專(zhuān)利名稱(chēng)：Il-8受體拮抗劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的含胍化合物、藥物組合物、其制備方法以及其在治療IL-8、GROα、GROβ、GROγ、ENA-78和NAP-2介導(dǎo)的疾病中的用途。
背景技術(shù)：
白細(xì)胞介素-8(IL-8)有許多不同的名稱(chēng)，諸如中性粒細(xì)胞引誘/活化蛋白-1(NAP-1)，源于單核細(xì)胞的中性粒細(xì)胞趨化因子(MDNCF)，中性粒細(xì)胞活化因子(NAF)，和T細(xì)胞淋巴細(xì)胞趨化因子。白細(xì)胞介素-8是對(duì)中性粒細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞和T細(xì)胞亞型的化學(xué)引誘劑，它是由包括暴露于TNF、IL-1α、IL-1β或LPS的巨嗜細(xì)胞、纖維母細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞在內(nèi)的多數(shù)有核細(xì)胞產(chǎn)生的，并且由暴露于LPS或諸如FMLP的趨化因子的中性粒細(xì)胞本身所產(chǎn)生。M.Baggiolini等，J.Clin.Invest.84，1045(1989)；J.Schroder等，J.Immunol.139，3474(1987)和J.Immunol.144，2223(1990)Strieter等，Science243，1467(1989)和J.Biol.Chem.264，10621(1989)；Cassatella等，J.Immunol.148，3216(1992)。
Groα、GROβ、GROγ和NAP-2還屬于趨化因子α家族，象IL-8一樣，這些趨化因子還被冠以不同的名稱(chēng)，例如GROα、β、γ分別被稱(chēng)為MGSAα、β和γ(黑素瘤生長(zhǎng)刺激活性(Melanoma Growth StimulatingActivity))，見(jiàn)Richmond等，J.Cell Physiology129，375(1986)和Chang等，J.Immunol148，451(1992)。所有擁有直接位于CXC基序之前的ELR基序的α家族的趨化因子均和IL-8β受體結(jié)合。
在體外，IL-8、GROα、GROβ、GROγ和NAP-2促進(jìn)了許多功能，它們均顯示出對(duì)中性粒細(xì)胞的化學(xué)引誘特性，同時(shí)IL-8和GROα顯示出T-淋巴細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞趨化活性。另外，IL-8可以誘導(dǎo)正常和特異反應(yīng)性的個(gè)體的嗜堿性細(xì)胞釋放組胺。另外，IL-8和GRO-α可以誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞的溶菌酶釋放和呼吸爆發(fā)。IL-8還顯示出增加了Mac-1(CD11b/CD18)在沒(méi)有de novo蛋白合成時(shí)在中性粒細(xì)胞的表面表達(dá)。這可有助于增加中性粒細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的粘附作用。許多已知的疾病是以大量的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)為特征的。正如IL-8、GROα、GROβ、GROγ和NAP-2促進(jìn)中性粒細(xì)胞的積聚和活化，這些趨化因子與包括牛皮癬和風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎在內(nèi)的很大范圍的急性和慢性炎癥疾病有關(guān)，Baggiolini等，F(xiàn)EBS Lett.307，97(1992)；Miller等，Crit.Rev.Immunol.2，17(1992)；Oppenheim等，Annu Rev.Immunol.9，617(1991)；Seitz等，J.Clin.Invest.87，463(1991)；Miller等，Am.Rev.Respir.Dis.146，427(1992)；Donnely等，Lancet341，643(1993)。另外，ELR趨化因子(那些正好在CXC基序前的含有氨基酸ELR基序)也與拮抗劑有關(guān)，Strieter等，Science258，1798(1992)。
在體外，通過(guò)結(jié)合并活化七次跨膜的G蛋白偶聯(lián)家族的受體，特別是通過(guò)結(jié)合IL-8受體，最顯著的是B受體，IL-8、GROα、GROβ、GROγ和NAP-2誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞形狀改變、趨化性、顆粒釋放和呼吸爆發(fā)，Thomas等，J.Biol.Chem.266，14839(1991)，和Holmes等，Science253，1278(1991)。此受體家族成員的非肽小分子拮抗劑的發(fā)展已經(jīng)有了先例，其綜述見(jiàn)R.Freidinger在Progress inDrug Research，Vol.40，pp.33-98，Birkhauser Verlag，Basel1993。因此，IL-8受體代表了新穎的抗炎藥物發(fā)展的充滿(mǎn)希望的靶標(biāo)。
兩種高親和力的人類(lèi)IL-8受體(77％同源性)的特征如下只與IL-8高親和力結(jié)合的IL-8Rα，以及對(duì)IL-8及GROα、GROβ、GROγ和NAP-2均有高親和力的IL-8Rβ。見(jiàn)Holmes等，見(jiàn)上文；Murphy等，Science253，1280(1991)；Lee等，J.Biol.Chem.267，16283(1992)；LaRosa等，J.Biol.Chem.267，25402(1992)；和Gayle等，J.Biol.Chem.268，7283(1993)。
在這一領(lǐng)域，對(duì)治療還需要能夠與IL-8α或β受體結(jié)合的化合物。因此，作為IL-8受體結(jié)合抑制劑的化合物將對(duì)與IL-8生成增加(其負(fù)責(zé)將中性粒細(xì)胞和T細(xì)胞亞型趨化到炎癥區(qū)域)相關(guān)的疾病有益。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了一種治療趨化因子介導(dǎo)疾病的方法，其中，趨化因子和IL-8α或β受體結(jié)合，而且此方法包括施用有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽。特別是，此趨化因子是IL-8。
本發(fā)明還涉及到需要抑制IL-8和其在哺乳動(dòng)物中受體結(jié)合的方法，它包括給上述哺乳動(dòng)物施用有效量的式(I)的化合物。
本發(fā)明所用式(I)化合物或其可藥用鹽，式(I)化合物具有如下結(jié)構(gòu) 其中Z為氰基、OR11、C(O)NR15R16、R18、C(O)R11、C(O)OR11、或S(O)2R17；R為具有可離解氫的任何官能團(tuán)并且pKa為10或更低；R1獨(dú)立選自氫、鹵素、硝基、氰基、鹵代的C1-10烷基、C1-10烷基、C2-10鏈烯基、C1-10烷氧基、鹵代的C1-10烷氧基、疊氮化物、(CR8R8)qS(O)tR4、羥基、羥基C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳基氧基、芳基C1-4烷基氧基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基、雜芳基C1-4烷基氧基、芳基C2-10鏈烯基、雜芳基C2-10鏈烯基、雜環(huán)C2-10鏈烯基、(CR8R8)qNR4R5、C2-10鏈烯基、C(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R10、S(O)3H、S(O)3R8、(CR8R8)qC(O)R11、C2-10鏈烯基C(O)R11、C2-10鏈烯基C(O)OR11、(CR8R8)qC(O)OR12、(CR8R8)qOC(O)R11、(CR8R8)qNR4C(O)R11、(CR8R8)qNHS(O)2R19、(CR8R8)qS(O)2NR4R5、或兩個(gè)R1部分可共同形成O-(CH2)sO-或5到6元飽和的或不飽和的環(huán)；q為0、或1～10的整數(shù)；t為0、或1或2的整數(shù)；s為1～3的整數(shù)；v為0、或1～4的整數(shù)；R4和R5獨(dú)立為氫、任選取代的C1-4烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳基C1-4烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳基C1-4烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基、或R4與R5和與其相連的氮共同形成5到7元環(huán)，其可任選包含另一個(gè)選自氧、氮或硫的雜原子；Y獨(dú)立選自氫、鹵素、硝基、氰基、鹵代的C1-10烷基、C1-10烷基、C2-10鏈烯基、C1-10烷氧基、鹵代的C1-10烷氧基、疊氮化物、(CR8R8)qS(O)tR4、羥基、羥基C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳基氧基、芳基C1-4烷基氧基、雜芳基、雜芳基烷基、雜芳基C1-4烷基氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基、芳基C2-10鏈烯基、雜芳基C2-10鏈烯基；雜環(huán)C2-10鏈烯基、(CR8R8)qNR4R5、C2-10鏈烯基C(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R10、S(O)3H、S(O)3R8、(CR8R8)qC(O)R11、C2-10鏈烯基C(O)R11、C2-10鏈烯基C(O)OR11、C(O)R11、(CR8R8)qC(O)OR12、(CR8R8)qOC(O)R11、(CR8R8)qNR4C(O)R11、(CR8R8)qNHS(O)2Rd、(CR8R8)qS(O)2NR4R5、或者兩個(gè)Y部分共同形成O-(CH2)sO-或5到6元飽和的或不飽和的環(huán)；n為1～3的整數(shù)；m為1～3的整數(shù)；R6和R7獨(dú)立為氫或C1-4烷基；或R6與R7和與其相連的氮共同形成5到7元環(huán)，該環(huán)可任選包含另一個(gè)選自氧、氮或硫的雜原子；R8獨(dú)立選自氫或C1-4烷基；R10為C1-10烷基C(O)2R8；R11為氫、C1-4烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳基C1-4烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳基C1-4烷基、任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜環(huán)基C1-4烷基；R12為氫、C1-10烷基、任選取代的芳基或任選取代的芳基烷基；R13和R14獨(dú)立為氫、任選取代的C1-4烷基或R13和R14之一為任選取代的芳基；R15和R16獨(dú)立氫、任選取代的C1-4烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳基C1-4烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳基C1-4烷基、任選取代的雜環(huán)基、任選取代的雜環(huán)基C1-4烷基、或R15和R16和與之相連的氮一起形成5到7員環(huán)，該環(huán)任選包含另外選自氧、氮或硫的雜原子；R17為C1-4烷基、NR15R16、OR11、任選取代的芳基、任選取代的芳基C1-4烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳基C1-4烷基、任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜環(huán)基C1-4烷基；R18為任選取代的C1-4烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳基C1-4烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳基C1-4烷基、任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜環(huán)基C1-4烷基；R19為C1-4烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基C1-4烷基，其中所有基團(tuán)可被任選取代；Rd為NR6R7、烷基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4鏈烯基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜芳基C2-4鏈烯基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基，其中烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基環(huán)可被任選取代；W是 或 含有E’的環(huán)任選選自下列的環(huán) 或 星號(hào)*表示與環(huán)連接的點(diǎn)；W1是
或 包含E的環(huán)任選選自下列的環(huán) 或 星號(hào)*表示與環(huán)連接的點(diǎn)。
發(fā)明詳述式(I)的化合物還可用于與哺乳動(dòng)物，人類(lèi)除外，的獸醫(yī)學(xué)治療有關(guān)的、需要抑制IL-8或與IL-8α和β受體結(jié)合的其它趨化因子中。在動(dòng)物中治療或預(yù)防包括趨化因子介導(dǎo)的疾病如在本文治療方法部分提到的那些疾病。
式(I)化合物中，合適的W是 或 通過(guò)星號(hào)(*)標(biāo)明的點(diǎn)表示的含有E’的環(huán)可任選存在。如果不存在，則環(huán)為被表示出的R1取代的苯基部分。E環(huán)可被任一環(huán)中的R1部分(飽和的或不飽和的)取代。為此目的本文只給出不飽和環(huán)上的R1取代。
合適的R是提供可離解的氫的任何官能團(tuán)，其pKa為10或小于10，優(yōu)選為約3～9，更優(yōu)選約3～7。這樣的官能團(tuán)包括，但不限于羥基、羧酸、硫羥基、-SR2、-OR2、-NH-C(O)Ra、-C(O)NR6’R7’、取代的式-NHS(O)2Rb、-S(O)2NHRc、NHC(X2)NHRb的磺酰胺、或四唑基，其中X2為氧或硫，優(yōu)選為氧。優(yōu)選地，該官能團(tuán)不是磺酸，或者直接在芳基、雜芳基或雜環(huán)部分環(huán)上，或者作為芳基、雜芳基或雜環(huán)部分環(huán)上的取代基，例如，在SR2或OR2中。更優(yōu)選R為OH、SH或NHS(O)2Rb。
合適地，R2為取代的芳基、雜芳基或雜環(huán)基，其環(huán)具有提供可離解氫的官能團(tuán)，pKa為10或小于10。
合適地，R6’和R7’為氫、C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4鏈烯基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜芳基C2-4鏈烯基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基、雜環(huán)基C2-4鏈烯基，所有這些基團(tuán)可任選獨(dú)立地被下列基團(tuán)一到三取代鹵素；硝基；鹵代的C1-4烷基，例如CF3；C1-4烷基，例如甲基；C1-4烷氧基，例如甲氧基；NR9C(O)Ra；C(O)NR6R7；S(O)3H；或C(O)OC1-4烷基，前提是只有R6’和R7’之一為氫，不能都為氫。
合適的，R6和R7獨(dú)立為氫或C1-4烷基，或者R6和R7和與其相連的氮一起形成5～7元環(huán)，該環(huán)任選還含有選自氧、氮或硫的雜原子。該雜環(huán)可任選如此處所定義被取代。
合適地，Ra為芳基、芳基C1-4烷基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基C1-4烷基，所有這些基團(tuán)可任選被取代，如下述定義。
合適地，Rb為NR6R7、烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4鏈烯基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜芳基C2-4鏈烯基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基、雜環(huán)基C2-4鏈烯基或樟腦基，所有這些基團(tuán)可任選獨(dú)立地被下列基團(tuán)一到三取代鹵素；硝基；鹵代的C1-4烷基，例如CF3；C1-4烷基，例如甲基；C1-4烷氧基，例如甲氧基；NR9C(O)Ra；C(O)NR6R7；S(O)3H；或C(O)OC1-4烷基。Rb優(yōu)選為任選取代的苯基、芐基或苯乙烯基。當(dāng)Rb是雜芳基時(shí)，優(yōu)選為任選取代的噻唑、任選取代的噻吩基或任選取代的喹啉基環(huán)。
合適地，R9為氫或C1-4烷基，優(yōu)選為氫。優(yōu)選地，當(dāng)取代基是NR9C(O)Ra時(shí)，則Ra優(yōu)選為烷基，例如甲基。
合適地，Rc為氫、烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳基C1-4鏈烯基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜芳基C1-4鏈烯基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基或雜環(huán)基C1-4鏈烯基，所有這些基團(tuán)可任選獨(dú)立地被下列基團(tuán)一到三取代鹵素、硝基、鹵代的C1-4烷基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NR9C(O)Ra、C(O)NR6R7、S(O)3H或C(O)OC1-4烷基，其中R9為氫或C1-4烷基。優(yōu)選地，Rc為任選取代的苯基。
當(dāng)R為OR2或SR2基團(tuán)時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)意識(shí)到芳環(huán)必須包含所需的可解離氫。該芳環(huán)還可任選被一到三個(gè)基團(tuán)獨(dú)立地取代，這些基團(tuán)也可包含另一個(gè)可解離基團(tuán)，其包括但不限于鹵素、硝基、鹵代C1-4烷基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、羥基、SH、-C(O)NR6R7、-NH-C(O)Ra、-NHS(O)2Rb、S(O)2NR6R7、C(O)OR8或四唑環(huán)。
在式(I)化合物中，合適的R1獨(dú)立選自氫、鹵素、硝基、氰基、鹵代C1-10烷基，例如CF3、C1-10烷基，例如甲基，乙基，異丙基或正丙基、C2-10烯基、C1-10烷氧基，例如甲氧基或乙氧基、鹵代C1-10烷氧基，例如三氟甲氧基、疊氮化物、(CR8R8)qS(O)tR4，其中t為0、1或2、羥基、羥基C1-4烷基，例如甲醇或乙醇、芳基，例如苯基或萘基、芳基C1-4烷基，例如芐基、芳基氧基，例如苯氧基、芳基C1-4烷基氧基，例如芐基氧基、雜芳基、雜芳基烷基、雜芳基C1-4烷基氧基、芳基C2-10鏈烯基、雜芳基C2-10鏈烯基、雜環(huán)基C2-10鏈烯基、(CR8R8)qNR4R5、C2-10鏈烯基C(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R10、S(O)3H、S(O)3R8、(CR8R8)qC(O)R11、C2-10鏈烯基C(O)R11、C2-10鏈烯基C(O)OR11、C(O)R11、(CR8R8)qC(O)OR12、(CR8R8)qOC(O)R11、(CR8R8)qNR4C(O)R11、(CR8R8)qNHS(O)2R19、(CR8R8)qS(O)2NR4R5、或兩個(gè)R1部分共同形成O-(CH2)sO-或5到6元飽和或不飽和環(huán)，并且s為1-3的整數(shù)。含芳基、雜芳基和雜環(huán)基的部分可任選被取代，如如下定義。
合適地，q為0，或1～10的整數(shù)。
當(dāng)R1形成二氧橋時(shí)，s優(yōu)選為1。當(dāng)R1形成另一個(gè)飽和或不飽和的5到6元環(huán)時(shí)，優(yōu)選為不飽和的6元環(huán)，形成萘環(huán)體系。這些環(huán)可獨(dú)立被如上述的其它的R1部分取代1到3次。
合適地，R4和R5獨(dú)立為氫、任選取代的C1-4烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳基C1-4烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳基C1-4烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基，或者R4和R5和與其相連的氮一起形成5～7元環(huán)，該環(huán)任選還含有選自O(shè)/N/S的雜原子。
合適的R8獨(dú)立選自氫或C1-4烷基。
合適的R10為C1-10烷基C(O)2R8，例如CH2C(O)2H或CH2C(O)2CH3。
R11合適為氫、C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基C1-4烷基。
合適的R12為氫、C1-10烷基、任選取代的芳基或任選取代的芳基烷基。
R19為C1-4烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基，其中所有這些基團(tuán)可任選被取代；優(yōu)選地，R1是鹵素、氰基、硝基、CF3、C(O)NR4R5、鏈烯基C(O)NR4R5、C(O)R4R10、鏈烯基C(O)OR12、雜芳基、雜芳基烷基、雜芳基鏈烯基、或S(O)NR4R5，并且優(yōu)選R4和R5都為氫或之一為苯基。對(duì)R1優(yōu)選的環(huán)取代是在苯環(huán)的4-位。
當(dāng)R為OH、SH或NSO2Rb時(shí)，則R1優(yōu)選在3-位、4-位被取代或在3，4-位被二取代。取代基適合為拉電子基團(tuán)，優(yōu)選當(dāng)R為OH、SH或NSO2Rb時(shí)，R1為硝基、鹵素、氰基、三氟甲基、C(O)NR4R5。
當(dāng)R為羧酸時(shí)，R1優(yōu)選為氫，或R1優(yōu)選在4-位被取代，更優(yōu)選被三氟甲基或氯取代。
在式(I)化合物中，合適的R13和R14獨(dú)立為氫、任選取代的C1-4烷基，其如本文所定義可為直鏈或支鏈的，或者R13和R14之一為任選取代的芳基；v為0或1～4的整數(shù)。
當(dāng)R13或R14為任選取代的烷基時(shí)，該烷基可獨(dú)立地被下列基團(tuán)一到三取代鹵素；鹵代的C1-4烷基，例如三氟甲基；羥基；羥基C1-4烷基；C1-4烷氧基，例如甲氧基或乙氧基；鹵代的C1-10烷氧基；S(O)tR4；芳基；NR4R5；NHC(O)R4；C(O)NR4R5；或C(O)OR8。
在式(I)化合物中，W1合適為
或 用星號(hào)(*)標(biāo)出連結(jié)點(diǎn)的含E的環(huán)可任選存在。如果它不存在，環(huán)為被如本文所示的Y取代的苯基。E環(huán)可被任何環(huán)(飽和的或不飽和的)中的Y取代，并且為此目的本文只給出不飽和環(huán)上Y的取代。
合適地，Y獨(dú)立選自氫、鹵素、硝基、氰基、鹵代的C1-10烷基、C1-10烷基、C2-10鏈烯基、C1-10烷氧基、鹵代的C1-10烷氧基、疊氮化物、(CR8R8)qS(O)tR4、羥基、羥基C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳基氧基、芳基C1-4烷基氧基、雜芳基、雜芳基烷基、雜芳基C1-4烷基氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基、芳基C2-10鏈烯基、雜芳基C2-10鏈烯基、雜環(huán)基C2-10鏈烯基、(CR8R8)qNR4R5、C2-10鏈烯基C(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R10、S(O)3H、S(O)3R8、(CR8R8)qC(O)R11、C2-10鏈烯基C(O)R11、C2-10鏈烯基C(O)OR11、(CR8R8)qC(O)OR12、(CR8R8)qOC(O)R11、(CR8R8)qNR4C(O)R11、(CR8R8)qNHS(O)2Rd、(CR8R8)qS(O)2NR4R5或者兩個(gè)Y部分一起形成O-(CH2)sO-或者5到6元飽和或不飽和的環(huán)，其中含芳基、雜芳基、雜環(huán)基的部分可任選如本文所定義被取代。
如果Y形成一個(gè)二氧基橋，s優(yōu)選為1。如果Y形成另一個(gè)飽和或不飽和的環(huán)，它優(yōu)選為6元環(huán)形成一個(gè)亞萘基環(huán)體系。該亞萘基環(huán)可被上述定義的其它Y部分1到3次取代。上述的芳基、芳基烷基、芳基鏈烯基、雜芳基、雜芳基烷基、雜芳基鏈烯基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基和雜環(huán)基鏈烯基部分都可如本文定義被任選取代。
合適地，Rd為NR6R7、烷基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4鏈烯基、雜芳基、雜芳基-C1-4烷基、雜芳基C2-4鏈烯基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基或雜環(huán)基C2-4鏈烯基，其中上述的芳基、芳基烷基、芳基鏈烯基、雜芳基、雜芳基烷基、雜芳基鏈烯基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基及雜環(huán)基鏈烯基都可按本文定義被任選取代。
Y優(yōu)選為鹵素、C1-4烷氧基、任選取代的芳基、任選取代的芳基氧基或芳基烷氧基、亞甲基二氧基、NR4R5、硫代C1-4烷基、硫代芳基、鹵代的烷氧基、任選取代的C1-4烷基或羥基烷基。Y更優(yōu)選為鹵素單-取代的(mono-substituted halogen)、鹵素二取代的(disubstituted halogen)、烷氧基單取代的(mono-substitutedalkoxy)、烷氧基二取代的(disubstitued alkoxy)、亞甲基二氧基、芳基或烷基，更優(yōu)選這些基團(tuán)是在2’-位或在2’，3’-位單或二-取代的。
在Y可在環(huán)的5個(gè)位置中任何位置被取代的同時(shí)，Y優(yōu)選在2’-位或3’-位被單-取代的，在4’-位優(yōu)選為未取代的；更優(yōu)選R為OH、SH或NSO2Rb。如果該環(huán)是被二取代的，優(yōu)選當(dāng)R為OH、SH或NSO2Rb時(shí)，這些取代基優(yōu)選在單環(huán)的2’位或3’位。在R1和Y可都為氫的同時(shí)，優(yōu)選只少一個(gè)環(huán)是被取代的，優(yōu)選兩個(gè)環(huán)是被取代的。
優(yōu)選當(dāng)Z為氰基，W為苯基，R為OH，v為O以及W1為苯基時(shí)，(Y)n，其中n為1或2，不是在苯環(huán)的3’位被下列基團(tuán)單取代的或在苯環(huán)的3’-5’位被下列基團(tuán)二取代的鹵素、三氟甲基、OCF3、C(O)2H、C(O)2烷基、C(O)2芳基、C(O)氨基、CN、烷基、烷氧基、羥基、硝基、羥甲基、氨磺酰、氨基、芳基氧基、烷基羰基、芳基羰基、烷基羰基氧基或芳基羰基氧基。
此外，優(yōu)選當(dāng)Z為氰基，v為0，W為苯基，R為OH，W1為苯基時(shí)，Y(n)，其中n為1，不是2-取代的芳基烷基，或者芳基鏈烯基(任選被烷基取代)。
在式(I)化合物中，Z合適為氰基、OR11、C(O)NR15R16、R18、C(O)R11、C(O)OR11或S(O)2R17。
合適地，R15和R16獨(dú)立為氫、任選取代的C1-4烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳基C1-4烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳基C1-4烷基、任選取代的雜環(huán)基、任選取代的雜環(huán)基C1-4烷基，或R15和R16和與其相連的氮共同形成5到7元環(huán)，其任選包含另一個(gè)選自氧、氮或硫的雜原子。
合適地，R17為C1-4烷基、NR15R16、OR11、任選取代的芳基、任選取代的芳基C1-4烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳基C1-4烷基、任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜環(huán)基C1-4烷基。
合適地，R18為任選取代的C1-4烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳基C1-4烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳基C1-4烷基、任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜環(huán)基C1-4烷基。
除非特別說(shuō)明，本文所用的“任選取代的”指這樣一些基團(tuán)鹵素，例如氟、氯、溴或碘；羥基；羥基取代的C1-10烷基；C1-10烷氧基，例如甲氧基或乙氧基；S(O)m’C1-10烷基，其中m’為0、1或2，例如甲基硫基、甲基亞硫?；蚣谆酋；话被?、單和二-取代的氨基，例如基團(tuán)NR4R5中；NHC(O)R4；C(O)NR4R5；C(O)OH；S(O)2NR4R5；NHS(O)2R21、C1-10烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基或叔丁基；鹵代的C1-10烷基，如CF3；任選取代的芳基，例如苯基，或任選取代的芳基烷基，例如芐基或苯乙基，任選取代的雜環(huán)基，任選取代的雜環(huán)基烷基，任選取代的雜芳基，任選取代的雜芳基烷基，其中這些芳基、雜芳基或雜環(huán)基可被下列基團(tuán)1到2次取代鹵素、羥基、羥基取代的烷基、C1-10烷氧基、S(O)m’C1-10烷基、氨基、單和二-取代的氨基，例如基團(tuán)NR4R5中、C1-10烷基或鹵代的C1-10烷基，例如CF3。
R21合適為C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜環(huán)基、或雜環(huán)基C1-4烷基。
合適的可藥用鹽為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的那些，并包括無(wú)機(jī)或有機(jī)酸的堿性鹽(basic salts)，酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、醋酸、蘋(píng)果酸、酒石酸、檸檬酸、乳酸、草酸、琥珀酸、富馬酸、馬來(lái)酸、苯甲酸、水楊酸、苯乙酸和扁桃酸。另外，式(I)化合物的可藥用鹽還可以與可藥用的陽(yáng)離子形成，例如，如果一個(gè)取代基中含有一個(gè)羧基。合適的可藥用陽(yáng)離子為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，并包括堿的、堿土的、銨和四元銨陽(yáng)離子。
本文所用的下列術(shù)語(yǔ)是指●“鹵素”-所有鹵素，即氯、氟、溴和碘。
●“C1-10烷基”或“烷基”-都指1-10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈部分，除非對(duì)鏈長(zhǎng)另有限定，其包括但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、正戊基等。
●本文所用的術(shù)語(yǔ)“環(huán)烷基”是指環(huán)狀基團(tuán)，優(yōu)選3到8個(gè)碳，包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。
●本文所用的術(shù)語(yǔ)“鏈烯基”在所有情況下均指2-10個(gè)碳原子的直鏈或支鏈基團(tuán)，除非對(duì)鏈長(zhǎng)另有限定，包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基等。
●“芳基”-苯基和萘基；●“雜芳基”(其本身或任何聯(lián)合中，諸如“雜芳基氧基”、或“雜芳基烷基”)-5-10元芳環(huán)體系，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)含有一個(gè)或多個(gè)選自N、O或S的雜原子，例如，但不限于吡咯、吡唑、呋喃、噻吩、喹啉、異喹啉、喹唑啉、吡啶、嘧啶、噁唑、噻唑、噻二唑、三唑、咪唑或苯并咪唑。
●“雜環(huán)基”(其本身或任何聯(lián)合中，諸如“雜環(huán)基烷基”)-飽和或部分不飽和的4-10元環(huán)體系，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)含有一個(gè)或多個(gè)選自N、O或S的雜原子，例如，但不限于吡咯烷、哌啶、哌嗪、嗎啉、四氫吡喃或咪唑啉。
●本文所用術(shù)語(yǔ)“芳基烷基”或“雜芳基烷基”或“雜環(huán)基烷基”若無(wú)其它說(shuō)明指如上定義的C1-10烷基連接到本文所定義的芳基、雜芳基或雜環(huán)基部分上。
●“亞硫?；?相應(yīng)硫化物的S(O)氧化物，術(shù)語(yǔ)“硫代”指硫化物，及術(shù)語(yǔ)“磺?；敝竿耆趸腟(O)2部分。
●本文所用術(shù)語(yǔ)“其中兩個(gè)R1部分(或兩個(gè)Y部分)可共同形成5或6元飽和或不飽和環(huán)”指形成亞萘基環(huán)體系或苯基部分連結(jié)一部分不飽和的6元環(huán)，如C6環(huán)烯基，即己烯或C5環(huán)烯基部分，環(huán)戊烯。
式(I)化合物的舉例包括N-(2-羥基-4-硝基苯基)-N’-(2-氯苯基)-N″-氰基胍N-(2-羥基-4-硝基苯基)N’-(2-氯苯基)-N″-氰基胍N-(4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(苯基)氰基胍N-(2-溴苯基)N’-(4-氰基-2-羥基苯基)N″-氰基胍N-(4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(2，3-二氯苯基)-N″-氰基胍N-(2-溴苯基)-N’-(4-氰基-2-羥基-3-丙基苯基)-N″-氰基胍N-(2-溴苯基)-N’-(4-氰基-2-羥基-3-異丁基苯基)-N″-氰基胍N-(2-溴苯基)-N’-(3-溴-4-氰基-2-羥基苯基)-N″-氰基胍N-(4-氰基--2-羥基-3-丙基苯基)-N’-(2，3-二氯苯基)-N″-氰基胍；和N-(3-溴-4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(2，3-亞甲基二氧基苯基)-N″-氰基胍
N-(2-氯苯基)-N’-(4-氰基-2-羥基-3-丙基苯基)-N″-氰基胍；和N-(2-溴苯基)-N’-(4-氰基-2-羥基-3-甲氧基羰基苯基)-N″-氰基胍。
應(yīng)該認(rèn)識(shí)到本發(fā)明化合物可以立體異構(gòu)體、區(qū)域異構(gòu)體(regioisomers)或非對(duì)映異構(gòu)體存在。這些化合物可包含一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱(chēng)碳原子并可以外消旋和光學(xué)活性形式存在。所有這些化合物都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
可應(yīng)用合成方法以獲得式(I)的化合物，其中一些方法在下文的路線中說(shuō)明。在這些路線中提供的合成方法可用于生產(chǎn)式(I)的化合物，其具有發(fā)生反應(yīng)的各種不同的R、R1，以及芳基并且用被適當(dāng)保護(hù)的任選取代基以達(dá)到與本文中所列的反應(yīng)一致。在這些情況下，隨后脫保護(hù)得到原本公開(kāi)的化合物。一旦構(gòu)成胍核，這些式的另一些化合物就可以按本領(lǐng)域已知的官能團(tuán)轉(zhuǎn)化的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)制備。而這些路線顯示的只有式(I)的化合物，這僅是為了說(shuō)明。
制備方法標(biāo)題化合物可通過(guò)硫脲鎓鹽(thiouronium salt)(2，路線1)合成。R’如在式(I)化合物中的定義代表-(R13R14)v-W1連接。為了說(shuō)明的目的，此處的路線代表的W為取代的苯基。
路線1 a)Na，EtOH，氨基氰b)EDC·HCl
硫脲鎓鹽(2，路線1)可通過(guò)氰氨基鈉與市售異硫氰酸酯1合成(如果購(gòu)買(mǎi)不到異硫氰酸酯，它可通過(guò)目的胺與硫代光氣在堿如碳酸氫鈉存在下反應(yīng)合成)。硫脲鎓鹽(2)可與合適取代的苯胺在偶合劑如EDC·HCl存在下經(jīng)縮合或酸化形成氰基硫脲然后反應(yīng)。
另外，4可通過(guò)市售的(Aldrich Chem.Co.)的氰基亞氨酸二苯基酯(diphenyl cyanocarboimidate)(5，路線2)與胺反應(yīng)生成中間體O-苯基異硫脲6，然后在三甲基鋁存在下通過(guò)Atwal的方法與合適取代的苯胺反應(yīng)。(Atwal，K.S.，Tetrahedron Lett，35，8085(1994))。其中R’為烷基的化合物可通過(guò)用合適取代的烷基胺，但在無(wú)催化劑存在下加熱制備。
路線2 a)乙腈，加熱b)AlMe3另外，標(biāo)題化合物可用保護(hù)的鄰位取代的苯胺(8，路線3，合成參見(jiàn)1996年6月27日提交的US provisional application USSN60/020655，Attorney Docket No.P50467P；1996年8月22日提交的WO96/25157，Widdowson等(Attorney Docket No.P50324-1)；及1996年8月21日提交的USSN 08/701,299(Attorney Docket No.P50324-2中的描述)，其公開(kāi)內(nèi)容在此全部引入作為參考。鄰位取代的苯胺(7，路線3)首先通過(guò)鄰位取代的苯胺與合適的烷基或甲硅烷基鹵化物在合適的堿(例如碳酸銫、碳酸鉀或咪唑)存在下，在非質(zhì)子傳遞溶劑中反應(yīng)得到保護(hù)(例如叔丁基二甲基甲硅烷基、烯丙基、芐基、mom或其它合適的保護(hù)基)。保護(hù)的鄰位取代的苯胺也可用鄰位取代的硝基苯(9)與保護(hù)基團(tuán)在本領(lǐng)域眾所周知的條件下反應(yīng)合成(見(jiàn)Greene，TProtecting Groupsin Organic Synthesis，Wiley& Sons，New York，1981)。然后用SnCl2在EtOH中或用H2/Pd或LiAlH4在質(zhì)子惰性溶劑中將這一保護(hù)的鄰位取代的硝基化合物還原成相應(yīng)的苯胺。
路線3 a)烷基或甲硅烷基鹵化物，堿b)還原劑然后用硫代光氣并隨后與陰離子ZNH-(由ZNH2與堿如NaH反應(yīng)形成)反應(yīng)可將這一保護(hù)的鄰位取代的苯胺(8)轉(zhuǎn)化成異硫氰酸酯。Z如式(I)化合物中所定義。然后用烷基化試劑如碘甲烷將所得到的硫代陰離子烷基化生成硫代亞氨酸酯(thioimidate)如10(路線4)。
路線4 a)ClCSCl，NaHCO3b)ZNH-c)MeI通過(guò)與胺R’NH2反應(yīng)可將硫代亞氨酸酯(10，路線5)轉(zhuǎn)化成標(biāo)題化合物4。這一反應(yīng)可通過(guò)加入對(duì)硫有高親和性的金屬鹽如氧化汞或醋酸銀或通過(guò)用二甲基環(huán)氧乙烷氧化硫而加速形成較好的離去基團(tuán)。最后，用標(biāo)準(zhǔn)方法脫去酚保護(hù)生成標(biāo)題化合物4。
路線5 a)RNH2b)脫保護(hù)另外，標(biāo)題化合物可通過(guò)保護(hù)的碳化二亞胺(11，路線6)與陰離子NH-Z(由NH2Z與堿例如NaH反應(yīng)生成)反應(yīng)或與中性化合物NH2Z(Z＝CN)及叔胺堿，例如Hünig堿(二異丙基乙胺)、三乙胺、三異丙基乙胺、N，N-二甲基芐胺或N，N-二甲基異丙基胺，在親核試劑大量過(guò)量存在的條件下反應(yīng)合成，并且反應(yīng)時(shí)間應(yīng)通過(guò)仔細(xì)監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成盡可能的短，隨后脫保護(hù)。用于此處其它合適的堿包括仲胺，例如吡啶，和氨基取代的吡啶衍生物。用于此處合適的溶劑當(dāng)Z為氰基時(shí)包括各種非質(zhì)子傳遞溶劑，例如乙腈；鹵代溶劑，例如氯仿和二氯甲烷；乙基乙二醇(gylcol)-二甲基醚(單GLYME)、二噁烷、DMF和DMSO；或其混合物，優(yōu)選乙腈。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)意識(shí)到對(duì)此處應(yīng)用溶劑的限制因素是氰基衍生化合物的溶解性。對(duì)于其中Z不是氰基的化合物，在非質(zhì)子傳遞溶劑為優(yōu)選的同時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)意識(shí)到可應(yīng)用其它合適的溶劑，例如質(zhì)子溶劑，即醇。
優(yōu)選的反應(yīng)(當(dāng)Z為氰基時(shí))溫度為約-10℃到約100℃，優(yōu)選約10℃到約50℃，更優(yōu)選約室溫，即20～30℃。
保護(hù)的R″部分可利用本領(lǐng)域公認(rèn)的技術(shù)適當(dāng)?shù)孛摫Ｗo(hù)。當(dāng)保護(hù)基是烯丙基衍生物時(shí)，脫保護(hù)優(yōu)選通過(guò)鈀(O)催化脫烯丙基化。
路線6 a)ZNH-(ZNH2+NaH)對(duì)于Z＝OR、COOEt、CHO、RNHSO2、ArNHSO2；b)ZNH2.HCl對(duì)于Z＝OH c)ZNH2和NR3對(duì)于Z＝CN d)脫保護(hù)碳化二亞胺11由硫脲(12a，路線7)通過(guò)用光氣和叔胺堿處理或用硫脲(12a)或脲(12b)通過(guò)與三苯基膦、四氯化碳和三乙胺反應(yīng)制備。
碳化二亞胺也可通過(guò)硫脲(12b)與過(guò)量的，例如2或多當(dāng)量的甲烷磺酰氯和叔胺堿，例如Hünig堿(二異丙基乙胺)、三乙胺、三異丙基乙基胺、N，N-二甲基芐胺或N，N-二甲基異丙胺，優(yōu)選三乙胺反應(yīng)制備。該反應(yīng)可用任何鹵代溶劑，例如二氯甲烷、氯仿或四氯乙烯等；合適的反應(yīng)溫度為約-30℃到約80℃，優(yōu)選-10℃到約50℃，更優(yōu)選約0℃到約室溫。參見(jiàn)Fell和Coppola(Fell，J.B.，Coppola，J.B.，Syn Communications 25，43，(1995)。
路線7 a)光氣，Et3N，b)Ph3P，CCl4，Et3N；c)MsCl，Et3N硫脲或脲按如1996年6月27日提交的US臨時(shí)申請(qǐng)USSN60/020655，Attorney Docket No.P50467P和Attorney Docket No.P50324-2中所述進(jìn)行合成，其公開(kāi)內(nèi)容在此引入作為參考。硫脲(12a，路線8)也可用保護(hù)的鄰位取代苯胺和兩當(dāng)量合適的堿如NaH、KH、氫化鈣反應(yīng)，并且所得陰離子與市售可得的異硫氰酸酯(W1-NCS，其中W1如對(duì)式(I)化合物所定義)反應(yīng)制備。該反應(yīng)可在任何合適的非質(zhì)子傳遞溶劑或鹵代溶劑，優(yōu)選二甲基甲酰胺中進(jìn)行。該反應(yīng)合適的反應(yīng)溫度為約-10℃到約50℃。
如果目的的異硫氰酸酯購(gòu)買(mǎi)不到，可通過(guò)相應(yīng)的苯胺與硫光氣和合適的堿如碳酸氫鈉反應(yīng)制備。
路線8 a)堿b)R’NCS本發(fā)明的另一方面是新的式(II)化合物W1-N＝C＝N-W (II)其中W和W1如式(I)定義，并且W包含如式(I)化合物中定義的保護(hù)的或未保護(hù)的R基團(tuán)(R″)。
本發(fā)明的另一方面是新的式(III)化合物W1-NH-C(S)-NH-W (III)其中W和W1如式(I)定義，并且W包含如式(I)化合物中定義的保護(hù)的或未保護(hù)的R基團(tuán)(R″)。
因此，式(I)化合物保護(hù)的(R″)形式也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
應(yīng)意識(shí)到胍官能團(tuán)可具有很多不同的互變體，例如，W1-N-C(＝NZ)-NW；ZN＝C(NW1)-NW；W1-N-C(＝NW)-NZ，所有這些都在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
式(I)化合物的可藥用鹽可按已知的方法得到，例如在合適的溶劑存在下用適量的酸或堿處理式(I)化合物。
在這些實(shí)施例中，所有溫度是攝氏度(℃)。除非另外說(shuō)明，質(zhì)譜是用快原子轟擊，在VG Zab質(zhì)譜儀上進(jìn)行測(cè)定。1H-NMR(下文為“NMR”)譜分別是用Bruker AM 250或AM400分光計(jì)上在250MHz或400MHz下記錄。所表示的多重峰是s＝單峰、d＝雙峰、t＝三重峰、q＝四重峰、m＝多重峰和br表示寬的信號(hào)。Sat.指飽和溶液，equiv.指試劑相對(duì)于主要反應(yīng)物的摩爾當(dāng)量比例。
閃式色譜用Merck硅膠60(230-400目)進(jìn)行。
合成實(shí)施例本發(fā)明將通過(guò)下列實(shí)施例進(jìn)行描述，這些實(shí)施例只是說(shuō)明性的，而不能被解釋為對(duì)本發(fā)明領(lǐng)域的限制。除非另外說(shuō)明，所有溫度均以攝氏度給出，本文所用的溶劑均是可獲得的最高純度，并且所有反應(yīng)均是在氬氣氛、無(wú)水條件下進(jìn)行的。
實(shí)施例1N-(2-羥基-4-硝基苯基)-N’-(2-氯苯基)-N″-氰基胍的制備a)N-(2-氯苯基)-N″-氰基硫脲鈉鹽將鈉(1.64g，71.3mmol)溶于乙醇中直至完全停止產(chǎn)生氣體，然后加入氨基氰(1.685g，40mmol)。攪拌反應(yīng)混合物15分鐘，加入2-氯苯基異硫氰酸鹽(7.21g，42.66)并保持回流6小時(shí)。冷卻反應(yīng)混合物并用二氯甲烷稀釋?zhuān)^(guò)濾沉淀的白色固體并干燥得到N-(2-氯苯基)-N″-氰基硫脲鈉鹽(8.26g，87.5％)。MS(ES+)m/e 210，212[M+H]+
b)N-(2-羥基-3-硝基苯基)-N’-(2-氯苯基)-N″-氰基胍在攪拌、Ar氣氛下，向N-(2-氯苯基)-N’-氰基硫脲鈉鹽(234mg，1mmol)和2-羥基-3-硝基-苯胺(156mg，1mmol)的2ml無(wú)水DMF溶液中加入EDC鹽酸鹽(384mg，2mmol)并在室溫下攪拌反應(yīng)4天。使反應(yīng)混合物在EtOAc和1N HCl之間分配并用水和鹽水洗滌有機(jī)萃取液。干燥(Na2SO4)并減壓蒸發(fā)溶劑分離得到紅色油狀物。經(jīng)色譜(硅膠，3％丙酮/CHCl3)得到亮黃色固體(30mg，9％)，用叔丁基甲基醚重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.93(s，1H)，8.53(s，1H)，7.92(d，J＝7.8Hz，1H)，7.61(d，J＝7.8Hz，2H)，7.38-7-50(m，2H)，7.22(s，1H)，7.08(t，1H)；IR(KBr)2181cm-1；MS(ES-)m/e 330[M-H]-；mp.163-164°。
實(shí)施例2N-(2-羥基-4-氰基苯基)-N’-(2-溴苯基)-N″-氰基胍的制備a)1-烯丙基氧基-5-氰基-2-硝基苯在室溫、氬氣氛下攪拌5-氰基-2-硝基-苯酚(3.0g，18.9mmol)、烯丙基溴化物(1.82ml，21.0mmol)和碳酸銫(7.39g，22.7mmol)的DMF(20ml)混合物18小時(shí)。將反應(yīng)混合物在叔丁基-甲基醚和水之間分配，分出有機(jī)層，水層繼續(xù)萃取(x3)。合并的有機(jī)層用水洗滌兩次，然后用鹽水洗滌并用MgSO4干燥，過(guò)濾。減壓除去溶劑得到標(biāo)題化合物(3.89g，100％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.87(d，J＝8.5Hz，1H)，7.35(dd，J＝8.4Hz J＝1.2Hz 1H)，7.35(d，J＝1.5Hz，1H)，6.02(m，1H)，5.52(d，1H)，5.43(d，1H)，4.73(dd，J＝3.6Hz J＝1.2Hz 2H)；b)2-烯丙基氧基-4-氰基苯胺在室溫下攪拌1-烯丙基氧基-5-氰基-2-硝基苯(3.6g，17.46mmol)氯化錫(II)(19.7g，87.3mmol)的乙醇(100ml)混合物過(guò)夜。減壓除去溶劑，將反應(yīng)混合物在5％NaHCO3和乙酸乙酯之間分配，過(guò)濾混合物除去錫鹽并進(jìn)一步用乙酸乙酯萃取水層(x4)。合并的有機(jī)相用水和鹽水洗滌并用MgSO4干燥。減壓除去溶劑得到棕色固體(2.82g)，用叔丁基-甲基醚/己烷重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物，為淺棕色固體。(2.63g，93％)MS(ES+)m/e 175[M+H]+；MS(ES-)m/e 173[M-H]-；c)N-(2-烯丙基氧基-4-氰基苯基)-N’-(2-溴苯基)-硫脲.
在0°下，向預(yù)先用己烷洗滌過(guò)的氫化鈉(60％油分散體，240mg，6.0mmol)的DMF(10ml)中加入2-烯丙基氧基-4-氰基苯胺(522mg，3mmol)的DMF(1.5ml)溶液。在0℃、Ar氣氛下攪拌15分鐘后，在0°下滴加異硫氰酸(2-溴苯基)酯并在室溫下攪拌反應(yīng)1小時(shí)，加入0.5M磷酸二氫鈉終止反應(yīng)。混合物用乙酸乙酯萃取，用水洗滌并用硫酸鈉干燥。粗品固體用甲醇重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物，為白色固體(911mg，78％)MS(ES+)m/e 388，390[M+H]+d)N-(2-烯丙基氧基-4-氰基苯基)-N’-(2-溴苯基)-碳化二亞胺在0℃、Ar氣氛、攪拌下，向N-(2-烯丙基氧基-4-氰基苯基)-N’-(2-溴苯基)-硫脲(900mg，2.32mmol)和三乙胺(1ml，6.95mmol)的二氯甲烷溶液中滴加甲烷磺酰氯(360uL，4.64mmol)。在0℃下攪拌反應(yīng)15分鐘，tlc顯示不存在原料。反應(yīng)混合物經(jīng)硅膠色譜純化，用二氯甲烷洗脫得到標(biāo)題化合物，為黃色固體(1.2g，＞100％)。該化合物不經(jīng)進(jìn)一步純化用于下一步反應(yīng)。
e)N-(2-烯丙基氧基-4-氰基苯基)-N’-(2-溴苯基)-N″-氰基胍攪拌下，向氨基氰(560mg，13.33mmol)和Huinig堿(2.6ml)的乙腈混合物中滴加N-(2-烯丙基氧基-4-氰基苯基)-N’-(2-溴苯基)-碳化二亞胺(600mg，1.69mmol)的乙腈(30ml)溶液。在室溫下攪拌反應(yīng)15分鐘，然后減壓除去溶劑，殘余物用0.5M磷酸二氫鈉水解。水溶液混合物的乙酸乙酯萃取液用0.5M磷酸二氫鈉和和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)后過(guò)濾并減壓蒸發(fā)溶劑得到粗品褐色固體(500mg)。該固體經(jīng)硅膠(50/50乙酸乙酯/己烷)色譜純化得到標(biāo)題化合物(455mg，95％)。MS(ES-)m/e 394，396[M-H]-f)N-(4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(2-溴苯基)-N″-氰基胍在室溫下，向N-(2-烯丙基氧基-4-氰基苯基)-N’-(2-溴苯基)-N″-氰基胍(100mg，0.25mmol)和氫硼化鈉(20mg，0.52mmol)的THF(3ml)混合物中加入四三苯基膦鈀[O](21mg，7mol％)。在室溫下攪拌反應(yīng)直到tlc顯示無(wú)原料存在。將混合物在乙酸乙酯和0.5M磷酸二氫鈉之間分配。用MgSO4干燥后過(guò)濾并在減壓下蒸發(fā)得到褐色固體粗品(100mg)。經(jīng)硅膠柱色譜純化，用5％甲醇/氯仿洗脫得到標(biāo)題化合物，為淺黃色固體(64mg)。用氯仿重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物(42mg，47％)。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.93(s，1H)，9.57(s，1H)，8.74(s，1H)，7.84(d，J＝8.3Hz，1H)，7.71(d，J＝7.8Hz，2H)，7-50-7.42(m，2H)，7.30-7.26(m，2H7.17(s，1H)，7.08(t，1H)；IR(KBr)2224，2193cm-1；MS(ES-)m/e 354，356[M-H]-；MS(ES+)m/e 356，358[M+H]+；mp.175-176°。
實(shí)施例3N-(4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(苯基)-N″-氰基胍的制備a)5-氰基-1-甲氧基甲基氧基-2-硝基苯在室溫下，向預(yù)先用己烷洗滌過(guò)的氫化鈉(60％油分散體，260mg，6.5mmol)的THF(5ml)中滴加5-氰基-2-硝基-苯酚(978mg，5.96mmol)的THF(10ml)溶液。溶液變成亮橙色并形成大塊沉淀。在室溫下攪拌15分鐘后，在攪拌下向上述漿狀物中滴加溴甲基甲基醚并在室溫下攪拌18小時(shí)。然后使黃色混合物在叔丁基-O-甲基醚和水之間分配并萃取水相(X3)，用5％碳酸氫鈉溶液(X4)和鹽水洗滌。干燥(MgSO4)后過(guò)濾并減壓蒸發(fā)溶劑得到標(biāo)題化合物，為淺黃色固體(1.05g，85％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.84(d，J＝8.4Hz，1H)，7.66(d，J＝1.4Hz1H)，7.35(dd，J＝8.4Hz J＝1.5Hz，1H)，5.34(s，2H)，3.55(s，3H)。
b)4-氰基-2-甲氧基甲基氧基苯胺在室溫、氫氣壓力為1atm下，將5-氰基-1-甲氧基甲基氧基-2-硝基苯(0.5g，2.4mmol)和10％的鈀炭(.05g)在乙酸乙酯(50mL)中的混合物攪拌72h。通過(guò)Celite過(guò)濾混合物以除去鈀且殘余物經(jīng)硅膠色譜純化(用25％的乙酸乙酯/己烷洗脫)得到標(biāo)題化合物(250mg，58％)。MS(ES+)m/e 179[M+H]+c)N-(4-氰基-2-甲氧基甲基氧基苯基)-N’-(2-苯基)-N″-氰基胍按照實(shí)施例1(c)-1(e)的步驟，除了用異硫氰酸苯基酯代替異硫氰酸2-溴苯基酯和用2-甲氧基甲基氧基-4-氰基苯胺代替2-烯丙基氧基-4-氰基苯胺，制備標(biāo)題化合物(24％總收率)。IR(KBr)2226，2198cm-1；MS(ES-)m/e 320[M-H]-d)N-(4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(苯基)-N″-氰基胍將實(shí)施例2(b)的化合物(47mg，0.146mmol)溶于乙酸乙酯(20mL)中，用6NHCl(10mL)處理并在室溫下攪拌3小時(shí)。然后加入6N HCl(5mL)并繼續(xù)再攪拌2小時(shí)?；旌衔镉靡宜嵋阴ズ望}水稀釋?zhuān)嘣儆靡宜嵋阴ポ腿?X5)。合并的有機(jī)相用硫酸鈉干燥并在真空下蒸發(fā)得到標(biāo)題化合物(64mg)，用叔丁基-O-甲基醚重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物，為白色固體(2mg，5％)。1H NMR(400MHz，DMSO d6)δ9.70(s，1H)，9.12(s，1H)，7.62(d，J＝8.3Hz，1H)，7.55(d，J＝1.2Hz，1H)，7.49(dd，J＝1.2Hz，J＝8.1Hz，1H)，7.36(m，4H)，7.18(m，1H)；IR(KBr)2233，2192cm-1；MS(ES+)m/e 278[M+H]+；MS(ES-)m/e 276[M-H]-；mp270-271℃。
實(shí)施例4N-(4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(2，3-二氯苯基)-N″-氰基胍的制備除用異硫氰酸(2，3二氯苯基)酯代替異硫氰酸(2-溴苯基)酯外，按照實(shí)施例1(a)-1(e)的方法制得標(biāo)題化合物(17％總收率)。IR(KBr)2231，2197cm-1；MS(ES+)m/e 346，348，350[M+H]+；MS(ES-)m/e344，346，347，348[M-H]-；mp 155-156℃。
實(shí)施例5N-(2-溴苯基)-N’-(4-氰基-2-羥基-3-丙基苯基)-N″-氰基胍的制備a)2-氨基-5-氰基-6-丙-1-烯-3-基-苯酚在氬氣氛下，用N，N-二甲基苯胺(20mL)處理實(shí)施例2(b)制備的化合物(1.88g，1.29mmol)并在175°(油浴溫度)下保持3.5h。在真空下除去溶劑，殘余物用含有各10-20％二氯甲烷和己烷的甲基-叔丁基醚重結(jié)晶得到標(biāo)題化合物，為透明固體(1.67g，89％)。MS(ES+)m/e175[M+H]+；MS(ES-)m/e 173[M-H]-；
b)2-氨基-5-氰基-6-丙基-苯酚在室溫、1atm氫氣存在下攪拌2-氨基-5-氰基-6-丙-1-烯-3-基-苯酚(0.5g，2.4mmol)和10％鈀炭(.05g)的乙酸乙酯(50mL)混合物2小時(shí)?；旌衔锝?jīng)Celite過(guò)濾除去鈀并將濾液減壓濃縮得到標(biāo)題化合物，為粉白色固體(1.2g，78％)。MS(ES+)m/e 177[M+H]+；MS(ES-)m/e 175[M-H]-。
c)N-(2-溴苯基)-N’-(4-氰基-2-羥基-3-丙基苯基)-N″-氰基胍除用2-氨基-5-氰基-6-丙基-苯酚代替5-氰基-2-硝基-苯酚外，按照實(shí)施例2(a)-1(e)的方法制得標(biāo)題化合物(37％總收率)。1H NMR(400MHz，DMSO d6)δ9.72(s，1H)，9.45(s，1H)，8.66(s，1H)，7.71(d，J＝7.0Hz，1H)，7.56(d，J＝8.4Hz，1H)，7.45(m，2H)，7.28(d，J＝8.4Hz，1H)，7.26(t，1H)，2.76(t，J＝7.5，2H)，1.55(hextet，J＝7.6，2H)，0.93(t，J＝7.3，3H)；IR(KBr)2224，2184cm-1；MS(ES+)m/e 398，400[M+H]+；MS(ES-)m/e 396，398[M-H]-；實(shí)施例6N-(4-氰基-2-羥基-3-丙基苯基)-N’-(2，3-二氯苯基)-N”-氰基胍的制備除用異硫氰酸(2，3-二氯苯基)酯代替異硫氰酸(2-溴苯基)酯、用2-烯丙基氧基-4-氰基-3-丙基苯胺代替2-烯丙基氧基-4-氰基苯胺外，按照實(shí)施例1(b)-1(e)的方法制得標(biāo)題化合物(7％總收率)。IR(KBr)2236，2182cm-1；MS(ES+)m/e 388，390，391[M+H]+；MS(ES-)m/e 386，388，390[M-H]-；mp 143-147℃。
實(shí)施例7N-(2-氯苯基)-N’-(4-氰基-2-羥基-3-丙基苯基)-N″-氰基胍的制備除用異硫氰酸(2-氯苯基)酯代替異硫氰酸(2-溴苯基)酯和用2-烯丙基氧基-4-氰基-3-丙基苯胺代替2-烯丙基氧基-4-氰基苯胺外，按照實(shí)施例1(b)-1(e)的方法制得標(biāo)題化合物(26％總收率)。IR(KBr)2225，2187cm-1；MS(ES+)m/e 354，356[M+H]+；MS(ES-)m/e352，354[M-H]-；mp 159-160℃。
實(shí)施例8N-(2-溴苯基)-N’-(4-氰基-2-羥基-3-異丁基苯基)-N″氰基胍的制備除用3-溴-2-甲基-1-丙烯代替烯丙基溴化物外，按照實(shí)施例4(a)-1(c)的方法制得標(biāo)題化合物(16％總收率)。IR(KBr)2231 2189cm-1；MS(ES+)m/e 412，414[M+H]+；MS(ES-)m/e 410，412[M-H]-；實(shí)施例9N-(2-溴苯基)-N’-(3-溴-4-氰基-2-羥基苯基)-N″-氰基胍的制備a)2-溴-3-羥基-4-硝基芐腈向3-羥基-4-硝基芐腈(3.03g，18.4mmol)的二氯甲烷(660ml)溶液中加入含三溴化氫的六亞甲基四胺化合物(1∶1)(9.91g，26.0mmol)。在室溫下攪拌所得溶液一周。反應(yīng)混合物用1N HCl酸化，用1/1的EtOAc/己烷混合物萃取。合并有機(jī)層，用MgSO4干燥并過(guò)濾。蒸發(fā)溶劑，所得固體用硅膠色譜(50/50已烷/EtOAc)純化得到目的產(chǎn)物(1.47g，35.0％)。MS(ES-)m/e 241，243[M-H]-。
b)N-(2-溴苯基)-N’-(3-溴-4-氰基-2-羥基苯基)-N″-氰基胍除用2-溴-3-羥基-4-硝基芐腈代替5-氰基-2-硝基-苯酚外，按照實(shí)施例2(a)-1(e)的方法制得標(biāo)題化合物，為米色固體。(色譜純化后44％總收率，重結(jié)晶后總收率15％)。1H NMR(400MHz，DMSO d6)δ10.66(s，1H)，9.56(s，1H)，8.92(s，1H)，7.71(d，J＝8.0Hz，1H)，7.68(d，J＝8.5Hz，1H)，7.48-7.41(m，3H)，7.26(t，1H)；IR(KBr)2228，2186cm-1；MS(ES+)m/e 434，436，438[M+H]+；MS(ES-)m/e 432，434，436[M-H]-；mp 142℃實(shí)施例10N-(3-臭-4-氰基-2-羥基苯基)-N’-(2，3-亞甲基二氧基苯基)-N″-氰基胍的制備除用異硫氰酸亞甲基二氧基苯基酯代替異氰酸(2-溴苯基)酯外，按照實(shí)施例8(a)-1(b)的方法制得標(biāo)題化合物(14％總收率)。IR(KBr)2230，2196cm-1；MS(ES+)m/e 400，402[M+H]+；MS(ES-)m/e398，400[M-H]-；mp 164-165℃實(shí)施例11N-(2-溴苯基)-N’-(4-氰基-2-羥基-3-甲氧基羰基苯基)-N″-氰基胍的制備a)甲基-2，6-二羥基苯甲酸酯在Ar氣氛下，將80％NaH(10.00g，333.3mmol)的DMF(45mL)溶液冷卻至0℃。在45分鐘以上時(shí)間向該混合物中慢慢加入2，6-二羥基苯甲酸(48.88g，317.1mmol)的DMF(50mL)溶液。攪拌該溶液45min，然后在20min以上時(shí)間加入MeI(21.0mL，337mmol)。在室溫下攪拌所得溶液70h。用二氯甲烷稀釋混合物并經(jīng)硅膠柱過(guò)濾，用二氯甲烷洗脫。蒸發(fā)溶劑得到目的產(chǎn)物(35.22g，66.1％)。1H NMR(250MHz，DMS0 d6)δ9.91(s，2H)，7.09(t，J＝1.2Hz，J＝2.5Hz，1H)，6.37(d，J＝1.1Hz，2H)，3.78(s，3H)。
b)甲基-2-芐基氧基-6-羥基苯甲酸酯在Ar氣氛下，向甲基-2，6-二羥基苯甲酸酯(20.00g，118.9mmol)的DMF(100mL)溶液中加入80％NaH(3.9144g，130.5mmol)，隨后加入芐基溴(25.5mL，214.5mmol)。在70℃加熱該溶液20h。冷卻混合物，然后加入飽和的碳酸氫鈉溶液，用EtOAc萃取，用MgSO4干燥并過(guò)濾。蒸發(fā)溶劑，所得固體經(jīng)硅膠色譜純化(95/5己烷/EtOAc)得到目的產(chǎn)物(16.71g，54.4％)。MS(ES-)m/e 257[M-H]-。
c)甲基-2-芐基氧基-6-氰基苯甲酸酯.
在0℃、Ar氣氛下，用N-苯基三氟甲烷磺酰胺(4.5424g，12.7mmol)和三乙胺(1.62mL，11.6mmol)處理甲基-2-芐基氧基-6-羥基苯甲酸酯(2.730g，10.6mmol)的二氯甲烷(28.5mL)溶液。將反應(yīng)混合物溫至室溫并攪拌14h。用乙醚稀釋該溶液并用水、5％氫氧化鈉溶液和鹽水洗滌。有機(jī)層用MgSO4干燥、過(guò)濾并蒸發(fā)得到粗品triflate(4.476g，108％)。1H NMR(250MHz，CDCl3)δ7.35(m，6H)，6.95(m，2H)，5.16(s，2H)，3.94(s，3H)。將粗品triflate溶于DMF(23mL)中并用四三苯基膦鈀[O](0.3036g，0.260mmol)和Zn(CN)2(1.1027g，9.39mmol)處理。在80℃加熱混合物10h，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并倒入飽和的碳酸氫鈉溶液中，該混合物用EtOAc萃取，用MgSO4干燥并過(guò)濾。蒸發(fā)溶劑，所得固體經(jīng)硅膠色譜純化(80/20己烷/EtOAc)得到目的產(chǎn)物(2.20g，兩步收率78％)。1HNMR(250MHz，CDCl3)δ7.5-7.2(m，8H)，5.19(s，2H)，4.00(s，3H)d)甲基-6-氰基-2-羥基苯甲酸酯的制備在Ar氣氛下，向甲基-2-芐基氧基-6-氰基苯甲酸酯(10.0g，37.4mmol)的EtOAc(330mL)溶液中加入10％Pd/炭(4.72g)。用氫氣充滿(mǎn)反應(yīng)器并在室溫下、氣囊壓力(balloon pressure)的氫氣氛下攪拌反應(yīng)混合物。3小時(shí)后，用Ar充滿(mǎn)反應(yīng)器，經(jīng)硅藻土(celite)過(guò)濾溶液。蒸發(fā)溶劑得到目的產(chǎn)物(6.12g，92.2％)。對(duì)C9H7NO3的分析，計(jì)算值C，61.02；H，3.98；N，7.91。實(shí)驗(yàn)值C，60.74；H，3.99；N，7.65。
e)甲基-6-氰基-2-羥基-3-硝基苯甲酸酯的制備在0℃下，向甲基-6-氰基-2-羥基苯甲酸酯(1.1428g，6.45mmol)的乙酸酐(21mL)的懸浮液中滴加濃硝酸(0.41mL，6.44mmol)進(jìn)行處理。將混合物溫?zé)岬绞覝?，在這期間所有原料溶解。攪拌溶液36小時(shí)，然后倒入水中并用EtOAc萃取，合并的有機(jī)層用MgSO4干燥并過(guò)濾，蒸發(fā)溶劑，所得固體經(jīng)硅膠色譜(70/30/1己烷/EtOAc/HOAc)純化得到目的產(chǎn)物(0.50g，35.7％)。MS(ES-)m/e 221[M-H]-。
f)甲基-3-氨基-6-氰基-2-羥基苯甲酸酯在Ar氣氛下，向甲基-6-氰基-2-羥基-3-硝基苯甲酸酯(402mg，1.81mmol)的EtOAc(40mL)溶液中加入10％Pd/炭(0.23g)。用氫氣充滿(mǎn)反應(yīng)器并在室溫下、氣囊壓力的氫氣氛下攪拌反應(yīng)混合物。2小時(shí)后，用Ar充滿(mǎn)反應(yīng)器，經(jīng)硅藻土過(guò)濾溶液。蒸發(fā)溶劑得到目的產(chǎn)物(334mg，96.0％)。MS(ES-)m/e 192[M-H]-。
g)N-(2-溴苯基)-N’-(4-氰基-2-羥基-3-甲氧基羰基苯基)-N″-氰基胍除用甲基-3-氨基-6-氰基-2-羥基苯甲酸酯代替5-氰基-2-硝基-苯酚外，按照實(shí)施例2(a)-1(e)的方法制得標(biāo)題化合物(總收率19％)。1H NMR(400MHz，DMSO d6)δ11.08(s，1H)，9.69(s，1H)，8.89(s，1H)，7.99(d，J＝8.40Hz，1H)，7.73(d，J＝7.9Hz，1H)，7.50-7.42(m，3H)，7.28(t，1H)；IR(KBr)2228，2186cm-1IR(KBr)2225，2177cm-1；MS(ES-)m/e 412，414[M-H]-；mp 210-211℃治療方法式(I)的化合物或其可藥用鹽可用于制備用于預(yù)防或治療人類(lèi)或其它哺乳動(dòng)物中任何疾病狀態(tài)的藥物，這些疾病狀態(tài)是由于哺乳動(dòng)物細(xì)胞產(chǎn)生的IL-8細(xì)胞因子過(guò)多或不規(guī)律所引起或加重的，諸如但不限于單核細(xì)胞和/或巨噬細(xì)胞，或其它與IL-8α或β受體，也稱(chēng)作I型或II型受體相結(jié)合的趨化因子。
因此，本發(fā)明提供了-種趨化因子介導(dǎo)疾病的治療方法，其中，趨化因子與IL-8α或β受體結(jié)合，并且此方法包含服用有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽。特別地，趨化因子是IL-8、GROα、GROβ、GROγ、ENA-78或NAP-2。
施用足夠量的式(I)化合物以抑制細(xì)胞因子功能，特別是IL-8、GROα、GROβ、GROγ、ENA-78或NAP-2的功能，使之生物學(xué)調(diào)低到生理功能的正常水平，或在某種意義上調(diào)整到低于正常水平，以改善疾病狀態(tài)。例如在本發(fā)明的上下文中，IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78的異常水平的產(chǎn)生由下列組成(i)游離IL-8水平超過(guò)或等于1皮克/mL；(ii)任何細(xì)胞IL-8、GROα、GROβ、GROγ、ENA-78或NAP-2超過(guò)正常生理水平；或(iii)IL-8、GROα、GROβ、GROγ、ENA-78或NAP-2的存在分別高于在細(xì)胞或組織中產(chǎn)生的IL-8、GROα、GROβ、GROγ、ENA-78或NAP-2的基本水平。
有許多疾病狀態(tài)，其中產(chǎn)生IL-8過(guò)剩或不規(guī)律加重和/或引起疾病。趨化因子介導(dǎo)的疾病牛皮癬、特應(yīng)性皮炎、關(guān)節(jié)炎、哮喘、慢性阻塞性肺病、成人呼吸窘迫綜合征、炎性腸病、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、中風(fēng)、感染性休克、內(nèi)毒素休克、葛蘭氏陰性膿毒血癥、中毒性休克綜合征、心臟和腎臟再灌注損傷、腎小球性腎炎、血栓形成、移植物抗宿主反應(yīng)、阿爾茨海默氏病、同種異體移植物排斥、瘧疾、restinosis、血管生成、動(dòng)脈粥樣硬化、骨質(zhì)疏松癥、齦炎或不良的造血干細(xì)胞釋放。
本發(fā)明化合物也用于治療由呼吸的病毒引起的疾病，包括但不限于鼻病毒和流感病毒、皰疹病毒，包括但不限于皰疹simplexI和II、及肝炎病毒，包括但不限于乙肝和丙肝病毒。
這些疾病主要以大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、T細(xì)胞浸潤(rùn)或新血管生長(zhǎng)為特征，并且和IL-8、GROα、GROβ、GROγ或NAP-2產(chǎn)生增加有關(guān)，其負(fù)責(zé)使中性粒細(xì)胞向炎癥區(qū)域趨化或內(nèi)皮細(xì)胞的方向性生長(zhǎng)。和其它炎癥性細(xì)胞因子(IL-1，TNF，和IL-6)相比，IL-8、GROα、GROβ、GROγ或NAP-2具有獨(dú)特的促使中性粒細(xì)胞趨化、酶的釋放特性，其包括但不限于釋放彈性蛋白酶以及超氧化物產(chǎn)生和活化。通過(guò)IL-8的I或II型受體起作用的α趨化因子并且特別是GROα、GROβ、GROγ或NAP-2，可以通過(guò)促使內(nèi)皮細(xì)胞的方向性生長(zhǎng)從而促使腫瘤的新血管形成。因此，對(duì)IL-8誘導(dǎo)的趨化或活化作用的抑制將導(dǎo)致中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)的直接減少。
最近的證據(jù)還表明了在HIV感染治療中趨化因子的作用，Littleman等，Nature381，pp 661(1996)和Koup等，Nature381，pp 667(1996)。
本發(fā)明還提供了一種治療方法，用式(I)的趨化因子受體拮抗劑化合物治療急性狀態(tài)(setting)，以及用于對(duì)那些被認(rèn)為是易感個(gè)體預(yù)防CNS損傷。
在此定義的CNS損傷包括頭顱開(kāi)放或穿透性創(chuàng)傷，諸如手術(shù)，或閉合性頭顱創(chuàng)傷，如頭顱區(qū)域的損傷。在此定義之內(nèi)還包括缺血性發(fā)作，特另是腦部區(qū)域。
缺血性發(fā)作可以定義為由特定腦部區(qū)域的血液供應(yīng)不足導(dǎo)致的病灶性神經(jīng)紊亂，通常結(jié)果為血管栓塞、血栓或局部動(dòng)脈粥樣硬化閉塞。在此區(qū)域顯示出炎癥性細(xì)胞因子的作用，本發(fā)明提供了一種可能的治療這些損傷的方法。對(duì)諸如這些急性損傷，幾乎沒(méi)有相關(guān)的治療是可行的。
TNF-α是一種具有前炎癥性作用的細(xì)胞因子，其包括內(nèi)皮性白細(xì)胞粘連分子的表達(dá)。白細(xì)胞浸潤(rùn)到缺血性腦損傷區(qū)域，并且因此抑制或減少TNF水平的化合物將對(duì)缺血性腦損傷的治療有用。見(jiàn)Liu等，Stroke，Vol.25.，No.7，pp 1481-88(1994)，其公開(kāi)的內(nèi)容在此引入作為參考。
閉合性頭顱損傷的模型和以混合的5-LO/CO劑的治療在Shohami等，J.of Vaisc & Clinical Physiology and Pharmacology，Vol.3，No.2，pp.99-107(1992)中進(jìn)行了討論，其公開(kāi)的內(nèi)容在此引入作為參考。在那些被治療的動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)減輕水腫形成的治療可改善功能結(jié)果。
服用足夠量的式(I)化合物以抑制與IL-8α或β受體結(jié)合的IL-8與這些受體的結(jié)合，如降低中性粒細(xì)胞趨化和活化作用。式(I)化合物是IL-8結(jié)合的抑制劑的發(fā)現(xiàn)，是基于本文描述的式(I)化合物的在體外受體結(jié)合試驗(yàn)中的效應(yīng)。在一些例子中，顯示出式(I)的化合物是重組I型和II型的IL-8受體的雙重抑制劑。優(yōu)選地，此化合物僅為一種受體的抑制劑，更優(yōu)選的是II型IL-8受體的抑制劑。
本文應(yīng)用的術(shù)語(yǔ)“IL-8介導(dǎo)的疾病或疾病狀態(tài)”指任何和所有的疾病狀態(tài)，其中IL-8、GROα、GROβ、GROγ、ENA-78或NAP-2起著作用，或者通過(guò)產(chǎn)生IL-8、GROα、GROβ、GROγ、ENA-78或NAP-2本身，或者通過(guò)IL-8、GROα、GROβ、GROγ、ENA-78或NAP-2引起另外的單核因子釋放，諸如但不限于IL-1、IL-6或TNF。一種疾病狀態(tài)，其中例如IL-1是主要成分，并且它的產(chǎn)生或作用對(duì)應(yīng)于IL-8的增加或減少，則因此被認(rèn)為是IL-8介導(dǎo)的疾病狀態(tài)。
本文應(yīng)用的術(shù)語(yǔ)“趨化因子介導(dǎo)的疾病或疾病狀態(tài)”指任何和所有的疾病狀態(tài)，其中與IL-8α或β受體結(jié)合的趨化因子起作用，例如但不限于IL-8、GROα、GROβ、GROγ、ENA-78或NAP-2。這包括一種疾病狀態(tài)，其中IL-8起作用，或通過(guò)產(chǎn)生IL-8本身，或通過(guò)IL-8引起另外的單核因子釋放，諸如但不限于IL-1、IL-6或TNF。一種疾病狀態(tài)，其中，例如IL-1是主要成分，并且它的產(chǎn)生或作用對(duì)應(yīng)于IL-8的增加或減少，則因此被認(rèn)為是IL-8介導(dǎo)的疾病狀態(tài)。
本文應(yīng)用的術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞因子”指可以影響細(xì)胞功能的任何分泌的多肽，并且是在免疫、炎癥或造血反應(yīng)中調(diào)整細(xì)胞間相互作用的分子。細(xì)胞因子包括但不限于單核因子和淋巴因子，不論它們由哪些細(xì)胞產(chǎn)生。例如單核因子通常指由諸如巨噬細(xì)胞和/或單核細(xì)胞的單核細(xì)胞產(chǎn)生和分泌的。但是許多其它細(xì)胞也產(chǎn)生單核因子，諸如自然殺傷細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、嗜堿細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、腦星型細(xì)胞、骨髓基質(zhì)細(xì)胞、表皮角化細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞。淋巴因子通常指由淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。細(xì)胞因子的例子包括，但不限于白細(xì)胞介素-1(IL-1)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-8(IL-8)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和腫瘤壞死因子β(TNF-β)。
本文應(yīng)用的術(shù)語(yǔ)“趨化因子”指可以影響細(xì)胞功能的任何分泌的多肽，并且是在免疫、炎癥或造血反應(yīng)中調(diào)整細(xì)胞間相互作用的分子，和上文的術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞因子”相似。趨化因子主要通過(guò)跨膜細(xì)胞(celltrausmembranes)分泌，并引起特定白血細(xì)胞和白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、T-細(xì)胞、B-細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的趨化作用和活化。趨化因子的例子包括但不限于IL-8、GROα、GROβ、GROγ、ENA-78、NAP-2、IP-10、MIP-1α、MIP-β、PF4和MCP1、2和3。
在治療中為了應(yīng)用式(I)的化合物或其可藥用鹽，通常按照標(biāo)準(zhǔn)的藥學(xué)實(shí)踐將其配制成藥物組合物。因此本發(fā)明還涉及包含有效的、無(wú)毒量的式(I)化合物和可藥用載體或稀釋劑的藥物組合物。
式(I)的化合物，其可藥用鹽及如上混合的藥物組合物可以通過(guò)任何方便的給藥途徑施用，例如口服、局部用藥、非腸道給藥或吸入。式(I)的化合物可以通過(guò)常規(guī)方法將式(I)的化合物和標(biāo)準(zhǔn)的藥學(xué)載體結(jié)合制成方便的劑型施用。式(I)的化合物還可以和一種已知的第二種治療上有活性的化合物以方便的劑型聯(lián)合應(yīng)用。這些方法可涉及將適當(dāng)?shù)某煞只旌稀⒅屏：蛪褐苹蛉芙獾侥康闹苿┲?。?yīng)意識(shí)到藥學(xué)可接受特性或稀釋劑的形式和特性受聯(lián)合使用的活性成分的量、給藥途徑和其他眾所周知的變量支配。在與制劑的其它成分相容的意義上說(shuō)，載體必須是“可接受的”并且不會(huì)對(duì)其受者有毒害。
例如，藥用載體可以是固體或液體，典型的固體載體是乳糖、石膏粉、蔗糖、滑石粉、凝膠、瓊脂、膠質(zhì)、阿拉伯樹(shù)膠、硬脂酸鎂、硬脂酸等。典型的液體載體是糖漿、花生油、橄欖油、水等。同樣，載體或稀釋劑可以包括本領(lǐng)域內(nèi)眾所周知的時(shí)間延遲物質(zhì)，諸如單獨(dú)或含石蠟的單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
可以使用的藥物形式很廣泛，因此，如果使用的是一種固體載體，制劑可以制備成片劑、以粉末或成小球形式或以錠劑或糖錠形式放入硬膠囊中。固體載體的量可有很大變化，但是優(yōu)選的是從大約25mg到大約1g。當(dāng)應(yīng)用液體載體時(shí)，制劑可以是糖漿劑、乳劑、軟膠囊、無(wú)菌可注射液，如安瓿或非水混懸液。
式(I)的化合物可以局部施用，即通過(guò)非全身用藥。這包括式(I)的化合物外用到表皮或頰腔和將此混合物滴入耳、眼和鼻，這樣此化合物將不會(huì)明顯的進(jìn)入血液。與此相反，全身用藥指口腔、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)和肌肉內(nèi)給藥。
適用于局部用藥的制劑包括適于穿透皮膚達(dá)到炎癥部位的液體或半液體制劑，諸如擦劑、洗劑、霜?jiǎng)④浉嗷蚝齽┖瓦m用于眼、耳或鼻部用藥的滴劑。對(duì)于局部用藥，在制劑重量中活性成分可包含0.001％到10％w/w，例如從1％到2％。但是它可含有高達(dá)制劑的10％w/w，但優(yōu)選少于5％w/w，更優(yōu)選的是0.1％到1％w/w。
本發(fā)明的洗劑包括適于皮膚或眼部應(yīng)用的那些。眼用洗劑可以包含任選含有殺菌劑的無(wú)菌水溶液并且可以用類(lèi)似于滴劑的制備方法制備。用于皮膚的洗劑或擦劑還可以包括一種加速干燥和使皮膚冷卻的試劑，諸如乙醇或丙酮，和/或一種保濕劑，如甘油或一種油，如蓖麻油或花生油。
本發(fā)明的霜?jiǎng)?、軟膏或糊劑是外用活性成分的半固體制劑。這些制劑可以通過(guò)細(xì)分散或粉末形式的活性成分，單獨(dú)或在水或非水液體的溶液或混懸液中，用適當(dāng)?shù)臋C(jī)械相助與油脂或非油脂基質(zhì)混合而制得?；|(zhì)可以包含烴諸如硬、軟或液體石蠟、甘油、蜂蠟、金屬皂；粘質(zhì)；天然來(lái)源的油諸如杏仁油、玉米油、花生油、蓖麻油或橄欖油；羊毛脂或其衍生物或脂肪酸諸如硬脂酸或油酸和醇諸如丙二醇或大粒凝膠。制劑可以包含任何適當(dāng)?shù)谋砻婊钚詣┲T如陰離子、陽(yáng)離子或非離子表面活性劑如脫水山梨醇酯或其聚氧乙烯衍生物。制劑可以包括懸浮劑諸如天然樹(shù)膠、纖維素衍生物或無(wú)機(jī)物諸如silicaceous硅，和其他成分諸如羊毛脂。
本發(fā)明的滴劑包含無(wú)菌水或油溶液或混懸液，并可以通過(guò)將活性成分溶解到適當(dāng)?shù)臍⒕鷦┖?或殺真菌劑和/或其它任何適當(dāng)?shù)姆栏瘎┑乃芤褐兄苽?，并且?yōu)選包括表面活性劑。然后將所得到的溶液通過(guò)過(guò)濾使之澄清，轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)娜萜魅缓竺芊?，通過(guò)高壓滅菌或維持在98-100℃半小時(shí)滅菌。另外，此溶液還可以通過(guò)過(guò)濾滅菌并用無(wú)菌技術(shù)轉(zhuǎn)移到容器中。適于包含在滴劑中的殺菌劑和殺真菌劑的例子是硝酸苯汞或醋酸苯汞(0.002％)、氯化苯甲烴銨(0.01％)和醋酸洗必泰(0.01％)。合適的用于制備油性溶液的溶劑包括甘油、稀的酒精和丙二醇。
式(I)的化合物可以胃腸外用藥，即通過(guò)靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)、直腸內(nèi)、陰道內(nèi)或腹膜內(nèi)用藥。通常優(yōu)選的胃腸外用藥是皮下和肌內(nèi)形式。適用于此用藥方式的適宜劑型可以通過(guò)常規(guī)技術(shù)制備。式(I)的化合物還可以通過(guò)吸入用藥，即通過(guò)鼻內(nèi)和口腔吸入。適用于此用藥方式的適宜劑型諸如氣霧劑或計(jì)量吸入器可以通過(guò)常規(guī)技術(shù)制備。
對(duì)于本文公開(kāi)的式(I)化合物的所有應(yīng)用方法，每日口服劑量方案優(yōu)選從大約0.01到大約80mg/kg體重。每日胃腸外劑量方案優(yōu)選從大約0.001到大約80mg/kg體重。每日局部用藥劑量方案優(yōu)選從0.1mg到150mg，每日用藥1到4次，優(yōu)選2或3次。每日吸入用藥劑量?jī)?yōu)選從大約0.01mg/kg到大約1mg/kg。本領(lǐng)域的技術(shù)人員也意識(shí)到式(I)化合物或可藥用鹽的個(gè)體劑量的最佳量和間隔將取決于待治療疾病的性質(zhì)和程度、劑型、用藥途徑和部位和待治療的特定患者，并且此最佳治療方案可由方便的技術(shù)決定。本領(lǐng)域的技術(shù)人員還意識(shí)到最佳的治療過(guò)程，即對(duì)于一個(gè)確定天數(shù)的治療，每天服用式(I)化合物或其可藥用鹽的劑量，可以由本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人員應(yīng)用常規(guī)的治療測(cè)定試驗(yàn)過(guò)程確定。
現(xiàn)在本發(fā)明將通過(guò)下列生物學(xué)實(shí)施例進(jìn)行描述。這些實(shí)施例只是用于說(shuō)明而不是作為本發(fā)明范圍的限制。
生物學(xué)實(shí)施例本發(fā)明化合物的IL-8和GRO-α趨化因子抑制效應(yīng)是用下列體外分析方法測(cè)定的受體結(jié)合分析
從Amersham Corp.，Arlington Heights，IL獲得[125I]IL-8(人類(lèi)重組體)，比活性為2000 Ci/mmol。從NEN-New EnglandNuclear獲得GRO-α。所有其它化學(xué)試劑為分析級(jí)。高水平的重組人類(lèi)IL-8α型和β型受體是在中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞上分別表達(dá)，如前所述(Holmes等，Science，1991，253，1278)。按照前述方法(Haour等，J Biol Chem.，249 pp 2195-2205(1974))將中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢膜均質(zhì)化。此外，均質(zhì)化緩沖液改為10mM Tris-HCL、1mM MgSO4、0.5mM EDTA(乙二胺四乙酸)、1mM PMSF(α-甲苯磺酰氟)、0.5mg/L亮肽素，pH 7.5。用Pierce Co.微分析試劑盒(Pierce Co.micro-assay kit)用牛血清白蛋白作為標(biāo)準(zhǔn)，測(cè)定膜蛋白的濃度。所有的分析均在96孔微孔平板中進(jìn)行。每個(gè)反應(yīng)混合物在20mM Bis-Trispropane和0.4mM Tris HCl緩沖液(pH 8.0)中含有125I IL-8(0.25nM)或125IGro-α和0.5μg/mL的IL-8Rα或1.0μg/mL的IL-8Rβ膜，緩沖液中含有1.2mM MgSO4、0.1mM EDTA、25mM NaCl和0.03％CHAPS。另外，加入預(yù)先溶解在DMSO中的待測(cè)藥物或化合物以達(dá)到的最終濃度在0.01nM和100uM之間。通過(guò)加入125I-IL-8開(kāi)始測(cè)試，在室溫下1小時(shí)后，在用含有1％聚乙烯亞胺/0.5％BSA阻擋的玻璃纖維filtermat上用Tomtec96孔收集器對(duì)此平板進(jìn)行收集，并用25mM NaCl、10mMTrisHCl、1mM MgSO4、0.5mM EDTA、0.03％CHAPS，pH 7.4洗滌三次。然后將過(guò)濾器干燥并在Betaplate液體閃爍計(jì)數(shù)器上計(jì)數(shù)。重組體IL-8Rα，或I型受體在本文還指非許可受體，并且重組體IL-8Rβ，或II型受體指許可受體。
在本文合成化學(xué)部分實(shí)施例1到11顯示的所有的式(I)的舉例化合物證明在IL-8受體抑制許可模型(IL-8)中IC50為大約5到大約100nM/mL。發(fā)現(xiàn)在2-位無(wú)離解質(zhì)子的化合物，N-(2-烯丙基氧基-4-氰基-苯基)-N’-(2-溴苯基)-N”-氰基胍在這一分析中無(wú)活性。
趨化分析這些化合物的體外抑制特性用中性粒細(xì)胞趨化作用分析方法測(cè)定，如在Current Protocols in Immunology，Vol I，Suppl 1，Unit6.12.3所述，其公開(kāi)內(nèi)容在此全部引入作為參考。如在CurrentProtocols in Immunology，Vol I，Suppl 1，Unit 7.23.1所述，從人血中分離中性粒細(xì)胞，其公開(kāi)內(nèi)容在此全部引入作為參考。將化學(xué)引誘劑IL-8、GRO-α、GRO-β、GRO-γ和NAP-2置入48多孔室(NeuroProbe，Cabin John，MD)的底室，濃度為0.1～100nM。兩室之間以5um的聚碳酸酯過(guò)濾器分隔。當(dāng)測(cè)試本發(fā)明的化合物時(shí)，就在上室加入細(xì)胞前和細(xì)胞混合(0.001-1000nM)。在潮濕的含有5％CO2的孵化器中在大約37℃持續(xù)孵化約45-90分鐘。在孵化期最后，將聚碳酸酯膜移開(kāi)并且洗滌頂側(cè)，然后用Diff Quick染色方法(Baxter Products，McGaw Park，IL，USA)將膜染色。趨化到趨化因子的細(xì)胞用顯微鏡目測(cè)計(jì)數(shù)。通常，每個(gè)樣品計(jì)數(shù)4個(gè)區(qū)域，這些數(shù)值平均作為遷移細(xì)胞的平均數(shù)量。每個(gè)樣品檢驗(yàn)三次而每個(gè)化合物重復(fù)測(cè)試至少4次。對(duì)于特定細(xì)胞(陽(yáng)性對(duì)照細(xì)胞)沒(méi)有加入化合物，這些細(xì)胞具有細(xì)胞的最大趨化反應(yīng)。在需陰性對(duì)照(未受刺激)的情況下，底室沒(méi)有加入趨化因子。陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照之間的差別代表了細(xì)胞的趨化活性。
彈性蛋白酶釋放分析測(cè)試本發(fā)明化合物對(duì)阻止彈性蛋白酶從人中性粒細(xì)胞釋放的能力。按照Current Protocols in Immunology Vol I，Suppl 1 Unit7.23.1中所述從人血液中分離出中性粒細(xì)胞。將懸浮在Ringer’sSolution(NaCl 118，KCl 4.56，NaHCO325，KH2PO41.03，葡萄糖11.1，HEPES 5mM，pH 7.4)中的PMNs 0.88×106個(gè)細(xì)胞放入96孔平板中，每孔體積50ul。向此平板加入50ul待測(cè)化合物(0.001-1000nM)、細(xì)胞松弛素B 50ul(20ug/ml)和Ringers緩沖液50ul。在加入終濃度為0.01-1000nM IL-8、GROα、GROβ、GROγ或NAP-2之前，將這些細(xì)胞溫育(37℃，5％CO2，95％RH)5分鐘。反應(yīng)持續(xù)45分鐘，然后將96孔平板離心(800×g 5分鐘)并將100ul上清液移走。將該上清加入到另一個(gè)96孔平板中，隨后加入終濃度為6ug/ml的人造彈性蛋白酶底物(MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC，NovaBiochem，La Jolla，CA)的磷酸鹽緩沖液。立即將平板置入96孔平板熒光讀數(shù)器(Cytofluor 2350，Millipore，Bedford，MA)中，按Nakajima等J.Biol Chem2544027(1979)的方法以3分鐘間隔記錄數(shù)據(jù)。從PMNs釋放的彈性蛋白酶的量可以通過(guò)測(cè)量MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val-AMC的降解速度計(jì)算出來(lái)。
在創(chuàng)傷性腦損傷中的TNF-α分析這一分析方法提供了腫瘤壞死因子mRNA在大鼠特定腦區(qū)域表達(dá)的檢驗(yàn)，該腦區(qū)域因被實(shí)驗(yàn)性引起的側(cè)面液性打擊而引起創(chuàng)傷性腦損傷(TBI)。成年Sprague-Dawley大鼠(n＝42)以戊巴比妥鈉麻醉(60mg/kg，腹腔注射)并遭受到中度側(cè)面液體打擊腦損傷(2.4atm.)，其中心位于左側(cè)顳頂部皮質(zhì)(n＝18)，或“模擬”處理(無(wú)損傷麻醉并手術(shù)，n＝18)。在損傷1、6和24小時(shí)后將動(dòng)物斷頭處死，取出腦，制備左側(cè)(傷側(cè))頂部皮質(zhì)(LC)、對(duì)面右側(cè)皮質(zhì)相應(yīng)的區(qū)域(RC)、損傷的頂部皮質(zhì)附近的皮質(zhì)(LA)、右側(cè)皮質(zhì)的相應(yīng)臨近區(qū)域(RA)、左側(cè)海馬(LH)和右側(cè)海馬(RH)的組織樣本。分離總RNA并實(shí)施Northern印記雜交且相對(duì)于TNF-α陽(yáng)性對(duì)照RNA(巨噬細(xì)胞＝100％)進(jìn)行定量。在受傷后1小時(shí)時(shí)的受傷側(cè)半球觀察到在LH中(陽(yáng)性對(duì)照的104±17％，和模擬組相比p＜0.05)、在LC中(105±21％，p＜0.05)和在LA中(69±8％，p＜0.01)TNFαmRNA表達(dá)的顯著增加。在傷后6小時(shí)也觀察到在LH中(46±8％，p＜0.05)、在LC中(30±3％，p＜0.01)和在LA中(32±3％，p＜0.01)TNF-αmRNA表達(dá)的增加，在傷后24小時(shí)就消退了。在對(duì)側(cè)半球，在傷后1小時(shí)，在RH中(46±2％，p＜0.01)、RC中(4±3％)和RA中(22±8％)，在傷后6小時(shí)RH中(28±11％)、RC中(7±5％)和RA中(26±6％，p＜0.05)TNF-αmRNA的表達(dá)增加，但是在傷后24小時(shí)則沒(méi)有。在模擬組(無(wú)損傷手術(shù))或空白動(dòng)物，在任何時(shí)間，不論哪側(cè)半球，6個(gè)腦區(qū)域均沒(méi)有觀察到TNF-αmRNA表達(dá)的一致改變。這些結(jié)果顯示在旁矢狀面液體打擊腦損傷后，在特定腦區(qū)有暫時(shí)的TNF-αmRNA表達(dá)改變，包括非創(chuàng)傷半球的變化。因?yàn)門(mén)NF-α能誘導(dǎo)神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)并刺激其他細(xì)胞因子從活化的腦星型細(xì)胞的釋放，創(chuàng)傷后TNF-α基因表達(dá)的改變?cè)趯?duì)CNS創(chuàng)傷的急性和再生性回應(yīng)中均起著重要的作用。
IL-βmRNA的CNS損傷模型此分析方法以在大鼠實(shí)驗(yàn)性側(cè)面液體打擊腦損傷(TBI)后特定腦區(qū)的白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)mRNA的區(qū)域性表達(dá)為特征。成年Sprague-Dawley大鼠(n＝42)用戊巴比妥鈉麻醉(60mg/kg，腹腔注射)并遭受中度側(cè)面液體打擊腦損傷(2.4atm.)，其中心位于左側(cè)顳頂部皮質(zhì)(n＝18)，或“模擬”處理(無(wú)損傷麻醉并手術(shù))。在損傷1、6和24小時(shí)后將動(dòng)物斷頭處死，取出腦，制備左側(cè)(傷側(cè))頂部皮質(zhì)(LC)、對(duì)面右側(cè)皮質(zhì)相應(yīng)的區(qū)域(RC)、損傷的頂部皮質(zhì)附近的皮質(zhì)(LA)、右側(cè)皮質(zhì)的相應(yīng)臨近區(qū)域(RA)、左側(cè)海馬(LH)和右側(cè)海馬(RH)的組織樣本。分離總RNA并實(shí)施Northern印記雜交，得到腦組織IL-1βmRNA的量用負(fù)荷在同樣的凝膠上的IL-1β陽(yáng)性巨噬細(xì)胞RNA相對(duì)放射活性的百分比表示。在腦損傷1小時(shí)后，在受傷側(cè)半球，觀察到LC中(陽(yáng)性對(duì)照的20.0±0.7％，n＝6，和模擬動(dòng)物相比p＜0.05)、LH中(24.5±0.9％，p＜0.05)和LA中(21.5±3.1％，p＜0.05) IL-1βmRNA的表達(dá)有明顯的和顯著的增加，傷后到6小時(shí)，在LC中(4.0±0.4％，n＝6，p＜0.05)和LH中(5.0±1.3％，p＜0.05)上述觀察現(xiàn)象仍然存在。在模擬或空白動(dòng)物中，沒(méi)有在任何相關(guān)腦區(qū)域觀察到IL-1βmRNA的表達(dá)。這些結(jié)果顯示在TBI后，在特定腦區(qū)IL-1βmRNA的暫時(shí)表達(dá)局部受到刺激。這些區(qū)域的細(xì)胞因子，諸如IL-1β的變化在創(chuàng)傷后起作用。
在本說(shuō)明書(shū)中引用的所有出版物，包括但不限于專(zhuān)利和專(zhuān)利申請(qǐng)?jiān)诖艘胱鳛閰⒖?，就象每一單?dú)的出版物被詳細(xì)地并單獨(dú)地指出被全文引入作為參考一樣。
上述描述完全公開(kāi)了本發(fā)明，包括其優(yōu)選實(shí)施方案。在此特別公開(kāi)的實(shí)施方案的改善和改進(jìn)屬于下列權(quán)利要求書(shū)的范圍內(nèi)。如果不進(jìn)一步詳細(xì)闡述，據(jù)信本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以應(yīng)用前面描述，最大程度地利用本發(fā)明。因此，此處實(shí)施例將僅作為說(shuō)明解釋?zhuān)谌魏我饬x上都不限制本發(fā)明的范圍。本發(fā)明要求保護(hù)的專(zhuān)有權(quán)或特許權(quán)的具體內(nèi)容如下文所限定。
權(quán)利要求
1.一種治療趨化因子介導(dǎo)的疾病的方法，其中趨化因子結(jié)合到哺乳動(dòng)物IL-8α或β受體上，疾病選自瘧疾、再狹窄、血管發(fā)生、動(dòng)脈粥樣硬化、骨質(zhì)疏松癥、齦炎、不良的造血干細(xì)胞釋放和由呼吸病毒、皰疹病毒及肝炎病毒導(dǎo)致的疾病，肝炎病毒包括但不限于乙肝和丙肝病毒，其包括給所述哺乳動(dòng)物施用有效量的式(I)化合物或其可藥用鹽 其中Z為氰基、OR11、C(O)NR15R16、R18、C(O)R11、C(O)OR11、或S(O)2R17；R為具有可離解氫的任何官能團(tuán)并且pKa為10或更低；R1獨(dú)立選自氫、鹵素、硝基、氰基、鹵代的C1-10烷基、C1-10烷基、C2-10鏈烯基、C1-10烷氧基、鹵代的C1-10烷氧基、疊氮化物、(CR8R8)qS(O)tR4、羥基、羥基C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳基氧基、芳基C1-4烷基氧基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基、雜芳基C1-4烷基氧基、芳基C2-10鏈烯基、雜芳基C2-10鏈烯基、雜環(huán)基C2-10鏈烯基、(CR8R8)qNR4R5、C2-10鏈烯基C(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R10、S(O)3H、S(O)3R8、(CR8)qC(O)R11、C2-10鏈烯基C(O)R11、C2-10鏈烯基C(O)OR11、(CR8R8)qC(O)OR12、(CR8R8)qOC(O)R11、(CR8R8)qNR4C(O)R11、(CR8R8)qNHS(O)2R19、(CR8R8)qS(O)2NR4R5、或兩個(gè)R1部分可共同形成O-(CH2)sO-或5到6元飽和的或不飽和的環(huán)，并且其中芳基、雜芳基和雜環(huán)基可任選被取代；q為0、或1～10的整數(shù)；t為0、或1或2的整數(shù)；s為1～3的整數(shù)；v為0、或1～4的整數(shù)；R4和R5獨(dú)立為氫、任選取代的C1-4烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳基C1-4烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳基C1-4烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基、或R4和R5和與其相連的氮共同形成5到7元環(huán)，其可任選包含另一個(gè)選自氧、氮或硫的雜原子；Y獨(dú)立選自氫、鹵素、硝基、氰基、鹵代的C1-10烷基、C1-10烷基、C2-10鏈烯基、C1-10烷氧基、鹵代的C1-10烷氧基、疊氮化物、(CR8R8)qS(O)tR4、羥基、羥基C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳基氧基、芳基C1-4烷基氧基、雜芳基、雜芳基烷基、雜芳基C1-4烷基氧基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基、芳基C2-10鏈烯基、雜芳基C2-10鏈烯基；雜環(huán)基C2-10鏈烯基、(CR8R8)qNR4R5、C2-10鏈烯基C(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R10、S(O)3H、S(O)3R8、(CR8R8)qC(O)R11、C2-10鏈烯基C(O)R11、C2-10鏈烯基C(O)OR11、C(O)R11、(CR8R8)qC(O)OR12、(CR8R8)qOC(O)R11、(CR8R8)qNR4C(O)R11、(CR8R8)qNHS(O)2Rd、(CR8R8)qS(O)2NR4R5、或者兩個(gè)Y共同形成O-(CH2)sO-或5到6元飽和的或不飽和的環(huán)，并且其中芳基、雜芳基和雜環(huán)基可任選被取代；n為1～3的整數(shù)；m為1～3的整數(shù)；R6和R7獨(dú)立為氫或C1-4烷基；或R6和R7和與其相連的氮共同形成5到7元環(huán)，該環(huán)可任選包含另一個(gè)選自氧、氮或硫的雜原子；R8獨(dú)立選自氫或C1-4烷基；R10為C1-10烷基C(O)2R8；R11為氫、C1-4烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳基C1-4烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳基C1-4烷基、任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜環(huán)基C1-4烷基；R12為氫、C1-10烷基、任選取代的芳基或任選取代的芳基烷基；R13和R14獨(dú)立為氫、任選取代的C1-4烷基或R13和R14之一為任選取代的芳基；R15和R16獨(dú)立為氫、任選取代的C1-4烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳基C1-4烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳基C1-4烷基、任選取代的雜環(huán)基、任選取代的雜環(huán)基C1-4烷基、或R15和R16和與之相連的氮一起形成5到7員環(huán)，該環(huán)任選包含另外一個(gè)選自氧、氮或硫的雜原子；R17為C1-4烷基、NR15R16、OR11、任選取代的芳基、任選取代的芳基C1-4烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳基C1-4烷基、任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜環(huán)基C1-4烷基；R18為任選取代的C1-4烷基、任選取代的芳基、任選取代的芳基C1-4烷基、任選取代的雜芳基、任選取代的雜芳基C1-4烷基、任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜環(huán)基C1-4烷基；R19為C1-4烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基C1-4烷基，其中所有這些基團(tuán)可任選被取代；Rd為NR6R7、烷基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4鏈烯基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜芳基C2-4鏈烯基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基，其中烷基、芳基、芳基烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基和雜環(huán)基烷基環(huán)可被任選取代；W是 或 包含E’的環(huán)任選選自下列 或 星號(hào)*表示與環(huán)連接的點(diǎn)；W1是 或 包含E的環(huán)任選選自下列 或 星號(hào)*表示與環(huán)連接的點(diǎn)。
2.權(quán)利要求1的方法，其中可離解的氫的pKa為3～10。
3.權(quán)利要求2的方法，其中R是羥基、羧基、硫羥基、SR2、OR2、NH-C(O)Ra、C(O)NR6’R7’、NHS(O)2Rb、S(O)2NHRc、NHC(X2)NHRb或四唑基；其中R2為取代的芳基、雜芳基或雜環(huán)部分，該環(huán)含有pKa為10或更小的可離解氫的官能團(tuán)；R6’和R7’為氫、C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4鏈烯基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜芳基C2-4鏈烯基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基、雜環(huán)基C2-4鏈烯基，所有這些基團(tuán)可任選獨(dú)立地被下列基團(tuán)1-3次取代鹵素、硝基、鹵代的C1-4烷基，例如CF3；C1-4烷基，例如甲基；C1-4烷氧基，例如甲氧基；NR9C(O)Ra；C(O)NR6R7、S(O)3H或C(O)OC1-4烷基，條件是R6’和R7’之一為氫，但不能兩者都為氫；Ra為芳基、芳基C1-4烷基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基C1-4烷基，所有這些基團(tuán)可任選被取代；Rb為NR6R7、烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4鏈烯基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜芳基C2-4鏈烯基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基、雜環(huán)基C2-4鏈烯基部分、樟腦，所有這些基團(tuán)可任選獨(dú)立地被下列基團(tuán)1-3次取代鹵素、硝基、鹵代的C1-4烷基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NR9C(O)Ra、C(O)NR6R7、S(O)3H或C(O)OC1-4烷基；R9為氫或C1-4烷基；Rc為烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4鏈烯基、雜芳基、雜芳基C1-4烷基、雜芳基C2-4鏈烯基、雜環(huán)基、雜環(huán)基C1-4烷基或雜環(huán)基C2-4鏈烯基部分，所有這些基團(tuán)可任選獨(dú)立地被下列基團(tuán)1-3次取代鹵素、硝基、鹵代的C1-4烷基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NR9C(O)Ra、C(O)NR6R7、S(O)3H或C(O)OC1-4烷基；以及X2為氧或硫。
4.權(quán)利要求3的方法，其中R2任選被下列基團(tuán)1-3次取代鹵素、硝基、鹵代C1-10烷基、C1-10烷基、C1-10烷氧基、羥基、SH、C(O)NR6’R7’、NH-C(O)Ra、NHS(O)Rb、S(O)NR6R7、C(O)OR8或四唑基環(huán)。
5.權(quán)利要求3的方法，其中R為OH、-NHS(O)2Rb或C(O)OH。
6.權(quán)利要求1的方法，其中R1為鹵素、氰基、硝基、CF3、C(O)NR4R5、鏈烯基C(O)NR4R5、C(O)R4R10、鏈烯基C(O)OR12、雜芳基、雜芳基烷基、雜芳基鏈烯基或S(O)NR4R5。
7.權(quán)利要求1的方法，其中Y為鹵素、C1-4烷氧基、任選取代的芳基、任選取代的芳基烷氧基、亞甲基二氧基、NR4R5、硫代C1-4烷基、硫代芳基、鹵代的烷氧基、任選取代的C1-4烷基、羥基烷基。
8.權(quán)利要求1的方法，其中R為OH、SH或NHS(O)sRb以及R1在3-位、4-位被拉電子基團(tuán)取代或在3，4-位被拉電子基團(tuán)二取代。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的式(I)化合物、藥物組合物和其在治療由趨化因子，白介素－8(IL－8)介導(dǎo)的疾病狀態(tài)中的用途。
文檔編號(hào)A61K31/277GK1494424SQ00808920
公開(kāi)日2004年5月5日 申請(qǐng)日期2000年6月16日 優(yōu)先權(quán)日1999年6月16日
發(fā)明者D·L·布賴(lài)安, J·G·格萊森, K·L·維多森, G·M·本森, D L 布賴(lài)安, 本森, 格萊森, 維多森 申請(qǐng)人:史密絲克萊恩比徹姆公司