專利名稱：西洋參果總皂苷提取物及其提取、精制方法及其醫(yī)藥用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通過提取西洋參果肉有效成分得到西洋參果總皂苷提取物，其制備方法及含有這些提取物的藥物組合物。
背景技術(shù)：
西洋參果是西洋參成熟的果實(shí)。西洋參(panax quinquefolium L.)又稱花旗參、美國人參、廣東人參等，為五加科人參屬植物，原產(chǎn)于美國、加拿大。西洋參味甘、微苦、性涼，能補(bǔ)脾降火、生津滋陰、除煩倦，虛而有火者相宜。我國自1975年以來，在華北、東北等地對(duì)西洋參進(jìn)行了大面積栽培，并獲得成功。根據(jù)資料記載西洋參有單莖、雙莖和多莖之分，3-4年生的每一莖上可結(jié)10-30個(gè)果實(shí)，產(chǎn)量較高。
西洋參果總皂苷PQFS的提取、分離設(shè)計(jì)以及在藥物方面的用途的理論基礎(chǔ)為本課題組經(jīng)過多年對(duì)西洋參果化學(xué)成分及其生物活性的研究結(jié)果。利用先進(jìn)的提取、分離及鑒定手段，從西洋參果中分離并鑒定了26個(gè)化合物，其中23個(gè)三萜皂苷，包括4個(gè)新發(fā)現(xiàn)的化合物，分別命名為西洋參皂苷-F1、-F2、-F3、和-F4，其它為人參皂苷-Ra1、-Ra2、-Rb1、-Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd、-Re、-Rg1、-Rg2、-Rg3(R、S)、-Rh1、-Rh2、偽人參皂苷-F11和RT5；一個(gè)新三糖及2個(gè)已知化合物。同時(shí)對(duì)其總皂苷的提取、精制方法進(jìn)行了大量的研究，獲得了具備生產(chǎn)量的西洋參果總皂苷提取物。經(jīng)過對(duì)西洋參果總皂苷的藥理活性研究表明，具有較強(qiáng)的治療冠心病、心肌缺血及心律不齊和治療II型糖尿病的生物功能。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種西洋參果總皂苷提取物，其特征為淺黃色至褐色，粉末狀，味苦，紫外光譜(甲醇)在203nm處有最大吸收峰，HPLC光譜顯示出5個(gè)以上的峰，該西洋參果總皂苷提取物的含量占西洋參果肉干重的15％-20％。
本發(fā)明還涉及制備上述提取物的方法，它包括如下步驟(1)將西洋參果肉加水在常溫下，機(jī)械攪拌，100γpm，提取2-3次，每次提取1-3小時(shí)；(2)將各次水煮所得的溶液合并，濾過，濾液備用；
(3)將上述濾液過大孔吸附樹脂，然后用10％-20％乙醇洗滌，至接近無色，棄取洗液，繼以50％-95％乙醇洗脫，收集該次洗脫液；(4)將該洗脫液回收乙醇后，濃縮，干燥，得西洋參果總皂苷提取物。
本發(fā)明還涉及含有西洋參果總皂苷提取物作為活性成分的藥物組合物，具體地講，本發(fā)明涉及含有該提取物的由于治療冠心病、心肌缺血及心律不齊和II型糖尿病的藥物組合物。
本發(fā)明的產(chǎn)品或提取物可以通過適宜的方式配成片劑、軟或硬明膠囊、用于制備與其溶解度相適應(yīng)的即用溶液或液體的顆粒狀粉末以及注射液。本發(fā)明西洋參果總皂苷提取物的劑量在30mg-400mg的范圍內(nèi)，可以每日給藥一次或多次，優(yōu)選200mg，每日給藥2次，適宜的給藥劑型是口服劑型。
本發(fā)明的特點(diǎn)及有益效果是西洋參果總皂苷提取物作為新的藥用有效部位在治療心血管疾病和糖尿病的藥物組合中，作用明顯，毒副作用小，治愈率高；西洋參果資源豐富，本發(fā)明采用的制備工藝方法，簡單易行，適合工業(yè)化生產(chǎn)，總皂苷的收率高，具有廣闊的應(yīng)用前景。
本發(fā)明中提取、精制西洋參果總皂苷的具體方案是a.提取以五加科人參屬成熟的西洋參果為原料，經(jīng)過除籽后，收集果肉、果汁為試驗(yàn)原料，采用最廉價(jià)經(jīng)濟(jì)的水作為提取溶劑，因?yàn)樗邆淞藢?duì)西洋參果總皂苷的溶解度較大，沸點(diǎn)較高，安全又無環(huán)境污染，易回收等優(yōu)點(diǎn)。
上述提取過程在常溫下進(jìn)行、采用機(jī)械攪拌方式，100γpm，加快提取，將一定量的西洋參果肉或汁用3倍量的水，分別提取3次，濾過，合并提取液，減壓濃縮，0.07Mpa，至流膏狀，比重1.11-1.21，得西洋參果總皂苷粗產(chǎn)品，低溫保存。b.精制取西洋參果總皂苷粗品一定量，用水5倍量的水稀釋，稀釋液上大孔吸附樹脂D101，首先用水洗脫至無色，然后用10％-20％乙醇洗脫至無色，最后用70％-85％乙醇洗脫，收集最后洗脫液，回收洗脫劑得西洋參果總皂苷，產(chǎn)率10％-20％。純度含西洋參果總皂苷55％-65％。
本發(fā)明的提取、精制方法的優(yōu)點(diǎn)是以西洋參果為原料，在常溫常壓下，以水為溶劑進(jìn)行提取西洋參果總皂苷粗產(chǎn)品；進(jìn)而以大孔吸附樹脂進(jìn)行精制，方法簡單，不需其它有毒的有機(jī)溶劑，收率高，達(dá)到了藥物生產(chǎn)的純度。
西洋參果總皂苷具有較好的治療心血管疾病、II型糖尿病的藥理活性，II型糖尿病中醫(yī)稱之為消渴癥，屬于氣陰兩虛型，因而西洋參果總皂苷可用于制備藥物，特別適用于治療冠心病、心肌缺血、心律不齊；治療糖尿病等疾病。
為了用西洋參果總皂苷制備藥品，將其制成一種形式的藥物制劑，該制劑除活性成分外，還有固體或液體的賦形劑。給藥方法及給藥的劑型通常是這樣的，內(nèi)服情況下，其可以任何常規(guī)形式給藥，如散劑、粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑等，溶液劑如懸浮劑、糖漿等，口腔含片、舌下含片等。在這里使用的固體或液體的賦形劑在本領(lǐng)域是公知的。
西洋參果總皂苷制備治療冠心病、心肌缺血、心律不齊、糖尿病等藥物，是由有效成分單體或有效成分與固體或液體的賦形劑一起構(gòu)成的。下面舉幾個(gè)具體的例子散劑如果是內(nèi)服的粉末劑，它的賦形劑有乳糖、淀粉、漿糊精、碳酸鈣、磷酸鈣、合成的或天然的硅酸鋁、氧化鎂、無水氧化鋁、硬脂酸鎂、碳酸氫鈉、干燥酵母等，其劑型包括沖劑、片劑、膠囊劑等；溶液劑的賦形劑有水、甘油、丙二醇、單糖漿、乙醇、脂油、乙二醇、聚乙二醇、山梨糖醇、木糖醇等；有效物質(zhì)的劑量可以根據(jù)服用方式、病人的年齡、體重及病情嚴(yán)重程度和其他類似的因素而改變。日用量為口服200mg-300mg，分二次服用。
用西洋參果總皂苷制備的治療冠心病、心肌缺血、心律不齊、糖尿病藥物，其優(yōu)點(diǎn)是療效好、無毒副作用、價(jià)格低廉等。
本發(fā)明通過下面的實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步說明。2.本發(fā)明的藥物用途2.1西洋參果總皂苷(PQFS)對(duì)犬急性心肌梗塞的影響目的觀察西洋參果總皂苷對(duì)雜種犬實(shí)驗(yàn)性心肌梗塞的影響。方法采用冠脈前降支結(jié)扎法，造成急性心肌梗塞。給予西洋參果總皂苷1、2、4mg/kg，異搏定0.2mg/kg，iv，觀察血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)和血?dú)庵笜?biāo)，包括心電圖ECG、計(jì)算心率HR、血壓BP、左室內(nèi)壓LVSP、左室舒張期末壓LVEDP、左室內(nèi)壓最大變化速率±dp/dt、冠脈血流量CBF、心輸出量Co、動(dòng)脈氧分壓、靜脈氧分壓、動(dòng)脈血氧飽和度、靜脈血氧飽和度及二級(jí)數(shù)據(jù)心肌血流量MBF、心搏出量SV、心臟指數(shù)CI、心搏指數(shù)SI、左室作功、冠脈阻力CVR、總外周阻力TPVR、心肌耗氧量、心肌耗氧指數(shù)、心肌氧利用率％、動(dòng)脈血氧含量、靜脈血氧含量；測(cè)量心外膜電圖EECG，心肌梗塞范圍N-ST計(jì)算心肌梗塞程度∑-ST；檢測(cè)血清肌酸激酶CK、乳酸脫氫酶LDH、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST；稱重心肌梗塞面積占全心及左室重量％。結(jié)果西洋參果總皂苷能明顯增加CBF、Co、MBF、CI、SI、血氧飽和度；顯著減少+dp/dt、SV、CVR；降低心肌缺血范圍和缺血程度，血清LDH、AST含量下降，并縮小心肌梗塞面積。結(jié)論西洋參果總皂苷能減輕心肌缺血的損傷，對(duì)心臟有保護(hù)作用。2.1.1實(shí)驗(yàn)材料2.1.1.1藥品 西洋參果總皂苷 由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院化學(xué)教研室提供，白色粉末，試驗(yàn)前用生理水配制成所需濃度。異搏定注射液，上海禾豐制藥有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)990401。戊巴比妥鈉，上?；瘜W(xué)試劑分裝廠，批號(hào)84-06-12。氯化硝基四氮唑蘭，上海前進(jìn)化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號(hào)20000502。鹽酸利多卡因注射液，上海第二軍醫(yī)大學(xué)朝暉制藥廠生產(chǎn)，批號(hào)990405。
生化試劑天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST試劑盒，肌酸激酶CK試劑盒，乳酸脫氫酶LDH試劑盒，均由北京眾生康生物技術(shù)開發(fā)中心生產(chǎn)，批號(hào)20010501。2.1.1.2動(dòng)物 雜種犬，體重10kg-17kg，由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供。2.1.1.3儀器 RM-6000型多導(dǎo)生理記錄儀，MFV-3200型電磁流量計(jì)，均由日本光電公司生產(chǎn)。EOS880型半自動(dòng)血液生化分析儀，意大利生產(chǎn)，Corning158血?dú)夥治鰞x，美國生產(chǎn)。SC-3電動(dòng)呼吸機(jī)，上海醫(yī)療設(shè)備廠生產(chǎn)。2.1.2實(shí)驗(yàn)方法健康雜種犬30只，隨機(jī)分為5組，每組6只，用30mg/kg戊巴比妥鈉溶液麻醉，iv。背位固定，用燒灼器切開頸部皮膚，分離氣管進(jìn)行氣管插管，連接人工呼吸機(jī)，正壓2-3kPa；分離左側(cè)頸總動(dòng)脈，插管連接壓力換能器，測(cè)定動(dòng)脈血壓(BP)；分離右側(cè)股動(dòng)脈，插心室導(dǎo)管，連接壓力換能器，記錄LVSP，經(jīng)耦合放大器，記錄LVEDP，經(jīng)微分處理器記錄±dp/dt；分離右側(cè)股靜脈以備給藥用；用針式電極刺入四肢皮下，記錄標(biāo)II導(dǎo)聯(lián)心電圖(ECG)，計(jì)算心率(HR)。
犬右側(cè)臥位，沿胸骨左側(cè)第4肋間開胸，去掉第4肋骨，用肋骨牽開器牽開肋骨，暴露心臟，將心包膜提起做心包床，分離主動(dòng)脈根部，放置適宜電磁流量計(jì)探頭，測(cè)定主動(dòng)脈流量即心輸出量Co；分離冠狀動(dòng)脈前降支下1/3處，備線待結(jié)扎用；分離冠狀動(dòng)脈左旋支，放置適宜電磁流量計(jì)探頭，測(cè)定冠脈流量CBF；用濕布式電極，測(cè)量心外膜電圖EECG。記錄24點(diǎn)，一點(diǎn)放置正常區(qū)，其余23點(diǎn)分別放置于梗塞邊緣區(qū)和梗塞中心區(qū)。
手術(shù)完畢，穩(wěn)定10分鐘。然后記錄正常血流動(dòng)力學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)和EECG；取動(dòng)脈A血和靜脈V血測(cè)血?dú)庵担血5ml進(jìn)行離心，分離血清，待測(cè)血清肌酸激酶CK、乳酸脫氫酶LDH和天門冬氨酸轉(zhuǎn)移酶AST。
結(jié)扎前iv鹽酸利多卡因，防止心律失常。然后結(jié)扎冠脈前降支下1/3處，如心肌缺血EECG不明顯，再結(jié)扎冠脈前降支1/2處，造成心肌缺血模型，記錄心肌缺血時(shí)及給藥后5、10、20、30、45、60、90、120、150、180、240min血流動(dòng)力學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)；記錄心肌缺血及藥后5、10、20、30、45、60、90、120、180、240、300、360minEECG變化。以ST段升高總mv數(shù)，∑-ST表示心肌缺血程度，以ST段抬高≥2mv的導(dǎo)聯(lián)數(shù)表示心肌缺血范圍，N-ST；檢測(cè)心肌缺血、藥后60、120、180、240min血?dú)庵导靶募∪毖?h的血清心肌三酶含量；實(shí)驗(yàn)結(jié)束摘取心臟稱全心重；沿冠狀溝切除心房，稱左室重。然后平行狀將心室切成1cm厚的心肌片，剪下結(jié)扎線下1cm處心肌組織1cm3，放入10％福爾馬林溶液中固定，做光鏡病理切片檢查；將心肌片放入0.1％的氯化硝基四氮唑蘭溶液中染色，于37度恒溫水浴溫孵10分鐘左右，取出用濾紙吸去水分，將非梗塞區(qū)染成蘭色的組織剪去，稱重梗塞區(qū)心肌組織重量，按稱重法計(jì)算梗塞心肌組織占全心或左心室重量的百分率。
將血流動(dòng)力學(xué)一級(jí)數(shù)據(jù)按公式計(jì)算二級(jí)數(shù)據(jù)，包括心肌血流量、心搏出量、心臟指數(shù)、心搏指數(shù)、左室作功、冠脈阻力、總外周阻力、心肌耗氧量、心肌耗氧指數(shù)、心肌氧利用率、動(dòng)脈和靜脈血氧含量。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均值±標(biāo)準(zhǔn)差(X±s)表示，進(jìn)行組間實(shí)測(cè)值及變化百分率t檢驗(yàn)分析。2.1.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1.3.1對(duì)±dp/dt的影響(1)對(duì)+dp/dt的影響西洋參果總皂苷小劑量1.0mg/kg、中劑量組2.0mg/kg對(duì)+dp/dt無明顯影響。西洋參果總皂苷大劑量組(4.0mg/kg)在藥后20-180min+dp/dt的百分率明顯低于鹽水對(duì)照組，兩組相比，有顯著差異，P＜0.05，P＜0.01。異搏定組藥后5-60min+dp/dt百分率明顯低于鹽水對(duì)照組，兩組相比有明顯差異，P＜0.05，P＜0.01。(2)對(duì)-dp/dt的影響西洋參果總皂苷小劑量組和大劑量組對(duì)-dp/dt無明顯影響。而中劑量組在藥后30min時(shí)-dp/dt明顯低于鹽水對(duì)照組，兩組相比差異顯著，P＜0.05。異搏定在藥后30min時(shí)-dp/dt顯著低于鹽水對(duì)照組，兩組相比，P＜0.05。2.1.3.2對(duì)CBF的影響西洋參果總皂苷小劑量組在藥后10minCBF明顯高于鹽水對(duì)照組，兩組相比差異顯著，P＜0.05。西洋參果總皂苷中劑量組在藥后30minCBF顯著高于鹽水對(duì)照組，P＜0.05。西洋參果總皂苷大劑量組在藥后5-45minCBF明顯增高，P＜0.05。異搏定組在藥后5-90minCBF明顯增加，與鹽水對(duì)照組相比，差異顯著，P＜0.05，P＜0.01。其藥后20-30minCBF的上升百分率顯著高于鹽水對(duì)照組，P＜0.05，P＜0.01。2.1.3.3對(duì)Co的影響西洋參果總皂苷各劑量組，給藥后Co逐漸減少，但小劑量組在240min時(shí)Co仍高于鹽水對(duì)照組，兩組比較差異顯著，P＜0.05。異搏定組在藥后45minCo明顯低于鹽水對(duì)照組，兩組相比，有顯著差異，P＜0.05。2.1.3.4對(duì)MBF的影響西洋參果總皂苷小劑量組對(duì)MBF無明顯影響。中劑量組在藥后各時(shí)間點(diǎn)均可增加MBF，與鹽水對(duì)照組比較差異顯著，P＜0.05，P＜0.01。大劑量組在藥后5-45minMBF明顯高于鹽水對(duì)照組，兩組相比，有顯著差異，P＜0.05。異搏定組藥后20-30minMBF上升百分率明顯高于鹽水對(duì)照組，兩組比較差異顯著，P＜0.05，P＜0.01，見表1。
表1 PQFS對(duì)心肌梗塞犬心肌血流量(ml/100g/min)-的影響(x±s，N＝6)鹽水組 異搏定PQFS0.2mg/kg mg/kg 2mg/kg 4mg/kg正常211.59±41.83192.24±29.17200.05±27.74 237.63±36.44 227.10±12.460梗塞149.90±20.61147.46±19.58147.00±19.78 177.23±28.39 167.74±11.475分 155.69±15.44165.09±30.25156.25±15.02 186.00±24.86*184.42±22.40*％ 4.40±5.48 11.57±9.67 7.21±11.965.43±5.52 9.65±6.1910分152.11±16.81167.96±35.84156.25±15.27 184.17±24.51*175.96±18.08*％ 1.84±4.03 13.16±12.40 7.21±12.034.35±4.64 4.71±3.8220分154.12±15.84172.35±32.99157.27±15.49 186.74±24.74*178.38±19.03*％ 3.33±5.78 16.43±10.74*7.86±11.405.81±4.41 6.13±4.3230分150.54±17.20173.15±29.10161.33±20.2 185.39±24.49*172.93±17.11*％ .78±4.5217.31±9.83**10.94±16.83 5.08±4.78 2.92±3.3145分155.03±11.78166.56±31.22157.94±15.41 198.20±28.80**187.56±23.14*％ 4.39±10.07 13.51±17.76 8.24±10.5312.20±6.1711.49±6.8260分156.73±13.80168.22±32.32155.87±15.27 209.52±40.69*175.40±19.94％ 5.46±10.30 14.72±18.97 6.80±10.0720.51±32.58 4.34±5.3990分155.61±16.28167.52±34.47156.88±17.37 187.39±30.45*175.40±19.94％ 4.75±12.77 14.02±19.04 7.17±7.03 5.79±5.55 4.34±5.39120分 154.39±19.97155.44±33.45153.65±15.35 186.40±26.96*175.40±19.94％ 3.24±5.90 5.24±14.84 5.08±6.84 5.44±3.91 4.34±5.39150分 151.82±17.28156.72±35.83153.08±14.99 187.76±29.12*173.42±18.11％ 1.83±8.44 6.21±17.43 4.75±7.86 6.12±5.53 3.23±4.93180分 148.33±13.59149.83±29.27151.62±15.85 185.41±26.91*168.59±22.93％ -0.32±8.57 1.58±12.93 3.66±7.22 5.02±7.08 0.20±7.78240分 144.75±14.05147.17±29.76141.75±13.00 181.45±28.64*165.06±23.44％ -2.92±5.38 -0.39±12.30 -2.93±7.272.45±2.78 -1.89±8.70與鹽水對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.012.1.3.5對(duì)SI的影響西洋參果總皂苷小劑量組在藥后240min時(shí)SI的下降百分率明顯低于鹽水對(duì)照組，兩組比較差異顯著，P＜0.05。西洋參果總皂苷其余各組對(duì)SI無明顯影響。異搏定組對(duì)SI無明顯影響。2.1.3.6對(duì)CVR影響西洋參果總皂苷小劑量、大劑量組對(duì)CVR無明顯影響。西洋參果總皂苷中劑量組藥后5、20、45、60、120-240min多個(gè)時(shí)間點(diǎn)CVR明顯降低，與鹽水對(duì)照組相比，差異顯著，P＜0.05。異搏定組合在藥后5-45、90minCVR的下降百分率明顯高于鹽水對(duì)照組，兩組相比差異顯著，P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001。2.1.3.7對(duì)EECG的影響(1)對(duì)N-ST的影響西洋參果總皂苷小劑量組在給藥后45-120min、360minN-ST明顯低于鹽水對(duì)照組，P＜0.05，其降低百分率明顯高于鹽水對(duì)照組，P＜0.05。中劑量組在藥后45-360minN-ST明顯小于鹽水對(duì)照組，兩組相比差異顯著，P＜0.05，其20-180、240-360minN-ST的下降百分率明顯高于鹽水對(duì)照組，P＜0.05。西洋參果總皂苷大劑量組在藥后90-180minN-ST明低于鹽水對(duì)照組，P＜0.05，其降低百分率明顯高于鹽水對(duì)照組，與鹽水對(duì)照組相比差異顯著，P＜0.05。異搏定組在藥后45min、90-360minN-ST明顯小于鹽水對(duì)照組，兩組相比差異顯著，P＜0.05，P＜0.01。其45-360minN-ST的降低百分率明顯高于鹽水對(duì)照組，P＜0.05。(2)對(duì)∑-ST的影響西洋參果總皂苷小劑量在藥后90min ∑-ST明顯輕于鹽水對(duì)照組，兩組比較差異顯著，P＜0.05，藥后20-120min其下降百分率明顯高于鹽水對(duì)照組，兩組比較有顯著差異，P＜0.05，P＜0.01。西洋參果總皂苷中劑量組在藥后90-120min ∑-ST顯著輕于鹽水對(duì)照組，P＜0.01，P＜0.05，藥后20-360min∑-ST的下降百分率明顯高于鹽水對(duì)照組，P＜0.05，P＜0.01。西洋參果總皂苷大劑量組在藥后60-360min ∑-ST比鹽水組輕，其下降百分率明顯高于鹽水對(duì)照組，P＜0.05，P＜0.01。異搏定組藥后60-360min ∑-ST明顯輕于鹽水對(duì)照組，與鹽水對(duì)照組相比有顯著差異，P＜0.05，P＜0.01，藥后10-360min ∑-ST的降低百分率明顯高于鹽水對(duì)照組P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001，見表2。
表2 PQFS對(duì)心肌梗塞犬缺血程度(∑-STmv)的影響(x±s，N＝6)鹽水組 異搏定 PQFS0.2mg/kg 1.0mg/kg 2.0mg/kg 4.0mg/kg正常18.25±11.88 29.92±6.1423.75±7.15 20.08±8.95 27.17±5.06梗塞139.83±38.15164.42±47.95 138.83±22.32157.17±22.21131.83±24.945分 118.59±29.75105.92±42.61 98.92±25.83 118.83±27.1799.92±21.82％ -10.50±29.48-36.78±10.90 -29.22±12.06-24.78±9.91 -24.34±7.6510分107.00±13.6289.00±34.76 99.42±26.10 113.17±21.8598.00±17.36％ -19.33±21.19-45.83±13.74*-28.15±15.14-27.94±9.94 -24.65±13.8320分112.08±20.7077.25±36.13 87.88±24.94 96.33±27.39 92.42±1.10％ -17.30±14.26-54.23±12.14***-37.26±11.14*-38.38±17.45*-29.21±10.4630分109.42±20.5987.92±37.09 85.92±35.74 94.50±21.74 80.83±23.87％ -19.34±13.23-47.72±11.73**39.84±17.28*-39.04±16.53*-37.82±20.4945分112.92±22.9885.58±30.59 83.33±36.86 85.33±22.75 82.50±30.42％ -15.96±20.18-47.69±13.86**-41.91±18.73*-44.87±15.90*-36.39±26.1760分109.42±34.0270.58±24.47*75.42±16.62 76.25±22.65 69.25±22.75*％ -20.34±17.83-56.49±11.90**-45.61±10.01*-49.51±14.33*-46.65±19.14*90分120.83±25.2062.92±15.28***78.50±25.60*74.00±22.08**67.17±19.48**％ -9.18±25.92 -58.92±15.75**-43.95±14.80*-51.82±16.69**-49.40±9.68**120分 114.08±31.1868.50±13.51**82.58±15.98 72.50±20.68*65.33±29.69*％ -17.55±12.46-56.92±9.53***-40.26±9.46**-52.98±15.01**-52.14±11.05***150分 109.92±38.4457.38±14.50*79.83±27.75 74.25±19.07 62.83±21.55*％ -20.53±17.97-62.32±15.06**-42.33±18.30-52.04±13.54**-53.24±7.52**180分 101.67±32.3652.42±14.92**90.00±26.65 76.25±18.97 58.50±21.59*％ -24.92±22.52-67.21±7.88**-34.52±17.92-50.64±15.23*-56.63±8.81**240分 99.75±26.21 58.83±24.45*76.25±15.83 77.92±25.91 57.08±20.14*％ -26.43±17.08-63.78±11.56**-44.53±10.59-49.83±18.24*-57.33±10.97**300分 101.33±34.2053.67±22.66*81.42±34.92 66.42±33.50 63.25±24.02*％ -27.80±9.93 -67.03±10.05***-41.54±20.74-56.10±24.56*-53.00±12.06**與鹽水對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001.2.1.3.8對(duì)血清酶的影響西洋參果總皂苷小劑量組給藥后AST明顯低于鹽水對(duì)照組，兩組相比，差異顯著，P＜0.05，對(duì)CK、LDH無明顯影響。西洋參果總皂苷中劑量組給藥后LDH含量明顯降低，其下降百分率明顯低于鹽水對(duì)照組，P＜0.05，其AST、CK值與鹽水組比較無顯著差異。西洋參果總皂苷大劑量組AST和LDH含量下降百分率明顯低于鹽水對(duì)照組，P＜0.05，P＜0.01。異搏定組給藥后AST、LDH含量顯著下降，其下降百分率明顯低于鹽水對(duì)照組，兩組相比，差異顯著，P＜0.05，P＜0.01。2.1.3.9對(duì)心肌梗塞面積的影響西洋參果總皂苷小劑量組心肌心梗重量占全心重％明顯低于鹽水對(duì)照組，兩組相比，差異顯著，P＜0.05。西洋參果總皂苷中劑量、大劑量組心梗面積占全心、左室重％均明顯低于鹽水對(duì)照組，有非常顯著意義，P＜0.05，P＜0.01。異搏定組給藥后心梗重量占全心、左室重量％均明顯低于鹽水對(duì)照組，兩組相比，差異顯著，P＜0.05，P＜0.01，見表3。
表3 PQFS對(duì)心肌梗塞犬梗塞面積的影響(x±s N＝±6)鹽水組 異搏定 PQFS0.2mg/kg1mg/kg 2mg/kg 4mg/kg占全心％7.97±1.4944.65±2.12*3.25±1.79*6.05±0.63*4.22±1.85*占左心％10.54±2.075.48±1.77**7.58±5.15 8.10±0.89*5.82±2.45**與鹽水對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.012.1.3.10對(duì)心肌梗塞病理切片的影響鹽水對(duì)照組心肌梗死病變較明顯、較重，而陽性藥物組及給藥組病變均較鹽水組有明顯減輕，尤其大劑量組病變最輕，說明該藥具有一定的抗心肌缺血作用，且劑量越大，效果越明顯。2.1.4實(shí)驗(yàn)結(jié)論西洋參果總皂苷能減輕心肌缺血損傷，增加心肌供血，對(duì)心臟有保護(hù)作用，適用治療心肌缺血、冠心病和心律不齊等心血管系統(tǒng)疾病。2.2西洋參果總皂苷對(duì)Wistar大鼠高血糖動(dòng)物模型的影響西洋參果總皂苷0.52g/kg、0.26g/kg、0.13g/kg(分別相當(dāng)于臨床等效用量的8倍、4倍、2倍)大、中、小三個(gè)劑量組，其中大、中劑量組可使Wistar大鼠高血糖動(dòng)物模型血糖水平下降，具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.05，與消渴丸組2.0g/kg，相當(dāng)于臨床等效用量的4倍，具有相似的作用；可使全血高切比粘度、全血低切比粘度下降，與模型組比較具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.05，P＜0.01，大、中劑量組可使血漿粘度明顯下降，與模型組比較具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜0.05。
西洋參果總皂苷0.90g/kg、0.45g/kg、0.09g/kg，分別相當(dāng)于臨床等效用量的10倍、5倍、1倍，對(duì)昆明種小鼠糖耐量曲線影響試驗(yàn)結(jié)果表明，給予葡萄糖后30分鐘，西洋參果總皂苷大劑量組血糖值下降與模型組比較有明顯差異P＜0.05，其余各給藥組血糖值低于模型組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。給予葡萄糖60分鐘，各組血糖值明顯升高，其中西洋參果總皂苷各組及消渴丸組血糖值低于模型組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞0.05，可120分鐘時(shí)各組血糖值均恢復(fù)正常。2.2.1試驗(yàn)材料藥品 西洋參果總皂苷，由吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院天然藥物研究室提供，批號(hào)20000708；消渴丸由廣州中藥一廠生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號(hào)(1994)第11146號(hào)，專利號(hào)ZL953081990。
動(dòng)物 wistar大鼠，雌雄各半，體重195g-245g，由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供，質(zhì)量合格證號(hào)醫(yī)動(dòng)字第10-5110號(hào)；主要試劑和儀器鏈脲霉素(STZ)美國sigma化學(xué)公司出品，批號(hào)89H0604血糖試條 北京怡成生物電子技術(shù)有限公司出品。JPS-III型快速血糖測(cè)試儀 北京怡成生物電子技術(shù)有限公司出品。離心機(jī) 北京醫(yī)用離心機(jī)廠，型號(hào)LDZ5-2。全自動(dòng)生化儀 日本日立公司出品，型號(hào)日立7170A型。2.2.2試驗(yàn)方法自吉林大學(xué)動(dòng)物部引入Wistar大鼠后，飼養(yǎng)于吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物室，室溫22-25℃，濕度30-60％，飼料組成玉米面39％、豆餅面25％、麥糠面14％、高粱面10％、骨粉2.5％、魚粉5％、酵母3.5％、添加劑1％。
取西洋參果總皂苷藥粉配成5.2％(g/v)、2.6％(g/v)、1.3％(g/v)大、中、小三個(gè)劑量的供試藥液。消渴丸配成濃度為20％(g/v)供試液。
自吉林大學(xué)動(dòng)物部引入Wistar大鼠106只，雌雄各半，在本室適應(yīng)1周，禁食不禁水4小時(shí)后，稱體重、測(cè)血糖、作標(biāo)記。選擇血糖值在正常范圍內(nèi)、狀態(tài)好的100只雌雄各半的大鼠做實(shí)驗(yàn)，從中留10只作為正常對(duì)照組，將90只Wistar大鼠用鏈脲霉素STZ按0.054g/kg造模型，鏈脲霉素STZ用0.05mol/L枸椽酸溶液PH＝4.5配成2.0％的溶液。大鼠禁食不禁水16小對(duì)后，按體重腹腔一次注入鏈脲霉素STZ藥液。第8天禁食不禁水4小時(shí)后，測(cè)血糖，其中血糖值大于10mmol/L為模型成立。與正常對(duì)照組比較有顯著性差異，P＜0.001。將54只高血糖模型動(dòng)物，髓機(jī)分為五組，每組10～11只，雌雄各組均分。分組為正常對(duì)照組、模型組、消渴丸組2.0g/kg，相當(dāng)于臨床用量的4倍、西洋參果總皂苷大劑量組0.52g/kg、中劑量組0.26g/kg、小劑量組0.13g/kg，相當(dāng)于臨床用量的8、4、2倍。
模型組給水10ml/kg，各給藥組均給予10ml/kg供試藥液。每日上午9時(shí)左右灌胃給藥，連續(xù)四周，每周測(cè)血糖、體重，按新體重計(jì)算藥量一次。于給藥第四周后處死動(dòng)物，取血測(cè)血常規(guī)、血液生化指標(biāo)、血液流變學(xué)和胰島素含量，并取胰腺進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。將各組所得結(jié)果以均值x±標(biāo)準(zhǔn)差S表示，結(jié)果與模型組進(jìn)行組間t檢驗(yàn)，判斷其顯著性。2.2.3試驗(yàn)結(jié)果2.2.3.1對(duì)血糖的影響給藥后第三周西洋參果總皂苷大劑量組與模型組比較血糖明顯下降(P＜0.05)。第四周西洋參果總皂苷大、中劑量組和消渴丸組血糖值均降低，與模型組比較，具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05，見表4。
表4西洋參果總皂苷對(duì)高血糖模型大鼠血糖值(mmol/L)的影響(x±s)組別 正常對(duì)照組模型組 消渴丸組 大劑量組 中劑量組 小劑量組劑量 10ml/kg 2.0g/kg0.52g/kg 0.26g/kg 0.13g/kg動(dòng)物(只) 1089 1098給藥前 6.12±0.5317.52±2.40 17.22±3.2217.04±3.34 17.10±2.63 16.37±3.32一周 6.19±0.5517.15±2.23 16.85±3.0615.54±3.23 15.10±2.36 15.72±3.10二周 6.12±0.4115.85±3.02 14.57±3.0213.57±2.60 14.06±2.53 15.12±3.23三周 6.12±0.3114.09±3.52 11.97±2.5310.93±2.58* 11.71±2.72 13.05±3.26四周 5.85±0.4613.80±4.12 9.36±2.83*9.07±2.78* 9.49±1.98* 11.81±3.63與模型組比較，*P＜0.052.2.3.2對(duì)血液生化指標(biāo)的影響西洋參果總皂苷大、中劑量組和消渴丸組的血糖值與模型組比較均有明顯下降，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，消渴丸組、大劑量組的總蛋白(TP)與模型組比較有明顯升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，西洋參果總皂苷大劑量組的尿素氮BUN與模型組比較有所降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表5。
表5西洋參果總皂苷對(duì)糖尿病大鼠生化指標(biāo)的影響(x±s)組別 正常對(duì)照組模型組消渴丸組 大劑量組 中劑量組 小劑量組劑量 10ml/kg 2.0g/kg0.52g/kg 0.26g/kg 0.13g/kg動(dòng)物(只) 108 9 10 9 8ALT(U/L) 42.7±20.2101.0±32.6 112.6±58.8100.9±55.2 108.2±45.9 133.5±85.4AST(U/L) 87.1±27.3157.5±49.2 163.8±66.2171.9±97.5 187.7±81.9 215.4±133.0ALP(U/L) 204.3±139.0 532.4±156.1 600.1±256.9 390.0±181.9 530.1±234.4 669.4±201.9TP(g/L)62.3±4.1 61.2±3.5 66.7±2.5**66.4±3.3** 64.6±3.5 62.9±6.1ALB(g/L) 34.5±3.5 30.2±2.4 31.2±1.8 33.7±4.132.3±2.4 32.9±2.0TBIL(umol/L) 0.37±0.230.39±0.340.17±0.11 0.36±0.32 0.24±0.200.45±0.43BUN(mmol/L)8.1±0.8 11.2±4.5 8.9±1.0 7.5±1.6*8.8±0.9 8.8±1.6CRE2(umol/L) 58.5±4.7 82.5±29.569.8±7.7 64.4±4.866.1±5.8 68.3±6.7CLU(mmol/L)6.07±1.8213.98±4.94 9.33±3.29*8.68±2.78* 9.27±2.76* 11.58±3.82CHO(mmol/L)1.3±0.2 1.4±0.5 1.2±0.2 1.4±0.4 1.2±0.1 1.2±0.1與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.012.4實(shí)驗(yàn)結(jié)論西洋參果總皂苷PQFS具有降低大鼠實(shí)驗(yàn)性糖尿病的生物活性。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明西洋參果總皂苷提取、精制方法
權(quán)利要求
1.一種西洋參果總皂苷提取物，其特征為淺黃色至褐色，粉末狀，味苦，紫外光譜(甲醇)在203nm處有最大吸收峰，HPLC光譜顯示出5個(gè)以上的峰，該西洋參果總皂苷提取物的含量占西洋參果肉干重的15％-20％。
2.一種西洋參果總皂苷的提取、精制方法，其特征在于包括如下步驟(1)取西洋參果肉一定量，加3倍量的水在常溫下，機(jī)械攪拌，100γpm，提取2-3次，每次提取1-3小時(shí)；(2)將各次水煮所得的溶液合并，濾過，濾液備用；(3)將上述濾液過大孔吸附樹脂，然后用10％-20％乙醇洗滌，至接近無色，棄取洗液，繼以50％-95％乙醇洗脫，收集該次洗脫液；(4)將該洗脫液回收乙醇后，濃縮，干燥，得西洋參果總皂苷提取物。
3.根據(jù)權(quán)利2所述的西洋參果總皂苷提取物的制備方法，其特征在于大孔吸附樹脂可采用D101、D4020、DA201、AB-8、XAD-4或D14。
4.一種藥物組合物，含有權(quán)利要求1和2所述西洋參果總皂苷提取物作為活性成分。
5.根據(jù)權(quán)利4所述的藥物組合物，其特征在于用于治療冠心病、心肌缺血及心律不齊和II型糖尿病。
全文摘要
本發(fā)明涉及西洋參果總皂苷提取物及其提取、精制方法及其醫(yī)藥用途。屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。通過以西洋參果為原料，采用科學(xué)的提取方法提取西洋參果總皂苷，再經(jīng)過大孔吸附樹脂精制得到西洋參果總皂苷產(chǎn)品，西洋參果總皂苷含量為55％－65％。該物質(zhì)特別適合在制備治療冠心病、心肌缺血、心律不齊及II型糖尿病等藥物中應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K31/704GK1482136SQ0312761
公開日2004年3月17日 申請(qǐng)日期2003年7月8日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月8日
發(fā)明者李平亞, 劉金平, 盧丹 申請(qǐng)人:李平亞