專利名稱：一種復(fù)方阿比朵爾廣譜抗病毒感冒藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新型的廣譜抗病毒藥物，明確地講是公開一種復(fù)方阿比朵爾廣譜抗病毒感冒藥物，屬于抗病毒藥物生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
原藥物鹽酸阿比朵爾(6-溴-5-羥基-4-二甲氨甲基-2-苯硫甲基吲哚-3-羧酸乙酯鹽酸鹽一水合物，Arbidol hydrochloride)是引自俄羅斯的一種新型抗病毒藥物，它對呼吸道病毒具有一定的抑制作用，但對于解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎及抗過敏臨床試驗(yàn)沒有反應(yīng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種復(fù)方阿比朵爾廣譜抗病毒藥物，對甲型流感病毒H1N1亞型、呼吸道合胞病毒均有較強(qiáng)的抑制作用，對腺病毒3型也具有一定的抑制作用，并具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎及抗過敏作用。
本發(fā)明主要是由下列重量份數(shù)原料藥制成阿比朵爾50～500份、對乙酰氨基酚150～400份。
本發(fā)明的優(yōu)選配比為阿比朵爾100份、對乙酰氨基酚250～350份。
本發(fā)明的藥物中還有以下原料撲爾敏1～2份。
本發(fā)明的藥物中還可添加以下原料
氯雷他定1～5份。
本發(fā)明原料藥可與常規(guī)的藥用輔劑如賦形劑、崩解劑、粘合劑、潤滑劑、抗氧化劑、包衣劑、著色劑、芳香劑、表面活性劑等混合，制成顆粒劑、膠囊、片劑等口服藥常規(guī)劑型。其它項(xiàng)目應(yīng)符合中華人民共和國藥典2000版相關(guān)劑型項(xiàng)目有關(guān)要求。
本發(fā)明的生產(chǎn)工藝如下按上述比例稱取阿比朵爾、對乙酰氨基酚原料及藥用輔料糖粉、淀粉、制糊淀粉、硬脂酸鎂等，將原、輔料分別在粉碎機(jī)中粉碎，篩過，按照藥劑學(xué)上的常規(guī)生產(chǎn)工藝制成相應(yīng)的口服藥劑型。
本發(fā)明為口服給藥，給藥量(成人)每天500～1720mg，兒童減半。
具體實(shí)施例方式下面的實(shí)驗(yàn)例、實(shí)施例可更詳細(xì)的說明本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。
實(shí)施例1稱取阿比朵爾10kg、對乙酰氨基酚25kg、氯雷他定0.2kg原料及輔料糖粉1.9kg、淀粉3.6kg、制糊淀粉1.4kg、硬脂酸鎂0.5kg為制備十萬片藥物。
將原、輔料分別在粉碎機(jī)中粉碎30min，后分別經(jīng)100目篩過篩，備用。分別稱取原輔料，混合均勻，再通過80目篩，使之充分混合。
操作工藝將阿比朵爾，對乙酰氨基酚，氯雷他定、糖粉、干淀粉投入濕法混合制粒機(jī)的鍋料內(nèi)，干混均勻后加入淀粉漿制成濕粒。
淀粉漿配置方法將批料中的煮漿淀粉置于煮漿罐中加入純水配成15％濃度，攪拌使其成均勻的懸浮液后進(jìn)行加熱至75℃左右糊化為好，放氣至30℃～60℃待用。
干混攪拌速度800轉(zhuǎn)/分，切碎速度為低檔，干混時(shí)間5分鐘。
制粒攪拌速度800轉(zhuǎn)/分，切碎速度為高檔，攪拌、切碎1分鐘為宜。
干燥濕顆粒的干燥溫度應(yīng)在55℃，干燥至含水量為2～5％為宜。
整粒干燥后于搖擺顆粒機(jī)中整粒，整粒目數(shù)為14目。
批混將整粒后的干顆粒中加入批數(shù)量的硬脂酸鎂于批混機(jī)中批混，批混時(shí)間為0.5小時(shí)，轉(zhuǎn)速為70轉(zhuǎn)/分。
壓片檢驗(yàn)合格的顆粒根據(jù)含量檢測結(jié)果，計(jì)算片重，上機(jī)壓片，十萬片。
試驗(yàn)實(shí)施例1對乙酰氨基酚250mg/kg及實(shí)施例2355mg/kg、118mg/kg，71mg/kg對小鼠熱板法試驗(yàn)給藥60分鐘大劑量具有一定的鎮(zhèn)痛作用；對扭體反應(yīng)試驗(yàn)小鼠對乙酰氨基酚250mg/kg及實(shí)施例2355mg/kg有鎮(zhèn)痛作用。對107/0.5ml個(gè)大腸桿菌所致的大鼠發(fā)熱，對乙酰氨基酚160mg/kg及實(shí)施例2大劑量227mg/kg具有一定的解熱作用，114mg/kg、57mg/kg解熱作用不明顯。
目的根據(jù)實(shí)施例2的適應(yīng)癥建立靈敏動(dòng)物模型，觀察其主要藥效學(xué)作用，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)室理論依據(jù)。
試驗(yàn)材料藥物對乙酰氨基酚，實(shí)施例2，均由吳太醫(yī)藥集團(tuán)提供。
動(dòng)物ICR潔凈級小白鼠，體重18～20g，合格證編號scxk(吉)2003-0001；wistar大鼠，體重為190～200g，合格證編號scxk(吉)2003-0001；由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物部提供。
儀器YLS-6A智能熱板儀，由山東醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站生產(chǎn)，出廠編號6007274。
結(jié)果與方法。
一、實(shí)施例2對小鼠熱板鎮(zhèn)痛作用的影響用YLS-6A智能熱板儀將溫度設(shè)定在55℃，作為熱刺激，記錄小鼠自投入熱板儀致出現(xiàn)舔后足的潛伏期作為該鼠痛閾值，在給藥前先測定每只小鼠的痛閾值作為基礎(chǔ)痛閾值，剔除喜跳躍者，以5～30s者為合格，將篩選合格的雌性小鼠50只分為5組，既陽性對照組對乙酰氨基酚(250mg/kg)；實(shí)施例2高、中、低三個(gè)劑量組(355mg/kg、118mg/kg、71mg/kg)；空白對照給予同體積生理鹽水，灌胃給藥后30、、60、90分鐘分別測定各組小鼠的痛閾值，結(jié)果見表1。
表1實(shí)施例2對小鼠熱板法鎮(zhèn)痛作用的影響 (X±S n＝10)組別 劑量(mg/kg)藥前 藥后30分空白 16.56±5.6313.69±4.34對乙酰氨基酚25013.16±5.4817.31±7.64組方大35514.59±6.2916.64±9.51組方中11815.36±5.1615.36±9.43組方小71 12.93±5.1215.35±6.01與空白對照組比較P＞0.05
組別劑量(mg/kg)藥后60分 藥后90分空白 13.54±4.79 15.85±5.06對乙酰氨基酚 250 13.08±5.36 17.26±7.81組方大 355 15.36±7.61*13.49±4.64組方中 118 16.33±4.77 15.36±8.16組方小 7115.82±8.67 19.60±4.64與空白對照組比較*P＜0.05；由表1可見，給藥60分后實(shí)施例2高劑量組對小鼠由熱板引起的疼痛具有抑制作用，與空白對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但中、低劑量組與空白對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；同時(shí)陽性對照組亦未顯示明顯鎮(zhèn)痛作用。
二、實(shí)施例2對小鼠扭體試驗(yàn)的鎮(zhèn)痛作用取小鼠50只，雌雄各半，分組及給藥同上，灌胃給藥30分鐘后，分別將各組小鼠腹腔注射0.6％冰醋酸，每只0.2ml觀察注射冰醋酸15分鐘內(nèi)出現(xiàn)的扭體次數(shù)及藥物對扭體反應(yīng)的抑制率，以判定實(shí)施例2的鎮(zhèn)痛效果，結(jié)果見表2。
抑制率(％)＝(空白組扭體均數(shù)-試藥組扭體均數(shù))/空白組扭體均數(shù)×100％表2實(shí)施例2對小鼠扭體試驗(yàn)的鎮(zhèn)痛作用。(X±S n＝10)組別 劑量 扭體次數(shù) 抑制率(mg/kg) (藥后45分) (％)空白 42.1±13.54對乙酰氨基酚 250 27.1±16.60*35.6組方大 355 25.3±18.32*39.9組方中 118 34.6±13.08 17.8組方小 7137±18.96 12.0與空白對照組比較*P＜0.05由表2可見，陽性藥對乙酰氨基酚與實(shí)施例2高劑量可減少小鼠由冰醋酸引起的扭體次數(shù)，但抑制率均小于50％，乙酰氨基酚與實(shí)施例2高劑量組與空白對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
三、實(shí)施例2對大鼠發(fā)熱反應(yīng)的影響取體重為190～200g大鼠50只，分為5組，每組10只，雌雄各半，即陽性對照對乙酰氨基酚組(160mg/kg)，實(shí)施例2三個(gè)劑量組(227mg/kg、114mg/kg、57mg/kg)，空白對照組，給藥前將大鼠肛表涂上凡士林，使其潤滑后將肛溫計(jì)插入大鼠肛門2cm，放置3分鐘后，取出讀數(shù)，記錄每只大鼠的正常體溫(攝氏溫度)，各組大鼠由尾靜脈注射107/0.5ml個(gè)細(xì)菌濃度的大腸桿菌菌液150min后灌胃給藥，空白對照組給予同體積生理鹽水，用同樣方法測量給藥后1h、2h、3h、4h、5h的大鼠體溫，比較給藥組與對照組大鼠體溫的差異情況，結(jié)果見表3.
表3實(shí)施例2對大鼠發(fā)熱反應(yīng)的影響(X±S n＝10)組別 劑量(mg/kg) 藥前1h 2h 3h空白 38.3±0.39 39.09±0.4439.56±0.4139.61±0.31對乙酰氨基酚 160 38.35±0.39 38.93±0.1839.46±0.2838.89±0.26**組方大 227 38.43±0.38 38.89±0.5739.1±0.54 38.89±0.46**組方中 114 38.4±0.41 38.93±0.4439.41±0.3739.25±0.42組方小 57 38.38±0.23 38.95±0.2139.54±0.2839.35±0.59與空白對照組比較**P＜0.01組別 劑量(mg/kg) 4h 5h空白 39.69±0.14 39.88±0.33對乙酰氨基酚 160 38.9±0.36***39.71±0.47組方大 227 39.13±0.34***39.24±0.79組方中 114 39.4±0.57 39.55±0.57組方小 57 39.49±0.74 39.74±0.42與空白對照組比較***P＜0.01
結(jié)果表明，對乙酰氨基酚及實(shí)施例2給藥組于給藥30分后均具有解熱作用。其實(shí)施例2與對乙酰氨基酚的作用相同，實(shí)施例2中、低劑量組作用不明顯，與空白組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
討論對實(shí)施例2的藥效學(xué)研究結(jié)果表明，該實(shí)施例2西藥制劑在高劑量具有一定的解熱、鎮(zhèn)痛作用與實(shí)施例1的作用相似，但扭體法鎮(zhèn)痛試驗(yàn)的鎮(zhèn)痛強(qiáng)度弱于實(shí)施例1?？赡芘c馬來酸氯苯那敏的中樞抑制作用缺乏有關(guān)。熱板法鎮(zhèn)痛模型在給藥高劑量組尚可見到一定的鎮(zhèn)痛效果，扭體法乙酰氨基酚與實(shí)施例2高劑量亦可見到一定的鎮(zhèn)痛效果，由此可以證明該藥具有一定的鎮(zhèn)痛作用。在解熱作用中，本試驗(yàn)可見在高劑量組3-4小時(shí)期間出現(xiàn)明顯體溫下降(P＜0.01)，可以說明實(shí)施例2具有解熱作用。但如何確定實(shí)施例2的最佳配伍，尚需進(jìn)一步拆方試驗(yàn)來證明。
結(jié)論實(shí)施例2具有一定的解熱、鎮(zhèn)痛作用試驗(yàn)實(shí)施例2鹽酸阿比朵爾治療流行性感冒作用的主要藥效學(xué)研究(體外)提要通過對呼吸道病毒致細(xì)胞病變抑制作用的研究表明，鹽酸阿比朵爾及其復(fù)方制劑對甲型流感病毒H1N1亞型和呼吸道合胞病毒(RSV)均有較強(qiáng)的抑制作用，對腺病毒3型(Ad3)也有一定的抑制作用。提示鹽酸阿比朵爾及鹽酸阿比朵爾復(fù)方制劑對由呼吸道病毒所引起的流行性感冒具有一定的預(yù)防和治療作用。
試驗(yàn)?zāi)康脑幬稃}酸阿比朵爾是引自俄羅斯的一種新型抗病毒藥物。有文獻(xiàn)報(bào)道，它對呼吸道病毒具有一定的抑制作用，為了進(jìn)一步確定其抗呼吸道病毒的作用，我們對鹽酸阿比朵爾單方進(jìn)行了初步抗呼吸道病毒的實(shí)驗(yàn)研究，同時(shí)配以對乙酰氨基酚和氯雷他定組成了復(fù)方鹽酸阿比朵爾，并進(jìn)行了相關(guān)的藥效學(xué)及臨床應(yīng)用藥物對比試驗(yàn)，以確定其用于治療流行性感冒的藥學(xué)功效。
受試藥物名稱，鹽酸阿比朵爾(6-溴-5-羥基-4-二甲氨甲基-2-苯硫甲基吲哚-3-羧酸乙酯鹽酸鹽一水合物，Arbidol hydrochloride)。實(shí)驗(yàn)用鹽酸阿比朵爾復(fù)方制劑是由鹽酸阿比朵爾、對乙酰氨基酚、氯雷他定三種西藥組成，由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理研究室提供。
配制方法鹽酸阿比朵爾、對乙酰氨基酚和氯雷他定分別用環(huán)氧乙烷除菌，鹽酸阿比朵爾復(fù)方制劑的配制比例為鹽酸阿比朵爾∶對乙酰氨基酚∶氯雷他定＝1∶1.17∶0.02，實(shí)驗(yàn)時(shí)用IMDM細(xì)胞培養(yǎng)液配制成所需濃度待用。
劑量選擇根據(jù)各藥物對培養(yǎng)細(xì)胞的毒性試驗(yàn)結(jié)果決定各組實(shí)驗(yàn)劑量(見表1)。
儀器多用氣體培養(yǎng)箱，NCPC03100-1，美國；深低溫冰箱，SANYO，日本；雙人超凈工作臺(tái)，SW-CT-ZF型，蘇州；離心沉淀機(jī)，LXT-II型，上海；酶標(biāo)儀，G3022型，南京；真空冷凍干燥機(jī)，MRK，日本。
試劑IMDM細(xì)胞培養(yǎng)液，HyClone公司，美國；新生小牛血清，大連生化試劑廠；胰蛋白酶，Difco進(jìn)口分裝，上海；噻唑藍(lán)(MTT，[3-4，5-dimethylthiazo(-2-yl)-2，5-diphenylte-trazoliumdromide]，Sigma)產(chǎn)品。
陽性對照藥物鹽酸胍(Guanidine HCL)，SIGMA，美國，臨用時(shí)以IMDM細(xì)胞培養(yǎng)液配制所需濃度(僅體外試驗(yàn)用)。
臨床應(yīng)用藥物對照組病毒唑(利巴韋林注射液)，蘇州第六制藥廠，批號021027，應(yīng)用劑量參照細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(見表1)，應(yīng)用時(shí)用IMDM細(xì)胞培養(yǎng)液配制成實(shí)驗(yàn)所需各濃度。
細(xì)胞狗腎傳代細(xì)胞(MDCK)，美國引進(jìn)，由中國科學(xué)院細(xì)胞庫提供，人宮頸癌細(xì)胞(Hela)和人羊膜細(xì)胞(FL)均由本室保藏。
病毒株甲型流感病毒H1N1亞型，由長春生物制品研究所提供、呼吸道合胞病毒(RSV)標(biāo)準(zhǔn)Long毒株和腺病毒3型(Ad3)標(biāo)準(zhǔn)毒株均由本室保存。
體外抗病毒實(shí)驗(yàn)主要步驟和結(jié)果1.鹽酸阿比朵爾、對乙酰氨基酚、氯雷他定、利巴韋林注射液和鹽酸胍對體外培養(yǎng)細(xì)胞毒性的測定將待測藥物分別配制成2000μg/ml、1500μg/ml、1000μg/ml、800μg/ml、600μg/ml、400μg/ml、200μg/ml、100μg/ml、50μg/ml在人宮頸癌細(xì)胞(Hela)上分別測定最大無毒濃度(TD0)和半數(shù)中毒濃度(TD50)。結(jié)果見表1，鹽酸阿比朵爾對細(xì)胞的無毒濃度(TD0)為1500μg/ml，本實(shí)驗(yàn)未測出半數(shù)中毒濃度(TD50)；對乙酰氨基酚的無毒濃度(TD0)為200μg/ml，半數(shù)中毒濃度(TD50)為1500μg/ml；氯雷他定的無毒濃度(TD0)為200μg/ml，半數(shù)中毒濃度(TD50)為600μg/ml；利巴韋林注射液的無毒濃度(TD0)為800μg/ml，半數(shù)中毒濃度(TD50)為1500μg/ml；鹽酸胍的無毒濃度(TD0)為250μg/ml，半數(shù)中毒濃度(TD50)為500μg/ml。
2.實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)設(shè)正常細(xì)胞對照組、完全病毒感染組、陽性藥物鹽酸胍對照組、臨床應(yīng)用藥物利巴韋林注射液對照組和實(shí)驗(yàn)組。鹽酸阿比朵爾單方實(shí)驗(yàn)組自TD0開始設(shè)1000μg/ml，500μg/ml，250μg/ml共3個(gè)濃度實(shí)驗(yàn)組。復(fù)方鹽酸阿比朵爾實(shí)驗(yàn)組自TD0開始設(shè)250μg/ml，125μg/ml，62.5μg/ml共3個(gè)濃度實(shí)驗(yàn)組。根據(jù)陽性藥物毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，陽性藥物鹽酸胍實(shí)驗(yàn)濃度為250μg/ml。臨床應(yīng)用藥物利巴韋林注射液實(shí)驗(yàn)濃度為800μg/ml。
3.對呼吸道病毒感染細(xì)胞病變抑制實(shí)驗(yàn)將各濃度組再分為先加藥后吸附病毒組；吸附病毒同時(shí)加藥組；先吸附病毒后加藥組。以20萬/ml細(xì)胞，0.1ml/孔接種96孔板，2天后用于實(shí)驗(yàn)，每組均設(shè)8個(gè)平行孔，感染病毒的毒力均為100TCID50/0.1ml。72小時(shí)后開始在顯微鏡下觀察細(xì)胞CPE，待病毒對照組CPE為++++時(shí)記錄結(jié)果，并用MTT法測定各孔的OD570值，以確定各實(shí)驗(yàn)組藥物對病毒感染細(xì)胞的病變抑制程度。結(jié)果見表2、3、4、5、6、7。由100TCID50病毒感染的細(xì)胞病變抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明對甲型流感病毒H1N1亞型和呼吸道合胞病毒(RSV)標(biāo)準(zhǔn)Long毒株的致細(xì)胞病變具有較強(qiáng)的抑制作用，對腺病毒3型(Ad3)的致細(xì)胞病變也具有一定的抑制作用。
討論實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，鹽酸阿比朵爾及復(fù)方制劑對甲型流感病毒H1N1亞型、呼吸道合胞病毒均有較強(qiáng)的抑制作用，對腺病毒3型也具有一定的抑制作用。顯然，鹽酸阿比朵爾及復(fù)方鹽酸阿比朵爾對引起流行性感冒和呼吸系統(tǒng)疾病的主要感染病毒具有較強(qiáng)的抑制作用，同時(shí)又對由呼吸道病毒感染的體外培養(yǎng)宿主細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用。由于鹽酸阿比朵爾已被證明是一種新型的廣譜抗病毒藥物，我們的實(shí)驗(yàn)又進(jìn)一步證明了該藥物及其復(fù)方制劑對引起呼吸道感染及流行性感冒的主要致病病毒均具有較強(qiáng)的抑制繁殖作用，其作用明顯高于臨床應(yīng)用對比藥物利巴韋林注射液，所以它可以作為一種用于治療流行性感冒的新藥進(jìn)行開發(fā)。
結(jié)論綜上所述，鹽酸阿比朵爾及復(fù)方制劑能夠達(dá)到治療感冒、流行性感冒的主要藥效學(xué)功效。鹽酸阿比朵爾復(fù)方制劑與陽性對照藥物鹽酸胍和臨床應(yīng)用藥物利巴韋林注射液相比，在抗病毒作用上具有明顯的提高。
實(shí)施例2稱取原料阿比朵爾10kg、對乙酰氨基酚25kg、撲爾敏0.2kg和輔料糖粉1.9kg、淀粉3.6kg、制糊淀粉1.4kg、硬脂酸鎂0.5kg為制成十萬片藥物量。
操作工藝1將檢驗(yàn)合格的原輔料分別在粉碎機(jī)中粉碎30min，后分別經(jīng)100目篩過篩，備用。
2根據(jù)處方量分別稱取原輔料，混合均勻，再通過80目篩，使之充分混合。
3濕法制粒
3.1將阿比朵爾，對乙酰氨基酚，撲爾敏、糖粉、干淀粉投入濕法混合制粒機(jī)的鍋料內(nèi)，干混均勻后加入淀粉漿制成濕粒。
3.2工藝參數(shù)淀粉漿配置方法將批料中的煮漿淀粉置于煮漿罐中加入純水配成15％濃度，攪拌使其成均勻的懸浮液后進(jìn)行加熱至75℃左右糊化為好，放氣至30℃～60℃待用。
干混攪拌速度800轉(zhuǎn)/分，切碎速度為低檔，干混時(shí)間5分鐘。
制粒攪拌速度800轉(zhuǎn)/分，切碎速度為高檔，攪拌、切碎1分鐘為宜。
4干燥濕顆粒的干燥溫度應(yīng)在55℃，干燥至含水量為2～5％為宜5整粒干燥后于搖擺顆粒機(jī)中整粒，整粒目數(shù)為14目。
6批混將整粒后的干顆粒中加入批數(shù)量的硬脂酸鎂于批混機(jī)中批混，批混時(shí)間為0.5小時(shí)，轉(zhuǎn)速為70轉(zhuǎn)/分。
7壓片檢驗(yàn)合格的顆粒根據(jù)含量檢測結(jié)果，計(jì)算片重，上機(jī)壓片。
試驗(yàn)實(shí)施例2對乙酰氨基酚250mg/kg及實(shí)施例1352mg/kg、117.2mg/kg，70.4mg/kg對扭體反應(yīng)試驗(yàn)小鼠有明顯鎮(zhèn)痛作用；對小鼠熱板法試驗(yàn)給藥60分鐘大劑量具有一定的鎮(zhèn)痛作用。對107/0.5ml個(gè)大腸桿菌所致的大鼠發(fā)熱，對乙酰氨基酚160mg/kg及實(shí)施例1大劑量225mg/kg具有一定的解熱作用，112.5mg/kg、56.2mg/kg解熱作用不明顯。
目的根據(jù)實(shí)施例1的適應(yīng)癥建立靈敏動(dòng)物模型，觀察其主要藥效學(xué)作用，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)室理論依據(jù)。
試驗(yàn)材料藥物對乙酰氨基酚，實(shí)施例1，均由吳太醫(yī)藥集團(tuán)提供。
動(dòng)物ICR潔凈級小白鼠，體重18～20g，合格證編號scxk(吉)2003-0001；wistar大鼠，體重為190～200g，合格證編號scxk(吉)2003-0001；由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物部提供。
儀器YLS-6A智能熱板儀，由山東醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站生產(chǎn)，出廠編號6007274。
結(jié)果與方法。
一、實(shí)施例1對小鼠熱板鎮(zhèn)痛作用的影響用YLS-6A智能熱板儀將溫度設(shè)定在55℃，作為熱刺激，記錄小鼠自投入熱板儀致出現(xiàn)舔后足的潛伏期作為該鼠痛閾值，在給藥前先測定每只小鼠的痛閾值作為基礎(chǔ)痛閾值，剔除喜跳躍者，以5～30s者為合格，將篩選合格的雌性小鼠50只分為5組，既陽性對照組對乙酰氨基酚(250mg/kg)；實(shí)施例1高、中、低三個(gè)劑量組(352mg/kg、117.2mg/kg、70.4mg/kg)；空白對照給予同體積生理鹽水，灌胃給藥后30、60、90分鐘分別測定各組小鼠的痛閾值，結(jié)果見表1。
表1實(shí)施例1對小鼠熱板法鎮(zhèn)痛作用的影響 (X±S n＝10)組別 劑量(mg/kg) 藥前 藥后30分空白16.16±5.7118.23±8.55對乙酰氨基酚 250 17.03±7.1018.07±9.66組方大 352 17.08±6.7716.61±8.16組方中 117.216.21±7.5420.11±10.70組方小 70.4 16.67±4.2518.49±6.98
與空白對照組比較P＞0.05組別劑量(mg/kg) 藥后60分藥后90分空白25.93±13.7819.43±5.73對乙酰氨基酚 25021.47±13.1721.40±12.76組方大 35215.86±5.34*16.05±6.74組方中 117.2 18.34±7.79 24.36±15.95組方小 70.4 27.95±4.85 20.52±7.70與空白對照組比較P＞0.05，*P＜0.05；由表1可見，給藥60分后實(shí)施例1高劑量組對小鼠由熱板引起的疼痛具有抑制作用，與空白對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但中、低劑量組與空白對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；同時(shí)陽性對照組亦未顯示明顯鎮(zhèn)痛作用。
二、實(shí)施例1對小鼠扭體試驗(yàn)的鎮(zhèn)痛作用取小鼠50只，雌雄各半，分組及給藥同上，灌胃給藥30分鐘后，分別將各組小鼠腹腔注射0.6％冰醋酸，每只0.2ml觀察注射冰醋酸15分鐘內(nèi)出現(xiàn)的扭體次數(shù)及藥物對扭體反應(yīng)的抑制率，以判定實(shí)施例1的鎮(zhèn)痛效果，結(jié)果見表2。
抑制率(％)＝(空白組扭體均數(shù)-試藥組扭體均數(shù))/空白組扭體均數(shù)×100％表2實(shí)施例1對小鼠扭體試驗(yàn)的鎮(zhèn)痛作用。(X±S n＝10)組別劑量(mg/kg) 扭體次數(shù)(藥后45分) 抑制率(％)空白 30.9±9.81對乙酰氨基酚250 10.7±11.22***65.37組方大352 4±8.75***87.06組方中117.24.2±7.81***86.41組方小70.4 8.9±10***71.20與空白對照組比較***P＜0.001由表2可見，陽性藥對乙酰氨基酚與實(shí)施例1高、中、低劑量可減少小鼠由冰醋酸引起的扭體次數(shù)，抑制率均大于50％，與空白對照組比較有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)，量效關(guān)系明顯，但給藥各組標(biāo)準(zhǔn)差值過高，甚至超過均值。根據(jù)試驗(yàn)記錄，對乙酰氨基酚及給藥組中各組有不同例數(shù)的零值，由此導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)差值過高。
三、實(shí)施例1對大鼠發(fā)熱反應(yīng)的影響取體重為190～200g大鼠50只，分為5組，每組10只，雌雄各半，即陽性對照對乙酰氨基酚組(160mg/kg)，實(shí)施例1三個(gè)劑量組(225mg/kg、112.5mg/kg、56.2mg/kg)，空白對照組，給藥前將大鼠肛表涂上凡士林，使其潤滑后將肛溫計(jì)插入大鼠肛門2cm，放置3分鐘后，取出讀數(shù)，記錄每只大鼠的正常體溫(攝氏溫度)，各組大鼠由尾靜脈注射107/0.5ml個(gè)細(xì)菌濃度的大腸桿菌菌液150min后灌胃給藥，空白對照組給予同體積生理鹽水，用同樣方法測量給藥后1h、2h、3h、4h、5h的大鼠體溫，比較給藥組與對照組大鼠體溫的差異情況，結(jié)果見表3。
表3實(shí)施例1對大鼠發(fā)熱反應(yīng)的影響(X±S n＝10)組別(mg/kg) 劑量 藥前 1h 2h 3h空白38.49±0.53 39.08±0.3939.52±0.3939.53±0.34對乙酰氨基酚 160 38.53±0.52 39.01±0.2539.44±0.2838.98±0.30**組方大 225 38.6±0.50 38.95±0.5339.13±0.4838.98±0.46**組方中 112.5 38.56±0.50 39.01±0.4439.43±0.4339.29±0.39組方小 56.238.54±0.41 38.98±0.2039.51±0.3239.43±0.56與空白對照組比較P＞0.05；**P＜0.01組別(mg/kg) 劑量4h 5h空白 39.6±0.22 39.82±0.32對乙酰氨基酚 160 38.92±0.35***39.78±0.44組方大 225 39.15±0.31**39.33±0.73組方中 112.539.44±0.53 39.57±0.54組方小 56.2 39.6±0.69 39.8±0.39與空白對照組比較P＞0.05；***P＜0.01
結(jié)果表明，對乙酰氨基酚及實(shí)施例1給藥組于給藥30分后均具有解熱作用。其實(shí)施例1與對乙酰氨基酚的作用相同，實(shí)施例1中、低劑量組作用不明顯，與空白組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
討論對實(shí)施例1的藥效學(xué)研究結(jié)果表明，該實(shí)施例1西藥制劑在高劑量具有一定的解熱、鎮(zhèn)痛作用。熱板法鎮(zhèn)痛模型是一種物理方法造成的急性銳痛，在對乙酰氨基酚常規(guī)動(dòng)物用量下未見鎮(zhèn)痛作用，而給藥高劑量組尚可見到一定的鎮(zhèn)痛效果，由此可以證明該藥具有一定的鎮(zhèn)痛作用.扭體法實(shí)驗(yàn)結(jié)果支持前面的結(jié)論。在解熱作用中，利用生存狀態(tài)的高濃度大腸桿菌導(dǎo)致發(fā)熱反應(yīng)，是一可靠的動(dòng)物模型，其特點(diǎn)為發(fā)熱反應(yīng)出現(xiàn)緩慢，在3.5小時(shí)達(dá)高峰，但由于內(nèi)毒素等致熱源的不斷釋放，發(fā)熱持續(xù)時(shí)間較長，一般藥物尚難以控制。本試驗(yàn)可見在3-4小時(shí)期間出現(xiàn)明顯體溫下降(P＜0.01)，可以說明實(shí)施例1具有解熱作用。但如何確定實(shí)施例1的最佳配伍，尚需進(jìn)一步拆方試驗(yàn)來證明。
結(jié)論實(shí)施例1具有一定的解熱、鎮(zhèn)痛作用試驗(yàn)實(shí)施例2鹽酸阿比朵爾治療流行性感冒的主要藥效學(xué)研究(體內(nèi))摘要通過對流感病毒體內(nèi)感染模型抗病毒作用的研究表明鹽酸阿比朵爾與鹽酸阿比朵爾復(fù)方制劑對小鼠肺內(nèi)流感A1型病毒顆粒的增殖具有較強(qiáng)的抑制作用。提示鹽酸阿比朵爾復(fù)方對由病毒而引起的流行性感冒具有一定的預(yù)防和治療作用。
試驗(yàn)?zāi)康牧餍行愿忻暗陌l(fā)病與由流感病毒直接損傷組織細(xì)胞而導(dǎo)致的呼吸系統(tǒng)炎癥有關(guān)。本項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的目的在于通過動(dòng)物體內(nèi)模型，觀察鹽酸阿比朵爾復(fù)方對小鼠肺組織流感病毒感染的抑制作用。
受試藥物系西藥鹽酸阿比朵爾、對乙酰氨基酚和氯雷他定組成的白色粉末。鹽酸阿比朵爾復(fù)方的配制比例為鹽酸阿比朵爾∶對乙酰氨基酚∶氯雷他定＝100g∶250g∶2g本復(fù)方配制比例由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理教研室提供。
配制方法和劑量選擇將鹽酸阿比朵爾、對乙酰氨基酚和氯雷他定按上述比例配方混合，研成細(xì)粉，干燥即成。體內(nèi)試驗(yàn)，將鹽酸阿比朵爾復(fù)方制劑用水調(diào)和成懸液，鹽酸阿比朵爾復(fù)方高劑量組49.28mg/ml，其中鹽酸阿比朵爾凈含量為14mg/ml；鹽酸阿比朵爾復(fù)方中劑量組16.408mg/ml，其中鹽酸阿比朵爾凈含量為4.6614mg/ml；鹽酸阿比朵爾復(fù)方低劑量組9.856mg/ml，其中鹽酸阿比朵爾凈含量為2.8mg/ml；鹽酸阿比朵爾對照組49.28mg/ml，各劑量組含量符合試驗(yàn)要求。
陽性對照藥物鹽酸嗎啉胍片，東芝堂藥業(yè)(安徽)有限公司出品，批號030318，規(guī)格0.1g。配制成1.9mg/ml的溶液備用。
儀器多用氣體培養(yǎng)箱，NCPC03100-1，美國；深低溫冰箱，SANYO，日本；SARTORIUS GMBH GOTTINGEN精密天平(精度0.00001)，德國；雙人超凈工作臺(tái)，SW-CT-ZF型，中國蘇州；離心沉淀機(jī)，LXT-II型，中國上海；真空冷凍干燥機(jī)，MRK，日本；雙筒顯微鏡，OLYMPUSBHF。
試劑IMDM細(xì)胞培養(yǎng)液，HyClone公司，美國；新生小牛血清，大連生化試劑廠。
動(dòng)物及飼養(yǎng)條件遠(yuǎn)雜交系昆明種小白鼠，封閉群，起源于瑞士，1989年由中國科學(xué)院引進(jìn)，雌雄兼用，體重13-15g，動(dòng)物合格證號960101017，動(dòng)物數(shù)1000只，封閉式隔離無菌觀察室飼養(yǎng)。由吉林省中醫(yī)中藥研究院動(dòng)物飼養(yǎng)室提供。
病毒株流感病毒A1型鼠肺適應(yīng)株(H1N1)，由長春生物制品研究所提供。
細(xì)胞狗腎細(xì)胞(MDCK)，由上海中國科學(xué)院細(xì)胞庫提供。
試驗(yàn)主要步驟和結(jié)果1.實(shí)驗(yàn)分組小鼠雌雄兼用，隨機(jī)分組，每籠同性別10只飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)分成5組，正常對照組；病毒對照組；西藥陽性藥物(鹽酸嗎啉胍片)對照組，13.3mg/kg；鹽酸阿比朵爾組和鹽酸阿比朵爾復(fù)方藥物實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組中再設(shè)3個(gè)劑量試驗(yàn)組，鹽酸阿比朵爾復(fù)方高劑量組(352mg/kg)；鹽酸阿比朵爾復(fù)方中劑量組(117.2mg/kg)；鹽酸阿比朵爾復(fù)方低劑量組(70.4mg/kg)。
2.病毒毒力測定于試驗(yàn)前7天取20只小鼠，滴鼻感染流感A1型鼠肺適應(yīng)株病毒，稀釋度分別為10-1、10-2、10-3和10-4的病毒液0.03ml，次日開始統(tǒng)計(jì)死亡％，計(jì)算LD50。LD50的測定結(jié)果為100TCID50/0.03ml。
3.對小鼠流感病毒引起肺炎的抑制作用于感染前1天開始灌胃給藥，每只鼠0.1ml，連續(xù)3天，正常對照組和病毒對照組連續(xù)灌服相同體積的生理鹽水。灌藥后第3天，各實(shí)驗(yàn)組(正常對照組除外)經(jīng)乙醚淺度麻醉下滴鼻流感病毒A1型鼠肺適應(yīng)株15LD50/0.05ml。感染后實(shí)驗(yàn)組每天繼續(xù)按上述劑量灌胃服藥，96小時(shí)后隨機(jī)選取10只殺剖小鼠取肺稱重，計(jì)算出各實(shí)驗(yàn)組肺重量指數(shù)的平均值，分別與病毒對照組比較，計(jì)算出肺病變抑制率。結(jié)果見表1。鹽酸阿比朵爾復(fù)方3個(gè)劑量組，均有顯著的治療作用。鹽酸阿比朵爾組也同樣具有相似的作用，與陽性藥物病毒靈對照組比較，其作用有明顯提高，與病毒對照組比較，差異呈極顯著水平。
4.對體內(nèi)病毒顆粒增殖的影響以流感A1型鼠肺適應(yīng)株病毒原液50μl滴鼻感染小鼠，藥物實(shí)驗(yàn)組于病毒感染前一天開始灌胃給藥0.1ml，感染后實(shí)驗(yàn)組每天繼續(xù)按同樣劑量灌胃服藥，8天后剖殺小鼠，取肺勻漿制成懸液，離心并冷凍真空濃縮上清液，微量濾菌器濾菌后，接種MDCK細(xì)胞，每天觀察CPE，待病毒對照組細(xì)胞90％以上出現(xiàn)病變后，收集各組細(xì)胞，反復(fù)凍融三次，在MDCK細(xì)胞上測定各實(shí)驗(yàn)組肺懸液中的病毒滴度(TCID50)，與病毒對照組比較，以TCID50降低1個(gè)對數(shù)值以上判為有效[1]，確定藥物在動(dòng)物體內(nèi)對病毒顆粒增殖的影響，結(jié)果見表2，各實(shí)驗(yàn)組與病毒對照組比較，TCID50值均降低1個(gè)以上對數(shù)值，差異呈極顯著水平。
試驗(yàn)結(jié)論試驗(yàn)結(jié)果表明，鹽酸阿比朵爾復(fù)方制劑對流感A1型病毒具有較強(qiáng)的抑制作用，其作用明顯強(qiáng)于陽性對照藥物病毒靈。提示鹽酸阿比朵爾復(fù)方對流感病毒而引發(fā)的流行性感冒具有一定的治療作用。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，鹽酸阿比朵爾復(fù)方對流行性感冒具有一定的治療作用，同時(shí)對由病毒感染所致的組織細(xì)胞損傷具有一定的恢復(fù)和保護(hù)作用。鹽酸阿比朵爾復(fù)方的抗病毒作用可以為該藥物治療流行性感冒提供藥效學(xué)依據(jù)。
結(jié)論綜上所述，鹽酸阿比朵爾及復(fù)方制劑能夠達(dá)到治療感冒、流行性感冒的主要藥效學(xué)功效。鹽酸陽比朵爾復(fù)方制劑與陽性對照藥物鹽酸胍和臨床應(yīng)用藥物利巴韋林注射液相比，在抗病毒作用上具有明顯的提高。
實(shí)施例3稱取阿比朵爾10kg、對乙酰氨基酚25kg原料及輔料糖粉1.9kg、淀粉3.6kg、制糊淀粉1.4kg、硬脂酸鎂0.5kg為制備十萬片藥物。其它項(xiàng)目應(yīng)符合中華人民共和國藥典2000版片劑項(xiàng)目有關(guān)要求。
實(shí)施例4稱取阿比朵爾20kg、對乙酰氨基酚55kg原料及輔料糖粉1.9kg、淀粉4.0kg、制糊淀粉1.9kg、50％乙醇適量，制粒，整粒，烘干，裝1#膠囊，每粒0.2g。其它項(xiàng)目應(yīng)符合中華人民共和國藥典2000版膠囊項(xiàng)目有關(guān)要求。
權(quán)利要求
1.一種復(fù)方阿比朵爾廣譜抗病毒感冒藥物，其特征在于主要是由下列重量份數(shù)原料藥制成阿比朵爾50～500份、對乙酰氨基酚150～400份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其中各原料藥的用量為阿比朵爾100份、對乙酰氨基酚250～350份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物，其中原料藥還有撲爾敏1～2份。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物，其中原料藥還有1～5份。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4所述的藥物為藥劑學(xué)任何口服劑型。
全文摘要
本發(fā)明提供一種復(fù)方阿比朵爾廣譜抗病毒感冒藥物，主要是由阿比朵爾、對乙酰氨基酚及撲爾敏或氯雷他定組成，通過常規(guī)的炮制工藝制成口服藥物劑型。本發(fā)明對甲型流感病毒H1N1亞型、呼吸道合胞病毒均有較強(qiáng)的抑制作用，對腺病毒3型也具有一定的抑制作用，并具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎及抗過敏作用，是一種廣譜抗病毒感冒藥物。
文檔編號A61P31/00GK1546019SQ20031011591
公開日2004年11月17日 申請日期2003年12月12日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月12日
發(fā)明者李欣, 李 欣 申請人:吉林省吳太感康藥業(yè)有限公司