專利名稱：腫瘤易感性增加的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)腫瘤易感性增加的方法，該方法是通過(guò)特異性檢測(cè)人的鼠雙微體-2(MDM2)基因外顯子12的354A→G位置的多態(tài)性來(lái)實(shí)現(xiàn)的。所述多態(tài)性是代表人類罹患腫瘤風(fēng)險(xiǎn)增加的遺傳性標(biāo)記物。本發(fā)明還涉及利用所述腫瘤易感性標(biāo)記物來(lái)開發(fā)體外及體內(nèi)檢測(cè)系統(tǒng)，該系統(tǒng)以特定的方式將所述標(biāo)記物整合入診斷、預(yù)防以及可能的治療方法中。
背景技術(shù)：
MDM2基因首先在自發(fā)性轉(zhuǎn)化的3T3DM小鼠細(xì)胞系的雙微染色體中被鑒定。已知該基因產(chǎn)物MDM2能夠轉(zhuǎn)化小鼠纖維原細(xì)胞，從而導(dǎo)致不受控制的、誘發(fā)腫瘤的生長(zhǎng)。人類的MDM2基因位于12q13-14的染色體片段上，當(dāng)發(fā)現(xiàn)其為腫瘤抑制基因p53的重要的拮抗劑時(shí)，其得到了重視。二基因之間的相互調(diào)控是通過(guò)一個(gè)反饋環(huán)發(fā)生的，即，p53基因活化MDM2基因的轉(zhuǎn)錄，而所形成的MDM2基因反過(guò)來(lái)使得p53蛋白降解。MDM2蛋白對(duì)p53顯示出泛素連接酶的活性，后者為蛋白體降解的標(biāo)記。結(jié)果達(dá)到了對(duì)p53蛋白表達(dá)的精細(xì)調(diào)節(jié)，而這種調(diào)節(jié)對(duì)胚胎形成是必須的。因此，MDM2基因敲除的小鼠是必死的，但是如果它們不攜帶有功能性活化的p53基因時(shí)，則能夠存活。已知MDM2除了與p53腫瘤抑制劑相互作用外，還會(huì)影響其它的腫瘤抑制代謝途徑，即，Rb-E2F-p16INK4A/p19ARF代謝途徑。因此，MDM2可與Rb蛋白結(jié)合，阻止Rb介導(dǎo)的G1細(xì)胞周期停止，或者直接與轉(zhuǎn)錄因子E2F1/DP相互作用并誘導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)換進(jìn)入S期。由于MDM2對(duì)兩條腫瘤抑制途徑都具有負(fù)調(diào)節(jié)作用，而這兩條途徑對(duì)80％的腫瘤都有影響，且許多研究證明，MDM2蛋白具有致腫瘤性(tumourigenic)，因此該基因已經(jīng)成為基因治療的一個(gè)靶點(diǎn)。
概括說(shuō)來(lái)，MDM2的特異性區(qū)域能夠與諸如p53，CBP/p300，pRb，p73，E2F1，DP1等多種蛋白、核糖體L5核蛋白顆粒、以及p14ARF和RNA等多種物質(zhì)相互作用。MDM2對(duì)于腫瘤發(fā)生、細(xì)胞周期、以及凋亡等的特殊功能已經(jīng)在一些綜述中進(jìn)行了討論(Freedman et al.，1999，Momand et al.，2000，Juven-Gershon and Oren，1999)。
特別研究了MDM2在肉瘤(即，來(lái)源于間葉細(xì)胞的惡性腫瘤)中的作用。在惡性腫瘤中，肉瘤具有對(duì)MDM2最高的擴(kuò)增比率-20～30％。MDM2在轉(zhuǎn)基因小鼠中的過(guò)度表達(dá)導(dǎo)致了38％的肉瘤發(fā)生(與p53的數(shù)據(jù)無(wú)關(guān))。通過(guò)multivariate Cox回歸分析可以看出，肉瘤患者中MDM2的過(guò)度表達(dá)使得相關(guān)病人的生存率顯著降低(Würl et al.，1997)。
總的來(lái)說(shuō)，對(duì)于MDM2 mRNA或者M(jìn)DM2蛋白所影響的正常或者腫瘤特異性代謝途徑還所知甚少。對(duì)基因的功能進(jìn)行研究的一個(gè)途徑是分析遺傳變異的結(jié)果。但是，迄今為止，對(duì)于MDM2基因的遺傳變異，即，突變或者多態(tài)性等，只僅僅進(jìn)行了很少的研究。對(duì)文獻(xiàn)的廣泛搜索發(fā)現(xiàn)，這一主題僅有4篇相關(guān)出版物。其中包括對(duì)人原發(fā)性腫瘤的陰性發(fā)現(xiàn)(沒有發(fā)現(xiàn)基因變化)(Silva et al.，2000)、在MDM2的鋅指區(qū)域很少發(fā)生點(diǎn)突變和插入突變(Schlott et al.，1997)、在5’-未翻譯區(qū)域的一種多態(tài)性(Heighway et al.，1994)、以及在鋅指區(qū)域外顯子10的多態(tài)性(Taubert et al.，2000)。這一多態(tài)性被確定為專門針對(duì)軟組織肉瘤(與健康對(duì)照受試者的多態(tài)性等位基因頻率相比較)。該多態(tài)性與存活率降低的趨勢(shì)相關(guān)(有多態(tài)性的患者的存活率38個(gè)月；無(wú)多態(tài)性的患者的存活率57個(gè)月)。
本發(fā)明的目的在于鑒別與腫瘤相關(guān)的人MDM2基因的突變或多態(tài)性，并確定其與易患病體質(zhì)(predispositions)的相關(guān)性。從這些相關(guān)性出發(fā)，欲開發(fā)出針對(duì)這些易患病體質(zhì)的分子遺傳學(xué)診斷方法。其目的在于建立一個(gè)模型，從而可在外科手術(shù)以及藥物上都能進(jìn)行預(yù)防以及緩解治療。
本發(fā)明是基于這樣一種認(rèn)識(shí)，即發(fā)生在MDM2基因外顯子12密碼子354上的多態(tài)性A→G(GAA→GAG)(NM_002392序列的核苷酸1373)并不局限于軟組織肉瘤，而是與多種惡性腫瘤的發(fā)病傾向相關(guān)，并且，令人驚奇的，該多態(tài)性具有遺傳特性，即，其保存于胚芽系中。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該多態(tài)性與某些上皮來(lái)源的實(shí)體瘤(前列腺實(shí)體瘤)具有相關(guān)性的傾向，但其并不局限于這些，它還對(duì)更多的實(shí)體瘤以及血液腫瘤的易感性具有關(guān)鍵性的作用。
本發(fā)明是按照權(quán)利要求書來(lái)實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明涉及一種檢測(cè)腫瘤易感性的方法，該方法的特征在于受試個(gè)體的核酸被分離，在外顯子12的354位的堿基變換A→G(GAA→GAG)的幫助下，人MDM2基因序列被確定基因型(genotyped)，并且可通過(guò)高通量過(guò)程對(duì)該多態(tài)性基因座(在純合體和雜合體間有區(qū)別)的等位基因數(shù)據(jù)進(jìn)行高特異性的、且非常敏感的有效確定。
可通過(guò)測(cè)序或其它適宜檢測(cè)點(diǎn)突變的方法來(lái)檢測(cè)基因分型。這些方法包括PCR所支持的基因分型方法，例如，等位基因特異性的PCR；使用寡核苷酸的其它基因分型方法(例如，點(diǎn)印跡或者寡核苷酸連接試驗(yàn)(OLA))；使用限制性酶的方法以及通過(guò)基質(zhì)輔助的激光離子化脫附游離質(zhì)譜(MALDI)進(jìn)行的單核苷酸多態(tài)性(SNP)分析；以及理論上用于變異性檢測(cè)的任意方法，其中包括任意技術(shù)方案的基因芯片技術(shù)。
基于上述研究，本發(fā)明的方法適于檢測(cè)廣譜的易患不同疾病的體質(zhì)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，該方法通過(guò)檢測(cè)354位的多態(tài)性A→G的純合性或雜合性來(lái)作為具有潛在腫瘤易感性的遺傳傾向性的標(biāo)準(zhǔn)，尤其適用于患者及其后代的罹患腫瘤的遺傳傾向性的標(biāo)準(zhǔn)。
在一個(gè)優(yōu)選的突變株中，通過(guò)檢測(cè)多態(tài)性的純合性或雜合性，該方法被用作對(duì)上皮組織實(shí)體瘤，例如前列腺癌(PCa)、乳腺癌、宮頸癌和/或卵巢癌等的腫瘤易感性的遺傳傾向性的標(biāo)準(zhǔn)。該方法尤其適用于檢測(cè)對(duì)前列腺癌的腫瘤易感性。
由此為分子生物學(xué)診斷專家提供了一個(gè)通用的遺傳性腫瘤標(biāo)記物。
根據(jù)本發(fā)明，通過(guò)檢測(cè)某一單模標(biāo)本的純合性或者雜合性，可以為其遺傳傾向提供有價(jià)值的陳述。由此可根據(jù)分子遺傳學(xué)提供遺傳學(xué)建議。
此外，該多態(tài)性的鑒定可能作為治療的診斷基礎(chǔ)。
可利用分離的核苷酸進(jìn)行檢測(cè)，也可使用DNA或者RNA?？衫帽绢I(lǐng)域公知的手段將分離的RNA轉(zhuǎn)錄為mRNA或者cDNA。此后，對(duì)DNA進(jìn)行測(cè)序。
根據(jù)上述知識(shí)，通過(guò)使用突變的核苷DNA序列，可以根據(jù)本發(fā)明開發(fā)出新的治療劑，該治療劑通過(guò)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄、翻譯以及影響其效率而影響MDM2基因的通路并攻擊MDM2基因(或與之相關(guān)的基因)，優(yōu)選采用調(diào)節(jié)表達(dá)的方式。
影響MDM2基因的一些基因通路是已知的。例如，它們包括·P53-p14·Rb-p161NK4A/p19ARF-E2F·Mdr-1。
優(yōu)選開發(fā)出作用于人MDM2基因，并攻擊該基因外顯子12的354位A→G的治療劑。
此外，本發(fā)明還開發(fā)了體外和體內(nèi)檢測(cè)系統(tǒng)。這些檢測(cè)系統(tǒng)表達(dá)外顯子12的354位A→G突變的人MDM2基因序列，可將該序列用于檢測(cè)與MDM2相關(guān)的疾病，并且可開發(fā)檢測(cè)個(gè)體特異性治療劑。
對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，這些檢測(cè)系統(tǒng)是公知的，它們可以是細(xì)胞系、異種移植物、以及其它動(dòng)物模型等。
下面采用對(duì)前列腺癌(PCa)的腫瘤易感性的檢測(cè)為例，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，但下述說(shuō)明并非為了對(duì)本發(fā)明做出限制。
對(duì)從泌尿道腫瘤患者手術(shù)前所選取的血液DNA樣品進(jìn)行分析，其中與德國(guó)正常人群相比，被診斷患有原發(fā)性前列腺癌、具有家族性既往病史(未表明該家族中的前列腺癌)、且已進(jìn)行相應(yīng)的治療(主要為治療處理的目的對(duì)局部前列腺癌進(jìn)行前列腺切除；對(duì)個(gè)別激素難控制的前列腺癌患者采用化療)的病人MDM2的354位(外顯子12)SNP A→G的雜合性要更高。
在進(jìn)一步的研究中，在229個(gè)受檢測(cè)DNA樣品中，清楚地檢測(cè)到31個(gè)樣品具有多態(tài)性(13.5％)。由該數(shù)字可以清楚地看出，MDM2的多態(tài)性比率要比正常人群高1倍(假設(shè)在對(duì)照個(gè)體中檢測(cè)了雜合性比率，對(duì)照個(gè)體為健康年輕的正常人群，也包括具有非傾向性可確定的前列腺癌風(fēng)險(xiǎn)的男性個(gè)體)。這一結(jié)果表示對(duì)偶發(fā)性前列腺癌患者來(lái)說(shuō)，雜合子基因座是可能的腫瘤易感性因子。
有趣的是，還發(fā)現(xiàn)，在晚期PCa患者的兩個(gè)DNA樣品中，得到了純合子等位基因的結(jié)果(兩個(gè)等位基因都為354位(外顯子12)的多態(tài)性A→G)。
當(dāng)在分子篩選中使用HTS來(lái)檢測(cè)待研究MDM2基因座的個(gè)體特異性等位基因數(shù)據(jù)時(shí)，可能解決現(xiàn)存的問(wèn)題。確定待研究的MDM2的多態(tài)性，是通過(guò)與病人DNA中所存在的純合或者雜合子的高靈敏性以及確切類型相聯(lián)系。選定的方法學(xué)操作簡(jiǎn)單快速，具有高度的可重復(fù)性以及穩(wěn)定性。
由上可知，該方法可高度綜合地與有核血細(xì)胞的全自動(dòng)化DNA提取相關(guān)，并且可能用于全自動(dòng)分離或者用于分子樣品的制備。優(yōu)選的檢測(cè)方法是基于DNA ELISA，以及接下來(lái)的在96孔格式中對(duì)雜交結(jié)果的間接酶學(xué)檢測(cè)。但是，這一優(yōu)選的DNA ELISA實(shí)施方案不應(yīng)被限制在對(duì)待研究的MDM2基因座的分子篩選方法中。在優(yōu)選的實(shí)施方案(DNA ELISA)中，利用從待研究患者的血液樣品中預(yù)先分離的基因組DNA來(lái)生成雙鏈DNA片段，將該片段采用PCR技術(shù)與待測(cè)MDM2基因座的側(cè)邊相聯(lián)(flank)。用于PCR的初始對(duì)含有一引物，該引物在5’位置被生物素化。由此所生成的PCR片段在擴(kuò)增后也被生物素化。接著將該P(yáng)CR片段轉(zhuǎn)移至鏈霉抗生素(streptavidin)包被的96孔微檢測(cè)板中，通過(guò)生物素化與板的表面共價(jià)連接。通過(guò)加入NaOH溶液使與板面結(jié)合的雙鏈DNA片段變性，通過(guò)洗滌去除未結(jié)合的DNA單鏈。接下來(lái)共價(jià)結(jié)合的DNA單鏈作為MDM2的基因型堿基互補(bǔ)雜交反應(yīng)的靶序列。然后用兩個(gè)FITC-標(biāo)記的寡核苷酸探針/擴(kuò)增樣品在各種情況下進(jìn)行雜交，寡核苷酸探針/擴(kuò)增樣品在所研究的MDM2基因座兩種可能的MDM2等位基因突變體都具有堿基互補(bǔ)性。該雜交反應(yīng)通過(guò)與酶偶聯(lián)的抗-FITC抗體反應(yīng)以及接下來(lái)的底物轉(zhuǎn)化而被間接酶學(xué)檢測(cè)。所存在的等位基因情況通過(guò)反應(yīng)完成后對(duì)相應(yīng)孔的顏色變化或者亮度的檢測(cè)進(jìn)行鑒別。以顏色為基礎(chǔ)，可能清楚地鑒別具有純合子或者雜合子特性的存在。該方法可能用一個(gè)96孔板同時(shí)研究48個(gè)患者的DNA。已經(jīng)通過(guò)大量研究的樣品以及一系列空白對(duì)照的研究證實(shí)了該方法的可重復(fù)性以及穩(wěn)定性。在附加的DNA序列的幫助下，已經(jīng)對(duì)一系列樣品的DNA ELISA生成的結(jié)果進(jìn)行了清楚的驗(yàn)證。
對(duì)所有顯著性的樣品以及典型數(shù)量的非顯著性樣品的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行重新評(píng)價(jià)，采用不同的識(shí)別檢測(cè)系統(tǒng)(直接PCR DNA測(cè)序，ALF Express，PharmaciaBiotech)得到了100％的確認(rèn)。
此外，在進(jìn)一步的空白實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)相關(guān)以及非相關(guān)實(shí)驗(yàn)系列確定了同一檢測(cè)個(gè)體的多個(gè)DNA等分以及陰性對(duì)照。該研究還得到了定性結(jié)果的完全匹配，該定性結(jié)果強(qiáng)調(diào)了所選用的檢測(cè)方法的靈敏性。進(jìn)一步的研究目前正在進(jìn)行中，該項(xiàng)研究對(duì)400多位可檢測(cè)的偶發(fā)性前列腺癌患者進(jìn)行了確定的數(shù)理統(tǒng)計(jì)分析。
對(duì)于其它類型腫瘤的實(shí)驗(yàn)證實(shí)了該基因多態(tài)性的發(fā)生與上皮細(xì)胞實(shí)體瘤發(fā)生率的升高的關(guān)系。例如，在32個(gè)所研究的患有乳腺癌、宮頸癌或者卵巢癌的血液DNA樣品中，其中有5例(15.6％)證實(shí)具有雜合MDM2等位基因的情況。
為了證實(shí)所述PCR-ELISA檢測(cè)結(jié)果的特異性，對(duì)于在多態(tài)性MDM2基因座具有已知等位基因情況的分組人口個(gè)體進(jìn)行了重新評(píng)價(jià)。此外，通過(guò)增加對(duì)照組來(lái)確定正常人群中的精確的雜合體頻率(在該方案中描述的所有DNA樣品來(lái)自健康對(duì)照個(gè)體以及Saxony和Saxony-Anhalt在1996-2001的腫瘤患者，并且樣品的獲得都得到了患者的書面同意，且制備的DNA樣品為匿名保存)。DNA樣品完全從經(jīng)過(guò)嚴(yán)格納入標(biāo)準(zhǔn)選擇的供血者中獲得(在供血時(shí)以及供血之前沒有腫瘤疾患的癥狀，無(wú)已知的家族性疾病，且不論在工作地點(diǎn)或者在家都未暴露于輻射或者其它致突變/致癌性物質(zhì))。
對(duì)于正常個(gè)體的108例血液DNA樣品，Taubert et al.(2000)已經(jīng)通過(guò)測(cè)序和限制性消化等手段對(duì)其中的一定比例樣品獨(dú)立進(jìn)行了MDM2多態(tài)性的研究，所有當(dāng)時(shí)檢測(cè)為雜合DNA的樣品已經(jīng)通過(guò)PCR-ELISA進(jìn)行了清楚的證實(shí)。此外，對(duì)已有研究的WTS組織的31個(gè)DNA樣品進(jìn)行研究已經(jīng)證實(shí)了100％的特異性。另外，在這些WTS患者中的一些(n＝6)，腫瘤組織DNA顯示出MDM2的多態(tài)性，對(duì)其相應(yīng)的DNA血液樣品進(jìn)行分析，也發(fā)現(xiàn)其為陽(yáng)性。由此可以看出，WTS患者組織DNA樣品的多態(tài)性檢測(cè)高度可能為遺傳性的，即，該多態(tài)性在生殖細(xì)胞系中是保守的。
在歐洲中部男性經(jīng)常罹患的癌癥疾病中，前列腺癌(PCa)排名第二，并且由于近年增加迅速，因此引起了重視。在美國(guó)，其已經(jīng)成為最常檢測(cè)出的腫瘤類型，并且為肺癌之后的腫瘤相關(guān)病死率最高的實(shí)體瘤。在80％的情況下，該疾病在65歲以上的男人中診斷出。盡管局部的前列腺癌可以通過(guò)切除前列腺治愈，但是對(duì)于在局部發(fā)展且伴有轉(zhuǎn)移的腫瘤則幾乎不可能得到治療。對(duì)于腫瘤轉(zhuǎn)移病人的三年存活率僅為40％。對(duì)于前列腺癌，轉(zhuǎn)移通過(guò)血流和淋巴管進(jìn)行傳播。淋巴轉(zhuǎn)移的最初侵襲位置為骨盆淋巴結(jié)。血液微轉(zhuǎn)移主要影響骨骼系統(tǒng)，最主要的為骨盆、脊骨、以及肝和肺等個(gè)體器官。對(duì)于有轉(zhuǎn)移的前列腺癌，手術(shù)和藥物治療的目的在于抑制睪丸激素的形成和作用，該睪丸激素是前列腺以及前列腺癌細(xì)胞增殖的主要原因。因此，對(duì)于腫瘤階段的正確確定，即，該腫瘤是局部的還是已經(jīng)發(fā)展為擴(kuò)散性，對(duì)確定接下來(lái)的治療形式是絕對(duì)必要的。在前列腺癌的最初診斷中，目前使用的檢測(cè)方法為直腸指診、血清中腫瘤標(biāo)記物PSA(前列腺特異性抗原)的檢測(cè)、對(duì)取出的或組織切片進(jìn)行組織病理學(xué)檢查、個(gè)別情況下對(duì)骨盆的淋巴結(jié)摘除進(jìn)行檢查、并可選擇性進(jìn)行MRT及CT或者骨閃爍掃描法。但是，直到現(xiàn)在，還無(wú)法檢測(cè)血液中或者淋巴結(jié)中最初轉(zhuǎn)移的生成(血液中擴(kuò)散的前列腺癌細(xì)胞、區(qū)域性淋巴結(jié)的低入侵)，而對(duì)淋巴結(jié)僅可能在術(shù)后通過(guò)組織病理學(xué)檢查?？捎糜谛g(shù)前檢測(cè)的影像學(xué)技術(shù)(CT，MRT)靈敏性很低，僅為22-26％，且僅能檢測(cè)廣泛轉(zhuǎn)移的病例。由于轉(zhuǎn)移的發(fā)展明顯依賴于腫瘤所處的階段、腫瘤的體積以及腫瘤等級(jí)，因此除了組織學(xué)區(qū)別(Gleason評(píng)分)，上述這些也是確定患者預(yù)后情況的重要因素。
除了直腸指診，腫瘤標(biāo)記物PSA(前列腺特異性抗原)的檢測(cè)也是前列腺癌早期診斷所用的一種高選擇性和靈敏的標(biāo)準(zhǔn)方法。但是，前列腺特異性抗原并非是前列腺的癌癥特異性標(biāo)記物，而僅為組織特異性的標(biāo)記物。PSA血清值的增加暗示了PCa的存在。通過(guò)PSA來(lái)區(qū)分BPH和腫瘤，在2-10ng/ml范圍內(nèi)是非常難于區(qū)分的，這是由于隨著年齡的增長(zhǎng)BPH發(fā)作更頻繁，隨著年齡的增加，由于前列腺的自然增大使PSA值也會(huì)增加。PSA的表達(dá)受到睪丸激素和二氫睪酮(DHT)的調(diào)節(jié)。在對(duì)患者給予激素(抑制睪丸激素和二氫睪酮的作用)時(shí)，血清中PSA水平降低。
PCa對(duì)于健康保健具有重要作用(尤其對(duì)于西方工業(yè)化國(guó)家)，因此，由于缺少腫瘤特異性標(biāo)記物以及已知的腫瘤生物學(xué)和腫瘤細(xì)胞異種性，需要對(duì)PCa進(jìn)行深入的臨床研究，該研究集中于鑒別偶發(fā)性以及遺傳性PCa的遺傳性以及外成性輔助因子。尤其在美國(guó)，對(duì)PCa發(fā)生率增加的家族進(jìn)行了表征，將人類基因?qū)W研究(家族相關(guān)性的)深入到PCa。
本發(fā)明公開了一種普遍適用的遺傳性腫瘤標(biāo)記物，該標(biāo)記物在MDM2外顯子12的354位具有A→G(GAA→GAG)的多態(tài)性，該標(biāo)記物尤其適用于前列腺癌。研究已經(jīng)表明該多態(tài)性與PCa具有精確的相關(guān)性。通過(guò)檢測(cè)該多態(tài)性，可能對(duì)PCa的遺傳傾向進(jìn)行更清楚地描述，并可能用于臨床。
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權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)對(duì)腫瘤具有易感性的方法，其特征在于分離受試個(gè)體的核酸，對(duì)人MDM2基因，采用外顯子12中354位的堿基交換A→G(GAA→GAG)進(jìn)行基因分型，用該方法來(lái)確定該多態(tài)性基因座的等位基因情況。
2.權(quán)利要求1的方法，其特征在于，將純合或雜合多態(tài)性(突變)的檢測(cè)用作腫瘤易感性的遺傳傾向性的充分標(biāo)準(zhǔn)。
3.權(quán)利要求1或2的方法，其特征在于將純合或雜合多態(tài)性(突變)的檢測(cè)用作受試者及其后代罹患腫瘤風(fēng)險(xiǎn)的遺傳傾向性的充分標(biāo)準(zhǔn)。
4.權(quán)利要求1至3任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于將純合或雜合多態(tài)性(突變)的檢測(cè)用作前列腺癌、乳腺癌、宮頸癌和/或卵巢癌的腫瘤易感性的充分標(biāo)準(zhǔn)。
5.權(quán)利要求1至4任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于通過(guò)對(duì)DNA進(jìn)行測(cè)序或者通過(guò)其它適于檢測(cè)點(diǎn)突變的方法來(lái)進(jìn)行基因分型。
6.權(quán)利要求1至5任意一項(xiàng)所述的方法，其特征在于通過(guò)多個(gè)高特異性的擴(kuò)增引物以及標(biāo)記的雜交探針的DNA-ELISA來(lái)進(jìn)行基因分型。
7.一種治療劑，該治療劑通過(guò)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄、翻譯以及影響其效率，優(yōu)選通過(guò)調(diào)節(jié)表達(dá)來(lái)影響MDM2基因的通路和/或攻擊MDM2基因外顯子12中354位的多態(tài)性A→G(GAA→GAG)、或與之相關(guān)的基因。
8.一種治療劑，該治療劑通過(guò)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄、翻譯以及影響其效率，優(yōu)選通過(guò)調(diào)節(jié)表達(dá)，作用于人MDM2基因并攻擊MDM2基因外顯子12中354位A→G(GAA→GAG)的位點(diǎn)變化。
9.一種體外及體內(nèi)檢測(cè)系統(tǒng)，該檢測(cè)系統(tǒng)表達(dá)人MDM2基因，該MDM2基因在外顯子12的354位具有A→G(GAA→GAG)突變(多態(tài)性)，所述檢測(cè)系統(tǒng)用于研究與MDM2相關(guān)的疾病以及用于開發(fā)檢測(cè)個(gè)體特異性治療劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)腫瘤易感性增加的方法，該方法是通過(guò)特異性檢測(cè)人的鼠雙微體－2(MDM2)基因外顯子12的354 A→G位置的多態(tài)性來(lái)實(shí)現(xiàn)的。所述多態(tài)性是代表人類罹患腫瘤風(fēng)險(xiǎn)增加的遺傳性標(biāo)記物。本發(fā)明還涉及利用所述腫瘤易感性標(biāo)記物來(lái)開發(fā)體外及體內(nèi)檢測(cè)系統(tǒng)，該系統(tǒng)以特定的方式將所述標(biāo)記物整合入診斷、預(yù)防以及可能的治療方法中。
文檔編號(hào)A61P13/08GK1662661SQ03814029
公開日2005年8月31日 申請(qǐng)日期2003年6月16日 優(yōu)先權(quán)日2002年6月18日
發(fā)明者阿克塞爾·梅耶, 黑爾格·陶貝特, 蒂莫·希勒布蘭德, 彼得·本扎科, 卡塔琳娜·克呂格爾, 馬蒂亞斯·卡普勒, 曼弗雷德·維爾特 申請(qǐng)人:英維泰克生物技術(shù)和生物設(shè)計(jì)有限公司