專利名稱：：含花色素原的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及含花色素原(proanthocyanidin)的組合物，本發(fā)明還涉及含有該組合物的飲料、食品、化妝品和藥物，另外本發(fā)明還涉及穩(wěn)定花色素原的方法。花色素原是一種許多植物均含有的物質(zhì)，已知其具有強的抗氧化作用。然而，在氧存在下，該物質(zhì)是不穩(wěn)定的。也就是說，在氧存在下，該物質(zhì)因迅速發(fā)生氧化聚合作用而變色。在酒中穩(wěn)定花色素原的已知方法包括把焦亞硫酸鉀混合到酒中。在蘋果汁中穩(wěn)定花色素原的已知方法包括把蘋果汁同抗壞血酸混合。另外，在JP-A-6-336420(此處所用的術(shù)語“JP-A”指未審查的公開日本專利申請，術(shù)語“JP-B”指已審查的公開日本專利申請)中公開了一種化妝品，在該化妝品中應(yīng)用亞硫酸氫鈉、1-羥基乙烷-1,1-二磺酸和二亞乙基三胺五乙酸或植酸以防止花色素原因時間增長而變色。另外，關(guān)于穩(wěn)定多元酚或預(yù)防它們變色的方法或組合物還記載在下列文獻中(1)JP-B-8-2819公開了通過混合卟啉-鋅絡(luò)合物和有機還原試劑來防止多元酚變色的方法；(2)JP-A-5-112441公開了一種皮膚用化妝品，其中把多元酚化合物同蔗糖-高級脂肪酸酯混合；(3)JP-A-5-163131公開了一種皮膚用化妝品，其中把多元酚化合物同烷基糖苷混合；(4)第2,744,572號日本專利公開了預(yù)防含多元醇或糖類的外用皮膚制劑脫色的方法，所述方法包括把多元醇或糖類同含有3個或更多酚羥基的多元酚化合物混合。本發(fā)明的目的是提供穩(wěn)定花色素原的方法，特別是用于預(yù)防例如因氧化聚合作用而脫色的方法。本發(fā)明的目的還提供具有良好穩(wěn)定性的含花色素原的組合物以及含有該組合物的飲料、食品、化妝品或藥物。本發(fā)明涉及下列(1)-(17)項(1)含有花色素原和帶羥基氨基酸的組合物或者含有花色素原和含所述氨基酸的二肽的組合物。(2)含有花色素原和帶羥基氨基酸的組合物。(3)含有花色素原和含帶羥基氨基酸的二肽的組合物。(4)第(1)項所述的組合物，其中帶羥基氨基酸的濃度或含該氨基酸的二肽的濃度為總組合物的0.001-1％重量。(5)第(1)-(4)項中任意一項所述的組合物，其中花色素原的濃度為總組合物的0.01-20％重量。(6)第(1)、(2)、(4)或(5)項所述的組合物，其中帶羥基氨基酸為L-絲氨酸或L-蘇氨酸。(7)第(1)、(3)、(4)或(5)項所述的組合物，其中含帶羥基氨基酸的二肽為甘氨?；?L-絲氨酸。(8)第(1)-(7)項任意一項所述的組合物，其中花色素原來源于葡萄屬(Vitis)、蘋果屬(Malus)、大麥屬(Hordeum)、柿樹屬(Diospyros)、椰子屬(Cocos)、可可屬(Theobroma)、松屬(Pinus)、越秸屬(Vaccinium)、草莓屬(Fragaria)、菜豆屬(Phaseolus)或花生屬(Arachis)植物。(9)含有第(1)-(8)項任意一項所述組合物和適合用于飲料的添加劑的組合物。(10)第(9)項的組合物，其中所述飲料為水果酒、水果汁飲料或保健飲料。(11)含有第(1)-(8)項任意一項所述組合物和適合用于食品的添加劑的組合物。(12)含有第(1)-(8)項任意一項所述組合物和可化妝用載體的組合物。(13)含有第(1)-(8)項任意一項所述組合物和可藥用載體的組合物。(14)穩(wěn)定花色素原的方法，包括把花色素原和帶羥基氨基酸混合。(15)穩(wěn)定花色素原的方法，包括把花色素原和含有帶羥基氨基酸的二肽混合。(16)花色素原穩(wěn)定劑，所述穩(wěn)定劑包括帶羥基氨基酸。(17)花色素原穩(wěn)定劑，所述穩(wěn)定劑包括含帶羥基氨基酸的二肽。帶羥基氨基酸的例子包括絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸等，其中優(yōu)選L-氨基酸。在這些氨基酸中，L-絲氨酸和L-蘇氨酸是特別優(yōu)選的。含有帶羥基氨基酸的二肽的例子包括甘氨?；z氨酸、甘氨?；K氨酸和甘氨?；野彼岬?，其中優(yōu)選甘氨?；?L-絲氨酸。帶羥基氨基酸或含帶羥基氨基酸的二肽可以以水合物或溶劑化物形式存在。盡管帶羥基氨基酸或含帶羥基氨基酸的二肽可以經(jīng)已知方法合成得到，它還可以按照市售產(chǎn)品購買得到。關(guān)于花色素原，可以舉例出由兩個或更多下式(Ⅰ)代表的黃烷-7-醇衍生物鍵合在一起的一類化合物。在花色素原中，一個黃烷-7-醇衍生物的一個碳原子同另一個黃烷-7-醇衍生物的相同或不同碳原子可以鍵合在一起，例如通過單鍵或醚鍵(經(jīng)氧原子)等相連接。對于醚鍵，可以通過黃烷-7-醇衍生物的一部分羥基完成。當(dāng)然，在該鍵中有關(guān)的碳原子可以是能夠應(yīng)用的任何碳原子。另外，不管通過何種鍵連接，黃烷-7-醇衍生物的結(jié)構(gòu)單位可以各自相同或不同。需要的花色素原優(yōu)選具有2-10個、更優(yōu)選具有2-4個黃烷-7-醇衍生物結(jié)構(gòu)單位。根據(jù)本發(fā)明，各種類型的花色素原可單獨應(yīng)用或者以兩個或更多組成的混合物形式應(yīng)用。在式(Ⅰ)中，R2和R3獨立地為氫原子、羥基、棓?；趸蜻拎咸烟茄趸?，R1、R4、R5、R6、R7和R8獨立地代表氫原子或羥基。式(Ⅰ)所代表的黃烷-7-醇衍生物的優(yōu)選的舉例性例子包括兒茶素、表兒茶素、沒食子茶素、表沒食子茶素、阿夫兒茶精(afzelechin)和表阿夫兒茶精(epiafzelechin)。花色素原中黃烷-7-醇衍生物之間結(jié)合模式的例子如下列式(Ⅱ-a)、(Ⅱ-b)和(Ⅱ-c)所示。在式(Ⅱ-a、Ⅱ-b和Ⅱ-c)中，R2a、R2b、R2c、R2d、R2e、R2f、R3a、R3b、R3c、R3d、R3e和R3f獨立地代表氫原子、羥基、棓酰基氧基或吡喃葡萄糖氧基；R1b、R1d、R1f、R4a、R4b、R4c、R4d、R4e、R4f、R5a、R5c、R5d、R5e、R6a、R6b、R6c、R6d、R6e、R6f、R7a、R7b、R7c、R7d、R7e、R7f、R8a、R8b、R8c、R8d、R8e和R8f獨立地代表氫原子或羥基。黃烷-7-醇衍生物的二聚物的例子包括表兒茶素和兒茶素的結(jié)合形式例如表兒茶素-(4β→8)-兒茶素、表兒茶素二聚體例如表兒茶素-(4β→6)表兒茶素或表兒茶素-(4β→8)-表兒茶素(花色素原B-2)和兒茶素二聚體例如兒茶素-(4α→8)-兒茶素；黃烷-7-醇衍生物三聚物的例子包括表兒茶素三聚物例如表兒茶素-(4β→8)-表兒茶素-(4β→8)-表兒茶素或表兒茶素-(4β→8)-表兒茶素-(4β→6)-表兒茶素、兒茶素三聚物例如兒茶素-(4α→8)-兒茶素-(4α→8)-兒茶素以及表兒茶素和兒茶素的混合三聚物例如表兒茶素-(4β→8)-表兒茶素-(4β→8)-兒茶素。本發(fā)明的花色素原還包括那些把沒食子酸或糖類如葡萄糖或鼠李糖加入到前述化合物中的化合物?；ㄉ卦梢杂卸喾N異構(gòu)體形式例如光學(xué)異構(gòu)體，本發(fā)明的花色素原還包括所有這些異構(gòu)體及其混合物?？梢詮亩喾N植物中提取和分離得到花色素原，其中所述植物例如葡萄(樹)、蘋果、大麥、柿子(樹)、椰子、可可、松樹、烏飯樹、草莓、adzuki豆和花生。這樣的植物優(yōu)選屬于葡萄屬、蘋果屬、大麥屬、柿樹屬、椰子屬、可可屬、松屬、越秸屬、草莓屬、菜豆屬或花生屬植物。花色素原還可以任選通過從合適提取物的發(fā)酵產(chǎn)品例如酒、蘋果酒或啤酒中純化得到?？梢酝ㄟ^下列已知方法從植物中提取和純化。在合適的季節(jié)收集作為起始原料的植物合適部分例如果實、種子、葉子、莖、根或根莖，直接將其作為提取原料，或者更優(yōu)選地，首先把收集的植物部分進行干燥步驟例如空氣干燥后再進行提取?？梢园凑找阎椒◤氖占奶崛〔牧现刑崛』ㄉ卦璠化學(xué)和制藥公報(Chemical&PharmaceuticalBulletin),38,321(1990)和40,889-898(1992)]。如其中所述，把起始原料粉碎或切細，然后用溶劑提取。關(guān)于提取溶劑，一種或多種親水性或親脂性溶劑可以單獨應(yīng)用、連續(xù)應(yīng)用或混在一起應(yīng)用。這樣的溶劑優(yōu)選自例如水、醇類例如乙醇、甲醇和異丙醇、酮類例如丙酮和甲基乙基酮以及酯類例如乙酸甲酯和乙酸乙酯。提取溫度通常為0-100℃、優(yōu)選5-50℃。提取時間約1小時到10天，溶劑用量通常為基于干原料的1-30倍重量、優(yōu)選5-10倍重量。可以通過攪拌或浸泡和靜置來進行提取步驟。如果情況(occasion)需要，提取步驟可以重復(fù)2次或3次。關(guān)于由通過從如上制備的粗提取物(或從植物榨取液或樹液)過濾或離心來除去不溶性殘余物得到的提取物中得到的花色素原的純化方法(純化方法A)，可以應(yīng)用任何方法。優(yōu)選方法包括用于分離純化生藥的已知方法。更可取的方法應(yīng)用例如兩相溶劑分配、柱色譜和/或制備性高效液相色譜等技術(shù)，這些技術(shù)可以單獨應(yīng)用或聯(lián)合應(yīng)用。兩相溶劑分配的例子所包括的方法中，一個方法是用溶劑例如正己烷或石油醚提取其中的油溶性成分和色素，然后除去；還有一個方法是把提取物分配到溶劑例如正丁醇或甲基乙基酮和水中，從溶劑相中回收花色素原。柱色譜的例子包括離子交換柱色譜(應(yīng)用的載體例如AmberliteIR-120B或AmberliteIRA-402)、吸附柱色譜(應(yīng)用的載體例如正相硅膠、反相硅膠、DiaionHP-20或SepaheadsSP-207)和凝膠過濾(應(yīng)用的載體例如SephadexLH-20)。制備性高效液相色譜的例子包括應(yīng)用反相柱的方法(含有的載體例如十八烷基硅膠)和應(yīng)用正相柱的方法(含有的載體例如硅膠)。另外，可以按照需要把這些方法單獨應(yīng)用或聯(lián)合應(yīng)用和重復(fù)應(yīng)用。通過這種純化方法從粗提取物中除去雜質(zhì)包括水溶性離子物質(zhì)如鹽、非離子物質(zhì)如糖類和多糖、油性物質(zhì)和色素，花色素原因此而被純化。另外，可以按照公開的方法，通過純化得到從葡萄籽提取的花色素原，例如按照ActaDerm.Venereol.(Stockh.),78,428(1998)中公開的方法進行。關(guān)于花色素原的合成方法，表兒茶素或兒茶素二聚體的制備方法記載在JournaloftheChemicalSociety:PerkinTransactionsI,1535-1543(1983)中。因此，按照該文獻記載的方法或其改良方法，可以合成各種類型的花色素原?？梢酝ㄟ^下列已知方法得到含花色素原的植物提取物發(fā)酵產(chǎn)品。也就是說，對于單一的發(fā)酵酒精例如酒和蘋果酒，可以用酵母菌使果汁進行酒精發(fā)酵來制備得到。例如，在由葡萄汁生產(chǎn)紅酒的過程中，把葡萄粉碎，將其同抗氧化劑混合，然后將其同2-5重量％的酵母菌混合，把該混合物進行主發(fā)酵7-10天。然后，壓榨該混合物除去皮和沉淀物，將其轉(zhuǎn)移至裝有發(fā)酵蓋的桶中，然后讓其在約10℃下進一步發(fā)酵直至殘余糖為0.2％或更低。然后，過濾掉渣滓例如酒石、鞣酸和蛋白質(zhì)，再儲存濾液，放置數(shù)年，這樣制備出酒。對于多重發(fā)酵類型的發(fā)酵酒例如啤酒，其是這樣制備的應(yīng)用谷類植物作為起始原料，首先用淀粉酶進行糖化作用，然后完成酒精發(fā)酵過程。例如，在應(yīng)用大麥作為主原料生產(chǎn)啤酒的過程中，從麥芽和水制備得到麥芽汁，然后加入酵母菌發(fā)酵。將其在7-10℃下進行10天的主發(fā)酵過程，轉(zhuǎn)移至貯蓄槽中，然后在0-2℃下進行60天的后發(fā)酵過程。后發(fā)酵過程完成后，進行過濾消毒或加熱消毒得到需要的發(fā)酵產(chǎn)品。分段關(guān)于從這些醇發(fā)酵產(chǎn)品中得到的花色素原的純化方法，可以應(yīng)用類似于純化方法A所例舉的方法。從植物或酒精發(fā)酵產(chǎn)品中得到的花色素原的舉例性實施例包括從葡萄籽中提取的花色素原、從紅酒中提取和純化的產(chǎn)品、從蘋果中得到的花色素原、從松樹中得到的花色素原和純化的花色素原低聚物。根據(jù)本發(fā)明的組合物，花色素原含量并不具體地被其用途或其它條件所限制。對于用于特定用途例如飲料、食品、化妝品和藥物等的組合物來說，優(yōu)選花色素含量為基于組合物總量(所有配方組份的總重量)的0.01-20％重量、更優(yōu)選0.1-10％重量。根據(jù)本發(fā)明的組合物，帶羥基氨基酸或含帶羥基氨基酸的二肽的含量沒有具體限制，但可以根據(jù)其用途或其它條件例如花色素原類型來任選地確定其含量。對用于特定用途例如飲料、食品、化妝品和藥物等的組合物來說，優(yōu)選其含量為基于組合物總量(所有配方組份的總重量)的0.001-1％重量、更優(yōu)選0.005-0.5％重量、最優(yōu)選0.01-0.3％重量。本發(fā)明的組合物還可以含有需要的抗氧化劑例如亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鉀、抗壞血酸、erythorbicacid或生育酚。另外，通過任選地加入適合各種用途的添加劑，本發(fā)明的組合物可以有多種用途例如飲料、食品、化妝品或藥物。關(guān)于本發(fā)明的飲料形式，可以舉例出酒精飲料例如果酒以及軟飲料、保健飲料、提神飲料(staminadrink)、維生素飲料和果汁飲料。本發(fā)明的飲料可以通過把帶羥基氨基酸或含帶羥基氨基酸的二肽同含花色素的飲料混合制備得到，其中含花色素的飲料例如(1)通過壓榨植物原料得到并可以作為例如蘋果汁、葡萄汁或越橘(Blueberry)汁的果汁飲料，(2)通過從植物原料及其加工產(chǎn)品包括各種茶例如大麥茶、綠茶、烏龍茶、紅茶、柿樹葉茶和枸杞茶中的熱水提取物中得到的飲料，(3)通過對植物壓榨液進行酒精發(fā)酵得到的飲料，其中的植物壓榨液包括果酒例如葡萄酒、蘋果酒和越橘酒以及酒精飲料例如啤酒和發(fā)泡酒或(4)通過把果實浸泡在酒精中然后提取所述提取物得到的飲料，例如木瓜酒或李子酒。另外，軟飲料、保健飲料和提神飲料可以通過常規(guī)方法制備除加入花色素和氨基酸或二肽外，還可以根據(jù)情況需要加入合適添加劑例如蛋白質(zhì)、糖類、脂類、微量元素、維生素、乳化劑或調(diào)味品。關(guān)于本發(fā)明的食品形式，可以舉例如下食品例如啤酒、膠囊、粉劑、丸劑、凝膠、冷凍食品、粉劑食品、片狀食品、瓶裝食品、罐裝食品和干餾袋(retortpouch)食品和加工形式例如天然液體食品、半消化營養(yǎng)食品和組合物營養(yǎng)食品。通過把食品中常用原料例如蛋白質(zhì)、糖類、脂類、微量元素、維生素、乳化劑和調(diào)料加入到花色素原和帶羥基氨基酸或含帶羥基氨基酸的二肽中，按照常規(guī)方法可以制備本發(fā)明食品。另外，通過加工水果(例如各種水果的各種果醬和果汁產(chǎn)品)得到的產(chǎn)品可以作為本發(fā)明的食品例子。關(guān)于本發(fā)明的化妝品形式，可以舉出的例子如液體產(chǎn)品、凝膠狀產(chǎn)品、乳劑樣產(chǎn)品和固體產(chǎn)品例如乳膏。通過把化妝品中常用的原料加入到花色素原、帶羥基氨基酸或含帶羥基氨基酸的二肽中，按照常規(guī)方法制備本發(fā)明的化妝品，其中化妝品中常用的原料例如固體或半固體油、液體油、保濕劑、潤膚劑、表面活性劑、水溶性聚合物、油溶性聚合物、有機或無機色素、有機粉劑、紫外線吸收劑、抗炎劑、冷凍劑、抗菌劑、抗氧化劑、pH-調(diào)節(jié)劑(例如檸檬酸鹽緩沖液)、殺菌劑、維生素、生藥或生藥組份、皮膚軟化劑、芳香劑、色素、乙醇或純化水。關(guān)于本發(fā)明的化妝品，可以舉出的例子有洗面乳液(facelotions)、化妝液、保濕乳液、乳液(milkylotions)、膏霜、粉包(packs)、生發(fā)油(hairtonic)和香波。關(guān)于本發(fā)明的藥物形式，可以舉出的例子有片劑、膠囊、粉狀制劑、丸劑、粉劑、finesubtilaes、粒劑、糖漿劑和錠劑。本發(fā)明的藥物含有花色素原、帶羥基氨基酸或含帶羥基氨基酸的二肽和根據(jù)情況需要的藥物的其它有效成分，應(yīng)用賦形劑按照通常的方式制備。賦形劑的例子包括糖類(如山梨糖醇、葡萄糖和乳糖)、糊精、淀粉、無機物質(zhì)(如碳酸鈣和硫酸鈣)、結(jié)晶纖維素、蒸餾水、芝麻油、玉米油、橄欖油和棉子油，但還可以應(yīng)用任何其它通常應(yīng)用的賦形劑。在藥物制備過程中，可以應(yīng)用添加劑例如粘合劑、潤滑劑、分散劑、懸浮劑、乳化劑、稀釋劑、緩沖劑、抗氧化劑和抗菌劑。本發(fā)明還提供穩(wěn)定花色素原的方法，包括把花色素原同帶羥基氨基酸或含帶羥基氨基酸的二肽混合。按照對本發(fā)明組合物和本發(fā)明飲料、食品、化妝品和藥物的說明，可以通過設(shè)定條件例如帶羥基氨基酸或含帶羥基氨基酸的二肽的加入量來完成本方法。本發(fā)明還提供花色素原穩(wěn)定劑，其含有帶羥基氨基酸或含帶羥基氨基酸的二肽，可以按照關(guān)于本發(fā)明組合物的和本發(fā)明飲料、食品、化妝品和藥物的說明，設(shè)定條件例如帶羥基氨基酸或含帶羥基氨基酸的二肽的加入量。另外，實施本發(fā)明的方式在實施例、測試實施例和參照實施例中舉例說明。在下文中，(w/w)表示(重量/重量)，(v/v)表示(體積/體積)。表1(1)組合物1-11的組成[％(w/w)]組份組合物編號123456L-絲氨酸0.030.060.100.30L-蘇氨酸0.030.06谷氨酰胺絲氨酸PB-2111111檸檬酸0.250.250.250.250.250.25檸檬酸鈉0.250.250.250.250.250.25乙醇707070707070純化水28.4728.4428.4028.2028.4728.44PB-2花色素原B-2(此后應(yīng)用相同)表1(2)組合物1-11的組成[％(w/w)]組份組合物編號7891011L-絲氨酸L-蘇氨酸0.100.30谷氨酰胺絲氨酸0.030.060.30PB-211111檸檬酸0.250.250.250.250.25檸檬酸鈉0.250.250.250.250.25乙醇7070707070純化水28.4028.2028.4728.4428.20實施例2在攪拌下混合下表2中所示組份以溶解固體物質(zhì)，由此制備本發(fā)明的組合物12-20。按照參照實施例3中的方法制備花色素原B-2。表2(1)組合物12-20的組成[％(w/w)]組份組合物編號1213141516L-絲氨酸0.030.060.100.30L-蘇氨酸0.03谷氨酰胺絲氨酸PB-211111檸檬酸0.250.250.250.250.25檸檬酸鈉0.250.250.250.250.25亞硫酸氫鈉0.050.050.050.050.05乙醇7070707070純化水28.4228.3928.3528.1528.42表2(2)組合物12-20的組成[％(w/w)]組份組合物編號17181920L-絲氨酸L-蘇氨酸0.060.100.30谷氨酰胺絲氨酸0.06PB-21111檸檬酸0.250.250.250.25檸檬酸鈉0.250.250.250.25亞硫酸氫鈉0.050.050.050.05乙醇70707070純化水28.3928.3528.1528.39實施例3在攪拌下混合下表3中所示組份以溶解固體物質(zhì)，由此制備本發(fā)明的組合物21-24。按照參照實施例3中的方法制備花色素原B-2。表3組合物21-24的組合物[％(w/w)]組份組合物編號21222324L-蘇氨酸0.030.060.100.30PB-21111檸檬酸0.250.250.250.25檸檬酸鈉0.250.250.250.25純化水98.4798.4498.4098.20實施例4蘋果汁的制備把10gL-蘇氨酸加入到100kg由參照實施例1中得到的混濁蘋果汁中，得到蘋果汁產(chǎn)品，將其裝入到紙包裝容器中得到終產(chǎn)品。實施例5葡萄酒的制備把10gL-蘇氨酸加入到100kg由參照實施例2中得到的桶裝葡萄發(fā)酵液中，攪拌該混合物使均勻溶解得到一產(chǎn)品，將其裝入到玻璃容器中得到終產(chǎn)品。實施例6果醬的制備越橘100kg砂糖60kg檸檬汁1kgL-絲氨酸0.03kg(制備方法)把砂糖加入到洗過的漿果中，將混合物加熱30分鐘。冷卻后，把檸檬汁和谷氨酰胺-L-絲氨酸加入到其中，均勻混合。將其裝入到玻璃容器中得到終產(chǎn)品。實施例7保健飲料的制備來源于葡萄籽的花色素原(參照實施例4)1.0g甘氨酰胺-L-絲氨酸0.1g苯甲酸鈉1.0g果糖10.0g香精(果實混合物)適量色素(越橘色素)適量純化水余量總量1,000g(制備方法)攪拌下將上述混合物均勻溶解，裝入瓶中，加熱處理后得到終產(chǎn)品。實施例8洗面乳液的制備(油相組份)香料(薄荷醇)0.05g聚氧乙烯(60mol)硬化的蓖麻油(由NipponEmulsion制備)2.0g1,3-丁二醇5.0g(水相組份)花色素原B-2(參照實施例3)0.5gL-絲氨酸0.06g甘油5.0g對羥基苯甲酸甲酯0.1g檸檬酸0.1g檸檬酸鈉0.2g乙醇8.0g純化水余量油相組份和水相組份總量100.0g(制備方法)分別將油相組份和水相組份均勻溶解，攪拌下把油相加入到水相中，由此得到洗面乳液。實施例9乳液的制備(油相組份)角鯊?fù)?.0g麥胚油2.0g單硬脂酸甘油酯1.0g聚氧乙烯十八?；?NipponEmulsion制備)4.0g對羥基苯甲酸丙酯0.1g(水相組份)花色素原B-2(參照實施例3)0.5gL-蘇氨酸0.06g對羥基苯甲酸甲酯0.1g丙二醇0.1g聚乙二醇6000(由NipponOil&Fats制備)0.2g1％透明質(zhì)酸鈉5.0g純化水余量油相組份和水相組份總量100.0g(制備方法)在80℃下加熱使油相組份和水相組份分別變成均勻狀態(tài)，攪拌下把水相加入到油相中，由此得到乳液。實施例10生發(fā)油的制備(油相組份)乙醇70gdl-α-生育酚乙酸酯0.2g泛酸醇(Pantothenylalcohol)0.3g聚氧乙烯(60mol)硬化的蓖麻油(由NipponEmulsion制備)1.0g丙二醇3.0g香料(薄荷醇)微量(水相組份)花色素原B-21.0g(參照實施例3)L-絲氨酸0.06g生物素0.0001gSwertiae提取物3.0g檸檬酸0.04g檸檬酸鈉0.03g亞硫酸氫鈉0.1g純化水余量油相組份和水相組份的總量100.0g(制備方法)在室溫下分別把油相組份和水相組份制備成均勻狀態(tài)，然后在攪拌下把水相加入到油相中，由.此得到生發(fā)油。實施例11片劑的制備來源于葡萄籽的花色素原(參照實施例4)10.0g甘氨酰胺-L-絲氨酸1.0g乳糖89.0g干玉米淀粉2.0g滑石1.8g硬脂酸鈣0.2g(制備方法)均勻混合這些組份，應(yīng)用單沖片劑壓片機(singleshottabletmakingmachine)制備成片劑，由此制備得到每片重量為250mg、直徑為7mm的片劑。實施例12維生素飲料的制備來源于葡萄籽的花色素原(參照實施例4)0.3gL-絲氨酸0.03g?；撬?.0g維生素B10.001gEeutherocock提取物(由MorinagaMilkIndustry制備)0.004g抗壞血酸0.1g檸檬酸0.5g果糖-葡萄糖糖漿(F-55由SanmatsuKogyo制備)20g苯甲酸鈉0.04g香料(fruitsmix)適量純化水余量總量100.0g(制備方法)攪拌下將這些組份均勻溶解，將其裝入玻璃容器，然后加熱處理得到所述產(chǎn)品。測試實施例1測定花色素原隨時間增長的顏色變化把實施例1-3中得到的組合物1-12、14-20和22-24在50℃下儲存1周，然后在波長400nm處測定組合物1-12、14-20、22-24及其對照組各個組合物的吸光度(光程1cm)。在此情況下，對照組組合物的組份與它們各自的組合物組份相同，但不含有帶羥基氨基酸或不含有含帶羥基氨基酸的二肽。結(jié)果如表4-6所示。表450℃下儲存1周后的顏色變化[70％(w/w)的乙醇水溶液]測試物質(zhì)吸光度對照組(組合物1-4)0.607組合物10.420組合物20.343組合物30.294組合物40.376對照組(組合物5-8)0.679組合物50.360組合物60.252組合物70.187組合物80.188對照組(組合物9-11)0.634組合物90.541組合物100.493組合物110.547表5在50℃下儲存1周后的顏色變化[70％(w/w)的乙醇水溶液]測試物質(zhì)吸光度對照組(組合物12-15)0.284組合物120.248組合物140.231組合物150.265對照組(組合物16-19)0.305組合物160.233組合物170.178組合物180.150組合物190.118對照組(組合物20)0.224組合物200.207表6在50℃下儲存1周后的顏色變化(水溶液)測試物質(zhì)吸光度對照組(組合物21-24)0.736組合物220.629組合物230.659組合物240.605基于上述結(jié)果，不難看出同對照組相比，本發(fā)明的組合物發(fā)生較少的周期顏色變化。測試實施例2花色素原的穩(wěn)定性測試把實施例2中獲得的組合物12-14和16-19、實施例3中得到的組合物22及其對照組在50℃下儲存1周，然后應(yīng)用高效液相色譜(HPLC)在下列分析條件下測定花色素原B-2的含量。在此情況下，對照組的組份與相對應(yīng)的組合物組份相同，但不含有帶羥基氨基酸或不含有含帶羥基氨基酸的二肽。(HPLC分析條件)柱InertsilODS-2(直徑4.6mm×柱長250mm)，由GLScience制備移動相乙腈/0.05％三氟乙酸(9/91體積比)檢測器UV280nm另外，應(yīng)用下列公式計算表中花色素原B-2的保留比花色素B-2的保留比=A/B×100(％)A測試前的花色素原B-2量B:1周后的花色素原B-2量測試實施例2的結(jié)果如表7和表8所示。表7在50℃時儲存1周的花色素原B-2保留比[70％(w/w)的乙醇水溶液]測試物質(zhì)保留比(％)對照組(組合物12-14)93.61組合物1298.66組合物13102.40組合物1499.88對照組(組合物16-19)93.52組合物1696.22組合物17100.68組合物1899.65組合物1995.80表8在50℃下儲存1周后花色素原B-2的保留比(水溶液)測試物質(zhì)保留比(％)對照組(組合物22)94.41組合物2299.00基于上述結(jié)果，容易理解，同對照組組合物相比，本發(fā)明組合物提供良好穩(wěn)定性的花色素原。參照實施例1混濁蘋果汁的制備把1噸洗靜的“富士”(“Fuji”)蘋果加入到壓碎機中，再向其中加入10kg10％的抗壞血酸。然后，加壓來壓榨果汁，用60目篩網(wǎng)過篩。然后，用快速滅菌機(flashsterilizationmachine)將其在95℃下滅菌20秒鐘，立即冷卻，離心后得到混濁蘋果汁。參照實施例2桶裝葡萄發(fā)酵液的制備把10噸“CabemetSauvignon”葡萄加入到壓碎機中，再向其中加入800g焦亞硫酸鉀，然后加入3％的酵母菌，讓混合物在20℃下進行10天主發(fā)酵。然后，加壓除去殼和沉淀物，將其轉(zhuǎn)移至裝有發(fā)酵蓋的桶中，在15℃下進行后發(fā)酵過程。之后，過濾掉渣滓例如酒石、鞣酸和蛋白質(zhì)，然后把濾液儲存2年完成熟化過程。參照實施例3從蘋果汁中純化花色素原B-2(表兒茶素-(4β→8)-表兒茶素)的方法把21,120kg蘋果汁加入到裝有DiaionHP20樹脂(由MitsubishiChemical制備)的柱(直徑60cm×柱長88.5cm體積250升)上，其中柱預(yù)先用水平衡。用1,000升去離子水和500升15％(v/v)甲醇水溶液洗滌柱。然后，用500升45％(v/v)甲醇水溶液洗脫有關(guān)物質(zhì)。弄干洗脫液，得到9450g干物質(zhì)。把1,465g部分上述干物質(zhì)溶解于25％(v/v)的甲醇水溶液中，將其裝入到裝有SephadexLH-20(由Pharmacia制備)的柱(直徑18cm×長度39.3cm，體積10升)上，其中所述柱預(yù)先用25％(v/v)甲醇水溶液平衡，然后按順序用20升25％(v/v)甲醇水溶液和20升50％(v/v)甲醇水溶液洗脫，目標物質(zhì)用20升75％(v/v)甲醇水溶液洗脫，然后干燥得到的洗脫液得到233g干物質(zhì)。把116g部分上述干物質(zhì)溶解于去離子水中，用制備性高效液相色譜(150mmΦ×1,000mm:ODS柱，甲醇/0.0001％乙酸水溶液=12/88)，這樣得到16.5g花色素原B-2(純度為94％或更高)。這樣得到的花色素原B-2的1H-NMR、13C-NMR和質(zhì)譜數(shù)據(jù)與標準制品的相應(yīng)數(shù)據(jù)相同。這樣，按照測試實施例2中描述的相同分析條件，用HPLC檢測花色素原B-2的純度。參照實施例4從葡萄籽中純化花色素原按照ActaDerm.Venereol.(Stockh.),78,428(1998)中記載的方法，從“Chardonnay”葡萄籽中分離和純化花色素原得到來源于葡萄籽的花色素原，其平均聚合度為3.5，每花色素原組成單體中g(shù)alloylation比為25％(摩爾比)。按照ActaDerm.Venereol.(Stockh.),78,428(1998)中描述的方法，計算出galloylation比和平均聚合度。已經(jīng)根據(jù)本發(fā)明特定實施方案詳細地描述了本發(fā)明，顯然對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說，可以在不偏離本發(fā)明的精神和范圍的前提下對本發(fā)明作出各種變化和改進。本申請以日本專利申請2000-83647(申請日2000年3月24日)為基礎(chǔ)，該申請在此引入作為參考。權(quán)利要求1.一種組合物，含有花色素原和帶羥基氨基酸或含有花色素原和含帶羥基氨基酸的二肽。2.一種組合物，含有花色素原和帶羥基氨基酸。3.一種組合物，含有花色素原和含帶羥基氨基酸的二肽。4.權(quán)利要求1的組合物，其中帶羥基氨基酸或含所述氨基酸的二肽的濃度為總組合物的0.001-1％重量。5.權(quán)利要求1-4任意一項的組合物，其中花色素原的濃度為總組合物的0.01-20％重量。6.權(quán)利要求1、2或4的組合物，其中帶羥基氨基酸為L-絲氨酸或L-蘇氨酸。7.權(quán)利要求5的組合物，其中帶羥基氨基酸是L-絲氨酸或L-蘇氨酸。8.權(quán)利要求1、3或4的組合物，其中含帶羥基氨基酸的二肽為甘氨酰-L-絲氨酸。9.權(quán)利要求5的組合物，其中含帶羥基氨基酸的二肽為甘氨酰-L-絲氨酸。10.權(quán)利要求1-4任意一項的組合物，其中花色素原來源于葡萄屬、蘋果屬、大麥屬、柿樹屬、椰子屬、可可屬、松屬、越秸屬、草莓屬、菜豆屬或花生屬植物。11.權(quán)利要求5的組合物，其中花色素原來源于葡萄屬、蘋果屬、大麥屬、柿樹屬、椰子屬、可可屬、松屬、越秸屬、草莓屬、菜豆屬或花生屬植物。12.權(quán)利要求6的組合物，其中花色素原來源于葡萄屬、蘋果屬、大麥屬、柿樹屬、椰子屬、可可屬、松屬、越秸屬、草莓屬、菜豆屬或花生屬植物。13.權(quán)利要求7的組合物，其中花色素原來源于葡萄屬、蘋果屬、大麥屬、柿樹屬、椰子屬、可可屬、松屬、越秸屬、草莓屬、菜豆屬或花生屬植物。14.權(quán)利要求8的組合物，其中花色素原來源于葡萄屬、蘋果屬、大麥屬、柿樹屬、椰子屬、可可屬、松屬、越秸屬、草莓屬、菜豆屬或花生屬植物。15.權(quán)利要求9的組合物，其中花色素原來源于葡萄屬、蘋果屬、大麥屬、柿樹屬、椰子屬、可可屬、松屬、越秸屬、草莓屬、菜豆屬或花生屬植物。16.含有權(quán)利要求1-4任意一項所述組合物和飲料添加劑的組合物。17.權(quán)利要求16的組合物，其中飲料為果酒、果汁飲料或保健飲料。18.含有權(quán)利要求1-4任意一項所述組合物和食品添加劑的組合物。19.含有權(quán)利要求1-4任意一項所述組合物和化妝品用載體的組合物。20.含有權(quán)利要求1-4任意一項組合物和可藥用載體的組合物。21.穩(wěn)定花色素原的方法，包括把花色素原與帶羥基氨基酸相混合。22.穩(wěn)定花色素原的方法，包括把花色素原與含帶羥基氨基酸的二肽混合。全文摘要用于穩(wěn)定花色素原特別是用于防止例如因花色素原氧化聚合而變色的組合物和方法。所述方法應(yīng)用(和該組合物含有)花色素原和帶羥基氨基酸或含所述氨基酸的二肽。同時顯示含有該組合物的飲料、食品、化妝品或藥物。文檔編號A61K8/00GK1321444SQ01116870公開日2001年11月14日申請日期2001年3月24日優(yōu)先權(quán)日2000年3月24日發(fā)明者高橋知也,小林麻子申請人:協(xié)和發(fā)酵工業(yè)株式會社