專利名稱：：中草藥組合物及其用途的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種新的中草藥組合物，其是由數(shù)種中草藥原料依特定重量配比制成。該組合物具有抗氧化能力(如清除自由基、抑制脂質(zhì)體過氧化作用、抑制亞油酸過氧化作用及螯合亞鐵離子)。
背景技術：
：生物體中含有多種清除活性氧或自由基的抗氧化物質(zhì)，包括維生素E、維生素C、類胡蘿卜素、微量元素、類黃酮素及一些酚類物質(zhì)。他們可作為還原劑、金屬螯合劑或活性氧清除劑，阻止自由基引起的脂質(zhì)過氧化反應。隨著年齡增加，體內(nèi)的防御系統(tǒng)也跟著降低，會導致許多疾病產(chǎn)生，因此補充抗氧化物質(zhì)是必要的。嗜氧的生物體藉由抗氧化傷害的系統(tǒng)而被保護著，它由多種功能不同的抗氧化劑組成，其功能在于阻止活性氧與自由基的生成、清除活性氧與自由基及修補活性氧與自由基造成的損傷。抗氧化劑依其作用原理大致上可分為幾種自由基終止劑(freeradicalterminator)、還原劑或氧的清除劑(oxygenscavenger)、金屬螯合劑(chelatingagent)、酶型抗氧化劑及過氧化物分解劑等。自由基之所以有害，是因為它具有活潑的化學特性，會和體內(nèi)的細胞組織發(fā)生化學反應，使細胞組織失去功能而破壞。也會和細胞內(nèi)的DNA發(fā)生反應，破壞DNA，加速老化并增加致癌機率。目前研究趨向?qū)μ烊豢寡趸锏奶接?，來源包括蔬果、植物、藥草或發(fā)酵食品等。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及一種新的中草藥組合物，其包含下列重量配比的原料黑大豆0.5～30、黑木耳1.0～10及大棗10～40。該組合物中優(yōu)選的原料重量配比為黑大豆10～30、黑木耳5～10及大棗20～40。上述更優(yōu)選的組合物，其中黑大豆∶黑木耳∶大棗的重量比為3∶1∶4。本發(fā)明的組合物，可以一般中草藥水提方式提取成份。提取物可制備成液劑或其它適宜劑型(如呈冷凍干燥干粉形式)便于儲存或調(diào)配制劑。本發(fā)明的組合物亦具有抗氧化能力。詳言之，該抗氧化能力包括但不限于如清除自由基、抑制脂質(zhì)體過氧化作用、抑制亞油酸過氧化作用及螯合亞鐵離子等能力。因此，本發(fā)明的組合物可阻止哺乳動物體內(nèi)活性氧與自由基的生成，可清除哺乳動物體內(nèi)活性氧與自由基及可修補哺乳動物體內(nèi)因活性氧與自由基造成的損傷。一般而言，自由基之所以有害，是因為它具有活潑的化學特性，會和體內(nèi)的細胞組織發(fā)生化學反應，使細胞組織失去功能而破壞。也會和細胞內(nèi)的DNA發(fā)生反應，破壞DNA，加速老化并增加致癌機率。因此，本發(fā)明的組合物能維護細胞組織功能，防止DNA被破壞，減緩老化與降低致癌機率。本發(fā)明的組合物適用對象為哺乳動物，優(yōu)選適用對象為人。本發(fā)明的組合物適用濃度為10～10000μg/ml，優(yōu)選濃度為30～250μg/ml，更優(yōu)選度為50～200μg/ml，視服用者的體質(zhì)和進展以及其它因素(如用于預防或改善)而有所變動。本發(fā)明的組合物亦可依不同給藥途徑與其它賦形劑或載體一同使用，但這些賦形劑或載體以不影響組合物的活性為前提。圖1顯示本發(fā)明的組合物清除DPPH自由基的能力。圖2顯示不同濃度的α-生育酚(維生素E)與本發(fā)明的組合物對脂質(zhì)體氧化作用的抑制效果。圖3顯示本發(fā)明的組合物在不同時間點對亞油酸氫過氧化物生成的影響。圖4顯示本發(fā)明的組合物以劑量依賴性效果來螯合亞鐵離子。具體實施例方式下列實施例進一步說明本發(fā)明，但并非欲限制本發(fā)明的范圍，任何本領域技術人員公知的替代和改變，均仍涵蓋于本發(fā)明的范圍中，而不偏離本發(fā)明的精神和目的。實施例一.本發(fā)明的組合物的制備實例1.將配方中所需藥材依序以下列重量配比配比秤好黑大豆562.5克、黑木耳187.5克及大棗750克。將秤好的藥材放入干凈的濾布藥袋中，并束緊。2.打開提煉機的鍋蓋，放入藥袋。3.注入20升干凈純水。4.蓋上鍋蓋并栓緊所有開關。5.激活電源，設定好溫度與時間(120℃，2小時)6.提煉完成后，將提煉完成的藥汁送至包裝機中進行包裝或是進行冷凍干燥制成干粉。二.清除DPPH自由基能力的實驗1.材料與方法DPPH2，2-二苯基-1-苦基偕腙肼購自Sigma，D-9132。DPPH分析參考Blois，M.S.Antioxidantdeterminationbytheuseofastablefreeradical.(1958)Nature1811199-1200進行。取100μl連續(xù)2倍稀釋的本發(fā)明的組合物或維生素C，加入新鮮配置的100μl0.4mM的DPPH甲醇溶液。震蕩混合均勻于室溫下靜置30分鐘后，在517nm測定其吸光度(DPPH自由基被清除的越多，則吸光度下降越多)。清除率(scavengingeffect％)＝[1-(樣品吸光度/未添加樣品的對照組吸光度)]×100。2.結(jié)果與討論抗氧化劑依其作用原理可分為幾種不同類型的抗氧化劑，其中一種是藉由氫供體(hydrogendonor)來清除油脂過氧化所產(chǎn)生的自由基，以抑制油脂自氧化的連鎖反應。DPPH自由基為一極穩(wěn)定的自由基，在抗氧化的研究上常用來檢測抗氧化物提供氫原子的能力。DPPH自由基的甲醇溶液在517nm下會有強的吸收波峰，但若DPPH自由基接受電子形成電子對時，則其在517nm的吸光度將會降低或消失。故藉由測定517nm吸光度的變化可檢測樣品提供氫原子清除自由基的能力，吸光度愈低表示樣品的供氫能力愈強。圖1結(jié)果顯示，本發(fā)明的組合物(C.K.茶)清除DPPH自由基的效果隨著提取液濃度的增加而清除能力有提高的趨勢。當本發(fā)明的組合物濃度為78μg/ml時，其清除DPPH自由基的效果最好，可達到88.97％的清除能力。而陽性對照組維生素C的濃度為171ng/ml時，其清除DPPH的能力即可達到82.01％。三.脂質(zhì)體氧化抑制作用的實驗1.原理丙二醛(MDA)是脂質(zhì)過氧化作用的重要裂解產(chǎn)物。MDA與硫代巴比妥酸(TBA)以1∶2形式在酸性高溫反應下會產(chǎn)生穩(wěn)定結(jié)構，之后再用正丁醇提取出來，以熒光光度計Ex/Em＝515nm/553nm或分光光度計532nm測定。應用上，以TBARS的吸光度換算回對應的MDA濃度來表示。2.材料與方法i.脂質(zhì)體溶液1，2-二?；?sn-甘油基-3-膽堿磷酸，SigmaP-5394，均質(zhì)化10mg/ml脂質(zhì)體溶液于20mMNaPi溶液(pH7.4)30秒，接著超聲振蕩3分鐘(30s開/20s關)。ii.2-硫代巴比妥酸(TBA)，SigmaT-5500，0.7％TBA溶液溶于氫氧化鈉溶液。iii.丁化羥基甲苯(BHT)，SigmaB-1378，2％于乙醇。iv.FeCl3，Riedel-deHaen12321，0.5M于ddH2O。v.TCA，Riedel-deHaen33731，30％于ddH2O。取700μl脂質(zhì)體溶液至2.0ml離心管后，依序加入250μl測試樣品或?qū)φ战M(水)、1μl0.5MFeCl3溶液及50μl25mML-維生素C后，置于37℃反應2小時。取400μl反應產(chǎn)物至另一新的2.0ml離心管后，依序加入400μl30％TCA溶液、50μl2％BHT及250μl0.7％TBA后于95℃反應50分插冰冷卻后加入0.5ml正丁醇充分混合后以4000rpm離心5分鐘。取200μl上清液至96孔板，以ELISA判讀機讀取532nm吸光度。3.結(jié)果與討論由圖2結(jié)果得知未添加任何樣品的脂質(zhì)體氧化作用后所測得的TBARS值為0.64(NC)。事先添加維生素E下，在濃度為62.5μg/ml即具有完全保護效果。而本發(fā)明的組合物(C.K.茶)在脂質(zhì)體氧化作用上的抑制作用有劑量依賴性效果，當濃度為8mg/ml時其效果與62.5μg/ml的維生素E相當。四、抑制亞油酸過氧化作用的實驗1.原理利用脂質(zhì)氧化初期產(chǎn)生高能的氫過氧化物將Fe2+氧化成Fe3+，F(xiàn)e3+又會與SCN-反應而生成紅色的硫氰酸鐵絡合物〔Fe(SCN)63-〕，此絡合物于波長500nm有最大吸收波峰。脂質(zhì)氧化程度越高，氫過氧化物亦生成越多，呈色也跟著加深。因此，藉由測量波長500nm的吸光度大小，便可得知樣品的抗氧化性。2.材料與方法i.亞油酸(Sigma)2.51％亞油酸乳劑于80％乙醇。ii.100mM磷酸鹽緩沖劑，pH7.4。iii.15mlFalcon離心管。iv.30％硫氰酸銨(w/v)于ddH2O。v.75％乙醇。vi.20mMFeCl2-4H2O制備于3.5％鹽酸。參考Sanchez-Moreno等人于FoodResearchInternational32407-412(1999)揭示方法，取0.5ml2.51％亞油酸至15mlFalcon離心管，加入1.5ml磷酸鹽緩沖劑，加入0.5ml待測樣品后，將蓋子旋松后置于37℃震蕩反應，分別于第12、24、36、48、60及72小時，取出40μl樣品至2ml離心管，加入1.88ml75％酒精后再加入40μl30％硫氰酸銨震蕩混合均勻后，加入40μl20mMFeCl2-4H2O反應3分鐘后，取200μl至96孔板以ELISA判讀機于波長500nm測吸光度。本發(fā)明的組合物的抗氧化活性以抑制亞油酸過氧化率表示。抑制亞油酸過氧化率(percentageofinhibitionofperoxidation，IP％)＝[1-(樣品于500nm的吸光度)/(未添加樣品的對照組于500nm的吸光度)]×100。抑制亞油酸過氧化率愈高表示抗氧化性愈強。3.結(jié)果與討論脂質(zhì)氧化程度越高，氫過氧化物亦生成越多，呈色也跟著加深。因此，藉由測量波長500nm的吸光度大小，便可得知樣品的抗氧化性。圖3結(jié)果顯示未添加樣品的對照組，其脂質(zhì)氫過氧化物隨著時間的增加，氫過氧化物的生成也愈多。而本發(fā)明的組合物濃度為0.25mg/ml時即可完全抑制脂質(zhì)氫過氧化物的生成，其效果與市售抗氧化劑0.1％BHT相當。表1結(jié)果顯示，在亞油酸自發(fā)性氧化的第72小時，本發(fā)明的組合物(0.25mg/ml)抑制亞油酸過氧化率為99.24％，其效果與市售抗氧化劑0.1％BHT(IP％＝99.78％)相當，顯示本發(fā)明的組合物在亞油酸自發(fā)性氧化系統(tǒng)中具有良好的抗氧化性。表1.本發(fā)明的組合物(C.K.茶)的抑制亞油酸過氧化率(IP％)。檢體濃度IP(％)C.K.茶0.25mg/ml99.24±0.66C.K.茶0.5mg/ml99.95±0BHT0.1％99.78±0.10*IP％(抑制亞油酸過氧化率72h)＝[1-(樣品于500nm的吸光度)/(未添加樣品的對照組于500nm的吸光度)]×100。五、抗氧化效果-螯合亞鐵離子能力的實驗1.原理在脂質(zhì)自氧化的過程中，金屬離子的存在可以直接催化起始反應的發(fā)生，少量的金屬離子會經(jīng)由氧化還原循環(huán)反應產(chǎn)生自由基并加速脂質(zhì)氧化的進行。在許多金屬離子中，亞鐵離子是最具影響力的助氧化劑，因此具有螯合亞鐵離子能力的樣品亦可對抗由金屬離子誘導的脂質(zhì)過氧化作用。實驗的原理是利用Fe2+與ferrozine所形成的復合物在562nm的波長下有最大吸光度，若樣品螯合Fe2+離子的能力越強，在562nm的吸光度就越低。2.材料與方法FeCl2-4H2OFluka，44936。FerrozineSigma，P-9762。參考Decker，E.A等人于J.Agric.Food.Chem.38674-677(1990)揭示方法，取1ml待測試樣品，加入775μlddH2O及75μl2mMFeCl2-4H2O后混合均勻，于30秒后，加入150μl5mMferrozine試劑，反應10分鐘后，以分光光度計測量562nm的吸光度。吸光度愈低表示樣品螯合亞鐵離子的能力愈強。螯合亞鐵離子的能力以[1-(樣品吸光度/對照組吸光度)]×100表示。3.結(jié)果與討論本實驗以二價金屬離子螯合劑EDTA作為實驗上的對照組，結(jié)果如圖4所示，1mMEDTA即可完全將亞鐵離子螯合。而食品中用以抑制脂肪過氧化的抗氧化劑如丁化羥基甲苯(BHT)則不具有螯合亞鐵離子能力。隨著濃度的增加，本發(fā)明的組合物以劑量依賴性效果來螯合Fe2+離子，當濃度在62.5μg/ml時具有50％螯合亞鐵離子的能力；當濃度5mg/ml以上時，其螯合亞鐵離子的能力達90％以上，顯示本發(fā)明的組合物具有螯合亞鐵離子能力而對抗由金屬離子誘導的脂質(zhì)過氧化作用。以上所述僅為本發(fā)明的部份優(yōu)選實例的說明，因此凡應用本發(fā)明說明書及權利要求書所為的等效方法的變化，理應包含在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。權利要求1.一種具有抗氧化能力的組合物，其包含下列重量配比的原料黑大豆0.5～30、黑木耳1.0～10及大棗10～40。2.根據(jù)權利要求1的組合物，其特征在于它是由下列重量配比的原料制成的黑大豆10～30、黑木耳5～10及大棗20～40。3.根據(jù)權利要求1的組合物，其特征在于它是由下列重量配比的原料制成的黑大豆10～20、黑木耳5～10及大棗20～30。4.根據(jù)權利要求1或2的組合物，其中黑大豆∶黑木耳∶大棗的重量比為3∶1∶4。5.根據(jù)權利要求1或2的組合物，其呈冷凍干燥制成干粉形式。6.根據(jù)權利要求1或2的組合物，其可阻止哺乳動物體內(nèi)活性氧與自由基的生成。7.根據(jù)權利要求1或2的組合物，其可清除哺乳動物體內(nèi)活性氧與自由基。8.根據(jù)權利要求1或2的組合物，其可修補哺乳動物體內(nèi)因活性氧與自由基造成的損傷。9.根據(jù)權利要求6的組合物，其中哺乳動物為人。10.根據(jù)權利要求1或2的組合物，其中抗氧化能力系以清除自由基能力當作參考指針。11.根據(jù)權利要求1或2的組合物，其中抗氧化能力系以抑制脂質(zhì)體過氧化作用當作參考指針。12.根據(jù)權利要求1或2的組合物，其中抗氧化能力系以抑制亞油酸過氧化作用當作參考指針。13.根據(jù)權利要求1或2的組合物，其中抗氧化能力系以螯合亞鐵離子能力當作參考指針。14.根據(jù)權利要求1或2的組合物，其能維護細胞組織功能。15.根據(jù)權利要求1或2的組合物，其能防止DNA被破壞。16.根據(jù)權利要求1或2的組合物，其能減緩老化。17.根據(jù)權利要求1或2的組合物，其能降低致癌機率。18.根據(jù)權利要求1或2的組合物，其濃度為10～10000μg/ml。19.根據(jù)權利要求18的組合物，其濃度為30～250μg/ml。20.根據(jù)權利要求19的組合物，其濃度為50～200μg/ml。全文摘要本發(fā)明涉及一種新的中草藥組合物，其包含下列重量配比的原料黑大豆0.5～30、黑木耳1.0～10及大棗10～40。該組合物在哺乳動物中具有抗氧化能力(如清除自由基、抑制脂質(zhì)體過氧化作用、抑制亞油酸過氧化作用及螯合亞鐵離子的活性)。文檔編號A61P39/06GK1565610SQ0314874公開日2005年1月19日申請日期2003年6月25日優(yōu)先權日2003年6月25日發(fā)明者許清祥申請人:光惠生物科技股份有限公司