專利名稱：石斑魚垂體富含的一個(gè)生殖調(diào)控因子的基因序列及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及石斑魚垂體富含的一個(gè)生殖調(diào)控因子的基因序列，更具體涉及一種從石斑魚垂體的SMART cDNA文庫中篩選出的一個(gè)高度富含的新基因生殖調(diào)控因子1(reproduction regulator 1，rr1)的序列、氨基酸序列和時(shí)空表達(dá)圖譜，本發(fā)明還涉及一種用途。
背景技術(shù)：
石斑魚(E.coioides)為海洋珊瑚礁魚類，屬鮨科(Serranidae)，石斑魚屬(Epinephelus)，是一種名貴的海水魚類，銷售市場穩(wěn)定、價(jià)格昂貴，同時(shí)石斑魚也是人工繁殖與育苗技術(shù)難度最大的海產(chǎn)魚類之一，至今養(yǎng)殖種苗的供應(yīng)仍依賴捕撈野生天然苗。近年來，日本、東南亞各國、我國臺灣、華南沿海都進(jìn)行了大規(guī)模的人工養(yǎng)殖。隨著海洋魚類人工規(guī)?；B(yǎng)殖不斷發(fā)展，天然苗種已不能滿足養(yǎng)殖生產(chǎn)的需要，人工育苗成為其持續(xù)發(fā)展的關(guān)鍵技術(shù)。盡管已進(jìn)行了一些初步的繁殖生物學(xué)研究，但對人工育苗的理論基礎(chǔ)---生殖調(diào)控的研究才剛剛起步、基礎(chǔ)十分薄弱。據(jù)張其永等2000年統(tǒng)計(jì)，我國已成功繁殖培育出幼苗魚苗的石斑魚種類有赤點(diǎn)石斑魚、鮭點(diǎn)石斑魚、點(diǎn)帶石斑魚、石斑魚等。但實(shí)際上它們離能夠較穩(wěn)定地進(jìn)行種苗批量生產(chǎn)的目標(biāo)尚有相當(dāng)?shù)牟罹唷?br> 石斑魚人工繁殖與育苗的難度主要來自以下幾個(gè)方面(1)石斑魚雌雄同體，雌性先熟，然后性轉(zhuǎn)化；(2)受精卵質(zhì)量差，孵化率低；(3)仔魚個(gè)體纖細(xì)，對開口餌料的要求嚴(yán)格；以及稚、幼魚的自相殘殺習(xí)性、病害等問題。尤其是石斑魚個(gè)體發(fā)育中普遍存在“先雌后雄”的性轉(zhuǎn)變過程，雄親魚均高齡化(一般6齡以上)，長時(shí)間的性逆轉(zhuǎn)過程，不僅消耗大量餌料，而且等生長到雄性精巢可以釋精時(shí)，種群數(shù)量已十分稀少而難以捕獲。即使捕獲到雄性親魚，因雌雄親魚性成熟不同步配對，導(dǎo)致受精率較低。目前育苗的方法是用外源的性類固醇激素(17a—甲基睪酮)給食、注射或埋植進(jìn)行強(qiáng)制逆轉(zhuǎn)培育雄性親魚。但在完全不了解其性別逆轉(zhuǎn)的分子機(jī)制的前提下，盲目地用過多的外源類固醇激素必然會帶來很多弊端。譬如，不僅費(fèi)工費(fèi)時(shí)，而且轉(zhuǎn)化效果差，性轉(zhuǎn)變后，雄魚精子活力不強(qiáng)，而停藥后，會產(chǎn)生性別復(fù)原問題。埋植激素后會導(dǎo)致手術(shù)魚不攝食或攝食減弱，影響魚正常發(fā)育。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種石斑魚垂體富含的一個(gè)生殖調(diào)控因子的基因序列、氨基酸序列和時(shí)空表達(dá)圖譜，篩選方法簡便，該基因?yàn)榻鉀Q石斑魚繁殖力低和難以獲得雄性親魚這兩個(gè)石斑魚規(guī)?；B(yǎng)殖的問題提供一條技術(shù)途徑。
本發(fā)明還涉及一種石斑魚垂體富含的基因序列在石斑魚的生殖調(diào)控中的應(yīng)用。
本發(fā)明還涉及一種石斑魚垂體富含的基因序列在石斑魚的性腺分化中的應(yīng)用。
本發(fā)明還涉及一種石斑魚垂體富含的基因序列在石斑魚的性別逆轉(zhuǎn)中的應(yīng)用。
本發(fā)明還涉及一種石斑魚垂體富含的基因序列在飼料制備人工餌料中的應(yīng)用。
本發(fā)明還涉及一種石斑魚垂體富含的基因序列在石斑魚的繁殖和人工控制性別中的應(yīng)用。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)措施本發(fā)明所述的基因rr1是從石斑魚垂體的SMART cDNA質(zhì)粒文庫中篩選到的一個(gè)高度富含的新基因，它在垂體中表達(dá)量非常高，在隨機(jī)篩選并測序的90個(gè)克隆中，共檢測到該基因的5個(gè)克隆。其特征是rr1基因的cDNA序列和rr1基因編碼蛋白的氨基酸序列(如下)。該基因的cDNA長560bp，有一個(gè)192bp(31-222)的開放閱讀框，編碼63個(gè)氨基酸，5’非編碼區(qū)長30bp，起始于一個(gè)包含在脊椎動(dòng)物起始密碼子ANNATG基元；3’非編碼區(qū)長338bp，有多聚腺苷酸加尾信號(AAUAAA)和多聚腺苷酸尾巴。在GenBank中進(jìn)行同源搜索，發(fā)現(xiàn)與其它基因無任何同源性，為一新基因。rr1基因的cDNA序列為GACTGTCTGAAAGCTTATTGGTACCAAAACATGAAGGGACTGAGCTTGGTTCTCCTCGTGCTTCTCCTGATGCTCGCCGTCGGGGAGGGCAATGATCCAGAAATGCAGTATTGGACATGTGGGTATAGAGGACTCTGCAGACGGTTCTGCCATGCCCAGGAGTACATCGTTGGTCATCACGGTTGCCCTCGGAGATACAGATGCTGTGCTGTGCGGTCTTAGCACCTGCATGCACCAGCATGAGGACTGACATCTCCAGGTAACTGACGACGGCGCTCTTCCGGATAACCCATTTCAACAACCTTACTCTCAATCGACACCTCTTGGACTTCTAACACGCTGTGGGATGTGACAATGAGTGCTTTGGAAGTGGACTTCAACTAGTTAGACCTGACTTATTCACAGCTAGATGTGCAGCAGATGTGTAACTGTTGCTTGATCCTGTATCTCACCTTTAATAACATTTATAATCACTCCTTTGTGAACAGTCAGTTGTACTCTCTGAAATGCAGTGTTGCCAATAAATGCACGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAArr1基因編碼蛋白的氨基酸序列為MKGLSLVLLVLLLMLAVGEGNDPEMQYWTCGYRGLCRRFCHAQEYIVGHHGCPRRYRCCAVRS通過Signal P程序?qū)ζ涞鞍状嬖谛盘栯牡目赡苄赃M(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)其N-端的21個(gè)氨基酸肽段極可能為信號肽，其信號肽酶的可能切割位點(diǎn)位于第21位和22位氨基酸之間，提示該蛋白為分泌型蛋白(圖1)；采用DAS軟件分析其跨膜結(jié)構(gòu)，顯示該蛋白在對應(yīng)信號肽位置存在跨膜區(qū)(圖2)。
運(yùn)用RT-PCR技術(shù)考察了其在石斑魚肝臟、腎臟、脾臟、胰臟、心、肌、垂體、下丘腦、端腦、小腦、中腦、延腦的mRNA水平，考察了其在處于卵子發(fā)生期、卵母細(xì)胞成熟期變性期不同階段石斑魚個(gè)體的腦垂體、下丘腦及成熟卵巢和處于變性期的性腺的表達(dá)圖譜，考察了其在未受精卵、桑椹期、高囊胚期、原腸中期、胚體期、視泡期、心跳期、出膜前期、出膜后、魚苗1天的表達(dá)圖譜，結(jié)果表明該基因在垂體中大量轉(zhuǎn)錄，在下丘腦中有微量轉(zhuǎn)錄，在其他10種組織中沒有檢測到其mRNA的存在(圖3)；在3種不同性腺發(fā)育階段的垂體都具有相同的高豐度，3種下丘腦都具有相同的低豐度，在成熟卵巢中未檢測到其mRNA的存在，但在處于變性期的性腺中具有高豐度的轉(zhuǎn)錄(圖4)。硬骨魚類與其它脊椎動(dòng)物相似，“垂體-下丘腦-性腺”是調(diào)節(jié)生殖活動(dòng)的重要內(nèi)分泌系統(tǒng)。該基因的表達(dá)譜完全符合魚類生殖的內(nèi)分泌調(diào)節(jié)體系中的“垂體-下丘腦-性腺組成的三級主干結(jié)構(gòu)；同時(shí)其在成熟卵巢中無轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，而在處于變性期的性腺中具有高豐度的轉(zhuǎn)錄，這表明該基因在調(diào)控石斑魚的生殖和性腺分化中具有重要功能。
鑒于rr1基因是全新基因，目前人類對此基因的認(rèn)識和了解僅限于本發(fā)明人所作的科學(xué)工作研究。由于該基因?yàn)榫哂锌缒^(qū)的分泌型多肽，在垂體中大量轉(zhuǎn)錄，在下丘腦中有微量轉(zhuǎn)錄，而且在成熟卵巢中未檢測到其mRNA的存在，但在處于變性期的性腺中具有高豐度的轉(zhuǎn)錄。因此它可能在石斑魚的生殖調(diào)控和性腺分化中有著重要功能。通過制備該基因的原核表達(dá)蛋白和真核酵母表達(dá)蛋白，用于研究該基因在石斑魚的生殖調(diào)控、性腺分化和性別逆轉(zhuǎn)中的作用。通過制備該基因的真核酵母表達(dá)蛋白，該蛋白是其內(nèi)源的分泌型多肽，通過制備酵母表達(dá)的蛋白，可作為飼料添加劑制備人工餌料，以增強(qiáng)石斑魚的繁殖力和人工控制性別。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)通過制備該基因的蛋白，用于研究該基因在石斑魚的生殖調(diào)控、性腺分化和性別逆轉(zhuǎn)中的作用，而該蛋白是其內(nèi)源的分泌型多肽，通過制備酵母表達(dá)的蛋白，可制備人工餌料，以增強(qiáng)石斑魚的繁殖力和人工控制性別。


圖1為Signal P程序分析顯示出的基因rr1的信號肽位置圖1是通過Signal P程序?qū)R1蛋白存在信號肽的可能性進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)其N-端的21個(gè)氨基酸肽段極可能為信號肽，其信號肽酶的可能切割位點(diǎn)位于第21位和22位氨基酸之間，提示該蛋白為分泌型蛋白。
圖2為DAS推測基因rr1的跨膜區(qū)圖2是采用DAS軟件分析其跨膜結(jié)構(gòu)，顯示該蛋白在對應(yīng)信號肽位置即第1-21位氨基酸處存在跨膜區(qū)圖3為RT-PCR檢測基因rr1在石斑魚組織中的表達(dá)圖3表明該基因在垂體中大量轉(zhuǎn)錄，在下丘腦中有微量轉(zhuǎn)錄，在其他10種組織中沒有檢測到其mRNA的存在。
圖4為RT-PCR檢測基因rr1在處于卵子發(fā)生期(1)、卵母細(xì)胞成熟期(2)、變性期(3)不同階段石斑魚個(gè)體的腦垂體、下丘腦及成熟卵巢和處于變性期的性腺中的表達(dá)圖4表明在3種不同性腺發(fā)育階段的垂體都具有相同的高豐度，3種下丘腦都具有相同的低豐度，在成熟卵巢中未檢測到其mRNA的存在，但在處于變性期的性腺中具有高豐度的轉(zhuǎn)錄。
具體實(shí)施例方式
1、RNA的提取和SMART cDNA質(zhì)粒文庫的構(gòu)建垂體總RNA用SV Total RNA Isolation System(Promega)提取，步驟具體如下取約500克石斑魚1尾，麻醉放血，開顱取出垂體，加入175μl的抽提緩沖溶液，充分勻漿后，加入350μl RNA稀釋緩沖液，混勻后70℃封阻3分鐘，14 000×g離心10min。轉(zhuǎn)移上清，加入200μl 95％乙醇，吹打混勻后轉(zhuǎn)移至離心柱，14 000×g離心1min，加入600μl RNA洗滌液，14 000×g離心1min。加入50μlDNA酶I 20-25℃消化15min后加200μl DNA酶終止溶液，14 000×g離心1min。加入600μl SV RNA洗滌液，14 000×g離心1min后，再次加入250μl RNA洗滌液，高速離心2min。用250μl無RNA酶水洗脫總RNA兩次。取0.5-5μl電泳檢測總RNA濃度和質(zhì)量。其余總RNA于-70℃凍結(jié)實(shí)，真空凍干機(jī)超低溫凍干濃縮，溶解于20-30μl水中，取0.5μl電泳檢測mRNA濃度和質(zhì)量。
SMART cDNA的合成用SMART cDNA library construction Kit(Clontech)試劑盒，具體操作如下合成所用的3個(gè)引物序列為(1)CDS引物(10μmol/L)5′-AAGCA GTGGTAACAACGCAGAGTACT(30)N-1N-3′；(2)Smart II寡核苷酸(10μmol/L)5′-AAG CAGTGGTAACAACGCAGAGTACGCGGG-3′；(3)PCR引物(10μmol/L)5′-AAGCAGTGGTAACAACGCAGAGT-3′。
取垂體總RNA50ng，按文庫構(gòu)建方法合成第一鏈cDNA加入CDS引物和SmartII寡核苷酸各1μl，72℃保溫2min后，冰上速冷2min；然后在終體積為10μL的反應(yīng)體系中，加入5×第一鏈反應(yīng)緩沖液(250mmol/L Tris-HCl，pH8.3；375mmol/L KCl；30mmol/L MgCl2)2μl、DTT(20mmol/L)1μl、dNTP(10mmol/L)1μl和PowerScript逆轉(zhuǎn)錄酶1μl，42℃保溫1h合成第一鏈cDNA。取2μl第一鏈cDNA加入dNTP 2μl、PCR引物4μl、和2μl 50×Advantage 2 cDNA Polymerase Mix，于100μl反應(yīng)體系中進(jìn)行如下PCR循環(huán)95℃預(yù)變性1min后，以95℃ 5s、65℃ 5s、68℃ 6min反應(yīng)13個(gè)循環(huán)，72℃延伸10min。反應(yīng)結(jié)束后，取5μL電泳檢測。此PCR產(chǎn)物用于構(gòu)建質(zhì)粒文庫。合成的SMART cDNA連接入pEGM-T載體中(Promega)，并轉(zhuǎn)化入DH5α感受態(tài)細(xì)胞中。
2、質(zhì)粒文庫的隨機(jī)篩選及測序鋪平板(內(nèi)含100μg/mL Amp以及5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷和異丙基硫代-β-D-半乳糖苷)，37℃培養(yǎng)過夜。挑取白色菌斑于預(yù)先分裝有100μLAmp-LB的Eppendorf管中，37℃培養(yǎng)2h以上。取1μL菌液作模板，以M13+和M13-為引物(M13+CAGGAAACAGCTATGAC；M13-GTAAACGACGGCCAGT)，PCR鑒定插入片段大小。將插入片段大于500bp的克隆進(jìn)行測序(上海，生工)。在隨機(jī)篩選并測序的90個(gè)克隆中，共檢測到該基因的5個(gè)克隆(編號分別為3-27、3-46、3-69、3-84和3-103)。該基因cDNA長560bp，有一個(gè)192bp(31-222)的開放閱讀框，編碼63個(gè)氨基酸。5’非編碼區(qū)長30bp，起始于一個(gè)包含在脊椎動(dòng)物起始密碼子ANNATG基元；3’非編碼區(qū)長338bp，有多聚腺苷酸加尾信號(AAUAAA)和多聚腺苷酸尾巴。在GenBank中進(jìn)行同源搜索，發(fā)現(xiàn)與其它基因無任何同源性，為一新基因。
3、組織和胚胎總RNA的提取和RT-PCR反應(yīng)提取了石斑魚的各種組織(包括肝臟、腎臟、脾臟、胰臟、心、肌、垂體、下丘腦、端腦、小腦、中腦、延腦)的RNA，提取了處于卵子發(fā)生期、卵母細(xì)胞成熟期變性期不同階段石斑魚個(gè)體的腦垂體、下丘腦及成熟卵巢和處于變性期的性腺的RNA，以及提取了石斑魚胚胎發(fā)育各個(gè)時(shí)期(包括未受精卵、桑椹期、高囊胚期、原腸中期、胚體期、視泡期、心跳期、出膜前期、出膜后、魚苗1天)的總RNA?？俁NA的提取用SV total RNA isolation system(Promega)提取。具體步驟同上。各取0.2μg的總RNA，用M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶(Gibco BRL)和寡聚(dT)8-12反轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA。取第一鏈cDNA稀釋10倍后1μl作模板用該基因的特異引物(3-46-FGA ATT CAT ATG AAG GGA CTG AGC TTG GTT C和3-46-RGCTC GAG CTA AGA CCG CAC AGC ACA GC)進(jìn)行PCR。反應(yīng)體系的總體積為20μl，內(nèi)含1μl模板DNA，0.2μM引物，0.5單位Taq酶，0.1μM dNTP和1×Taq酶反應(yīng)緩沖液。PCR反應(yīng)在Perkin-Elmer DNA GeneAmp PCR System9600擴(kuò)增儀上進(jìn)行，反應(yīng)程序?yàn)樵?4℃預(yù)變性4分鐘后，進(jìn)行28個(gè)擴(kuò)增循環(huán)，每個(gè)循環(huán)包括94℃變性40秒，62℃復(fù)性50秒，72℃延伸50秒。最后一次循環(huán)結(jié)束后72℃延伸7分鐘。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳分離。用鯽魚的α-tubulin基因(上游引物5’-GTGCACTGGTCTTCA GGGGTT-3’，下游引物5’-GGGAAGTGGATGCGTGGGTAT-3’)作為對照。
α-tubulin引物做PCR，確證各個(gè)組織和各個(gè)胚胎發(fā)育時(shí)期逆轉(zhuǎn)錄的效率都符合要求而且cDNA的量都相差不多。而該基因的表達(dá)圖譜顯示該基因在垂體中大量轉(zhuǎn)錄，在下丘腦中有微量轉(zhuǎn)錄，在其他10種組織中沒有檢測到其mRNA的存在(圖4)；在3種不同性腺發(fā)育階段的垂體都具有相同的高豐度，3種下丘腦都具有相同的低豐度，在成熟卵巢中未檢測到其mRNA的存在，但在處于變性期的性腺中具有高豐度的轉(zhuǎn)錄(圖5)。在胚胎發(fā)育過程中尚未表達(dá)該基因。
4、rr1基因融合蛋白的制備以基因開放閱讀框的核苷酸序列與pET-15b載體制備成表達(dá)質(zhì)粒，挑單克隆培養(yǎng)至對數(shù)期，加入終濃度為1mmoL的IPTG在37℃誘導(dǎo)表達(dá)3-6h。表達(dá)的蛋白N端融合了長20個(gè)氨基酸的組氨酸t(yī)ag，可用金屬離子親和層析純化。
5、rr1基因編碼蛋白特異性多克隆抗體將3mL純化蛋白(約100-300μg)與3mL弗氏完全佐劑充分混勻乳化，在家兔的背部皮下多點(diǎn)注射，每點(diǎn)注射約0.2mL。第一次注射2-3周后加強(qiáng)免疫3次，各次劑量為第一次注射的四分之一，每次間隔10天，后3次以弗氏不完全佐劑乳化樣品。在第4次注射后10天自心臟抽取血液。將兔血于37℃放置1h后再在4℃放置過夜，4,000×g離心10min，吸取上層的多抗血清，分裝后于-80℃凍存。
6 rr1基因在酵母中的表達(dá)以基因開放閱讀框的核苷酸序列與pGAPZA和pGAPZαB表達(dá)載體制備成表達(dá)質(zhì)粒，構(gòu)建的表達(dá)載體轉(zhuǎn)入克隆菌株DH5α中，將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶BspHI消化，濃縮線性化的DNA片段后，電轉(zhuǎn)化畢赤酵母，在Zeocin抗性平板上篩選重組子，3mlYPD(100μg/ml)Zeocin)培養(yǎng)，48h分別取菌體和上清于12.5％的聚丙烯按凝膠電泳。篩選出有特異蛋白表達(dá)的克隆。
序列表rr1基因的cDNA序列為GACTGTCTGAAAGCTTATTGGTACCAAAACATGAAGGGACTGAGCTTGGTTCTCCTCGTGCTTCTCCTGATGCTCGCCGTCGGGGAGGGCAATGATCCAGAAATGCAGTATTGGACATGTGGGTATAGAGGACTCTGCAGACGGTTCTGCCATGCCCAGGAGTACATCGTTGGTCATCACGGTTGCCCTCGGAGATACAGATGCTGTGCTGTGCGGTCTTAGCACCTGCATGCACCAGCATGAGGACTGACATCTCCAGGTAACTGACGACGGCGCTCTTCCGGATAACCCATTTCAACAACCTTACTCTCAATCGACACCTCTTGGACTTCTAACACGCTGTGGGATGTGACAATGAGTGCTTTGGAAGTGGACTTCAACTAGTTAGACCTGACTTATTCACAGCTAGATGTGCAGCAGATGTGTAACTGTTGCTTGATCCTGTATCTCACCTTTAATAACATTTATAATCACTCCTTTGTGAACAGTCAGTTGTACTCTCTGAAATGCAGTGTTGCCAATAAATGCACGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAArr1基因編碼蛋白的氨基酸序列為MKGLSLVLLVLLLMLAVGEGNDPEMQYWTCGYRGLCRRFCHAQEYIVGHHGCPRRYRCCAVRS
權(quán)利要求
1.一種石斑魚垂體富含的一個(gè)生殖調(diào)控因子的基因序列，其特征在于rr1基因的cDNA序列和rr1基因編碼蛋白的氨基酸序列，基因cDNA長560bp，有一個(gè)192bp的開放閱讀框，編碼63個(gè)氨基酸，5’非編碼區(qū)長30bp，起始于一個(gè)包含在脊椎動(dòng)物起始密碼子ANNATG基元，3’非編碼區(qū)長338bp，有多聚腺苷酸加尾信號AAUAAA和多聚腺苷酸尾巴。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種石斑魚垂體富含的一個(gè)生殖調(diào)控因子的基因序列，其特征在于rr1基因cDNA序列GACTGTCTGAAAGCTTATTGGTACCAAAACATGAAGGGACTGAGCTTGGTTCTCCTCGTGCTTCTCCTGATGCTCGCCGTCGGGGAGGGCAATGATCCAGAAATGCAGTATTGGACATGTGGGTATAGAGGACTCTGCAGACGGTTGTGCCATGCCCAGGAGTACATCGTTGGTCATCACGGTTGCCCTCGGAGATACAGATGCTGTGCTGTGCGGTCTTAGCACCTGCATGCACCAGCATGAGGACTGACATCTCCAGGTAACTGACGACGGCGCTCTTCCGGATAACCCATTTCAACAACCTTACTCTCAATCGACACCTCTTGGACTTCTAACACGCTGTGGGATGTGACAATGAGTGCTTTGGAAGTGGACTTCAACTAGTTAGACCTGACTTATTCACAGCTAGATGTGCAGCAGATGTGTAACTGTTGCTTGATCCTGTATCTCACCTTTAATAACATTTATAATCACTCCTTTGTGAACAGTCAGTTGTACTCTCTGAAATGCAGTGTTGCCAATAAATGCACGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種石斑魚垂體富含的一個(gè)生殖調(diào)控因子的基因序列，其特征在于rr1基因編碼的氨基酸序列MKGLSLVLLVLLLMLAVGEGNDPEMQYWTCGYRGLCRRFCHAQEYIVGHHGCPRRYRCCAVRS
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種石斑魚垂體富含的一個(gè)生殖調(diào)控因子的基因序列在石斑魚的生殖調(diào)控中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種石斑魚垂體富含的一個(gè)生殖調(diào)控因子的基因序列在石斑魚的性腺分化中的應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種石斑魚垂體富含的一個(gè)生殖調(diào)控因子的基因序列在石斑魚的性別逆轉(zhuǎn)中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種石斑魚垂體富含的一個(gè)生殖調(diào)控因子的基因序列在飼料制備人工餌料中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種石斑魚垂體富含的一個(gè)生殖調(diào)控因子的基因序列在石斑魚的繁殖和人工控制性別中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種石斑魚垂體富含的一個(gè)生殖調(diào)控因子的基因序列及用途，該基因cDNA長560bp，有一個(gè)192bp的開放閱讀框，編碼63個(gè)氨基酸，5’非編碼區(qū)長30bp，起始于一個(gè)包含在脊椎動(dòng)物起始密碼子ANNATG基元，3’非編碼區(qū)長338bp，有多聚腺苷酸加尾信號和多聚腺苷酸尾巴。該基因在石斑魚的生殖調(diào)控、性腺分化和性別逆轉(zhuǎn)中的應(yīng)用。
文檔編號A61K31/7088GK1473840SQ02138830
公開日2004年2月11日 申請日期2002年7月26日 優(yōu)先權(quán)日2002年7月26日
發(fā)明者周莉, 桂建芳, 周 莉 申請人:中國科學(xué)院水生生物研究所