專利名稱：抗真菌組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種抗真菌組合物，該組合物含有吡咯尼群和至少一種選自拉諾康唑、布替萘芬或其鹽以及烯丙胺類抗真菌藥物的物質(zhì)作為有效成分，并且該組合物被用于醫(yī)療領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
吡咯尼群是由下面的結(jié)構(gòu)式(1)所表示的、具有抗真菌作用的藥物，它以單一藥物給藥方案或與其它具有抗真菌作用的藥物的多種藥物給藥方案被廣泛使用。
作為多種藥物給藥方案，已知的有含吡咯尼群和克霉唑等咪唑類抗真菌物質(zhì)作為有效成分的抗真菌組合物(特開昭61-56127號(hào)公報(bào))。
一方面，分別以下面結(jié)構(gòu)式(2)-(4)表示的拉諾康唑、布替萘芬以及烯丙胺類抗真菌藥物特比萘芬都是具有抗真菌作用的藥物，這些藥物也可以作為單一藥物使用。
但是，對(duì)含有吡咯尼群和至少一種選自拉諾康唑、布替萘芬或其鹽以及烯丙胺類抗真菌藥物特比萘芬或其鹽的物質(zhì)作為有效成分的抗真菌組合物卻根本沒有了解。
雖然這些抗真菌藥物的任何一種單獨(dú)使用時(shí)都顯示出優(yōu)異的抗真菌作用，但是從減輕副作用、改善患者的順應(yīng)性、降低主藥成本等角度出發(fā)，仍然希望開發(fā)具有更強(qiáng)活性的抗真菌藥物。 發(fā)明的公開本發(fā)明的發(fā)明者們通過將吡咯尼群與拉諾康唑合用、將吡咯尼群與布替萘芬或其鹽合用以及將吡咯尼群與烯丙胺類抗真菌藥物，特別是特比萘芬或其鹽合用，取得了比這些藥物各自單獨(dú)使用時(shí)更好的協(xié)同效果，獲得了具有更強(qiáng)抗菌及殺菌活性的抗真菌藥物。
本發(fā)明抗真菌組合物的特征在于其含有吡咯尼群和至少一種選自拉諾康唑、布替萘芬或其鹽以及烯丙胺類抗真菌藥物的物質(zhì)作為有效成分。
優(yōu)選本發(fā)明抗真菌組合物的特征在于其含有吡咯尼群和拉諾康唑作為有效成分。
還優(yōu)選本發(fā)明抗真菌組合物的特征在于其含有吡咯尼群和布替萘芬或其鹽作為有效成分。
在本發(fā)明的抗真菌組合物中，布替萘芬的鹽的例子有鹽酸鹽等。
還優(yōu)選本發(fā)明抗真菌組合物的特征在于其含有吡咯尼群和烯丙胺類抗真菌藥物作為有效成分。
適用于本發(fā)明抗真菌組合物的烯丙胺類抗真菌藥物優(yōu)選特比萘芬或其鹽。
特比萘芬的鹽的例子有鹽酸鹽等。
實(shí)施發(fā)明的最佳形態(tài)在本發(fā)明的這些抗真菌組合物中，所含吡咯尼群和拉諾康唑、吡咯尼群和布替萘芬或其鹽、以及吡咯尼群和烯丙胺類抗真菌藥物的重量比均為10∶1-1∶10，優(yōu)選5∶1-1∶5，更優(yōu)選2∶1-1∶2，但是所述比例可隨抗真菌藥物的種類、所要治療的病原菌以及癥狀的輕重程度等而適當(dāng)增減。
本發(fā)明的這些抗真菌組合物中所含的有效成分，即吡咯尼群和拉諾康唑、吡咯尼群和布替萘芬或其鹽、吡咯尼群和烯丙胺類抗真菌藥物的含有比例均為0.01-10％重量，優(yōu)選0.05-5％重量。
在本發(fā)明的這些抗真菌組合物中，有效成分的投藥量可根據(jù)劑型、兩種有效成分的含有比例、所要治療的病原菌以及癥狀的輕重程度等進(jìn)行適當(dāng)選擇，但是一般均在0.01-10mg/日，優(yōu)選在0.05-5mg/日的范圍內(nèi)進(jìn)行投藥。
而且，除上述有效成分之外，在本發(fā)明的抗真菌組合物中還可以適當(dāng)配合例如克羅米通、苯海拉明、利多卡因、辛可卡因、水楊酸甲酯、薄荷醇、樟腦、甘草次酸、甘菊環(huán)烴等止癢、消炎、鎮(zhèn)痛或局部麻醉劑；苯扎氯銨、芐索氯銨、氯己定、苯酚、三氯叔丁酯、碘等殺菌劑；水楊酸、癸二酸二乙酯、尿素、硫等角質(zhì)軟化滲透劑；氯化鋅、尿囊素等收斂劑或修復(fù)劑等。
對(duì)本發(fā)明的抗真菌組合物的劑型沒有特別限制，可以使用與已知抗真菌藥物相同的劑型，例如溶液、凝膠、乳膏、軟膏、氣溶膠、粉末、陰道栓等，優(yōu)選作為外用藥物使用。
本發(fā)明的抗真菌組合物可以與下述的各種藥用基質(zhì)、載體配合，并可以通過常用方法，例如第十三次修改的日本藥典所記載的方法制成上述的劑型。
舉例來說，當(dāng)制成軟膏時(shí)，可以加入凡士林、白蠟、石蠟、聚乙二醇等；當(dāng)制成乳膏時(shí)，可以加入油脂、高級(jí)脂肪酸、高級(jí)醇、脂肪酸酯、精制水、多元醇、乳化劑等；當(dāng)制成凝膠時(shí)，可以加入羧基乙烯基聚合物、水溶性堿性物質(zhì)(堿的氫氧化物等)、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、精制水、低級(jí)醇、多元醇、聚乙二醇等；當(dāng)制成溶液時(shí)，可以加入低級(jí)醇、甘油、丙二醇、精制水等。
下面通過測(cè)試?yán)齺碚f明本發(fā)明抗真菌組合物的效果。
測(cè)試?yán)?吡咯尼群(以下也稱為[PY])和拉諾康唑(以下也稱為[LC])合用的協(xié)同效果1.測(cè)試菌a白假絲酵母(Candida albicans)YU-1200b白假絲酵母12012c紅色發(fā)癬菌(Trichophyton rubrum)7030d紅色發(fā)癬菌7010
2.測(cè)試培養(yǎng)基薩布羅葡萄糖瓊脂(葡萄糖2％)3.測(cè)試菌液的配制利用薩布羅葡萄糖瓊脂(葡萄糖2％)的斜面培養(yǎng)基將發(fā)癬菌(Trichophyton spp.)在25℃培養(yǎng)2-3周后，向測(cè)試菌的斜面部分加入約3-5ml添加了0.1％(w/v)吐溫80的殺菌生理鹽水，用白金環(huán)刮擦斜面部分，以使分生狍子游離。將收集的分生狍子懸浮液用細(xì)篩孔金屬網(wǎng)過濾除去菌絲塊，之后在3000xg下離心10分鐘，使分生狍子濃縮，然后使其再懸浮于上述殺菌生理鹽水中，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)，將其調(diào)整至預(yù)定的分生狍子數(shù)目(105個(gè)孢子/ml)。
用薩布羅液體培養(yǎng)基(葡萄糖2％)將白假絲酵母在30℃培養(yǎng)24小時(shí)之后，將所得菌液用相同培養(yǎng)基稀釋至10倍(105個(gè)細(xì)胞/ml)，使用所得菌液。
4.所用藥物分別用乙醇將PY、用二甲基亞砜(DMSO)將LC配制成1mg/ml的溶液，接下來，用20％乙醇作為稀釋液將PY液配制成所定濃度，用10％DMSO作為稀釋液將LC配制成所定濃度。
5.通過瓊脂平板稀釋法測(cè)定合用效果使用薩布羅葡萄糖瓊脂，并將9ml培養(yǎng)基與所定濃度的0.5ml PY液和0.5ml LC液混合，制成含有藥物的平板來測(cè)定抑制效果(方格圖案法)。
用壓印法(stamping method)接種所定菌液(細(xì)胞數(shù)或孢子數(shù)/ml)，分別將發(fā)癬菌在25℃培養(yǎng)2周，將假絲酵母(Candida spp.)在30℃培養(yǎng)2天后判定各測(cè)試菌是否生長(zhǎng)。
通過PY和LC的單獨(dú)使用以及兩者結(jié)合使用所得到的MIC值計(jì)算出FIC指數(shù)。
結(jié)果如表1所示。
表1MIC值(μg/ml) ( )內(nèi)為FIC指數(shù)值

測(cè)試?yán)?PY和LC1∶1合用時(shí)的殺菌效果(測(cè)試條件)所用培養(yǎng)基薩布羅(葡萄糖2％)液體培養(yǎng)基測(cè)試菌白假絲酵母12012接種菌量約104個(gè)細(xì)胞/ml(將1％在30℃培養(yǎng)了24小時(shí)的菌株用薩布羅液體培養(yǎng)基進(jìn)行接種)(測(cè)試方法)向配制成濃度為所定濃度10倍的1體積份藥物溶液中，加入9體積份接種了菌株的薩布羅液體培養(yǎng)基，混合后，在30℃培養(yǎng)24小時(shí)，判定MIC。
進(jìn)一步從各種濃度的測(cè)試菌液中取0.1ml的試樣，將其接種在預(yù)先制好的薩布羅(葡萄糖2％)瓊脂平板培養(yǎng)基上，并用康拉迪涂取器進(jìn)行涂抹。
于30℃培養(yǎng)2天以后，對(duì)所形成的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，求出每0.1ml中殘存的活菌數(shù)。殘存的活菌株數(shù)示于表2。
表2活菌株數(shù)(CFU/0.1ml)(∞表示103-104個(gè))

從測(cè)試?yán)?的結(jié)果可明顯看出，本發(fā)明的PY和LC混合而成的抗真菌組合物對(duì)于測(cè)試菌表現(xiàn)出很強(qiáng)的協(xié)同效果。
進(jìn)而，從測(cè)試?yán)?的結(jié)果可明顯看出，本發(fā)明的PY和LC混合而成的抗真菌組合物與它們各自單獨(dú)使用時(shí)相比，在低濃度下表現(xiàn)出很強(qiáng)的殺菌效果。
測(cè)試?yán)?吡咯尼群(以下也稱為[PY])和布替萘芬鹽酸鹽(以下也稱為[BTF])合用的協(xié)同效果1.測(cè)試菌e紅色發(fā)癬菌7005f.紅色發(fā)癬菌7030g表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)150012.測(cè)試培養(yǎng)基發(fā)癬菌使用與測(cè)試?yán)?相同的培養(yǎng)基。
一般細(xì)菌(表皮葡萄球菌)使用Mueller Hinton瓊脂。
3.測(cè)試菌液的配制對(duì)發(fā)癬菌進(jìn)行與測(cè)試?yán)?相同的操作。
用Mueller Hinton液體培養(yǎng)基將一般細(xì)菌在37℃培養(yǎng)20小時(shí)之后，用相同培養(yǎng)基將其稀釋至100倍(106個(gè)細(xì)胞/ml)，使用所得菌液。
4.所用藥物分別用乙醇將PY、用二甲基亞砜(DMSO)將BTF配制成1mg/ml的溶液，接下來，用20％乙醇作為稀釋液將PY液配制成所定濃度，用10％DMSO作為稀釋液將BTF配制成所定濃度。
5.通過瓊脂平板稀釋法測(cè)定合用效果對(duì)于發(fā)癬菌，將9ml培養(yǎng)基與所定濃度的0.5ml PY液和0.5ml BTF液混合，制成含有藥物的平板，進(jìn)行與測(cè)試?yán)?相同的操作。
對(duì)于一般細(xì)菌，使用Mueller Hinton瓊脂制成平板，進(jìn)行測(cè)試?yán)?相同的操作，在37℃培養(yǎng)20小時(shí)之后，判定測(cè)試菌是否生長(zhǎng)。
FIC指數(shù)的計(jì)算也與測(cè)試?yán)?相同。
結(jié)果如表3所示。
表3MIC值(μg/ml)( )內(nèi)為FIC指數(shù)值

從測(cè)試?yán)?的結(jié)果可明顯看出，本發(fā)明的PY和BTF混合而成的抗真菌組合物對(duì)于測(cè)試菌表現(xiàn)出很強(qiáng)的協(xié)同效果。
測(cè)試?yán)?吡咯尼群(以下也稱為[PY])和鹽酸特比萘芬(以下也稱為[TF])合用的協(xié)同效果1.測(cè)試菌h白假絲酵母16010i紅色發(fā)癬菌7010j紅色發(fā)癬菌7030k金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)FP51表皮葡萄球菌150012.測(cè)試培養(yǎng)基葡萄球菌(Staphylococcus spp.)使用Mueller Hinton瓊脂培養(yǎng)基，真菌使用薩布羅葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(葡萄糖2％)。
3.測(cè)試菌液的配制利用薩布羅葡萄糖瓊脂(葡萄糖2％)的斜面培養(yǎng)基將發(fā)癬菌在25℃培養(yǎng)2-3周后，向測(cè)試菌的斜面部分加入約3-5ml添加了0.1％(w/v)吐溫80的殺菌生理鹽水，用白金環(huán)刮擦斜面部分，以使分生狍子游離。將收集的分生狍子懸浮液用細(xì)篩孔金屬網(wǎng)過濾，以除去菌絲塊，之后進(jìn)行3000xg.、10分鐘的離心處理，從而使分生狍子濃縮，然后使其再懸浮于上述殺菌生理鹽水中，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)，將其調(diào)整至預(yù)定的分生狍子數(shù)目(105個(gè)孢子/ml)后使用。
用薩布羅液體培養(yǎng)基(葡萄糖2％)將白假絲酵母在30℃培養(yǎng)24小時(shí)之后，將所得菌液用相同培養(yǎng)基稀釋至10倍(105個(gè)細(xì)胞/ml)，使用所得菌液。
用Mueller Hinton液體培養(yǎng)基將葡萄球菌在37℃培養(yǎng)18-20小時(shí)，之后用相同培養(yǎng)基將所得菌液稀釋至100倍(約106個(gè)細(xì)胞/ml)，將其作為接種菌液。
4.所用藥物分別用乙醇將PY、用二甲基亞砜(DMSO)將TF配制成1mg/ml的溶液，接下來，用20％乙醇作為稀釋液將PY液配制成所定濃度，用10％DMSO作為稀釋液將TF配制成所定濃度。
5.通過瓊脂平板稀釋法測(cè)定合用效果使用所述培養(yǎng)基，將9ml培養(yǎng)基與所定濃度的0.5ml PY液和0.5mlTF液混合，制成含有藥物的平板來測(cè)定對(duì)測(cè)試菌生長(zhǎng)的抑制效果。
通過壓印法將所定菌液(細(xì)胞數(shù)或孢子數(shù)/ml)接種在上述平板上，分別將發(fā)癬菌在25℃培養(yǎng)2周，將假絲酵母在30℃培養(yǎng)2天，將葡萄球菌在37℃培養(yǎng)20小時(shí)后判定各測(cè)試菌是否生長(zhǎng)(方格圖案法)。
通過PY和TF的單獨(dú)使用以及兩者結(jié)合使用所得到的MIC值計(jì)算出FIC指數(shù)。
結(jié)果如表4所示。
表4MIC值(μg/ml)( )內(nèi)為FIC指數(shù)值

從測(cè)試?yán)?的結(jié)果可明顯看出，本發(fā)明的PY和TF混合而成的抗真菌組合物對(duì)于測(cè)試菌表現(xiàn)出很強(qiáng)的協(xié)同效果。
實(shí)施例1吡咯尼群2.5g拉諾康唑1.0g甘油50g乙醇300ml精制水 適量將吡咯尼群(2.5g)和拉諾康唑(1.0g)溶解在甘油(50g)和乙醇(300ml)中，加入精制水使其達(dá)到1000ml，攪拌均勻，得到外用溶液。
實(shí)施例2吡咯尼群 2.5g布替萘芬鹽酸鹽5.0g白凡士林 200g硬脂醇200g丙二醇100g月桂基硫酸鈉 15g對(duì)羥基苯甲酸甲酯 0.2g對(duì)羥基苯甲酸丙酯 0.2g精制水適量在加溫、攪拌條件下，將吡咯尼群(2.5g)、布替萘芬鹽酸鹽(5.0g)和對(duì)羥基苯甲酸丙酯(0.2g)溶解在白凡士林(200g)、硬脂醇(200g)和丙二醇(100g)中。
另一方面，在加溫條件下，將月桂基硫酸鈉(15g)和對(duì)羥基苯甲酸甲酯(0.2g)溶解在精制水中，加入上述主藥的溶解液，攪拌乳化，使其均勻混合，得到軟膏藥(1000g)。
實(shí)施例3吡咯尼群 2.5g布替萘芬鹽酸鹽2.5g甘油 50g乙醇 300ml精制水適量將上述各成分進(jìn)行與實(shí)施例1相同的處理，得到外用溶液(1000ml)。
實(shí)施例4吡咯尼群 2.5g拉諾康唑 2.5g白凡士林 200g硬脂醇200g丙二醇100g月桂基硫酸鈉 15g對(duì)羥基苯甲酸甲酯 0.2g對(duì)羥基苯甲酸丙酯 0.2g精制水適量將上述各成分進(jìn)行與實(shí)施例2相同的處理，得到軟膏藥1000g。
實(shí)施例5吡咯尼群2.5g鹽酸特比萘芬5.0g甘油50g乙醇300ml精制水 適量將吡咯尼群(2.5g)和鹽酸特比萘芬(5.0g)溶解在甘油(50g)和乙醇(300ml)中，加入精制水使其達(dá)到1000ml，攪拌均勻，得到外用溶液。實(shí)施例6吡咯尼群 2.5g鹽酸特比萘芬 1.0g白凡士林 200g硬脂醇200g丙二醇100g月桂基硫酸鈉 15g對(duì)羥基苯甲酸甲酯 0.2g對(duì)羥基苯甲酸丙酯 0.2g精制水適量在加溫、攪拌條件下，將吡咯尼群(2.5g)、鹽酸特比萘芬(1.0g)和對(duì)羥基苯甲酸丙酯(0.2g)溶解在白凡士林(200g)、硬脂醇(200g)和丙二醇(100g)中。
另一方面，在加溫條件下，將月桂基硫酸鈉(15g)和對(duì)羥基苯甲酸甲酯(0.2g)溶解在精制水中，加入上述主藥的溶解液，攪拌乳化，使其均勻混合，得到軟膏藥(1000g)。
工業(yè)上的利用可能性如上所述，本發(fā)明的抗真菌組合物對(duì)于例如癬、疊瓦癬、黃癬、深癬等皮膚真菌?。黄つw粘膜念珠菌病、深念珠菌病等真菌感染疾病的治療極為有用。
而且，本發(fā)明的抗真菌組合物與各種單獨(dú)的藥物相比，具有很強(qiáng)的抗真菌效果，并且從減輕副作用、改善患者的順應(yīng)性等觀點(diǎn)出發(fā)也是極為有用的。
權(quán)利要求
1.一種抗真菌組合物，該組合物含有吡咯尼群和至少一種選自拉諾康唑、布替萘芬或其鹽以及烯丙胺類抗真菌藥物的物質(zhì)作為有效成分。
2.權(quán)利要求1的抗真菌組合物，該組合物含有吡咯尼群和拉諾康唑作為有效成分。
3.權(quán)利要求1的抗真菌組合物，該組合物含有吡咯尼群和布替萘芬或其鹽作為有效成分。
4.權(quán)利要求1的抗真菌組合物，該組合物含有吡咯尼群和烯丙胺類抗真菌藥物作為有效成分。
5.權(quán)利要求4的抗真菌組合物，其中所述烯丙胺類抗真菌藥物為特比萘芬或其鹽。
全文摘要
含有吡咯尼群和至少一種選自拉諾康唑、布替萘芬或其鹽以及烯丙胺類抗真菌藥的物質(zhì)作為活性成分的抗真菌組合物。與上述各抗真菌藥單獨(dú)使用時(shí)相比,本組合物可發(fā)揮有效的抗真菌作用,因此對(duì)于治療皮膚真菌病如發(fā)癬菌疹、皮內(nèi)癬菌病、黃癬疹和深位發(fā)癬菌疹以及真菌感染疾病如粘膜皮膚念珠菌病和深位念珠菌病極為有用。而且,從例如減輕副作用和改善患者的順應(yīng)性等觀點(diǎn)出發(fā),這些組合物也是有用的。
文檔編號(hào)A61K31/136GK1355699SQ00808780
公開日2002年6月26日 申請(qǐng)日期2000年4月13日 優(yōu)先權(quán)日1999年4月16日
發(fā)明者上村利明, 藪田次男, 小畑三郎 申請(qǐng)人:藤澤藥品工業(yè)株式會(huì)社