專利名稱：甲殼低聚糖硫酸酯和/或殼聚糖硫酸酯作為制備降血糖藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及海洋藥物的研究與開發(fā)，具體講是一種防治糖尿病的藥物化合物——甲殼低聚糖硫酸酯和/或殼聚糖硫酸酯作為制備降血糖藥物中的應用，其屬于海洋生物技術領域。
背景技術：
眾所周知，高血糖是糖尿病的一個重要特征。糖尿病是一種常見的內分泌代謝紊亂性疾病，其是由于胰島素分泌絕對或相對不足引起糖、脂肪、蛋白質代謝紊亂，出現(xiàn)持續(xù)性的高血糖狀態(tài)。糖尿病的久病者常伴發(fā)動脈硬化，心血管，腎臟，眼病及神經(jīng)系統(tǒng)等慢性并發(fā)癥，嚴重者威脅生命，其發(fā)病率高，并發(fā)癥多，嚴重影響人們的身體健康。全世界有糖尿病患者1.25億人，我國的糖尿病患者已達4000萬人，并還有上升趨勢，世界衛(wèi)生組織將糖尿病列為世界三大疑難病之一。
當前臨床上常用于治療糖尿病的降糖藥物主要有兩種，一種是磺脲類，一種是雙胍類。其中，磺脲類藥物主要是通過刺激胰島素分泌，從而降低血糖水平。有一種消渴丸藥物，就是目前市場上常用的治療糖尿病的藥物，其主藥成分優(yōu)降糖屬磺脲類降血糖藥。比法國施維雅藥廠生產(chǎn)的第二代藥達美康，其降糖作用高，具有劑量小、作用快、療效高、持續(xù)時間長、副作用輕等優(yōu)點。但是，這種藥物在人體內有蓄積作用，這就增加了肝、腎等內臟器官的負荷，尤其對老年人和肝、腎功能不全者，更是不適應的，此外還易發(fā)生低血糖。鑒于糖尿病對人體健康的危害極大，而目前市場上尚無十分理想的治療糖尿病的藥物，人們一直在努力以尋求治療糖尿病的最佳途徑。經(jīng)過研究發(fā)現(xiàn)殼聚糖具有一定的降血糖作用，推測其作用機理在于殼聚糖能刺激胰島β細胞合成、分泌及釋放胰島素，并降低胰島α細胞分泌胰高血糖素，同時作用于肝臟，抑制肝糖元異生和體內糖分的吸收，減少糖輸出，并增強周圍組織對糖的利用而降低血糖，還可能會增加胰島素受體和葡萄糖受體，提高胰島素敏感性，加強生物活性，使受體后的抵抗減弱，抑制細胞內氧化酶系統(tǒng)而致組織缺氧，增強葡萄糖代謝，加速其利用，從而降低血糖。
眾所周知，殼聚糖是自然界大量存在的一類天然生物多糖，無毒，具有很多生物活性，如抗腫瘤、增強免疫力等，但殼聚糖不溶于水的性質限制了它的應用?，F(xiàn)有技術中對殼聚糖硫酸酯(CSB)研究的主要內容有殼聚糖硫酸酯含硫量較低，硫酸酯基含量小于33％。因殼聚糖不溶于水，很多人用非均相反應，這就造成殼聚糖利用率很低?，F(xiàn)又有人研究，用均相反應，但其所使用的酸溶劑為二氯乙酸。此酸溶劑價格高(94元/500ml)，雖然可增加殼聚糖的利用率，但總成本未見起色。還有人，在N2氣氛下反應2～8h制備殼聚糖硫酸酯，其方可使殼聚糖硫酸酯的含硫酸酯基量僅達到32.7％；還有人主要研究殼聚糖硫酸酯的抗凝血活性，抗艾滋病方面應用，而對其降血糖方面功效，還未見報道。
(三)技術內容本發(fā)明的目的是要提供一種降血糖的海洋藥材，即一種防治糖尿病的藥物化合物——甲殼低聚糖硫酸酯和/或殼聚糖硫酸酯作為制備降血糖藥物中的應用。由于研究發(fā)現(xiàn)，殼聚糖經(jīng)磺化后所得聚糖硫酸酯(CSA、CSB)衍生物，具有與肝素類似的結構，并具有強聚陰離子性質，因而引起了廣大學者的關注。因此對殼聚糖進行化學改性和修飾，以擴大其應用范圍，已成為當今的熱門。本發(fā)明的防治糖尿病的藥物化合物具有與肝素類似結構和強聚陰離子性質，已研究其除了具有抗凝、抗栓和抗病毒等作用外，且對人體無毒副作用，有望在深層次研究而被開發(fā)利用，為人類造福。
本發(fā)明的任務是有以下技術方案完成的，研制了一種防治糖尿病的藥物化合物——甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)和/或殼聚糖硫酸酯(CSB)作為制備降血糖藥物中的應用。兩該聚糖硫酸酯(CSA、CSB)可以有效量的組分與藥用載體和/或賦形劑，制成口服液，氣霧劑。
所述的兩該聚糖硫酸酯(CSA、CSB)還可用0.5％羧甲基纖維素鈉溶液配成所需濃度混懸液。
兩該聚糖硫酸酯(CSA、CSB)化合物的典型結構式為 其中n為聚合度3～600，R1為SO3Na或H，R2為SO3Na或H或Ac，R1與R2同為H或Ac者除外；該化合物的活性基團——硫酸酯基(OSO3-)的含量為40.73～42.21％；其中，淡黃色棉花狀的甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)分子量為1～6KD，淡黃色棉花狀的殼聚糖硫酸酯(CSB)分子量為30～100KD。
所述的甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)，其聚合度3～15；所述的殼聚糖硫酸酯(CSB)，其聚合度100～600。
所述防治糖尿病藥物的甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)的制備步驟如下(1)酯化試劑的制備一定量的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)置與三口瓶中，經(jīng)冰鹽浴冷卻后，攪拌下緩慢滴加適量氯磺酸，始終保持反應體系溫度小于5℃；(2)稱取定量的殼聚糖原料；(3)加適量的2％乙酸溶液，將原料充分溶解；(4)將上述充分溶解的原料，放于微波爐中反應數(shù)分鐘；(5)將上述加熱反應的原料，用2N的NaOH溶液中和至中性，再放置一段時間；(6)將中和至中性的上述料液進行抽濾；(7)取濾餅進行烘干，所得的淡黃色固體物質；再粉碎烘干的該物質，測其分子量，該物質即為較低分子量的甲殼低聚糖；(8)取適量上述粉碎烘干的產(chǎn)物，加入適量甲酰胺溶劑；(9)將上述混合物，攪拌均勻后，加入適量甲酸或二氯乙酸，混合均勻后；(10)再加入一定量磺化劑DMF·SO3，攪拌均勻后；(11)再在40～60℃溫度下，攪拌反應1～2h；(12)將上述反應液再加入3倍體積的95％乙醇，當出現(xiàn)大量白色絮狀沉淀時，放置4℃冷藏柜中沉化30min，得到的沉淀物即是甲殼低聚糖硫酸酯的粗產(chǎn)品；(13)將上述沉淀物進行抽濾，取濾餅；(14)將上述濾餅再用水溶解，然后加2N的NaOH溶液中和至中性；(15)將上述溶液用透析袋進行透析，除鹽后取透析液；或使用超濾方法除鹽，取截留溶液；(16)再將上述溶液，濃縮至1/10體積；(17)將上述濃縮液放于冰柜中凍結，然后冷凍干燥得淡黃色棉花狀物質；(18)粉碎該棉花狀物質，測定其含硫量及分子量，取符合規(guī)定的低分子量1～6KD的甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)作為防治糖尿病的藥物。
本發(fā)明的防治糖尿病藥物制備方法的甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)的制備步驟中所述的(1)中的DMF與氯磺酸的體積比為10～5∶1；所述的(3)中的2％乙酸溶液的量與(2)中殼聚糖的體積重量比為6～30∶1(V/W)；所述的(4)在微波爐中反應到100℃，反應時間3～6min；所述的(7)中的淡黃色固體物質的分子量為9.21×103～3.86×104道爾頓；所述的(8)中取適量烘干產(chǎn)物與適量甲酰胺溶劑的體積重量比為15～50∶1(V/W)；所述的(9)中加入88％的濃甲酸量與(8)中的混合物的體積比為1∶3～10(V/V)；所述的(10)中加入磺化劑DMF·SO3的量為50～100ml；所述的(11)中的攪拌反應，是在大氣氣氛下常壓反應的；所述的(15)中的透析袋是用1和8KD的兩種膜包，所截取透析液是截留1～6KD分子量大小的產(chǎn)物。
所述防治糖尿病的藥物的殼聚糖硫酸酯(CSB)的制備步驟如下(1)酯化試劑的制備一定量的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)置與三口瓶中，經(jīng)冰鹽浴冷卻后，攪拌下緩慢滴加適量氯磺酸，始終保持反應體系溫度小于5℃；(2)取適量殼聚糖原料，加入適量甲酰胺溶劑；(3)將上述混合物，攪拌均勻后，加入適量甲酸或二氯乙酸，混合均勻后；(4)再加入一定量磺化劑DMF·SO3，攪拌均勻后；在40～60℃溫度下，攪拌反應1～2h；(5)將上述反應液再加入3倍體積的95％乙醇，當出現(xiàn)大量白色絮狀沉淀時，放置4℃冷藏柜中沉化30min，得到的沉淀物即是殼聚糖硫酸酯的粗產(chǎn)品；(6)將上述沉淀物進行抽濾，取濾餅；(7)將上述濾餅再用水溶解，然后加2N的NaOH溶液中和至中性；(8)將上述溶液用透析袋進行透析，除鹽后取透析液；或使用超濾方法除鹽取截留溶液；(9)再將上述溶液，濃縮至1/10體積；(10)將上述濃縮液放于冰柜中凍結，然后冷凍干燥得淡黃色棉花狀物質——殼聚糖硫酸酯(CSB)；(11)粉碎該棉花狀物質，測定其含硫量及分子量，取符合規(guī)定分子量30～100KD的殼聚糖硫酸酯(CSB)作為防治糖尿病的藥物。
本發(fā)明的防治糖尿病藥物的制備方法中的殼聚糖硫酸酯(CSB)的制備步驟中，所述的(1)中DMF與氯磺酸的體積比為10～5∶1；所述的(2)中的取適量殼聚糖原料的量與適量甲酰胺溶劑的比為15～50∶1(V/W)；所述的(3)中加入88％濃甲酸量為3～10ml；所述的(4)中加入磺化劑DMF·SO3的量為50～100ml其中的攪拌反應是在大氣氣氛下常壓反應的；所述的(8)中所用的透析袋是用截留分子量最低限為1.2KD的透析袋，進行透析脫鹽。
本發(fā)明的甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)和/或殼聚糖硫酸酯(CSB)作為制備降血糖海洋藥物的應用是本發(fā)明的重要保護范圍。
所述的甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)和/或殼聚糖硫酸酯(CSB)可以有效量的組分與藥用載體和/或賦形劑，制成口服液，氣霧劑。
所述的甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)和/或殼聚糖硫酸酯(CSB)還可用0.5％羧甲基纖維素鈉溶液配成所需濃度混懸液。
本發(fā)明的防治糖尿病的藥物化合物，其包括甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)和/或殼聚糖硫酸酯(CSB)，這兩種防治糖尿病藥物的試驗積極效果如下(A)甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)的毒理學試驗1.實驗動物實驗動物昆明種小鼠，體重18-22克，雌雄各半，由山東省新藥藥理研究中心實驗動物室提供，合格證號970102飼養(yǎng)條件室溫18-22℃，小鼠每籠5只，自由攝水攝食，飼料為顆粒鼠料，由山東省新藥藥理研究中心實驗動物室提供。
試驗方法預試驗表明，本品毒性較低，難以測出LD50，故進行其小鼠一日內最大耐受量測定。
2.給藥方式2.1i.g給藥樣品甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)溶液配制25g/100ml，給藥量0.4ml/10g，取健康昆明種小鼠20只，雌雄各半，試驗前12小時禁食不禁水，第二日按0.4ml/10g體重i.gCSA混懸液，于8:00am ig一次，藥后立即觀察動物反應情況，并記錄動物行為活動、呼吸、精神狀態(tài)、大小便性狀及顏色、被毛、鼻、眼、口腔分泌物和死亡情況，連續(xù)觀察7天。
2.2i.p給藥選擇樣品CSA，配制溶液濃度12.5g/100ml，給藥量0.2ml/10g，取健康昆明種小鼠20只，雌雄各半，試驗前12小時禁食不禁水，第二日按0.2ml/10g體重i.p混懸液，于8:00am i.p一次，藥后立即觀察動物反應情況，并記錄動物行為活動、呼吸、精神狀態(tài)、大小便性狀及顏色、被毛、鼻、眼、口腔分泌物和死亡情況，連續(xù)觀察7天。
3實驗結果3.1.CSA.ig給藥后小鼠行為活動、呼吸、精神狀態(tài)、大小便性狀及顏色、被毛、鼻、眼、口腔等均未見明顯異常，連續(xù)觀察7天未見明顯變化，第7天處死并剖檢部分小鼠，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等主要臟器均無肉眼可見異常。表明CSA小鼠ig給藥的一日最大耐受量大于10g/kg，本品一次用藥無明顯毒性作用。
3.2.CSA i.p給藥后小鼠活動立即增加，十分鐘后動物逐漸出現(xiàn)扭體，活動減少，一小時后扭體癥狀消失，動物開始出現(xiàn)俯臥，閉目不動，直至藥物后八小時仍少動，藥后第二天動物恢復正常。連續(xù)觀察7天未見明顯變化，第7天處死并剖檢部分小鼠，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等主要臟器均無肉眼可見異常。表明CSA小鼠i.p給藥的一日最大耐受量大于2.5g/kg，本品一次用藥無明顯毒性作用。
該樣品的原料殼聚糖天然無毒，具有生物相容性并在體內降解，經(jīng)磺化引入SO42-，結構類似肝素，與其它含SO42-的天然多糖一樣，其毒副作用小。經(jīng)過我們的實驗證明CSA毒副作用小，可見甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)作為新藥開發(fā)是可行的。
(B)殼聚糖硫酸酯(CSB)(CSB)的降血糖試驗11.實驗動物昆明種小鼠，體重24-28克，雌雄各半，由山東省新藥藥理研究中心實驗動物室提供，合格證號9701022.主要藥品試劑及設備淡黃色粉末CSA用0.5％羧甲基纖維素鈉溶液配成所需濃度混懸液。Lab-500型全自動生化分析法，由南京桃園應用生物技術有限公司生產(chǎn)。血糖試劑盒(葡萄糖氧化酶法)，由北京中生生物工程高技術公司生產(chǎn)，批號981129。
3.試驗分組及高血糖癥造型取小鼠6組，各組小鼠經(jīng)尾靜脈注射四氧嘧啶70mg/kg造成高血糖模型，72h后測定空腹血糖水平。結果表明，四氧嘧啶可造成小鼠血糖顯著升高。然后分別給藥igCSA、CSB 300mg/kg和1000mg/kg，陽性對照組消渴丸組1250mg/kg，陰性對照組給等體積的0.5％羧甲基纖維素鈉溶液。分別與給藥后2、4、6、12和24h測定血糖水平，甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)能明顯抑制四氧嘧啶所致小鼠血糖升高，見表1表1殼低聚糖硫酸酯對四氧嘧啶所致小鼠高血糖的影響
注x±s，n＝10，各對照組比較，*1p＜0.001，*2p＜0.01從上表可以看出，甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)低高劑量組對四氧嘧啶所致的小鼠高血糖有明顯的抑制作用，高劑量組比低劑量組抑制率高，說明高低劑量組之間有明顯的量效關系。它們抑制血糖的效果要比對照組消渴丸好，抑制率比消渴丸高。高分子量殼聚糖硫酸酯(CSB)由表中可以看出，它的降血糖效果比低分子量殼聚糖硫酸酯(CSB)的效果好，也表現(xiàn)出明顯的量效關系。說明分子量是影響降血糖活性的一重要因素。
四氧嘧啶能選擇性地破壞胰島β細胞，而殼聚糖硫酸酯(CSB)對四氧嘧啶所致的血糖升高有明顯的抑制作用，這表明殼聚糖硫酸酯(CSB)可能減弱四氧嘧啶對胰島β細胞的損傷或改善受損傷的β細胞的功能。從而具有抗四氧嘧啶所致血糖升高的效果。
(C)甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)的調節(jié)血糖試驗21.實驗動物Wistar大鼠，體重200-300克，雌雄各半。由山東省新藥藥理中心實驗動物室提供，合格證號9701022.試驗分組及高血糖癥造型將小鼠隨機分成6組，每組10只。陽性對照組ig優(yōu)降糖25mg/kg，陰性對照組給等體積的0.5％羧甲基纖維素鈉溶液，其余四組分別ig CSA、CSB300mg/kg和1000mg/kg。與給藥后4h，各組小鼠ip腎上腺素0.02mg/kg，于注射后1h斷頭取血測血糖。結果表明甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)300mg/kg和1000mg/kg可明顯抑制腎上腺素的升高血糖作用，見表2。表2殼聚糖硫酸酯(CSB)對腎上腺素引起血糖升高的影響
從上表可以看出，甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)低高劑量組對腎上腺素所致的小鼠高血糖有明顯的抑制作用，高劑量組比低劑量組抑制率高，說明高低劑量組之間有明顯的量效關系。它們抑制血糖的效果要比對照組優(yōu)降糖好，抑制率比優(yōu)降糖高。由表中還可以看出高分子量殼聚糖硫酸酯(CSB)降血糖效果比低分子量甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)效果好，也表現(xiàn)出明顯的量效關系。說明分子量是影響降血糖活性的一重要因素。腎上腺素能促進肝糖原和肌糖原的分解而引起血糖升高，甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)能拮抗腎上腺素的升血糖作用，可能與抑制糖原分解有關。
本發(fā)明所述甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)的制備步驟(9)中與所述殼聚糖硫酸酯(CSB)的制備步驟(3)中所加入的酸溶劑都是88％的濃甲酸(本發(fā)明的實施例中優(yōu)選使用88％的濃甲酸5ml)。使用該酸溶劑時不用除水及其它雜質，簡化了工藝程序，節(jié)約了干燥成本。選擇甲酸還由于甲酸的價格(10元/500ml)遠遠低于二氯乙酸(94元/500ml)，用此酸溶劑所進行的均相反應，所得產(chǎn)物的含硫量和產(chǎn)率均與用二氯乙酸相當，其性格價能比大大提高了。在本領域技術中使用甲酸作為酸溶劑還未見有報道。
本發(fā)明所述甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)的制備步驟(11)中與所述殼聚糖硫酸酯(CSB)的制備步驟(4)中的攪拌反應，是在大氣氣氛下常壓進行反應的。此項改進與前人“在N2氣氛下反應2～8h”的技術相比，其方法更簡單易行，而且節(jié)省了能源。
綜上所述，本發(fā)明的防治糖尿病的藥物化合物的兩種聚糖硫酸酯(CSA、CSB)的活性含硫量高，殼聚糖原料利用率也高；所用制備材料與前人所用的相比，性能價格比高。兩種聚糖硫酸酯(CSA、CSB)首次作為降血糖的海洋藥物方面的應用。由于受活性基團硫酸酯基及其分子量的影響，該防治糖尿病的藥物化合物在抗血糖、調血脂、增強免疫力、抗凝血等方面顯示出的活性。本防治糖尿病的藥物化合物的制備方法采用均相反應，簡單易行，操作成本低，污染少，原料利用率高。
(四)附圖及其實施例，本發(fā)明的保護范圍不僅局限于以下實施例中。
本發(fā)明的實施例結合附圖進一步說明如下

圖1為殼聚糖原料的紅外光譜圖。
圖2為殼聚糖硫酸酯的紅外光譜圖。
圖3為殼低聚糖硫酸酯的13C-NMR圖譜。
本發(fā)明防治糖尿病的海洋藥物的制備方法實施例如下I、甲殼低聚糖硫酸酯的制備實施例①.酯化試劑的制備采用N，N-二甲基甲酰胺(DMF)為反應介質制備磺化試劑——DMF·SO3(二甲基甲酰胺—氯磺酸)磺化劑。向裝有攪拌裝置的三口燒瓶中加入50mlN，N-二甲基甲酰胺，置于冰鹽水浴中。在攪拌狀態(tài)下，滴加一定體積氯磺酸，控制滴加的速度，使反應體系的溫度保持在5℃以下。滴加完畢后在室溫下繼續(xù)攪拌一定時間，使磺化試劑更為安全有效。氯磺酸加入量如表3表3DMF與氯磺酸的比例對磺化劑狀態(tài)的影響
由上表可知，本實驗選擇DMF與氯磺酸的比為10～5∶1均可，但5∶1效果最佳。
②.微波作用下殼聚糖的降解，制備如下(1)取2～5g上述粉碎烘干的產(chǎn)物，加入30～150ml甲酰胺溶劑；(2)將上述混合物，攪拌均勻后，加入3～10ml甲酸或二氯乙酸，混合均勻后；(3)再加入50～100ml磺化劑DMF·SO3，攪拌均勻后；(4)再在40～60℃溫度下，攪拌反應1～2h；(5)將上述反應液再加入3倍體積的95％乙醇，當出現(xiàn)大量白色絮狀沉淀時，放置4℃冷藏柜中沉化30min；(6)將上述沉淀物進行抽濾，取濾餅；(7)將上述濾餅再用水溶解，然后加2N的NaOH溶液中和至中性；(8)將上述溶液用透析袋進行透析，除鹽后取透析液；或使用超濾方法除鹽，取截留溶液；(9)再將上述溶液，濃縮至1/10體積；(10)將上述濃縮液放于冰柜中凍結，然后冷凍干燥得淡黃色棉花狀物質；(11)粉碎該棉花狀物質，測定其含硫量及分子量，取符合規(guī)定的低分子量1～6KD的甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)作為防治糖尿病的藥物。④制取本發(fā)明的兩種聚糖硫酸酯(CSA，CSB)的條件見表5、6表5在二氯乙酸作用下甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)制備條件及結果
表6在甲酸作用下甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)制備條件及結果
由上兩表可知，甲酸作為溶劑效果與二氯乙酸作為酸溶劑效果相當，某種程度來講稍微好些，且甲酸價格遠遠低于二氯乙酸，因此用性價比來衡量，甲酸優(yōu)于二氯乙酸。
II、殼聚糖硫酸酯(CSB)的制備實施例①.酯化試劑的制備與甲殼低聚糖硫酸酯中酯化試劑的制備相同。
②.高分子量的殼聚糖硫酸酯(CSB)的制備，制備步驟如下(1)取2～5g殼聚糖原料，加入30～150ml甲酰胺溶劑；將上述混合物，攪拌均勻后，加入3～10ml甲酸或二氯乙酸，混合均勻后；(2)再加入50～100ml磺化劑DMF·SO3，攪拌均勻后；(3)再在40～60℃溫度下，攪拌反應1～2h；(4)將上述反應液再加入3倍體積的95％乙醇，當出現(xiàn)大量白色絮狀沉淀時，放置4℃冷藏柜中沉化30min，得到的沉淀物即是殼聚糖硫酸酯的粗產(chǎn)品；
(5)將上述沉淀物進行抽濾，取濾餅；(6)將上述濾餅再用水溶解，然后加2N的NaOH溶液中和至中性；(7)將上述溶液用透析袋進行透析，除鹽后取透析液；或使用超濾方法除鹽取截留溶液；(8)再將上述溶液，濃縮至1/10體積；(9)將上述濃縮液放于冰柜中凍結，然后冷凍干燥得淡黃色棉花狀物質——殼聚糖硫酸酯(CSB)；(10)粉碎該棉花狀物質，測定其含硫量及分子量，取符合規(guī)定分子量30～100KD的殼聚糖硫酸酯(CSB)作為防治糖尿病的藥物。
制取的甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)條件見表7、8表7在二氯乙酸作用下甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)制備條件及結果
表8在甲酸作用下甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)制備條件及結果
由上兩表可知，甲酸作為溶劑效果與二氯乙酸作為酸溶劑效果相當，某種程度來講稍微好些，且甲酸價格遠遠低于二氯乙酸，因此用性能價格比來衡量，甲酸優(yōu)于二氯乙酸。
④.殼聚糖硫酸酯(CSB)的圖譜分析(1).殼聚糖硫酸酯(CSB)的紅外光譜圖分析結果由圖1殼聚糖原料的紅外光譜看出，3435cm-1是亞胺基伸縮振動，2917cm-1和2874cm-1分別是-CH3，-CH2的伸縮振動，1659，1597cm-1是酰胺I帶，酰胺II帶，1379cm-1是-CH2的面外彎曲振動，1076cm-1是醚鍵(c-o-c)的伸縮振動，此外，897cm-1，930cm-1，750cm-1處吸收弱，說明殼聚糖是以β-1.4糖苷鍵連結的多聚物，紅外光譜結果與文獻報導一致(李繼珩，1997；王轉花，1997；周赤，1996)。
磺酸化產(chǎn)物IR見圖2，與圖1比較，在3429cm-1，2923cm-1，1629cm-1，1535cm-1，1062cm-1出現(xiàn)了殼聚糖骨架的特征峰，而在1257cm-1，803cm-1，1383cm-1處出現(xiàn)三個峰，分別是Vs(s＝0)，V(s-o-c)和Vas(s＝0)，紅外光譜與參考文獻圖譜一致(A.M.Naggi，1985)，證明反應后在殼聚糖分子上引入了硫酸基團。
(2).殼聚糖硫酸酯(CSB)的13C-NMR光譜分析結果從圖3看出，在殼聚糖的C6位引入硫酸酯基(-OSO3-)后，由于硫酸酯基的去屏蔽作用使C6的化學位移由62.85ppm明顯向低場漂移至69.3ppm，C3的化學位移由75.3ppm明顯向低場漂移至78.1ppm，C2的化學位移由56.7ppm明顯向低場漂移至58.2ppm，表明此反應已成功的將硫酸酯基引入到殼聚糖上，在100.45ppm，77.78ppm，75.40ppm，處分別出現(xiàn)C-1，C-4，C-5信號，此三位點化學位移幾乎不變。
權利要求
1.甲殼低聚糖硫酸酯和/或殼聚糖硫酸酯作為制備降血糖藥物中的應用。
2.根據(jù)權利要求1所述甲殼低聚糖硫酸酯和/或殼聚糖硫酸酯作為制備降血糖藥物中的應用，其特征在于所述的甲殼低聚糖硫酸酯和/或殼聚糖硫酸酯可以有效量的組分與藥用載體和/或賦形劑，制成口服液，氣霧劑。
3.根據(jù)權利要求1所述甲殼低聚糖硫酸酯和/或殼聚糖硫酸酯作為制備降血糖藥物中的應用，其特征在于所述的甲殼低聚糖硫酸酯和/或殼聚糖硫酸酯還可用0.5％羧甲基纖維素鈉溶液配成所需濃度混懸液。
全文摘要
本發(fā)明是一種甲殼低聚糖硫酸酯和/或殼聚糖硫酸酯作為制備降血糖藥物中的應用。該防治糖尿病的藥物化合物，其包括甲殼低聚糖硫酸酯(CSA)和/或殼聚糖硫酸酯(CSB)。兩該化合物的典型結構式為右式,其中n為聚合度3～600，R
文檔編號A61P3/00GK1471921SQ0313878
公開日2004年2月4日 申請日期2003年7月5日 優(yōu)先權日2003年7月5日
發(fā)明者李鵬程, 邢榮娥, 劉松, 于華華 申請人:中國科學院海洋研究所