專利名稱：沙棘全果素及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及沙棘全果提取物以及制備該提取物的方法和該提取物的用途。
沙棘果實含有多種生理活性成分，具有廣泛的藥用價值。中國藥典就明確表達(dá)其具有＂止咳、祛痰、消食化滯、活血散瘀＂等功效。在長期的醫(yī)療實踐中，人們常將它用于治療咳嗽、慢性支氣管炎、胸悶、消化不良、胃痛、跌打瘀腫、閉經(jīng)等疾病。隨著人們對沙棘果的深入研究發(fā)現(xiàn)，沙棘不僅具有以上傳統(tǒng)的醫(yī)藥用途，它同時還具有調(diào)節(jié)人體免疫功能、抗腫瘤、抗輻射、抗脂肪肝及肝硬化、調(diào)節(jié)血脂、抗衰老等一系列藥用功效。
目前生產(chǎn)制備沙棘制品生產(chǎn)沙棘籽油有壓榨法、浸出法、超臨界CO2萃取法；生產(chǎn)沙棘果渣油有浸出法、超臨界CO2萃取法；生產(chǎn)沙棘果油有離心法、溶劑沉淀離心法；生產(chǎn)沙棘黃酮有溶劑除油法(CN1055412C)、大孔樹脂吸附法(CN1308084)。無疑，超臨界CO2萃取沙棘籽油是最優(yōu)的方法，除此而外以上方法都存在著嚴(yán)重的缺陷。沙棘果渣油浸出法有溶劑殘留，根本不可取；沙棘果渣油常溫下是固態(tài)，常規(guī)超臨界CO2萃取出料困難，還必須在管道系統(tǒng)增加保溫裝置，同時也給系統(tǒng)的清洗帶來了困難。沙棘果油離心法需將果汁加溫到70℃以上，而且工藝路線長、工藝復(fù)雜；溶劑沉淀離心法同樣工藝路線長、工藝復(fù)雜、生產(chǎn)效率低，更為重要的是會有溶劑殘留。沙棘黃酮溶劑除油會使產(chǎn)品中有溶劑殘留，而且除油的同時會丟掉很多活性成分；沙棘黃酮大孔樹脂吸附法其樹脂脫落會使產(chǎn)品中殘留甲苯、二甲苯等有毒物質(zhì)，同時也會丟掉很多活性成分；常規(guī)的超臨界CO2萃取，無法有效提取沙棘中強(qiáng)極性活性成分(如沙棘黃酮)。再者，以上這些方法通常都是對沙棘果實的不同部位(如果肉、果渣、籽)作為原料進(jìn)行提取，從而獲得相應(yīng)的果油，果渣油、籽油等。而在果油、果渣油、籽油內(nèi)，其所含有效活性成分和含量是不同的。由于其有效活性成分不全以及含量上有顯著差異，這些單一產(chǎn)品是不能與天然沙棘相提并論的。
從產(chǎn)品開發(fā)角度，為了得到一種有效成分更為全面的沙棘制品，ZL98103550.7公開了一種沙棘油復(fù)合膠囊。該復(fù)合膠囊是將沙棘籽油、沙棘果渣油、沙棘果油、沙棘黃酮粉、沙棘黃酮浸膏按一定的比例量進(jìn)行混合后制成的。該方法仍存在一定問題。首先是簡單地將各種提取物進(jìn)行量化混合，破壞了天然物質(zhì)的有機(jī)組成，故有礙于充分發(fā)揮天然植物特有的生理活性。其次，在前面介紹目前生產(chǎn)制備沙棘制品方法中，可以清楚的看到該專利產(chǎn)品中的成分沙棘果渣油、沙棘果油、沙棘黃酮不僅存在生產(chǎn)工藝上的缺陷，更為嚴(yán)重的是沙棘黃酮中會存在有機(jī)溶劑殘留或大孔樹脂脫落的甲苯、二甲苯等有毒物質(zhì)，給產(chǎn)品造成了致命的問題。
本發(fā)明的目的就是提供一種沙棘全果素，即一種與天然沙棘果實有效活性成分更為接近的沙棘全果提取物，同時提供一種提取該全果素的方法，以及該全果素的一種藥用用途。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的本發(fā)明提供了一種以沙棘全果為原料，采用二元超臨界流體萃取而獲得的沙棘全果素。用以彌補(bǔ)現(xiàn)有沙棘果油、沙棘果渣油，沙棘黃酮生產(chǎn)工藝不合理，并完全避免了產(chǎn)品的有機(jī)溶劑殘留，保證了產(chǎn)品的安全性。
為獲得這種沙棘全果素，需采用一種二元超臨界流體萃取方法進(jìn)行沙棘全果提取，該方法含有以下步驟a、采用沙棘全果為原料，干燥、粉碎為10-60目；b、進(jìn)行超臨界CO2首次萃取，即將a步中的粉碎物在萃取溫度35-65℃、萃取壓力20-40MPa條件下進(jìn)行萃取，獲得首次萃取物(即非極性、弱極性油狀提取物)留取備用。
c、將b步中首次萃取后的濾渣加90％以上食用乙醇，在40-60℃保溫罐中浸提8-20小時，離心得浸提液，回收乙醇，然后遠(yuǎn)紅外微波組合負(fù)壓干燥得粗提物(即中強(qiáng)極性粉狀提取物)；為提取更加完全，可將濾渣按上述步驟再重復(fù)一次，以增加沙棘全果得率。
d、將c步中粗提物進(jìn)行二元超臨界流體萃取，萃取溫度35-60℃，萃取壓力25-45MPa，解析壓力6-12MPa，解析溫度35-50℃的條件下，萃取2-3小時，萃取過程中注入95％食用乙醇，其物料比為100％-200％，得萃取液，回收乙醇，低溫負(fù)壓干燥得二次萃取物(即中強(qiáng)極性粉狀萃取物)；e、將首次萃取物與二次萃取物混合，均質(zhì)，得到油粉混懸的沙棘全果素。
本發(fā)明沙棘全果素具有良好的生理活性，可在制備治療肝炎藥物中得到應(yīng)用。
本發(fā)明的創(chuàng)新點之一在于采用的原料為沙棘全果，它包含有沙棘果肉、果皮、種子，因而首先從原料的選用上可以保持天然沙棘果實的完整性。無疑，本發(fā)明為沙棘全果，特別是為人工種植的大果沙棘全果的產(chǎn)品開發(fā)提供了最佳方法。
本發(fā)明的創(chuàng)新點之二在于本發(fā)明方法采取二元超臨界流體萃取使沙棘全果可以在超臨界流體的極性有梯度變化狀況下進(jìn)行分級提取，使原料中的不同分子量、不同極性、不同結(jié)構(gòu)的活性物質(zhì)在其適合的狀態(tài)下進(jìn)行分級提取，再進(jìn)一步均質(zhì)，從而使提取物最大限度地包含了沙棘全果原料中所含有的活性成份。從而得到較為接近天然沙棘果實有效成份的沙棘全果素。
本發(fā)明的創(chuàng)新點之三在于本發(fā)明方法的實施，完全克服了有機(jī)溶劑提取沙棘黃酮造成的溶劑殘留，或大孔樹脂吸附法提取沙棘黃酮造成的樹脂脫落物甲苯、二甲苯等有害物質(zhì)的殘留，使沙棘產(chǎn)品真正做到了安全。
本發(fā)明制備的沙棘全果素，可以一并檢測到十七種脂肪酸(即肉豆蔻酸、肉豆蔻烯酸、月桂酸、月桂烯酸、棕櫚酸、癸酸、花生四烯酸、花生烯酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸、十五碳酸、芥酸、花生酸、十七碳酸)、維生素E(包括有α-Ve、β-Ve)、維生素C、β-胡蘿卜素、黃酮類化合物(槲皮素、異鼠李素、山奈酚及其苷類、楊梅酮、兒茶酸等)，氨基酸十八種，非皂化物(包括膽甾烷、豆甾烷、豆甾醇系列、谷甾醇系列)、揮發(fā)油、微量元素等。
成分檢測表明，本發(fā)明方法提取的沙棘全果素，包含了沙棘果皮、果肉、種子之中所有能夠檢測到的物質(zhì)。由此可見本發(fā)明的沙棘全果素克服了現(xiàn)有沙棘產(chǎn)品有效成分不全、有效成全不均衡的弊端。
本發(fā)明是在超臨界CO2萃取狀態(tài)下進(jìn)行的，故保持了超臨界CO2萃取法固有的優(yōu)點，低溫萃取避免了提取過程對有效成份的破壞；萃取物中無有機(jī)溶劑殘留物；對環(huán)境無污染。
用本發(fā)明方法提取的沙棘全果素其有效成份全、且含量高，生物活性好。其優(yōu)異的效果通過下列實驗得到了證實。
試驗是針對沙棘全果素和沙棘籽油對化學(xué)性肝損傷作用進(jìn)行的比較。其目的是觀察沙棘全果素和沙棘籽油對小鼠化學(xué)性肝損傷保護(hù)作用有無差異，以探討沙棘全果素的活性效力。
受試物沙棘全果素為油粉混懸棕黃色液體，沙棘籽油為棕黃色液體，由河北神興沙棘研究院超臨界CO2萃取實驗室提供，沙棘籽油保肝人群推薦日攝入量為0.05g/kg.bw。
四氯化碳(CCl4)分析法，由北京化學(xué)試劑廠生產(chǎn)，批號990607。
試驗動物SPF級昆明種雄性小鼠，體重20～22g，共140只(其中20只動物備用)由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，批號為冀動字第20020601號。
試驗分組及劑量設(shè)計將動物隨機(jī)分成六組，每組20只，按沙棘籽油保肝人群日攝入量0.05g/kg.bw分別擴(kuò)大5、10、20倍(即0.25、0.5、1.0g/kg.bw)作為受試物組的低、中、高劑量組，另設(shè)正常、沙棘籽油和肝損傷對照組，正常對照組和肝損傷對照組按0.20ml/10g.bw給予蒸餾水，沙棘籽油組按0.5g/kg.bw灌胃。
試驗方法每日經(jīng)口灌胃給予，動物每周稱重一次，按體重變化調(diào)整受試物劑量，于試驗第31天將各組動物隔夜禁食16小時，肝損傷陽性組、沙棘籽油組及受試物組一次經(jīng)腹腔注射給予0.15％的CCl4油溶液0.10ml/10g.bw，正常對照組給予等量蒸餾水，沙棘籽油組和受試物組繼續(xù)受試物至試驗結(jié)束時。給予CCl424小時和48小時后處死動物，進(jìn)行各項指標(biāo)的檢測。
檢測指標(biāo)血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的測定，采用SABA-180型意大利產(chǎn)自動生化分析儀，上海長征生化試劑公司生產(chǎn)的相應(yīng)試劑盒測定。
肝臟稱重及臟體系數(shù)試驗結(jié)果各劑量組對小鼠體重的影響見表1表1沙棘全果提取物對小鼠體重的影響(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)組別 動物數(shù)(只) 初重(g)中期重(g) 終重(g)正常對照組10 22.2±1.8 35.4±3.1 40.1±5.1肝損傷對照組 10 22.1±1.6 35.8±2.8 39.0±4.2沙棘籽油組10 22.4±1.5 36.5±3.6 38.0±3.0低劑量組 10 22.1±1.6 33.1±3.0 38.6±2.9中劑量組 10 22.5±1.0 32.4±2.6 38.6±2.9高劑量組 10 22.5±1.2 35.0±3.4 38.0±4.2小鼠血清中ALT、AST結(jié)果見表2給予CCl4后肝損傷陽性對照組ALT和AST值明顯升高。24小時后，沙棘籽油組動物血清中ALT和AST值與肝損傷陽性對照組比較，差異有顯著性(P＜0.05)，受試物低、中、高劑量組與肝損傷陽性對照組比較，差異有極顯著性(P＜0.01)。
表2各組小鼠血清ALT、AST測定值(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)
組別 劑量 動物數(shù) 24hALT 24hAST 48hALT 48hASTg/kg.bw) (只)(V/L) (V/L) (V/L)(V/L)正常對照組0 10 34.1±10.0 152.3±52.141.3±5.7123.4±20.8肝損傷對照組 0 10 321.0±69.0350±105.0 188.9±19.5 198.0±42.3沙棘籽油組0.5 10 235.2±53.2*283±32.0*138.6±10.5 155.2±5.6低劑量組 0.25 10 219.0±54.5**263.8±25.7**125.5±11.6 156.2±9.2中劑量組 0.5 10 210.0±15.2**158.2±24.0**120.7±10.8 130.5±17.9高劑量組 1.0 10 216.2±23.0**165.7±21.2**126.3 ±7.7 116.3±12.9*與肝損傷對照組比較P＜0.05**與肝損傷組比較P＜0.01小鼠體重、肝重和臟體系數(shù)見表3表3沙棘全果提取物對小鼠臟器重量及系數(shù)的影響(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差)組別 劑量動物數(shù) 體重 肝重臟體比(g/kg) (只)(g)(g)正常對照組0 10 40.1±5.1 1.61±0.22 4.2±0.46肝損傷對照組 0 10 39.0±4.2 1.65±0.13 4.6±0.35沙棘籽油組0.5 10 38.0±3.0 1.60±0.21 4.4±0.32低劑量組 0.2510 38.2±2.8 1.55±0.14 4.2±0.35中劑量組 0.5 10 38.642.9 1.53±0.15 4.3±0.28高劑量組 1.0 10 38.8±4.2 1.58±0.23 4.1±0.47由表3可見沙棘籽油組、受試物各劑量組體重、肝重和臟體系數(shù)與肝損傷組及正常對照組比較均無明顯差異。
實驗表明給予CCl4后，24小時轉(zhuǎn)氨酶ALT和AST檢驗結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計處理，沙棘籽油組與肝損傷陽性對照組比較，有顯著性差異(P＜0.05)，沙棘全果素低、中、高劑量組與肝損傷陽性對照組比較，有極顯著性差異(P＜0.01)。48小時后沙棘籽油組及沙棘全果素肝損傷恢復(fù)程度更為明顯?？梢娚臣貙π∈蠡瘜W(xué)性肝損傷保護(hù)作用要優(yōu)于沙棘籽油。這也表明，沙棘全果素的生物活性要比沙棘種子油高。
實施例1含水8％的120公斤沙棘全果，經(jīng)過SCC-10型遠(yuǎn)紅外微波組合負(fù)壓干燥設(shè)備，于60℃負(fù)壓干燥10分鐘，經(jīng)粉碎機(jī)粉碎至40目，經(jīng)過SFE-300型超臨界CO2萃取設(shè)備，于26Mpa，45℃，流量1000kg/h進(jìn)行超臨界CO2萃取，得到非極性、弱極性油狀提取物20公斤，留取備用。其余92公斤沙棘濾渣，用500升92％食用乙醇，于50℃保溫罐中浸提10小時，離心，回收乙醇，經(jīng)過SCC-10型遠(yuǎn)紅外微波組合干燥設(shè)備，于60℃負(fù)壓干燥25分鐘，得到中強(qiáng)極性的粉狀粗提物16公斤。粗提物經(jīng)過SFF-100型超臨界CO2萃取中試設(shè)備，于35MPa，60℃，流量300kg/h，解析壓力8MPa，解析溫度40℃進(jìn)行二元超臨界流體萃取，萃取過程中注入16公斤95％食用乙醇，時間為2小時，得到萃取液20升?；厥找掖?，再經(jīng)過SCC-10型遠(yuǎn)紅外微波組合干燥設(shè)備于60℃負(fù)壓干燥，得沙棘中強(qiáng)極性的粉狀萃取物0.42公斤，其中沙棘黃酮以異鼠李素計檢測，其含量達(dá)32％。
將以上兩次超臨界流體萃取物混合，過膠體磨得到油粉混懸的沙棘全果素。
實施例2含水8％的120公斤沙棘全果，經(jīng)過SCC-10型遠(yuǎn)紅外微波組合負(fù)壓干燥設(shè)備，于60℃負(fù)壓干燥10分鐘，經(jīng)粉碎機(jī)粉碎至20目，經(jīng)過SFE-300型超臨界CO2萃取設(shè)備，于26MPa，45℃，流量1000kg/h進(jìn)行超臨界CO2萃取，得到非極性、弱極性油狀提取物20公斤，留取備用。其余92公斤沙棘濾渣，用500升95％食用乙醇，于50℃保溫罐中浸提12小時，離心，回收乙醇，經(jīng)過SCC-10型遠(yuǎn)紅外微波組合干燥設(shè)備，于60℃負(fù)壓干燥25分鐘，得到中強(qiáng)極性的粉狀粗提物16公斤。粗提物經(jīng)過SFF-100型超臨界CO2萃取中試設(shè)備，于35MPa，60℃，流量300kg/h，解析壓力10MPa，解析溫度35℃進(jìn)行二元超臨界流體萃取，萃取過程中注入30公斤95％食用乙醇，時間為2.5小時，得到萃取液20升?；厥找掖?，再經(jīng)過SCC-10型遠(yuǎn)紅外微波組合干燥設(shè)備于60℃負(fù)壓干燥，得沙棘中強(qiáng)極性的粉狀萃取物0.54公斤，其中沙棘黃酮以異鼠李素計檢測，其含量達(dá)41％。
將以上兩次超臨界流體萃取物混合，過膠體磨得到油粉混懸的沙棘全果素。
從以上實施例中得到的沙棘全果素可以用于制備治療肝炎藥物。例如，它可以制成沙棘全果素軟膠囊，用作肝炎疾病的治療藥物。
權(quán)利要求
1.一種沙棘全果素，其特征在于它以沙棘的全果為原料，采用二元超臨界流體萃取獲得。
2.一種提取沙棘全果素的方法，其特征在于它含有以下步驟a、采用沙棘全果為原料，干燥、粉碎為10-60目；b、進(jìn)行超臨界CO2首次萃取，即將a步中的粉碎物在萃取溫度35-65℃、萃取壓力20-40MPa條件下進(jìn)行萃取，獲得首次萃取物留取備用；c、將b步中首次萃取后的濾渣加90％以上食用乙醇，在40-60℃保溫罐中浸提8-20小時，離心得浸提液，回收乙醇，負(fù)壓干燥得粗提物；d、將c步中粗提物進(jìn)行二元超臨界流體萃取，萃取溫度35-60℃，萃取壓力25-45MPa，解析壓力6-12MPa，解析溫度35-50℃的條件下萃取2-3小時，萃取過程中注入95％食用乙醇，其物料比為100％-200％，得萃取液，回收乙醇，低溫負(fù)壓干燥得二次萃取物；e、將首次萃取物與二次萃取物混合，均質(zhì)，得到油粉混懸的沙棘全果素。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的沙棘全果素作為制備治療肝炎藥物的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種與天然沙棘果實有效活性成分更為接近的沙棘全果提取物，同時提供一種提取該全果素的方法，以及該全果素的一種藥用用途。該方法包括a.采用沙棘全果為原料，干燥、粉碎為10－60目；b.進(jìn)行超臨界CO
文檔編號A61P1/16GK1473576SQ0212541
公開日2004年2月11日 申請日期2002年8月6日 優(yōu)先權(quán)日2002年8月6日
發(fā)明者劉玉成, 蘇琳, 鄒元生, 聶勇, 王岳 申請人:河北神興沙棘研究院