專利名稱：硫酸酯化生漆多糖及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物活性硫酸酯化生漆多糖及其制備方法和用途。該硫酸酯化多糖具有抗凝血活性、抗病毒活性，作為一種藥物在治療心血管疾病及HIV等方面有應用前景。
背景技術(shù)：
血栓栓塞可以通過抗凝血治療得到解決。據(jù)估計，就深靜脈血栓和肺栓塞而言，每年需要抗凝血治療的人約占0.2-0.4％。最常用的抗凝血藥物是肝素，一種硫酸酯化的天然多糖。目前，肝素已成為僅次于胰島素的第二大天然治療用藥。然而盡管肝素具有非常好的抗凝血療效，但由于部分病人先天缺乏和肝素作用的抗凝血酶以及肝素常引起血小板減少和出血而在一些臨床條件下限制了使用。此外，從哺乳動物分離得到的肝素還會有被致病介質(zhì)污染的危險。因此，從非哺乳動物途徑，尋找新型硫酸酯化多糖來替代肝素是多糖研究開發(fā)領(lǐng)域的重要方向。
硫酸酯化反應是多糖中引入硫酸酯基的常用方法。然而，由于多糖結(jié)構(gòu)的復雜性，用于某一確定多糖的可預期衍生物制備的硫酸酯化方法常常不能輕易應用于另一種多糖的修飾。從中國漆樹生漆中分離提取得到的生漆多糖，是含D-半乳糖(～66mol％)，4-O-甲基-β-D-葡萄糖醛酸(～24mol％)，D-葡萄糖醛酸(～3mol％)，L-鼠李糖(～5mol％)和L-阿拉伯糖(～3mol％)的酸性雜多糖，其結(jié)構(gòu)以1，3-β-D-吡喃半乳糖為主鏈，并具有4-O-甲基-β-D-葡萄糖醛酸位于末端的復雜支鏈。
生漆多糖的硫酸酯化有報道的也僅是用DMF-SO3在DMF中進行的方法。該方法所用硫酸酯化試劑量大，且反應過程中降解嚴重，產(chǎn)物分子量小(＜10000)，生物活性較差。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明就是為了解決上述問題，提出一種生物活性硫酸酯化生漆多糖及其制備方法和用途，所得硫酸酯化多糖不僅具有較高的分子量，而且具有高的取代度，可替代肝素用于制備抗凝血藥物。
本發(fā)明提供的技術(shù)方案是一種硫酸酯化生漆多糖，由生漆多糖經(jīng)硫酸酯化制得，硫酸酯化生漆多糖的硫酸酯化度在0.1～1.7之間，分子量在7.3×104～1.1×104之間。
本發(fā)明還提供了上述硫酸酯化生漆多糖的制備方法將生漆多糖溶解或懸浮在50～100倍重量比的干燥溶劑中，在40～100℃下攪拌10～30min，接著加入生漆多糖殘基1～4倍摩爾量的三氧化硫吡啶復合物或體積比為1∶2～4∶1的氯磺酸吡啶混合物反應0.5～4小時，反應混合物用冰浴冷卻，加入溶劑體積的1/3～1/2倍的冰水，用5-20wt％NaOH中和，然后于蒸餾水中透析，透析內(nèi)液在30-70℃減壓蒸餾濃縮，接著用無水乙醇沉淀；沉淀用P2O5真空干燥即得所需硫酸酯化生漆多糖。
上述溶劑為二甲亞砜、二甲基甲酰胺、甲酰胺和吡啶中的一種或兩種。
本發(fā)明重復性好，所得硫酸酯化多糖不僅具有較高的分子量，而且具有高的取代度和抗凝血活性、抗病毒活性，可替代肝素用于制備抗凝血藥物。
具體實施例方式
實施例1486mg生漆多糖懸浮在48.6ml二甲亞砜中，在60℃下攪拌30min，接著加入三氧化硫吡啶復合物1.92g。反應1h后，反應混合物用冰水浴冷卻到室溫，加入30ml冰水，用15wt％NaOH中和，然后于蒸餾水中透析120小時。透析內(nèi)液在45℃減壓蒸餾濃縮，接著用無水乙醇沉淀；沉淀用P2O5真空干燥后得產(chǎn)品。所得產(chǎn)品分子參數(shù)和抗凝血性能列于表1。
實施例2486mg生漆多糖懸浮在48.6ml二甲亞砜中，在60℃下攪拌30min，接著加入三氧化硫吡啶復合物1.92g。反應3h后，反應混合物用冰水浴冷卻到室溫，加入30ml冰水，用15wt％NaOH中和，然后于蒸餾水中透析120小時。透析內(nèi)液在45℃減壓蒸餾濃縮，接著用無水乙醇沉淀；沉淀用P2O5真空干燥后得產(chǎn)品。所得產(chǎn)品分子參數(shù)和抗凝血性能列于表1。
實施例3162mg生漆多糖懸浮在16.2ml二甲亞砜中，在40℃下攪拌30min，接著加入三氧化硫吡啶復合物0.64g。反應3h后，反應混合物用冰水浴冷卻到室溫，加入10ml冰水，用15wt％NaOH中和，于蒸餾水中透析。透析內(nèi)液減壓蒸餾濃縮，接著用無水乙醇沉淀，真空干燥后得產(chǎn)品。所得產(chǎn)品分子參數(shù)和抗凝血性能列于表1。
實施例4162mg生漆多糖懸浮在16.2ml二甲亞砜中，在70℃下攪拌30min，接著加入三氧化硫吡啶復合物0.324g。反應3h后，反應混合物用冰水浴冷卻到室溫，加入10ml冰水，用15wt％NaOH中和，于蒸餾水中透析。透析內(nèi)液減壓蒸餾濃縮，接著用無水乙醇沉淀，真空干燥后得產(chǎn)品。所得產(chǎn)品分子參數(shù)和抗凝血性能列于表1。
實施例5162mg生漆多糖懸浮在16.2ml二甲基甲酰胺中，在80℃下攪拌30min，接著加入三氧化硫吡啶復合物0.64g。反應3h后，反應混合物用冰水浴冷卻到室溫，加入10ml冰水，用15wt％NaOH中和，于蒸餾水中透析。透析內(nèi)液減壓蒸餾濃縮，無水乙醇沉淀，真空干燥后得產(chǎn)品。所得產(chǎn)品分子參數(shù)和抗凝血性能列于表1。
實施例6162mg生漆多糖溶解在16.2ml甲酰胺中，在100℃下攪拌30min，接著加入三氧化硫吡啶復合物0.64g。反應3h后，反應混合物用冰水浴冷卻到室溫，加入10ml冰水，用15wt％NaOH中和，于蒸餾水中透析。透析內(nèi)液減壓蒸餾濃縮，無水乙醇沉淀，真空干燥后得產(chǎn)品。所得產(chǎn)品分子參數(shù)和抗凝血性能列于表1。
實施例7486mg生漆多糖溶解在48.6ml甲酰胺中，在90℃下攪拌30min，接著加入硫酸酯化試劑(氯磺酸1ml+吡啶2ml)。反應4h后，反應混合物用冰水浴冷卻到室溫，加入乙醇沉出多糖。離心收集沉淀，接著溶沉淀于蒸餾水中，用5wt％NaOH中和，并于蒸餾水中透析。透析內(nèi)液減壓蒸餾濃縮，無水乙醇沉淀，真空干燥后得產(chǎn)品。所得產(chǎn)品分子參數(shù)和抗凝血性能列于表1。
表1硫酸酯化生漆多糖的分子參數(shù)和抗凝血活性重均分子量 硫酸酯化度抗凝血活性(×104) (unit/mg)實施例13.50 1.15 30.2實施例22.58 1.57 11.8實施例36.86 0.52 -實施例44.00 0.81 1.323.39 0.73 -實施例57.29 0.12 -實施例65.85 0.92 10.4實施例74.49 1.22 9.7實施例8162mg生漆多糖在16.2ml甲酰胺和二甲亞砜的混合溶液(體積比為1∶1)中，在70℃下攪拌30min，接著加入三氧化硫吡啶復合物0.64g。反應2h后，反應混合物用冰水浴冷卻到室溫，加入10ml冰水，用20wt％NaOH中和，于蒸餾水中透析。透析內(nèi)液減壓蒸餾濃縮，無水乙醇沉淀，真空干燥后得產(chǎn)品。
實施例9486mg生漆多糖懸浮在25ml吡啶中，在60℃下攪拌15min，接著加入氯磺酸4ml+吡啶1ml。反應4h后，反應混合物用冰水浴冷卻到室溫，加入30ml冰水，用15wt％NaOH中和，然后于蒸餾水中透析120小時。透析內(nèi)液在45℃減壓蒸餾濃縮，接著用無水乙醇沉淀；沉淀用P2O5真空干燥后得產(chǎn)品。
實施例10486mg生漆多糖懸浮在48.6ml二甲亞砜和二甲基甲酰胺的混合溶液(體積比為2∶1)中，在60℃下攪拌30min，接著加入三氧化硫吡啶復合物1.92g。反應3h后，反應混合物用冰水浴冷卻到室溫，加入30ml冰水，用15wt％NaOH中和，然后于蒸餾水中透析120小時。透析內(nèi)液在45℃減壓蒸餾濃縮，接著用無水乙醇沉淀；沉淀用P2O5真空干燥后得產(chǎn)品。
實施例11486mg生漆多糖懸浮在48.6ml二甲亞砜和吡啶的混合溶液(體積比為4∶1)中，在60℃下攪拌30min，接著加入三氧化硫吡啶復合物1.92g。反應3h后，反應混合物用冰水浴冷卻到室溫，加入30ml冰水，用15wt％NaOH中和，然后于蒸餾水中透析120小時。透析內(nèi)液在45℃減壓蒸餾濃縮，接著用無水乙醇沉淀；沉淀用P2O5真空干燥后得產(chǎn)品。
權(quán)利要求
1.一種硫酸酯化生漆多糖，由生漆多糖經(jīng)硫酸酯化制得，硫酸酯化生漆多糖的硫酸酯化度在0.1～1.7之間，分子量在7.3×104～1.1×104之間。
2.權(quán)利要求1所述硫酸酯化生漆多糖的制備方法，將生漆多糖溶解或懸浮在50～100倍重量比的干燥溶劑中，在40～100℃下攪拌10～30min，接著加入生漆多糖殘基1～4倍摩爾量的三氧化硫吡啶復合物或體積比為1∶2～4∶1的氯磺酸吡啶混合物反應0.5～4小時，反應混合物用冰浴冷卻，加入溶劑體積的1/3～1/2倍的冰水，用5-20wt％NaOH中和，然后于蒸餾水中透析，透析內(nèi)液在30-70℃減壓蒸餾濃縮，接著用無水乙醇沉淀；沉淀用P2O5真空干燥即得所需硫酸酯化生漆多糖。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征是上述溶劑為二甲亞砜、二甲基甲酰胺、甲酰胺和吡啶中的一種或兩種。
4.權(quán)利要求1所述硫酸酯化生漆多糖在制備抗凝血藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種生物活性硫酸酯化生漆多糖，其硫酸酯化度在0.1～1.7之間，分子量在7.3×10
文檔編號A61K31/715GK1544477SQ200310111449
公開日2004年11月10日 申請日期2003年11月25日 優(yōu)先權(quán)日2003年11月25日
發(fā)明者杜予民, 楊建紅 申請人:武漢大學