專利名稱：有彈性蛋白酶抑制活性的雜環(huán)化合物及其中間體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥劑、尤其一種有彈性蛋白酶抑制活性的新穎雜環(huán)化合物、其中間體、和含有所述新穎化合物作為有效成分的彈性蛋白酶抑制劑。
背景技術(shù)：
彈性蛋白酶是能使構(gòu)成結(jié)締組織的彈性蛋白降解的蛋白酶的總稱。嗜中性彈性蛋白酶、胰彈性蛋白酶、金屬?gòu)椥缘鞍酌傅染褪且阎獮閺椥缘鞍酌傅?。前兩種是結(jié)構(gòu)上類似的蛋白酶，而且對(duì)底物有類似的特異性。
嗜中性彈性蛋白酶是嗜中性細(xì)胞顆粒含有的絲氨酸蛋白酶。在患有感染性疾病或炎性疾病的情況下，組織中累積的嗜中性細(xì)胞釋放出大量嗜中性彈性蛋白酶。該嗜中性彈性蛋白酶會(huì)使肺、軟骨、脈管壁等各種組織中構(gòu)成間質(zhì)的蛋白例如彈性蛋白、膠原、蛋白多糖、纖連蛋白等降解。也知道的是，嗜中性彈性蛋白酶參與其它各種蛋白質(zhì)的降解和細(xì)胞的損傷。通常，嗜中性彈性蛋白酶的活性并未受到內(nèi)生蛋白酶抑制劑例如α1-蛋白酶抑制劑等的控制而呈過(guò)量。然而，可以認(rèn)為，在劇烈炎癥發(fā)生的組織中，隨著嗜中性細(xì)胞分泌的嗜中性彈性蛋白酶的數(shù)量增多和內(nèi)生蛋白酶抑制劑因該區(qū)域中產(chǎn)生的反應(yīng)性氧種而失活，嗜中性彈性蛋白酶作用過(guò)度，因而使該組織受傷。因此，人們一直希望有一種有嗜中性彈性蛋白酶抑制活性的藥劑。
嗜中性彈性蛋白酶參與的疾病包括慢性阻塞性肺部疾病(包括肺氣腫和慢性支氣管炎)、慢性和急性間質(zhì)肺炎、自發(fā)性間質(zhì)肺炎(IIP)、彌散性泛細(xì)支氣管炎、囊性肺纖維變性、急性肺損傷(ALI)/急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)、支氣管擴(kuò)張、哮喘、胰腺炎、腎炎、肝炎(肝衰竭)、慢性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)硬化、骨關(guān)節(jié)病、牛皮癬、牙周病、動(dòng)脈粥樣硬化、器官移植排異、局部缺血/再輸注引起的組織受傷、休克、敗血病、凝血病包括播散性血管內(nèi)凝固(DIC)和深度靜脈血栓形成、結(jié)膜炎、角膜炎、角膜潰瘍、節(jié)段性回腸炎、全身性紅斑狼瘡等。
進(jìn)而，胰彈性蛋白酶原來(lái)是一種外分泌消化酶，但可以認(rèn)為，在胰腺炎的情況下，胰彈性蛋白酶參與了胰腺組織的損傷，因?yàn)橛凶泽w溶解發(fā)生。
因此，盡管人們認(rèn)為嗜中性彈性蛋白酶(和胰腺炎中的胰彈性蛋白酶)參與各種慢性的或急性的疾病，但目前只有少數(shù)化合物顯示出經(jīng)口給藥的實(shí)用彈性蛋白酶抑制活性并適用于其慢性疾病。因而，人們認(rèn)為，有經(jīng)口活性的彈性蛋白酶抑制劑作為這些疾病的治療劑或預(yù)防劑是有效的。
在這樣的期待下，已經(jīng)報(bào)告了各種彈性蛋白酶抑制劑。例如，在歐洲專利公報(bào)A 189305中，公開(kāi)了很多種有彈性蛋白酶抑制活性的化合物。在所述專利公報(bào)的權(quán)利要求1中，描述了以下通式(A-1)(對(duì)應(yīng)于所述專利公報(bào)的式Ib)所代表的化合物 其中，在以上式(A-1)中，R1是C1-C5烷基(見(jiàn)所述公報(bào)P240)，R2是一種選自C1-C10烷基等的基團(tuán)(見(jiàn)所述公報(bào)p241)，R4是氫等(見(jiàn)所述公報(bào)p259)，A是-CO-等(見(jiàn)所述公報(bào)p259)，且n是1等(見(jiàn)所述公報(bào)p259)。
當(dāng)將以上R1、R2、R4、A和n的定義運(yùn)用于上式(A-1)時(shí)，可以寫(xiě)出下式 順便提一下，式(A-2)中的R3定義于所述專利公報(bào)p245～259。盡管這個(gè)定義不十分明確，但所述專利公報(bào)p258描述的項(xiàng)(VIII)中R3的定義相對(duì)地涉及以下提到的本發(fā)明化合物。即，項(xiàng)(VIII)中R3定義的“一種芳香族雜環(huán)基團(tuán)，含有(a)1～15個(gè)碳和1～4個(gè)雜原子，每個(gè)雜原子都獨(dú)立地選自硫、氮和氧組成的一組，和(b)1～3個(gè)五元環(huán)或六元環(huán)，其中至少一個(gè)環(huán)是芳香族的，且任選地其中該芳香族環(huán)的可多達(dá)3個(gè)碳可以在任何碳原子上有氟……組成的一組的一個(gè)成員取代，且進(jìn)一步的先決條件是，任何一個(gè)氮都可以有一個(gè)含有1～6個(gè)碳的烷基取代，先決條件是當(dāng)A是OCO或NHCO時(shí)A必須連接到該芳香族雜環(huán)的一個(gè)碳上”。
然而，在所述專利公報(bào)p260的先決條件(3)中，其定義是無(wú)任何雜原子可以直接連接到硫、氮或氧上。從這個(gè)定義判斷，清楚的是，以下提到的本發(fā)明化合物并不包括在其中。進(jìn)而，在所述專利公報(bào)中根本沒(méi)有描述其(A-2)中的R3對(duì)應(yīng)于以上項(xiàng)(VIII)的具體化合物。
此外，在J.Med.Chem.，1997，40，1876-1885中，描述了所述專利公報(bào)的式(A-2)所包括的化合物，并描述了以下化合物作為相對(duì)地類似于本發(fā)明化合物的化合物 式中R是2-吡啶基羰基、3-吡啶基羰基、4-吡啶基羰基或4-咪唑羰基。
盡管式中R是2-吡啶基羰基的化合物在以上論文的表2(p1880)中顯示出弱活性，但據(jù)報(bào)告這些化合物在經(jīng)口給藥方式中是失活的(p1879，右欄第9～10行)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要提供一種即使在經(jīng)口給藥中也有優(yōu)異彈性蛋白酶抑制活性的新穎化合物。
本發(fā)明者們進(jìn)行了廣泛研究并發(fā)現(xiàn)，通過(guò)在一種肽基·三氟甲基酮化合物的N-末端部分結(jié)合一種特定不飽和雜環(huán)基而制備的化合物，即使在經(jīng)口給藥中也顯示出優(yōu)異的彈性蛋白酶抑制活性。從而完成了本發(fā)明。
本發(fā)明涉及以下式(I)所代表的雜環(huán)化合物及其鹽 式中R1是一種下式代表的雜環(huán)基團(tuán) 式中A系指苯環(huán)的存在或不存在，X是氧原子、硫原子或NH，Y是氮原子或CH，所述雜環(huán)基團(tuán)可以有1～3個(gè)相同或不同的、選自下列組成的一組的取代基取代低級(jí)烷基，低級(jí)烷氧基，和可以有任選地有鹵原子取代的低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基或鹵原子取代的苯基；和R2和R3是氫原子或羥基，或者兩者可以合在一起形成一個(gè)氧代基，先決條件是兩者都不是氫原子。
本發(fā)明說(shuō)明性地提供一種以下式(I-a)所代表的雜環(huán)化合物及其鹽 式中R1同以上定義，和一種以下式(I-b)所代表的雜環(huán)化合物及其鹽
式中R1同以上定義，R2b和R3b是氫原子或羥基，先決條件是兩者都不是氫原子。
本發(fā)明也涉及一種包含以上通式(I-a)所代表的雜環(huán)化合物或其醫(yī)藥上可接受鹽的醫(yī)藥組合物，一種包含以上通式(I-a)所代表的雜環(huán)化合物或其醫(yī)藥上可接受鹽作為有效成分的彈性蛋白酶抑制劑，和一種因彈性蛋白酶活性提高而引起的疾病的治療方法，包含對(duì)患者給藥有效量的以上式(I-a)所代表的雜環(huán)化合物或其醫(yī)藥上可接受鹽。
以上通式(I-a)的化合物即使在經(jīng)口給藥中也有優(yōu)異的彈性蛋白酶抑制活性。下式所代表的部分結(jié)構(gòu)有很大貢獻(xiàn) 使得能顯示出本發(fā)明化合物(I-a)的如此優(yōu)異性能。即，所述雜環(huán)基團(tuán)必須含有一個(gè)氮原子，且所述氮原子直接與至少一個(gè)雜原子結(jié)合形成一個(gè)環(huán)。
因此，本發(fā)明化合物(I)的化學(xué)結(jié)構(gòu)的基本特征在于以上提到的特定部分結(jié)構(gòu)。本發(fā)明化合物(I)的化學(xué)結(jié)構(gòu)的第二特征在于以上特定部分結(jié)構(gòu)與該結(jié)構(gòu)其余部分的組合。
具體實(shí)施例方式
以下更詳細(xì)地解釋本發(fā)明的化合物(I)。
在以上通式(I)所代表的化合物中，式中R2和R3合在一起形成一個(gè)氧代基的化合物(I-a)和較好以下式(I-c)所代表的雜環(huán)化合物及其鹽
式中R1同以上定義，有優(yōu)異的彈性蛋白酶抑制活性。
進(jìn)而，在以上式(I-b)所代表的化合物中，式中R2和R3彼此不同而且是氫原子或羥基的化合物可作為直接中間體用于制備有彈性蛋白酶抑制活性的以上化合物(I-a)。式中R2和R3兩者都是羥基的化合物對(duì)應(yīng)于通過(guò)使一個(gè)水分子加成到化合物(I-a)上制備的化合物，而且使該化合物脫水(通過(guò)平衡反應(yīng))就生成化合物(I-a)。
雜環(huán)基團(tuán)在本發(fā)明的化合物中，下式所代表的雜環(huán)基 式中A、X和Y同以上定義包括例如異噁唑基、異噻唑基、1，2，3-噻二唑基、苯并[d]異噁唑基、吡唑基、苯并三唑基、苯并[3，4-d]1，2，3-噻二唑基、三唑基、1H-吲唑基等，較好異噁唑基、苯并[d]異噁唑基和吡唑基。
該雜環(huán)基團(tuán)上的取代基該雜環(huán)基團(tuán)上任選地結(jié)合的取代基包括低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、和苯基，該苯基可以有任選地有鹵素原子取代的低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基或鹵素原子取代。
該低級(jí)烷基系指直鏈或支鏈C1-6烷基、較好C1-4烷基。該低級(jí)烷基的實(shí)例是甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、新戊基、己基等。
該低級(jí)烷氧基系指直鏈或支鏈C1-6烷氧基、較好C1-4烷氧基。該低級(jí)烷氧基的實(shí)例是甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基等。
可以有任選地有鹵素原子取代的低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基或鹵素原子取代的苯基系指苯基和有1～5個(gè)以上低級(jí)烷基、有鹵素原子取代的以上低級(jí)烷基、以上低級(jí)烷氧基、或鹵素原子取代的苯基。該鹵素原子系指氟原子、氯原子、溴原子和碘原子。有鹵素原子取代的低級(jí)烷基系指其中以上低級(jí)烷基的至少一個(gè)(例如1～5個(gè)、較好1～3個(gè))氫原子被相同或不同的鹵素原子(氟原子、氯原子、溴原子、碘原子)所取代者。其實(shí)例是氯甲基、二氟甲基、三氯甲基、三氟甲基、2-溴乙基、2，2，2-三氟乙基、五氟乙基、3，3，3-三氟丙基、4，4，4-三氟丁基、5，5，5-三氟戊基、6，6，6-三氟己基等。
以下說(shuō)明所述苯基的實(shí)例苯基、甲苯基、二甲苯基、基、枯烯基、4-(叔丁基)苯基、4-氯苯基、3-氯苯基、2-氯苯基、2，3-二氯苯基、2，4-二氯苯基、3，4-二氯苯基、2，5-二氯苯基、2，6-二氯苯基、3，5-二氯苯基、2-氟苯基、3-氟苯基、4-氟苯基、2-溴苯基、3-溴苯基、4-溴苯基、2，4-二氟苯基、2，3-二氟苯基、2，5-二氟苯基、3，5-二氟苯基、3，4-二氟苯基、4-溴-2-氟苯基、2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、3，4-二甲氧基苯基、3-三氟甲基苯基、4-三氟甲基苯基、4-氯-2-甲氧基苯基、4-氯-3-甲氧基苯基、3-氯-4-甲氧基苯基、2-甲基-4-甲氧基苯基、4-甲基-3-氯苯基、3-甲基-4-氯苯基、3-氯-2-氟苯基、4-氯-2-氟苯基、2-氯-4-氟苯基、2-氯-6-氟苯基、3-氯-4-氟苯基、4-氯-2-氟苯基等。取代基的位置不受限制。
本發(fā)明化合物的R1中的所述雜環(huán)基可以有1～3個(gè)以上提到的取代基在該環(huán)的可能位置上，且當(dāng)該取代基的數(shù)目是2或3時(shí)每個(gè)基團(tuán)相同或不同。該取代基可以在構(gòu)成該雜環(huán)基的雜原子上。這些化合物列舉如下N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲酰基}吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)羧酰胺；N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基](苯并[d]異噁唑-3-基)羧酰胺；N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(4-甲基-1，2，3-噻二唑-5-基)羧酰胺；N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(3-乙基-5-甲基異噁唑-4-基)羧酰胺；N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲酰基}吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(5-甲基-1-苯基吡唑-4-基)羧酰胺；N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(3-甲氧基異噁唑-5-基)羧酰胺；N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲酰基}吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-[3-(甲基乙氧基)異噁唑-5-基]羧酸胺；N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲酰基}吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(5-甲基異噁唑-3-基)羧酰胺；N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(5，6-二甲基苯并[d]異噁唑-3-基)羧酰胺；N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-[1-(4-氯苯基)-5-甲基吡唑-4-基]羧酰胺；N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-[5-甲基-1-(4-甲氧基苯基)吡唑-4-基]羧酰胺；N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-[1-(2-氟苯基)-5-甲基吡唑-4-基]羧酰胺；和N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-{5-甲基-1-[4-(三氟甲基)苯基]吡唑-4-基}羧酰胺。
本發(fā)明化合物(I)的鹽沒(méi)有限定，但較好是一種醫(yī)藥上可接受鹽，例如，與一種有機(jī)堿如三甲胺、三乙胺、N-甲基嗎啉的鹽，和與一種無(wú)機(jī)金屬如鈉或鉀的鹽。進(jìn)而，本發(fā)明化合物中的若干種化合物與一種有機(jī)酸例如酒石酸、富馬酸、乙酸、乳酸、琥珀酸、甲磺酸、馬來(lái)酸、丙二酸、葡糖酸，或者一種氨基酸例如在天冬氨酸、或者一種無(wú)機(jī)酸例如鹽酸、磷酸等，形成一種酸加成鹽。
本發(fā)明化合物(I)可以呈一種水合物或一種溶劑合物的形式。進(jìn)而，本發(fā)明的化合物(I)以光學(xué)活性化合物、立體異構(gòu)體或其混合物的形式存在，它們?nèi)堪ㄔ诒景l(fā)明化合物中。
本發(fā)明化合物的制備工藝本發(fā)明的化合物是新穎的，可以例如用以下方法制備 式中，R1同以上定義。
步驟1步驟1是通過(guò)使化合物(II)與化合物(III)反應(yīng)來(lái)制備化合物(I-b’)的步驟。這個(gè)步驟是通過(guò)使化合物(II)和化合物(III)在一種堿例如三乙胺的存在下或不存在下、無(wú)溶劑或在一種溶劑例如吡啶、二氯甲烷或二甲基甲酰胺中攪拌混合來(lái)進(jìn)行的。這個(gè)步驟較好是在一種縮合劑例如鹽酸1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亞胺、N，N’-二環(huán)己基碳二亞胺、1，1’-羰基二咪唑或碳酸N，N’-二琥珀酰亞胺的存在下進(jìn)行。關(guān)于化合物(II)和(III)的數(shù)量比例，相對(duì)于每一摩爾化合物(II)而言，可以以0.9～2摩爾、較好0.9～1.5摩爾的數(shù)量使用化合物(III)。相對(duì)于每一摩爾化合物(II)而言，可以以1～2摩爾、較好1～1.5摩爾的數(shù)量使用該縮合劑。該反應(yīng)是在0～40℃、較好0～25℃進(jìn)行1～20小時(shí)、較好2～15小時(shí)的。
這樣得到的本發(fā)明化合物(I-b’)(OH化合物)是新穎的，并作為一種起始原料用于以下步驟2直接制備本發(fā)明的化合物(I-a)(酮化合物)，后者是新穎的而且可用來(lái)作為一種彈性蛋白酶抑制劑。
化合物(II)是已知的，可以例如用WO 00/52032中所述方法制備。化合物(III)的幾乎所有化合物都是已知的，但有一些是新穎的。所述新穎化合物是按照已知化合物的制備方法制備的。
步驟2步驟2是化合物(I-b’)的羥基氧化的步驟。該氧化可以通過(guò)使化合物(I-b’)與一種氧化劑在一種溶劑例如二氯甲烷、二甲基甲酰胺、四氫呋喃、乙酸乙酯或甲苯中反應(yīng)來(lái)進(jìn)行。
作為氧化劑，可以列舉一種碘苯衍生物，即Dess-Martin試劑。在這個(gè)使用Dess-Martin試劑的步驟，將化合物(I-b’)溶解于上述溶劑中，并向其中添加叔丁醇(1～2摩爾/化合物(I-b’))和Dess-Martin試劑(1.5～3摩爾、較好1.5～2.2摩爾/化合物(I-b’))。該反應(yīng)在約0～40℃進(jìn)行0.5～15小時(shí)、較好1～2小時(shí)。此外，在二甲基亞砜的存在下用五氧化二磷氧化、在二甲基亞砜的存在下用1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亞胺或鹽酸二氯乙酸(Cl2CHCOOH)N，N’-二環(huán)己基碳二亞胺氧化、以及用草酰氯和三乙胺的組合的氧化(Swern氧化)與能較好地進(jìn)行。
本發(fā)明的化合物是用慣常已知的分離和精制方法例如濃縮、溶劑萃取、過(guò)濾、重結(jié)晶、多種色譜法等從反應(yīng)混合物中分離出來(lái)的。
這樣得到的本發(fā)明化合物可以用慣常方式轉(zhuǎn)化成其鹽、或者可以進(jìn)行脫鹽。當(dāng)?shù)玫搅硕喾N異構(gòu)體時(shí)，這些異構(gòu)體是用慣常方式分離的。
化合物(I-a)的光學(xué)活性化合物可以通過(guò)使用化合物(II)的光學(xué)活性化合物作為起始原料而方便地制備。
本發(fā)明的彈性蛋白酶抑制劑在本發(fā)明的化合物(I)當(dāng)中，可用來(lái)作為彈性蛋白酶抑制劑的化合物是化合物(I-a)(酮化合物)、更好是化合物(I-c)。
本發(fā)明的化合物(I-a)或其鹽(有時(shí)簡(jiǎn)稱為有效成分)在經(jīng)口給藥中顯示出嗜中性彈性蛋白酶抑制活性和胰彈性蛋白酶抑制活性。
對(duì)患有由彈性蛋白酶引起的疾病的患者給藥某一有效量的本發(fā)明化合物(I-a)或其鹽。
本發(fā)明的化合物(I-a)或其鹽較好是經(jīng)口給藥的。其劑量因患者的病情、體重、和年齡等而有很大差異。例如，在經(jīng)口給藥中，該有效成分的劑量通常是約0.5～約5000mg/60kg體重/日、較好約5～約2000mg/60kg體重/日、更好15～300mg/60kg體重/日。
本發(fā)明的化合物(I-a)或其鹽是以慣常醫(yī)藥制劑例如片劑、脫囊劑、顆粒劑、細(xì)小顆粒劑、散劑、水溶液劑、油溶液劑等形式給藥的。這些制劑可以含有0.01wt％以上、較好在0.1～70wt％范圍內(nèi)的數(shù)量的有效成分。這些制劑可以含有其它醫(yī)療有效成分。
這些醫(yī)藥制劑可以按照慣常方法使用慣常醫(yī)藥上可接受成分來(lái)制備。這些制劑制備用成分均可使用，只要它們慣常用于本領(lǐng)域而且不與該有效成分反應(yīng)即可，例如乳糖、肌醇、葡萄糖、甘露糖醇、葡聚糖、環(huán)糊精、山梨糖醇、淀粉、部分預(yù)凝膠化淀粉、蔗糖、偏硅鋁酸鎂、合成硅酸鋁、結(jié)晶纖維素、羧甲基纖維素鈉、羥丙基淀粉、羧甲基纖維素鈣、離子交換樹(shù)脂、甲基纖維素、明膠、阿拉伯膠、羥丙基纖維素(HPC)、低取代的羥丙基纖維素(低取代HPC)、羥丙基·甲基纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯醇、藻酸、藻酸鈉、輕質(zhì)無(wú)水硅酸、硬脂酸鎂、滑石、羧乙烯基聚合物、氧化鈦、脫水山梨糖醇脂肪酸酯、硫酸月桂酯鈉、甘油、甘油脂肪酸酯、精制羊毛脂、甘油明膠、polysolyate、大粒凝膠、植物油、蠟、丙二醇、水、乙醇、加氫聚氧乙烯蓖麻油、氯化鈉、氫氧化鈉、氯化氫、磷酸氫鈉、磷酸二氫鈉、檸檬酸、谷氨酸、芐醇、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯等。
實(shí)施例通過(guò)說(shuō)明實(shí)施例、實(shí)驗(yàn)和制劑例，更詳細(xì)地解釋本發(fā)明。
實(shí)施例1N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)羧酰胺的制備工藝
步驟1N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S，2S)-3，3，3-三氟-2-羥基-1-(甲基乙基)丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基](3，5-二甲基異噁唑-4-基)羧酰胺的制備工藝按照WO 00/52032中公開(kāi)的方法制備[(2S)-1-((2S)-2-氨基-3-甲基丁?；?吡咯烷-2-基]-N-[(1S，2S)-3，3，3-三氟-2-羥基-1-(甲基乙基)丙基]羧酰胺鹽酸鹽，即步驟1的起始原料。
把這樣得到的[(2S)-1-((2S)-2-氨基-3-甲基丁?；?吡咯烷-2-基]-N-[(1S，2S)-3，3，3-三氟-2-羥基-1-(甲基乙基)丙基]羧酰胺鹽酸鹽(2.0g，4.95mmol)和3，5-二甲基異噁唑-4-羧酸(0.70g，4.95mmol)溶解于吡啶(20ml)中，向其中添加1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(1.00g，5.20mmol)。該混合物在室溫下攪拌12小時(shí)，然后使該反應(yīng)混合物減壓濃縮。
向該殘?jiān)刑砑右宜嵋阴ィ摶旌衔锵嗬^用1N鹽酸、水、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥。減壓下脫除溶劑，將殘?jiān)苡谝译嬷小Ｔ撊芤和ㄟ^(guò)使用CHP-20P柱的中壓柱色譜法(洗脫劑水-乙腈)精制。含有目的化合物的級(jí)分減壓下蒸發(fā)至干，給出目的化合物1.90g(78％)。
APCI-MS491(MH+)1H-NMR(300MHz，CDCl3，δ)0.86-1.08(12H，m)，1.94-2.35(6H，m)，2.46(3H，s)，2.62(3H，s)，3.63-3.83(2H，m)，4.07-4.13(2H，m)，4.50-4.55(2H，m)，4.79-4.83(1H，m)，6.36(1H，d)，6.72(1H，d)步驟2N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲酰基}吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)羧酰胺的制備工藝將步驟1制備的化合物(1.90g，3.87mmol)溶解于二氯甲烷(25ml)中，向其中添加叔丁醇(0.39ml，3.87mmol)和Dess-Martin試劑(3.30g，7.75mmol)?；旌衔镌谑覝叵聰嚢?小時(shí)，然后減壓濃縮。向殘?jiān)刑砑右宜嵋阴?。該混合物相繼用飽和硫代硫酸鈉水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和氯化鈉水溶液洗滌，用無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓下脫除溶劑。將殘?jiān)芙庥谝译嬷校ㄟ^(guò)使用CHP-20P柱的中壓柱色譜法(洗脫劑水-乙腈)精制。含有目的化合物的級(jí)分減壓下蒸發(fā)至干，給出目的化合物1.50g(79％)。
APCI-MS489(MH+)1H-NMR(300MHz，CDCl3，δ)0.90-1.09(12H，m)，1.89-2.16(6H，m)，2.47(3H，s)，2.64(3H，s)，3.62-3.84(2H，m)，4.59-4.62(1H，m)，4.80-4.89(2H，m)，6.36(1H，d)，7.31(1H，d)元素分析 C22H31F3N4O5·0.25H2O計(jì)算值C53.60 H6.44F11.56 N11.36實(shí)測(cè)值C53.74 H6.46 F11.73 N11.24實(shí)施例2～48按照與實(shí)施例1相同的方式制備下列化合物。這些化合物的物理性質(zhì)列于表1中。表中的質(zhì)譜是用APCIMS測(cè)定的，除非另有說(shuō)明。
實(shí)施例2N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(苯并[d]異噁唑-3-基)羧酰胺。
實(shí)施例3N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1 S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(4-甲基-1，2，3-噻二唑-5-基)羧酰胺。
實(shí)施例4N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(3-乙基-5-甲基異噁唑-4-基)羧酰胺。
實(shí)施例5N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)羧酰胺。
實(shí)施例6N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲酰基}吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(1，5-二甲基吡唑-3-基)羧酰胺。
實(shí)施例7N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(苯并三唑-5-基)羧酰胺。
實(shí)施例8N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(1H-吲唑-3-基)羧酰胺。
實(shí)施例9N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(5-苯基異噁唑-3-基)羧酰胺。
實(shí)施例10N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(5-甲基-1-苯基吡唑-4-基)羧酰胺。
實(shí)施例11N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(3-甲氧基異噁唑-5-基)羧酰胺。
實(shí)施例12N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-[3-(甲基乙氧基)異噁唑-5-基]羧酰胺。
實(shí)施例13N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-[1-(甲基乙基)苯并三唑-5-基]羧酰胺。
實(shí)施例14N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(苯并[d]1，2，3-噻二唑-5-基)羧酰胺。
實(shí)施例15N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(5-甲基異噁唑-3-基)羧酰胺。
實(shí)施例16N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(3，5-二甲基吡唑4基)羧酰胺。
實(shí)施例17N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲酰基}吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(5，6-二甲基苯并[d]異噁唑-3-基)羧酰胺。
實(shí)施例18N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(5-甲基苯并[d]異噁唑-3-基)羧酰胺。
實(shí)施例19N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(3-甲氧基異噁唑-4-基)羧酰胺。
實(shí)施例20N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(5-甲基異噁唑-4-基)羧酰胺。
實(shí)施例21N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(3-甲基異噁唑-4-基)羧酰胺。
實(shí)施例22N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(3-甲基異噁唑-5-基)羧酰胺。
實(shí)施例23N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲酰基}吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(3-叔丁基異噁唑-5-基)羧酰胺。
實(shí)施例24N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(3-苯基異噁唑-5-基)羧酰胺。
實(shí)施例25N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(5-叔丁基-1-甲基吡唑-3-基)羧酰胺。
實(shí)施例26N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲酰基}吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(1-甲基-5-苯基吡唑-3-基)羧酰胺。
實(shí)施例27N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(1-叔丁基-5-甲基吡唑-3-基)羧酰胺。
實(shí)施例28N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲酰基}吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(1-苯基吡唑-3-基)羧酰胺。
實(shí)施例29N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(5-甲基-1-苯基吡唑-3-基)羧酰胺。
實(shí)施例30N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(5-叔丁基-1-苯基吡唑-3-基)羧酰胺。
實(shí)施例31N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(1，3-二甲基吡唑-5-基)羧酰胺。
實(shí)施例32N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲酰基}吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(1-叔丁基-5-甲基吡唑-4-基)羧酰胺。
實(shí)施例33N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(1-苯基吡唑-4-基)羧酰胺。
實(shí)施例34N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲酰基}吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(3，5-二甲基-1-苯基吡唑-4-基)羧酰胺。
實(shí)施例35N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲酰基}吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(1-甲基-3-苯基吡唑-5-基)羧酰胺。
實(shí)施例36N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(3-甲基-1-苯基吡唑-5-基)羧酰胺。
實(shí)施例37N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-[1-(4-氟苯基)-5-甲基吡唑-4-基]羧酰胺。
實(shí)施例38N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲酰基}吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-[1-(4-氯苯基)-5-甲基吡唑-4-基]羧酰胺。
實(shí)施例39N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-[5-甲基-1-(4-甲基苯基)吡唑-4-基]羧酰胺。
實(shí)施例40N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-[5-甲基-1-(4-甲氧基苯基)吡唑-4-基]羧酰胺。
實(shí)施例41N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(3-叔丁基-1-甲基吡唑-5-基)羧酰胺。
實(shí)施例42N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(1-叔丁基-3-甲基吡唑-5-基)羧酰胺。
實(shí)施例43N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲酰基}吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-[3-(甲基乙氧基)異噁唑-4-基]羧酰胺。
實(shí)施例44N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲酰基}吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基](3-叔丁基-1-苯基吡唑-5-基)羧酰胺。
實(shí)施例45N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-[1-(2-氟苯基)-5-甲基吡唑-4-基]羧酰胺。
實(shí)施例46N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-[1-(3-氟苯基)-5-甲基吡唑-4-基]羧酰胺。
實(shí)施例47N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲酰基}吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-{5-甲基-1-[4-(三氟甲基)苯基]吡唑-4-基}羧酰胺。
實(shí)施例48N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-{5-甲基-1-[3-(三氟甲基)苯基]吡唑-4-基}羧酰胺。
表1
實(shí)施例49下列化合物可以按照與實(shí)施例1相同的方式制備。
實(shí)驗(yàn)1對(duì)人類嗜中性彈性蛋白酶(HNE)的抑制活性本實(shí)驗(yàn)考察了本發(fā)明化合物對(duì)人類嗜中性彈性蛋白酶的離體抑制活性。
向含有1M NaCl和0.001％Brij-35(聚氧乙烯月桂基醚)的100mMHEPES{[N-(2-羥基乙基)哌嗪-N’-(2-乙磺酸)]，pH 7.5}緩沖溶液中添加人類嗜中性彈性蛋白酶(最終濃度0.2U/ml，Elastine Product公司)和本發(fā)明化合物(溶解于10％二甲基亞砜中；最終濃度10-10～3×10-3M)。該混合物在37℃預(yù)培育3分鐘。向其中添加MeO-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-pNA(甲氧基琥珀酰-丙氨酰-丙氨酰-脯氨酰纈氨酰-對(duì)硝基苯胺(Sigma化學(xué)公司))作為底物，給出0.5mM的最終濃度，引發(fā)該反應(yīng)。在這種條件下，反應(yīng)產(chǎn)物即N-某酰對(duì)硝苯胺(pNA)在37℃的產(chǎn)生速率是通過(guò)測(cè)定404nm吸光度3分鐘來(lái)估計(jì)的。
按照下式計(jì)算本發(fā)明化合物對(duì)人類嗜中性彈性蛋白酶(HNE)的抑制活性 達(dá)到50％HNE抑制所需要的本發(fā)明化合物的濃度(即IC50)是根據(jù)本發(fā)明化合物的濃度一抑制率曲線計(jì)算的。
使用N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(咪唑-4-基)羧酰胺作為比較化合物，并進(jìn)行相同的試驗(yàn)。這種化合物的平面結(jié)構(gòu)與J.Med.Chem.，1997，40，1876-1885中公開(kāi)的化合物(22)之一相同。
結(jié)果列于以下表2中。
表2
如表2中所示，本發(fā)明化合物顯示出對(duì)人類嗜中性彈性蛋白酶的強(qiáng)抑制活性。
實(shí)驗(yàn)2對(duì)豬胰彈性蛋白酶的抑制活性按照與實(shí)驗(yàn)1中相同的方式測(cè)定抑制活性，所不同的是使用豬胰彈性蛋白酶(Elastin Products公司，最終濃度40ng/ml)作為靶酶和使用Suc-Ala-Ala-Ala-pNA(琥珀酰-丙氨酰-丙氨酰-丙氨酰-對(duì)硝基苯胺，Peptide Research公司，最終濃度2.5mM)作為底物。
結(jié)果列于以下表3。
表3
如表3中所示，本發(fā)明化合物顯示出對(duì)胰彈性蛋白酶的抑制活性。
實(shí)驗(yàn)3對(duì)人類嗜中性彈性蛋白酶(HNE)誘發(fā)的肺出血的抑制活性本實(shí)驗(yàn)測(cè)試了本發(fā)明化合物的活體功效。當(dāng)經(jīng)氣管內(nèi)對(duì)倉(cāng)鼠給藥人類嗜中性彈性蛋白酶時(shí)，誘發(fā)了肺出血。該彈性蛋白酶給藥后一定時(shí)間之后，在經(jīng)由氣管洗肺得到的支氣管肺泡灌洗液中，檢測(cè)到血紅蛋白。這個(gè)實(shí)驗(yàn)是要通過(guò)測(cè)定血紅蛋白濃度來(lái)估計(jì)本發(fā)明化合物對(duì)出血的抑制到底有多強(qiáng)。
把倉(cāng)鼠(敘利亞品系，7～10周齡，雄性)分成由3～6只組成小組，每一組處理如下(A)不對(duì)其給藥本發(fā)明化合物的小組(疾病對(duì)照組)把溶解了25單位人類嗜中性彈性蛋白酶(Elastin Product公司)的生理食鹽水溶液(0.2ml)經(jīng)氣管內(nèi)對(duì)倉(cāng)鼠給藥，以誘發(fā)肺出血。在彈性蛋白酶給藥后1小時(shí)之后，用放血法宰殺倉(cāng)鼠，肺泡用生理食鹽水(2.5ml)經(jīng)氣管洗滌2次，通過(guò)測(cè)定414nm的吸光度確定支氣管肺泡灌洗液(5ml)中的血紅蛋白濃度。
(B)對(duì)其給藥本發(fā)明化合物的小組將固定量的本發(fā)明化合物溶解于二甲基亞砜(DMSO)中，向其中添加0.5％西黃蓍膠，制備一種懸浮液。在人類嗜中性彈性蛋白酶(HNE)(DMSO的最終濃度，1％)給藥前30分鐘，將該懸浮液經(jīng)口對(duì)倉(cāng)鼠給藥，然后按照與上述方法(A)相同的方式給藥人類嗜中性彈性蛋白酶。1小時(shí)后，按照與上述方法(A)相同的方式確定支氣管肺包灌洗液中血紅蛋白的濃度。
本發(fā)明化合物的出血抑制活性表述為下式的出血抑制率
達(dá)到肺出血50％抑制所需要的本發(fā)明化合物的劑量(即ED50)是根據(jù)給藥劑量-出血抑制率曲線計(jì)算的。
作為比較例，也對(duì)實(shí)驗(yàn)1中使用的比較化合物進(jìn)行相同實(shí)驗(yàn)。
將本發(fā)明的一些化合物與比較化合物以3mg/kg的劑量進(jìn)行出血抑制率比較。
結(jié)果列于表4和表5中。
表4
表5
如表4和表5中所示，本發(fā)明化合物在本實(shí)驗(yàn)中顯示出對(duì)肺出血的強(qiáng)抑制活性。
實(shí)驗(yàn)4對(duì)人類嗜中性彈性蛋白酶(HNE)誘發(fā)的肺出血的抑制活性的持續(xù)時(shí)間進(jìn)行與實(shí)驗(yàn)3(B)相同的程序，所不同的是，在人類嗜中性彈性蛋白酶(HNE)給藥前150分鐘(而不是30分鐘)經(jīng)口給藥劑量(10mg/kg)的本發(fā)明化合物。
結(jié)果，即使在HNE給藥前150分鐘給藥實(shí)施例10的本發(fā)明化合物，本發(fā)明化合物也強(qiáng)力地抑制肺出血并顯示出更長(zhǎng)持續(xù)時(shí)間的活性。
實(shí)驗(yàn)5急性毒性將本發(fā)明化合物(實(shí)施例10、實(shí)施例11、實(shí)施例15、實(shí)施例25、和實(shí)施例40的每一種化合物)懸浮在0.5％西黃蓍膠中，并將該懸浮液以300mg/kg的劑量對(duì)7周齡雄性ICR小鼠(5只小鼠)經(jīng)口給藥。給藥24小時(shí)后檢查是否死時(shí)全都活著。
如以上實(shí)驗(yàn)所示，本發(fā)明化合物不僅在離體實(shí)驗(yàn)中顯示出獨(dú)特的嗜中性彈性蛋白酶抑制活性和胰彈性蛋白酶抑制活性，而且在經(jīng)口給藥中也顯示出優(yōu)異的彈性蛋白酶抑制活性。因此，本發(fā)明化合物可用于預(yù)防和治療彈性蛋白酶活性增加引起的各種疾病，例如，由于彈性蛋白酶引起的蛋白質(zhì)降解增加而造成的各種疾病，尤其呼吸性疾病。
以下說(shuō)明制劑實(shí)例。本發(fā)明化合物即有效成分是在超微粉碎到5μm或以下的粒度之后使用的。
實(shí)施例A、B和C片劑將表6中所示各顆粒成分按照慣常方法造粒，并向其中添加賦形劑。將混合物壓片，以制備各重120mg～300mg的片劑。
表6
實(shí)施例D、E和F顆粒劑將表7中所示各顆粒成分按照慣常方法造粒，并向其中添加賦形劑，給出顆粒劑。
表7
工業(yè)適用性本發(fā)明化合物有優(yōu)異的彈性蛋白酶抑制活性，可用于預(yù)防和治療彈性蛋白酶活性增加所引起的各種疾病，例如，由于彈性蛋白酶引起蛋白質(zhì)降解增加而造成的各種疾病，尤其呼吸性疾病。
序列表<110>大日本醫(yī)藥有限公司<120>有彈性蛋白酶抑制活性的雜環(huán)化合物及其中間體<130>663649<150>JP 2002-27634<151>2002-2-5<160>1<170>PatentIn Ver.2.1<210>1<211>4<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>人工序列描述彈性蛋白酶底物，MeO-Suc-肽-pNA<400>1Ala Ala Pro Val權(quán)利要求
1.以下式(I)所代表的雜環(huán)化合物或其鹽 式中R1是下式所代表的雜環(huán)基 式中A代表苯環(huán)的存在或不存在，X是氧原子、硫原子或NH，Y是氮原子或CH，且所述雜環(huán)基可以有1～3個(gè)相同或不同的、選自下列組成的一組的取代基取代低級(jí)烷基；低級(jí)烷氧基；和可以有任選地有鹵素原子取代的低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基或鹵素原子取代的苯基；和R2和R3是氫原子或羥基，或兩者可以合在一起形成一個(gè)氧代基，先決條件是兩者都不是氫原子。
2.以下式(I-a)所代表的雜環(huán)化合物或其鹽 式中R1與權(quán)利要求1中的定義相同。
3.以下式(I-b)所代表的雜環(huán)化合物或其鹽 式中R1與權(quán)利要求1中的定義相同，R2b和R3b是氫原子或羥基，先決條件是兩者都不是氫原子。
4.以下式(I-c)所代表的雜環(huán)化合物或其鹽 式中R1與權(quán)利要求1中的定義相同。
5.按照權(quán)利要求1或2的雜環(huán)化合物或其鹽，其中，下式所代表的R1中的雜環(huán)基 是選自下列組成的一組的基團(tuán)異噁唑基、異噻唑基、1，2，3-噻二唑基、苯并[d]異噁唑基、吡唑基、苯并三唑基、三唑基、1H-吲唑基、和任選地有取代的苯并[3，4-d]1，2，3-噻二唑基。
6.按照權(quán)利要求1的雜環(huán)化合物或其鹽，其中，該化合物是選自下列組成的一組的化合物N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(3，5-二甲基異噁唑-4-基)羧酰胺；N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲酰基}吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基](苯并[d]異噁唑-3-基)羧酰胺；N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(4-甲基-1，2，3-噻二唑-5-基)羧酰胺；N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(3-乙基-5-甲基異噁唑-4-基)羧酰胺；N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲酰基}吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(5-甲基-1-苯基吡唑-4-基)羧酰胺；N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(3-甲氧基異噁唑-5-基)羧酰胺；N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲酰基}吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-[3-(甲基乙氧基)異噁唑-5-基]羧酸胺；N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲酰基}吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(5-甲基異噁唑-3-基)羧酰胺；N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-(5，6-二甲基苯并[d]異噁唑-3-基)羧酰胺；N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-[1-(4-氯苯基)-5-甲基吡唑-4-基]羧酰胺；N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-[5-甲基-1-(4-甲氧基苯基)吡唑-4-基]羧酰胺；N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲?；鶀吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-[1-(2-氟苯基)-5-甲基吡唑-4-基]羧酰胺；和N-[(1S)-2-((2S)-2-{N-[(1S)-3，3，3-三氟-1-(甲基乙基)-2-氧代丙基]氨基甲酰基}吡咯烷基)-1-(甲基乙基)-2-氧代乙基]-{5-甲基-1-[4-(三氟甲基)苯基]吡唑-4-基}羧酰胺。
7.一種醫(yī)藥組合物，包含以下式(I-a)所代表的雜環(huán)化合物或其醫(yī)藥上可接受鹽 式中R1與權(quán)利要求1中的定義相同。
8.一種彈性蛋白酶抑制劑，包含以下式(I-a)所代表的雜環(huán)化合物或其醫(yī)藥上可接受鹽作為有效成分 式中R1與權(quán)利要求1中的定義相同。
9.一種由彈性蛋白酶活性增加而引起的疾病的治療方法，包含對(duì)患者給藥某一有效量的以下式(I-a)所代表的雜環(huán)化合物或其醫(yī)藥上可接受鹽 式中R1與權(quán)利要求1中的定義相同。
全文摘要
通式(I)代表的而且有彈性蛋白酶抑制活性的雜環(huán)化合物；及其合成用中間體(I)式中R
文檔編號(hào)A61P43/00GK1642975SQ0380742
公開(kāi)日2005年7月20日 申請(qǐng)日期2003年2月5日 優(yōu)先權(quán)日2002年2月5日
發(fā)明者佐藤文憲, 出口貴司, 白武亮太郎, 岡崎烊, 黑宮明美 申請(qǐng)人:大日本制藥株式會(huì)社