專利名稱：超聲造影劑和兼藥物、基因靶向載體的超聲造影劑的制作方法
一、所屬領(lǐng)域本發(fā)明屬于臨床心血管內(nèi)科學(xué)，涉及肝臟、腎臟、脾臟、前列腺及乳腺等實(shí)質(zhì)臟器腫瘤醫(yī)學(xué)，化學(xué)和超聲醫(yī)學(xué)應(yīng)用的超聲造影劑。特別涉及超聲造影劑和兼藥物、基因靶向載體的超聲造影劑。
國(guó)外超聲造影劑研制現(xiàn)狀A(yù)lbunex和Optison均系聲振白蛋白，美國(guó)FDA批準(zhǔn)臨床應(yīng)用。Levovist在歐洲批準(zhǔn)臨床應(yīng)用。但是心肌顯影效果都欠佳，屬于第1和第2代產(chǎn)品。近年正在研制脂質(zhì)、高分子多聚體成膜材料、有彈性外殼的第3代超聲造影劑，心肌顯影良好，也能被肝臟網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)特異性吞噬而肝臟顯影，實(shí)驗(yàn)和臨床期研究已顯示了良好的應(yīng)用前景。
國(guó)內(nèi)造影劑的研制狀況國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上只有德國(guó)產(chǎn)Levovist，是唯一被我國(guó)衛(wèi)生部批準(zhǔn)的臨床應(yīng)用的超聲造影劑，以半乳糖為原料，心肌顯影欠佳，價(jià)格昂貴，不易推廣使用。北京阜外醫(yī)院的謝峰曾做研究，目前仍未見相關(guān)產(chǎn)品。第一軍醫(yī)大學(xué)南方醫(yī)院超聲科正研制聲振白蛋白氟碳?xì)怏w超聲造影劑，屬于第2代產(chǎn)品，目前仍未投入市場(chǎng)使用。至今，無(wú)國(guó)產(chǎn)心臟超聲造影劑臨床應(yīng)用的報(bào)告。因此，發(fā)展穩(wěn)定、可靠、價(jià)廉的國(guó)產(chǎn)超聲造影劑，是我國(guó)醫(yī)學(xué)和相關(guān)技術(shù)領(lǐng)域面臨的迫切任務(wù)。2.兼基因或藥物靶向載體的超聲造影劑研制現(xiàn)狀(1)基因載體研制現(xiàn)狀隨著人類基因圖的組成和致病基因的不斷發(fā)現(xiàn)，基因治療研究的不斷深入，心腦血管病和腫瘤的基因治療已成為基因治療研究中最活躍的領(lǐng)域之一。裸DNA由于易被機(jī)體胞外屏障和胞內(nèi)屏障阻礙清除，主要通過(guò)直接的物理和機(jī)械方法導(dǎo)入部位，雖能有效轉(zhuǎn)運(yùn)并表達(dá)目的基因，但缺乏靶向性，只能局部作用，并且可能還需進(jìn)行外科手術(shù)以暴露靶器官，臨床應(yīng)用受限。人們愈來(lái)愈認(rèn)識(shí)到選擇適當(dāng)?shù)妮d體，使基因靶向性和特異性的在一些人體組織部位表達(dá)，是基因治療成功的關(guān)鍵。目前，應(yīng)用于基因治療的載體主要有病毒載體和非病毒載體。其中85％基因治療臨床項(xiàng)目是采用病毒載體，存在許多不足或危險(xiǎn)，主要體現(xiàn)在免疫原性高、毒性大、插入性基因突變、目的基因容量小、靶向特意性差、制備較復(fù)雜及費(fèi)用較高等。所以正積極研制非病毒載體。脂質(zhì)體作為載體，雖然包裹DNA后直接注射安全、無(wú)免疫原性，但是無(wú)靶向性和特異性，體內(nèi)基因轉(zhuǎn)移效率低等缺點(diǎn)。納米微粒是有希望的載體，但是靶向性仍然有待于研究解決。10年來(lái)，雖然有許多新的靶向特異性基因治療，但是成功的基因治療仍然是難以捉摸和具有挑戰(zhàn)性的，最主要的障礙是缺乏無(wú)創(chuàng)、有效、靶向特殊器官和組織的載體釋放系統(tǒng)。(2)溶栓藥物和抗腫瘤藥物載體研制現(xiàn)狀血栓性疾病與腫瘤已成為危害人類的主要疾病。許多血栓性疾病是由血栓所致，如心肌梗死、外周血管血栓形成、腦梗塞，需要溶栓和/或抗凝血治療。但是，目前的溶栓劑和抗血栓藥物如r-tPA、鏈激酶，尿激酶，都無(wú)血栓特異性，容易導(dǎo)致身體其它部位出血的嚴(yán)重副作用。迄今仍然沒有發(fā)現(xiàn)特異性的作用于血栓部位的藥物。因此，研制攜帶溶栓藥和抗血小板藥物，特異性靶向血栓的載體釋放系統(tǒng)具有重要臨床意義。同理，目前的抗癌藥不但殺死癌細(xì)胞，而且也破壞正常的組織細(xì)胞。但是目前仍然沒有特異性的、靶向的理想藥物載體釋放系統(tǒng)。
心肌聲學(xué)造影是近年發(fā)展的一種影像新技術(shù)，將含有微氣泡的造影劑注入靜脈，當(dāng)通過(guò)心肌微血管床時(shí)，用二維超聲心動(dòng)圖心肌顯影，由于微氣泡通過(guò)心肌時(shí)完全保持在血管內(nèi)，故它不但可在跳動(dòng)的心臟上估計(jì)冠脈微循環(huán)和心肌存活性，而且氣微泡作為載體，能將攜帶的基因或者藥物等帶到心肌微循環(huán)，超聲空化作用氣微泡破壞，使所攜帶基因或藥物被釋放在特定組織部位。國(guó)外已有有關(guān)攜帶抗血小板抗體的超聲造影劑的實(shí)驗(yàn)論文發(fā)表，國(guó)內(nèi)少有相關(guān)的研究。因此，研究可生物降解的高分子多聚體超聲造影劑，其氣微泡作為攜帶多種基因或藥物的載體，超聲介導(dǎo)在特定組織部位基因轉(zhuǎn)染或者藥物釋放，填補(bǔ)基因?qū)牒退幬锇邢蛐葬尫诺目瞻住o(wú)疑它必將有廣闊的應(yīng)用前景和巨大的經(jīng)濟(jì)效益。
本發(fā)明的目的之一研制一種適用于靜脈注射的超聲造影劑。該造影劑具有如下作用1)急性心肌梗死的早期診斷，梗死范圍及再灌注療效損傷評(píng)價(jià)；2)慢性缺血心肌的診斷；3)心功能評(píng)價(jià)超聲心動(dòng)圖評(píng)價(jià)心功能需要清晰的心內(nèi)膜界。而不少患者，單純超聲心動(dòng)圖不能清晰地分辨心內(nèi)膜面，影響了心功能測(cè)定。超聲造影劑增強(qiáng)了心內(nèi)膜界，使心功能評(píng)價(jià)更準(zhǔn)確。
4)診斷和鑒別診斷肝臟、腎臟、脾臟、前列腺、乳腺等實(shí)質(zhì)性臟器腫瘤。
本發(fā)明的目的之二研制一種既有超聲造影作用，又是藥物、基因載體的靶向超聲造影劑。
該造影劑具有如下作用1)攜帶VEGF、bFGF等多基因的超聲造影劑氣微泡，在超聲的作用下，在心肌缺血壞死組織部位氣微泡破裂，VEGF等多基因被靶向釋放在缺血心肌局部，轉(zhuǎn)染心肌內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)心肌微血管及側(cè)枝血管再通，即無(wú)創(chuàng)轉(zhuǎn)基因治療，實(shí)現(xiàn)無(wú)創(chuàng)性心肌內(nèi)微血管“搭橋”。
2)靶向血管內(nèi)血栓。在急性冠脈綜合癥的病因中，富含血小板的血栓是主要原因。血小板激活在急性冠脈綜合癥的病理生理過(guò)程中起著關(guān)鍵的作用。血小板膜糖蛋白IIb/IIIa(GPIIb/IIIa)受體是血小板激活過(guò)程中最終的介質(zhì)，它的阻斷可使急性冠脈綜合癥患者減少心臟并發(fā)癥。人類血小板抗原研究最多的是GPIIIa和IIb。超聲造影劑氣微泡攜帶IIb/IIIa抗體和溶栓藥，在經(jīng)胸超聲心動(dòng)局部超聲作用下，破壞氣微泡，使攜帶的IIb/IIIa抗體和溶栓藥特異性的在血栓部位釋放，利用抗體與血栓的IIb/IIIa抗原特異性結(jié)合，特異性的抗血小板和溶栓，避免和減少全身出血的副作用。
3)攜帶特異性抗體或基因或特異性抗腫瘤藥物，靶向?qū)嵸|(zhì)器官的腫瘤，特異性治療肝臟、腎臟、脾臟、前列腺、乳腺等實(shí)質(zhì)器官腫瘤，避免全身用藥的毒副作用。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是1.一種靜脈注射的超聲造影劑，其特征在于，按以下方法制備1)首先制備表面帶正電荷的氣微泡該氣微泡的泡壁是由脂質(zhì)、可生物降解的聚合體，表面活性劑組成，氣微泡中空，內(nèi)含空氣、氮?dú)獾确躯u碳?xì)怏w，將丙烯酸及其衍生物進(jìn)行乳液共聚；在表面活性劑的參與下，調(diào)節(jié)氣相與液相之表面張力，使氣相進(jìn)入聚合物乳微泡中，或者使氣微泡的泡壁具有胺基、酰胺基、羧基、醚基和硫鍵，或者使氣微泡的脂質(zhì)含有羥基；2)將氣微泡與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、鹼性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子質(zhì)粒重組，以40-100∶1重量比混合攪拌，制備成攜帶血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、鹼性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子基因的含氣微泡的超聲造影劑；3)將氣微泡與GPIIb/IIIa抗體以30-100∶1重量比混合攪拌，使含氣微泡與GPIIb/IIIa抗體通過(guò)二硫鍵共價(jià)藕聯(lián)，制成攜帶IIb/IIIa抗體的氣微泡。
本發(fā)明的其它一些特點(diǎn)是所述氣微泡采用乳液聚合法制備，其配方為氰基丙烯酸酯 100份烷基酚聚氧乙烯(10)醚 2.0份N-?；劝彼徕c 1.5份多聚胱氨酸鈉 1.5份過(guò)醋酸 4份蒸餾水 300份在強(qiáng)力攪拌下進(jìn)行乳液聚合，并向料液中通入氮?dú)?，聚合反?yīng)在65℃-78℃下進(jìn)行反應(yīng)，時(shí)間為6h-8h；氣微泡的粒徑為0.6微米～10.0微米。
所述可生物降解的聚合體為聚氰基丙烯酸酯或氰基丙烯酸酯——丙烯酰胺共聚物。
所述表面活性劑為磷脂或烷基酚聚氧乙烯(10)醚或N-?；劝彼徕c或多聚胱氨酸鈉或上述各活性劑的復(fù)合。
兼藥物或基因靶向載體超聲造影劑，按以下方法制備1)首先制備好如權(quán)利要求書1所述的靜脈注射的超聲造影劑；2)將氣微泡和多聚氨基酸、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、鹼性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)質(zhì)?；旌蠑嚢?，在15℃條件下進(jìn)行反應(yīng)，使氣微泡通過(guò)與多聚氨基酸、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、鹼性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)基因親和，按次價(jià)力進(jìn)行結(jié)合。
所述氣微泡還可以通過(guò)與GPIIb/IIIa抗體以30-100∶1重量比混合攪拌，制成攜帶IIb/IIIa抗體的氣微泡。
所述氣微泡還可以通過(guò)與抗纖維蛋白溶解酶原激活物t-PA單克隆抗體混合攪拌，制成攜帶溶栓藥物的載體。
所述氣微泡還可以通過(guò)利用抗體的硫鍵等活性基團(tuán)與微泡壁的活性基團(tuán)化學(xué)結(jié)合，制成多種具有血栓特異性的抗血栓劑的氣微泡。
血管內(nèi)的血栓主要是由纖維蛋白、血小板及血細(xì)胞組成，其中許多物質(zhì)可以克隆為抗體。
含氣微泡包裹抗腫瘤藥物，可以在超聲作用下釋放。
本發(fā)明的超聲造影劑和兼藥物、基因靶向載體的超聲造影劑，具有以下效果(一)心臟和心肌超聲造影1.所發(fā)明的超聲造影劑可明確壞死、缺血心肌的范圍；2.心肌再灌注損傷評(píng)分；3.增強(qiáng)了心內(nèi)膜界面的清晰度，提高了超聲心動(dòng)圖心功能評(píng)價(jià)的準(zhǔn)確性；4.可探查到的大血管腔內(nèi)(如頸和股動(dòng)靜脈等)、心腔內(nèi)特別是經(jīng)胸超聲心動(dòng)圖不易探查到的心耳內(nèi)血栓診斷；(二)理想的藥物和基因的載體具有靶向性和特異性1.載體攜帶血小板及血栓特異性抗體靶向血小板和血栓，用于血管內(nèi)血栓和冠脈血栓的溶解。
2.載體攜帶血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、鹼性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)基因，在超聲作用下，在心肌局部釋放基因并轉(zhuǎn)染心肌內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)缺血、壞死心肌組織微血管再生，即“微血管搭橋”。
3.攜帶特異性抗體或抗腫瘤藥物，在超聲作用下，在肝、腎等實(shí)質(zhì)器官的腫瘤部位釋放。


圖1是可生物降解聚合體氣微泡化學(xué)聚合示意圖。
圖2是兼藥物、基因靶向載體的超聲造影劑實(shí)施例流程示意圖。
圖1是可生物降解聚合體氣微泡化學(xué)聚合示意圖按本發(fā)明的技術(shù)方案，靜脈注射的超聲造影劑，按以下方法制備1)制備含直徑1-10微米的含氣微泡；氣微泡殼層(即氣微泡的泡壁)是由脂質(zhì)、可生物降解的聚合體(如聚氰基丙烯酸酯、氰基丙烯酸酯——丙烯酰胺共聚物等)，表面活性劑(如磷脂、烷基酚聚氧乙烯(10)醚、N-酰基谷氨酸鈉、多聚胱氨酸鈉等)組成。表面活性劑(再此亦稱為乳化劑)，我們是采用多種表面活性劑復(fù)合使用。聚合體單體與表面活性劑用量的比例為100∶4-6(重量份)。表面活性劑的分子中含有一個(gè)較大的中性烴基結(jié)構(gòu)和極性末端，中性烴基結(jié)構(gòu)能溶于聚合體的單體中，對(duì)空氣、氮?dú)庖嘤杏H和性，其極性端則親水。在乳液聚合中采用水為分散介質(zhì)，表面活性劑用以減少單體與分散介質(zhì)間的界面張力，使單體乳化成為單體乳膠粒，并增加單體于水相中的溶解度，使容納于表面活性劑膠囊中的單體成為增溶溶液。同時(shí)也減少了氣體(空氣、氮?dú)?與分散介質(zhì)間的界面張力，使氣體能更多的容納于表面活性劑的膠囊中，再進(jìn)入聚合體—單體乳膠粒中，而最后形成為氣微泡乳膠粒子。在水溶液中表面活性劑將憎水基朝向單體液滴或聚合體粒子，在他們的周圍造成保護(hù)層，阻止粒子并合而保證了乳液的穩(wěn)定，同時(shí)也提供了氣體在聚合體—單體乳膠粒中的較穩(wěn)定的環(huán)境。(附圖1)。
2)帶正電荷的氣微泡與帶負(fù)電荷的VEGF、bGFG基因質(zhì)粒混合；或者氣微泡的泡壁具有胺基、酰胺基、羧基、醚基和硫鍵，或者氣微泡的脂質(zhì)有羥基，與VEGF、bGFG的氨基基團(tuán)耦聯(lián)，制備成攜帶VEGF、bGFG基因的含氣微泡；3)使含氣微泡的羥基與GPIIb/IIIa抗體藕聯(lián)，制成攜帶IIb/IIIa抗體的氣微泡。
兼藥物或基因靶向載體超聲造影劑，按以下方法制備1)首先制備好如權(quán)利要求書1所述的靜脈注射的超聲造影劑；氣微泡的外層分布著表面活性劑烷基酚聚氧乙烯(10)醚，N-?；劝彼徕c以及多聚胱氨酸鈉的分子束，使氣微泡的泡壁具有胺基、酰胺基、羧基、醚基和硫鍵，對(duì)多聚氨基酸、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、鹼性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)基因均具有親和作用，可按次價(jià)力進(jìn)行結(jié)合；使氣微泡既是超聲造影劑，同時(shí)也可成為基因、藥物靶向載體；2)同時(shí)氣微泡的泡壁具有的多種活性官能基與多聚賴氨酸、VEGF、bFGF等基因中的活性官能基在15℃條件下進(jìn)行反應(yīng)，發(fā)生結(jié)合或生成化學(xué)鍵；使氣微泡既是超聲造影劑，同時(shí)也可成為基因、藥物靶向載體；3)將氣微泡與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、鹼性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)基因質(zhì)?；旌?，以40-100∶1重量比混合攪拌，制備成攜帶血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、鹼性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子基因質(zhì)粒的含氣微泡的載體，同時(shí)也是超聲造影劑；4)使含氣微泡與血小板GPIIb/IIIa抗體通過(guò)二硫鍵共價(jià)藕聯(lián)將微泡與GPIIb/IIIa抗體以30-100∶1重量比混合攪拌，制成攜帶IIb/IIIa抗體的氣微泡；5)使含氣微泡與抗纖維蛋白溶解酶原激活物t-PA單克隆抗體混合攪拌，制成攜帶溶栓藥物的載體；6)利用抗體的硫鍵等活性基團(tuán)，與微泡壁的活性基團(tuán)化學(xué)結(jié)合，從而制成多種具有血栓特異性的抗血栓劑的氣微泡。
圖2是兼藥物、基因靶向載體的超聲造影劑的實(shí)施例流程示意圖。
首先將單體、復(fù)合乳化劑、引發(fā)劑、分散介質(zhì)和水混合；在強(qiáng)力攪拌下乳液聚合，生成泡壁有多種活性官能基，泡內(nèi)含有聚合體及氣體的氣微泡乳膠粒，加入有活性基團(tuán)的基因(VEGF、bFGF質(zhì)粒)，制備成能攜帶基因的氣微泡，經(jīng)靜脈注射入血液循環(huán)，經(jīng)心臟冠脈及其微循環(huán)，在體表心臟部位持續(xù)超聲作用下，氣微泡釋放，達(dá)到如下作用1、心肌顯影；2、氣微泡釋放基因入心肌，基因轉(zhuǎn)染心肌內(nèi)皮細(xì)胞，在心肌內(nèi)表達(dá)，使缺血、壞死心肌血管再生。
實(shí)施例氣微泡是采用乳液聚合法制備的，其配方為氰基丙烯酸酯 100份烷基酚聚氧乙烯(10)醚 2.0份N-酰基谷氨酸鈉 1.5份多聚胱氨酸鈉 1.5份過(guò)醋酸 4份蒸餾水 300份在強(qiáng)力攪拌下進(jìn)行乳液聚合，并向料液中通入氮?dú)猓酆戏磻?yīng)在65℃-78℃下進(jìn)行。反應(yīng)后獲得的產(chǎn)物用電鏡分析測(cè)試，乳膠粒子(即氣微泡)的粒徑基本上為0.6微米～10.0微米。乳膠粒包容有一定量的空氣如氮?dú)?，乳膠粒的聚合物即聚氰基丙烯酸酯為可生物降解的聚合物。乳膠粒子的外層分布著乳化劑(即表面活性劑)烷基酚聚氧乙烯(10)醚，N-?；劝彼徕c以及多聚胱氨酸鈉的分子束，使氣微泡的泡壁具有胺基、酰胺基、羧基、醚基和硫鍵，對(duì)多聚氨基酸、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、鹼性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)基因(注VEGF和bFGF是促血管生長(zhǎng)因子，已證實(shí)VEGF、bFGF等血管生長(zhǎng)因子基因特異性地促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分裂增殖，血管通透性增加，為血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移及血管形成提供基質(zhì)，是新生血管的始動(dòng)因素，促進(jìn)缺血組織血管再生及側(cè)枝微血管生長(zhǎng)，使遭到破壞的心肌內(nèi)微血管重建。)均具有親和作用，可按次價(jià)力進(jìn)行結(jié)合。同時(shí)氣微泡的泡壁具有的多種活性官能基與多聚賴氨酸、VEGF、bFGF等基因中的活性官能基在適當(dāng)條件下也可以進(jìn)行反應(yīng)，發(fā)生結(jié)合或生成化學(xué)鍵。因此氣微泡既是超聲造影劑，同時(shí)也可成為基因、藥物靶向載體。
將氣微泡與VEGF、bFGF基因質(zhì)?；旌希捎跉馕⑴莸呐荼诰哂卸喾N極性官能基，而基因質(zhì)粒中也含有極性基因，泡壁與基因質(zhì)粒間即具有范德華力的作用且有生成氫鍵的可能，泡壁附有的氨基酸的羧基基團(tuán)并可與VEGF、bFGF基因質(zhì)粒的活性基團(tuán)藕聯(lián)，或者帶正電荷的氣微泡與帶負(fù)電荷的VEGF、bFGF基因質(zhì)粒結(jié)合，將微泡與VEGF、bFGF質(zhì)粒重組以40-100∶1重量比混合慢速攪拌，制備成攜帶血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、鹼性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子基因質(zhì)粒的含氣微泡的載體，同時(shí)也是超聲造影劑。
作為攜帶血管生長(zhǎng)因子的載體的超聲造影劑的氣微泡注射入靜脈，隨血液流經(jīng)心肌，在超聲空化作用下，氣微泡在心肌局部破壞，釋放出其內(nèi)的氣體，不但產(chǎn)生線性散射和非線性散射，使心肌血液灌注好的區(qū)域顯影增強(qiáng)，心肌血液灌注不好的區(qū)域則不顯影或顯影不好。從而實(shí)現(xiàn)心肌造影，可成為無(wú)創(chuàng)、床旁、適時(shí)和可重復(fù)的急性或慢性缺血性心臟病新的良好診斷技術(shù)。而且超聲空化作用破壞氣微泡，使氣微泡所攜帶的血管生長(zhǎng)因子基因釋放到心肌局部，轉(zhuǎn)染血管內(nèi)皮細(xì)胞，營(yíng)造血管再生的微環(huán)境，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增長(zhǎng)，最終使缺血、壞死的心肌血管再生，實(shí)現(xiàn)無(wú)創(chuàng)性心肌內(nèi)微血管“搭橋”。
權(quán)利要求
1.一種靜脈注射的超聲造影劑，其特征在于，按以下方法制備1)首先制備表面帶正電荷的氣微泡該氣微泡的泡壁是由脂質(zhì)、可生物降解的聚合體，表面活性劑組成，氣微泡中空，內(nèi)含空氣、氮?dú)獾确躯u碳?xì)怏w，將丙烯酸及其衍生物進(jìn)行乳液共聚；在表面活性劑的參與下，調(diào)節(jié)氣相與液相之表面張力，使氣相進(jìn)入聚合物乳微泡中，或者使氣微泡的泡壁具有胺基、酰胺基、羧基、醚基和硫鍵，或者使氣微泡的脂質(zhì)含有羥基；2)將氣微泡與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、鹼性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子質(zhì)粒以40-100∶1重量比混合攪拌，制備成攜帶血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、鹼性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子基因的含氣微泡的超聲造影劑；3)將氣微泡與GPIIb/IIIa抗體以30-100∶1重量比混合攪拌，使含氣微泡與GPIIb/IIIa抗體通過(guò)二硫鍵共價(jià)藕聯(lián)，制成攜帶IIb/IIIa抗體的氣微泡。
2.如權(quán)利要求1所述的靜脈注射的超聲造影劑，其特征在于，所述氣微泡采用乳液聚合法制備，其配方為氰基丙烯酸酯 100份烷基酚聚氧乙烯(10)醚 2.0份N-?；劝彼徕c 1.5份多聚胱氨酸鈉 1.5份過(guò)醋酸 4份蒸餾水 300份在強(qiáng)力攪拌下進(jìn)行乳液聚合，并向料液中通入氮?dú)?，聚合反?yīng)在65℃-78℃下進(jìn)行反應(yīng)，時(shí)間為6h-8h；氣微泡的粒徑為0.6微米～10.0微米。
3.如權(quán)利要求1所述的靜脈注射的超聲造影劑，其特征在于，所述可生物降解的聚合體為聚氰基丙烯酸酯或氰基丙烯酸酯——丙烯酰胺共聚物。
4.如權(quán)利要求1所述的靜脈注射的超聲造影劑，其特征在于，所述表面活性劑為磷脂或烷基酚聚氧乙烯(10)醚或N-?；劝彼徕c或多聚胱氨酸鈉或上述各活性劑的復(fù)合。
5.一種兼藥物或基因靶向載體超聲造影劑，其特征在于，按以下方法制備1)首先制備好如權(quán)利要求書1所述的靜脈注射的超聲造影劑；2)將氣微泡和多聚氨基酸、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、鹼性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)質(zhì)粒混合攪拌，在15℃條件下進(jìn)行反應(yīng)，使氣微泡通過(guò)與多聚氨基酸、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、鹼性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)基因親和，按次價(jià)力進(jìn)行結(jié)合。
6.如權(quán)利要求5所述的兼藥物或基因靶向載體超聲造影劑，其特征在于，所述氣微泡還可以通過(guò)與GPIIb/IIIa抗體以30-100∶1重量比混合攪拌，制成攜帶IIb/IIIa抗體的氣微泡。
7.如權(quán)利要求5所述的兼藥物或基因靶向載體超聲造影劑，其特征在于，所述氣微泡還可以通過(guò)與抗纖維蛋白溶解酶原激活物t-PA單克隆抗體混合攪拌，制成攜帶溶栓藥物的載體。
8.如權(quán)利要求5所述的兼藥物或基因靶向載體超聲造影劑，其特征在于，所述氣微泡還可以通過(guò)利用抗體的硫鍵等活性基團(tuán)與微泡壁的活性基團(tuán)化學(xué)結(jié)合，制成多種具有血栓特異性的抗血栓劑的氣微泡。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種超聲造影劑和一種兼藥物、基因載體靶向超聲造影劑，含氣微泡，直徑0.6微米－10微米，氣微泡殼是由脂質(zhì)、高分子可降解多聚體、表面活性劑組成，表面帶正電荷。氣微泡中空，含空氣、氮?dú)獾确躯u碳?xì)怏w。用乳液共聚合方法，將丙烯酸及其衍生物進(jìn)行乳液共聚。在表面活性劑參與下，調(diào)節(jié)氣相與液相之表面張力，使氣相進(jìn)入聚合物乳微泡中。兼藥物、基因載體靶向超聲造影劑的氣微泡是在上述超聲造影劑的氣微泡基礎(chǔ)上含有多聚賴氨酸或多聚氨基酸，帶有活性官能基團(tuán)，基團(tuán)與一些基因質(zhì)粒的基團(tuán)耦合使含氣微泡的羧基與GP IIb/IIIa等血栓或抗血栓或溶栓物質(zhì)的抗體藕聯(lián)，制成攜帶IIb/IIIa等抗體的氣微泡；氣微泡包裹的抗腫瘤藥物，在超聲作用下破裂，藥物在腫瘤局部釋放。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1438037SQ0311456
公開日2003年8月27日 申請(qǐng)日期2003年3月24日 優(yōu)先權(quán)日2003年3月24日
發(fā)明者李麗君 申請(qǐng)人:西安交通大學(xué)