專利名稱：新的環(huán)狀化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有抗真菌活性的新的環(huán)狀化合物(以下簡稱氣絲菌素)，氣絲菌素在醫(yī)藥治療中的用途，含有氣絲菌素的藥物組合物以及用于制備氣絲菌素的方法。
吡咯類抗真菌劑目前被廣泛地用來治療全身性真菌病。然而，吡咯抗真菌藥的長期預(yù)防藥用途導(dǎo)致了由于它們的抑真菌作用而產(chǎn)生了抗吡咯的假絲酵母菌屬種(Candida spp.)。因此，殺真菌劑對(duì)于治療嚴(yán)重的全身性真菌病特別是預(yù)防肺麹菌病是特別重要的。此外，現(xiàn)用的抗真菌藥對(duì)足放線病菌屬種(Scedosporium spp.)無效，它們是在免疫受損患者中出現(xiàn)的一種致病菌。兩性霉素B是目前臨床上使用的一種高效殺真菌劑，但其治療指數(shù)(有效劑量比中毒劑量)十分窄。已知某些環(huán)狀化合物例如LY303366(EP736 541)，WF11243(BP584 360)顯示通過抑制β-1，3-葡聚糖合成酶的殺菌活性。然而，它們就抗菌譜和/或安全性而言仍然具有一些缺點(diǎn)。因而，亟需研制具有較好地安全性和效果的預(yù)防嚴(yán)重的全身性致病菌包括煙曲霉(Aspegillus fumigatus)和足放線病菌屬種的新的殺真菌劑。
本發(fā)明特別涉及通式(I)代表的新的氣絲菌素和其藥學(xué)可接受的鹽， 其中R1是N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-2，5-二氨基戊?；鵠氨基，N-(3-氨基丙基)-N-[-5-氨基-2-[N，N-雙(2-氨乙基)氨基]戊酰]氨基，N-(3-氨基丙基)-N-[-5-氨基-2-[N-(3-氨基丙基)氨基]戊酰]氨基，N-(2-氨乙基)-N-[-5-氨基-2-[N，N-雙(2-氨乙基)氨基]戊酰]氨基或鳥氨酰-鳥氨酰氨基；R2是氫或甲基；R3是氫或羥基。
本發(fā)明還涉及一種包括通式(I)的氣絲菌素和藥學(xué)可接受的載體的藥物組合物。此外，本發(fā)明涉及這種氣絲菌素在制備藥物中的用途，以及制備通式(I)的氣絲菌素的方法。另外，本發(fā)明涉及一種用于預(yù)防和/或治療由致病微生物所引起的傳染病的方法。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及通式(I)的氣絲菌素，其中R1是N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-2，5-二氨基戊酰基]氨基，N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N，N-雙(2-氨乙基)氨基]戊酰]氨基，N-(3-氨基丙基)-N-[(2R)-5-氨基-2-[N，N-雙(2-氨乙基)氨基]戊酰]氨基，N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N-(3-氨基丙基)氨基]戊酰]氨基，N-(2-氨乙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N，N-雙(2-氨乙基)氨基]戊酰]氨基或(L)鳥氨酰-(D)-鳥氨酰氨基；R2是氫或甲基，優(yōu)選氫；R3是氫或羥基，優(yōu)選氫；和其藥學(xué)可接受的鹽。
在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及通式(I)的化合物，其中R1是N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-2，5-二氨基戊?；鵠氨基，R2和R3是氫原子；即通式(IIIa) 和其藥學(xué)可接受的鹽。
在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及通式(I)的化合物，其中R1是(L)-鳥氨酰-(D)-鳥氨酰氨基，R2和R3是氫原子；即通式(IVa) 和其藥學(xué)可接受的鹽。
在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及通式(I)的化合物，其中R1是N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N，N-雙(2-氨基乙基)氨基]戊酰]氨基，R2和R3是氫原子；即通式(Va) 和其藥學(xué)可接受的鹽。
在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及通式(I)的化合物，其中R1是N-(3-氨基丙基)-N-[(2R)-5-氨基-2-[N，N-雙(2-氨基乙基)氨基]戊酰]氨基，R2和R3是氫原子；即通式(VIa) 和其藥學(xué)可接受的鹽。
在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及通式(I)的化合物，其中R1是N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N-(3-氨基丙基)氨基]戊酰]氨基，R2和R3是氫原子；即通式(VIIa) 和其藥學(xué)可接受的鹽。
在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及通式(I)的化合物，其中R1是N-(2-氨基乙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N，N-雙(2-氨基乙基)氨基]戊酰]氨基，R2和R3是氫原子；即通式(VIIIa) 和其藥學(xué)可接受的鹽。
根據(jù)本發(fā)明的氣絲菌素是下表1中舉例說明的氣絲菌素。 表1 *(R)構(gòu)型**(S)構(gòu)型通式(I)代表的氣絲菌素可以由氣絲菌素1，2或3根據(jù)反應(yīng)路線1和2列出的方法產(chǎn)生，其中氨基保護(hù)基P1和P2可以選自叔丁氧羰基(Boc)，芐氧羰基(Cbz)，芴基甲氧羰基(Fmoc)等等；R2和R3如以上所定義。方法A原料化合物，通式(II)的氣絲菌素，可以通過在有氧條件下在含水的或固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)能產(chǎn)生氣絲菌素1，2和3[氣絲菌素3(＝WF11243)，在參考實(shí)施例1中描述]的屬于半知菌亞門(Deuteromycotina)的微生物，并從培養(yǎng)物中分離氣絲菌素1，2和/或3來制備。 [其中R2是氫或甲基；R3是氫或羥基]可以通過下面的方法B或C將通式II的化合物轉(zhuǎn)變?yōu)橥ㄊ絀的化合物方法B 反應(yīng)路線1 反應(yīng)路線1(續(xù))方法C 反應(yīng)路線2
可以如下更詳細(xì)地說明方法A到C方法A用于本發(fā)明的微生物可以是任何能產(chǎn)生氣絲菌素1，2和3的屬于半知菌亞門的菌株，包括突變株和變種。特別優(yōu)選菌株NR 7379，它們由在日本鹿兒島縣收集的落葉分離，并確定為屬于半知菌亞門的菌株。
菌株NR 7379的培養(yǎng)和形態(tài)特征如下1.培養(yǎng)特征玉米粉瓊脂(CMA)無大量生長。由接種物(4.5毫米直徑瓊脂塊)在25℃14天后，菌落達(dá)到直徑為11毫米。它們是扁平的，有暗的奶油黃色。反面是暗奶油黃色。有無色和粘性的溢泌物。
Miura’s培養(yǎng)基(LCA)無大量生長。由接種物在25℃14天后，菌落達(dá)到直徑為11毫米。它們是扁平的有暗的奶油黃色。反面是暗的奶油黃色。沒有溢泌物。
麥芽提取物瓊脂(MEA)無大量生長。由接種物在25℃14天后，獲得直徑18毫米的皰狀的菌落。菌落的顏色是淺黃棕色。反面為相同的顏色。溢泌物是無色和粘性的。
馬鈴薯-葡糖瓊脂培脂(PDA)無大量生長。菌落是皰狀的，由接種物在25℃14天后，達(dá)到直徑14毫米。菌落的顏色和質(zhì)地類似于在MEA上的菌落。溢泌物是無色和粘性的。
在5℃和30℃之間在CMA，LCA，MEA和PDA上觀察到萌芽。
2.形態(tài)特征菌絲體是部分埋生的，部分在表面的，分枝的，有隔膜的，為暗褐色到奶油黃色的。分生孢子梗由埋生的菌絲體形成。它們是透明的，有隔膜的，分枝的，不規(guī)則的。產(chǎn)分生孢子細(xì)胞在分離的分生孢子?；虿灰?guī)則的菌絲上。它們是成腸細(xì)胞的(enteroblastic)，瓶梗的，末端的或近末端的。末端的或近末端的瓶梗是長度和形狀可變的。它們是圓柱的到瓶形的，它們的長度和寬度分別至多為5.5到10μm和2.5到5.5μm。常常形成直接在隔膜下的具有側(cè)面產(chǎn)分生孢子細(xì)胞的不規(guī)則絲狀的分生孢子梗。分生孢子是單細(xì)胞的，透明的，平滑的，球形的到近球形的，長度為2.0到5.5μm且寬度為2.0到5.0微米。
根據(jù)這些明顯的培養(yǎng)和形態(tài)特征，本菌株屬于半知菌亞門，指定為半知菌亞門NR 7379。
標(biāo)為半知菌亞門NR 7379的菌株已經(jīng)在日本國立生命科學(xué)和人體技術(shù)研究所(National Institute of Bioscience and Human-Technology，Agencyof Industrial Science and Technology，Japan)以Nippon Roche K.K.(地址為日本東京105，港區(qū)芝2丁目，6-1)的名義在1998年6月16日按照布達(dá)佩斯條約保藏如下半知菌亞門NR 7379(FERM BP-6391)。
按照本發(fā)明提供的方法的培養(yǎng)可以在含有通常的可被培養(yǎng)的微生物利用的營養(yǎng)素的培養(yǎng)基中進(jìn)行?？梢蕴峒暗奶荚词?，例如，葡萄糖，蔗糖，淀粉，甘油，糖蜜，糊精及它們的混合物。氮源是，例如，大豆粉，棉籽粉，肉膏，蛋白胨，干酵母，酵母抽提物，玉米漿，硫酸銨，硝酸鈉和它們的混合物。而且可以向培養(yǎng)基中加入其它用于促進(jìn)微生物的生長和用于提高氣絲菌素1生產(chǎn)的有機(jī)或無機(jī)物。這種物質(zhì)的實(shí)例是無機(jī)鹽，例如碳酸鈣，氯化鈉，磷酸鹽等等。
在有氧條件下優(yōu)選在液體培養(yǎng)基中通過深層發(fā)酵進(jìn)行，或在固體培養(yǎng)基通過靜止發(fā)酵進(jìn)行培養(yǎng)。適合于培養(yǎng)的溫度為20℃到30℃，最適溫度為27℃。優(yōu)選在pH值3到9下進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)時(shí)間取決于進(jìn)行培養(yǎng)的條件。一般說來，培養(yǎng)20到360小時(shí)就足夠了。
為了從培養(yǎng)物中收獲目標(biāo)氣絲菌素1，2和3，可以適當(dāng)?shù)厥褂猛ǔＳ糜趶奈⑸锏呐囵B(yǎng)物中分離由微生物產(chǎn)生的代謝物的分離方法。例如，氣絲菌素1(為一種甲醇可提取的兩性化合物)可通過下面的方法方便地回收。
即，用適宜的溶劑提取通過固態(tài)發(fā)酵獲得的全部培養(yǎng)物固體以回收目標(biāo)產(chǎn)品。可用于從全部的培養(yǎng)物固體中提取目標(biāo)化合物的溶劑包括水溶性有機(jī)溶劑或水溶性有機(jī)溶劑的含水溶液，例如甲醇，乙醇和含水的醇。
為了從得到的萃取液中除去鹽、水溶性物質(zhì)等等，可有效地利用在水和與水不溶混的有機(jī)溶劑例如正丁醇、乙酸乙酯等等之間的溶劑分配作用。為了從得到的萃取液中除去顏色物質(zhì)，脂溶性物質(zhì)等等，可有效地利用通過甲醇，乙醇，乙腈-0.1％含水三氟乙酸的混合物等等的溶劑純化作用。
為了完成氣絲菌素的純化，可有效利用柱色譜法。可用于柱色譜法中的載體為例如YMC-GEL ODS(Yamamura Chemical Laboratories，日本)或Preparative C18(Waters Millipore公司)。作為洗脫液，可使用一種由含水三氟乙酸和適宜的水溶性有機(jī)溶劑例如甲醇，乙醇，乙腈，等等的混合物構(gòu)成的溶劑體系?？蓪⒑懈髯越M分的由此純化的洗脫液級(jí)分濃縮或冷凍干燥，研磨，得到氣絲菌素1，2和3。
氣絲菌素1，2和3是以三氟乙酸鹽的形式分離出的，但可以通過下面的方法制備游離的氣絲菌素1，2和3。即，將氣絲菌素1，2和3的三氟乙酸鹽溶于水，向其中加入一當(dāng)量的氫氧化鈉，然后將混合物用交聯(lián)葡聚糖凝膠Sephadex LH-20柱色譜純化，用含水醇例如甲醇-水，等等洗脫，由此分別獲得氣絲菌素1，2和3(游離態(tài))。
方法B可以從通式(II)的氣絲菌素[其中R1是氨基；R2和R3如以上所定義]以4個(gè)步驟(1)用丙烯腈進(jìn)行N-烷基化，(2)用N-保護(hù)的鳥氨酸(ornitine)?；?，(3)除去氨基保護(hù)基(P1和P2)，和(4)氰基的還原，制備通式(III)的化合物。
可以從通式(II)的氣絲菌素[其中R1是氨基；R2和R3如以上所定義]以6個(gè)步驟(1)用丙烯腈進(jìn)行N-烷基化，(5)用N-保護(hù)的鳥氨酸(ornitine)?；?，(3)除去氨基保護(hù)基(P1)，(4)用N-保護(hù)的氨基-乙醛進(jìn)行還原N-烷基化，(5)除去氨基保護(hù)基(P2)，和(6)氰基的還原，制備通式(V，VI)的化合物。
可以從通式(II)的氣絲菌素[其中R1是氨基；R2和R3如以上所定義]以6個(gè)步驟(1)用N-保護(hù)的氨基-乙醛進(jìn)行還原的N-烷基化，(2)用N-保護(hù)的鳥氨酸(ornitine)酰化，(3)除去氨基保護(hù)基(P1)，(4)用N-保護(hù)的氨基-乙醛進(jìn)行還原N-烷基化，(5)除去氨基保護(hù)基(P1)，和(6)氰基的還原，制備通式(VIII)的化合物。
可以從通式(II)的氣絲菌素[其中R1是氨基；R2和R3如以上所定義]以6個(gè)步驟(1)用丙烯腈進(jìn)行N-烷基化，(2)用N-保護(hù)的鳥氨酸(ornitine)?；?3)除去氨基保護(hù)基(P1)，(4)用丙烯腈進(jìn)行N-烷基化，(5)除去氨基保護(hù)基(P2)，和(6)氰基的還原，制備通式(VII)的化合物。
方法C可以從通式(II)的氣絲菌素[其中R1是氨基；R2和R3如以上所定義]以4個(gè)步驟(1)用N-保護(hù)的鳥氨酸(ornitine)?；?，(2)除去氨基保護(hù)基(P1)，(3)用N-保護(hù)的鳥氨酸(ornitine)?；?4)除去氨基保護(hù)基(P2)，制備通式(IV)的化合物。
在上述方法B和C中(a)氨基的N-單烷基化可使用丙烯腈根據(jù)“Organic Synthesis col.”第III卷，第93頁中的方法進(jìn)行。(b)伯或仲氨基的N-烷基化可使用還原劑例如氰基硼氫鈉在存在或不存在弱酸例如乙酸的情況下通過N-保護(hù)的氨基乙醛的常規(guī)還原烷基化作用進(jìn)行。反應(yīng)可以在室溫下，在一種溶劑例如甲醇，乙醇，乙酸等等中進(jìn)行。(c)氰基的還原可以通過催化氫化或用硼氫化鈉/氯化鈷，硼烷-二甲硫復(fù)合物等等還原實(shí)現(xiàn)的。[參照J(rèn).Med.Chem.，37，222(1994)](d)使用縮合劑例如二環(huán)己基碳二亞胺，BOP，HBTU，TNTU，PyBroPTM，PyBOPTM，TBTU，TSTU，HOBt等等(或它們中兩種的結(jié)合)，用N-保護(hù)的鳥氨酸(ornitine)進(jìn)行氨基的N-?；饔?。反應(yīng)可以在溶劑例如甲醇，乙醇，吡啶，N，N-二甲基甲酰胺，N-甲基吡咯烷酮等等中，在有或沒有堿例如三乙胺，二異丙基乙基胺，吡啶等等的條件下，在溫度在-20℃至+50℃之間，優(yōu)選在0℃至+25℃的條件下進(jìn)行。(e)通過為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的方法進(jìn)行氨基保護(hù)基的除去，例如對(duì)于Boc基用三氟乙酸處理，或?qū)τ贔moc基用哌啶處理。
本發(fā)明還涉及氣絲菌素的酸加成鹽。酸加成鹽可以在正常的分離過程后以三氟乙酸鹽獲得?？梢詫⒂纱双@得的鹽溶于水中，通過帶有所需陰離子的陰離子交換柱。可以將含有所需鹽的洗脫液濃縮以回收固態(tài)產(chǎn)物的鹽。
借助于叔氮原子的存在可以將通式(I)的氣絲菌素轉(zhuǎn)變相應(yīng)的鹽。
通式(I)氣絲菌素的酸加成鹽可以通過用至少一種化學(xué)計(jì)量的適宜的酸處理氣絲菌素的游離堿獲得。適宜的酸包括，例如無機(jī)物酸，例如，鹽酸，氫溴酸，硫酸，硝酸，磷酸，等等，和有機(jī)酸，例如，乙酸，丙酸，羥基乙酸，丙酮酸，草酸，蘋果酸，丙二酸，琥珀酸，馬來酸，富馬酸，酒石酸，檸檬酸，苯甲酸，肉桂酸，扁桃酸，甲磺酸，乙磺酸，對(duì)甲苯磺酸，水楊酸，等等。典型地，將游離堿溶于惰性有機(jī)溶劑例如乙醇，甲醇，等等中，然后將酸加入類似的溶劑中。維持溫度在約40℃。得到的鹽自然地沉淀下來，或可以用一種較小極性的溶劑從溶液中帶出。
可以將通式(I)的氣絲菌素的酸加成鹽通過用至少一種化學(xué)計(jì)量的適當(dāng)?shù)膲A例如氫氧化鈉或氫氧化鉀，碳酸鉀，碳酸氫鈉，氨水等等處理轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)游離堿。
本發(fā)明提供的氣絲菌素顯示出對(duì)各種真菌的廣譜殺菌活性，可以用作治療和預(yù)防真菌感染的疾病的藥劑。通式(I)代表的氣絲菌素的活體外和體內(nèi)抗真菌活性(見表2，3-1和3-2)以及對(duì)肝細(xì)胞(見表4)的毒性如以下所示1.體外抗真菌活性本發(fā)明有代表性的氣絲菌素的體外抗真菌活性通過測定80％抑制濃度(IC80)加以評(píng)價(jià)，是通過分光光度法計(jì)算與沒有藥物的對(duì)照組比較抑制真菌生長至20％濁度的抗真菌藥的最低濃度。
IC80值是按照NCCLS批準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)(有下面的較小的改動(dòng))通過肉湯微量稀釋方法測定的(國家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)，(1997)對(duì)于酵母的肉湯稀釋抗真菌敏感性試驗(yàn)的參考方法，批準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)，文件M27-A)。用補(bǔ)充以1％葡萄糖和0.25％K2HPO4的酵母氮堿(YNB；Difco Lab.)作為酵母的試驗(yàn)培養(yǎng)基。將用0.2％的低熔點(diǎn)瓊脂糖(BR1)固化的同樣的培養(yǎng)基用于絲狀真菌。接種物的大小是1-3×103細(xì)胞/毫升，并在35℃培育1-2天。表2體外抗真菌活性，IC80(μg/ml)
2.體內(nèi)抗真菌效果2-1鼠科動(dòng)物全身性念珠菌病本發(fā)明的氣絲菌素的對(duì)于全身性念珠菌病的體內(nèi)抗真菌效果見下面的表3-1。用常規(guī)具有免疫能力的小鼠品系的小鼠，CrjCD-1(ICR)作為全身性念珠菌病的實(shí)驗(yàn)感染模型。將4星期大的CrjCD-1(ICR)小鼠通過尾部靜脈注射白色念珠菌5×106分生孢子/小鼠用于全身性念珠菌病。在剛剛?cè)硇阅钪榫「腥疽院箪o脈內(nèi)(i.v.)給與試驗(yàn)化合物一次。由每種劑量在第7天上幸存者的數(shù)量計(jì)算50％有效劑量(ED50)值。
表3-1對(duì)于全身性念珠菌病的小鼠體內(nèi)抗真菌活性第7天上的ED50(mg/kg)氣絲菌素132 0.43氣絲菌素133 0.35氣絲菌素135 0.352-2鼠科肺麹菌病本發(fā)明的氣絲菌素對(duì)于肺麹菌病的體內(nèi)抗真菌效果見下面的表3-2。在可的松處理(250mg/kg，在感染3天之前和當(dāng)天兩次皮膚下治療)的ICR雄性小鼠中引起鼠科肺麹菌病。用煙曲霉的分生孢子(2.5×105分生孢子/小鼠)氣管內(nèi)感染這些小鼠，并每日進(jìn)行一次治療，進(jìn)行4天。從幸存者數(shù)量測定每種藥物的效果，由每種劑量在第14天上幸存者的數(shù)量計(jì)算50％有效劑量(ED50)。
表3-2對(duì)于肺麹菌病的小鼠體內(nèi)抗真菌活性第14天上的ED50(mg/kg)氣絲菌素1325.2氣絲菌素1345.8氣絲菌素1375.2氣絲菌素3 ＞153.體外肝臟毒性試驗(yàn)通過膠原酶消化分離小鼠肝細(xì)胞并在微量培養(yǎng)板中培養(yǎng)。將肝細(xì)胞單層暴露于培養(yǎng)體系中的試驗(yàn)氣絲菌素，暴露1天。培養(yǎng)期后，在顯微鏡下觀察肝細(xì)胞并進(jìn)行形態(tài)學(xué)評(píng)價(jià)。測試氣絲菌素引起的肝細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變程度與WF 11243和LY303366相比較。
表4對(duì)肝細(xì)胞的細(xì)胞毒性(μg/ml)氣絲菌素132 ＞100氣絲菌素134 ＞100氣絲菌素135 ＞100WF11243 100(＝氣絲菌素3)LY30336610以5mg/kg和30mg/kg氣絲菌素132對(duì)小鼠給藥(每日一次i.v.)2星期顯示沒有急性毒性。
因此，通式(I)的新的氣絲菌素以及它們的藥學(xué)可接受的鹽在很寬的劑量范圍內(nèi)顯示出對(duì)小鼠的于各種真菌感染的有效的抗真菌活性，包括麹菌病，且可用作抗真菌藥。而且，本發(fā)明提供的氣絲菌素比已知的環(huán)肽衍生物(WF11243和LY303366)對(duì)肝細(xì)胞具有更少的細(xì)胞毒性。
本發(fā)明的氣絲菌素還可以抑制或減輕卡氏肺孢子蟲(Pneumocystiscarinii)對(duì)免疫受損病人的感染。
本發(fā)明進(jìn)一步地涉及含有通式(I)的新的氣絲菌素以及它們的藥學(xué)可接受鹽的藥物組合物。
通式(I)的新的氣絲菌素以及它們的藥學(xué)可接受鹽是高效的殺真菌劑。它們對(duì)于各種真菌物種包括假絲酵母屬種，曲霉屬種(Aspergillus spp.)，足放線病菌屬種，毛霉屬種(Mucor spp.)和犁頭霉屬種(Absidia spp.)是有殺真菌活性的。
由此，本發(fā)明的氣絲菌素對(duì)動(dòng)物和人類具有局部的和全身性治療真菌病的用途。例如，它們可有效用于治療由假絲酵母屬種，毛癬菌屬種(Trichophyton spp.)和小孢子霉屬種(Microsporum spp.)所引起局部和粘膜的真菌感染。它們可以還用于治療由例如，假絲酵母屬種，曲霉屬種，或足放線病菌屬種所引起的全身性真菌感染。
對(duì)于臨床使用，通式(I)的新的氣絲菌素和它們的藥學(xué)可接受的鹽可以單獨(dú)給藥，但通常是視特定的使用和所需的目的而定，通過與賦形劑，粘合劑，潤滑劑，崩解劑，包衣材料，乳化劑，懸浮劑，溶劑，穩(wěn)定劑，吸收增強(qiáng)劑和/或軟膏基質(zhì)混合，以配制的藥物混合物給藥的?；旌衔锟梢钥诜?，注射，鼻部，直腸或局部的給藥使用。
對(duì)于口服的氣絲菌素的藥物制劑可以是粒劑，片劑，糖包衣片，膠囊，丸劑，懸液或乳劑。對(duì)于腸胃外的注射，例如，靜脈內(nèi)，肌肉的或皮下注射，通式(I)的氣絲菌素可以以無菌水溶液的形式使用，并可以含有其它物質(zhì)，例如，鹽或葡萄糖以使溶液是等滲的。這些組合物還可以以安瓿中的單元?jiǎng)┬痛嬖诨虼嬖谟诙鄤┝咳萜髦?，?yōu)選加入防腐劑。或者，活性組分可以為粉末形式用于在給藥之前與合適的載體重新配制。氣絲菌素也可以以栓劑或陰道栓劑的形式給藥，或它們可以以洗劑，溶液，乳膏，軟膏或細(xì)粉的形式局部地應(yīng)用。
當(dāng)通過口服或腸胃外的途徑給藥時(shí)，通式(1)的氣絲菌素的每日劑量水平在0.1到50毫克/千克(以等分劑量)。因此，氣絲菌素的片劑或膠囊應(yīng)該含有5毫克到0.5克的活性化合物，視情況一次給藥一?；騼闪；蚋嗔?。在任何情況下實(shí)際的劑量可以由醫(yī)師決定，且可能根據(jù)年齡，體重和特定病人的反應(yīng)而不同。
當(dāng)氣絲菌素用于抗真菌時(shí)，可以使用任何方法給藥。對(duì)于治療真菌感染，通常使用口服或靜脈內(nèi)的給藥。
當(dāng)氣絲菌素用于控制肺孢子蟲屬感染時(shí)，優(yōu)選用其直接治療肺和支氣管。因此優(yōu)選吸入方法。對(duì)于吸入或鼻給藥，本發(fā)明的氣絲菌素可以氣霧劑的噴灑給予形式從加壓的包裝或噴霧器方便地遞送。優(yōu)選吸入或經(jīng)鼻的遞送體系為一種計(jì)量的劑量吸入氣霧劑，它們可以是通式(I)的化合物在適當(dāng)?shù)臍忪F劑推進(jìn)劑(例如氟烴或烴)中配制的粉末，懸液或溶液。
盡管本發(fā)明的氣絲菌素可以作為片劑、膠囊、局部的組合物、吹入劑粉末、栓劑，等等使用，本發(fā)明的氣絲菌素在水和水介質(zhì)中的溶解性使它們能適用于注射制劑以及適合于氣溶膠噴射的液相組分。
下面的實(shí)施例舉例說明了制備本發(fā)明的氣絲菌素的優(yōu)選的方法，然而它們并不意欲限制本發(fā)明的范圍。
在下面的實(shí)施例中，通過HPLC使用選自下列的反相柱進(jìn)行產(chǎn)物的分析和純化?；旌先軇┯?.05％三氟乙酸-水0.05％三氟乙酸-乙腈按照適當(dāng)?shù)谋壤M成，如每個(gè)實(shí)施例所描述。HPLC柱柱ACAPCELL PAK C18，UG-120，4.6×250mm柱BCAPCELL PAK C18，UG-120，10×250mm柱CCAPCELL PAK C18，UG-80，20×250mm柱DCAPCELL PAK C18，SG-120，4.6×250mm柱ECAPCELL PAK C18，SG-120，10×250mm柱FTSK GEL ODS-80Ts，20×250mm在下面的研究實(shí)施例中，除非另有陳述氣絲菌素是以三氟乙酸鹽的形式得到的。
參考實(shí)施例1
氣絲菌素1，2和3的制備a)固體發(fā)酵將0.1毫升份的半知菌亞門NR 7379(FERM BP6391)在10％(V/V)甘油溶液中的冷凍培養(yǎng)物解凍并接種在含有100毫升由2％葡萄糖，1％馬鈴薯淀粉，1.5％甘油，1％Toast大豆(Nissin Seiyu)，0.35％酵母抽提物(Nippon Seiyaku)，0.25％Polypepton(Nihon Seiyaku)，0.3％NaCl，0.5％CaCO3，0.005％ZnSO4·7H2O，0.0005％CuSO4·5H2O，和0.0005％MnSO4·4H2O組成的培養(yǎng)基的500毫升錐形依氏燒瓶中。不調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值。將種子培養(yǎng)物在27℃下在220rpm的旋轉(zhuǎn)搖瓶機(jī)上培育7天。將2毫升種子培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到3升錐形依氏燒瓶中，其中含有由200克壓榨過的大麥，0.12克酵母抽提物(Difco)，0.06克酒石酸鈉，0.06克KH2PO4，和120毫升水組成的固體培養(yǎng)基。在27℃在靜止條件下進(jìn)行發(fā)酵。發(fā)酵在240小時(shí)產(chǎn)量達(dá)到最大值，然后自培養(yǎng)物中分離氣絲菌素1，2和3。
向得到的培養(yǎng)物固體(10千克)中加入甲醇(40L)，然后攪拌混合物，隨后過濾得到甲醇萃取液(39L)。濃縮由此得到的甲醇萃取液，減壓干燥，并向殘余物(64.8克)中加入乙酸乙酯(1L)和水(1L)。然后攪拌混合物，隨后除去乙酸乙酯層。
此外，同樣地用乙酸乙酯(1L)洗滌水層兩次。將殘余的水層用正丁醇(1L)提取三次。合并由此得到的提取液并濃縮，減壓干燥，然后將殘余物(28.5克)溶解在乙腈-0.1％含水的三氟乙酸(1∶1)的混合物(250毫升)中。通過離心除去不溶物以后，將由此得到的溶液減壓蒸干，并向殘余物中加入甲醇(300毫升)，然后攪拌混合物，隨后過濾，得到甲醇溶液(280毫升)。將由此得到的可溶于甲醇的物質(zhì)(9.3克)在反相硅膠C18(1L)柱上柱色譜分離。使用甲醇-0.1％含水的三氟乙酸(2∶8，4∶6，5∶5，6∶4，7∶3，并8∶2)的混合物進(jìn)行柱的分步洗脫。將以這個(gè)順序用甲醇-0.1％含水的三氟乙酸(7∶3)洗脫的氣絲菌素1，2和3濃縮并真空干燥，分別得到氣絲菌素3的三氟乙酸鹽(731毫克)和氣絲菌素1的三氟乙酸鹽(747毫克)白色粉末。將含有氣絲菌素2的級(jí)分減壓濃縮，并進(jìn)一步地用HPLC在下面的條件下純化柱Capcell PakCl8(30×250mm，ShiseidoCo.，LTD.)；流動(dòng)相乙腈-0.1％含水的三氟乙酸(45∶55)；流速40ml/min.；檢測UV 220nm。將在上述條件下得到的適當(dāng)?shù)南疵撘涸谡婵罩袧饪s至干燥，得到白色粉末的氣絲菌素2三氟乙酸鹽(42毫克)。
b)燒瓶發(fā)酵將2毫升份冷凍的發(fā)酵的半知菌亞門NR7379(FERM BP-6391)的10％(V/V)甘油溶液解凍并接種在500-毫升錐形依氏燒瓶中，燒瓶中含有100毫升由1％葡萄糖，1％燕麥粉，4％番茄醬，0.5％玉米漿(Andokasei)，0.001％FeSO4·7H2O，0.001％MnSO4·4H2O，0.0001％ CaCl2，0.0002％ZnSO4·7H2O，0.00002％(NH4)6MoO2·4H2O，和0.00006％H3BO3組成的培養(yǎng)基。滅菌之前調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值為6.8。將種子培養(yǎng)物在27℃下在220rpm的旋轉(zhuǎn)搖瓶機(jī)上培育3天。將2毫升第一批種子培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到500-毫升錐形依氏燒瓶中，該燒瓶中含有100毫升同樣的培養(yǎng)基，并在旋轉(zhuǎn)搖瓶機(jī)上在同樣的條件下培育3天。將2毫升第二批種子培養(yǎng)物在500毫升錐形依氏燒瓶中培植，燒瓶中含有100毫升由8.5％甘油，1％柑桔果膠，0.4％花生粉，0.4％無維生素的牛乳酪蛋白，0.4％番茄醬，0.4％玉米漿(Andokasei)，0.2％甘氨酸，和0.2％KH2PO4組成的培養(yǎng)基。滅菌之前調(diào)節(jié)介質(zhì)的pH值為7.0。在27℃在220rpm的攪動(dòng)下進(jìn)行發(fā)酵。培養(yǎng)10天后，產(chǎn)量達(dá)到最大值，然后將全部培養(yǎng)物分離氣絲菌素1，2和3。
c)罐發(fā)酵將2毫升份冷凍的發(fā)酵的半知菌亞門NR7379(FERM BP-6391)的10％(V/V)甘油溶液解凍并接種在500-毫升含有100毫升如上所述同樣的種子培養(yǎng)基的錐形依氏燒瓶中。將燒瓶在27℃下在220rpm下?lián)u動(dòng)3天。將2毫升第一批種子培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到500毫升錐形依氏燒瓶中，該燒瓶中含有100毫升同樣的種子培養(yǎng)基，并在旋轉(zhuǎn)搖瓶機(jī)上在同樣的條件下培育3天。將六百毫升第二批種子培養(yǎng)物在50升小型發(fā)酵罐中培植，發(fā)酵罐中含有30升如上所述同樣的生產(chǎn)培養(yǎng)基和0.4％消泡劑(NissanDisfoam CA-123)。在27℃下以30升/分鐘的通氣量和400rpm的攪動(dòng)下進(jìn)行發(fā)酵。發(fā)酵在168小時(shí)產(chǎn)量達(dá)到最大值，然后將全部培養(yǎng)物分離氣絲菌素1，2和3。
氣絲菌素11)外觀白色固體2)分子量(FAB-MS法)m/z 1547(M+H)+3)分子式C72H118N14O234)高分辨率質(zhì)譜(M+H)+測定1547.8568C72H119N14O23計(jì)算值1547.85725)紫外線吸收光譜(

圖1)在甲醇中λ(ε)max(MeOH)225±5(10600sh)，270±5(2000)，278±5(2100)λ(ε)max(N/10 NaOH-MeOH)240±5(7700)，268±5(1800)，298±5(1800)6)紅外吸收光譜(KBr)(圖2)主要吸收波數(shù)(cm-1)如下3379，2927，2855，1740，1660，1535，1453，1203，1139，8377)1H-NMR譜(圖3)400MHz，CD3OD8)13C-NMR譜(圖4)100MHz，CD3OD9)溶解性可溶于水，甲醇，二甲亞砜10)顯色反應(yīng)陽性的茚三酮，茴香醛-硫酸，碘蒸氣，香草醛-硫酸，Rydon-Smith試劑，磷鉬酸陰性的Sakaguchi試劑，溴甲酚綠，2，4-二硝基苯肼-硫酸11)薄層色譜法(TLC)載體 溶劑 Rf硅膠F254*1n-BuOH∶丙酮∶AcOH∶H2O(4∶5∶1∶1) 0.74
MeOH∶H2O(95∶5)0.12*1 E.Merck AG.，Germany12)高效液相色譜法載體Capcell Pak C18 gel S120A，4.6×250mm(由Shiseido，Co.，LTD.制造)流動(dòng)相乙腈∶0.05％含水的三氟乙酸＝1∶1流速1ml/min.Rt＝12.1±0.513)氨基酸分析將氣絲菌素1在120℃下在6N HCl中加熱24小時(shí)，隨后進(jìn)行氨基酸分析，檢測蘇氨酸，3單位的異蘇氨酸，甘氨酸，丙氨酸，纈氨酸，酪氨酸，鳥氨酸，3-羥脯氨酸，4-羥脯氨酸，3-羥基谷氨酰胺。
氣絲菌素21)外觀白色固體2)分子量(FAB-MS法)m/z 1549(M+H)+3)分子式C71H116N14O244)高分辨率質(zhì)譜(M+H)+實(shí)測1549.8384計(jì)算值C71H117N14O241549.83655)UV光譜(圖5)在甲醇中λ(ε)max(MeOH)225±5(10200 sh)，270±5(1900)，278±5(2000)λ(ε)max(N/10 NaOH-MeOH)240±5(7700)，293±5(2000)6)IR光譜(KBr)(圖6)主要吸收峰波數(shù)(cm-1)如下3323，2928，2856，1740，1670，1531，1450，1203，1137，8377)1H-NMR譜(圖7)400MHz，在CD3OD中8)13C-NMR譜(圖8)100MHz，在CD3OD中9)溶解性可溶于水，甲醇，二甲亞砜10)顯色反應(yīng)陽性的茚三酮，茴香醛-硫酸，碘蒸氣，香草醛-硫酸，Rydon-Smith試劑，磷鉬酸陰性的Sakaguchi試劑，溴甲酚綠，2，4-二硝基苯肼-硫酸11)薄層色譜法(TLC)載體 溶劑 Rf硅膠F254*1n-BuOH∶丙酮∶AcOH∶H2O(4∶5∶1∶1) 0.29MeOH∶H2O(95∶5) 0.15*1E.Merck AG.，Germany12)高效液相色譜載體Capcell Pak C18 gel S120A，4.6×250mm(由Shiseido，Co.，LTD.制造)流動(dòng)相乙腈∶0.05％含水的三氟乙酸＝1∶1流速1ml/min.Rt＝9.9±0.513)氨基酸分析將氣絲菌素2在120℃下在6N HCl中加熱24小時(shí)，隨后進(jìn)行氨基酸分析，檢測蘇氨酸，3單位的異蘇氨酸，甘氨酸，丙氨酸，纈氨酸，3-羥基酪氨酸(DOPA)，鳥氨酸，3-羥脯氨酸，4-羥脯氨酸，3-羥基谷氨酰胺。
氣絲菌素31)外觀白色固體2)分子量(FAB-MS法)m/z 1533(M+H)+3)分子式C71H116N14O234)紫外線吸收光譜在甲醇中λ(ε)max(MeOH)225±5(11000sh)，270±5(2000)，280±5(19000)λ(ε)max(N/10 NaOH-MeOH)243±5(7800)，295±5(1800)5)IR譜(KBr)主要吸收波數(shù)(cm-1)如下3334，2928，2852，1742，1662，1520，1449，1202，1136，8366)溶解性可溶于水，甲醇，二甲亞砜7)顯色反應(yīng)陽性的茚三酮，茴香醛-硫酸，碘蒸氣，香草醛-硫酸，Rydon-Smith試劑，磷鉬酸陰性的Sakaguchi試劑，溴甲酚綠，2，4-二硝基苯肼-硫酸8)薄層色譜法(TLC)載體溶劑 Rf硅膠F254*1n-BuOH∶丙酮∶AcOH∶H2O(4∶5∶1∶1)0.26MeOH∶H2O(95∶5) 0.09*1E.Merck AG.，Germany9)高效液相色譜法載體Capcell Pak C18 gel S120A，4.6×250mm(由Shiseido，Co.，LTD.制造)流動(dòng)相乙腈∶0.05％含水的三氟乙酸＝1∶1流速1ml/min.Rt＝9.1±0.510)氨基酸分析
將氣絲菌素3在120℃下在6N HCl中加熱24小時(shí)，隨后進(jìn)行氨基酸分析以檢測蘇氨酸，3單位的異蘇氨酸，甘氨酸，丙氨酸，纈氨酸，酪氨酸，鳥氨酸，3-羥脯氨酸，4-羥脯氨酸，3-羥基谷氨酰胺。
實(shí)施例1氣絲菌素132的制備(a)在室溫下向氣絲菌素3(500毫克，0.326mmol)和三乙胺(682μl，4.89mmol)在甲醇(10毫升)中的混合物中加入丙烯腈(214μl，3.27mmol)。將混合物在室溫下攪拌20小時(shí)。在真空中蒸發(fā)溶劑后，將殘余物溶于正丁醇并用稀鹽酸和水依次洗滌。將有機(jī)層在真空中濃縮。將粗殘余物通過反向HPLC純化，其中詳細(xì)條件如下所示。將適當(dāng)?shù)募?jí)分合并，冷凍并冷凍干燥得到207毫克氣絲菌素120(通式(I)化合物，其中R2和R3是氫且R1是(2-氰乙基)-氨基)無色無定形固體。HPLC(Rt)27.5分鐘(柱F，流速10毫升/分鐘，洗脫液0.05％三氟乙酸∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝53∶47)；FAB-MS(M/Z)1586[M+H]+。(b)向攪拌的Boc-L-Orn(Boc)-OH(46毫克，0.138mmol)的DMF(2毫升)溶液中加入BOP試劑(62毫克，0.14mmol)，HOBT水合物(22毫克，0.144mmol)和N-乙基二異丙基胺(24μl，0.138mmol)。在室溫下攪拌2小時(shí)以后，向反應(yīng)混合物中加入氣絲菌素120(100毫克，0.063mmol)和N-乙基二異丙基胺(24μl，0.138mmol)的DMF(2毫升)溶液。在室溫下攪拌20小時(shí)以后，將溶劑真空蒸發(fā)。
在0℃下將以上得到的粗殘余物在TFA(3毫升)中攪拌30分鐘。打開反應(yīng)容器，將TFA在干燥的氮?dú)鈿饬飨抡舭l(fā)。將殘余物通過反相HPLC純化，其中詳細(xì)條件如下所示。將純凈級(jí)分合并，冷凍并冷凍干燥得到60.5毫克化合物-1，為白色無定形固體。HPLC(Rt)20.7分鐘(柱F，流速10毫升/分鐘，洗脫液0.05％三氟乙酸∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝57∶43)；FAB-MS(M/Z)1700[M+H]+。(c)向化合物-1(60.5毫克，0.0356mmol)在二氧六環(huán)(2毫升)和水(2毫升)的混合物中加入10％鈀/炭(10毫克)，然后將反應(yīng)容器充滿氫氣。在室溫下攪拌14小時(shí)后，將混合物通過膜式過濾器(孔徑大小0.2毫米)過濾，然后將溶劑在真空中蒸發(fā)。將粗殘余物通過反向HPLC純化，其中詳細(xì)條件如下所示。將適當(dāng)?shù)募?jí)分合并，冷凍并冷凍干燥得到27.8毫克氣絲菌素132，為無色無定形固體。HPLC(Rt)18.9分鐘(柱F，流速10毫升/分鐘，洗脫液0.05％三氟乙酸∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝60∶40)；FAB-MS(M/Z)1704[M+H]+。
實(shí)施例2氣絲菌素134的制備(a)向攪拌的Fmoc-L-Orn(Boc)-OH(379毫克，0.834mmol)的DMF(6毫升)溶液中加入BOP試劑(368毫克，0.832mmol)，HOBT水合物(128毫克，0.836mmol)和N-乙基二異丙基胺(145μl，0.832mmol)。在室溫下攪拌2小時(shí)以后，向反應(yīng)混合物中加入氣絲菌素120(600毫克，0.378mmol)和N-乙基二異丙基胺(145μl，0.832mmol)的DMF(3毫升)溶液。在室溫下攪拌18小時(shí)以后，向混合物中加入哌啶(3毫升)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌10分鐘。將溶劑在真空中濃縮。將殘余物用二氯甲烷和二乙醚洗滌以除去試劑。將粗產(chǎn)品不進(jìn)一步地純化用于下一步。(b)向以上得到的粗產(chǎn)品(320毫克)的甲醇(10毫升)溶液中加入(2-氧代-乙基)氨基甲酸叔丁酯(粗品，530毫克)，AcOH(2毫升)和NaBH3CN(210毫克，3.342mmol)的甲醇(4毫升)溶液。將混合物在室溫下攪拌20小時(shí)后，將反應(yīng)混合物在真空中濃縮。將殘余物溶于正丁醇并用稀鹽酸和水依次洗滌。將有機(jī)層在真空中濃縮。
在0℃下將以上得到的粗殘余物在TFA(6毫升)中攪拌30分鐘。打開反應(yīng)容器，將TFA在干燥的氮?dú)鈿饬飨抡舭l(fā)。將殘余物通過反向HPLC純化，其中詳細(xì)條件如下所示。將適當(dāng)?shù)募?jí)分合并，冷凍并冷凍干燥得到88.2毫克化合物-2，為白色無定形固體。HPLC(Rt)22.4分鐘(柱F，流速10毫升/分鐘，洗脫液0.05％三氟乙酸∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝60∶40)。(c)向化合物-2(88.2毫克，0.0494mmol)在二氧六環(huán)(1.5毫升)和水(1.5毫升)的混合物中加入10％鈀/炭(20毫克)，然后將反應(yīng)容器充滿氫氣。在室溫下攪拌16小時(shí)后，將混合物通過膜式過濾器(孔徑大小0.2毫米)過濾，然后將溶劑在真空中蒸發(fā)。將粗殘余物通過反向HPLC純化，其中詳細(xì)條件如下所示。將適當(dāng)?shù)募?jí)分合并，冷凍并冷凍干燥得到22.0毫克氣絲菌素134，為無色無定形固體。HPLC(Rt)25.7分鐘(柱F，流速10毫升/分鐘，洗脫液0.05％三氟乙酸∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝63∶37)；FAB-MS(M/Z)1790[M+H]+。
實(shí)施例3氣絲菌素135的制備按照類似于實(shí)施例2中描述的方法制備氣絲菌素135。HPLC(Rt)25.5分鐘(柱F，流速10毫升/分鐘，洗脫液0.05％三氟乙酸∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝63∶37)；FAB-MS(M/Z)1790[M+H]+。
實(shí)施例4氣絲菌素136的制備(a)向攪拌的Fmoc-L-Orn(Boc)-OH(379毫克，0.834mmol)的DMF(6毫升)溶液中加入BOP試劑(368毫克，0.832mmol)，HOBT水合物(128毫克，0.836mmol)和N-乙基二異丙基胺(145μl，0.832mmol)。在室溫下攪拌2小時(shí)以后，向反應(yīng)混合物中加入氣絲菌素120(600毫克，0.378mmol)和N-乙基二異丙基胺(145μl，0.832mmol)的DMF(3毫升)溶液。在室溫下攪拌18小時(shí)以后，向混合物中加入哌啶(3毫升)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌10分鐘。將溶劑在真空中濃縮。將殘余物用二氯甲烷和二乙醚洗滌以除去試劑。將粗產(chǎn)品不進(jìn)一步地純化用于下一步。(b)向以上得到的粗產(chǎn)品(300毫克)的乙醇(EtOH)(10毫升)溶液中加入丙烯腈(110μl，1.68mmol)和N-乙基二異丙基胺(44μl，0.253mmol)。將混合物在室溫下攪拌14小時(shí)后，加入丙烯腈(440μl，6.72mmol)和N-乙基二異丙基胺(44μl，0.253mmol)。將混合物在室溫下攪拌22小時(shí)后，加入丙烯腈(220μl，3.36mmol)和N-乙基二異丙基胺(44μl，0.253mmol)。將混合物在室溫下攪拌6小時(shí)后，將反應(yīng)混合物在真空中濃縮。將殘余物用二氯甲烷和二乙醚洗滌以除去試劑。
在0℃下將以上得到的粗殘余物在TFA(3毫升)中攪拌30分鐘。打開反應(yīng)容器，將TFA在干燥的氮?dú)鈿饬飨抡舭l(fā)。將殘余物通過反向HPLC純化，其中詳細(xì)條件如下所示。將適當(dāng)?shù)募?jí)分合并，冷凍并冷凍干燥得到104.6毫克化合物-3，為白色無定形固體。HPLC(Rt)27.8分鐘(柱F，流速10毫升/分鐘，洗脫液0.05％三氟乙酸∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝57∶43)。(c)向化合物-3(104.6毫克，0.0596mmol)在二氧六環(huán)(3毫升)和水(3毫升)的混合物中加入10％鈀/炭(25毫克)，然后將反應(yīng)容器充滿氫氣。在室溫下攪拌16小時(shí)后，將混合物通過膜式過濾器(孔徑大小0.2毫米)過濾，然后將溶劑在真空中蒸發(fā)。將粗殘余物通過反向HPLC純化，其中詳細(xì)條件如下所示。將適當(dāng)?shù)募?jí)分合并，冷凍并冷凍干燥得到40.3毫克氣絲菌素136，為無色無定形固體。HPLC(Rt)25.8分鐘(柱F，流速10毫升/分鐘，洗脫液0.05％三氟乙酸∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝63∶37)；FAB-MS(M/Z)1761[M+H]+。
實(shí)施例5氣絲菌素133的制備(a)向氣絲菌素3單TFA鹽(2.5g)的DMF(10毫升)溶液中加入Fmoc-D-Orn(Boc)OH(850毫克)，BOP(180毫克)，HOBT(279毫克)和N-乙基二異丙基胺(0.795毫升)。將混合物在室溫下攪拌3小時(shí)后，加入哌啶(4.0毫升)。在室溫下繼續(xù)攪拌30分鐘，而后將溶劑真空中蒸發(fā)。將殘余物溶于二氯甲烷，然后滴加乙醚，得到粗產(chǎn)品白色無定形粉末。將粗產(chǎn)品用乙醚洗滌，并不經(jīng)純化用于下一步。(b)將以上得到的粗產(chǎn)品溶于DMF(20毫升)。向此溶液中加入Boc-L-Orn(Boc)OH(656毫克)，BOP(872毫克)，HOBT(302毫克)和N-乙基二異丙基胺(0.793毫升)。將混合物在室溫下攪拌3小時(shí)后，將溶劑在真空中蒸發(fā)。(c)在0℃下向以上得到的殘余物中加入TFA(15毫升)。將混合物在0℃攪拌30分鐘以后，滴加乙醚，得到白色沉淀。將其用乙醚洗滌，并用反相HPLC純化。將純凈級(jí)分合并，冷凍并冷凍干燥得到515毫克氣絲菌素133，為無色無定形固體。HPLC(Rt)19.7分鐘(柱F，流速10毫升/分鐘，洗脫液0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝60∶40)；FAB-MS(M/Z)1761[MH+]。
實(shí)施例6氣絲菌素137的制備(a)向氣絲菌素3單TFA鹽(622毫克)的二氯甲烷(16毫升)和MeOH(4毫升)溶液中加入N-Boc-氨基乙醛(120毫克)和N-乙基二異丙基胺(0.072毫升)。在室溫下攪拌1小時(shí)以后，向反應(yīng)混合物中加入氰基硼氫鈉(48毫克)和硫酸(0.04毫升)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌72小時(shí)后，將溶劑在真空中蒸發(fā)，而后加入0.1N HCl。用nBuOH提取并濃縮。(b)將殘余物溶于DMF(6毫升)，向其中加入2-(S)-[二(2-叔丁氧羰基-氨基乙基)氨基]-5-叔丁氧羰基-氨基戊酸(294毫克)，HOAt(77毫克)，HBTU(215毫克)和N-乙基二異丙基胺(0.148毫升)。在室溫下攪拌48小時(shí)后，將溶劑在真空中蒸發(fā)，而后將殘余物溶于二氯甲烷。向此溶液中加入乙醚，得到白色沉淀。將粗產(chǎn)品用乙醚洗滌，并不經(jīng)用于下一步。(c)然后在0℃下向以上得到的化合物中加入TFA(3毫升)。將混合物在0℃攪拌30分鐘以后，向反應(yīng)混合物中加入乙醚，得到白色沉淀。將其用乙醚洗滌，并用反相HPLC純化。將純凈級(jí)分合并，冷凍并冷凍干燥得到95毫克氣絲菌素137無色無定形固體。HPLC(Rt)14.6分鐘(柱F，流速10毫升/分鐘，洗脫液0.05％三氟乙酸-水∶0.05％三氟乙酸-乙腈＝61∶39)；FAB-MS(m/z)1776[M+H]+。
實(shí)施例A以本身常規(guī)的方式制造各自含有以下成分的可注射溶液。氣絲菌素132 20毫克無水磷酸氫二鈉 7.6毫克二磷酸氫鈉二水合物 2.0毫克乙醇150毫克蒸餾水，去離子，無菌的 850毫克總計(jì)1029.6毫克
權(quán)利要求
1.通式(I)代表的氣絲菌素和其藥學(xué)可接受的鹽 其中R1是N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-2，5-二氨基戊酰基]氨基，N-(3-氨基丙基)-N-[-5-氨基-2-[N，N-雙(2-氨乙基)氨基]戊酰]氨基，N-(3-氨基丙基)-N-[-5-氨基-2-[N-(3-氨基丙基)氨基]戊酰]氨基，N-(2-氨乙基)-N-[-5-氨基-2-[N，N-雙(2-氨乙基)氨基]戊酰]氨基或鳥氨酰-鳥氨酰氨基；R2是氫或甲基；R3是氫或羥基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的氣絲菌素，其中R1是N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-2，5-二氨基戊酰基]氨基，N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N，N-雙(2-氨基乙基)氨基]戊酰]氨基，N-(3-氨基丙基)-N-[(2R)-5-氨基-2-[N，N-雙(2-氨基乙基)氨基]戊酰]氨基，N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N-(3-氨基丙基)氨基]戊酰]氨基，N-(2-氨基乙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N，N-雙(2-氨基乙基)氨基]戊酰]氨基或(L)-鳥氨酰-(D)-鳥氨酰氨基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的氣絲菌素，其中R2和R3為氫。
4.根據(jù)權(quán)利要求1到3任一項(xiàng)的氣絲菌素，其中R1是N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-2，5-二氨基戊?；鵠氨基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1到3任一項(xiàng)的氣絲菌素，其中R1是(L)-鳥氨酰-(D)-鳥氨酰氨基。
6.根據(jù)權(quán)利要求1到3任一項(xiàng)的氣絲菌素，其中R1是N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N，N-雙(2-氨基乙基)氨基]戊酰]氨基。
7.根據(jù)權(quán)利要求1到3任一項(xiàng)的氣絲菌素，其中R1是N-(3-氨基丙基)-N-[(2R)-5-氨基-2-[N，N-雙(2-氨基乙基)氨基]戊酰]氨基。
8.根據(jù)權(quán)利要求1到3任一項(xiàng)的氣絲菌素，其中R1是N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N-(3-氨基丙基)氨基]戊酰]氨基。
9.根據(jù)權(quán)利要求1到3任一項(xiàng)的氣絲菌素，其中R1是N-(2-氨基乙基)-N-[(2S)-5-氨基-2-[N，N-雙(2-氨基乙基)氨基]戊酰]氨基。
10.根據(jù)權(quán)利要求1到4任一項(xiàng)的氣絲菌素，其中R1是N-(3-氨基丙基)-N-[(2S)-2，5-二氨基戊?；鵠氨基而R2和R3是氫。
11.一種制備權(quán)利要求4的化合物的方法，該方法包括(a)用丙烯腈使通式(II)的化合物[其中R1是氨基；R2和R3如權(quán)利要求1所定義]N-烷基化，(b)用N-保護(hù)的鳥氨酸(ornitine)使得到的化合物?；?c)除去氨基保護(hù)基(P1和P2)，以及(d)還原氰基。
12.一種制備權(quán)利要求6和7的化合物的方法，該方法包括(a)用丙烯腈使通式(II)的化合物[其中R1是氨基；R2和R3如權(quán)利要求1所定義]N-烷基化，(b)用N-保護(hù)的鳥氨酸(ornitine)使得到的化合物酰化，(c)除去鄰近于酮基的氨基保護(hù)基(P1)，(d)用N-保護(hù)的氨基-乙醛進(jìn)行還原N-烷基化，(e)除去剩余的氨基保護(hù)基(P2)，以及(f)還原氰基。
13.一種制備權(quán)利要求9的化合物的方法，該方法包括(a)用N-保護(hù)的氨基-乙醛使通式(II)的化合物[其中R1是氨基；R2和R3如權(quán)利要求1所定義]還原N-烷基化，(b)用N-保護(hù)的鳥氨酸(ornitine)使得到的化合物酰化，(c)除去鄰近于酮基的氨基保護(hù)基(P1)，(d)用N-保護(hù)的氨基-乙醛進(jìn)行還原N-烷基化，(e)除去剩余的氨基保護(hù)基(P2)，以及(f)還原氰基。
14.一種制備權(quán)利要求8的化合物的方法，該方法包括(a)用丙烯腈使通式(II)的化合物[其中R1是氨基；R2和R3如權(quán)利要求1所定義]N-烷基化，(b)用N-保護(hù)的鳥氨酸(ornitine)使得到的化合物酰化，(c)除去鄰近于酮基的氨基保護(hù)基(P1)，(d)用丙烯腈N-烷基化，(e)除去剩余的氨基保護(hù)基(P2)，以及(f)還原氰基。
15.一種制備權(quán)利要求5的化合物的方法，該方法包括(a)用N-保護(hù)的鳥氨酸(ornitine)的酰化通式(II)的化合物[其中R1是氨基；R2和R3如權(quán)利要求1所定義]，(b)除去鄰近于酮基的氨基保護(hù)基(P1)，(c)用N-保護(hù)的鳥氨酸(ornitine)?；?，以及(d)除去剩余的氨基保護(hù)基(P2)。
16.權(quán)利要求1到10中任一項(xiàng)氣絲菌素在醫(yī)藥治療中的用途。
17.一種包含權(quán)利要求1到10的任一項(xiàng)的化合物與藥學(xué)可接受的載體的藥物組合物。
18.權(quán)利要求1到10中任一項(xiàng)化合物在制備治療或預(yù)防真菌病的藥物中的用途。
19.一種用于預(yù)防和/或治療由致病微生物所引起的傳染病的方法，該方法包括給予人或動(dòng)物權(quán)利要求1到10中任一項(xiàng)的化合物。
20.以上描述的發(fā)明。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的由式(I)代表的氣絲菌素(其中R
文檔編號(hào)A61K38/00GK1396929SQ01803638
公開日2003年2月12日 申請(qǐng)日期2001年1月11日 優(yōu)先權(quán)日2000年1月17日
發(fā)明者高知雅美, 增淵一尚, 村田武, 岡田武博, 真間信雄 申請(qǐng)人:巴斯利爾藥物股份公司