專利名稱：分離型醫(yī)療材料的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及采用了具有活體適合性的透明質(zhì)酸酯的衍生物的關(guān)節(jié)病癥治療用的注入劑。
背景技術(shù)：
透明質(zhì)酸是由β-D-N-乙酰氨基葡糖和β-D-葡糖醛酸相互結(jié)合而成的直鏈狀的高分子多糖。人們公知透明質(zhì)酸除分布于哺乳動(dòng)物的結(jié)締組織中，另外還存在于雞冠、連鎖球菌的夾膜等處。雞冠、臍帶等可用作提取材料，也可從連鎖球菌的培養(yǎng)物來(lái)調(diào)制精制物。
人們公知天然產(chǎn)的透明質(zhì)酸的分子量具有多分散性，無(wú)種群和臟器特異，在移植或注入活體時(shí)，也顯示良好的活體適應(yīng)性。
關(guān)節(jié)液被供給活體關(guān)節(jié)的關(guān)節(jié)軟骨作為營(yíng)養(yǎng)，同時(shí)它還具有其它種類液體不具有的良好的潤(rùn)滑功能和抗沖擊功能，而關(guān)節(jié)液中主要成分之一，透明質(zhì)酸對(duì)該良好的粘彈性功能起到了至關(guān)重要的作用。人們還公知，透明質(zhì)酸的分子量是幾百萬(wàn)-1千萬(wàn)的高分子量。
通常，從變形性關(guān)節(jié)病癥、慢性關(guān)節(jié)風(fēng)濕病等各種關(guān)節(jié)病癥患者的關(guān)節(jié)液中的透明質(zhì)酸濃度和分子量的分析結(jié)果看，人們確認(rèn)關(guān)節(jié)病癥患者的關(guān)節(jié)液與正常的關(guān)節(jié)液相比，其濃度、分子量都趨向于偏低，人們認(rèn)為它與關(guān)節(jié)液的潤(rùn)滑作用、關(guān)節(jié)軟骨表面保護(hù)作用的降低所引起的運(yùn)動(dòng)功能障礙和疼痛癥狀的發(fā)生有著密切聯(lián)系。
作為這些關(guān)節(jié)病癥中的變形性膝關(guān)節(jié)病癥的有效治療手段，采用將透明質(zhì)酸溶液注入疾患關(guān)節(jié)部位的方法，作為該膝關(guān)節(jié)治療劑的具體例，可例舉アルツ(生化學(xué)工業(yè)公司制，平均分子量為90萬(wàn))、Hyalgan(Fidia公司制造，平均分子量＜50萬(wàn))以及本發(fā)明者基于高分子量的治療劑有望能獲得更良好的效果的思路，開(kāi)發(fā)出也適合于慢性關(guān)節(jié)風(fēng)濕病的スベニ一ル(アベンテイスファ一マ公司/中外制藥公司/電氣化學(xué)工業(yè)公司制造，平均分子量為190萬(wàn))。
此外，還開(kāi)發(fā)了含有通過(guò)化學(xué)交聯(lián)透明質(zhì)酸，高分子化而改良了粘彈性的、交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠的Synvisc(ジエンザイム公司制造)。該交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠是通過(guò)交聯(lián)劑二乙烯基砜對(duì)透明質(zhì)酸進(jìn)行化學(xué)交聯(lián)而成的透明質(zhì)酸凝膠，稱為海蘭(ハイラン)。海蘭和交聯(lián)海蘭而成的凝膠的生成法在美國(guó)專利第4713448號(hào)中有詳細(xì)記載。將透明質(zhì)酸作為基礎(chǔ)物質(zhì)的單一和混合凝膠在美國(guó)專利第4582865號(hào)和第4605691號(hào)中有記載。
采用這些關(guān)節(jié)制劑的治療必須是每周3-5次直接對(duì)患者的關(guān)節(jié)進(jìn)行注射，從減輕患者和醫(yī)務(wù)人員的負(fù)擔(dān)的角度看，希望減少注射次數(shù)。
關(guān)于含自交聯(lián)透明質(zhì)酸的關(guān)節(jié)治療劑的技術(shù)也在WO97/49412中有記載。其目的是利用交聯(lián)透明質(zhì)酸來(lái)控制粘彈性的性質(zhì)以及關(guān)節(jié)內(nèi)的滯留性。還公開(kāi)了通過(guò)均勻混合自交聯(lián)的透明質(zhì)酸和透明質(zhì)酸的水溶液以控制粘彈性的技術(shù)。還概念性地顯示了在關(guān)節(jié)腔內(nèi)自交聯(lián)透明質(zhì)酸水解，可制得天然的透明質(zhì)酸的容器(reservoirs)。
關(guān)節(jié)液的pH約為7.3-7.6。(日本生化學(xué)學(xué)會(huì)編，生化學(xué)手冊(cè)I，東京化學(xué)同人，1979，p1569)記錄了關(guān)節(jié)腔內(nèi)所注射的關(guān)節(jié)治療劑的pH與關(guān)節(jié)液的pH有很大差別的情況下，成為引起刺激性和疼痛的原因。為此，將アルツ或スベニ一ル的pH調(diào)整到以7.4為中心的范圍內(nèi)。
為了減輕醫(yī)療機(jī)構(gòu)的調(diào)整投藥時(shí)的負(fù)擔(dān)、防止細(xì)菌污染和異物混入等，對(duì)關(guān)節(jié)治療劑，在出售形式上從瓶劑到預(yù)充式注射器(預(yù)充式シリンジ)的這類盒劑，產(chǎn)生了很大變化。從瓶劑，特別是將高粘度的透明質(zhì)酸制劑抽入注射筒內(nèi)的時(shí)間長(zhǎng)，抽入量的偏差也大。用盒劑不僅能減輕醫(yī)療機(jī)構(gòu)投藥調(diào)整的負(fù)擔(dān)，而且可容易且更加均勻地注入設(shè)定液量，是醫(yī)療上有益的劑形。
本發(fā)明者在深入研究透明質(zhì)酸的酯衍生物、特別是自交聯(lián)透明質(zhì)酸的性質(zhì)的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)該酯衍生物在中性區(qū)域內(nèi)不具有足夠的穩(wěn)定性。投入活體的醫(yī)療材料被制劑化成生理?xiàng)l件的中性區(qū)域，但是如果按照該條件，在將透明質(zhì)酸的酯衍生物用作醫(yī)療材料時(shí)，則在流通過(guò)程等中可能不能經(jīng)受長(zhǎng)期保存。
因此，為了解決如下問(wèn)題，即特別在使由上述透明質(zhì)酸的酯衍生物制得的醫(yī)療材料制劑化時(shí)，透明質(zhì)酸的酯衍生物在中性pH區(qū)域內(nèi)不穩(wěn)定的問(wèn)題，本發(fā)明者對(duì)穩(wěn)定提供該酯衍生物的方法進(jìn)行了深入研究。其結(jié)果發(fā)現(xiàn)該酯衍生物在pH為4.5-6.5的弱酸性區(qū)域條件下，穩(wěn)定性提高。因此，在提供將透明質(zhì)酸的酯衍生物作為成分的醫(yī)療材料時(shí)，考慮形成如下這種形態(tài)的制劑，即在弱酸性的透明質(zhì)酸的酯衍生物的分散水溶液以及中和劑溶液、還包括中和劑溶液中溶解有透明質(zhì)酸的情況，以分離狀態(tài)進(jìn)行填充，形成兩者不同的pH條件，在治療時(shí)能夠混合注入，從而最終能夠在生理中性pH條件下給藥的制劑，并據(jù)此完成本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的由如下的要點(diǎn)組成
1.分離型醫(yī)療材料，其特征在于，它由緩沖至pH為4.5-6.5的含有透明質(zhì)酸酯衍生物的水溶液的(A)液，以及具有將與該(A)液混合時(shí)的pH控制在6.8-7.8范圍內(nèi)的緩沖能的水溶液的(B)液構(gòu)成，(A)液和(B)液在給藥時(shí)混合投入，但給藥前保持分離的狀態(tài)。
2.根據(jù)上述1所述的分離型醫(yī)療材料，其特征在于，(A)液的透明質(zhì)酸酯衍生物是自交聯(lián)的透明質(zhì)酸。
3.根據(jù)上述1或2所述的分離型醫(yī)療材料，其特征在于，(A)液含有透明質(zhì)酸酯衍生物的水溶液的透明質(zhì)酸酯衍生物的濃度在1-20質(zhì)量％的范圍內(nèi)。
4.根據(jù)上述1、2或3所述的分離型醫(yī)療材料，其特征在于，具有將與(A)液混合時(shí)的pH控制在6.8-7.8的范圍內(nèi)的緩沖能的水溶液的(B)液是溶解了透明質(zhì)酸的水溶液。
5.根據(jù)上述1-4中任一項(xiàng)所述的分離型醫(yī)療材料，其特征在于，還含有醫(yī)藥品或可醫(yī)藥性相容的潤(rùn)滑劑。
6.根據(jù)上述5所述的分離型醫(yī)療材料，其特征在于，在緩沖至pH為4.5-6.5的含有透明質(zhì)酸酯衍生物的水溶液的(A)液中溶解或分散有醫(yī)藥品或可醫(yī)藥性相容的潤(rùn)滑劑。
7.根據(jù)上述5或6所述的分離型醫(yī)療材料，其特征在于，在(A)液的透明質(zhì)酸酯衍生物中溶解或分散有醫(yī)藥品或可醫(yī)藥性相容的潤(rùn)滑劑。
8.根據(jù)上述5-7中任一項(xiàng)所述的分離型醫(yī)療材料，其特征在于，在具有將與(A)液混合時(shí)的pH控制在6.8-7.8范圍內(nèi)的緩沖能的水溶液的(B)液中，溶解或分散有醫(yī)藥品或可醫(yī)藥性相容的潤(rùn)滑劑。
9.根據(jù)上述5-8中任一項(xiàng)所述的分離型醫(yī)療材料，其特征在于，可醫(yī)藥性相容的潤(rùn)滑劑是磷脂質(zhì)。
10.根據(jù)上述1-9中任一項(xiàng)所述的分離型醫(yī)療材料，其特征在于，它是在注射器以分離的狀態(tài)填充(A)液和(B)液的關(guān)節(jié)注入型醫(yī)療材料。
11.關(guān)節(jié)疾病用的醫(yī)療材料的給藥方法，其特征在于，在將要給藥前，將構(gòu)成上述1-10中任一項(xiàng)的分離型醫(yī)療材料的(A)液和(B)液混合成混合液，并將該混合液注入患者的關(guān)節(jié)以實(shí)施給藥。


圖1是本發(fā)明的分離型醫(yī)療材料的一實(shí)施例的、填充到預(yù)充式注射器中的樣品的示意圖。
符號(hào)的說(shuō)明1前端部密封用部件2橡膠檔塊3圓筒4柱塞桿(A)凝膠懸浮液(B)透明質(zhì)酸具體實(shí)施方式
以下詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明。
用在本發(fā)明的透明質(zhì)酸，不問(wèn)其來(lái)源，可用從動(dòng)物組織提取的透明質(zhì)酸，也可使用通過(guò)發(fā)酵法所制得的透明質(zhì)酸。
用在發(fā)酵法中的菌株較好是如下能高產(chǎn)率并穩(wěn)定生產(chǎn)透明質(zhì)酸的變異菌株，如從自然界分離出的糞類鏈球菌類等具有透明質(zhì)酸生產(chǎn)能力的微生物；或者是日本特許公開(kāi)公報(bào)昭63-123392號(hào)中所記載的糞類鏈球菌·エクイFM-100(微工研菌寄第9027號(hào))、日本特許公開(kāi)公報(bào)平2-234689號(hào)中所記載的糞類鏈球菌·エクイFM-300(微工研菌寄第2319號(hào))。使用采用上述變異菌株進(jìn)行培養(yǎng)并精制而成的菌株。
用在本發(fā)明的透明質(zhì)酸的分子量較好約為1×105-1×107道爾頓的范圍內(nèi)。只要是具有上述范圍內(nèi)的分子量的透明質(zhì)酸，即使是由更高的分子量的物質(zhì)進(jìn)行水解處理等而制得的低分子量的透明質(zhì)酸，也同樣適合使用。
本發(fā)明所說(shuō)的透明質(zhì)酸還包括其堿金屬鹽，例如鈉、鉀、鋰鹽的概念。
作為透明質(zhì)酸的酯衍生物及其制造方法，在EP 0216453B1中公開(kāi)了以脂肪族、芳香族、芳基脂肪族(arylalip透明質(zhì)酸t(yī)ic)、環(huán)狀脂肪族、多環(huán)系列的醇將一部分或全部的羧基進(jìn)行酯化而成的透明質(zhì)酸酯。另外，在EP 0341745B1中還公開(kāi)了用同一的多糖鏈或者其它多糖鏈的醇基將一部分或全部的羧基酯化而成、自交聯(lián)的透明質(zhì)酸酯。以脂肪族、芳香族、芳基脂肪族、環(huán)狀脂肪族、多環(huán)系列的多元醇將一部分或全部的羧基酯化、通過(guò)間隔鏈(スベ一サ一鎖)產(chǎn)生交聯(lián)而成的透明質(zhì)酸的交聯(lián)化合物。另外，在WO95/25751中記載了與透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸的部分或全部的酯的琥珀酸的半酯。在WO99/10385中記載了將透明質(zhì)酸的水溶液調(diào)整到酸性，凍結(jié)該水溶液，然后通過(guò)至少一次解凍所生成的自交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠。在WO01/57093中記載了不進(jìn)行凍結(jié)而通過(guò)將透明質(zhì)酸和酸性溶液混合并保持在該共存狀態(tài)，使成為5質(zhì)量％以上的濃度，而生成的自交聯(lián)透明質(zhì)酸。公開(kāi)了通過(guò)將透明質(zhì)酸進(jìn)行酯衍生物化，與透明質(zhì)酸的水溶液相比，提高了在活體內(nèi)的滯留性。
將透明質(zhì)酸的酯衍生物用作關(guān)節(jié)治療劑時(shí)，從控制粘彈性的性質(zhì)為目的看，酯交聯(lián)后的透明質(zhì)酸的酯衍生物較為理想。多元醇和透明質(zhì)酸的羧基而成的酯、多元羧酸和透明質(zhì)酸的羥基而成的酯、透明質(zhì)酸的羧基和羥基間進(jìn)行酯結(jié)合而成的自交聯(lián)透明質(zhì)酸都較為理想。在通過(guò)在關(guān)節(jié)腔內(nèi)進(jìn)行酯鍵的水解，即使在以形成天然的透明質(zhì)酸的容器(reservoirs)為目的的情況下，也較好用酯交聯(lián)而成的透明質(zhì)酸，它以低酯化度大大改變?cè)诨铙w內(nèi)的滯留性。
自交聯(lián)透明質(zhì)酸的安全性，由于自交聯(lián)透明質(zhì)酸的分解所放出的天然的透明質(zhì)酸被生理學(xué)的代謝路徑所代謝，具有高于通過(guò)其它的交聯(lián)反應(yīng)而制得的酯交聯(lián)透明質(zhì)酸的安全性。將透明質(zhì)酸的酯衍生物用作關(guān)節(jié)治療劑時(shí)，以形成天然的透明質(zhì)酸的容器(reservoirs)為目的情況下，所放出的透明質(zhì)酸自身的分子量大為好。人們公知透明質(zhì)酸從關(guān)節(jié)腔內(nèi)的代謝(移動(dòng))受到透明質(zhì)酸自身的分子量的很大影響(CibaFoundation Symposium 143，The Biology of Hyaluronan，John Wiley&Sons，1989，p265)。
所放出的透明質(zhì)酸的分子量在30萬(wàn)以下時(shí)，所放出的透明質(zhì)酸由于快速?gòu)年P(guān)節(jié)腔內(nèi)代謝(移動(dòng))，所以關(guān)節(jié)治療的效果可能會(huì)大大減退。
將透明質(zhì)酸的酯衍生物用作關(guān)節(jié)治療劑時(shí)，由于通過(guò)注射針注入到關(guān)節(jié)腔內(nèi)，所以必須將透明質(zhì)酸的酯衍生物分散在生理性可相容的介質(zhì)內(nèi)，形成為懸浮液。由于可通過(guò)在透明質(zhì)酸的酯衍生物的制造工序、精制工序的在一階段中，使用混合機(jī)或均化器那樣的破碎機(jī)將透明質(zhì)酸的酯衍生物進(jìn)行破碎來(lái)調(diào)整的透明質(zhì)酸的酯衍生物的分散粒子的粒徑，控制關(guān)節(jié)治療劑的物理化學(xué)性質(zhì)和效果，所以可任意調(diào)整懸浮液。將透明質(zhì)酸的酯衍生物分散在生理性可相容的介質(zhì)后，利用均化器進(jìn)行處理的話，可容易調(diào)整到0.05mm-2.0mm的分散粒徑。
酯交聯(lián)透明質(zhì)酸在生理性可相容的介質(zhì)中膨潤(rùn)形成凝膠。凝膠的平衡膨脹倍率可由酯交聯(lián)透明質(zhì)酸的交聯(lián)度進(jìn)行任意調(diào)整。例如，平衡膨脹倍率為100倍時(shí)，可生理性相容的介質(zhì)中的透明質(zhì)酸濃度為1.0質(zhì)量％。平衡膨脹倍率為10倍時(shí)，可生理性相容介質(zhì)中的透明質(zhì)酸的濃度為10質(zhì)量％。將酯交聯(lián)透明質(zhì)酸用作關(guān)節(jié)治療劑時(shí)，以形成天然的透明質(zhì)酸的容器(reservoirs)為目的的情況下，可生理性相容的介質(zhì)中的透明質(zhì)酸濃度高，在將注入關(guān)節(jié)腔內(nèi)的容量恒定時(shí)，由于增大了注入關(guān)節(jié)腔內(nèi)的透明質(zhì)酸量，能夠期待好的治療效果。
市面上出售的膝關(guān)節(jié)治療劑，例如アルツ或スベニ一ル等的透明質(zhì)酸水溶液的透明質(zhì)酸濃度為1.0質(zhì)量％。所以在可生理性相容的介質(zhì)中分散酯交聯(lián)透明質(zhì)酸的濃度小于1質(zhì)量％時(shí)，不能期望獲得好于市面出售產(chǎn)品的治療效果。由于透明質(zhì)酸分子自身具有對(duì)水的高親和性，在可生理性相容的介質(zhì)中分散酯交聯(lián)透明質(zhì)酸時(shí)，其透明質(zhì)酸濃度高于20質(zhì)量％會(huì)顯著影響分散液的流動(dòng)性，所以不實(shí)用。
在本發(fā)明中，緩沖至為pH為4.5-6.5的含有透明質(zhì)酸酯衍生物的水溶液的(A)液，以及具有將與(A)液進(jìn)行混合時(shí)的pH控制在6.8-7.8的范圍內(nèi)的緩沖能的水溶液的(B)液，在最終混合(A)液和(B)液時(shí)，是生理性相容的水性介質(zhì)。生理性相容是指在將關(guān)節(jié)治療劑注入到關(guān)節(jié)腔內(nèi)時(shí)，水性介質(zhì)自身不好的作用或副作用不會(huì)成為例如組織的膨潤(rùn)或收縮、炎癥等的原因。生理性相容的水性介質(zhì)通常是選自如下1種以上的低分子量物質(zhì)的水溶液堿金屬或堿土金屬的氯化物、硫酸鹽、磷酸鹽或重碳酸鹽之類的無(wú)機(jī)鹽類，例如氯化鈉、硫酸鈉、氯化鎂以及對(duì)應(yīng)的鉀、鈣鹽、乳酸鈉、醋酸鈉之類的有機(jī)酸鹽；或者葡萄糖、甘露糖、多元醇之類的中性有機(jī)物質(zhì)，例如，甘油、甘露醇等。低分子量成分的種類和量，考慮到最終混合(A)液和(B)液時(shí)，所形成的生理性相容的浸透壓、pH、離子含量而進(jìn)行選擇。
緩沖至pH為4.5-6.5的含有透明質(zhì)酸酯衍生物的水溶液的(A)液的緩沖成分，可由能緩沖為指定pH的生理性相容成分進(jìn)行任意選擇。例如有機(jī)酸鹽較為適合，例如乙酸-乙酸鈉、乳酸-乳酸鈉、檸檬酸-檸檬酸鈉。透明質(zhì)酸自身也是具有羧基的高分子電解質(zhì)，也可有效利用透明質(zhì)酸自身所具有的緩沖性。
具有將與(A)液混合時(shí)的pH控制在6.8-7.8的范圍內(nèi)的緩沖能的水溶液的(B)液的緩沖成分，考慮到最終混合(A)液和(B)液時(shí)，所形成的生理性相容的浸透壓、pH、離子含量的基礎(chǔ)上，可從認(rèn)可用作醫(yī)藥品添加物的物質(zhì)中進(jìn)行任意選擇。例如在(A)液的緩沖成分是乙酸-乙酸鈉時(shí)，如選擇氫氧化鈉作為(B)液的緩沖成分，在最終混合(A)液和(B)液時(shí)，生成乙酸鈉。
具有將與(A)液混合時(shí)的pH控制在6.8-7.8范圍內(nèi)的緩沖能的水溶液的(B)液是溶解了透明質(zhì)酸的水溶液的情況下，還必須考慮到透明質(zhì)酸本身是不穩(wěn)定的物質(zhì)。即使透明質(zhì)酸以鈉鹽形式制成制劑被應(yīng)用，但是透明質(zhì)酸鈉本身在水溶液的狀態(tài)時(shí)也缺乏穩(wěn)定性。透明質(zhì)酸具有分子量越大，穩(wěn)定性越差的性質(zhì)。透明質(zhì)酸鈉的溶液是其穩(wěn)定性受到pH的影響，在中性附近是比較穩(wěn)定。為此，在該情況下，最好也將(B)液自身的pH控制在8.0以下，通過(guò)緩沖成分的濃度對(duì)緩沖能進(jìn)行調(diào)整。作為將pH調(diào)整到8.0以下的緩沖成分，可用例如磷酸緩沖成分、硼酸緩沖成分、碳酸緩沖成分、有機(jī)物質(zhì)緩沖成分。溶解的透明質(zhì)酸的濃度，從作為關(guān)節(jié)治療劑的有效性來(lái)看，最好是在0.5-2.0質(zhì)量％的范圍內(nèi)。
在(A)液和溶解了透明質(zhì)酸時(shí)的(B)液中都可添加可提高透明質(zhì)酸自身穩(wěn)定性的穩(wěn)定劑。提高透明質(zhì)酸自身穩(wěn)定性的穩(wěn)定劑，被記載在例如日本特許公開(kāi)公報(bào)平8-104642號(hào)、日本特許公開(kāi)公報(bào)平10-212303號(hào)、日本特許公開(kāi)公報(bào)平11-302197號(hào)中。
因?yàn)榉€(wěn)定劑本身不受pH的限制，所以適合用例如含碘的還原劑或含硫的還原劑。透明質(zhì)酸自身的穩(wěn)定性有時(shí)受鐵等重金屬離子的影響較大，所以添加磷酸等的金屬的惰性劑也是有效的。
下面對(duì)本發(fā)明的分離型醫(yī)療材料的實(shí)際的保存形態(tài)進(jìn)行說(shuō)明。
在將(A)液和(B)液分離進(jìn)行保存的實(shí)際狀態(tài)時(shí)，(A)液作為將透明質(zhì)酸的酯衍生物破碎后分散在特定的水性介質(zhì)中而成的懸浮液被填充在容器中。(B)液，為了不在保存時(shí)與(A)液混合，填充在另外的容器中或者同一容器內(nèi)的不同隔斷區(qū)域內(nèi)。在作為醫(yī)藥品和醫(yī)療材料提供產(chǎn)品時(shí)，通常提供填充在注射器中的產(chǎn)品。例如兩液分離型的預(yù)充式注射器等一致，最好利用這樣的保存容器分別封入(A)液和(B)液。因此，通常液用注射器的突起部分的位置、橡膠栓位置等根據(jù)(A)液和(B)的封入量和容積比進(jìn)行最佳位置的調(diào)整。為了提高(A)液和(B)液的混合性，可用裝有靜態(tài)攪拌器等的容器。
靜態(tài)攪拌器可裝配在兩液分離型的預(yù)充式注射器的注射器的前端，也可裝配在分別(A)液和(B)液進(jìn)行填充的2個(gè)注射器的前端的混合部分。
在用于本發(fā)明的根據(jù)治療用的醫(yī)療材料中還可含有醫(yī)藥品或醫(yī)藥性可相容的潤(rùn)滑劑。作為醫(yī)藥品，可添加麻醉劑、抗生素、類固醇性和非類固醇性的消炎藥劑、生長(zhǎng)抑素等荷爾蒙類的消炎藥劑、表皮親和性的維他命、IL-1和IL-6等的細(xì)胞素、細(xì)胞素受體、FGF等的增殖因子、抗風(fēng)濕病藥劑、抗過(guò)敏藥劑、免疫抑制劑等醫(yī)藥上適合的活性藥劑。
作為潤(rùn)滑劑，可適合用磷脂質(zhì)。用于本發(fā)明的磷脂質(zhì)，可用不管來(lái)源的物質(zhì)，例如可用從動(dòng)物組織提取的磷脂質(zhì)，或者也可用人工合成而制得的磷脂質(zhì)。磷脂質(zhì)較好含有磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、鞘髓磷脂及其衍生物。特好是α-二棕櫚?；字Ｄ憠A(α-DPPC)。該α-DPPC也可以是L體、D體或外消旋(DL)體混合物。
用于本發(fā)明的磷脂質(zhì)的濃度較好為1-200mg/ml。若磷脂質(zhì)濃度未滿1mg/ml時(shí)，作為關(guān)節(jié)用醫(yī)藥品的效果低，若超過(guò)200mg/ml時(shí)，磷脂質(zhì)的凝集增強(qiáng)，保存困難，操作變難，不理想。磷脂質(zhì)由于是兩親媒性物質(zhì)，為了保證透明質(zhì)酸溶液中的穩(wěn)定性等，可以進(jìn)行核糖體化，但也可以不特別進(jìn)行核糖體化，只使其懸浮。
用于本發(fā)明的關(guān)節(jié)治療用的醫(yī)療材料中所添加的醫(yī)藥品或者可醫(yī)藥性相容的潤(rùn)滑劑，根據(jù)醫(yī)藥品或潤(rùn)滑劑的物理化學(xué)上的性質(zhì)或者添加目的，可添加在(A)液或(B)液中的任意一種液體中，或者添加在兩液中，可任意選擇添加方式。同樣也可添加在(A)液中的透明質(zhì)酸的酯衍生物的分散粒子內(nèi)，或者添加在分散介質(zhì)中，或者添加到兩者中進(jìn)行任意添加。為了保持添加醫(yī)藥品的關(guān)節(jié)腔內(nèi)的濃度一定，即在保持DDS效果的制劑設(shè)計(jì)時(shí)，在透明質(zhì)酸的酯衍生物的分散粒子內(nèi)最好添加所需的醫(yī)藥品或潤(rùn)滑劑。
作為本發(fā)明的分離型醫(yī)療材料提供的形態(tài)是填充在注射器的關(guān)節(jié)注入型醫(yī)療材料。
實(shí)施例以下，通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更加詳細(xì)說(shuō)明，但本發(fā)明不受這些實(shí)施例的限制。
實(shí)施例1通過(guò)凍結(jié)和解凍法進(jìn)行透明質(zhì)酸凝膠的制造的例子。
將透明質(zhì)酸鈉(電氣化學(xué)工業(yè)會(huì)社制造分子量2×106道爾頓)溶解在蒸餾水中，調(diào)制成1質(zhì)量％的透明質(zhì)酸的水溶液。用1mol/l鹽酸(和光純藥)將該水溶液的pH調(diào)整到pH為1.5。將15ml的透明質(zhì)酸的酸性水溶液放入30ml的玻璃瓶中，并將其放入設(shè)定為-20℃的冷凍箱中。放置65小時(shí)后，在25℃下解凍。其結(jié)果是制得海綿狀的透明質(zhì)酸凝膠。
將該凝膠多次浸漬在100mmol/l的磷酸緩沖液(pH為6.8)，充分中和凝膠。然后用攪拌器將所得的海綿狀的透明質(zhì)酸凝膠打碎，制得凝膠破碎懸浮液。在3,000rpm、5分鐘的條件下對(duì)其進(jìn)行離心分離，分離凝膠成分，對(duì)該凝膠成分添加新的緩沖液，并重復(fù)5次這樣的操作，將凝膠溶劑置換為5mmol/l磷酸緩沖生理食鹽水。
通過(guò)以上方法制得以酸性凍結(jié)和解凍法制得的透明質(zhì)酸凝膠懸浮液。
利用酸混合法制得透明質(zhì)酸凝膠的制造例。
取出透明質(zhì)酸鈉(電氣化學(xué)工業(yè)會(huì)社制造，分子量為2×106道爾頓)的粉末5g量，添加冰冷而成的15ml的1N硝酸(和光純藥)到該粉末中。在燒杯內(nèi)將兩者進(jìn)行充分混合后，以放入乙烯基塑料袋的狀態(tài)放入4℃的冷凍箱內(nèi)，放置65小時(shí)。其結(jié)果是制得海綿狀的透明質(zhì)酸凝膠。將該凝膠多次浸漬在100mmol/l的磷酸緩沖液(pH為6.8)，充分中和凝膠。然后用攪拌器將所得的海綿狀的透明質(zhì)酸凝膠打碎，制得凝膠破碎懸浮液。在3,000rpm、5分鐘的條件下對(duì)其進(jìn)行離心分離，分離凝膠成分，對(duì)該凝膠成分添加新的緩沖液，并重復(fù)5次這樣的操作，將凝膠溶劑置換為5mmol/l磷酸緩沖生理食鹽水。利用以上方法，以酸混合法制得透明質(zhì)酸凝膠懸浮液。
用下面的加速試驗(yàn)對(duì)由以上方法制得的透明質(zhì)酸凝膠的pH穩(wěn)定性進(jìn)行評(píng)價(jià)。在評(píng)價(jià)中，采用了凝膠懸浮液，該凝膠懸浮液是將懸浮于pH4、pH5、pH6、pH7的乙酸緩沖生理食鹽水和磷酸緩沖生理食鹽水的透明質(zhì)酸濃度調(diào)整為1質(zhì)量％。
將10ml的凝膠懸浮液放入15ml的塑料試管內(nèi)，將其放置在60℃的溫浴上，每隔2小時(shí)后進(jìn)行取樣。對(duì)于取樣液，首先以12,000rpm、5分鐘的離心條件除去凝膠成分，其后以0.22μ的過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾，完全將凝膠除去。對(duì)此進(jìn)行GPC分析和比色分析，求出透明質(zhì)酸濃度。該上清液中的透明質(zhì)酸濃度是溶解有凝膠的濃度，所以從與初始濃度的比來(lái)求出殘留的凝膠的比例和溶解有凝膠的比例(兩者的和相當(dāng)于100％)。通過(guò)以上方法調(diào)查各取樣時(shí)間的殘留的凝膠的比例。其結(jié)果顯示在表1中。
表1

從表1可知溶解后25小時(shí)，調(diào)整到pH為7的凝膠懸浮液的凝膠殘留率為75％，調(diào)整到pH為6的凝膠懸浮液的殘留率為84％，而將pH調(diào)整到4的凝膠懸浮液的殘留率為88％。另外，pH為5時(shí)，有95％的凝膠殘留，pH為5的附近的低pH一側(cè)，凝膠具有保存穩(wěn)定性。
實(shí)施例2
將透明質(zhì)酸鈉(電氣化學(xué)工業(yè)會(huì)社制造分子量2×106道爾頓)溶解在蒸餾水中，調(diào)制成1質(zhì)量％的透明質(zhì)酸的水溶液。用1mol/l鹽酸(和光純藥)將該水溶液的pH調(diào)整到pH為1.5。將100ml的透明質(zhì)酸的酸性水溶液放入200ml的玻璃瓶中，并將其放入設(shè)定為-20℃的冷凍箱中。放置14天后，在25℃下解凍。其結(jié)果是制得海綿狀的透明質(zhì)酸凝膠。
將該凝膠多次浸漬在100mmol/l的磷酸緩沖液(pH為6.8)，充分中和凝膠。然后用攪拌器將所得的海綿狀的透明質(zhì)酸凝膠打碎，制得凝膠破碎懸浮液在3,000rpm、5分鐘的條件下對(duì)其進(jìn)行離心分離，分離凝膠成分，給凝膠成分提供1升的蒸餾水，攪拌下洗凈。重復(fù)5次進(jìn)行凝膠成分的分離和洗凈，完全除去中和劑的磷酸緩沖成分。用生理的食鹽水將透明質(zhì)酸濃度調(diào)整到5質(zhì)量％，添加鹽酸將其的pH調(diào)整到5.0，形成(A)液。調(diào)制0.01N的氫氧化鈉水溶液，作為(B)液。
在10ml的pH調(diào)整為上述的5.0的(A)液中添加1.6ml的上述(B)液，充分混合。混合后的水溶液的pH為7.4。
實(shí)施例3將透明質(zhì)酸鈉(電氣化學(xué)工業(yè)會(huì)社制造分子量2×106道爾頓)溶解在以20mM的磷酸緩沖液將pH緩沖到8.0的生理的食鹽水中，作為(B)液。在2.0ml的實(shí)施例2制得的(A)液中添加8.0ml的上述調(diào)制好的(B)液，并進(jìn)行充分混合?；旌虾蟮乃芤旱膒H為7.4。
實(shí)施例4將透明質(zhì)酸鈉(電氣化學(xué)工業(yè)會(huì)社制造分子量2×106道爾頓)溶解在以20mM的硼酸緩沖液將pH緩沖到8.0的生理的食鹽水中，作為(B)液。在2.0ml的實(shí)施例2制得的(A)液中添加8.0ml的上述調(diào)制好的(B)液，并進(jìn)行充分混合。混合后的水溶液的pH為7.4。
實(shí)施例5通過(guò)凍結(jié)和解凍法制造含透明質(zhì)酸凝膠的分離型醫(yī)療材料的制造例。
將透明質(zhì)酸鈉(電氣化學(xué)工業(yè)會(huì)社制造分子量2×106道爾頓)溶解在蒸餾水中，調(diào)制成1質(zhì)量％的透明質(zhì)酸的水溶液。用1mol/l鹽酸(和光純藥)將該水溶液的pH調(diào)整到pH為1.5。將15ml的透明質(zhì)酸的酸性水溶液放入30ml的玻璃瓶中，并將其放入設(shè)定為-20℃的冷凍箱中。
放置65小時(shí)后，在25℃下解凍。制得海綿狀的透明質(zhì)酸凝膠。將該凝膠多次浸漬在100mmol/l的磷酸緩沖液(pH為6.8)，充分中和凝膠。
然后，用杯狀混合機(jī)(12,000rmp，2分鐘)將制得的海綿狀的透明質(zhì)酸凝膠破碎，制得凝膠破碎懸浮液。在3,000rpm、5分鐘的條件下對(duì)其進(jìn)行離心分離，分離凝膠成分。對(duì)該凝膠成分添加新的緩沖液，重復(fù)5次這樣的操作，將凝膠溶劑置換為pH為5的5mmol/l乙酸緩沖生理食鹽水。
將懸浮于乙酸緩沖生理食鹽水形成2質(zhì)量％的濃度的透明質(zhì)酸凝膠懸浮液(pH為5.0)的(A)液，以及溶解于磷酸緩沖生理食鹽水(pH7.5)形成1質(zhì)量％的濃度的透明質(zhì)酸(電氣化學(xué)工業(yè)會(huì)社制造)溶液的(B)液，以(A)∶(B)＝2∶8分別填充到トツプ公司的預(yù)充式注射器(G類)。即，如圖1所示那樣，將0.6ml的(A)液的透明質(zhì)酸凝膠懸浮液填充在注射口側(cè)的隔離區(qū)(A)內(nèi)，將2.4ml的(B)液的透明質(zhì)酸溶液填充在柱塞桿一側(cè)的隔離區(qū)(B)內(nèi)。
實(shí)施例6利用酸混合法制得含透明質(zhì)酸凝膠的分離型醫(yī)療材料的制造例。
取出透明質(zhì)酸鈉(電氣化學(xué)工業(yè)會(huì)社制造，分子量為2×106道爾頓)的粉末5g量，添加預(yù)先經(jīng)過(guò)冰冷的15ml的1mol/l硝酸(和光純藥)到該粉末中。在燒杯內(nèi)將兩者進(jìn)行充分混合后，以放入乙烯基塑料袋的狀態(tài)放入4℃的冷凍箱內(nèi)，放置65小時(shí)。其結(jié)果是制得海綿狀的透明質(zhì)酸凝膠。將該凝膠多次浸漬在100mmol/l的磷酸緩沖液(pH為6.8)，充分中和凝膠。
然后用杯狀混合機(jī)(12,000rpm、2分鐘)將制得的海綿狀的透明質(zhì)酸凝膠破碎，制得凝膠破碎懸浮液。在3,000rpm、5分鐘的條件下對(duì)其進(jìn)行離心分離，分離凝膠成分。對(duì)該凝膠成分添加新的緩沖液，重復(fù)5次這樣的操作，將凝膠溶劑置換為pH為5的5mmol/l乙酸緩沖生理食鹽水。
將懸浮于乙酸緩沖生理食鹽水形成2質(zhì)量％的濃度的透明質(zhì)酸凝膠懸浮液(pH為5.0)的(A)液，以及溶解于磷酸緩沖生理食鹽水(pH7.5)形成1質(zhì)量％的濃度的透明質(zhì)酸(電氣化學(xué)工業(yè)會(huì)社制造)溶液的(B)液，以(A)∶(B)＝2∶8分別填充到トツプ公司的預(yù)充式注射器(G類)。即，如圖1所示那樣，將0.6ml的(A)液的透明質(zhì)酸凝膠懸浮液填充在注射口側(cè)的隔離區(qū)(A)內(nèi)，將2.4ml的(B)液的透明質(zhì)酸溶液填充在柱塞桿一側(cè)的隔離區(qū)(B)內(nèi)。
比較例1非分離型的透明質(zhì)酸和透明質(zhì)酸凝膠的混合醫(yī)療材料的調(diào)制將懸浮于乙酸緩沖生理食鹽水形成2質(zhì)量％的濃度的透明質(zhì)酸凝膠懸浮液(pH為5.0)的(A)液，以及溶解于磷酸緩沖生理食鹽水(pH7.5)形成1質(zhì)量％的濃度的透明質(zhì)酸(電氣化學(xué)工業(yè)會(huì)社制造)溶液的(B)液，以(A)∶(B)＝2∶8進(jìn)行混合后，注入テルモ公司的注射器(SS-02S2138)中。
實(shí)施例7透明質(zhì)酸制劑中的透明質(zhì)酸凝膠穩(wěn)定性將實(shí)施例2和比較例1調(diào)制好的注射器保存在60℃的恒溫槽內(nèi)。在各個(gè)時(shí)間段后取出，進(jìn)行采樣。首先以12,000rpm、5分鐘的離心條件除去取樣液的凝膠成分，其后以0.22μ的過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾，完全將凝膠除去。對(duì)此進(jìn)行GPC分析和比色分析，求出透明質(zhì)酸濃度。該上清液中的透明質(zhì)酸濃度，因溶解了凝膠的濃度部分增加，所以從與初始濃度的比來(lái)求出殘留的凝膠的比例和溶解有凝膠的比例(兩者的和相當(dāng)于100％)。通過(guò)以上方法調(diào)查各取樣時(shí)間的殘留的凝膠的比例。其結(jié)果顯示在表2中。
表2

從表2可知在60℃下保存，25小時(shí)后的、均勻混合的比較例1中，凝膠只殘留開(kāi)始時(shí)的64％，對(duì)此，實(shí)施例1的分離狀態(tài)的凝膠殘留率是開(kāi)始時(shí)的94％，特別高。為此，分離保存可提高凝膠的穩(wěn)定性。
實(shí)施例8透明質(zhì)酸制劑在活體內(nèi)的貯留性為了評(píng)價(jià)作為膝關(guān)節(jié)制劑的有效性，對(duì)實(shí)施例5制得的透明質(zhì)酸凝膠和透明質(zhì)酸溶液的分離型醫(yī)療材料在兔子膝關(guān)節(jié)內(nèi)的貯留性進(jìn)行了試驗(yàn)。試驗(yàn)以如下順序進(jìn)行在3個(gè)月大的兔子(KbsNZW雄)的左膝注射0.25ml的透明質(zhì)酸凝膠和透明質(zhì)酸溶液的混合液(透明質(zhì)酸凝膠懸浮液∶透明質(zhì)酸溶液＝2∶8)。給藥1天和3天后，向耳靜脈內(nèi)注射戊巴比妥鈉對(duì)該動(dòng)物進(jìn)行麻醉后，放血使其致死。其后切斷注射了透明質(zhì)酸的一條腿，從背面切開(kāi)膝關(guān)節(jié)，用生理食鹽水對(duì)腔內(nèi)進(jìn)行清洗，回收膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)的貯留液。對(duì)沒(méi)有注射透明質(zhì)酸的那一條腿也同樣回收。將所得的關(guān)節(jié)腔內(nèi)的貯留液的pH調(diào)整到堿性一側(cè)，完全分解殘留的透明質(zhì)酸凝膠后，用GPC分析對(duì)全部的透明質(zhì)酸的量進(jìn)行定量。以從沒(méi)有注射透明質(zhì)酸的那一個(gè)膝蓋回收的貯留液的透明質(zhì)酸量進(jìn)行空白補(bǔ)正，得到給藥1天和3天后的透明質(zhì)酸的回收率。
其結(jié)果是給藥后經(jīng)過(guò)1天的透明質(zhì)酸的回收率為80％，給藥后經(jīng)過(guò)3天后的透明質(zhì)酸的回收率為50％。
因此可知給藥后經(jīng)過(guò)1天和3天后，分別注射入關(guān)節(jié)腔內(nèi)的透明質(zhì)酸有殘留，顯示了關(guān)節(jié)制劑的有用性。
工業(yè)上利用的可能性通過(guò)本發(fā)明，在將弱酸性的透明質(zhì)酸的酯衍生物的分散水溶液及其中和劑溶液、還包括中和劑溶液中溶解有透明質(zhì)酸的情況下，以分離狀態(tài)進(jìn)行保存，形成兩者具有不同pH的條件，就能形成保存穩(wěn)定性好的狀態(tài)。
可提供預(yù)先以分離的狀態(tài)進(jìn)行保存，在治療時(shí)進(jìn)行混合，最終可在生理的中性pH條件下進(jìn)行給藥的制劑。
通過(guò)本發(fā)明可保證透明質(zhì)酸的酯衍生物的保存穩(wěn)定性并同時(shí)避免關(guān)節(jié)治療劑注射時(shí)的刺激性和疼痛，提供透明質(zhì)酸的酯衍生物作為關(guān)節(jié)治療劑。
權(quán)利要求
1.分離型醫(yī)療材料，其特征在于，它由緩沖至pH為4.5-6.5的含有透明質(zhì)酸酯衍生物的水溶液的(A)液，以及具有將與該(A)液混合時(shí)的pH控制在6.8-7.8范圍內(nèi)的緩沖能的水溶液的(B)液構(gòu)成，(A)液和(B)液在給藥時(shí)混合投入，但給藥前以分離的狀態(tài)進(jìn)行保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分離型醫(yī)療材料，其特征在于，(A)液的透明質(zhì)酸酯衍生物是自交聯(lián)的透明質(zhì)酸。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分離型醫(yī)療材料，其特征在于，(A)液的含有透明質(zhì)酸酯衍生物的水溶液的透明質(zhì)酸酯衍生物的濃度在1-20質(zhì)量％的范圍內(nèi)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的分離型醫(yī)療材料，其特征在于，具有將與(A)液混合時(shí)的pH控制在6.8-7.8的范圍內(nèi)的緩沖能的水溶液的(B)液是溶解了透明質(zhì)酸的水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的分離型醫(yī)療材料，其特征在于，還含有醫(yī)藥品或可醫(yī)藥性相容的潤(rùn)滑劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的分離型醫(yī)療材料，其特征在于，在緩沖至pH為4.5-6.5的含有透明質(zhì)酸酯衍生物的水溶液的(A)液中溶解或分散有醫(yī)藥品或可醫(yī)藥性相容的潤(rùn)滑劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的分離型醫(yī)療材料，其特征在于，在(A)液的透明質(zhì)酸酯衍生物中溶解或分散有醫(yī)藥品或可醫(yī)藥性相容的潤(rùn)滑劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求5-7中任一項(xiàng)所述的分離型醫(yī)療材料，其特征在于，在具有將與(A)液混合時(shí)的pH控制在6.8-7.8范圍內(nèi)的緩沖能的水溶液的(B)液中，溶解或分散有醫(yī)藥品或可醫(yī)藥性相容的潤(rùn)滑劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求5-8中任一項(xiàng)所述的分離型醫(yī)療材料，其特征在于，可醫(yī)藥性相容的潤(rùn)滑劑是磷脂質(zhì)。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的分離型醫(yī)療材料，其特征在于，它是在注射器以分離的狀態(tài)填充(A)液和(B)液的關(guān)節(jié)注入型醫(yī)療材料。
11.關(guān)節(jié)疾病用的醫(yī)療材料的給藥方法，其特征在于，在將要給藥前，將構(gòu)成權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的分離型醫(yī)療材料的(A)液和(B)液混合成混合液，并將該混合液注入患者的關(guān)節(jié)，實(shí)施給藥。
全文摘要
本發(fā)明提供一種含有透明質(zhì)酸酯衍生物的分離型醫(yī)療材料，它具有好的透明質(zhì)酸酯衍生物的保存穩(wěn)定性，能避免注射關(guān)節(jié)治療劑時(shí)的刺激性和疼痛。它是以(A)液和(B)液分離的狀態(tài)進(jìn)行保存的分離型醫(yī)療材料，上述的(A)液是緩沖至pH為4.5－6.5的含有透明質(zhì)酸酯衍生物的水溶液；上述的(B)液是具有將與該(A)液混合時(shí)的pH控制在6.8－7.8范圍內(nèi)的緩沖能的水溶液。
文檔編號(hào)A61K31/728GK1649604SQ0282946
公開(kāi)日2005年8月3日 申請(qǐng)日期2002年8月16日 優(yōu)先權(quán)日2002年8月16日
發(fā)明者宮田喜明, 姬田康一, 橋本正道, 梅田俊彥, 三好照三 申請(qǐng)人:電氣化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社