專利名稱：15－或16－位取代的睪酮類似物的藥物學(xué)應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及甾體化學(xué)領(lǐng)域。更具體而言，它涉及包含15-或16-位取代的睪酮類似物的藥物劑量單位，以及使用這些睪酮類似物的治療方法。本發(fā)明的睪酮類似物具有雄激素活性。
背景技術(shù)：
英國(guó)專利GB-B 774,064涉及15-位取代的睪酮，特別是15-羥睪酮的生產(chǎn)方法。這些物質(zhì)的治療應(yīng)用在該專利中沒(méi)有提及。
法國(guó)專利申請(qǐng)F(tuán)R-A 2 035 786記載16α，17-二羥甾體的16α-α-D-糖苷的獸醫(yī)學(xué)應(yīng)用。據(jù)稱，這些甾體化合物可被用作雌激素以抑制動(dòng)物例如嚙齒動(dòng)物、狗、牛和羊排卵。在權(quán)利要求3中提及16α-羥睪酮的糖苷。在該法國(guó)專利申請(qǐng)中只提及非胃腸道給藥。
目前，雄性甾體化合物的主要治療應(yīng)用是用于男性性腺功能減退的治療。在本領(lǐng)域中已知治療雄激素缺乏的方法包括給藥雄激素如睪酮、二氫睪酮、脫氫表雄酮和睪酮的各種酯，或衍生物和類似物如美睪酮。
男性雄激素缺乏通常被分為三種，即原發(fā)性雄激素缺乏(睪丸機(jī)能不全)、繼發(fā)性雄激素缺乏(下丘腦垂體機(jī)能不全)和老年男性中的雄激素缺乏(ADAM)，也稱為“男性絕經(jīng)期”或“男性更年期”。
至于向男性長(zhǎng)期給藥雄激素，在治療和補(bǔ)充之間是有差別的。治療通常需要相對(duì)高的通常類似于內(nèi)源性雄激素生成速度的劑量。另一方面，需要適當(dāng)?shù)匮a(bǔ)充低于內(nèi)源性雄激素(即睪酮、二氫睪酮和脫氫表雄酮)生成速度的劑量。
由于涉及到不良的副作用，雄激素僅謹(jǐn)慎地用于治療和激素補(bǔ)充。事實(shí)上，雄激素通常僅用于對(duì)被確診為原發(fā)性或繼發(fā)性雄激素缺乏的男性進(jìn)行治療。
只有少數(shù)雄激素如脫氫表雄酮(DHEA)和睪酮的17α-烷基化衍生物適合口服給藥，這是因?yàn)榕c睪酮不同，它們基本能抵抗肝代謝。然而，口服給藥的缺點(diǎn)導(dǎo)致這些雄激素吸收不良，并且它們對(duì)肝臟尤其是肝臟代謝施加的影響較大(Bhasin等，(1997)J.Clin.Endocr.Metab.823-8)。這正是現(xiàn)有的治療方案中雄激素通常都以2-3周的儲(chǔ)庫(kù)型注射劑或植入劑的形式給藥的原因。
現(xiàn)有技術(shù)還建議在男性避孕法中聯(lián)合使用孕激素和雄激素。在該方法中，以足夠高的量給藥孕激素以中斷精子生成——從而導(dǎo)致精子缺乏，且同時(shí)給藥雄激素以預(yù)防另一方面因給藥孕激素而可能導(dǎo)致的雄激素缺乏。因?yàn)閾?dān)心特別是當(dāng)口服給藥時(shí)雄激素成分的可靠性和可能的副作用，男性避孕法仍僅限于試驗(yàn)階段。
現(xiàn)有技術(shù)中已提出的雄激素的其他治療應(yīng)用包括HIV感染的個(gè)體中的消耗性綜合征(wasting syndrome)和由逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物引起的脂肪代謝障礙(retro-viral drug induced lipodystrophia)的治療、促進(jìn)病危異化個(gè)體(critically ill catabolic individual)的恢復(fù)、治療激素避孕女性的良性婦科失調(diào)、青春期延遲、女性向男性的轉(zhuǎn)化(female-to-male conversion)。
如上所述，顯然需求如下的雄激素(i)在上述提及的治療方法中可有效地使用而不引起不良的副作用，(ii)產(chǎn)生非常一致即可預(yù)知的效果和/或(iii)可以方便的方式給藥，特別是口服。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的發(fā)明人出乎意料地發(fā)現(xiàn)，在治療應(yīng)用中未曾使用過(guò)的甾體化合物即15-羥基或16-羥基取代的睪酮類似物符合上述需求。
據(jù)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明羥睪酮類似物令人驚訝地將足夠的雄激素效力與可接受的口服生物利用度及對(duì)肝臟代謝的很小的影響相結(jié)合。從而，該雄激素特別適合于任何已應(yīng)用或推薦應(yīng)用雄激素的治療用途。該羥睪酮類似物可以被有效地傳遞，特別是通過(guò)透粘膜或透皮途徑，以相對(duì)較低的劑量如那些女性通常所需的劑量給藥。
本發(fā)明羥睪酮類似物的另一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是可預(yù)知的和一致的治療效果，其被認(rèn)為與有效的攝取、其微弱的肝臟作用和/或其對(duì)性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)的微弱的親和力有關(guān)。相對(duì)而言，有時(shí)用于口服給藥的已知雄激素，特別是DHEA或睪酮的17α-烷基化衍生物，其治療效果非常依賴于個(gè)體的生理甚至他/她的飲食。因此，這些雄激素通常以相對(duì)高的劑量應(yīng)用以保證每個(gè)個(gè)體都能達(dá)到最低有效劑量。當(dāng)然，如此高的劑量自會(huì)有缺點(diǎn)，其導(dǎo)致一些個(gè)體相對(duì)過(guò)量，后者又可能產(chǎn)生顯著的副作用。
具體實(shí)施例方式
因此，本發(fā)明一個(gè)方面涉及包含至少10μg雄性甾體化合物以及藥物學(xué)可接受的賦形劑的用于口服、透粘膜或透皮給藥的藥物劑量單位，所述雄性甾體化合物選自15-羥睪酮、16-羥睪酮、其前體以及這些羥睪酮和/或其前體的混合物。
術(shù)語(yǔ)“15-羥睪酮”包括15α-羥睪酮(15α，17β-二羥基-4-雄烯-3-酮)和15β-羥睪酮(15β，17β-二羥基-4-雄烯-3-酮)兩者。類似地，術(shù)語(yǔ)“16-羥睪酮”包括16α-羥睪酮(16α，17β-二羥基-4-雄烯-3-酮)和16β-羥睪酮(16β，17β-二羥基-4-雄烯-3-酮)兩者。
本文通篇所使用的術(shù)語(yǔ)“前體”是指那些在將所述前體向人類患者給藥后被轉(zhuǎn)變?yōu)楸景l(fā)明羥睪酮之一的物質(zhì)。
本發(fā)明雄性甾體化合物優(yōu)選的前體是該羥睪酮的衍生物，其中至少一個(gè)羥基的氫原子被以下基團(tuán)取代1-25個(gè)碳原子的烴羧酸、磺酸或氨基磺酸的酰基；四氫呋喃基；四氫吡喃基；或每個(gè)殘基包含1-20個(gè)糖苷單位的直鏈或支鏈糖苷殘基。
已發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明羥睪酮存在于哺乳動(dòng)物中，這意味著它們具有可歸于天然雄激素之類這一重要優(yōu)勢(shì)(Yamazaki等，Arch BiochemBiophys 1997 Oct 1；346(1)161-9)。另外，如由上述文章可知，15α-羥睪酮、15β-羥睪酮和16β-羥睪酮存在于人體中，這意味著初步看來(lái)其不良副作用的危險(xiǎn)比合成的雄激素或不存在于人體中的天然雄激素的要低。因而，在本發(fā)明的一個(gè)特別優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，該雄性甾體化合物選自15α-羥睪酮、15β-羥睪酮、16β-羥睪酮、其前體以及這些羥睪酮和/或其前體的混合物。更優(yōu)選地，該雄性甾體化合物選自15α-羥睪酮、15β-羥睪酮、其前體以及這些羥睪酮和/或其前體的混合物。
該口服劑量單位可以用本領(lǐng)域熟知的任何一種用于藥物組合物生產(chǎn)的方法來(lái)制備，并且這些單位可包含一種或更多的選自甜味劑、調(diào)味劑、著色劑和防腐劑的物質(zhì)。所述劑量單位可以適當(dāng)?shù)匕瑹o(wú)毒的、藥物學(xué)可接受的賦形劑。例如就片劑而言，這些賦形劑可以是例如惰性稀釋劑如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；制粒劑和崩解劑如玉米淀粉或海藻酸；粘合劑如淀粉、明膠或阿拉伯膠；以及潤(rùn)滑劑如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。片劑可以不包衣或用已知的技術(shù)包衣以延緩在胃腸道的崩解與吸收，從而在更長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)提供持續(xù)的作用。例如，可以使用一種時(shí)間延緩材料如可將單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯單獨(dú)應(yīng)用或者與蠟一同應(yīng)用。
可通過(guò)口服途徑給藥的劑量單位形式的實(shí)例包括片劑、軟明膠膠囊(包括用于軟明膠膠囊的溶液)、水或油混懸劑、乳劑、丸劑、錠劑、藥片、糖漿、酏劑等。口服應(yīng)用的制劑也可采用硬明膠膠囊的形式，其中活性成分與惰性固體稀釋劑例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土相混合，或采用軟明膠膠囊的形式，其中甾體成分與水或油介質(zhì)如花生油、液體石蠟或橄欖油相混合。在一個(gè)特別優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的口服劑量單位是以固體或半固體劑量單位、尤其是片劑、膠囊、扁囊劑、小球、丸劑、散劑或顆粒劑的形式提供。
根據(jù)本發(fā)明的水混懸劑包含甾體化合物與適于生產(chǎn)水混懸劑的賦形劑的混合物。這種賦形劑包括助懸劑如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、海藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍膠及阿拉伯膠，以及分散劑或潤(rùn)濕劑如天然存在的磷脂(如卵磷脂)、烯化氧和脂肪酸的縮合產(chǎn)物(如聚氧乙烯硬脂酸酯)、環(huán)氧乙烷與長(zhǎng)鏈脂肪醇的縮合產(chǎn)物(如十七亞乙基氧代十六醇(heptadecaethyleneoxycetanol))、環(huán)氧乙烷與源自脂肪酸和己糖醇的偏酯的縮合產(chǎn)物(如聚氧乙烯山梨醇單油酸酯)、或者環(huán)氧乙烷與源自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的縮合產(chǎn)物(如聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯)。該水混懸劑還可包含一種或更多種防腐劑如對(duì)羥基苯甲酸乙酯或?qū)αu基苯甲酸正丙酯、一種或更多種著色劑、一種或更多種調(diào)味劑以及一種或更多種甜味劑例如蔗糖、阿司帕坦或糖精。正如本領(lǐng)域所熟知，眼用制劑需要調(diào)節(jié)滲透壓。
油混懸劑可通過(guò)在植物油如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油中，或在礦物油如液體石蠟中懸浮該甾體化合物成分而配制。該油混懸劑可以包含增稠劑如蜂蠟、固體石蠟或鯨蠟醇。可以加入甜味劑以提供美味的經(jīng)口制劑(oral preparation)。這些組合物可以通過(guò)加入抗氧化劑如維生素C加以保存。
本發(fā)明適于通過(guò)加入水而制備水混懸劑的可分散的粉末和顆粒可以通過(guò)將甾體化合物成分與分散劑、助懸劑和/或潤(rùn)濕劑以及一種或多種防腐劑相混合而配制。適當(dāng)?shù)姆稚┗驖?rùn)濕劑及助懸劑的實(shí)例如上所述。也可加入其他的賦形劑如甜味劑、調(diào)味劑和著色劑。
本發(fā)明的藥物劑量單位也可以是水包油型乳劑的形式。油相可以是植物油如橄欖油或花生油、礦物油如液體石蠟、或它們的混合物。適當(dāng)?shù)娜榛瘎┌ㄌ烊淮嬖诘臉淠z如阿拉伯膠和黃蓍膠、天然存在的磷脂如大豆卵磷脂、源自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯如脫水山梨醇單油酸酯、以及這些偏酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物如聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯。該乳劑還可包含甜味劑和調(diào)味劑。
糖漿和酏劑可以用甜味劑如甘油、山梨醇或蔗糖來(lái)配制。該制劑還可包含緩和劑、防腐劑、調(diào)味劑或著色劑。
本發(fā)明的甾體化合物還可以藥物的直腸或陰道給藥的栓劑的形式給藥。這些劑量單位可以通過(guò)將甾體化合物與適當(dāng)?shù)臒o(wú)刺激性的賦形劑相混合而制備，該賦形劑在常溫下是固體但在直腸溫度下是液體，并且因此將在直腸中熔融并釋放藥物。這種材料為可可脂和聚乙二醇。
該劑量單位優(yōu)選地包含至少20μg、更優(yōu)選為至少40μg、最優(yōu)選為至少60μg的雄性甾體化合物。如果該劑量單位是用以提供雄性甾體化合物的緩慢釋放，例如就透皮貼劑而言，包含在該劑量單位中的雄性甾體化合物的量可達(dá)1000mg之多。優(yōu)選地，該雄性甾體化合物的用量不超過(guò)500mg、更優(yōu)選為不超過(guò)200mg。最優(yōu)選地，該雄性甾體化合物在劑量單位中的用量最好不超過(guò)100mg。
在本發(fā)明一個(gè)特別優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，該劑量單位設(shè)計(jì)為用于口服給藥?？蛇m用于傳遞本發(fā)明甾體化合物的口服劑量單位的實(shí)例包括片劑、膠囊、扁囊劑、小球、丸劑、散劑或顆粒劑。
該藥物口服劑量單位的重量通常在0.1-10克范圍內(nèi)。包含在該口服劑量單位中的雄性甾體化合物的量?jī)?yōu)選為至少30μg、更優(yōu)選為至少50μg、最優(yōu)選為至少80μg。通常包含在該口服劑量單位中的雄性甾體化合物的量不應(yīng)超過(guò)50mg，更優(yōu)選為不超過(guò)30mg，最優(yōu)選為不超過(guò)20mg。
本發(fā)明的羥睪酮類似物可有利地用于男性避孕法中。如前文所述，該方法要求孕激素和雄激素聯(lián)合給藥。包含在本劑量單位中的孕激素的量通常將大于10μg、更優(yōu)選為大于30μg。在一個(gè)特別優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，該劑量單位另外還包含與75至800μg、更優(yōu)選100至500μg的左炔諾孕酮等效的量的孕激素。
在其它應(yīng)用如女性激素替代療法和女性避孕中，該羥睪酮類似物可有利地與雌激素聯(lián)合給藥。因此，該劑量單位中除本發(fā)明雄性甾體化合物外可適當(dāng)?shù)匕昧績(jī)?yōu)選為至少10μg、更優(yōu)選為至少15μg的雌激素。
可應(yīng)用于本發(fā)明劑量單位以及本文所述的方法中的孕激素的實(shí)例包括孕酮、左炔諾孕酮、諾孕酯、炔諾酮、地屈孕酮、屈螺酮、3-β-羥基去氧孕烯、3-酮-去氧孕烯(＝依托孕烯)、17-去乙?；Z孕酯、19-去甲孕酮、乙酰氧基孕烯諾龍、烯丙基雌烯三醇、阿那孕酮、氯地孕酮、環(huán)丙孕酮、地美孕酮、去氧孕烯、地諾孕素、dihydrogesterone、地美炔酮、炔孕酮、雙醋炔諾醇、醋酸氟孕酮、gastrinon、孕二烯酮、孕三烯酮、羥甲基孕酮、羥基孕酮、利奈孕酮、美屈孕酮、甲羥孕酮、甲地孕酮、美侖孕酮、諾美孕酮、炔諾酮、異炔諾酮、炔諾孕酮(包括d-炔諾孕酮和d1-炔諾孕酮)、諾孕烯酮、normethisterone、孕酮、奎孕酮、(17α)-17-羥基-11-亞甲基-19-去甲孕-4，15-二烯-20-炔-3-酮、替勃龍、曲美孕酮、阿孕奈德、nestorone、普美孕酮、17-羥基孕酮酯、19-去甲-17-羥基孕酮、17α-乙炔基睪酮、17α-乙炔基-19-去甲睪酮、d-17β-乙酰氧基-13β-乙基-17α-乙炔基-甾-4-烯-3-酮肟、應(yīng)用于本發(fā)明方法時(shí)能夠在體內(nèi)釋放出這種孕激素的這些化合物的前體以及它們的組合。優(yōu)選地，該孕激素選自孕酮、去氧孕烯、依托孕烯、孕二烯酮、地諾孕素、左炔諾孕酮、諾孕酯、炔諾酮、屈螺酮、曲美孕酮、地屈孕酮、這些孕激素的前體以及它們的組合。
適于根據(jù)本發(fā)明應(yīng)用的雌激素的實(shí)例包括乙炔基雌二醇、美雌醇、quinestranol、雌二醇、雌酮、雌烷、雌三醇、雌四醇、結(jié)合馬雌激素、應(yīng)用于本發(fā)明方法時(shí)能在體內(nèi)釋放出這種雌激素的這些化合物的前體以及它們的組合。優(yōu)選地，該雌激素選自乙炔基雌二醇、雌二醇、雌四醇以及其組合。
本發(fā)明雄性甾體化合物優(yōu)選的前體是本發(fā)明羥睪酮的衍生物，其中至少一個(gè)羥基的氫原子被以下基團(tuán)取代1-25個(gè)碳原子的烴羧酸、磺酸或氨基磺酸的?；?；四氫呋喃基；四氫吡喃基；或每個(gè)殘基包含1-20個(gè)糖苷單位的直鏈或支鏈糖苷殘基。
本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及治療性或預(yù)防性地治療哺乳動(dòng)物的方法，所述方法包括向所述哺乳動(dòng)物口服、透粘膜或透皮給藥如上所述的本發(fā)明藥物劑量單位。此處使用的術(shù)語(yǔ)透粘膜給藥是指陰道內(nèi)、子宮內(nèi)、直腸、鼻內(nèi)、肺部、口腔和舌下傳遞，最優(yōu)選為陰道內(nèi)傳遞。該方法特別適用于對(duì)人類進(jìn)行治療。
口服、直腸、鼻內(nèi)、口腔和肺部給藥理想地適于每天給藥(至少)一次。透皮給藥適于以每天一次到每月一次的頻率施用。陰道內(nèi)和子宮內(nèi)給藥適于以每周一次到每月一次的頻率給藥。
出于便利、也為達(dá)到高順應(yīng)率的原因，本方法優(yōu)選采用的給藥間隔為1天、1周或1月。特別優(yōu)選采用每日一次口服給藥、每周一次透皮給藥或每月一次陰道給藥的治療方案。最優(yōu)選地，本發(fā)明方法包含每日至少一次給藥。
本發(fā)明雄激素甾體化合物適于以每公斤體重至少0.5μg的平均每日劑量給藥。優(yōu)選地，該平均每日劑量為每公斤體重至少1μg，更優(yōu)選為每公斤體重至少1.5μg。該平均每日劑量通常為每公斤體重不超過(guò)1.5mg。優(yōu)選地，該平均每日劑量為每公斤體重不超過(guò)1mg，更優(yōu)選為每公斤體重不超過(guò)0.5mg。
根據(jù)本發(fā)明的方法優(yōu)選用于以下方法中治療或預(yù)防(男性或女性中)雄激素缺乏的方法；(男性或女性)激素避孕法；治療或預(yù)防HIV感染的個(gè)體中的消耗性綜合征、由逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物引起的脂肪代謝障礙、不健康或疲勞的方法；逆轉(zhuǎn)由慢性疾病、手術(shù)介入、腫瘤疾病、外傷和/或營(yíng)養(yǎng)不良引起的異化狀態(tài)的方法；治療或預(yù)防細(xì)胞毒性化療后引起的萊迪希氏細(xì)胞功能紊亂和生殖上皮損傷的方法；在細(xì)胞毒性化療或放療期間或之后治療或預(yù)防疲勞或維持體重、血紅蛋白或嗜中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法；治療或預(yù)防良性婦科失調(diào)的方法；改善(男性或女性)性欲的方法；治療或預(yù)防青春期延緩的方法；或維持女性向男性轉(zhuǎn)變的方法。如前文所述，本發(fā)明甾體化合物的給藥特別適用于下述方法中治療或預(yù)防雄激素缺乏的方法；激素避孕的方法或治療或預(yù)防良性婦科失調(diào)的方法。應(yīng)注意，雄激素缺乏的癥狀在男性和女性中都會(huì)存在。在一個(gè)特別優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，本發(fā)明甾體化合物被用于治療或預(yù)防雄激素缺乏或被用作男性避孕的方法。
前述方法通常在為期至少十天、優(yōu)選為至少二十天期間持續(xù)給藥本發(fā)明甾體化合物。在一個(gè)特別優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，該甾體在為期至少一百天期間給藥，其間不給藥的間隔不超過(guò)十天，優(yōu)選為不超過(guò)八天。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明方法包括以每公斤體重至少0.2μg的平均每日劑量聯(lián)合給藥孕激素和/或以每公斤體重至少0.2μg的平均每日劑量聯(lián)合給藥雌激素。聯(lián)合給藥的孕激素或雌激素的平均每日劑量通常為每公斤體重不超過(guò)1mg，所述劑量更優(yōu)選為每公斤體重不超過(guò)500μg，最優(yōu)選為每公斤體重不超過(guò)300μg。
本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及選自15-羥睪酮、16-羥睪酮、其前體以及這些羥睪酮和/或其前體的混合物中的雄性甾體化合物在制備如本文所述的口服、透粘膜或透皮劑量單位中的應(yīng)用。在一個(gè)特別優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，所述雄性甾體化合物用于制備固體或半固體口服劑量單位，特別是片劑、膠囊、扁囊劑、小球、丸劑、散劑或顆粒劑形式的口服劑量單位。
通過(guò)下面的實(shí)施例，本發(fā)明更進(jìn)一步得以闡明。
實(shí)施例實(shí)施例1采用一種確定的競(jìng)爭(zhēng)性甾體結(jié)合試驗(yàn)測(cè)定15α-羥睪酮(15α，17β-二羥基-4-雄烯-3-酮)、15β-羥睪酮(15β，17β-二羥基-4-雄烯-3-酮)以及16β-羥睪酮(16β，17β-二羥基-4-雄烯-3-酮)對(duì)雄激素受體(AR)的相對(duì)結(jié)合親合力。睪酮(17β-羥基-4-雄烯-3-酮)以及5α-二羥睪酮(DHT，5α，17β-二羥基-雄烷-3-酮)在該試驗(yàn)中用作對(duì)照。
所采用的方法是根據(jù)科學(xué)文獻(xiàn)改編，且由Chang等詳細(xì)記載(1987，J.Steroid Biochem.，27，1-3，123-131)。重組大鼠AR得以表達(dá)并自大腸桿菌純化。體外試驗(yàn)包括應(yīng)用AR以及將1.5nM固定濃度的[3H]米勃酮用作標(biāo)記配體。將重組AR溶于結(jié)合緩沖液(50mMTris-堿，pH7.5，0.8mM NaCl，10％甘油，2mM二硫蘇糖醇，1mg/mlBSA和2％乙醇)中，之后將雙份等分試樣與最終濃度為1.5nM的[3H]米勃酮以及載體對(duì)照(1.0％DMSO)或者等量的包含濃度升高的未標(biāo)記的甾體配體作為競(jìng)爭(zhēng)劑的載體一同溫育。于4℃溫育4小時(shí)后，移除未結(jié)合的配體并測(cè)定結(jié)合至AR的[3H]米勃酮的量。用在每種競(jìng)爭(zhēng)劑濃度下結(jié)合至AR的[3H]米勃酮量的平均值繪制抑制曲線。IC50值隨后通過(guò)非線性最小二乘法回歸分析確定。利用Cheng和Prusoff方程(Cheng等，1973，Biochem.Pharmacol.，22，3099-3108)，通過(guò)所測(cè)得的待測(cè)化合物的IC50值、試驗(yàn)中所應(yīng)用的放射配體的濃度以及被確定為3nM的放射配體Kd的先驗(yàn)值計(jì)算出抑制常數(shù)(Ki)。
從三個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)得到的15α-羥睪酮、15β-羥睪酮、16β-羥睪酮、睪酮和DHT的平均Ki值如表1所示。為了比較結(jié)合親和力，將DHT的Ki值(其顯示出最高的親和力)人為地設(shè)定為100％并用于計(jì)算相對(duì)親和力(表1)。與DHT和睪酮相比，15α-羥睪酮、15β-羥睪酮以及16β-羥睪酮與AR結(jié)合的親和力小2至3個(gè)數(shù)量級(jí)(表1)。
表1經(jīng)試驗(yàn)測(cè)定的15α-羥睪酮、15β-羥睪酮、16β-羥睪酮、睪酮以及5α-二羥睪酮(DHT)的AR結(jié)合抑制常數(shù)(Ki)。將DHT的Ki值定為100％，得到相對(duì)結(jié)合親和力。

實(shí)施例2為測(cè)定15-取代的睪酮衍生物在體內(nèi)的雄激素效力，每日一次向未成熟雄性Wistar大鼠連續(xù)5天通過(guò)口服給藥15α-羥睪酮(15α，17β-二羥基-4-雄烯-3酮)和15β-羥睪酮(15β，17β-二羥基-4-雄烯-3酮)。在該生物測(cè)定中，采用均口服給藥的睪酮(17β-羥基-4-雄烯-3酮)和5α-二羥睪酮(DHT，5α，17β-二羥基-雄烯-3酮)作為陽(yáng)性對(duì)照。
將15α-羥睪酮、15β-羥睪酮、睪酮和5α-二羥睪酮溶于2％的吐溫80水混懸液中，最終試驗(yàn)濃度為3mg/ml和1mg/ml。若干組每組5只未成熟Wistar大鼠，每只重50±2克，或接受載體治療或以10ml/kg的給藥體積通過(guò)經(jīng)口管飼法連續(xù)五天給藥30或10mg/kg/天的待測(cè)物質(zhì)。在試驗(yàn)期間，將動(dòng)物飼養(yǎng)在45×23×15cm的籠子里，并置于溫度控制在22-24℃以及濕度為60-80％且明/暗循環(huán)周期為12小時(shí)的環(huán)境中。食物(試驗(yàn)膳食，嚙齒動(dòng)物膳食，PMI nutritioninternational)和水自由攝入。
在接受最后劑量24小時(shí)后，處死動(dòng)物，記錄每只動(dòng)物精囊的濕重并計(jì)算出每組的平均濕重。相對(duì)于載體治療的大鼠的平均精囊濕重而言，平均精囊濕重的增加被認(rèn)為可指征體內(nèi)的雄激素效力。
體內(nèi)的雄激素效力數(shù)據(jù)如表2所示。睪酮的15α和15β羥基取代的類似物均導(dǎo)致精囊濕重的劑量依賴性且顯著的增加。該體內(nèi)雄激素作用與所觀察到的睪酮的劑量依賴性作用類似或等效，并且比口服給藥DHT后所觀察到的體內(nèi)雄激素效力更強(qiáng)，其中DHT為經(jīng)典的雄激素且為睪酮在體內(nèi)的活性代謝產(chǎn)物(O’Donnel等，1996，Endocrinology，137，2703-2710)。
表2，每日一次、連續(xù)五天口服給藥15α-羥睪酮、15β-羥睪酮、睪酮或5α-二羥睪酮(DHT)治療的每組5只未成熟Wistar大鼠的組中，其精囊濕重相對(duì)于載體(2％吐溫80)治療的動(dòng)物的平均精囊濕重的平均升高。以DHT作為參照(100％)，還得出相對(duì)雄激素效力。

實(shí)施例3采用一種確定的競(jìng)爭(zhēng)性甾體結(jié)合試驗(yàn)(Hammond和Lahteenmaki.1983.Clin Chem Acta 132101-110)測(cè)定15α-羥睪酮(15α-OH-T)、15β-羥睪酮(15β-OH-T)、脫氫表雄酮(DHEA)、睪酮(T)和5α-二羥睪酮(DHT)對(duì)人性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)的相對(duì)結(jié)合親合力。
如前所述，自轉(zhuǎn)基因小鼠血清中純化得到人SHBG(AvvakumovGV等，2000.J Biol Chem 27525920-25925)。將如此制備的人SHBG用聚丙烯酰胺凝膠電泳在變性條件下測(cè)定，純度為＞99％。其甾體結(jié)合特征不能與人血清中的SHBG相區(qū)別(Avvakumov GV等，2000.JBiol Chem 27525920-25925)。體外試驗(yàn)包括使用純化的人SHBG并以[3H]DHT作為標(biāo)記配體。將人SHBG在室溫下用右旋糖酐包衣的炭(DCC)在磷酸緩沖鹽(PBS)中的混懸液處理30分鐘以除去所有的甾體配體。離心(2,000×g，10分鐘)沉淀DCC之后，將含有人SHBG的上清液用PBS稀釋，直至基于其甾體結(jié)合能力的濃度為1nM。
然后將該人SHBG溶液的雙份等分試樣(100μl)與10nM等體積的[3H]DHT以及100μl的PBS或者含有濃度升高的未標(biāo)記的甾體配體作為競(jìng)爭(zhēng)劑的等量PBS一同在聚苯乙烯試管中溫育。于室溫下溫育1小時(shí)后，將反應(yīng)混合物于冰浴下再放置15分鐘。然后將冰冷的DCC混懸液的等分試樣(600μl)加入至每個(gè)試管中，并經(jīng)略微混合2秒鐘后，將每個(gè)試管在冰浴下溫育10分鐘。然后將吸附于DCC的未結(jié)合配體通過(guò)離心(2,000×g，15min，4℃)除去，并且以液體閃爍分光光度計(jì)在2ml的ACS閃爍混合物中計(jì)算結(jié)合到SHBG的[3H]標(biāo)記的DHT的數(shù)量。將在每種競(jìng)爭(zhēng)劑濃度下結(jié)合至SHBG的[3H]標(biāo)記的DHT的平均量(B)表示為競(jìng)爭(zhēng)劑不存在時(shí)結(jié)合至SHBG的[3H]標(biāo)記的DHT的平均量(T)，并對(duì)每個(gè)試管中的競(jìng)爭(zhēng)劑濃度作圖。


圖1顯示以5α-二氫睪酮(DHT)、睪酮(T)、脫氫表雄酮(DHEA)、15α-羥睪酮(15α-OH-T)、15β-羥睪酮(15β-OH-T)為競(jìng)爭(zhēng)劑時(shí)，[3H]DHT從人SHBG中被置換的競(jìng)爭(zhēng)曲線。結(jié)果表示為在每種競(jìng)爭(zhēng)劑濃度下的結(jié)合(B)cpm/不存在競(jìng)爭(zhēng)劑時(shí)的總結(jié)合(T)cpm的百分比。
競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合試驗(yàn)的結(jié)果如圖1所示。數(shù)據(jù)顯示，在以[3H]DHT作為標(biāo)記配體的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合試驗(yàn)中，當(dāng)與DHT、T或DHEA相比時(shí)，15α-OH-T和15β-OH-T不與人SHBG結(jié)合。因此，與其它雄激素相比，15α-OH-T或15β-OH-T與人SHBG的結(jié)合可以忽略不計(jì)。
權(quán)利要求
1.一種用于口服、透粘膜或透皮給藥的藥物劑量單位，其包含至少10μg雄性甾體化合物以及藥物學(xué)可接受的賦形劑，其中所述雄性甾體化合物選自15-羥睪酮、16-羥睪酮、其前體以及這些羥睪酮和/或其前體的混合物。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物劑量單位，其中所述甾體化合物選自15α-羥睪酮、15β-羥睪酮、16β-羥睪酮、其前體以及這些羥睪酮和/或其前體的混合物。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物劑量單位，其中所述甾體化合物選自15α-羥睪酮、15β-羥睪酮、其前體以及這些羥睪酮和/或其前體的混合物。
4.如權(quán)利要求3所述的藥物劑量單位，其中所述甾體化合物選自15α-羥睪酮、其前體以及15α-羥睪酮和/或其前體的混合物。
5.如權(quán)利要求3所述的藥物劑量單位，其中所述甾體化合物選自15β-羥睪酮、其前體以及15β-羥睪酮和/或其前體的混合物。
6.如權(quán)利要求2所述的藥物劑量單位，其中所述甾體化合物選自16β-羥睪酮、其前體以及16β-羥睪酮和/或其前體的混合物。
7.如權(quán)利要求1至6之一所述的藥物劑量單位，其中所述羥睪酮的前體是其中至少一個(gè)羥基的氫原子被以下基團(tuán)所取代的羥睪酮衍生物1-25個(gè)碳原子的烴羧酸、磺酸或氨基磺酸的?；凰臍溥秽?；四氫吡喃基；或每個(gè)殘基包含1-20個(gè)糖苷單位的直鏈或支鏈糖苷殘基。
8.如權(quán)利要求1至7之一所述的藥物劑量單位，其中所述劑量單位是口服劑量單位。
9.如權(quán)利要求8所述的藥物劑量單位，其中所述劑量單位是片劑、膠囊劑、扁囊劑、小球、丸劑、散劑或顆粒劑。
10.如權(quán)利要求1至9之一所述的藥物劑量單位，其中所述劑量單位包含20μg-1000mg、優(yōu)選40μg-500mg的雄性甾體化合物。
11.如權(quán)利要求1至10之一所述的藥物劑量單位，其中所述劑量單位還包含至少10μg的孕激素和/或至少10μg的雌激素。
12.如權(quán)利要求1至11之一所述的藥物劑量單位，其中所述藥物劑量單位用于治療性或預(yù)防性地治療哺乳動(dòng)物的方法中，所述方法包括向所述哺乳動(dòng)物口服、透粘膜或透皮給藥該劑量單位。
13.如權(quán)利要求12所述的藥物劑量單位，其中所述方法包括向所述哺乳動(dòng)物口服給藥該劑量單位。
14.如權(quán)利要求12或13所述的藥物劑量單位，其中所述方法包括以每公斤體重0.5μg-1.5mg、優(yōu)選每公斤體重1μg-1mg范圍內(nèi)的劑量給藥該甾體化合物。
15.如權(quán)利要求12至14之一所述的藥物劑量單位，其中所述藥物劑量單位用于以下方法中治療或預(yù)防雄激素缺乏的方法；激素避孕法；治療或預(yù)防HIV感染的個(gè)體中的消耗性綜合征、由逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物引起的脂肪代謝障礙、不健康或疲勞的方法；逆轉(zhuǎn)由慢性疾病、手術(shù)介入、腫瘤疾病、外傷和/或營(yíng)養(yǎng)不良引起的異化狀態(tài)的方法；治療或預(yù)防細(xì)胞毒性化療后引起的萊迪希氏細(xì)胞功能紊亂和生殖上皮損傷的方法；在細(xì)胞毒性化療或放療期間或之后治療或預(yù)防疲勞或維持體重、血紅蛋白或嗜中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法；治療或預(yù)防良性婦科失調(diào)的方法；改善性欲的方法；治療或預(yù)防青春期延緩的方法；或維持女性向男性轉(zhuǎn)變的方法。
16.選自15-羥睪酮、16-羥睪酮、其前體以及這些羥睪酮和/或其前體的混合物中的雄性甾體化合物在制備口服、透粘膜或透皮劑量單位中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含15－或16－位取代的睪酮類似物的用于口服、透粘膜或透皮給藥的藥物劑量單位，以及使用這些睪酮類似物的治療方法。更具體而言，本發(fā)明涉及這種至少包含10μg雄性甾體化合物以及藥物學(xué)可接受的賦形劑的藥物劑量單位，該雄性甾體化合物選自15－羥睪酮、16－羥睪酮、其前體和這些羥睪酮和/或其前體的混合物。術(shù)語(yǔ)“15－羥睪酮”涵蓋15α－羥睪酮(15α，17β－二羥基－4－雄烯－3－酮)和15β－羥睪酮(15β，17β－二羥基－4－雄烯－3－酮)兩者。類似地，術(shù)語(yǔ)“16－羥睪酮”涵蓋16α－羥睪酮(16α，17β－二羥基－4－雄烯－3－酮)和16β－羥睪酮(16β，17β－二羥基－4－雄烯－3－酮)兩者。本發(fā)明雄性甾體化合物可有利地用于如治療或預(yù)防雄激素缺乏的方法或激素避孕法中。
文檔編號(hào)A61K31/565GK1694710SQ03824890
公開日2005年11月9日 申請(qǐng)日期2003年9月5日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月5日
發(fā)明者埃弗特·約翰內(nèi)斯·本舍滕, 赫爾曼·揚(yáng)·逖杰曼·科林格本寧克, 勒內(nèi)·弗朗克·范德林登 申請(qǐng)人:潘培希生物科學(xué)股份有限公司