專利名稱：地榆總皂苷提取物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥提取物及其制備方法和用途，具體地說(shuō)，涉及一種地榆總皂苷提取物及其制備方法，以及它在制備治療或預(yù)防人白細(xì)胞減少癥的藥物制劑中的用途。
背景技術(shù)：
從世界人口譜、疾病譜來(lái)看，腫瘤對(duì)于人類健康危害極大，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，而其死亡率則居眾多疾病之首位。在腫瘤的治療方法中，以放療、化療為主的藥物綜合治療仍然是目前腫瘤治療的主要手段和方法。然而放療、化療自身存在難以克服的明顯毒副作用，主要毒副作用首先是骨髓造血功能的抑制，表現(xiàn)為外用血白細(xì)胞及血小板的明顯降低，這一毒副作用嚴(yán)重制約放、化療順利進(jìn)行和療效發(fā)揮。
目前針對(duì)放化療所導(dǎo)致白細(xì)胞減少癥主要采用各類藥物治療，包括各種中藥制劑，如人參、當(dāng)歸、黃芪、阿膠、白術(shù)、補(bǔ)骨脂、刺五加枸杞子等組成的單味及復(fù)方制劑[中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志.2001，8(5)18]；西藥制劑，如鯊肝醇、白血生、利血生、肌苷、維生素B4(新編藥物學(xué).人民衛(wèi)生出版社.14版，402)，但上述中、西藥物的臨床療效都較為有限。近年來(lái)，新的生物制劑如粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)，粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)開(kāi)始應(yīng)用于臨床，其升白作用顯著，但價(jià)格昂貴。目前，針對(duì)腫瘤放、化療所致的白細(xì)胞減少癥，以及其他原因引起的白細(xì)胞減少癥，臨床仍然缺乏療效顯著、價(jià)格低廉、使用方便的治療藥物。
地榆屬Sanguisorba I..系薔薇科多年生草本植物，生長(zhǎng)在山地灌木叢、草原、山坡、田岸。我國(guó)有7種，南北均有分布，主要品種有地榆Sanguisorba officinalis，長(zhǎng)葉地榆S.longifolia，矮地榆S.filiformis，小白花地榆S.parviflora，細(xì)葉地榆S.tenuifolia，小地榆S.minor，高山地榆S.alpinaBge.，白花地榆S.sitchensis。據(jù)2000版《中國(guó)藥典》(一部)和《中華本草》(上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999年9月第1版，第四卷.281)記載，中藥地榆為薔薇科植物地榆(Sanguisorba officinalis L.)或長(zhǎng)葉地榆(Sanguisorba officinalis L.var.Longifolia(Bettol.)Yüet Li)的根。全國(guó)大部分地區(qū)均產(chǎn)，春秋季采挖，除去地上莖葉，洗凈曬干。其根呈圓柱形，略扭曲狀彎曲，表面棕褐色，具明顯縱皺。質(zhì)堅(jiān)，稍脆，折斷面平整，略具粉質(zhì)。氣微，味微苦澀。地榆為常用中藥，其功能主治為涼血止血，清熱解毒，消腫斂瘡。主治吐血、咯血、衄血、尿血、便血、痔血、血痢、崩漏、赤白帶下、瘡癰腫痛、濕疹、陰癢、水火燙傷、蛇蟲咬傷。
現(xiàn)代研究表明，地榆主要含多種鞣質(zhì)、三帖及其苷、黃酮類、糖類和無(wú)機(jī)微量元素，其中含鞣質(zhì)達(dá)17-25％，皂苷2.5-4％[地榆屬植物研究進(jìn)展.中草藥.1996，27(增刊)213；中藥化學(xué).上海人民出版社.1975]。地榆具有止血、抗炎、促進(jìn)傷口愈合、抗菌、鎮(zhèn)吐等多方面藥理活性，毒理研究表明地榆水提液及醇提液的毒性極小。進(jìn)一步研究已發(fā)現(xiàn)，地榆所含鞣質(zhì)及多元酚具有較強(qiáng)的止血作用，但現(xiàn)有研究對(duì)地榆皂苷類成分及其活性研究較少，尚無(wú)地榆總皂苷提取物及其治療白細(xì)胞減少癥的有關(guān)文獻(xiàn)記載或研究報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有的治療白細(xì)胞減少癥治療藥物的缺陷，本發(fā)明提供一種具有升高白細(xì)胞作用的地榆總皂苷提取物及其制備方法，該提取物可作為升白藥物應(yīng)用于人類白細(xì)胞減少癥的治療及預(yù)防。
本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種地榆總皂苷提取物，其含有地榆總皂苷，其重量百分比為10～90％。更進(jìn)一步，其含有重量百分比為40～90％的地榆總皂苷。
本發(fā)明所述的地榆總皂苷提取物中，含有一種或幾種具有以下化學(xué)結(jié)構(gòu)的三萜類皂苷
地榆皂苷-I3-O-α-L-阿拉伯糖基-19α-羥基烏索-12烯-28-羧酸-28-O-B-D-葡萄糖基酯(ziyu-glycoside I)。
地榆皂苷-II19α-羥基烏索-12烯-28-羧酸-3-α-O-L-阿拉伯糖苷(ziyu-glycoside II)。
3β[(α-L-阿拉伯糖)羥基]烏索-12，19(29)-二烯-28-羧酸-28-O-β-D-葡萄糖基。

2α，3α，19α-三羥基烏索-12烯-28-羧酸-28-O-β-D-葡萄糖基酯。
所述的地榆總皂苷提取物，是由地榆屬(Sanguisorba)植物提取獲得的。更具體的，是從地榆[Sanguisorba officinalis L.]或長(zhǎng)葉地榆[Sanguisorba officinalis L.var.Longifolia(Bettol.)Yüet Li]中提取獲得，最優(yōu)選的提取物是自中藥地榆提取獲得的。
本發(fā)明還提供上述地榆總皂苷提取物的制備方法，包括以下步驟a、將原藥材經(jīng)過(guò)適當(dāng)粉碎后，用水、甲醇或乙醇，或含水醇類，室溫或加熱(包括回流)提取1～3小時(shí)，可重復(fù)提取1～3次，然后濾去藥渣，濾液在常壓或減壓下濃縮至一定濃度，靜置備用。
b、將上述提取濃縮液用聚酰胺柱吸附，然后用濃度為30-90％的乙醇洗脫柱子，洗脫液減壓回收后，可重復(fù)用聚酰胺柱吸附1～3次，得浸膏，經(jīng)真空或冷凍干燥成干粉。
其中，提取溶劑以50～90％乙醇溶液較好。乙醇溶液用量為藥材重量的6～12倍，8倍為佳。洗脫液為60～90％乙醇，以70％為佳。以上制備的干粉，為淺黃色固體物質(zhì)，味微苦。其中所含總皂苷為總重量的10％～90％。
以上制備的干粉，即地榆總皂苷提取物，為淺黃色固體物質(zhì)，味微苦。其中所含地榆總皂苷為總重量的10％-90％。地榆總皂苷提取物參照文獻(xiàn)[Triterpene glycosides from the roots Sanguisorbaofficindis，Phytochenistry，57(5)，773-779，2001]可分離鑒定和制備得到地榆皂苷-I3-O-α-L-阿拉伯糖基-19α-羥基烏索-12烯-28-羧酸-28-O-β-D-葡萄糖基酯(ziyu-glycoside I)；地榆皂苷-II19α-羥基烏索-12烯-28-羧酸-3-α-O-L-阿拉伯糖苷(ziyu-glycosideII)；3β[(α-L-阿拉伯糖)羥基]烏索-12，19(29)-二烯-28-羧酸-28-O-β-D-葡萄糖基；2α，3α，19α-三羥基烏索-12烯-28-羧酸-28-O-β-D-葡萄糖基酯等多種皂苷成分。
上述地榆總皂苷提取物，用于制備治療或預(yù)防人白細(xì)胞減少癥的藥物制劑中，該藥物制劑中含有上述地榆總皂苷或?yàn)楹械赜芸傇碥盏膹?fù)方，即配伍有其他升高白細(xì)胞的西藥或中藥活性成分。所述制劑是口服片劑、膠囊、口服液或注射液。
①片劑包括普通片、薄膜片、腸溶片等。用上述總皂苷干粉，加入適量稀釋劑如淀粉、糊精、甘露醇、微晶纖維等，適量的粘合劑如水、乙醇、淀粉漿、明膠、纖維素等，適量的崩解劑如干淀粉、羧甲基淀粉鈉、海藻酸鈉等，以及適量的潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂、滑石粉、聚乙二醇等，按常規(guī)濕法制粒，干燥后整?；蚋煞ㄖ屏：髩浩?。如是包薄膜衣片，可用成膜材料如纖維素類、聚乙二醇類等，按常規(guī)包衣，分裝入密閉瓶或鋁塑板中。
②膠囊劑包括普通膠囊劑、腸溶膠囊劑等。將上述總皂苷干粉加入適量輔料如淀粉、碳酸鈣、甘露醇、氧化鎂、微粉硅膠等，適量潤(rùn)滑劑如滑石粉、硬脂酸鎂、乙二醇酯，聚硅酮類等，以及適量的黏合劑如礦物油、食油等，混合成干粉或制成顆粒，填充入膠囊，分裝如密閉鋁塑包裝中。以上各劑型可加入適量甜味劑，如D-木糖，木糖醇、麥芽糖醇、甜葉菊素、天冬甜母等。
③口服液口服液制備過(guò)程中，用上述地榆總皂苷干粉加入藥用添加劑，如懸浮劑(如山梨醇糖漿、纖維素衍生物、葡萄糖/蔗糖糖漿、明膠、硬脂酸鋁膠或氫化食用脂肪)；乳化劑(例如卵磷脂、阿拉伯膠或失水山梨醇-油酸酯)；非水載體(例如杏仁油、油狀酯、乙醇或精煉植物油)；以及防腐劑(例如對(duì)羥基苯甲酸甲酯或?qū)αu基苯甲酸丙酯或山梨酸)。根據(jù)需要，液體制劑還可以含有已知的緩沖劑、矯味劑和芳香成分、染料和甜味劑。
④注射液用上述地榆總皂苷干粉，加入藥用輔劑，如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑和/或調(diào)節(jié)溶液滲透壓的試劑，可配制成注射劑，優(yōu)選肌肉、靜脈注射液。
本發(fā)明還提供一種藥物組合物，其含有權(quán)利要求1至6所述的地榆總皂苷提取物，或者含有權(quán)利要求1至6所述的地榆總皂苷提取物與其他升高白細(xì)胞的西藥或中藥活性成分配伍成的復(fù)方。
按照本發(fā)明，可以將上述地榆總皂苷提取物與其他中藥和/或其他化學(xué)藥物共同組成中藥復(fù)方或中西藥復(fù)方制劑，并按照常規(guī)方法制成口服片劑、膠囊、口服液、注射液等多種劑型。
本發(fā)明的有益效果是由于地榆總皂苷提取物具有良好的升高白細(xì)胞作用，可將其制成口服片劑、膠囊等多種劑型，適用于不明原因的原發(fā)性白細(xì)胞減少癥，尤其是腫瘤放、化療引起白細(xì)胞減少癥，以及其他藥物所致白細(xì)胞減少癥的治療，具有療效顯著、價(jià)格低廉、使用方便等優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)。
顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1地榆總皂苷提取物的制備地榆1000g，粉碎后加70％乙醇溶液8L，加熱回流提取1.5小時(shí)，濾渣再加6L70％乙醇溶液，加熱回流提取1小時(shí)，過(guò)濾。合并兩次濾液，濃縮至一定濃度，靜置備用。取聚酰胺裝柱，將上述提取液用聚酰胺柱吸附，然后用濃度為70％的乙醇洗脫柱子，收集洗脫液，洗脫液減壓回收乙醇得浸膏后，加水加熱溶解，再重復(fù)用聚酰胺柱吸附1次，最后得浸膏，真空干燥成干粉，得24g地榆總皂苷提取物，其地榆總皂苷含量為總重量的55％。
實(shí)施例2地榆總皂苷提取物對(duì)60Co-γ所致小鼠骨髓損傷的保護(hù)作用昆明種小鼠60只，雌雄各半，分為6組正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、地榆總皂苷提取物(為實(shí)施例1所得地榆總皂苷提取物)高、中、低劑量組，鯊肝醇組。以上6組動(dòng)物，除正常對(duì)照組動(dòng)物外，其余5組動(dòng)物均在給藥前1天用60Co-γ射線照射一次，劑量為4Gy，24小時(shí)后再隨機(jī)分為5組，除正常對(duì)照組和模型對(duì)照組灌胃蒸餾水0.4ml/只，其余各組按不同劑量灌胃給藥，每日1次，連續(xù)7日。末次給藥24小時(shí)，拔除小鼠眼球取血，檢測(cè)血中WBC(白細(xì)數(shù)總數(shù))、RBC(紅細(xì)胞數(shù))、PLT(血小板數(shù))，結(jié)果見(jiàn)表1。
表1地榆總皂苷提取物對(duì)60Co照射損傷小鼠血液學(xué)的影響(X±SD)

注模型組與正常對(duì)照組比較，ΔΔp＜0.01藥物治療組與模型組比較，*p＜0.05，**p＜0.01表1結(jié)果顯示，地榆總皂苷提取物各劑量與模型對(duì)照組比較有極顯著性或顯著性差異，即地榆總皂苷提取物對(duì)60Co-γ照射所致外用血白細(xì)胞減少有明顯保護(hù)作用，大、中劑量組療效優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照藥鯊肝醇組。實(shí)施例3地榆總皂苷提取物對(duì)環(huán)磷酰胺致小鼠白細(xì)胞減少的治療作用昆明種小鼠67只，雌雄各半，隨機(jī)分為6組，即正常對(duì)照組，環(huán)磷酰胺模型對(duì)照組(Cy組)，Cy+地榆總皂苷提取物(為實(shí)施例1所得地榆總皂苷提取物)高、中、低劑量組，Cy+鯊肝醇組。除正常對(duì)照組外，其余各組小鼠均腹腔注射環(huán)磷酰胺(Cy)150mg/kg造成白細(xì)胞減少癥模型。于注射Cy當(dāng)日開(kāi)始按正常組和Cy模型對(duì)照組分別按20ml/kg給予蒸餾水。其余各組按不同劑量分別給予不同藥物，每日1次，灌胃給藥，連續(xù)10天。末次給藥后24小時(shí)后，摘眼球取血，并檢測(cè)血中白細(xì)胞總數(shù)WBC，結(jié)果見(jiàn)表2。
表2結(jié)果顯示，地榆總皂苷提取物各劑量與模型對(duì)照組比較有極顯著性或顯著性差異，即地榆總皂苷提取物對(duì)環(huán)磷酰胺所致外周血白細(xì)胞減少有明顯保護(hù)作用。
表2地榆總皂苷對(duì)環(huán)磷酰胺致小鼠白細(xì)胞減少的影響(X±SD)

注模型組與正常對(duì)照組比較，ΔΔp＜0.01藥物治療組與模型組比較，*p＜0.05，**p＜0.01通過(guò)以上藥理實(shí)驗(yàn)可以證明，本發(fā)明的地榆總皂苷提取物，對(duì)骨髓損傷及白細(xì)胞減少有明顯的治療作用。
實(shí)施例4片劑的制備片劑組成地榆總皂苷提取物0.5gHPMCLV10030g乳糖70g硬脂酸鎂1g (共制成1000片)地榆總皂苷、HPMC、乳糖混勻，以75％乙醇為粘合劑制濕顆粒，過(guò)22目篩，50℃干燥3h，22目篩整粒，加入硬脂酸鎂混勻壓片，每片重0.1g，用于白細(xì)胞減少癥患者，口服，每日三次，每次1片，一月為一療程。
實(shí)施例5膠囊劑的制備膠囊組成地榆總皂苷提取物 0.5g淀粉 100g硬脂酸鎂 1g (共制成1000粒)地榆總皂苷提取物、淀粉、硬脂酸鎂，混勻，裝膠囊。每粒裝100mg，用于白細(xì)胞減少癥患者，口服，每日三次，每次1片，一月為一療程。
實(shí)施例6注射液的制備注射液組成地榆總皂苷提取物 0.5g吐溫8010ml氯化鈉8g (共制成1000ml)地榆總皂苷提取物，加10％Na2CO3調(diào)PH至7.0-7.5，冷藏濾過(guò)，加吐溫-80，NaCl，加注射用水至1000ml，G3垂熔漏斗(玻璃)濾過(guò)，分裝，灌封，100℃流通蒸氣滅菌30min即得。
實(shí)施例7復(fù)方片劑的制備用地榆總皂苷提取物制備復(fù)方制劑，取地榆總皂苷提取物0.5g，人參總皂甙200g，黃芪總皂苷200g，按常規(guī)方法，加入相應(yīng)輔料，制成片劑或膠囊。每粒裝200mg，用于白細(xì)胞減少癥患者，口服，每日三次，每次1片，一月為一療程。
權(quán)利要求
1.一種地榆總皂苷提取物，其特征是含有地榆總皂苷，其重量百分比為10～90％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的地榆總皂苷提取物，其特征是含有地榆總皂苷，其重量百分比為40～90％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的地榆總皂苷提取物，其特征是該提取物含有一種或幾種具有以下化學(xué)結(jié)構(gòu)的三萜類皂苷 地榆皂苷-I3-O-α-L-阿拉伯糖基-19α-羥基烏索-12烯-28-羧酸-28-O-β-D-葡萄糖基酯(ziyu-glycoside I) 地榆皂苷-II19α-羥基烏索-12烯-28-羧酸-3-α-O-L-阿拉伯糖苷(ziyu-glycosideII)。 3β[(α-L-阿拉伯糖)羥基]烏索-12，19(29)-二烯-28-羧酸-28-O-β-D-葡萄糖基 2α，3α，19α-三羥基烏索-12烯-28-羧酸-28-O-β-D-葡萄糖基酯
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的地榆總皂苷提取物，其特征是由地榆屬(Sanguisorba)植物提取獲得。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的地榆總皂苷提取物，其特征是從地榆[Sanguisorba officinalis L.]或長(zhǎng)葉地榆[Sanguisorba officinalis L.var.Longifolia(Bettol.)Yüet Li]中提取獲得。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的地榆總皂苷提取物，其特征是由中藥地榆提取獲得。
7.權(quán)利要求1至6所述的地榆總皂苷提取物的制備方法，其特征在于包括以下步驟a、將原藥材經(jīng)過(guò)適當(dāng)粉碎后，用水、甲醇或乙醇，或含水醇類，室溫或加熱(包括回流)提取1～3小時(shí)，可重復(fù)提取1～3次，然后濾去藥渣，濾液在常壓或減壓下濃縮至一定濃度，靜置備用。b、將上述提取濃縮液用聚酰胺柱吸附，然后用濃度為30-90％的乙醇洗脫柱子，洗脫液減壓回收后，可重復(fù)用聚酰胺柱吸附1～3次，得浸膏，經(jīng)真空或冷凍干燥成干粉。
8.上述任意一項(xiàng)權(quán)利要求所述的地榆總皂苷提取物，在制備治療或預(yù)防人白細(xì)胞減少癥的藥物制劑中的用途。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的地榆總皂苷提取物的用途，其特征在于所述的藥物制劑含有權(quán)利要求1至6所述的地榆總皂苷的提取物。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的地榆總皂苷提取物的用途，其特征在于所述的藥物制劑中，權(quán)利要求1至6所述的地榆總皂苷的提取物還配伍有其他升高白細(xì)胞的西藥或中藥活性成分。
11.根據(jù)權(quán)利要求8、9或10所述的地榆總皂苷提取物的用途，其特征在于所述的藥物制劑為口服片劑、膠囊、口服液或注射液。
12.一種藥物組合物，其特征在于其含有權(quán)利要求1至6所述的地榆總皂苷提取物。
13.一種藥物組合物，其特征在于含有權(quán)利要求1至6所述的地榆總皂苷提取物與其他升高白細(xì)胞的西藥或中藥活性成分配伍成的復(fù)方。
14.根據(jù)權(quán)利要求11、12或13所述的藥物組合物，其特征是以地榆總皂苷提取物作為活性成分或其與其他升高白細(xì)胞的西藥或中藥活性成分的復(fù)方，加上藥學(xué)上可接受的載體或輔料，制備成為口服片劑、膠囊、口服液或注射液。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種地榆總皂苷提取物及其制備方法和用途。本發(fā)明的技術(shù)方案是提供一種地榆總皂苷提取物，其含有地榆總皂苷，其重量百分比為10～90％，可用于制備治療或預(yù)防人白細(xì)胞減少癥的藥物制劑中。本發(fā)明的有益效果是由于地榆總皂苷提取物具有良好的升高白細(xì)胞作用，可將其制成口服片劑、膠囊等多種劑型，適用于不明原因的原發(fā)性白細(xì)胞減少癥，尤其是腫瘤放、化療引起白細(xì)胞減少癥，以及其他藥物所致白細(xì)胞減少癥的治療，具有療效顯著、價(jià)格低廉、使用方便等優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61K9/48GK1504478SQ200310119248
公開(kāi)日2004年6月16日 申請(qǐng)日期2003年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月2日
發(fā)明者鄒文俊, 劉忠榮, 付鐵軍, 劉豫, 及元喬, 王若竹, 喻凱 申請(qǐng)人:成都地奧制藥集團(tuán)有限公司