專利名稱：荊芥揮發(fā)油及制劑的制法和在制備治療抗感冒藥中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥領(lǐng)域，具體地說是涉及一種以中藥材為原料而提取的藥物活性成份及其制劑的制備方法和在制備治療抗感冒藥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
感冒是由感冒病毒引起的一種常見的多發(fā)病，主要分普通感冒及流行性感冒兩種，病癥包括發(fā)燒、頭痛、肌肉痛、流鼻涕、咽喉痛等。感冒貌似“小病”，但若是治療不及時(shí)，容易導(dǎo)致多種嚴(yán)重的并發(fā)癥，如病毒性心肌炎等，嚴(yán)重者并可能有生命危險(xiǎn)，尤其是其中的流行性感冒，它是由流感病毒引起的一種發(fā)病率高、流行廣泛、傳播迅速的急性呼吸道傳染病。1918年、1957年及1968年在全球爆發(fā)了3次大流感疫癥，有數(shù)千萬人被流感奪去了生命。因流感病毒的表面抗原紅細(xì)胞凝集素HA(Hemagglutinin)及神經(jīng)氨酸酶NA(Neuraminidase)能經(jīng)常不斷地發(fā)生變異，造成感冒病毒種類繁多，進(jìn)而給采用疫苗預(yù)防流感帶來了一定的困難。目前，患感冒的人數(shù)越來越多，而且每年冬春季節(jié)都有幾次流感發(fā)作，故感冒藥的應(yīng)用有著廣泛的市場前景。盡管經(jīng)過多年的研究，國際上已研制出了一些藥物用于防治流感，當(dāng)前臨床上用于治療感冒的藥品主要分為西藥和中藥兩種，西藥如金剛烷胺(amantadine)、金剛乙胺(rimantadine)、三氮唑核苷(ribavirin)等，雖然具有顯效較快的優(yōu)點(diǎn)，但副作用較大，如很多西藥抗感冒藥中因含副作用極大的PPA而被禁用；相比較而言，中藥及其有效成分副作用較少，但目前市場上應(yīng)用的抗感冒中藥，雖療效較好，但顯效較慢，不能滿足人們現(xiàn)代化快節(jié)奏生活的需要。

發(fā)明內(nèi)容
迄今為止，流感仍是未被人類有效控制的病毒性傳染病，因而從植物藥中尋找高效、無毒副作用的抗流感病毒藥物已得到世界各國的重視。故抗感冒新藥的研制開發(fā)有著現(xiàn)實(shí)的意義，如能開發(fā)一種療效顯著、副作用較小的新型抗感冒藥，必將對人們的醫(yī)療健康事業(yè)做出相應(yīng)的貢獻(xiàn)。在此指導(dǎo)思想下，我們以傳統(tǒng)解表藥中藥材荊芥為原藥材，以其有效部位荊芥揮發(fā)油為研究對象，系統(tǒng)研究了荊芥揮發(fā)油及其制劑的制備方法以及在感冒治療中的應(yīng)用。
1、發(fā)明目的本發(fā)明目的是提供一種荊芥揮發(fā)油及其制劑的制備方法，以及在制備治療抗感冒藥物中的應(yīng)用。
中藥材荊芥(Schizonepeta tenuifolia Briq.)為唇形科一年生草本植物荊芥的干燥地上部分。荊芥最早以“假蘇”一名載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被列為中品；荊芥之名始載于《吳普本草》。荊芥性溫、味辛，亦有人認(rèn)為其性平或涼；其生品具有祛風(fēng)解表、宣毒透疹、散瘀止血之功效，主治風(fēng)寒感冒、咽喉腫痛及多種皮膚病，為中醫(yī)臨床常用藥物。近期，丁安偉等對荊芥藥材進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，從中提取得到一有效部位—荊芥揮發(fā)油，經(jīng)系統(tǒng)的藥理毒理實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，表明該提取物具有明顯的抗炎、抗菌、抗甲型及乙型流感病毒活性，且具有毒副作用小的優(yōu)點(diǎn)，有著良好的開發(fā)應(yīng)用前景，可將其進(jìn)一步開發(fā)成有效的抗感冒新藥。
2、技術(shù)方案揮發(fā)油提取常采用水蒸氣蒸餾法、溶劑提取法、超臨界萃取法等方法，其中水蒸氣蒸餾法具有操作方便、成本低廉、無污染、適用于大生產(chǎn)等特點(diǎn)，故本發(fā)明采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油。
一種荊芥揮發(fā)油，其特征在于由荊芥穗80～120g，加水8～12倍量，水蒸氣蒸餾而制得的提取物。
一種荊芥揮發(fā)油的提取方法，其提取步驟為(1)稱取荊芥穗80～120g，加水8～12倍量，水蒸氣蒸餾2～8小時(shí)；(2)用油水分離器分離得含水荊芥揮發(fā)油；(3)在-9～15℃下冰凍6～36小時(shí)，去冰除水，得荊芥揮發(fā)油。
一種荊芥揮發(fā)油制劑，其特征在于加入制備不同劑型的各種輔料，以專門的制劑工藝可制成膠囊劑(硬膠囊、軟膠囊)、噴霧劑及其它各種制劑。
一種硬膠囊劑的制備方法，其制備步驟為(1)取1～2g的荊芥揮發(fā)油，加6～12倍量的β-環(huán)糊精和18～22倍β-環(huán)糊精的蒸餾水，在25～40℃條件下用分散機(jī)高速分散10～60分鐘，進(jìn)行藥液包結(jié)；(2)將包結(jié)后藥液用噴霧干燥法去除黏附的揮發(fā)油，噴霧干燥的進(jìn)風(fēng)溫度為140～180℃，出風(fēng)溫度為60～80℃；(3)將包結(jié)物噴干粉末，加適當(dāng)?shù)?5％的乙醇，進(jìn)行干式制粒，灌裝膠囊。
一種軟膠囊劑的制備方法，其制備步驟為(1)取1～2g的荊芥揮發(fā)油，加30～34g的聚乙二醇-400和1～4g的甘油，在25~40℃條件下用攪拌0.5～4小時(shí)，進(jìn)行藥液分散；(2)將分散后藥液壓制軟膠囊；(3)將壓制好的軟膠囊用60～90％的乙醇洗粒，20～40℃烘干24～96小時(shí)，即得。
一種噴霧劑的制備方法，其制備步驟為(1)取1～2g荊芥揮發(fā)油，加20～40％的乙醇及10％～30％的聚乙二醇，分散成溶液狀；(2)加水200～400ml，分裝成口腔噴霧劑。
以荊芥揮發(fā)油為原料，可將其開發(fā)成各種制劑，如膠囊劑、噴霧劑等，這些制劑具有攜帶方便，服用簡便等優(yōu)點(diǎn)，亦可將其開發(fā)成其它劑型。
荊芥揮發(fā)油在制備治療抗感冒藥物中的應(yīng)用。
以下結(jié)合荊芥揮發(fā)油的藥效學(xué)試驗(yàn)，進(jìn)一步說明本發(fā)明的有益效果(1)體外抗菌試驗(yàn)結(jié)果表明不同濃度的荊芥揮發(fā)油對臨床分離菌株肺炎雙球菌，人葡萄球菌、表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、中葡萄球菌，肺炎克雷百氏菌、陰溝桿菌、溶葡萄球菌、產(chǎn)堿桿菌、大腸桿菌、奇變桿菌、不動(dòng)桿菌、鏈球菌、乙型鏈球菌、大腸桿菌、哈夫利亞桿菌、聚團(tuán)桿菌、變形桿菌、板畸桿菌、科代葡萄球菌、洋蔥假單孢桿菌、產(chǎn)氣桿菌和標(biāo)準(zhǔn)菌株金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、藤黃微球菌、短小芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌等均具有一定的抑菌作用，MIC在0.625mg～10mg之間，提示荊芥揮發(fā)油具有體外抗菌作用。
(2)體內(nèi)抗菌試驗(yàn)結(jié)果表明①荊芥揮發(fā)油10mg/kg、20mg/kg劑量組可降低金黃色葡萄球菌感染小鼠死亡率，與模型對照組比較有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)。②荊芥揮發(fā)油20mg/kg劑量組可降低肺炎雙球菌感染小鼠死亡率，5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg三個(gè)劑量組可延長感染小鼠的存活天數(shù)；與模型對照組比較有顯著性差異(P＜0.05＝提示荊芥揮發(fā)油對金黃色葡萄球菌和肺炎雙球菌感染小鼠具有一定的保護(hù)作用。
(3)體內(nèi)抗病毒試驗(yàn)結(jié)果表明①荊芥揮發(fā)油10mg/kg、20mg/kg劑量組對甲型流感病毒(A/PR/8/34)感染小鼠具有明顯的保護(hù)作用，保護(hù)率分別為58.7％和69.0％，并能明顯延長甲型流感病毒感染小鼠的存活時(shí)間，與模型對照組比較有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01＝。②荊芥揮發(fā)油5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg劑量組能明顯降低甲型流感病毒感染小鼠的肺指數(shù)值，與模型對照組比較有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01＝，肺指數(shù)抑制率分別為24.4％，28.9％和34.2％，組織病理學(xué)檢查結(jié)果，荊芥揮發(fā)油具有抗甲型流感病毒所致肺部感染疾病的作用，抗病毒感染效果以荊芥揮發(fā)油10mg/kg、20mg/kg作用較強(qiáng)，肺部總體病變程度最輕。提示荊芥揮發(fā)油具有抗甲型流感病毒感染的作用。③荊芥揮發(fā)油10mg/kg、20mg/kg劑量組均可明顯延長乙型流感病毒感染小鼠的存活天數(shù)和降低乙型流感病毒感染小鼠死亡數(shù)，與模型對照組比較具顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01＝。④荊芥揮發(fā)油10mg/kg、20mg/kg劑量組均可明顯降低乙型流感病毒感染小鼠的肺指數(shù)值，肺指數(shù)抑制率為23.23％和22.87％，提示荊芥揮發(fā)油具有減輕乙型流感病毒感染小鼠肺部病變的作用。提示荊芥揮發(fā)油對乙型流感病毒感染小鼠具有明顯的保護(hù)作用。
(4)抗炎試驗(yàn)結(jié)果表明①荊芥揮發(fā)油10mg/kg、20mg/kg可降低二甲苯所致耳廓腫脹度，與模型組比較有明顯差異(P＜0.05，P＜0.01)。②荊芥揮發(fā)油10mg/kg、20mg/kg可降低醋酸所致的小鼠腹腔洗出液的光密度值的增加，與模型組比較有明顯差異(P＜0.05，P＜0.01＝，提示荊芥揮發(fā)油具有一定的抗炎作用。
(5)發(fā)汗、解熱試驗(yàn)結(jié)果表明①荊芥揮發(fā)油10mg/kg可降低干酵母所致大鼠體溫升高，與模型組比較有明顯差異(P＜0.05)。②荊芥揮發(fā)油6mg/kg可降低內(nèi)毒素所致家兔體溫升高，與模型組比較有明顯差異(P＜0.05，P＜0.01)。③荊芥揮發(fā)油5mg/kg、10mg/kg可促進(jìn)大鼠足趾汗腺的分泌，與模型組比較有明顯差異(P＜0.05，P＜0.01)。提示荊芥揮發(fā)油具有一定解熱、發(fā)汗作用。
綜上所述荊芥揮發(fā)油具有較好的抗炎、解熱、發(fā)汗、抗菌和抗病毒作用。
3、有益效果(1)荊芥揮發(fā)油為從傳統(tǒng)中藥中提取的有效部位，具有較好的抗炎、解熱、發(fā)汗、抗菌和抗病毒作用①體外抗菌試驗(yàn)結(jié)果表明荊芥揮發(fā)油具有體外抗菌作用。②體內(nèi)抗菌試驗(yàn)結(jié)果表明荊芥揮發(fā)油對金黃色葡萄球菌和肺炎雙球菌感染小鼠具有一定的保護(hù)作用。③體內(nèi)抗病毒試驗(yàn)結(jié)果表明荊芥揮發(fā)油具有抗甲型、乙型流感病毒感染小鼠具有明顯的保護(hù)作用。④抗炎試驗(yàn)結(jié)果表明荊芥揮發(fā)油具有一定的抗炎作用。⑤發(fā)汗、解熱試驗(yàn)結(jié)果表明荊芥揮發(fā)油具有一定解熱、發(fā)汗作用。
(2)荊芥揮發(fā)油具有劑量小的優(yōu)點(diǎn)。其小鼠有效劑量為10mg/kg、20mg/kg。
(3)荊芥揮發(fā)油具有毒副作用小的優(yōu)點(diǎn)，其小鼠LD50為560mg/kg，95％的可信限為514mg/kg～609mg/kg。
(4)以荊芥揮發(fā)油為原料制成硬膠囊的包結(jié)工藝中采用均質(zhì)分散工藝，該工藝可以大大縮短包結(jié)時(shí)間，提高包結(jié)效率。
(5)硬膠囊制備工藝中的干燥工藝采用噴霧干燥工藝，該工藝可以去除黏附的揮發(fā)油，提高半成品及制劑的穩(wěn)定性。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1、荊芥揮發(fā)油的提取方法，其提取步驟為(1)取荊芥穗3.31kg，加10倍量水，水蒸氣蒸餾6小時(shí)；(2)用油水分離器分離得含水荊芥揮發(fā)油33.0g；(3)在-12℃冰凍24小時(shí)，去冰除水，得荊芥揮發(fā)油31.5g，即得。
實(shí)施例2、本發(fā)明硬膠囊劑—金感膠囊的制備方法，其制備步驟為(1)取荊芥揮發(fā)油31.5g，加入8倍量的β-環(huán)糊精(252g)和20倍β-環(huán)糊精的蒸餾水(5.04L)在30℃條件下，用分散機(jī)高速分散30分鐘；(2)包結(jié)藥液采用噴霧干燥，設(shè)置進(jìn)風(fēng)溫度160℃，出風(fēng)溫度70℃，得包結(jié)物噴干粉末；(3)每250g噴干粉噴加10ml95％乙醇，干式制粒，灌裝膠囊1000粒，每粒裝0.25g，即得。
實(shí)施例3、本發(fā)明軟膠囊劑—清菲軟膠囊的制備方法，其制備步驟為(1)取2g的荊芥揮發(fā)油，加31.35g的聚乙二醇-400和1.65g的甘油，在30℃條件下用攪拌2小時(shí)，進(jìn)行藥液分散；(2)將分散后的藥液壓制軟膠囊；(3)將壓制好的軟膠囊用75％的乙醇洗粒，25℃烘干72小時(shí)，即得。
實(shí)施例4、口腔噴霧劑的制備方法，其步驟為(1)取1.2g荊芥揮發(fā)油，加30％的乙醇及10％的聚乙二醇，分散成溶液狀；(2)加水200ml，分裝成口腔噴霧劑。
實(shí)施例5、金感膠囊藥效學(xué)試驗(yàn)1實(shí)驗(yàn)材料1.1藥品與試劑金感膠囊，類白色粉末，每1gβ-環(huán)糊精包結(jié)物含揮發(fā)油0.084g，由南京中醫(yī)藥大學(xué)提供，批號(hào)20011220，臨用時(shí)用蒸餾水配制到所需濃度。
β-環(huán)糊精中國醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司 批號(hào)20010308環(huán)丙沙星廣州南新制藥有限公司 批號(hào)011102利巴韋林膠囊浙江—新制藥有限公司 批號(hào)010105雙黃連哈爾濱松花江制藥廠批號(hào)001014乙醚上海馬陸化工廠批號(hào)980209氯化鈉 江蘇太倉化工廠批號(hào)990901苦味酸 廣東臺(tái)山化工廠批號(hào)990623營養(yǎng)肉湯 上海市醫(yī)學(xué)化驗(yàn)所 批號(hào)010927營養(yǎng)瓊脂 上海市醫(yī)學(xué)化驗(yàn)所 批號(hào)010324綿羊紅細(xì)胞 南京江寧防疫站 批號(hào)020505胃膜素由中國藥科大學(xué)微生物室提供二甲苯上海化學(xué)試劑采購供應(yīng)站經(jīng)銷批號(hào)010121冰醋酸南京化學(xué)試劑廠批號(hào)010317伊文思蘭中國醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司 批號(hào)010213
三九感冒靈三九醫(yī)藥股份有限公司 批號(hào)20010609阿司匹林阿斯特拉(無錫)制藥有限公司 批號(hào)20020110內(nèi)毒素美國Sigma公司批號(hào)L-2630 Lot 31k4121干酵母湖北安琪酵母股份有限公司 批號(hào)20020518無水乙醇上海久意化學(xué)試劑有限公司 批號(hào)20010520碘中國成都化學(xué)試劑廠批號(hào)010314蓖麻油上海化學(xué)試劑站分裝廠 批號(hào)010623田-高氏試劑A液取碘2克溶于100ml無水乙醇即成。
田-高氏試劑B液取可溶性淀粉50克、蓖麻油100ml，兩者均勻混合即可。
1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物ICR小鼠 由南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格批號(hào)SCZK(蘇)2001-0015昆明種小鼠、SD大鼠由南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)蘇動(dòng)(質(zhì))97003，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)SYXK(蘇)2002-0053，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)許可證號(hào)SCXK(蘇)2002-0012兔由江寧縣湯山青龍山動(dòng)物繁殖廠，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)許可證號(hào)SCXK(蘇)2002-00271.3實(shí)驗(yàn)用菌株和病毒株標(biāo)準(zhǔn)菌株金黃色葡萄球菌(26003)、大腸桿菌(44104)、短小芽苞桿菌(63202)、枯草芽苞桿菌(63501)、藤黃微球菌(28001)，由衛(wèi)生部微生物鑒定所提供。
臨床分離菌株金黃色葡萄球菌，大腸桿菌，綠膿桿菌，不動(dòng)桿菌，肺炎克雷百氏菌，表皮葡萄球菌，人葡萄球菌，洋蔥假單孢桿菌、枸櫞酸腸桿菌，鏈球菌、變形桿菌、奇變桿菌、產(chǎn)氣桿菌、板畸桿菌、聚團(tuán)桿菌、溶葡萄球菌、肺炎雙球菌、乙型鏈球菌、中葡萄球菌、哈夫利亞桿菌，科代葡萄球菌、產(chǎn)堿桿菌、由江蘇省人民醫(yī)院微生物室分離鑒定提供。
病毒株甲型流感病毒A/PR/8/34，乙型流感病毒B/京防98-76由中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒所提供。
2 實(shí)驗(yàn)條件及統(tǒng)計(jì)方法2.1實(shí)驗(yàn)條件給藥前后，實(shí)驗(yàn)小鼠分籠飼養(yǎng)全價(jià)顆粒飼料，由南京江浦振興實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料廠提供，合格證號(hào)蘇動(dòng)(飼)字96001，自由飲水，室溫22±2℃，濕度55-60％。
2.2統(tǒng)計(jì)方法資料統(tǒng)計(jì)采用t檢驗(yàn)，X2檢驗(yàn)。
3實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果
3.1金感膠囊的體外抗菌作用[1][4]3.1.1增菌培養(yǎng)取各菌株少許，接種肉湯培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)18h，取出用NS稀釋至10-5備用。
3.1.2含藥平皿的的配制取金感膠囊32g加至已融化至60℃100ml瓊脂培養(yǎng)基中混勻(320mg/ml)，以二倍法稀釋成160mg、80mg、40mg、20mg、10mg、5mg、2.5mg、1.25mg 0.625mg、0.313mg、0.156mg/ml系列濃度含藥平皿待用。取鹽酸環(huán)丙沙星注射液與瓊脂培養(yǎng)基混勻，也以二倍稀釋法制成終濃度為128μg、64μg、32μg、16μg、8μg、4μg、2μg、1μg、0.5μg、0.25μg、0.125μg、0.0625μg、0.0313μg/ml的系列含藥平皿待用。
3.1.3體外抗菌活性MIC的測定在上述系列含藥平皿上用6mm無菌鋼圈打3個(gè)孔，每孔注入含菌量約為10-5CFUml，0.1ml，37℃培養(yǎng)18～20h，以無菌生長平皿培養(yǎng)基中所含藥物的最低濃度即為藥物對該菌的最低抑菌濃度(MIC)結(jié)果見表1表1金感膠囊的體外抗菌活性(n＝2)


實(shí)驗(yàn)結(jié)果所示金感膠囊對標(biāo)準(zhǔn)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、藤黃微球菌。短小芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和臨床分離菌肺炎雙球菌、人葡萄球菌、表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、中葡萄球菌、肺炎克雷百氏菌、陰溝桿菌、溶葡萄球菌、產(chǎn)堿桿菌、大腸桿菌、奇變桿菌、不動(dòng)桿菌、鏈球菌、乙型鏈球菌、大腸桿菌、哈夫利亞桿菌、聚團(tuán)桿菌、變形桿菌、板畸桿菌、科代葡萄球菌、洋蔥假單孢桿菌、產(chǎn)氣桿菌具有較強(qiáng)的抑菌作用，MIC在0.625mg-10mg之間，提示金感膠囊具有體外抗菌作用。
3.2金感膠囊的體內(nèi)抗菌作用3.2.1金黃色葡萄球菌菌液的制備取金黃色葡萄球菌菌株，用接種環(huán)挑少許于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置37℃孵箱培養(yǎng)18h。取出，劃線于血平皿上，37℃孵箱培養(yǎng)18h，取出，用6ml 5％的胃膜素洗脫菌落，用生理鹽水配成0.75ml/ml、0.25ml/ml、0.15ml/ml、0.083ml/ml濃度菌液備用。
3.2.2金黃色葡萄球菌感染小鼠死亡率預(yù)實(shí)驗(yàn)取ICR小鼠40只，♀♂各半，體重18-22g隨機(jī)分組，每組1個(gè)濃度，腹腔注射金黃色葡萄球菌菌液，0.5ml/只鼠，觀察感染小鼠死亡數(shù)，結(jié)果感染小鼠死亡率分別為100％，100％，90％，70％。實(shí)驗(yàn)選用0.11ml/ml濃度菌液。
3.2.3對金黃色葡萄球菌感染小鼠的保護(hù)作用取18-22g ICR種小鼠126只隨機(jī)分組，每組21只，♀♂兼用。(1)空白對照組等量β-環(huán)糊精20ml/kg(2)模型對照組等量β-環(huán)糊精20ml/kg。(3)雙黃連組20ml/kg。(4)金感膠囊I組5mg/kg。(5)金感膠囊II組10mg/kg。(6)金感膠囊III組20mg/kg。以上各組小鼠均灌胃給藥，灌胃容量20ml/kg，1次/天×5天，第3天給藥1小時(shí)后，腹腔注射金黃色葡萄球菌培養(yǎng)液0.5ml/只鼠(除空白對照組)，繼續(xù)給藥2天，觀察各組動(dòng)物7日內(nèi)死亡情況結(jié)果見表2表2金感膠囊對金黃色葡萄球菌感染小數(shù)死亡的保護(hù)作用組別 動(dòng)物數(shù) 劑量 死亡數(shù)存活率存活天數(shù)(只)(g/kg)(只) (％) (x±S) P值空白對照組 21 -1模型對照組 21 -1719.04 3.35±2.24雙黃連組 21 20ml 9 57.14*5.00±2.43 p＜0.05金感膠囊I組 21 0.0051052.38 4.86±2.44 p＞0.05金感膠囊II組 21 0.0109 57.14*5.10±2.35 p＜0.05金感膠囊III組21 0.0207 66.67**5.23±2.43 p＜0.05模型對照組比較*p＜0.05**p＜0.05實(shí)驗(yàn)結(jié)果所示金感膠囊10mg/kg和20mg/kg劑量組對金黃色葡萄球菌感染小鼠可降低其死亡率并可延長感染小鼠的存活天數(shù)；與模型組比較具有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)提示金感膠囊對金黃色葡萄球菌感染小鼠具有明顯的保護(hù)作用。
3.2.4肺炎雙球菌菌液的制備取肺炎雙球菌菌株，用接種環(huán)挑少許于營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置37℃孵箱培養(yǎng)18h。取出，劃線于血平皿上，37℃孵箱培養(yǎng)18h，取出，用6ml 5％的胃膜素洗脫菌落，用生理鹽水配成1ml/ml，0.5ml/ml，0.33ml/ml，0.25ml/ml濃度菌液備用。
3.2.5肺炎雙球菌感染小鼠死亡率的預(yù)實(shí)驗(yàn)取ICR小鼠40只，♀♂各半，體重18--22g隨機(jī)分組，每組1個(gè)濃度，腹腔注射肺炎雙球菌菌液，0.5ml/只鼠，觀察感染小鼠死亡數(shù)，結(jié)果感染小鼠死亡率分別為100.0％，90.0％，60.0％，40.0％實(shí)驗(yàn)選用0.5ml/ml濃度菌液。
3.2.6.金感膠囊對肺炎雙球菌感染小鼠死亡的保護(hù)作用。
取18-22g ICR種小鼠126只隨機(jī)分組，每組21只，♀♂兼用。(1)空白對照組等量β-環(huán)糊精20ml/kg(2)模型對照組等量β-環(huán)糊精20ml/kg。(3)雙黃連組20ml/kg。(4)金感膠囊I組5mg/kg。(5)金感膠囊II組10mg/kg。(6)金感膠囊III組20mg/kg。以上各組小鼠均灌胃給藥，灌胃容量20ml/kg，1次/天×5天，第3天給藥1小時(shí)后，腹腔注射肺炎雙球菌培養(yǎng)液0.5ml/只鼠(除空白對照組)，繼續(xù)給藥2天，觀察各組動(dòng)物7日內(nèi)死亡情況結(jié)果見表3表3金感膠囊對肺炎雙球菌感染小鼠死亡的保護(hù)作用組別 動(dòng)物數(shù) 劑量 死亡數(shù)存活率 存活天數(shù)(只)(g/kg) (只) (％) (x±S) P值空白對照組 21 -0模型對照組 21 -199.51.81±1.74雙黃連組 21 20ml 1242.9*3.81±2.81 p＜0.05金感膠囊I組 21 0.0051338.1 3.52±2.75 p＜0.05金感膠囊II組 21 0.0101338.1 3.71±2.62 p＜0.05金感膠囊III組21 0.0201242.9*3.95±2.95 p＜0.05與模型對照組比較*P＜0.05**P＜0.01實(shí)驗(yàn)結(jié)果所示金感膠囊20mg/kg劑量組對肺炎雙球菌感染小鼠可降低其死亡率，金感膠囊5mg/kg，10mg/kg和20mg/kg劑量組可延長感染小鼠的存活天數(shù)；與模型對照組比較具有顯著性差異(P＜0.05＝提示金感膠囊對肺炎雙球菌感染小鼠具有一定的保護(hù)作用。
3.3金感膠囊的體內(nèi)抗病毒作用[2][3]3.3.1對甲型流感病毒感染小鼠的保護(hù)作用(1)血凝試驗(yàn)取36孔微孔板，每孔加入生理鹽水0.25ml。第一孔加入10-1病毒尿囊液0.25ml，混勻后，依次取0.25ml置第二孔，稀釋至第9孔。第十孔不加病毒尿囊液，作對照。每孔加入0.5％雞紅細(xì)胞0.25ml，輕輕搖勻后于室溫放置2小時(shí)觀察結(jié)果，記錄結(jié)果，血凝試驗(yàn)(HA)為640。
(2)甲型流感病毒感染小鼠半數(shù)致死量(LD50)滴定。
取ICR小鼠49只，體重13-15g，雌雄兼用，隨機(jī)分7組，每組7只，取增毒3次的病毒尿囊液，以10倍稀釋，每組滴一個(gè)病毒濃度，各組小鼠在乙醚淺麻醉下以病毒尿囊液30ul滴鼻，觀察14天內(nèi)死亡數(shù)，按Reed和Muench法計(jì)算，結(jié)果LD50為2.903.3.2金感膠囊對甲型流感病毒感染小鼠的保護(hù)作用取ICR小鼠174只，體重12-16g，雌雄各半，隨機(jī)分6組，每組29只(1)空白對照組等量β-環(huán)糊精10ml/kg(2)模型對照組等量β-環(huán)糊精10ml/kg(3)利巴韋林組75mg/kg(4)金感膠囊I組5mg/kg(5)金感膠囊II組10mg/kg(6)金感膠囊III組20mg/kg，在乙醚淺麻醉下，以血凝試驗(yàn)640以上的尿囊液，給小鼠滴鼻感染，每鼠30ul，(20個(gè)LD50致死量)，觀察動(dòng)物感染后發(fā)病及死亡情況，結(jié)果見表4。
表4. 金感膠囊對甲型流感病毒感染小鼠死亡的保護(hù)作用組別 動(dòng)物數(shù) 劑量 死亡數(shù) 死亡率保護(hù)率存活天數(shù)(只) (mg/kg) (只) (％) (％) (x±s)空白對照組 29 - -模型對照組29 - 21 72.4 27.6 8.58±3.55利巴韋林組29 758 27.5 72.5**10.38±2.71**金感膠囊I組 29 5 14 48.2 51.8 10.93±3.58*金感膠囊II組 29 1012 41.3 58.7*11.17±3.50*金感膠囊III組 29 209 31.0 69.0**12.31±3.72**與病毒對照組比較*p＜0.05**p＜0.01實(shí)驗(yàn)結(jié)果所示金感膠囊5mg/kg、10mg/kg和20mg/kg劑量組均可明顯延長甲型流感病毒感染小鼠的存活天數(shù)，(P＜0.05，P＜0.01＝10mg/kg和20mg/kg劑量組可顯著降低甲型流感病毒感染小鼠死亡數(shù)，與模型對照組比較具顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)提示金感膠囊對甲型流感病毒感染小鼠具有明顯的保護(hù)作用。
3.3.3金感膠囊對甲型流感病毒感染小鼠肺指數(shù)的影響取ICR小鼠100只，體重13-16g，♂♀各半。隨機(jī)分5組，每組20只。(1)模型對照組等量β-環(huán)糊精 10ml/kg(2)利巴韋林組75mg/kg(3)金感膠囊I組5mg/kg(4)金感膠囊II組10mg/kg(5)金感膠囊III組20mg/kg，以上各組小鼠均灌胃給藥，灌胃容量20ml/kg 1次/天×7天，于給藥第3天各組小鼠(除空白對照組外)，在乙醚淺麻醉下以病毒尿囊液滴鼻感染小鼠，每鼠30ul(15個(gè)LD50攻擊量)。繼續(xù)給藥4天，實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水，實(shí)驗(yàn)當(dāng)日各組小鼠稱重，脫頸處死，解剖，觀察肺部病變，取全肺稱重，計(jì)算各鼠肺指數(shù)值，肺指數(shù)抑制率，比較各組間差異，并取肺用10％甲醛固定，作病理組織學(xué)檢查，結(jié)果見表5。
表5金感膠囊對甲型流感病毒感染小鼠肺指數(shù)的影響(x±s)組別劑量 動(dòng)物數(shù) 肺指數(shù)值 肺指數(shù)抑制率(mg/kg) (只) (g/10g) (％)模型對照組 - 20 0.1676±0.055利巴韋林組 7520 0.1075±0.017**35.86金感膠囊I組 5 20 0.1267±0.034*24.40金感膠囊II組1020 0.1175±±0.019**29.89金感膠囊III組 2020 0.1103±0.020**34.19與病毒對照組比較*p＜0.05**p＜0.01實(shí)驗(yàn)結(jié)果所示(1)金感膠囊5mg/kg，10mg/kg和20mg/kg劑量組均可明顯降低甲型流感病毒感染小鼠的肺指數(shù)值，肺指數(shù)抑制率為24.40％，29.89％和34.19，提示金感膠囊具有減輕甲型流感病毒感染小鼠肺部病變的作用。
(2)肺部病理學(xué)檢查報(bào)告所示。
①甲型流感病毒肺炎模型組輕度支氣管炎，間質(zhì)性肺炎1例。中度化膿性支氣管炎，小葉性肺炎和間質(zhì)性肺炎改變3例。支氣管上皮細(xì)胞可見變性、壞死，腔內(nèi)可見一些膿性滲出物。部分肺組織結(jié)構(gòu)不清，呈實(shí)變狀。實(shí)變區(qū)有較多的嗜中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤。上述改變成效葉狀分布。實(shí)變區(qū)周圍部分肺泡壁增厚，其內(nèi)血管擴(kuò)張充血，亦見少量上述炎細(xì)胞浸潤，小部分肺泡擴(kuò)張，呈氣腫狀。重度化膿性支氣管炎，小葉性肺炎和間質(zhì)性肺炎改變了5例。支氣管上皮細(xì)胞變性、壞死，腔內(nèi)可見較多膿性滲出物。病變支氣管周圍小葉泡周圍肺組織結(jié)構(gòu)不清，有大量嗜中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤。部分病變?nèi)诤蠈?shí)變。實(shí)變區(qū)周圍部分肺泡壁增厚，其內(nèi)血管擴(kuò)張，間質(zhì)有多少不等的上述炎細(xì)胞浸潤。部分肺泡擴(kuò)張，呈氣腫狀。極重度化膿性支氣管炎，小葉性肺炎和間質(zhì)性肺炎改變了1例。支氣管上皮細(xì)胞明顯變性、壞死，腔內(nèi)可見大量膿性滲出物。病變支氣管周圍大片肺組織結(jié)構(gòu)不清，呈實(shí)變狀，實(shí)變區(qū)有大量嗜中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤。實(shí)變區(qū)周圍部分肺泡壁增厚，其內(nèi)血管明顯擴(kuò)張、充血，間質(zhì)有較多上述炎細(xì)胞浸潤。部分肺泡擴(kuò)張，呈氣腫狀。
②利巴韋林組輕度支氣管炎，間質(zhì)性肺炎7例。中度化膿性支氣管炎，小葉性肺炎和間質(zhì)性肺炎3例。
③金感膠囊小劑量組輕度支氣管炎，間質(zhì)性肺炎4例。中度化膿性支氣管炎，小葉性肺炎和間質(zhì)性肺炎6例。
④金感膠囊中劑量組輕度支氣管炎，間質(zhì)性肺炎7例。
中度化膿性支氣管炎，小葉性肺炎和間質(zhì)性肺炎3例。
⑤金感膠囊大劑量組輕度支氣管炎，間質(zhì)性肺炎6例。中度化膿性支氣管炎，小葉性肺炎和間質(zhì)性肺炎4例。
上述結(jié)果提示甲型流感病毒感染復(fù)制小鼠肺部感染性疾病，可形成各種程度的化膿性支氣管炎，小葉性肺尖及間質(zhì)性肺炎。金感膠囊具有抗甲型流感病毒所致肺部感染疾病的作用。
3.3.4對乙型流感病毒感染小鼠的保護(hù)作用。
(1)血凝試驗(yàn)取36孔板，每孔加入生理鹽水0.25ml。第一孔加入10-1病毒尿囊液0.25ml，混勻后，依次取0.25ml置第二孔，稀釋至第9孔。第十孔不加病毒尿囊液，作對照。每孔加入0.5％雞紅細(xì)胞0.25ml，輕輕搖勻后于室溫放置2小時(shí)觀察結(jié)果，記錄結(jié)果，血凝試驗(yàn)(HA)為640。
(2)乙型流感病毒B/京防98-76感染小鼠半數(shù)致死量(LD50)滴定。
取ICR小鼠49只，體重13-15g，雌雄兼用，隨機(jī)分7組，每組7只，取增毒3次的病毒尿囊液，以10倍稀釋，每組滴一個(gè)病毒濃度，各組小鼠在乙醚淺麻醉下以病毒尿囊液30ul滴鼻，觀察14天內(nèi)死亡數(shù)，按Reed Muench法計(jì)算，結(jié)果LD50為2.60。
3.3.5金感膠囊對乙型流感病毒B/京防98-76感染小鼠的保護(hù)作用取ICR小鼠174只，體重12-16g，雌雄各半，隨機(jī)分6組，每組29只(1)空白對照組等量β-環(huán)糊精10ml/kg(2)病毒對照組等量β-環(huán)糊精10ml/kg(3)利巴韋林組75mg/kg(4)金感膠囊I組5mg/kg(5)金感膠囊II組10mg/kg(6)金感膠囊III組20mg/kg，在乙醚淺麻醉下，以血凝試驗(yàn)640以上的尿囊液，給小鼠滴鼻感染，每鼠30ul，(20個(gè)LD50致死量)，觀察動(dòng)物感染后發(fā)病及死亡情況，結(jié)果見表6。
表6金感膠囊對乙型流感病毒感染小鼠死亡的保護(hù)作用組別 動(dòng)物數(shù)劑量 死亡數(shù)死亡率保護(hù)率存活天數(shù)(只) (mg/kg) (只) (％) (％) (x±s)空白對照組 19 - 0模型對照組 19 - 18 95.0 5.0 7.16±2.28利巴韋林組 19 7510 52.6* 47.4 10.74±3.18**金感膠囊I組 19 5 12 63.2 36.8 9.42±3.68*金感膠囊II組 19 1010 52.6* 47.4 10.68±3.36**金感膠囊III組19 2010 52.6* 47.4 10.21±3.75**與模型對照組比較*p＜0.05**p＜0.01實(shí)驗(yàn)結(jié)果所示金感膠囊10mg/kg和20mg/kg劑量組均可明顯延長乙型流感病毒感染小鼠的存活天數(shù)和降低乙型流感病毒感染小鼠死亡數(shù)，與模型對照組比較具顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)提示金感膠囊對乙型流感病毒感染小鼠具有明顯的保護(hù)作用。
3.3.6金感膠囊對乙型流感病毒感染小鼠肺指數(shù)的影響取ICR小鼠100只，體重13-16g，♂♀各半。隨機(jī)分5組，每組20只。(1)模型對照組等量β-環(huán)糊精10ml/kg(2)利巴韋林組75mg/kg(3)金感膠囊I組5mg/kg(4)金感膠囊II組10mg/kg(5)金感膠囊III組20mg/kg，以上各組小鼠均灌胃給藥，灌胃容量20ml/kg 1次/天×5天，于給藥第2天各組小鼠(除空白對照組外)，在乙醚淺麻醉下以病毒尿囊液滴鼻感染小鼠，每鼠30ul(20個(gè)LD50攻擊量)。繼續(xù)給藥4天，實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水，實(shí)驗(yàn)當(dāng)日各組小鼠稱重，脫頸處死，解剖，觀察肺部病變，取全肺稱重，計(jì)算各鼠肺指數(shù)值，肺指數(shù)抑制率，比較各組間差異，并取肺用10％甲醛固定，作病理組織學(xué)檢查，結(jié)果見表7。
表7金感膠囊對乙型流感病毒感染小鼠肺指數(shù)的影響(x±s)
組別 劑量 動(dòng)物數(shù) 肺指數(shù)值 肺指數(shù)抑制率(mg/kg) (只) (g/10g) (％)空白對照組 - 16 0.0999±0.009模型對照組 - 14 0.1679±0.047利巴韋林組 75 16 0.1210±0.034**27.93金感膠囊I組5 16 0.1479±0.039 11.91金感膠囊II組 10 16 0.1289±0.032**23.23金感膠囊III組 20 16 0.1295±0.036*22.87與模型對照組比較*p＜0.05**p＜0.01實(shí)驗(yàn)結(jié)果所示(1)金感膠囊10mg/kg和20mg/kg劑量組均可明顯降低乙型流感病毒感染小鼠的肺指數(shù)值，肺指數(shù)抑制率為23.23％和22.87％，提示金感膠囊具有減輕乙型流感病毒感染小鼠肺部病變的作用。
(2)病理組織學(xué)檢查結(jié)果見附

圖14-29。
①正常對照組10例肺組織均呈正常形態(tài)。支氣管腔內(nèi)無滲出物，黏膜上皮無變性壞死脫落，管壁及其周圍組織無炎細(xì)胞浸潤；肺泡間隔未增厚，無炎細(xì)胞浸潤，肺泡腔內(nèi)無滲出物。
②模型組本組所有肺組織均呈中至重度支氣管炎及間質(zhì)性肺炎，且充血、出血較明顯，1/3肺組織為輕至中度肺泡炎。表現(xiàn)為支氣管上皮細(xì)胞變性、壞死，腔內(nèi)見壞死細(xì)胞及滲出物。病變支氣管壁及其周圍肺組織結(jié)構(gòu)不清，有多量淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和少量嗜中性粒細(xì)胞浸潤。肺泡壁普遍增厚，其內(nèi)血管擴(kuò)張，并有多少不等的上述炎細(xì)胞浸潤，其中部分肺組織肺泡內(nèi)可見凋亡小體。
③利巴韋林組本組7例肺組織呈輕至中度支氣管炎及間質(zhì)性肺炎，2例較重，1例基本正常?？傮w病變程度輕于模型組。
④低劑量組本組肺組織亦呈輕至中度支氣管炎及間質(zhì)性肺炎，少數(shù)病例較重。但總體病變程度輕于模型組⑤中劑量組本組病變形態(tài)與低劑量組相似，總體病變程度略輕。
⑥高劑量組本組病變形態(tài)與上述各組相似，但總體病變程度明顯輕于上述各給藥組。其中3例基本正常。
結(jié)論乙型流感病毒感染成功復(fù)制小鼠肺炎性病變。主要表現(xiàn)為支氣管炎和間質(zhì)性肺炎。荊芥有抗乙型流感病毒所致肺部感染疾病的作用，高劑量療效較好。
3.4金感膠囊對小鼠的抗炎作用3.4.1金感膠囊對二甲苯所致的耳腫脹的抗炎作用[5]昆明種雄性小鼠50只，體重25-30g，按體重隨機(jī)分為5組，每組10只。(1)模型對照組給予等體積的β-環(huán)糊精；(2)阿司匹林組600mg/kg；(3)金感膠囊I組5mg/kg；(4)金感膠囊II組10mg/kg；(5) 金感膠囊III組20mg/kg；給藥體積20ml/kg，金感膠囊各劑量組當(dāng)天ig給藥45min后，于小鼠右耳兩面涂二甲苯0.05ml/只致腫，左耳不涂為正常耳。45min后脫頸椎處死小鼠，用9mm打孔分別在相同部位打下圓片，電子天平稱重，每鼠右耳重量-左耳重量＝腫脹度。結(jié)果見表8。
表8金感膠囊對二甲苯致小鼠耳腫脹的抗炎作用(X±S)組別 動(dòng)物數(shù) 劑量 耳廓腫脹度(mg) 腫脹抑制率(只) (mg/kg) (％)模型對照組 10 --0.0147±0.0029 ----阿司匹林組 10 600 0.0045±0.0048**69.39％金感膠囊I組 10 5 0.0154±0.0037 -4.76％金感膠囊II組 10 100.0114±0.0033*22.45％金感膠囊III組10 200.0105±0.0031**28.57％與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01結(jié)果表明金感膠囊10mg/kg、20mg/kg劑量組可對抗二甲苯所致小鼠耳腫脹，與模型對照組比較有顯著性差異(*P＜0.05)。提示金感膠囊具有一定的抗炎作用。
3.4.2金感膠囊對醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血通透性增加的影響[6]昆明種雄性小鼠50只，按體重隨機(jī)分為5組，每組10只。(1)模型對照組給予等體積的β-環(huán)糊精；(2)阿司匹林組600mg/kg；(3)金感膠囊I組5mg/kg；(4)金感膠囊II組10mg/kg；(5)金感膠囊III組20mg/kg；給藥體積20ml/kg，金感膠囊各劑量組當(dāng)天ig給藥45min后，尾靜脈注射0.5％伊文思藍(lán)生理鹽水溶液0.1ml/10g，立即腹腔注射0.6％醋酸0.1ml/10g，20min后，斷頭放血處死小鼠，剪開腹腔，用5ml生理鹽水沖洗腹腔數(shù)次，收集洗滌液，離心(1000rpm)5min，在紫外分光光度計(jì)590nm處測定吸收度(OD值)。結(jié)果見表9。
表9 金感膠囊對醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增加的影響(X±S)動(dòng)物數(shù) 劑量 吸收度組別(只) (mg/kg)(OD值)模型對照組 10-- 0.248±0.088阿司匹林組 106000.128±0.049**金感膠囊I組 105 0.235±0.099金感膠囊II組 1010 0.147±0.067*金感膠囊III組1020 0.133±0.062**與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01結(jié)果表明金感膠囊10mg/kg、20mg/kg劑量組可抑制醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血通透性增加，與模型對照組比較有顯著性差異(*P＜0.05)。提示金感膠囊具有一定的抗炎作用。
3.5金感膠囊的解熱、發(fā)汗作用3.5.1金感膠囊對干酵母所致大鼠發(fā)熱的影響[8]取SD大鼠70只體重200±20g置于實(shí)驗(yàn)環(huán)境中，實(shí)驗(yàn)前2天固定時(shí)間用體溫計(jì)測量大鼠肛溫一次，選取體溫在正常范圍36.6℃-38.3℃內(nèi)波動(dòng)的大鼠，于實(shí)驗(yàn)前禁食12小時(shí)，可自由飲水，實(shí)驗(yàn)當(dāng)日測體溫2次，隔2小時(shí)一次，選擇溫差不超過0.3℃的合格大鼠50只，按體重隨機(jī)分為5組，每組10只。(1)模型對照組給予等體積的β-環(huán)糊精；(2)阿司匹林組300mg/kg；(4)金感膠囊I組2.5mg/kg；(4)金感膠囊II組5mg/kg；(5)金感膠囊III組10mg/kg，給藥體積20ml/kg，灌胃給藥后立刻于大鼠背部皮下注射干酵母(15％)混懸液10ml/kg，然后在1h、2h、4h、6h、8h、10h的時(shí)刻測其肛溫值，于大鼠背部皮下注射干酵母(15％)混懸液4h后再灌胃給藥一次，求出各測定時(shí)刻體溫相對于正常體溫的變化值，以此為縱坐標(biāo)，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，作圖，觀察體溫變化情況。見表10。
表10 金感膠囊對干酵母所致大鼠發(fā)熱的影響(X±S)

與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01表明金感膠囊10mg/kg可降低干酵母所致大鼠體溫升高，與模型對照組比較有明顯差異，提示金感膠囊具有一定的降低體溫作用。
3.5.2金感膠囊對內(nèi)毒素所致家兔發(fā)熱的影響[9]選用體重2kg左右的健康家兔置于實(shí)驗(yàn)環(huán)境中，實(shí)驗(yàn)前2天固定時(shí)間用體溫計(jì)測量家兔肛溫一次，選取體溫范圍38.5℃-39.5℃的家兔，耳緣靜脈注射內(nèi)毒素1h后，選擇溫差超過1.0℃的發(fā)熱家兔40只，隨機(jī)分5組，(1)模型對照組給予等體積的β-環(huán)糊精；(2)阿司匹林組300mg/kg；(3)金感膠囊I組6mg/kg；(4)金感膠囊II組3mg/kg；(5)金感膠囊III組1.5mg/kg，灌胃給藥，給藥體積1ml/kg，然后在1h、2h、3h、4h、5h、6h的時(shí)刻測其肛溫值，求出各測定時(shí)刻體溫相對于正常體溫的變化值，以此為縱坐標(biāo)，以時(shí)間為橫坐標(biāo)，作圖，觀察體溫變化情況，見表11。
表11 金感膠囊對內(nèi)毒素所致家兔發(fā)熱的影響(X±S)動(dòng)物數(shù) 劑量 藥前體溫藥后體溫(Δ℃)組別(只) (mg/kg) (℃) 1h 2h 3h 4h 5h 6h40.52±0.39 40.90±0.48 41.22±0.3840.72±0.5940.19±0.4939.72±0.39模型對照組 8 - 39.10±0.19(1.42±0.35)(1.80±0.50)(2.12±0.37) (1.62±0.58) (1.08±0.50) (0.62±0.41)39.35±0.2140.22±0.16 40.20±0.28**40.31±0.68**40.00±0.62*39.61±0.38*阿司匹林組 8 300 39.21±0.11(0.14±(1.02±0.22*) (0.99±0.35**) (1.11±0.75**)(0.77±0.69*) (0.41±0.44*)0.21*)金感膠囊I 40.80±0.45 40.81±0.45 41.31±0.5940.75±0.6040.16±0.4939.78±0.428 1.5 39.22±0.12組(1.58±0.49)(1.59±0.47)(2.09±0.60) (1.53±0.54) (0.94±0.43) (0.56±0.34)金感膠囊II40.60±0.47 40.65±0.32 41.02±0.4640.44±0.5539.90±0.3439.52±0.338 3 39.06±0.23組(1.54±0.41)(1.59±0.25)(1.97±0.50) (1.38±0.54) (0.84±0.33) (0.47±0.35)金感膠囊III 40.86±0.34 40.74±0.33 40.62±0.52*40.14±0.4439.81±0.4839.49±0.268 6 39.26±0.10組(1.60±0.31)(1.47±0.33)(1.36±0.52**)(0.87±0.47*) (0.55±0.53) (0.22±0.30)與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01結(jié)果表明金感膠囊6mg/kg可降低內(nèi)毒素所致兔體溫升高，與模型對照組比較有明顯差異，提示金感膠囊具有一定的降低體溫作用。
3.5.3金感膠囊對大鼠足趾部汗液分泌的影響[10]取體重相近的雄性大鼠50只，分別觀察足底部有無污物，如有污物，用棉簽蘸取無水乙醇輕輕擦洗干凈。隨機(jī)分為5組，(1)模型對照組給予等體積的β-環(huán)糊精；(2)三九感冒靈組500mg/kg；(3)金感膠囊I組10mg/kg；(4)金感膠囊II組5mg/kg；(5)金感膠囊III組2.5mg/kg，給藥體積20ml/kg，灌胃給藥45min后，分別置于自制的大鼠固定器內(nèi)固定，暴露雙下肢，用干棉簽輕輕拭干原有和掙扎所致的汗液。然后分別于每鼠足趾部皮膚涂上和田-高氏試劑A液。待充分干燥后，再薄薄涂上B液，然后用放大鏡觀察深紫色著色點(diǎn)(即汗點(diǎn))，記錄5min內(nèi)大鼠出汗的點(diǎn)數(shù)，見表12。觀察后隨即取下大鼠一側(cè)足，用10％福爾馬林固定，作病理組織學(xué)檢查，觀察各組大鼠汗腺上皮細(xì)胞變化。
表12 金感膠囊對大鼠足趾部汗液分泌的影響(X±S)動(dòng)物數(shù) 劑量組別5min內(nèi)出汗點(diǎn)數(shù)(只) (mg/kg)模型對照組 10 -- 186.4±63.42三九感冒靈組 10 500 288.0±66.42**金感膠囊I組 10 2.5 238.6±88.31金感膠囊II組 10 5263.6±81.59*金感膠囊III組10 10 262.8±41.66**與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01病理結(jié)果如下，并見附圖30～34。
①模型對照組各取材點(diǎn)大鼠皮膚完整，皮下汗腺組織結(jié)構(gòu)清晰完好，周圍組織無明顯出血及炎細(xì)胞浸潤。
②三九感冒靈組各取材點(diǎn)大鼠皮膚完整，皮下汗腺組織結(jié)構(gòu)清晰完好，汗腺腺泡數(shù)目較模型組有明顯增加(++- +++)，周圍組織無明顯出血及炎細(xì)胞浸潤。
③小劑量組各取材皮下汗腺組織結(jié)構(gòu)清晰完好，汗腺腺泡數(shù)目較模型組有所增加(+- ++)，周圍組織無明顯出血及炎細(xì)胞浸潤。
④中劑量組各取材點(diǎn)大鼠皮膚完整，皮下汗腺組織結(jié)構(gòu)清晰完好，汗腺腺泡數(shù)目增加同小劑量組(+- ++)，周圍組織無明顯出血及炎細(xì)胞浸潤。
⑤大劑量組各取材點(diǎn)大鼠皮膚完整，皮下汗腺組織結(jié)構(gòu)清晰完好，汗腺腺泡數(shù)目有明顯增加(++- +++)，周圍組織無明顯出血及炎細(xì)胞浸潤。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明金感膠囊20mg/kg、10mg/kg劑量可促進(jìn)大鼠足趾汗腺的分泌，與模型對照組比較有顯著性差異，提示金感膠囊具有一定的促進(jìn)發(fā)汗作用。
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1.一種荊芥揮發(fā)油，其特征是由荊芥穗80～120g，加水8～12倍量，水蒸氣蒸鎦而制得的提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的荊芥揮發(fā)油，其特征是由下列步驟提取(1)稱取荊芥穗80～120g，加水8～12倍量，水蒸氣蒸餾2～8小時(shí)；(2)用油水分離器分離得含水荊芥揮發(fā)油；(3)在-9～15℃下冰凍6～36小時(shí)，去冰除水，得荊芥揮發(fā)油。
3.一種荊芥揮發(fā)油制劑，其特征在于加入制備不同劑型的各種輔料，以專門的制劑工藝可制成膠囊劑(硬膠囊劑、軟膠囊劑)、噴霧劑及其它各種制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的荊芥揮發(fā)油制劑，其特征是硬膠囊劑的制備步驟為(1)取1～2g的荊芥揮發(fā)油，加6～12倍量的β-環(huán)糊精和18～22倍β-環(huán)糊精的蒸餾水，在25～40℃條件下用分散機(jī)高速分散10～60分鐘，進(jìn)行藥液包結(jié)；(2)將包結(jié)后藥液用噴霧干燥法去除黏附的揮發(fā)油，噴霧干燥的進(jìn)風(fēng)溫度為140～180℃，出風(fēng)溫度為60～80℃；(3)將包結(jié)物噴干粉末，加適當(dāng)?shù)?5％的乙醇，進(jìn)行干式制粒，灌裝膠囊。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的荊芥揮發(fā)油制劑，其特征是軟膠囊劑的制備步驟為(1)取1～2g的荊芥揮發(fā)油，加30～34g的聚乙二醇-400和1～4g的甘油，在25～40℃條件下用攪拌0.5～4小時(shí)，進(jìn)行藥液分散；(2)將分散后藥液壓制軟膠囊；(3)將壓制好的軟膠囊用60～90％的乙醇洗粒，20～40℃烘干24～96小時(shí)。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的荊芥揮發(fā)油制劑，其特征是噴霧劑的制備步驟為(1)取1～2g荊芥揮發(fā)油，加20～40％的乙醇及10％～30％的聚乙二醇，分散成溶液狀；(2)加水200～400ml，分裝成口腔噴霧劑。
7.荊芥揮發(fā)油在制備治療抗感冒藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種荊芥揮發(fā)油及其制劑的制備方法和藥效學(xué)作用。以荊芥穗為原料，加水，蒸餾，分離得含水荊芥揮發(fā)油，冰凍后，去冰除水，即得荊芥揮發(fā)油，再以荊芥揮發(fā)油為活性物質(zhì)加入不同劑型的輔料，可制成各種劑型，為膠囊劑(硬膠囊劑、軟膠囊劑)、噴霧劑。荊芥揮發(fā)油及其制劑—金感膠囊、清菲軟膠囊均具有較好的抗炎、解熱、發(fā)汗抗菌和抗病毒作用，且具有使用劑量小的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61K9/48GK1488379SQ0313216
公開日2004年4月14日 申請日期2003年7月4日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月4日
發(fā)明者丁安偉, 張麗, 丁婕 申請人:南京中醫(yī)藥大學(xué)