zhì)、DNA或蛋白發(fā)生反應的特性，引起這些成分不可逆的損傷，如Stadtman H.R.，Berlett B.S.J.Biol.Chem.(1991)266，17201-17211；Floyd R.A.Carcinogenesis(1990)11，1447-1450；Gille J.J.，Van Berkel C.G.，Joenge H.Carcinogenesis(1994)15，2695-2699；Halliwell B.Muta.Res.(1999)443，37-52所描述。
通過NF-κB因子激活某些自殺基因(Bel或p53基因)，這些自由基物質(zhì)也是造成細胞凋亡現(xiàn)象的原因，這已被Siebenlist U.，F(xiàn)ranzosoG.，Brown K.Annu.Rev.Cell.Biol.(1994)10，405-455描述。
可溶性SOD負責將超氧自由基轉(zhuǎn)化成過氧化氫，然后后者被谷胱甘肽依賴性過氧化物酶或過氧化氫酶處理。
抗氧化劑的其它水平的細胞保護也存在，尤其是在膜中，這些水平的保護限制不飽和膜磷脂的氧化。α-生育酚和β-胡蘿卜素是脂質(zhì)抗氧化劑的主要例子。
在尋找用于預防或治療與氧化應激有關的疾病的治療方法中，最有前景的策略在于盡可能干預氧化級聯(lián)的上游，以便在很早的階段防止與自由基物質(zhì)的極強反應性相關的損傷。
為做到這一點，曾經(jīng)嘗試利用稱作“自旋-捕獲”分子來捕獲這些高反應性自由基，在“自旋-捕獲”分子中硝酮類看起來是最有效的。
硝酮類在降低和預防生物體系中自由基所引起的損傷方面的治療作用已在1990年由Oliver C.，Starke-Read P.，Stadman E.，Liu G.，Carncy J.，F(xiàn)loyd R.Proc.Natl.Acad.USA(1990)87，5144-5147證明。
這些作者證明注射α-C-苯基-N-叔丁基硝酮(PBN)后，在沙鼠體內(nèi)使腦缺血引起的損傷減小。腦缺血伴隨著自由基產(chǎn)生的大量增加，這些自由基被PBN捕獲，從而形成更穩(wěn)定并因而反應性和毒性更小的自旋加合物。PBN是自旋捕獲劑，已有大量的生物學研究與之相關。
例如，可參考的文獻有Hensley K.，Carney J.M.，Stewart C.A.，Tabatabaie T.，Pye Q.N.，F(xiàn)loyd R.A.Int.Rev.Neurobiol.(1997)40，229-317。
PBN在腦中發(fā)揮作用有非常高度的特異性，這可能是由于它的相當?shù)挠H脂性，使其能穿過血-腦屏障，如Cheng H.Y.，Liu T.，F(xiàn)euerstein G.，Barone F.C.Free Radic.Biol.Med.(1993)14，243-250所證明。
最眾所周知和有效的硝酮類是α-C-苯基N-叔丁基硝酮(PBN)、5，5-二甲基-吡咯烷-N-氧化物(DMPO)和新近發(fā)現(xiàn)的分子N-苯亞甲基-1-二乙氧基磷?；?1-甲基-乙胺N-氧化物(PBNP)和5-二乙基膦?；?5-甲基吡咯啉N-氧化物(DEPMPO)。
一種PBN的二磺酸酯衍生物，即NXY-059(4-[(叔丁基亞胺基)甲苯-1，3-二磺酸酯N-氧化物]二鈉)，其具有比PBN更強的神經(jīng)保護活性，其藥理學研究和臨床開發(fā)正在進行，在以下文獻中也被提及Kuroda S.，Tsuchidate R.，Smith M.L.，Maples K.R.，Siesjo B.K.J.Cereb.Blood Flow Metab.(1999)19，778-787；Lees K.R.，Sharma A.K.，Barer D.，F(xiàn)ord G.A.，Kostulas V.，ChengY.F.，Odergren T.Stroke(2001)32，675-680。
但是，以上提及的化合物中沒有一個在低劑量時具有令人滿意的體內(nèi)或體外功效，盡管它們的細胞毒濃度很高Almli L.M.，HamrickS.E.G.，Koshy A.A.，Tuber M.G.，F(xiàn)erriero D.M.，Dev.Brain Res.(2001)132，121-129；Nakao N.，Grasbon-Frodl E.M.，Widner H.，Brundin P.Neuroscience(1996)73，185-200。缺少功效可能與藥物差的生物利用度以及細胞穿透問題有關。
因此，仍需要一種自旋捕獲化合物，其能夠捕獲自由基并且還能被人體或動物體轉(zhuǎn)運到細胞內(nèi)它的靶點。
具體地，仍需要一種化合物，其能夠穿過細胞膜并且甚至更重要和困難的挑戰(zhàn)是能夠穿過線粒體膜以進入產(chǎn)生超氧自由基的區(qū)室。
考慮這個目的，Ouari O.，Polidori A.，Pucci B.，Tordo P.，ChalierF.J.Org.Chem.(1999)64，3554-3556和Geromel V.，Kadhom N.，Celabos-Pico I.，Ouari O.，Polidori A.，Munnich A.，Rtig A.，RustinP.Hum.Mol.Genet.(2001)10，1221-1228提議了一種PBN的兩親全氟碳衍生物TA1PBN。
該化合物已在呼吸鏈復合物V(ATP酶)的活性嚴重缺乏的成纖維細胞系上測試，并且顯示出了鼓舞人心的結(jié)果。
不過，TA1PBN的合成存在困難，這使得難以設想在工業(yè)規(guī)模上生產(chǎn)之。
因此，本申請人將目標定為構(gòu)思并制備新型化合物，該化合物具有自旋捕獲的活性，顯示出與現(xiàn)有技術的分子相比增加的生物利用度而且制備簡單，從而使得可能設想工業(yè)規(guī)模的生產(chǎn)。
本發(fā)明涉及新型化合物，其特征在于它們相應于下面的式(I) 其中
X代表選自以下的親水性基團單糖或多糖以及單糖和多糖的氨基衍生物、聚環(huán)氧乙烷鏈、肽鏈、選自季銨、氧化胺或肉堿基團的極性離子基團；m代表等于1、2或3的整數(shù)；Y代表用于連接芳核和親水性X取代基的間隔臂；Y選自酯、酰胺、脲、氨基甲酸酯、醚、硫醚和胺官能團，和任選被一個或多個酯、酰胺、脲或氨基甲酸酯官能團和被一個或多個醚、胺或硫醚橋間斷的C1-C6烴鏈；y代表等于0或1的整數(shù)；Y’代表選自 酯官能團、 酰胺官能團、 脲官能團、 氨基甲酸酯官能團、-O-醚橋或-S-硫醚橋的基團；m’是選自1和2的整數(shù)；X’代表氫原子或任選被一個或多個氟原子取代的C4-C14烷基鏈。
本發(fā)明可以使用的單糖中，可以提及葡萄糖、乳糖、果糖、甘露糖、半乳糖、核糖和麥芽糖。糖類的氨基衍生物中，具體可以提及葡糖胺。本發(fā)明所使用的多糖中，可以提及由一些單糖單元例如蔗糖和乳糖酰胺組成的鏈。
當式(I)分子的親水性部分X為聚環(huán)氧乙烷鏈時，后者有利地包含30到100個環(huán)氧乙烷單元，優(yōu)選50到60個。
肽鏈優(yōu)選地由天然氨基酸組成，這些天然氨基酸例如丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸和纈氨酸。
本發(fā)明可以使用的親水性離子和非離子基團如以下示意

圖1中所示。
離子極性頭端 非離子極性頭端示意圖1極性頭端的一般結(jié)構(gòu)間隔臂Y被基團X取代一次或二次，這取決于所述間隔臂是單官能團還是多官能團。
基團X’可選自例如以下基團-烴基正丁基、叔丁基、異丁基、正戊基、異戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基、正十一烷基、正十二烷基、正十三烷基、正十四烷基等。
-氟化烴基可以提及的氟化烴基相應于式-(CH2)t-(CF2)rF，其中r和t代表兩個整數(shù)，其中14≥r+t≥4，例如-(CF2)4F；-(CF2)5F；-(CF2)6F；-(CF2)7F；-(CF2)8F；-(CF2)9F；-(CF2)10F；-(CF2)11F；-(CF2)12F；-(CF2)13F；-(CF2)14F；-CH2-(CF2)3F；-CH2-(CF2)4F；-CH2-(CF2)5F；-CH2-(CF2)6F；-CH2-(CF2)7F；-CH2-(CF2)8F；-CH2-(CF2)9F；-CH2-(CF2)10F；-CH2-(CF2)11F；-CH2-(CF2)12F；-CH2-(CF2)13F；-(CH2)2-(CF2)2F；-(CH2)2-(CF2)3F；-(CH2)2-(CF2)4F；-(CH2)2-(CF2)5F；-(CH2)2-(CF2)6F；-(CH2)2-(CF2)7F；-(CH2)2-(CF2)8F；-(CH2)2(CF2)9F；-(CH2)2-(CF2)10F；-(CH2)2-(CF2)11F；-(CH2)2-(CF2)12F；-(CH2)3(CF2)1F；等，-(CH2)13-(CF2)F。
優(yōu)選滿足下列條件中至少一個X代表乳糖酰胺基團、肉堿或者聚氧乙烯鏈；m代表1；m’代表1或2；X’選自辛基、癸基、十二烷基或CF3(CF2)rCH2CH2-，其中8≥r≥6。
本發(fā)明的化合物同現(xiàn)有技術化合物相比，顯示出被賦予更高生物利用度的優(yōu)點。該更高的生物利用度至少部分歸功于本發(fā)明分子的兩親性質(zhì)。
本發(fā)明還涉及相應于式(I)的化合物的制備方法，所述方法的特征在于根據(jù)以下路線2，使相應于式(II)的醛和相應于式(III)的羥胺反應 路線2其中，X、y、Y、m、X’、m’和Y’具有與如上相同的定義。
根據(jù)以下路線3中所描述的方法制備式(III)的化合物 路線3在如下將說明的條件下實施路線3，這些條件取決于親脂性基團的性質(zhì)。
a-疏水性單鏈線(monocatenary)烴或全氟碳部分(圖1)圖1顯示式(III)的化合物的制備，其中m’＝1；X’＝(CH2)2-R，其中R＝C6F13、C8F17或CH3(CH2)n，其中4＜n＜14； (化合物5)、 (化合物6)、 (化合物2)、 (化合物1)或-S-(化合物7)。
疏水性單鏈線部分由2-甲基-2-硝基丙醇合成。該合成子的醇官能團通過使醇和酸在偶聯(lián)劑二環(huán)己基碳二亞胺和二甲基氨基吡啶(1)存在下反應，使得可能通過酯鍵直接連接烴和全氟碳鏈。
醇還能和烷基異氰酸酯反應以產(chǎn)生氨基甲酸酯型鍵(2)。
醇官能團可以通過先經(jīng)甲苯磺?；?，之后經(jīng)疊氮化鈉取代而轉(zhuǎn)化為胺。通過Staudinger反應，烷基疊氮在三苯膦和氫氧化鈉存在下轉(zhuǎn)變?yōu)榘贰?br> 該胺能和脂肪酸反應以產(chǎn)生酰胺型鍵(5)，或和烷基異氰酸酯反應而形成脲(6)。
最后，甲苯磺酸酯在堿性介質(zhì)中被硫醇取代而形成硫醚鍵(7)。
然后利用4當量Kagan試劑(SMI2)在THF/MeOH混合物或乙酸中將不同疏水性合成子(1-7)的硝基官能團還原為羥胺。
Girard P.，Namy J.L.，Kagan H.B.J.Am.Chem.Soc.(1980)102，2693-2698和Namy J.L.，Girard P.，Kagan H.B.Nouv.J.Chem.(1977)1，5已描述該反應。
該反應非?？焖俚匕l(fā)生(3min)，取決于待還原的硝基烷的性質(zhì)，收率在50％到100％之間變動。
b-疏水性雙鏈線(bicatenary)烴或全氟碳部分(圖2)圖2顯示式(III)的化合物的制備，其中m’＝2；X’＝(CH2)2-R，其中R＝C6F13、C8F17或CH3(CH2)n，其中4＜n＜14； (化合物8)、 (化合物9)、-S-(化合物12)、 (化合物14)或 (化合物13)。
疏水性雙鏈線部分由2-硝基-2-甲基-1，3-丙二醇合成。脂肪鏈通過氨基甲酸酯(9)或酯(8)鍵連接到醇官能團上。醇官能團通過與甲苯磺酰氯反應轉(zhuǎn)化為甲苯磺酸酯。二甲苯磺酸酯可被烷基硫醇取代以產(chǎn)生硫醚(12)。該二甲苯磺酸酯通過用疊氮化鈉取代甲苯磺酸酯并再與三苯膦反應和堿性水解可被轉(zhuǎn)化為二胺。此二胺可與異氰酸酯反應以產(chǎn)生脲鍵(14)，或與酸反應以形成酰胺鍵(13)。
然后用Kagan試劑還原雙觸角合成子的硝基官能團，取決于所涉及的分子，其收率可從60％到80％變動。
c-非離子親水性部分(圖3)圖3顯示式(II)的化合物的制備，其中X代表非離子極性基團；
Y代表-NH-CH2-(化合物20)、 (化合物21、22和23)、 (化合物24)或 (化合物25)；y＝1；m＝1(化合物20至24)；m＝3(化合物25)。
非離子親水性頭端由糖(乳糖酰胺、半乳糖、葡萄糖、甘露糖等)、糖基化或非糖基化的多元醇(例如Tris)或聚乙二醇組成。乳糖酰胺的衍生物20由4-氰基苯甲醛和乳糖酸內(nèi)酯合成。通過縮醛化作用保護醛官能團(15)并然后還原硝基后，將產(chǎn)生的胺縮合到乳糖酸內(nèi)酯上。在酸性介質(zhì)中利用過量的乙醛使醇官能團乙?；⑹谷┕倌軋F脫保護，從而產(chǎn)生極性合成子20。
其它的極性頭端由4-羧基苯甲醛合成。葡萄糖基化(21)、甘露糖基化(22)和半乳糖基化(23)衍生物通過在Helferich反應條件下將Boc-氨基乙醇縮合到相應的乙酰溴代糖苷(17、18和19)上而獲得。在肽偶聯(lián)劑存在下胺官能團脫保護并縮合到酸官能團上后，獲得3個糖基化的極性頭端21-23。
聚乙二醇化的衍生物24通過將胺官能化的聚乙二醇縮合到通過縮醛保護的4-羧基苯甲醛的酸官能團上而得到。縮醛脫保護而獲得該衍生物。最后，通過將文獻Polidori A.，Pucci B.，Zarif L.，LacombeJ-M.，Riess J-G.，Pavia A.A.，Chem.Phys.Lipids(1995)77，225-251已描述的胺縮合到4-羧基苯甲醛的酸官能團上，可能獲得三半乳糖基化衍生物25。
d-離子親水性部分(圖4)圖4顯示式(II)的化合物的制備，其中X代表離子極性基團；Y代表-CH2-(化合物26和27)、 (化合物28)或 (化合物29)；y＝1；m＝1.
離子極性頭端由季銨、氧化胺或肉堿基團組成。銨基是通過先將醛官能團用乙二醇保護并用AlLiH4還原后由腈合成。獲得的胺根據(jù)Sommer H.Z.，Lipp H.I.，Jackson L.L.J.Org.Chem.(1971)36，824-828描述的方法，在DMF中于三丁胺存在下用甲基碘進行全甲基化。
結(jié)晶產(chǎn)物在乙酸水溶液中水解以回收衍生物26。
氧化胺27在2當量的甲基碘存在下形成叔胺之后由相同的胺得到。氮在甲醇中用10體積的過氧化氫氧化?；衔?7在縮醛脫保護后得到。
氧化胺29通過McQuade等的方法由醛官能團被縮醛基團保護的4-羧基苯甲醛和N-乙基-N’，N’-二甲基乙二胺合成。此方法已被McQuade D.T.，Quinn M.A.，YU S.M.，Polans A.S.，Krebs M.P.，Gellman S.H.Angew.Chem.Int.Ed.(2000)39，758-761描述。
偶聯(lián)在肽偶聯(lián)劑DCC存在下實現(xiàn)。用10體積過氧化氫氧化胺官能團且使縮醛脫保護后，回收化合物29。
最后，肉堿衍生物29通過將胺15縮合到琥珀酸酐上，再在DCC存在下在DMF中將酸官能團偶聯(lián)到肉堿的醇官能團上而得到。產(chǎn)物28在縮酮官能團脫保護后得到。
e-單鏈線(圖5)和雙鏈線(圖6)兩親硝酮的獲得不同的兩親硝酮通過將不同極性合成子的醛官能團與疏水部分的羥胺基團偶聯(lián)而得到。根據(jù)標記為I的離子親水頭端(大極性)或標記為NI的非離子糖基化親水性頭端(因乙酰化而非極性)的極性的多少來使用質(zhì)子(乙醇)或非質(zhì)子(THF)極性溶劑。不過，在質(zhì)子極性溶劑中反應更迅速(2天，而在THF中為10天)。
在這些圖中，矩形標記的HC代表任選氟取代的烴鏈X’。
THF和糖基化極性頭端一起使用，因為它是一種不發(fā)生醇官能團脫乙?；磻娜軇Ｋ械奶腔瘍捎H硝酮均經(jīng)反相HPLC(C18柱/甲醇-水洗脫劑)純化。離子化合物通過結(jié)晶分離。聚乙二醇化的兩親硝酮通過排阻色譜法(sephadex LH20)純化。
本發(fā)明另外涉及與如上所定義的相應于式(I)的化合物作為抗自由基試劑的用途。
因而已證明本發(fā)明的化合物具有與現(xiàn)有技術化合物相當?shù)牟东@自由基的能力。
此性質(zhì)使得設想在多個領域中使用本發(fā)明的分子成為可能-在治療領域，本發(fā)明的產(chǎn)品可用于預防和/或治療與氧化應激和含氧自由基物質(zhì)形成相關的病理狀況。
因而本發(fā)明涉及在藥物學可接受的賦形劑中包含本發(fā)明的化合物的藥物組合物。本發(fā)明涉及本發(fā)明的化合物用于制備用于預防和/或治療自由基作用的藥物的用途。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明的化合物用于制備用于預防和/或治療與氧化應激和含氧自由基物質(zhì)形成相關的病理狀況的藥物組合物的用途，這些病理狀況具體地為免疫和炎癥性疾病、缺血再灌注綜合征、動脈粥樣硬化、阿爾茨海默氏病、帕金森氏病、亨廷頓氏病、由紫外線和離子輻射引起的損傷、癌癥和細胞老化。
本發(fā)明的產(chǎn)品可經(jīng)本領域技術人員所知的任何途徑給予，具體地，通過靜注或肌注，或者通過口服或透皮給予。它們可單獨使用或和其它活性化合物聯(lián)合使用。其劑量和每日給藥量根據(jù)所涉及的化合物測定的活性以及病人的體重進行調(diào)整。
-在化妝品領域，本發(fā)明的化合物可用于預防和/或治療老化作用以及太陽輻射作用。
因而本發(fā)明還涉及在化妝品可接受的賦形劑中包含本發(fā)明的化合物的化妝品組合物。
上述組合物可施用于皮膚或表皮附件(指甲和毛發(fā))。
該組合物可以以水溶液或油溶液、油包水或水包油乳劑、三相乳劑或軟膏形式存在。
本發(fā)明的化合物可引入尋求抗自由基活性的化妝品組合物中護膚乳、遮光產(chǎn)品、卸妝劑、皮膚或發(fā)用包裝、洗發(fā)劑、化妝品如唇膏、粉妝、粉底、指甲油等。
-在有機合成領域中，本發(fā)明的化合物可用作自由基反應中的自由基捕獲劑。
由于它們在多種介質(zhì)中的溶解性，本發(fā)明的化合物使用方便，且可應用于眾多的情況。
實驗部分I-生物學評估化合物A1用于進行自由基捕獲實驗。體外測試了本發(fā)明的幾種化合物作為生物抗氧化劑和抗自由基試劑的能力。
硝酮A11-捕獲自由基物質(zhì)能力的測定以碳(CH3和CO2基團)和氧(OH基團)為中心并對化合物A1進行的自由基捕獲實驗表明，PBN的官能化并不影響這些化合物捕獲自由基物質(zhì)的能力?？赡苡^察到以碳為中心的自由基物質(zhì)的特征性EPR信號，如圖7所示。
另一方面，當體系中產(chǎn)生羥基自由基時，以碳為中心的自由基捕獲的特征性EPR信號被檢測到。這是由于在極性頭端經(jīng)OH基與糖的氫反應生成的含碳自由基被硝酮捕獲。
2-生物抗氧化劑和抗自由基能力的體外測定a-通過測定caspase III的酶活性進行大鼠皮層神經(jīng)元的抗凋亡能力評估對糖基化烴基兩親硝酮衍生物硝酮A2進行這些初步實驗。將它的抗凋亡活性與兩種商品硝酮，即PBN和DMPO相比較。
硝酮A2大鼠神經(jīng)元細胞在培養(yǎng)的第8天用10μM過氧化氫毒害20min。加入過氧化氫產(chǎn)生凋亡現(xiàn)象，這已被Whittemore E.R.，Loo D.T.，Cotman C.W.Neuroreport(1994)5，1485-1488描述(利用加入星形孢菌素產(chǎn)生凋亡的陽性對照來校驗)，通過在405nm處比色測定此代謝特異的酶，即caspase III，與最大毒性對照相比較來對凋亡進行評定(以前被Nicholson D.W.，Ali A.，Thombury N.A.，Vaillancourt J.P.，DingC.H.，Gallant M.，Griffin P.R.，Labelle M.，Lazebnik Y.A.，MundayN.A.，Raju S.M.，Smulson M.E.，Yannin T.，Yu V.I.，Miller D.K.Nature(1995)376，37-43描述)。
在用過氧化氫毒害之前，將各種無毒濃度(10、100和200μM)的不同待試化合物培養(yǎng)20小時。經(jīng)漂洗和培養(yǎng)箱干燥后，在比色測定前將細胞溶解。兩親硝酮A1在大于400μM時具有顯著的細胞毒性。
所得結(jié)果(圖8所示)清楚地表明，當兩親硝酮A2存在時，經(jīng)100μM過氧化氫毒害后，caspase III的活性非常顯著地降低。此活性遠遠低于未被毒害的神經(jīng)元細胞中caspase III的正常活性。此結(jié)果清楚地顯示高于在商品硝酮PBN和DMPO情況下測定的保護水平。
b-對神經(jīng)—肌肉共培養(yǎng)物的神經(jīng)保護功效的評定經(jīng)用過氧化氫毒害30分鐘后，評定這些兩親硝酮對神經(jīng)—肌肉共培養(yǎng)物的保護作用。
通過將衛(wèi)星細胞轉(zhuǎn)移到適當?shù)呐囵B(yǎng)基中而將來源于健康橫紋肌標本的人肌細胞分離出來。在培養(yǎng)基中這些細胞融合成非收縮性肌纖維。將大鼠胚胎脊髓的外植塊沉積于肌細胞上。
三周后，在外植塊附近的所有肌纖維均收縮，且具有成熟的神經(jīng)肌肉接頭。成熟后，對細胞進行挑選，用與顯微鏡連接的攝像機拍照。A(A1、A2、A3和A4)與B(B1)型化合物以100μM和200μM的濃度培養(yǎng)20小時。然后用800mM的H2O2毒害細胞30分鐘，之后漂洗它們。分別在此氧化應激產(chǎn)生后24小時和48小時觀察細胞并拍照。
20小時的培養(yǎng)后，可見羧酸酯型的離子化合物B1具有細胞毒作用，并引起肌細胞的迅速破壞。雖然其它化合物無毒，不過它們引起肌肉收縮的停止或減慢，無論使用何種濃度(100和200μm)。另一方面，在全氟化化合物A3和A4所用濃度為100μm和烴化合物A1和A2所用濃度為100或200μm(表1)的情況下，用過氧化氫毒害后48小時，觀察到收縮完全或部分恢復。雖然其它化合物保護細胞免于破壞，但它們沒有使得收縮恢復。
在溶解細胞并離心后，通過以下步驟對凋亡情況進行定量用“cell death detection ELISA”試劑盒測定上清液中片段化DNA的量。酶顯影后，用平板讀數(shù)器在405nm下測量光密度(圖9)。
結(jié)果清楚地表明，除離子衍生物B1外，所有測試的化合物均保護細胞免于通過加入過氧化氫而誘導的凋亡。在200mM的濃度下，羧酸酯衍生物B1表現(xiàn)出非常低的人為凋亡信號，其是由于在細胞溶解前，經(jīng)該硝酮處理的培養(yǎng)細胞死亡后，其DNA片段釋放入培養(yǎng)基中。
A型硝酮 B型硝酮
1細胞死亡表1用800μm過氧化氫毒害后48小時測量神經(jīng)—肌肉細胞培養(yǎng)物的收縮活性
表2觀察肌纖維收縮活性的標準c.對患有呼吸鏈復合物V嚴重缺乏的成纖維細胞株的抗氧化活性的評定利用MTT測試測定細胞的成活力這些測試在特征為NARP基因突變的成纖維細胞株上進行，該基因編碼線粒體鏈復合物V中的一種蛋白(亞基6)。這些細胞的特征在于超氧化物歧化酶的異常過量產(chǎn)生，表明這一遺傳缺陷引起超氧化物自由基產(chǎn)生的增加。超氧化物自由基的過量產(chǎn)生引起細胞凋亡加快的過程(Geromel V.，Kadhom N.，Cebalos-Picot I.，Ouari O.，Polidori A.，Munnich A.，Rtig A.，Rustin P.Hum.Mol.Genet.(2001)10，1221-1228)。
從由兩位個體(對照)和一位為NARP突變攜帶者的患者獲得的皮膚活組織檢查物制備成纖維細胞培養(yǎng)物。將細胞在添加有如下物質(zhì)的RPMi 1640培養(yǎng)基(由Life technologies SARL銷售，Cergy Pontoise，法國)中培養(yǎng)glutamax(446mg/l)、10％未透析的胎牛血清、100μg鏈霉素/ml、100IU青霉素/ml、200μm尿苷及2.5mM丙酮酸鈉。對于細胞毒性測試，在37℃下，5％CO2條件下，在Petri微量培養(yǎng)板中接種細胞，密度為每孔3000個細胞。為了引發(fā)氧化應激，24小時后，以10mM半乳糖代替葡萄糖(選擇性培養(yǎng)基，圖10a到10f中標記為sm)使細胞經(jīng)受低血糖。在用于呼吸細胞的選擇性培養(yǎng)基(無葡萄糖的RPMi 1640培養(yǎng)基)中，24小時后使細胞接觸增加濃度的各種待測化合物48小時和72小時。為比較的目的，所有研究均在同一個群體倍增后所收集的細胞上進行。
通過MTT測試測量兩親硝酮保護細胞免于凋亡的能力來評定兩親硝酮的抗氧化活性。
MTT測試是一種比色法，其可測定增殖和細胞毒性分析中有活力細胞的數(shù)量。培養(yǎng)孔用20μl MTT溶液(5mg/ml于PBS中)在37℃下培養(yǎng)一小時。之后，加入200μl異丙醇以萃取出MTT甲，并用自動讀數(shù)裝置于540m下測量每孔的吸光度。
用MTT比色測定獲得的結(jié)果如圖10a至10f所示。在這些圖中，化合物A5是一種A型硝酮，其中R＝OCONH(CH2)5CH2，化合物H相應于下式 化合物H此測試表明TA1PAN在濃度為50μm及以上時具有保護NARP細胞免于凋亡引起的細胞死亡的能力。這些結(jié)果為以前關于TA1PBN進行的分析(Geromel V.，Kadhom N.，Cebalos-Picot I.，Ouari O.，Polidori A.，Munnich A.，Rtig A.，Rustin P.Hum.Mol.Genet.(2001)10，1221-1228)提供了很好的證明。全氟碳化合物B1在濃度為100μm及以上時看起來也有效。要注意全氟碳化合物A4和烴化合物A1、A2和A5于此細胞模型中無效。此功效的缺乏可能歸因于脂肪烴鏈缺乏疏水性。全氟化化合物A4的鏈長短于化合物A3的。最后要注意，TA1PBN的全氟化鏈C8F17長于化合物A3(C6F13鏈)。此可解釋用這兩種兩親硝酮處理NARP細胞時功效的差異。目前正在測試與A3相似且具有C8F17氟化鏈的衍生物?？傊?，看起來這些硝酮的疏水性看起來對其生物活性有決定性的影響。后者可能由硝酮被轉(zhuǎn)移通過細胞質(zhì)膜以及可能進入線粒體腔的能力決定。
II-合成實施例1.兩親單鏈線糖基化烴基硝酮的合成a.由2-甲基-2-硝基丙基E3合成4-甲苯磺酸酯 將9.6g甲苯磺酰氯(0.050mol-1.2當量)溶解在30ml吡啶中。然后逐滴加入已溶解在30ml二氯甲烷中的5g 2-甲基-2-硝基丙醇(0.042mol-1當量)。在添加過程中培養(yǎng)基在0℃下保持，而后在室溫下48小時。將反應混合物倒入150ml冰水中同時劇烈攪拌。用50ml二氯甲烷萃取水相三次。合并有機相，用75ml 3N HCl洗滌三次，然后用75ml鹽水洗滌兩次，經(jīng)過Na2SO4干燥，最后減壓下蒸發(fā)。在乙酸乙酯/環(huán)己烷混合物中重結(jié)晶后，得到亮白色粉末狀化合物E3(9.55g-0.035mol-83％)。前沿比0.35(環(huán)己烷/乙酸乙酯8∶2)。M.p.＝74-75.5℃。
1H NMR(250MHz，CDCl3)δ7.76(2H，d，J＝8.5Hz，H芳環(huán))，7.37(2H，d，J＝8.5Hz，H芳環(huán))，4.27(2H，s，CH2-O)，2.46(3H，s，甲苯磺?；械腃H3)，1.56(6H，s，叔丁基中的CH3)13C NMR(62.86MHz，CDCl3)δ146.1(CIV芳環(huán))，132.6(CIV芳環(huán))，130.7和128.6(CH芳環(huán))，86.3(CIV)，73.2(CH2-O)，23.5(叔丁基中的CH3)，22.3(甲苯磺?；械腃H3)紅外(KBr，cm-1)ν(CH芳環(huán))＝3059及3005，ν(NO2)＝1543b.1-辛基硫烷基-2-甲基-2-硝基丙基E7a的合成 在氬氣氛下，將4.1g叔丁醇鉀(0.039mol-2當量)懸浮在30ml無水DMF中。攪拌20分鐘后，用滴液漏斗逐滴加入已溶解在10mlDMF中的6.4ml辛硫醇(0.039mol-2當量)。培養(yǎng)基漸漸呈現(xiàn)出乳白色外觀，10分鐘后，緩緩加入已溶解在20ml DMF中的5g E3(0.0183mol-1當量)。將反應混合物加熱到50℃，在氬氣流下保持4小時。將混合物倒入400ml冰鹽水中，然后該混合物用50ml環(huán)己烷萃取5次。有機相用100ml鹽水洗兩次，經(jīng)過Na2SO4干燥，減壓下蒸發(fā)。用快速色譜法在硅膠上對其純化(洗脫劑環(huán)己烷/二氯甲烷，從9∶1至8∶2)，得到油狀化合物E7a(4.4g-0.0178mol-97％)。Rf0.65(環(huán)己烷/乙酸乙酯，8∶2)。
1H NMR(250MHz，CDCl3)δ3.04(2H，s，CIV-CH2-S)，2.52(2H，t，J＝7.25Hz，CH2-S)，1.64(6H，s，叔丁基中的CH3)，1.54(2H，qt，J＝7.25Hz，CH2-CH2-S)，1.40至1.20(10H，m，鏈中的CH2)，0.87(3H，t，J＝7Hz，鏈中的CH3)。
13C NMR(62.86MHz，CDCl3)δ87.4(CIV)，41.5(CIV-CH2)，33.2(CH2-S)，30.8，28.8，28.1及27.7(鏈中的CH2)，24.4(叔丁基中的CH3)，21.6(鏈中的CH2)，13.1(鏈中的CH3)紅外(KBr，cm-1)ν(NO2)＝1543c.N-(1，1-二甲基-2-辛基-硫烷基乙基)羥胺E7b的合成 將0.247g硝基化合物E7a(1mmol-0.25當量)溶解在6ml先前經(jīng)氬氣脫氣的THF/MeOH(2∶1)混合物中。在惰性氣氛下將溶液全部同時加入kagan試劑(4當量)中。反應幾乎即刻發(fā)生，之后出現(xiàn)綠/灰色(SmI2物質(zhì)消失，以SmI3物質(zhì)為主)。攪拌15分鐘后，向反應介質(zhì)中加入20ml 10％的Na2S2O3溶液。減壓下蒸發(fā)THF。稀釋水相2倍，然后用30ml乙酸乙酯萃取3次。用30ml蒸餾水洗有機相2次，然后減壓下蒸發(fā)。硅膠色譜法純化(洗脫劑環(huán)己烷/乙酸乙酯，從8∶2至7∶3)，得到半透明油狀的羥胺E7b(164mg-0.7mmol-70％)。
還回收得到50mg起始化合物E7a，并由此可確定轉(zhuǎn)化率為88％。
1H NMR(250MHz，DMSOδ7.09(1H，s，NH)，5.3(1H，bs，OH)，2.63(2H，s，CIV-CH2-S)，2.55(2H，t，J＝7.2Hz，CH2-S)，1.64(6H，s，叔丁基中的CH3)，1.54(2H，qt，J＝6.7Hz和J＝7.2Hz CH2-CH2-S)，1.40至1.20(10H，m，鏈中的CH2)，0.87(3H，t，J＝7Hz，鏈中的CH3)13C NMR(62.86MHz，CDCl3)δ57.2(CIV)，40.8(CIV-CH2)，33.2(CH2-S)，31.2，29.4，28.6及28.5(鏈中的CH2)，2.37(叔丁基中的CH3)，22.0(鏈中的CH2)，13.9(鏈中的CH3)紅外(KBr，cm-1)ν(NH)＝3246d.烴基硝酮A2的合成 在氬氣氛下，將0.5g糖基化乙醛(Ouari O.，Chalier F.，Pucci B.，Tordo P.，J.Chem.Soc.Perkin Trans 2(1998)，2299)(0.615mmol-1當量)溶解在10ml無水并脫氣的THF中。加入已溶解于2ml THF中的0.1g羥胺E7b(0.430mmol-0.7當量)，以及一匙尖4分子篩。在氮氣下升溫反應物至60℃，并同時避光。每隔一天加入50mg羥胺(0.215mmol-0.35當量)和一匙尖4分子篩。以TLC檢測反應進程，8日后，加入另外1.75當量的羥胺，之后硅藻土過濾反應介質(zhì)。減壓下蒸發(fā)溶劑后，利用快速色譜法通過硅膠純化粗反應混合物(洗脫劑乙酸乙酯/環(huán)己烷，7∶3)。在LH-20排阻樹脂上再次純化(洗脫劑甲醇/二氯甲烷，1∶1)，得到純的硝酮A2(313mg-0.304mmol-50％)以及含有最初的乙醛的116mg餾分(由1HNMR確定比例大約為1/3)。M.p.＝70℃(分解)。[α]D＝+17.8°(c，1，CH2Cl2)。
1H NMR(250MHz，CDCl3)δ8.24(2H，d，J＝8.1Hz)，7.49(1H，s，CH＝N(O))，7.25(2H，d，J＝8.1Hz)，6.57(1H，m，NH)，5.67(1H，d，J＝6.6Hz，H-2)，5.60(1H，dd，J＝3.8Hz和J＝5.8Hz，H-3)，5.37(1H，d，J＝3Hz，H-4’)，5.18(1H，dd，J＝2.5Hz和J＝10.3Hz，H-2’)，5.08(1H，m，H-5)，4.98(1H，dd，J＝3.4Hz和J＝10.4Hz，H-3’)，4.65(1H，d，J＝7.9Hz，H-1’)，4.62至4.45(2H，m，1H-6a和H-7a)，4.42至4.30(2H，m，H-4和H-7b)，4.23至3.98(3H，m，H-6b，H-6’a和H-6’b)，3.90(1H，t，J＝6.5Hz)，3.00(2H，s，CIV-CH2-S)，2.41(2H，t，J＝7.25Hz，CH2-S)，2.13，2.05，2.02，2.01，1.98，1.95(24H，6s，CH3-CO)，1.61(6H，s，叔丁基中的CH3)，1.43(2H，m，CH2-CH2-S)1.3至1.1(10H，m，鏈中的CH2)，0.82(3H，t，J＝6.6Hz，鏈中的CH3)。
13C NMR(62.86MHz，CDCl3)δ170.4，170.4，170.0，170.0，169.9，169.7，169.7，169.5，169.2(CH3-CO)，167.1(CO-NH)，139.8(CIV芳環(huán))，131.0(CH＝N(O))，130.1(CIV芳環(huán))，129.2，127.5(CH芳環(huán))，101.7(CH-1’)，77.3(CH-4)，73.4(CIV)，71.7(CH-2)，70.9(CH-5’和CH-3’)，69.7(CH-5)，69.1(CH-3)，68.9(CH-2)，66.8(CH-4’)，61.6，60.9(CH2-OAc)，42.9(CH2-NH)，42.4(CIV-CH2-S)，33.3(CH2-S)，31.7，29.9，29.0，29.0，28.6(鏈中的CH2)，25.7(叔丁基中的CH3)，22.5(鏈中的CH2)，20.8，20.7，20.6，20.6，20.6，20.5，20.5，20.4(CH3-CO)，14.0(鏈中的CH3)。
MS FAB+(1027.1g.mol-1)[M+H]+＝1027(5％)，[M+Na]+＝1049(10％)，[C12H25S]+＝201(70％)。
用Zemplen方法使糖脫乙酰后，得到脫保護產(chǎn)物 M.p.＝115℃(分解)Rf0.52(乙酸乙酯/甲醇/水，7∶2∶1)[α]D＝+17.2(0.25c，1，CH3OH)1H NMR(250MHz，CD3OD)δ8.28(2H，d，J＝8.25Hz)，7.82(1H，s，CH＝N(O))，7.42(2H，d，J＝8.25Hz)，4.65至4.35(4H，m，CH2-NH，H-1’，H-2)，4.25(1H，m，H-3)，4.00至3.35(10H，m，H-4，H-5，CH2-OH，H-4’，H-5’，H-3’和H-2)，3.01(2H，2，CH2-S)，2.43(2H，t，J＝7.3Hz，CH2-S)，1.61(6H，單峰，叔丁基中的CH3)，1.44(2H，m，CH2)，1.3至1.1(10H，m，CH2)，0.87(3H，t，J＝6.9Hz)13C NMR(62.86MHz，CD3OD)；δ175.3(CO-NH)，143.4(CIV芳環(huán))，136.0(CH＝N(O))，131.1(CH芳環(huán))，130.6(CIV芳環(huán))，128.3(CH芳環(huán))，105.8(CH-1’)，83.3(CH-4)，77.2(CH-5’)，74.8(CIV)，74.6(CH-3’或CH-2’)，74.1(CH-2)，73.2(CH-5)，72.8(CH-3’或CH-2’)，72.5(CH-3)，70.4(CH-4’)，63.8，62.7(CH2-OH)，43.5，43.0(CH2-NH和CH2-S)，34.2(CH2-S)，32.9，31.0，30.3，30.2，29.7(CH2)，26.0(叔丁基中的CH3)，23.7(CH2)，14.4(CH3)UV(MeOH，nm)λmax＝299MS FAB+(690.8g.mol-1)無[M+H]+，[M+Na]+＝713(2.5％)，[M+K]+＝729(1.5％)，[C12H25S]+＝201(65％)。
MS FAB-(690.8g.mol-1)[M-H]-＝689(很微弱)HPLC(Microsorb C18-21.4mm/250mm)tr＝11.4mint＝0到t＝5min，梯度從70MeOH-30H2O到85MeOH-15H2O從t＝5min開始恒溶劑85MeOH-15H2O流速0.6ml/min2.碳氟硝酮A4的合成a.1-疊氮基-2-甲基-2-硝基丙烷的合成 6g化合物E3(0.0218mol-1當量)和2.3g疊氮化鈉(0.0353mol-1.6當量)在超聲激活下(大號探針-1s脈沖/2s恢復-90％振幅)，在20mlDMF中反應，同時用冰浴冷卻介質(zhì)。經(jīng)過3小時聲波處理，起始化合物完全消失后，用50ml二氯甲烷吸收反應介質(zhì)，將其傾倒入300ml冰鹽水中同時劇烈攪拌。以50ml二氯甲烷萃取水相2次，之后合并有機相，用75ml鹽水洗兩次，經(jīng)過Na2SO4干燥，減壓下蒸發(fā)。在50℃下真空泵產(chǎn)生的真空下，除去殘留的痕量DMF后，得到黃色液態(tài)半透明油狀終化合物(2.66g-0.0185mol-85％)。
1H NMR(250MHz，CDCl3)δ3.74(2H，s，CH2-N3)，1.60(6H，s，叔丁基中的CH3)13C NMR(62.86MHz，CDCl3)δ86.7(CIV)，58.3(CH2-N3)，23.9(叔丁基中的CH3)紅外(KBr，cm-1)ν(N3)＝2111ν(NO2)＝1546b.2-甲基-2-硝基丙胺E4的合成 在氮氣流下，將4.08g疊氮化合物(0.0283mol-1當量)溶解在10ml無水并已脫氣的THF中。將溶解在30ml THF中的11.3g三苯膦(0.0431mol-1.50當量)逐滴加入疊氮化合物中。產(chǎn)生很強的氣體放出。在室溫于氮氣氛下攪拌兩小時后，加入20ml 2N氫氧化鈉水溶液并將介質(zhì)放置24小時。減壓下蒸發(fā)THF并加入20ml 3NHCl酸化水相至pH為1，然后以30ml乙酸乙酯萃取兩次。然后加入固體NaOH堿化水相至pH為10，之后以30ml二氯甲烷萃取3次。以30ml水洗有機相2次，經(jīng)過Na2SO4干燥，并減壓下蒸發(fā)。得到黃色油狀胺E4(2.90g-0.0245mol-87％)。
1H NMR(250MHz，CDCl3)δ3.07(2H，s，CH2-NH2)，1.57(6H，s，叔丁基中的CH3)13C NMR(62.86MHz，CDCl3)δ89.4(CIV)，51.1(CH2-NH2)，23.6(叔丁基中的CH3)考慮其不穩(wěn)定性，我們合成了相應的銨鹽酸鹽，以便對其表征和儲存用60ml乙醚吸收胺，向其中鼓入氣態(tài)HCl持續(xù)10分鐘。置反應介質(zhì)于-20℃持續(xù)2小時，然后減壓下過濾。以葉輪泵除盡溶劑后，得到E4的白色粉末狀銨鹽酸鹽(3.75g-0.0243mol-定量收率)1H NMR.(250MHz，D2O)δ3.62(2H，s，CH2-NH3+Cl-)，1.72(6H，s，叔丁基中的CH3)13C NMR(62.86MHz，D2O)δ87.0(CIV)，46.9(CH2-NH3+Cl-)，24.8(叔丁基中的CH3)紅外(KBr，cm-1)ν(NO2)＝1541c.4，4，5，5，6，6，7，7，8，8，9，9，9-十三氟壬酰(2-甲基-2-硝基丙基)酰胺E5a的合成 在氮氣氛下，將2.47g DCC(0.0120mol-1.2當量)和一匙尖HOBt溶解在10ml無水二氯甲烷中。將溶解在10ml二氯甲烷中的1.41g胺E4(0.012mol-1.2當量)加入介質(zhì)中。溶液脫氣幾分鐘后，將溶解在30ml乙酸乙酯中的3.86g氟酸(0.0098mol-1當量)全部同時加入。攪拌36小時后，過濾反應介質(zhì)，有機相分別以50ml 1N HCl和50ml鹽水各洗兩次，之后經(jīng)過Na2SO4干燥并減壓下蒸發(fā)。經(jīng)硅膠色譜法純化(洗脫劑環(huán)己烷/乙酸乙酯，8∶2至7∶3)，得到白色粉末狀化合物E5a(4.4g-8.94mol-91％)。M.p.＝87.3-88.8℃。Rf0.37(環(huán)己烷/乙酸乙酯，8∶2)。
1H NMR(250MHz，CDCl3)δ6.11(1H，大寬峰(massive)，NH)，3.76(2H，d，CHIV-CH2-NH，J＝6.75Hz)，2.55至2.42(4H，大寬峰，CH2-CH2-Rf)，1.58(6H，大寬峰，叔丁基中的CH3)13C NMR(62.86MHz，CDCl3)δ170.5(CO)，88.7(CIV)，46.1(CH2-NH-)，24.1(叔丁基中的CH3)19F NMR(235MHz，CDCl3)δ-81.1(CF3，單峰)，-114.8(CF2-CH2，單峰)，-122.1，-123.1，和-123.8(CF2，單峰)，-126.4(CF2-CF3)
紅外(KBr，cm-1)ν(NH)＝3280，ν(C-O)＝1664，ν(NO2)＝1547，ν(CF2)＝1246d.4，4，5，5，6，6，7，7，8，8，9，9，9-十三氟壬酰(2-羥胺基-2-甲基丙基)酰胺E5b的合成 實驗程序與用于第一個羥胺E7b的相同。將溶解在20mlTHF/MeOH混合物中的1.71g硝基化合物E7a(3.5mmol-0.25當量)加入140ml Kagan試劑中。
用硅膠色譜法處理和純化后(洗脫劑乙酸乙酯/甲醇，10∶0至9.5∶0.5)，得到白色粉末狀羥胺E7b(0.82g-1.7mmol-49％)。
同時回收得到0.56g起始化合物E7a，并由此可以確定轉(zhuǎn)化率為72％。M.p.＝110.5℃-112.3℃。Rf0.58(乙酸乙酯/甲醇，95∶5)。
1H NMR(250MHz，DMSO)δ7.79(1H，t，J＝6.0Hz，NH)，6.89(1H，s，NH)，5.23(1H，bs，OH)，3.05(2H，d，J＝6.0Hz，CH2-NH)，2.48(4H，m，CH2-CH2-Rf)，0.86(6H，s，叔丁基中的CH3)13CNMR(62.86MHz，DMSO)δ169.7(CO)，56.9(CIV)，44.7(CIV-CH2)，22.4(叔丁基中的CH3)19F NMR(235MHz，DMSO)δ-80.0(CF3，單峰)，-113.4(CF2-CH2，單峰)，-121.5，-122.5和-123.0(CF2，單峰)，-125.6(CF2-CF3，單峰)e.碳氟硝酮A4的合成 實驗程序與用于第一種硝酮的相同。
使0.61g乙醛(0.75mmol-1當量)和羥胺E7b(0.26g-0.7當量)在15ml THF中反應。攪拌10天，加入另外0.35g羥胺(0.732mmol-0.98當量)后，終止反應。
利用快速色譜法在硅膠(洗脫劑乙酸乙酯/甲醇，10∶0至95∶5)上以及利用排阻色譜法在LH-20樹脂(洗脫劑甲醇/二氯甲烷，1∶1)上進行純化。得到一純化合物硝酮A4(0.564g-0.443mmol-60％)，呈白色泡沫狀。還回收最初的乙醛(115mg-0.142mmol)，可確定轉(zhuǎn)化率為73％。M.p.＝95℃(分解)。
1H NMR(250MHz，CDCl3)δ8.21(2H，d，J＝8.1Hz)，7.49(1H，s，CH＝N(O))，7.31(2H，d，J＝8.1Hz)，6.95(1H，t，J＝6Hz，NH)，6.76(1H，t，J＝6Hz，NH)，5.45-3.80(15H)，3.69(2H，d，J＝6.0Hz，CIV-CH2-NH)，2.70-2.35(4H，m，CH2-CH2-Rf)，2.17，2.16，2.08，2.07，2.06，2.05，2.04，1.98(24H，8s，CH3-CO)，1.60(6H，s，叔丁基中的CH3)13C NMR(62.86MHz，CDCl3)δ170.6(CO-NH+CH3-CO)，170.4，170.2，170.1，170.0，169.8，169.7，169.3(CH3CO)，167.3(CO-NH)，140.6(CIV芳環(huán))，131.5(CH＝N(O))，129.8(CIV芳環(huán))，129.4，127.7(CH芳環(huán))，101.9(CH-1’)，77.5(CH-4)，73.4(CIV)，71.7(CH-2)，71.0(CH-5’和CH-3’)，70.0(CH-5)，69.3(CH-3)，69.1(CH-2)，66.9(CH-4’)，61.8，60.9(CH2-OAc)，47.3，43.1(CH2-NH)，27.0()，24.9(叔丁基中的CH3)，20.9，20.8，20.7，20.7，20.6，20.5(CH3-CO)19F NMR(235MHz，CDCl3)δ-81.1(CF3，s)，-115.0(CF2-CH2，s)，-122.3，-123.2，-123.9(CF2，s)，-126.5(CF2-CF3，s)MS FAB+(1272.0g.mol-1)[M+H]＝1273(1.5％)，[M+Na]＝1295(3.5％)使用Zemplen方法使糖脫乙酰后得到脫保護產(chǎn)物
M.p.＝150℃(分解)[α]D＝+14.4(0.25c，1，CH3OH)UV(MeOH，nm)λmax＝299Rf0.47(乙酸乙酯/甲醇/水，7∶2∶1)1H NMR(250MHz，CD3OD)δ8.33(2H，d，J＝8.4Hz)，7.86(1H，s，CH＝N(O))，7.47(2H，d，J＝8.5Hz)，4.65至4.45(4H，m，CH2-NH，H-1’，H-2’)，4.3(1H，m，H-3)，4.05至3.87(2H，m，H-4和H-5)，3.87至3.66(7H，m，CH2-OH，H-4’和CH2-NH)，3.66至3.45(3H，m，H-5’，H-3’和H-2’)，2.55至2.40(4H，m，CH2-CH2-Rf)，1.59(6H，單峰，叔丁基中的CH3)13C NMR(62.86MHz，CD3OD)δ174.0，171.9(CO-NH)，142.1(CIV芳環(huán))，134.6(CH＝N(O))，129.7(CH芳環(huán))，129.2(CIV芳環(huán))，126.9(CH芳環(huán))，104.4(CH-1’)，82.0(CH-4)，75.8(CH-5’)，73.5(CIV)，73.4(CH-3’或O’)，72.7(CH-2)，71.8(CH-5)，71.4(CH-3’或CH-2’)，71.2(CH-3)，69.0(CH-4’)，62.4(CH2-6)，61.3(CH2-6’)，46.3(CIV-CH2-NH)，42.1(CIV芳環(huán)，-CH2-NH)，26.0(CH2-CH2-Rf)，23.3(叔丁基的CH3)19F NMR(235MHz，CD3OD)δ-82.1(CF3，s)，-115.3(CF2-CH2，s)，-122.6，-123.6，-124.3(CF2，s)，-127.0(CF2-CF3，s)MS FAB+(935.7g.mol-1)[C13H13F13NO]+＝446(1％)，[C9H4F13O]+＝375(8％)MSFAB-(35.7g.mol-1)[M-H]＝934(非常弱)制備柱(Microsorb C18-21.4mm/250mm)tr＝9.800
從t＝0到t＝5min，梯度從70甲醇-30水到80甲醇-20水從t＝5到t＝8min，梯度從80甲醇-20水到82甲醇-18水從t＝8min起，恒溶劑，82甲醇-18水流速，0.8ml/min3.離子烴基硝酮B1的合成a.[4-(1，3-二氧戊環(huán))-2-基-苯甲基]三甲基碘化銨的合成 在封閉管中將1.25g胺E15(7mmol-1當量)溶解在4ml DMF中。然后全部同時加入2.58g三丁胺(14mmol-2當量)同時攪拌。使該介質(zhì)冷卻至0℃，然后緩慢加入5.2g甲基碘(35mmol-5當量)。蓋上封閉管，室溫下繼續(xù)攪拌24小時。然后AcOEt吸收粗反應混合物，濾除產(chǎn)生的沉淀，再乙醚吸收然后再次過濾。得到白色粉末狀銨化合物(1.7g-4.9mmol-70％)。
1H NMR(250MHz，DMSO-d6)δ7.59(4H，s，H芳環(huán))，5.80(H，s，縮醛中的H)，4.61(2H，s，CH2-NH)，4.2到3.9(4H，AA’BB’，CH2-O)，3.06(9H，s，CH3-N)13C NMR(62.86MHz，DMSO-d6)δ140.6(CIV芳環(huán))，133.3(CH芳環(huán))，129.6(CIV芳環(huán))，127.5(CH芳環(huán))，102.7(CH縮醛)，67.6(CH2-N)，65.4(CH2-O)，52.2(CH3-N)百分比分析(C13H20NO2I，0.83H2O)，計算值C41.69，H4.60，N4.42，實測值C41.69，H4.58，N4.31。
b.(4-甲?；郊谆?三甲基碘化銨E26的合成
將0.38g二氧戊環(huán)胺(1.08mmol-1當量)溶解在10ml乙酸/水1∶1混合物中。攪拌12小時后，反應介質(zhì)在真空下蒸發(fā)，并用葉片泵去除痕量溶劑。得到深棕色粉末狀化合物E26(0.34g-1.08mmol-定量收率)。
1H NMR(250MHz，DMSO-d6)δ10.12(1H，s，CHO)，8.06(2H，d，J＝8Hz，H芳環(huán))，7.80(2H，d，J＝8Hz，H芳環(huán))，4.69(2H，s，CH2-NH)，3.09(9H，s，CH3-N)13C NMR(62.86MHz，DMSO-d6)δ193.4(CHO)，137.6，134.8(CIV芳環(huán))，134.1，130.2(CH芳環(huán))，62.2(CH2N)，52.6(CH3N)c.離子碳氟硝酮B2的合成 將0.25g化合物E26(0.82mmol-1當量)和0.48g羥胺E7b(1.02mmol-1.25當量)溶解在5ml吡啶中，吡啶事先用氬脫氣。將反應介質(zhì)加熱到80℃，在黑暗中氬氣氛下保持42小時。然后反應混合物在減壓下蒸發(fā)，并用葉片泵去除痕量溶劑。經(jīng)過在甲醇/乙醚混合物中二次連續(xù)結(jié)晶后，得到白色粉末狀硝酮(0.35g-0.47mmol-57％)。M.p.＝171-173。
1H NMR(250MHz，CD3OD)δ8.54(2H，d，J＝8.4Hz，H芳環(huán))，8.03(1H，s，CH＝N(O))，7.71(2H，d，J＝8.4Hz，H芳環(huán))，4.65(2H，s，CH2-N)，3.18(11H，s，CH3-N+CIV-CH2-S)，2.7(2H，m，CH2-S)，2.45(2H，m，CH2-CH2-Rf)，1.71(6H，s，叔丁基的CH3)13C NMR(62.86MHz，CD3OD)δ133.3(CIV芳環(huán))，132.8(CH＝N(O))，132.7(CH芳環(huán))，129.8(CIV芳環(huán))，129.7(CH芳環(huán))，73.9(CIV)，68.5(CH2-N)，51.9，51.9，51.8(CH3-N)，41.3(CH3-S)，31.9(CH2-CH2-Rf)，24.6(叔丁基的CH3)，23.0(CH2-CH2-Rf)19F NMR(235MHz，CD3OD)δ-82.3(CF3，單峰)，-115.2(CF2-CH2，單峰)，-112.9，-123.9，-124.3(CF2，單峰)，-127.3(CF2-CF3，單峰)UV(MeOH，nm)λmax＝304nmHR MS FAB+(754.4g.mol-1)理論值m/z對于C23H29F13IN幽佑幽為755.0838([M+H]+)實測值m/z755.0851MS FAB+(754.4g.mol-1)[2M+H]+＝1510，[2M-I]+＝1381(5％)，[M+H]+＝755(2.5％)，[M-I]+＝627(100％)，[C12H12F13S]+＝435(100％)4.雙鏈線烴基硝酮C1的合成a.3-十七烷基氨基甲酰氧基-2-甲基-2-硝基丙基十七烷基氨基甲酸酯E9a的合成 將6.31g硬脂酸(0.022mol-3當量)在氬氣氛下懸浮于50ml無水甲苯中。加入2.47g三乙胺(0.024mol-3.3當量)和6.71g二苯磷?；B氮化物(0.024mmol-3.3當量)，并將介質(zhì)加熱到60℃。攪拌2小時后，在混懸液中加入1g 2-硝基-2-甲基-1，3-丙二醇(0.0074mol-1當量)和1匙尖DABCO，并繼續(xù)攪拌12小時。用100ml乙酸乙酯稀釋粗反應混合物，再用50ml 1N HCl洗三遍并用50ml飽和的NaHCO3洗三遍，最后用50ml鹽水洗兩遍。有機相經(jīng)過Na2SO4干燥并在減壓下蒸發(fā)。經(jīng)過三次連續(xù)結(jié)晶后，得到白色粉末狀化合物E9a(2.02g-2.89mmol-40％)。.M.p.＝75-76.2℃。
Rf0.42(環(huán)己烷/乙酸乙酯，8∶2)1H NMR(250MHz，CDCl3)δ4.77(2H，m，NH)，4.45(2H，AB系統(tǒng)，CH2-O)，3.15(2H，q，J＝9.8Hz，CH2-NH)，1.59(3H，s，叔丁基的CH3)，1.47(2H，m，CH2-CH2-NH)，1.24(55H，m，鏈中的CH2)，0.87(3H，t，鏈中的CH3)13C NMR(62.86MHz，CDCl3)δ155.1(CO)，88.1(CIV)，65.1(CH2-O)，41.3(CH2-NH)，31.9，29.8，29.7，29.6，29.5，29.4，29.3(鏈中的CH2)，26.7(叔丁基中的CH3)，22.7，18.5(鏈中的CH2)，14.1(鏈中的CH3)紅外(KBr，cm-1)ν(NH)-3392，ν(CO)-1720和1703，ν(NO2)＝1549b.十七烷基氨基甲酰3-十七烷基氨基甲酰氧基-2-羥氨基-2-甲基丙基酯E9b的合成 實驗程序與用于合成化合物E5b和E7b的相同。
將溶解在20ml THF/甲醇混合物中的1.39g硝基化合物E9a(2.0mmol-0.25當量)加入到80ml Kagan試劑中。
用硅膠色譜法(洗脫劑二氯甲烷/乙酸乙酯，從10∶0到5∶5)處理和純化之后，得到白色粉末狀羥胺E9b(0.8g-1.17mmol-60％)。
還回收0.24g起始化合物E9a，并由此可得出轉(zhuǎn)化率為71％。M.p.＝80-81.6℃。
Rf0.51(環(huán)己烷/乙酸乙酯，5∶5)1H NMR(250MHz，CDCl3)δ4.83(2H，t，J＝NH)，4.45(4H，AB系統(tǒng)，CH2-O)，3.17(4H，q，J＝9.8Hz，CH2-NH)，1.49(2H，m，CH2-CH2-NH)，1.25(55H，m，鏈中的CH2)，1.07(3H，s，叔丁基中的CH3)，0.88(3H，t，鏈中的CH3)13C NMR(62.86MHz，CDCl3)δ156.7(CO)，88.1(CIV)，64.7(CH2-O)，41.2(CH2-NH)，31.9，29.8，29.7，29.6，29.5，29.4，29.3(鏈中的CH2)，26.8(叔丁基中的CH3)，22.7，16.8(鏈中的CH2)，14.1(鏈中的CH3)c.雙觸角烴基硝酮C1的合成 在4分子篩和0.3g羥胺E9b(0.44mmol-0.71當量)存在下，將0.5g乙醛E20(0.616mmol-1當量)溶解在6ml無水并脫氣的THF中。在氬氣氛并避光下，加入1.2ml冰乙酸，并將介質(zhì)加熱到50℃。
48小時和96小時后加入0.2g羥胺(0.29mmol-0.47當量)，并在反應5天結(jié)束時用硅藻土過濾反應介質(zhì)。
利用快速色譜法在硅膠(洗脫劑；乙酸乙酯/二氯甲烷，從7∶3到8∶2)上和排阻色譜法在Sephadex LH-20樹脂(洗脫劑乙醇/二氯甲烷，1∶1)上進行純化，使可得到幾乎不含痕量乙醛的白色粉末狀C型硝酮(0.58g-0.392mmol-63％)。還回收到80mg純乙醛，并可得出轉(zhuǎn)化率為76％。在20℃下[α]D＝+16.9°(c，1，CHCl3)。
Rf0.37(乙酸乙酯/二氯甲烷，8∶2)
1H NMR(250MHz，CDCl3)δ8.28(2H，d，J＝8.1Hz，H芳環(huán))，7.45(1H，s，CH2＝N(O))，7.31(2H，d，J＝8.5Hz，H芳環(huán))，6.65(1H，t，J＝5.8Hz，NH酰胺)，5.75到5.55(2H，m，H-2和H-3)，5.35(1H，d，J＝3Hz)，5.25到4.80(5H，m，H-2’，H-5，H-3’和NH氨基甲酸酯)，4.70到4.25(9H，m，H-1’，H-6a和H-7a，H-4，H-7b和CH2-O-CO-NH)，4.20到3.80(4H，m，H-6b，H-6’a，H-6’b和H-5’)，3.14(4H，dd，J＝6.7Hz，CH2-NH-CO-O)，2.16，2.15，2.09，2.05，2.04，1.98，1.92(24H，8s，CH3-CO)，1.60(3H，s，叔丁基中的CH3)，1.55到1.10(60H，m，鏈中的CH2)，0.87(6H，t，J＝6.4Hz，鏈中的CH3)13C NMR(250MHz，CDCl3)δ170.6，170.3，170.2，170.0，169.9，169.8，169.4，(CH3-CO)，167.3(CO-NH)，155.7(O-CO-NH)，140.3(CIV芳環(huán))，132.4(CH＝N(O))，130.0(CIV或CH芳環(huán))，129.6(CIV或CH芳環(huán))，127.8(CH芳環(huán))，101.9(CH-1’)，77.4(CH-4)，75.1(CIV)，71.7(CH-2)，71.1(CH-5’和CH-3’)，69.9(CH-5)，69.3(CH-3)，69.1(CH-2)，66.9(CH-4’)，65.5(CH2-O-CO-NH)，61.8和61.0(CH2-OAc)，43.2(CH2-NH)，41.3(CH2-NH-CO-O)，32.0，29.9，29.8，29.7，29.7，29.6，29.4，29.3，(鏈中的CH2)，26.8(叔丁基中的CH3)，22.8(鏈中的CH2)，20.9，20.9，20.8，20.7，20.7，20.6(CH3-CO)，14.2(鏈端CH3)MS FAB+(1477.8g.mol-1)[M+H]＝1478(16％)，[M+Na]＝1500(6％)。
通過Zemphen方法使糖脫乙酰后得到脫保護產(chǎn)物
通過快速色譜法在硅膠(洗脫劑氯仿/甲醇/水，8∶2∶0.1)上并之后通過尺寸排阻色譜法在Sephadex LH-20樹脂(洗脫劑二氯甲烷/甲醇，7∶3)上純化硝酮C1。D＝+7.6°(0.25c，1，CHCl3)Rf0.28(氯仿/甲醇/水，8∶2∶0.1)M.p.＝190℃(分解)1H NMR(250MHz，DMSO-d6)δ8.28(2H，d，J＝8.2Hz，H芳環(huán))，8.07(1H，t，J＝6.3Hz，NH酰胺)，7.72(1H，s，CH2＝N(O))，7.35(2H，d，J＝8.3Hz，H芳環(huán))，7.08(2H，m，NH氨基甲酸酯)，4.60到4.00(9H，m，CH2-NH，CH2-O-CO-NH，H-1’，H-2和H-3)，3.78(2H，m，H-4和H-5)，3.70到3.40(8H，m，CH2-OH，H-2’，H-3’，H-4’和H-5’)，2.94(4H，m，CH2-NH-CO-O)，1.54(3H，s，叔丁基中的CH3)，1.45到1.10(60H，m，CH2)，0.87(6H，t，J＝6.6Hz，CH3)13C NMR(62.86MHz，DMSO-d6)δ173.0(CO-NH)，156.1(O-CO-NH)，142.3(CIV芳環(huán))，132.1(CH＝N(O))，130.0(CIV芳環(huán))，129.1(CH芳環(huán))，127.2(CH芳環(huán))，105.1(CH-1’)，83.4(CH-4)，76.2(CH-5’)，74.9(CIV)，73.7(CH-3’或CH-2’)，72.6(CH-2)，71.9(CH-5)，71.6(CH-3’或CH-2’)，71.1(CH-3)，68.7(CH-4’)，65.1(CH2-O-CO-NH)，62.8，61.1(CH-6和CH-6’)，42.2(CH2-NH)，40.7(CH2-NH-CO-O)，31.8，29.8，29.6，29.2(鏈中的CH2)，26.7(叔丁基中的CH3)，22.6(鏈中的CH2)，14.4(鏈中的CH3)
MS FAB+(1140.77g.mol-1)[M+Na]＝1164，[M+H]＝1142III-本發(fā)明分子的疏水性的測定本發(fā)明的目的之一是調(diào)節(jié)自由基捕獲劑的HLB值以促進體內(nèi)跨膜通路和轉(zhuǎn)運。
從這一觀點看，測定這些化合物的分配系數(shù)P是重要的。
因此，在對依賴于它們的疏水性的不同安眠藥作用功效的研究中，Hansch和他的同事(Hansch，C.；Steward，A.R.；Anderson，S.M.；Bentley，D.J.Med.Chem.11，1(1968))建立了如下關系log1/C＝-k(log P)2+k’(log P)+k”C產(chǎn)生標準生物學應答的摩爾濃度k、k’和k”用最小二乘法測定的常數(shù)。
因此，一個化合物疏水性越強，log P值將越大于0，與脂質(zhì)相的相互作用也將增大。
我們已經(jīng)用反向高效液相色譜法測定了這些硝酮的分配系數(shù)(Lambert，W.J.J.Chromtogr.656，469(1993)；Dorsey，J.G.；Kahaledi，M.G.J.Chromtogr.656，485(1993))。
Thomas也用這種色譜方法測定自PBN衍生的環(huán)狀自旋捕獲劑的疏水性(Fevig，T.L.；Bowen，S.M.；Janowick，D.A.；Jones，B.K.；Munson，H.R.；Ohlweiler，D.F.；Thomas，C.E.J.Med.Chem.39，4988(1996)。利用反相HPLC對辛醇/水分配系數(shù)(Kow)的估測高度地取決于化合物的保留時間，因此取決于容量系數(shù)k’。其可以用如下關系表示Log Kow＝a log k’+b其中a和b為表征溶劑系統(tǒng)的經(jīng)驗常數(shù)。
實驗上，對于不同的甲醇/水洗脫劑混合物，k’由以下公式求出。
k’＝(tR-t0)/t0其中tR代表樣品的保留時間，t0代表流動相的洗脫時間。
然后需要通過線性回歸外推得100％水相的k’值以便得到kw值。
我們已經(jīng)用這種方法進行了自乳糖酸衍生的A型化合物。為了比較和證實我們的模型，我們還測定了PBN和TA1PBN的疏水性。
表3概括了用建立在最少不同的兩天的最少3個值得到的平均保留時間。
依賴于所采用的流動相得到的k值的線性回歸使可得到該類型的直線方程y＝ax+b其中y代表logk’，a代表logk’w并且x代表洗脫劑中甲醇所占分數(shù)。
表3用HPLC測定logk’值我們用相同的方式進行了其它4種衍生物的測定，結(jié)果概括在下表(表4)中。
表4用HPLC測定logk’w值為了清楚考慮，我們將不同硝酮的k’w值轉(zhuǎn)換為直方圖(圖11)。
根據(jù)得到的結(jié)果使我們作出下列幾點評論和結(jié)論1-對于有烴鏈的化合物，得到的值與我們的期望值一致。疏水性的量值與鏈中的碳原子數(shù)成正比例。另一方面，鏈連結(jié)點的性質(zhì)對logk’值所起的作用不是不重要的，酰胺或氨基甲酸酯鍵本質(zhì)上比硫醚連結(jié)點極性大。因此得到下列疏水性遞增的順序A5＜A1＜A22-對于氟化化合物，化合物A3顯示出對脂質(zhì)介質(zhì)比化合物A4有更強的親合力，這一結(jié)果看起來與它們各自的CMC值一致。不過，化合物A3和A4具有相近的logk’w值，但它們的CMC值變化二倍以上。這是因為氟化鏈顯示出不尋常的表面活性劑特性的性質(zhì)所致。所以有必要對表面活性劑活性概念和疏水性概念作出明確的區(qū)分。因此得到以下疏水性遞增的順序A5＜A1＜A2＜A4＜A33-PBN的logk’w值比所有合成的化合物的值略低。根據(jù)Hansch理論，由此我們可以推論這些化合物有更強的跨膜滲透性，并因此有更強的捕獲自由基活性。
4-TA1PBN的logk’w值大體與化合物A3的相同。
權利要求
1.一種化合物，特征在于其相應于式(I) 其中X代表選自以下的親水性基團單糖或多糖以及單糖和多糖的氨基衍生物、聚環(huán)氧乙烷鏈、肽鏈、選自季銨、氧化胺或肉堿基團的極性離子基團；m代表等于1、2或3的整數(shù)；Y代表用于連接芳核和親水性X取代基的間隔臂；Y選自酯、酰胺、脲、氨基甲酸酯、醚、硫醚和胺官能團，和任選被一個或多個酯、酰胺、脲或氨基甲酸酯官能團和被一個或多個醚、胺或硫醚橋間斷的C1-C6烴鏈；y代表等于0或1的整數(shù)；Y’代表選自酯官能團、酰胺官能團、脲官能團、氨基甲酸酯官能團、醚橋或硫醚橋的基團；m’是選自1和2的整數(shù)；X’代表氫原子或任選被一個或多個氟原子取代的C4-C14烷基鏈。
2.根據(jù)權利要求1的化合物，其特征在于X代表選自以下的基團葡萄糖、乳糖、果糖、甘露糖、半乳糖、核糖、麥芽糖、葡糖胺、蔗糖和乳糖酰胺。
3.根據(jù)權利要求1的化合物，其特征在于X代表選自包含30到100個環(huán)氧乙烷單元，優(yōu)選50到60個單元的聚環(huán)氧乙烷鏈的基團。
4.根據(jù)權利要求1的化合物，其特征在于X代表選自以下的基團
5.根據(jù)權利要求1的化合物，其特征在于滿足下列條件中至少一個X代表選自以下的基團乳糖酰胺、肉堿或者聚氧乙烯鏈；m代表1；m’代表1或2；X’為選自基團辛基、癸基、十二烷基和CF3(CF2)rCH2CH2-，其中8≥r≥6。
6.一種權利要求1至5任意一項的相應于式(I)的化合物的制備方法，所述方法的特征在于根據(jù)以下路線2，使相應于式(II)的醛和相應于式(III)的羥胺反應 路線2
7.根據(jù)權利要求6的方法，其特征在于根據(jù)以下路線3所描述的方法制備式(III)的化合物 路線3
8.一種藥物組合物，其包含在藥物學可接受的賦形劑中的至少一種權利要求1至5任意一項的相應于式(I)的化合物。
9.權利要求1至5任意一項的相應于式(I)的化合物用于制備用于預防和/或治療自由基作用的藥物的用途。
10.權利要求1至5任意一項的相應于式(I)的化合物用于制備用于預防或治療與氧化應激和含氧自由基物質(zhì)形成相關的病理狀況的藥物的用途。
11.根據(jù)權利要求10的用途，用于預防或治療選自以下的病理狀況免疫和炎癥性疾病、缺血—再灌注綜合征、動脈粥樣硬化、阿爾茨海默氏病和帕金森氏病、紫外線和離子輻射引起的損傷、亨廷頓氏病、癌癥和細胞老化。
12.一種化妝品組合物，其特征在于所述化妝品組合物包含在化妝品可接受的賦形劑中的至少一種權利要求1至5任意一項的相應于式(I)的化合物。
13.一種用于預防和/或治療老化作用的化妝品治療方法，其特征在于將權利要求12的組合物施用于皮膚或表皮附件。
14.權利要求1至5任意一項的相應于式(I)的化合物作為自由基反應中的自由基捕獲劑在有機合成中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及新型化合物α－C－苯基－N－叔丁基硝酮衍生物，其制備方法以及它們用于制備預防或治療與氧化應激相關的疾病的藥物的用途。
文檔編號A61K8/60GK1738827SQ200380108516
公開日2006年2月22日 申請日期2003年11月7日 優(yōu)先權日2002年11月8日
發(fā)明者格雷戈里·迪朗, 安格·波利多里, 貝爾納·普奇 申請人:Ts 制藥公司, 阿維尼翁大學