專利名稱：組織工程自體角膜上皮及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種組織工程自體角膜上皮及其制備方法，屬于組織工程領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國每年有400～500萬角膜病患者在等待著角膜移植，但由于受傳統(tǒng)思想的影響，捐獻(xiàn)角膜者甚少，導(dǎo)致患者需要長時(shí)間等待方可得到適宜的角膜，延誤了治療。
為解決這個(gè)問題，人們發(fā)明了生物工程角膜，將從胚胎角膜緣組織或者另一側(cè)眼睛的角膜緣獲得的角膜干細(xì)胞在體外培養(yǎng)至第三、四代時(shí)構(gòu)建在一個(gè)生物支架上，共同構(gòu)成角膜上皮?？捎糜谥委煾鞣N原因?qū)е碌慕悄p傷、脫落病人的角膜移植。經(jīng)過臨床觀察，胚胎干細(xì)胞因?yàn)槭钱愺w的，幾乎不能達(dá)到任何效果；而采用自體的角膜緣的上皮細(xì)胞構(gòu)建于羊膜上的生物工程復(fù)合皮膚經(jīng)過幾百例的臨床試驗(yàn)，總有效率達(dá)到75％，病人視力和功能恢復(fù)良好。但是，這種生物工程角膜上皮還存在著許多不足首先、由于生物工程角膜的角膜干細(xì)胞來源于于異體的胚胎角膜緣組織，而角膜干細(xì)胞最終要存活于患者的角膜緣中，該部位具有免疫細(xì)胞，因而無法避免免疫排斥反應(yīng)，導(dǎo)致移植失敗。
第二、生物支架采用膠原蛋白、隱形眼鏡或羊膜，導(dǎo)致角膜干細(xì)胞和上皮細(xì)胞在其表面難以均勻生長，手術(shù)后降解速度緩慢，因而限制了臨床應(yīng)用。
以前的這種角膜緣細(xì)胞的生長都采用了鼠源性滋養(yǎng)層細(xì)胞，有潛在的非人類來源的傳染，同時(shí)采用了胎牛血清作為培養(yǎng)基，又易于傳染牛的傳染病等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種組織工程自體角膜上皮。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供這種組織工程自體角膜上皮的制備方法。
本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供這種組織工程自體角膜上皮的應(yīng)用。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案一種組織工程自體角膜上皮，它由纖維蛋白生物支架和附著在其上的來源于患者自體的角膜上皮干細(xì)胞和角膜上皮細(xì)胞構(gòu)成。角膜上皮干細(xì)胞取自患者角膜緣部位，具有增殖能力，經(jīng)培養(yǎng)，分裂為角膜上皮干細(xì)胞和TA細(xì)胞(transientamplifying cell)。TA細(xì)胞具有分化能力，分化成為角膜上皮細(xì)胞。
所述的角膜上皮干細(xì)胞和角膜上皮細(xì)胞是由來源于患者自體的角膜干細(xì)胞經(jīng)體外擴(kuò)增、培養(yǎng)得到的。
如果一個(gè)病人只有一側(cè)眼角膜出現(xiàn)損傷，就用其另一側(cè)的角膜緣作為供體，取1-2平方毫米的角膜緣組織，進(jìn)行體外的增殖培養(yǎng)，將培養(yǎng)傳代至第三、四代時(shí)的上皮細(xì)胞建于生物支架上，繼續(xù)培養(yǎng)，進(jìn)行移植。
所述纖維蛋白為人的纖維蛋白，它作為組織工程自體角膜上皮的生物支架，能支持角膜上皮干細(xì)胞和角膜上皮細(xì)胞的增殖并能保持干細(xì)胞特征，該支架能較快地被吸收，降解速度快，并且柔軟，可折皺，便于手術(shù)操作。
一種制備組織工程自體角膜上皮的方法，是將來源于患者自體的角膜上皮干細(xì)胞在體外擴(kuò)增和分化后，接種到纖維蛋白生物支架上進(jìn)行培養(yǎng)，在體外構(gòu)建組織工程自體角膜上皮。
所述接種到纖維蛋白生物支架上進(jìn)行培養(yǎng)是指采用人的纖維蛋白原為材料，按照濃度為1-8mg/ml，加入1-5unit/ml人的凝血因子和1-5μmol/mlCaCl2，同時(shí)加入40000-60000個(gè)傳代角膜培養(yǎng)細(xì)胞，室內(nèi)溫下混合，立刻構(gòu)建于35mm的培養(yǎng)皿上，形成附著有自體角膜上皮干細(xì)胞和自體角膜上皮細(xì)胞胞的生物支架；在培養(yǎng)皿中加入2ml角膜細(xì)胞培養(yǎng)液，Sony CO2培養(yǎng)箱，37℃，5％ CO2，繼續(xù)培養(yǎng)。
組織工程自體角膜上皮，用于制備角膜移植用的生物材料，可移植到病人損傷角膜表面，從而修復(fù)和恢復(fù)角膜功能。
本發(fā)明的有益效果在于一、降低或消除了免疫排斥反應(yīng)，成功分離出角膜干細(xì)胞，并在體外快速增殖、分化，并且具有正常角膜上皮干細(xì)胞和上皮細(xì)胞的特征和功能。
二、無傳染性疾病的交叉?zhèn)魅締栴}細(xì)胞培養(yǎng)過程不使用非人類來源的動(dòng)物細(xì)胞滋養(yǎng)層和培養(yǎng)基，避免了傳染性疾病的發(fā)生。
三、新的生物支架能很好的支持角膜干細(xì)胞、上皮細(xì)胞的增殖分泌，并且該生物膜吸收迅速，從而病人愈合速度明顯加快(從以往可四個(gè)月減少到一個(gè)月)。
四、手術(shù)操作簡便克服了以往產(chǎn)品難以辨認(rèn)細(xì)胞生長面和需要多針縫合的問題。
下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。


圖1為本發(fā)明成品外觀2為患者手術(shù)前眼角膜3為移植本發(fā)明后患者的眼角膜圖具體實(shí)施方式
從正常人的眼角膜中分離出干細(xì)胞，進(jìn)行體外培養(yǎng)、增殖和分化，在二到三周內(nèi)使這些細(xì)胞增殖數(shù)百萬倍，然后將這些帶有干細(xì)胞的上皮細(xì)胞種在一種生物膜上，從而長成生物工程角膜，將其移植到角膜損傷病人的病變部位，進(jìn)行修復(fù)，使病人視力恢復(fù)。
實(shí)施例1、組織工程自體角膜上皮的制備在確定取角膜組織之前，由具有執(zhí)業(yè)醫(yī)師資格的醫(yī)務(wù)人員向患者或患者家屬解釋原因，爭得患者或家屬同意，角膜上皮的取材部位由具有執(zhí)業(yè)醫(yī)師資格的醫(yī)務(wù)人員確定，并按照醫(yī)院規(guī)定的手術(shù)原則取材。患者進(jìn)行體檢和化驗(yàn)，包括常規(guī)檢驗(yàn)、傳染病病原(如HIV、肝炎病毒等)的檢查。所取的角膜上皮立即由專業(yè)人員放入無菌容器內(nèi)，并立即冷藏(10℃以下)，然后按規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)操作程序處理。
一、角膜上皮組織樣品處理及細(xì)胞培養(yǎng)傳代(一)提取健康細(xì)胞1.手術(shù)室取材(百級(jí)空氣凈化)從患者的另一側(cè)正常眼角膜緣由專業(yè)醫(yī)生取1×1mm組織塊。
2.所取的角膜組織的保存用含的DMEM培養(yǎng)液的15ml保存管中保存組織(4℃)。
3.在超凈工作臺(tái)中消毒、清洗，組織剪碎用含100單位/ml青霉素和100mg/ml的鏈霉素的PBS沖洗組織3次，修剪多余的脂肪和皮下結(jié)綈組織。
4.組織消化(Sony CO2培養(yǎng)箱)將1mm×1mm組織塊放置于35mm培養(yǎng)皿中加入濃度為0.05％的胰酶/EDTA液，消化。DMEM+FBS(美國Hyclone公司)培養(yǎng)液終止。
5.細(xì)胞分離將消化后的組織塊剪碎并用吸管打散。
6.離心吹散后的細(xì)胞收集至離心管中，Backman公司控溫離心機(jī)，25℃，1000轉(zhuǎn)/min，離心5分鐘，棄去上清液。
7.細(xì)胞鑒定1)形態(tài)學(xué)采用倒置光學(xué)顯微鏡觀察。細(xì)胞多呈多角型，角為鈍角，細(xì)胞呈圓性。細(xì)胞外觀透明，細(xì)胞緊密聯(lián)結(jié)成單層或多層。為典型正常的角膜上皮細(xì)胞。
2)細(xì)胞表型采用Keratin角質(zhì)蛋白3的抗體(美國ICN公司)進(jìn)行細(xì)胞免疫抗原結(jié)合反應(yīng)，鑒定為典型正常的角膜上皮細(xì)胞。
3)致癌性采用裸鼠試驗(yàn)，見《美國FDA關(guān)于生物制品生產(chǎn)用細(xì)胞株鑒定和指控的考慮要點(diǎn)》，結(jié)果無致癌性。
4)無菌檢測按《中國生物制品規(guī)程》(2000版)通則《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》A/B項(xiàng)進(jìn)行，結(jié)果符合無菌要求。
5)細(xì)胞存活率采用臺(tái)盼藍(lán)(Trypan blue)染色法檢查，核染色的細(xì)胞為死亡細(xì)胞，不著色的細(xì)胞為活細(xì)胞，計(jì)數(shù)總細(xì)胞數(shù)和死細(xì)胞數(shù)，計(jì)算細(xì)胞存活率。
細(xì)胞存活率＝[(總細(xì)胞數(shù)-死細(xì)胞數(shù))/總細(xì)胞數(shù)]×100％經(jīng)測定，細(xì)胞存活率超過80％。
(二)細(xì)胞培養(yǎng)傳代1.細(xì)胞培養(yǎng)在離心管中加入角膜無血清培養(yǎng)液(美國Sigma公司)，接種入1×35mm培養(yǎng)皿，Sony CO2培養(yǎng)箱，37℃，5％ CO2，進(jìn)行培養(yǎng)。
2.細(xì)胞傳代每隔2～3天換液1次，上皮細(xì)胞達(dá)到50～70％匯集細(xì)胞后傳代。
二、構(gòu)建組織工程自體角膜上皮(一)制備1.制備人纖維蛋白原用200ml血漿在4℃離心，3500轉(zhuǎn)/min，離心30分鐘，棄上清液，加10ml注射用水，制成懸濁液，保存?zhèn)溆谩?br> 2.構(gòu)建角膜上皮1)采用人的纖維蛋白原為材料，按照濃度為1-8mg/ml，加入1-5unit/ml人的凝血因子(購于Sigma公司)和1-5μmol/ml鈣離子(CaCl2)，同時(shí)加入50000個(gè)傳代至第三代的細(xì)胞，室內(nèi)溫下混合，立刻構(gòu)建于35mm的培養(yǎng)皿上，形成附著有自體角膜上皮干細(xì)胞和自體角膜上皮細(xì)胞胞的生物支架。
2)在培養(yǎng)皿中加入2ml角膜細(xì)胞培養(yǎng)液(購于Sigma公司)，Sony CO2培養(yǎng)箱，37℃，5％ CO2，繼續(xù)培養(yǎng)，2天后可用于臨床移植。
(二)檢測1.生物支架的檢測生物支架柔軟，可折疊，并且具有很強(qiáng)的粘附性，眼觀為一個(gè)淡白色的膜狀。
1)pH值測定取材料支架5g，加入pH7.0的蒸餾水15ml，于37℃下浸泡24小時(shí)，測pH，pH值在7.0-7.5之間。
2)體外降解試驗(yàn)取材料支架，浸入37℃含蛋白酶(2mg/ml)的磷酸緩沖液中，浸泡24小時(shí)后，支架全部消失。
3)皮膚刺激和致敏試驗(yàn)按GB/T16886.10-2000醫(yī)療器械生物評(píng)價(jià)第10部分刺激與致敏試驗(yàn)規(guī)定進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果無致敏性。
4)細(xì)胞毒性按照GB/T16886.5-1997醫(yī)療器械生物評(píng)價(jià)第5部分細(xì)胞毒性試驗(yàn)的規(guī)定進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果符合要求。
5)肌肉植入試驗(yàn)按GB/T16886.6-1997醫(yī)療器械生物評(píng)價(jià)第6部分植入后局部反應(yīng)試驗(yàn)中規(guī)定的方法進(jìn)行，結(jié)果無局部反應(yīng)。
6)遺傳毒性試驗(yàn)按照GB/T16886.3-1997 醫(yī)療器械生物評(píng)價(jià)第3部分中規(guī)定的方法進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果無毒性。
2.成品檢測1)外觀呈半透明膜狀，厚薄均勻，有光澤。
2)規(guī)格尺寸直徑為20-35mm的圓形。
3)彈性和強(qiáng)度折疊和變形時(shí)組織工程角膜上皮能恢復(fù)其初始和設(shè)計(jì)形狀，保持完整。
4)組織學(xué)觀察將培養(yǎng)的成品進(jìn)行常規(guī)組織學(xué)包埋處理，10％福爾馬林固定、組織處理、石蠟包埋，切片后進(jìn)行H-E染色，封片后光學(xué)顯微鏡觀察。光鏡下，未見明顯的細(xì)菌生長，無明顯的上皮或成纖維細(xì)胞退變或壞死，無局域性細(xì)胞無規(guī)則生長；可見體外培養(yǎng)的組織工程角膜上皮，具有大量的角膜上皮細(xì)胞。
5)無菌試驗(yàn)按《中國生物制品規(guī)程》(2000版)通則《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》A/B項(xiàng)進(jìn)行，結(jié)果符合無菌要求。
本發(fā)明的使用方法產(chǎn)品使用前，用不含血清的培養(yǎng)液沖洗三次。角膜的移植，需要眼外科醫(yī)生對(duì)病人進(jìn)行360度的環(huán)狀的病變部位切除，將生物工程角膜做四針縫合于環(huán)狀切割部位，用隱形鏡片壓迫，將眼瞼采用兩針縫合，一周后拆除縫線，將有新生的角膜上皮形成。
產(chǎn)品的儲(chǔ)存和運(yùn)輸應(yīng)在2℃～10℃、陰涼、干燥、清潔、避免陽光直射、無腐蝕性氣體、無重壓的環(huán)境中進(jìn)行。
本發(fā)明主要應(yīng)用于燒傷，化學(xué)燒傷，眼表皮腫瘤，過敏性、放射性損傷，遺傳性眼病，眼表面化膿和其他眼綜合癥導(dǎo)致的眼角膜上皮細(xì)胞脫落，結(jié)膜覆蓋于眼角膜表面而致的失明。
實(shí)施例2、臨床報(bào)告一、診斷標(biāo)準(zhǔn)角膜緣干細(xì)胞缺乏診斷標(biāo)準(zhǔn)角膜緣新生血管生長或角膜上皮結(jié)膜化大于或等于一個(gè)象限。
角膜上皮長期缺損診斷標(biāo)準(zhǔn)角膜上皮缺損時(shí)間7天以上。
病因診斷1.酸、堿等化學(xué)燒傷及熱燒傷2.藥物過敏3.各種原因所致的角膜緣大量淺層新生血管4.復(fù)發(fā)性翼狀胬肉二、納入病例標(biāo)準(zhǔn)1.符合角膜緣干細(xì)胞缺乏或角膜上皮長期缺損診斷標(biāo)準(zhǔn)。
2.患者年齡≥12歲，可配合各項(xiàng)檢查。
3.單眼患病，對(duì)側(cè)眼無明顯眼病史。
4.簽署知情同意書者。
5.基礎(chǔ)淚液分泌試驗(yàn)≥5mm(濾紙統(tǒng)一規(guī)格)。
6.裂隙燈檢查角膜及結(jié)膜無明顯感染及免疫性炎癥表現(xiàn)。
角膜新生血管位于上皮下及基質(zhì)淺層(≤1/4角膜厚度)。
瞼球粘連≤2個(gè)象限。
瞼裂閉合完全。無眼瞼內(nèi)翻倒睫。
三、健眼取材術(shù)前檢查血、尿常規(guī)，肝、腎功能，澳抗，愛滋病抗體。
術(shù)前點(diǎn)用抗生素眼藥水3天，4次/天。
取材應(yīng)在正規(guī)手術(shù)室、顯微鏡下進(jìn)行。
取材部位顳上或顳下角膜緣，大小為1×2mm2，深度為基質(zhì)前。
四、實(shí)驗(yàn)室體外培養(yǎng)標(biāo)本取材后立即置于保存液中，放在2℃-10℃的保溫箱中運(yùn)輸及保存，于6小時(shí)內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，以生物工程組織為載體培養(yǎng)自體角膜緣干細(xì)胞，并符合其組織工程自體角膜上皮注冊(cè)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)。
五、剔除病例標(biāo)準(zhǔn)角膜緣干細(xì)胞培養(yǎng)失敗，培養(yǎng)所得的產(chǎn)品不符合產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)者。
六、移植手術(shù)1.術(shù)前點(diǎn)用抗生素眼藥水3天，4次/天。
2.手術(shù)應(yīng)在正規(guī)手術(shù)室顯微鏡下進(jìn)行。
3.角膜上皮刮除范圍應(yīng)大于病變2mm2。
4.移植片與植床應(yīng)貼合緊密，不應(yīng)有積血或積液殘留。
5.以8-0可吸收線間斷縫合固定植片。
6.如有瞼球粘連，應(yīng)將結(jié)膜與角膜組織徹底分離，充分止血并將結(jié)膜后退。
7.術(shù)畢，術(shù)眼涂點(diǎn)必舒眼膏并包扎。
七、術(shù)后處理1.連續(xù)包扎2天，第三天打開點(diǎn)藥。
2.口服抗生素3天，打開包扎后點(diǎn)用點(diǎn)必舒目液1周，4次/天?？赏瑫r(shí)點(diǎn)用人工淚液，但禁用上皮生長因子。
八、療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)(一)顯效1.角膜新生血管減少在二級(jí)(含二級(jí))以上或消失。
2.角膜上皮缺損修復(fù)在二級(jí)(含二級(jí))以上或消失。
3.眼部自覺刺激癥狀減輕在二級(jí)(含二級(jí))以上或消失。
(二)有效1.角膜新生血管減少在一級(jí)或以上。
2.角膜上皮缺損修復(fù)在一級(jí)或以上。
3.眼部自覺刺激癥狀減輕在一級(jí)或以上。
(三)無效各項(xiàng)指標(biāo)未達(dá)到上述標(biāo)準(zhǔn)者。
顯效、有效的判定標(biāo)準(zhǔn)為至少滿足第(1)條加第(2)或第(3)條。
九、數(shù)據(jù)管理和統(tǒng)計(jì)1.數(shù)據(jù)收集所有入選病例均必須完成病例觀察表，研究者將觀察、檢查結(jié)果及時(shí)、準(zhǔn)確、完整、規(guī)范、真實(shí)地記錄于病歷及病例觀察表中。
全部數(shù)據(jù)錄入數(shù)據(jù)庫并校對(duì)后，將數(shù)據(jù)庫交統(tǒng)計(jì)分析人員進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，并提供統(tǒng)計(jì)報(bào)告，交臨床試驗(yàn)的主要研究者寫出臨床總結(jié)報(bào)告。
2.統(tǒng)計(jì)分析根據(jù)數(shù)據(jù)性質(zhì)，對(duì)基礎(chǔ)資料數(shù)據(jù)、療效分析(各指標(biāo)分析)及安全性分析、分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述。
計(jì)量數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法觀察組內(nèi)前后變化情況采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)。
計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法采用確切概率法。
等級(jí)型數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法觀察組內(nèi)前后變化情況采用符號(hào)秩和檢驗(yàn)。
3.統(tǒng)計(jì)軟件所有的統(tǒng)計(jì)均利用SAS JMP5.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用雙側(cè)檢驗(yàn)，以P≤0.05作為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
十、結(jié)論本產(chǎn)品在北京市兩家三甲醫(yī)院進(jìn)行了臨床研究，共入選20例患者，經(jīng)六個(gè)月觀察后評(píng)價(jià)其對(duì)于角膜上皮長期缺損和角膜緣干細(xì)胞缺乏患者的角膜刺激癥、角膜上皮缺損、角膜新生血管以及視力的改善情況，各主要觀察指標(biāo)的療效如下1.角膜刺激癥狀明顯改善10例，改善4例，無改善6例，改善率70％2.角膜上皮缺損明顯改善10例，改善6例，無改善4例，改善率80％3.角膜新生血管明顯改善7例，改善6例，無改善7例，改善率65％4.視力明顯改善2例，改善3例，無改善15例，改善率25％總體評(píng)價(jià)顯效(3)明顯改善+(2)或(1)明顯改善共計(jì)7例有效(3)改善+(2)或(1)明顯改善或改善共計(jì)6例即總體有效13例，總有效率65％。
本說明書附圖例舉角膜新生血管型患者術(shù)前和術(shù)后的眼角膜情況圖以作說明，分別見圖2和圖3，可以看出在手術(shù)移植本發(fā)明的組織工程自體角膜后，患者的病情得到了改善。
權(quán)利要求
1.一種組織工程自體角膜上皮，其特征在于它由纖維蛋白生物支架和附著在其上的來源于患者自體的角膜上皮干細(xì)胞和角膜上皮細(xì)胞構(gòu)成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織工程自體角膜上皮，其特征在于所述的角膜上皮干細(xì)胞和角膜上皮細(xì)胞是由來源于患者自體的角膜干細(xì)胞經(jīng)體外擴(kuò)增、培養(yǎng)得到的。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織工程自體角膜上皮，其特征在于所述纖維蛋白為人的纖維蛋白。
4.一種制備組織工程自體角膜上皮的方法，是將來源于患者自體的角膜上皮干細(xì)胞在體外擴(kuò)增和分化后，接種到纖維蛋白生物支架上進(jìn)行培養(yǎng)，在體外構(gòu)建組織工程自體角膜上皮。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的組織工程自體復(fù)合皮膚的制備方法，其特征在于所述接種到纖維蛋白生物支架上進(jìn)行培養(yǎng)是指采用人的纖維蛋白原為材料，按照濃度為1-8mg/ml，加入1-5unit/ml人的凝血因子和1-5μmol/mlCaCl2，同時(shí)加入40000-60000個(gè)傳代角膜培養(yǎng)細(xì)胞，室內(nèi)溫下混合，立刻構(gòu)建于35mm的培養(yǎng)皿上，形成附著有自體角膜上皮干細(xì)胞和自體角膜上皮細(xì)胞胞的生物支架；在培養(yǎng)皿中加入2ml角膜細(xì)胞培養(yǎng)液，Sony CO2培養(yǎng)箱，37℃，5％CO2，繼續(xù)培養(yǎng)。
6.權(quán)利要求1、或2、或3所述的組織工程自體角膜上皮，用于制備角膜移植用的生物材料。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種組織工程自體角膜上皮，它由纖維蛋白生物支架和附著在其上的來源于患者自體的角膜上皮干細(xì)胞和角膜上皮細(xì)胞構(gòu)成。其制備方法是將來源于患者自體的角膜上皮干細(xì)胞在體外擴(kuò)增和分化后，接種到纖維蛋白生物支架上進(jìn)行培養(yǎng)，在體外構(gòu)建組織工程自體角膜上皮。該組織工程自體角膜上皮，可用于制備角膜移植用的生物材料。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是1.降低或消除了免疫排斥反應(yīng)；2.細(xì)胞培養(yǎng)過程不使用非人類來源的動(dòng)物細(xì)胞滋養(yǎng)層和培養(yǎng)基，避免了傳染性疾病的發(fā)生；3.生物支架能很好地支持角膜干細(xì)胞、上皮細(xì)胞的增殖分泌，并且該生物膜吸收迅速，加快愈合速度；4.手術(shù)操作簡便，克服了以往產(chǎn)品難以辨認(rèn)細(xì)胞生長面和需要多針縫合的問題。
文檔編號(hào)A61L27/00GK1569259SQ0315037
公開日2005年1月26日 申請(qǐng)日期2003年7月25日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月25日
發(fā)明者韓斌, 田書彥, 杜彥俠, 張旭 申請(qǐng)人:北京以嶺生物工程有限公司