專利名稱：一種含姬松茸的中藥復(fù)方制劑及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥復(fù)方制劑及制備方法，具體涉及含姬松茸的中藥復(fù)方制劑及制備方法。
姬松茸(Agaricus blazei)為傘菌科菌類的干燥實(shí)體，又名巴西磨菇，原產(chǎn)于巴西的山區(qū)。姬松茸不但美味可口，而且營(yíng)養(yǎng)豐富，被當(dāng)?shù)孛癖娨暈檎湎〖哑贰?br> 日本許多研究機(jī)構(gòu)的資料證明，姬松茸除含有豐富的多糖、蛋白質(zhì)之外，還含有脂肪酸、纖維素等物質(zhì)。研究證明，姬松茸含有的多糖與香菇多糖、云芝多糖等菌類多糖一樣具有較強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)功能。例如水野卓等人在“キノコ化學(xué)·生化學(xué)”一書中指出，姬松茸多糖能激活宿主的巨噬細(xì)胞和網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)，促進(jìn)干擾素的生成。此外，姬松茸還有保護(hù)肝臟、降血脂等生理活性。為此，姬松茸在日本等國(guó)廣為流行，被推崇為“21世紀(jì)成人病人的功能性食品”，并被尊稱為“神奇菇”。
國(guó)內(nèi)蘭州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院用姬松茸治療慢性肝病亦取得了較滿意的療效。慢性肝炎患者經(jīng)姬松茸口服液治療三個(gè)月后，患者的癥狀、體征消失或改善均優(yōu)于對(duì)照組(對(duì)照組給予維生素、能量合劑、聯(lián)苯雙酯等常規(guī)治療)，對(duì)肝功能的改善亦很明顯，尤其降酶作用快、幅度大，且停藥后尚未發(fā)現(xiàn)反跳現(xiàn)象，與對(duì)照組相比，AST、ALT、血清膽紅素、γ-球蛋白、CG、SF均有改善，治療前后相比呈現(xiàn)顯著性差異(P＜0.05-0.001)。療程結(jié)束后，所隨訪者檢驗(yàn)肝功能保持正常，說(shuō)明療效穩(wěn)定而持久。臨床研究表明，姬松茸可明顯促進(jìn)慢性肝炎的肝功能恢復(fù)，增加肝儲(chǔ)備功能，保護(hù)肝細(xì)胞。
中日兩國(guó)學(xué)者的共同研究發(fā)現(xiàn)，姬松茸粗多糖(ABPS)與黃芪、枸杞子等補(bǔ)益藥的多糖一樣能顯著促進(jìn)正常小鼠骨髓?！獑蜗到y(tǒng)祖細(xì)胞、成纖維祖細(xì)胞和多能造血干細(xì)胞的增殖(P＜0.01)，由于免疫和造血相輔相成，因而ABPS是否通過(guò)免疫調(diào)節(jié)來(lái)完成對(duì)造血的調(diào)節(jié)尚有待于進(jìn)一步研究。
蘆筍(Asparagus officinalis Linn)又名石刁柏，為百合科天門冬屬多年生草本植物，除供食用外還作為功能性(保健)食品而被廣泛運(yùn)用。蘆筍最早見(jiàn)于“本草綱目”互考諸菜類。近代“南寧市藥物志”記載，蘆筍有“潤(rùn)肺、鎮(zhèn)咳、殺蟲”等功效。據(jù)報(bào)導(dǎo)，蘆筍含有多種甾體化合物和非蛋白含氮物質(zhì)(天冬酰胺)。許多研究工作表明，蘆筍有促進(jìn)組織新陳代謝、調(diào)整器官功能、消除肝功能障礙、促進(jìn)抗體產(chǎn)生、增強(qiáng)機(jī)體免疫力的功能。
本發(fā)明的目的是要提供一種能顯著提高免疫功能，保護(hù)肝臟，促進(jìn)肝功能恢復(fù)，輔助抑制腫瘤的含姬松茸、蘆筍的中藥復(fù)方制劑。
本發(fā)明公開的含姬松茸中藥復(fù)方制劑是由1份姬松茸、蘆筍提取物和0.5-1.5份藥用輔料組成的，每100g制劑含姬松茸多糖≥50mg的口服制劑。
本發(fā)明所述的口服制劑是醫(yī)學(xué)上可接受的各類口服制劑如片劑、膠囊劑、口服液、顆粒劑等。
本發(fā)明另一目的是要提供上述含姬松茸中藥復(fù)方制劑的制備方法。
本發(fā)明公開的含姬松茸中藥復(fù)方制劑是由下述方法制得的(1)姬松茸、蘆筍提取物的制備50-90％姬松茸和10-50％蘆筍加8-15倍水，回流1-2小時(shí)，過(guò)濾，殘?jiān)?-10倍水回流0.5-1.5小時(shí)，過(guò)濾，合并濾液減壓濃縮至原藥材量的40-60％，即得姬松茸、蘆筍提取物；(2)口服制劑的制備取姬松茸、蘆筍提取物1份加入0.1-1.5份藥用輔料，按常規(guī)方法制成片劑、膠囊劑、口服液及顆粒劑。
本發(fā)明所述的藥用輔料是指常用的填充劑、崩解劑、防腐劑、矯味劑和潤(rùn)滑劑等。
用本發(fā)明的含姬松茸中藥復(fù)方制劑，經(jīng)上海市預(yù)防醫(yī)學(xué)研究院進(jìn)行功能性試驗(yàn)，證明樣品具有輔助抑制腫瘤作用，具有免疫調(diào)節(jié)作用，對(duì)化學(xué)性肝損傷具有保護(hù)作用。一、輔助抑制腫瘤作用測(cè)定1、樣品處理；樣品為棕黑色液體，以蒸餾水調(diào)制成各種濃度，供試。2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種雄性小白鼠，體重范圍20-22克，由上海醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物房提供的清潔級(jí)動(dòng)物(本站SPF動(dòng)物房飼養(yǎng))，合格證號(hào)02-22-1。3、實(shí)驗(yàn)瘤株小鼠肉瘤180(S180)和小鼠艾氏癌腹水型(EAC)，均由上海醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院提供。4、劑量設(shè)計(jì)樣品人體每日推薦劑量為90ml/60kg，本實(shí)驗(yàn)設(shè)低、中、高三劑量組分別為5、15、45ml/kg，另設(shè)蒸餾水陰性對(duì)照組。4.1.給樣方式灌胃，灌胃容積為0.4ml/20g，每目一次，連續(xù)四周。5、實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果；5.1.S180肉瘤動(dòng)物連續(xù)給樣四周后，抽取健康的腹水型S180小鼠腹.水，進(jìn)行計(jì)數(shù)后，根據(jù)活細(xì)胞數(shù)用生理鹽水稀釋腹水至細(xì)胞數(shù)107個(gè)/ml，每只小鼠腋部皮下接種0.2ml。接種后繼續(xù)給樣，接種10天后，將小鼠稱重，頸椎脫臼處死，取皮下瘤塊稱重。并重復(fù)實(shí)驗(yàn)一次。
樣品對(duì)動(dòng)物體重的影響組別 動(dòng)物數(shù) 初始體重 接種前體重 實(shí)驗(yàn)終體重正常對(duì)照2020±1.743±3.2 43±4.0低劑量 2020±1.342±4.2 42±5.4中劑量 2019±1.438±2.7 39±3.7高劑量 2019±1.439±3.0 39±3.8由上表可見(jiàn)，樣品各劑量組與對(duì)照組相比，均無(wú)顯著性差異。
S180腫瘤抑制試驗(yàn)組別 動(dòng)物數(shù) S180實(shí)體瘤瘤重 抑制率 S180實(shí)體瘤瘤重 抑制率(只) (第一次) (g) (％)(第二次) (g) (g)對(duì)照 101.52±0.51 -- 1.55±0.49 --低劑量101.30±0.38 14.5 1.38±0.57 11.0中劑量101.11±0.22 27.0 1.18±0.40 23.8高劑量101.00±0.26* 34.2 1.05±0.25* 32.3*P＜0.05與對(duì)照組相比(經(jīng)方差分析)由上表可見(jiàn)，樣品高劑量組動(dòng)物在二次實(shí)驗(yàn)中S180實(shí)體瘤瘤重均明顯低于對(duì)照組，均有顯著差異，且抑制率均大于30％。5.2.EAC腹水瘤實(shí)驗(yàn)方法5.2.1抽取腹水取接種后7-10天健康動(dòng)物，頸椎脫臼，腹部消毒，抽取腹水(乳白色濃稠液體)。5.2.2細(xì)胞計(jì)數(shù)取一滴腹水于載玻片上，制片，瑞氏染色，鏡下進(jìn)行細(xì)胞分類計(jì)數(shù)，瘤細(xì)胞應(yīng)≥95％。
另取少量腹水置于加有肝素的干試管內(nèi)，生理鹽水稀釋10倍及100倍，取稀釋液0.9ml，加0.2％臺(tái)盼藍(lán)生理鹽水液0.1ml?；靹?，用白細(xì)胞計(jì)數(shù)法計(jì)瘤細(xì)胞總數(shù)，同時(shí)計(jì)算受感染的死細(xì)胞數(shù)。5.2.3給樣方式灌胃，灌胃容積為0.4ml/20g，每日一次，連續(xù)四周5.2.4接種根據(jù)活細(xì)胞數(shù)用無(wú)菌葡萄糖的平衡鹽水稀釋腹水至細(xì)胞數(shù)為107個(gè)/ml，每只小鼠腹腔注射0.1ml(60分鐘內(nèi)完成)。接種后次日分別對(duì)各組動(dòng)物稱體重，觀察動(dòng)物生存情況，逐日記錄。5.2.5數(shù)據(jù)處理計(jì)算各組動(dòng)物平均生存時(shí)間，采用方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。以上試驗(yàn)經(jīng)兩批動(dòng)物重復(fù)試驗(yàn)。5.2.6結(jié)果EAC腫瘤抑制試驗(yàn)(第一次)組別 動(dòng)物數(shù)接種后體重死亡前體重平均生存時(shí)間(只)(克) (克) (天)對(duì)照1036±2.6 50±7.5 15.1±2.2低劑量1039±2.748±3.716.4±1.8中劑量1036±3.146±4.717.7±1.3高劑量1036±1.750±2.522.7±1.0**P＜0.05與對(duì)照組相比(經(jīng)方差分析)EAC腫瘤抑制試驗(yàn)(第二次)組別 動(dòng)物數(shù)接種后體重死亡前體重平均生存時(shí)間(只)(克) (克) (天)對(duì)照1038±3.1 49±5.1 14.2±1.7低劑量 1041±5.5 49±6.7 14.8±1.5中劑量 1040±2.6 51±3.8 17.9±2.2高劑量 1037±2.8 52±4.7 22.7±1.6**P＜0.05與對(duì)照組相比(經(jīng)方差分析)由上二表可見(jiàn)，樣品高劑量組動(dòng)物在二次實(shí)驗(yàn)中的平均生存時(shí)間均明顯長(zhǎng)于對(duì)照組，均有顯著性差異。6、對(duì)免疫功能的影響6.1樣品處理；樣品為淡褐色粉末，以蒸餾水調(diào)制成各濃度，供試。6.2動(dòng)物來(lái)源昆明種小白鼠，由上海醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物房提供的清潔級(jí)動(dòng)物(本站SPF動(dòng)物房飼養(yǎng))。合格證號(hào)02-22-1。6.3劑量設(shè)計(jì)樣品人體推薦劑量為每日0.6g/60kg，本實(shí)驗(yàn)設(shè)低、中、高三劑量組分別為0.05、0.1、0.3g/kg，另設(shè)蒸餾水陰性對(duì)照組。6.4給樣途徑灌胃，灌胃容積為0.4ml/20g。6.5.1體重樣品對(duì)動(dòng)物體重的影響組別 動(dòng)物數(shù) 初始體重 中期體重 終期體重 增重正常對(duì)照 20 20±1.1 26±0.937±0.9 17±0.8低劑量20 20±0.8 26±0.837±0.9 17±1.4中劑量20 19±1.1 26±0.837±0.8 18±1.5高劑量20 20±1.1 26±0.937±0.8 17±1.6由上表可見(jiàn)，樣品各劑量組與對(duì)照組相比，均無(wú)顯著差異。6.5.2小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)；動(dòng)物連續(xù)給樣四周后，每鼠腹腔注射20％雞紅細(xì)胞懸液1ml，間隔30分鐘，頸椎脫臼處死，固定于鼠板上，剪開腹壁皮膚，注射生理鹽水2ml，轉(zhuǎn)動(dòng)鼠板1分鐘，吸出腹腔洗液1ml，分滴于2片玻片上，37℃孵箱濕孵30分鐘，用生理鹽水漂洗，晾干，以1∶1丙酮甲醇溶液固定，4％Giemsa-磷酸緩沖液染色3分鐘，再用蒸餾水漂洗晾干，用油鏡鏡檢，計(jì)算吞噬％和吞噬指數(shù)。
巨噬細(xì)胞吞噬試驗(yàn)組別動(dòng)物數(shù)(只)吞噬％吞噬指數(shù)對(duì)照 10 40±2.9 0.49±0.04低劑量10 41±3.4 0.50±0.03中劑量10 40±4.1 0.50±0.04高劑量10 44±4.3 0.55±0.05**P＜0.05與對(duì)照組相比(經(jīng)方差分析)由上表可見(jiàn)，樣品高劑量組巨噬細(xì)胞的吞噬指數(shù)與對(duì)照組相比，有顯著性差異。6.5.3NK細(xì)胞活性測(cè)定動(dòng)物連續(xù)給樣四周后頸椎脫臼處死，取脾臟，制成脾細(xì)胞懸液，取傳代后24h YAC-1細(xì)胞加3H-TdR 10uCi/1×106/ml，37℃培養(yǎng)2小時(shí)，每30分鐘震蕩1次，用培養(yǎng)液洗滌3次，配制成1×105/mlYAC-1靶細(xì)胞加入96孔培養(yǎng)板，每孔加100μl，試驗(yàn)孔加入100μl1×107/ml小鼠脾細(xì)胞懸液，空白對(duì)照孔加入100μl培養(yǎng)液，最大稀釋孔加入100μl 2.5％TritonX-100，每個(gè)樣品設(shè)3個(gè)復(fù)孔，37℃培養(yǎng)4h后用多頭細(xì)胞收集器將細(xì)胞收集在49型玻璃纖維濾紙上，60℃烤干后浸入閃爍過(guò)夜，用液體閃爍儀測(cè)量CPM。
NK細(xì)胞活性測(cè)定組別動(dòng)物數(shù)(只)時(shí)間(天) NK細(xì)胞活性對(duì)照 102839±1.7低劑量102841±2.2中劑量102843±4.7高劑量102847±5.5*由上表可見(jiàn)，樣品高劑量組動(dòng)物NK細(xì)胞活性與對(duì)照組相比，有顯著性差異。二、免疫調(diào)節(jié)作用1、樣品性狀及處理樣品為棕黑色液體，以蒸餾水調(diào)制成各濃度，供試。2、動(dòng)物來(lái)源BABL/C種小白鼠，體重18～22，雄性，由上海醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供的清潔級(jí)動(dòng)物(本站SPF動(dòng)物房飼養(yǎng))。合格證號(hào)；02-22-1。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)室溫度20±2℃，相對(duì)濕度50-70％，動(dòng)物房合格證號(hào)02-28動(dòng)物飼養(yǎng)料，由蘇杭實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技發(fā)展公司提供。3、劑量設(shè)計(jì)本樣品人體推薦劑量為每日90ml/60kg，本次實(shí)驗(yàn)設(shè)立低、中、高三個(gè)劑量組，分別為7.5、15、45ml/kg，對(duì)照組飲用蒸餾水。4、給樣途徑灌胃，灌胃容積為0.4ml/20g。5、實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果5.1體重；動(dòng)物稱重，按體重隨機(jī)分組，分為4組，每組10只，按劑量設(shè)計(jì)連續(xù)喂養(yǎng)28天，在實(shí)驗(yàn)中期和實(shí)驗(yàn)?zāi)┓謩e稱重一次。
樣品(免疫一組)對(duì)動(dòng)物體重的影響組別動(dòng)物數(shù) 初始體重中期體重 終期體重增重正常對(duì)照 1018±0.520±0.622±0.84±1.1低劑量1018±0.420±0.522±0.74±0.6中劑量1018±0.420±0.823±0.85±0.7高劑量1018±0.320±0.822±0.84±0.8由上表可見(jiàn)，樣品各劑量組與對(duì)照組相比，均無(wú)顯著差異。
樣品(免疫二組)對(duì)動(dòng)物體重的影響組別 動(dòng)物數(shù) 初始體重 中期體重 終期體重增重正常對(duì)照 1018±0.420±0.7 22±0.94±0.9低劑量 1018±0.420±0.7 22±0.84±1.0中劑量 1018±0.420±0.6 22±1.14±1.2高劑量 1018±0.420±0.8 23±0.85±0.9由上表可見(jiàn)，樣品各劑量組與對(duì)照組相比，均無(wú)顯著差異。
樣品(免疫二組)對(duì)動(dòng)物體重的影響組別動(dòng)物數(shù) 初始體重中期體重 終期體重增重正常對(duì)照 10 18±0.420±0.722±0.74±0.8低劑量10 18±0.420±0.822±0.84±0.9中劑量10 18±0.420±0.723±0.84±0.8高劑量10 18±0.420±0.523±1.05±1.2由上表可見(jiàn)，樣品各劑量組與對(duì)照組相比，均無(wú)顯著差異。5.2血清溶血素試驗(yàn)動(dòng)物連續(xù)給樣四周后，眼眶采血，頸椎脫臼處死，分離血清。在96孔微量血凝板上加25μl生理鹽水，再分別在第一排加25ml血清，以后各排作對(duì)倍稀釋，每孔加1％SRBC1滴，振蕩后室溫放置3小時(shí)，當(dāng)血球?qū)φ粘霈F(xiàn)沉落后觀察結(jié)果。
血清溶血試驗(yàn)組別動(dòng)物數(shù)(只)時(shí)間(天)抗體積數(shù)對(duì)照 10 28 28±8.3低劑量10 28 30±17.8中劑量10 28 39±18.2高劑量10 28 60±33.1**P＜0.05與對(duì)照組相比(經(jīng)方差分析)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析樣品高劑量組與對(duì)照組相比，有顯著差異。5.3抗體生成檢測(cè)試驗(yàn)動(dòng)物連續(xù)給樣四周后，將脫纖維綿羊紅細(xì)胞免疫5天后，動(dòng)物頸椎脫臼處死，取脾臟，制成脾細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為5×106/ml。將表層培養(yǎng)基(1g瓊脂糖加雙蒸水100ml)加熱溶解后，放入45℃水浴保溫，與等量pH7.2-7.4、2倍濃度的Hanks液混合，分裝小試管，每管0.5ml，再向管內(nèi)加入50μl 10％SRBC，20μl脾細(xì)胞懸液，迅速混勻；傾倒于已刷瓊脂薄層的6cm平皿上，放入二氧化碳培養(yǎng)箱中溫育1.5h，然后用SA緩沖液稀釋的補(bǔ)體(1∶10)加入平皿中，繼續(xù)溫育1.5h后，計(jì)數(shù)溶血空斑數(shù)。結(jié)果用方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
組別動(dòng)物數(shù) 溶血空斑數(shù)(1×103/全脾)對(duì)照 10 120.7±12.4低劑量10 133.5±15.5中劑量10 128.1±21.2高劑量10 135.6±14.4經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析樣品各劑量組與對(duì)照組相比，均無(wú)顯著差異。5.4 NK細(xì)胞活性測(cè)定動(dòng)物連續(xù)給樣四周后，頸椎脫臼處死，取脾臟，制成脾細(xì)胞懸液(效應(yīng)細(xì)胞)，取傳代后24h YAC-1細(xì)胞加1640完全培養(yǎng)液，調(diào)整細(xì)胞濃度為1×105/ml(靶細(xì)胞)，取靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞各100μl(效靶比50∶1)，加入U(xiǎn)型96孔培養(yǎng)板，靶細(xì)胞自然釋放孔加靶細(xì)胞和培養(yǎng)液各100μl，最大釋放孔加靶細(xì)胞和1％NP40各100μl，上述各項(xiàng)均設(shè)三個(gè)復(fù)孔，于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時(shí)，然后將96孔培養(yǎng)板以1500r/min離心5min，每孔吸取上清液100μ1置平底96孔培養(yǎng)板中，同時(shí)加入LDH基質(zhì)業(yè)100μl，反應(yīng)3min，每孔加入1mol/L的HCL30μl，用酶標(biāo)儀在490mm處測(cè)定光密度值(OD)。
NK細(xì)胞活性測(cè)定組別 動(dòng)物數(shù)(只)時(shí)間(天)NK細(xì)胞活性對(duì)照1028 38±3.5低劑量 1028 40±5.9中劑量 1028 46±4.0高劑量 1028 53±12.2**P＜0.05與對(duì)照組相比(經(jīng)方差分析)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析樣品各劑量組與對(duì)照組相比，有顯著性差異。5.5胸腺指數(shù)、脾指數(shù)的測(cè)定；動(dòng)物連續(xù)給樣四周后每鼠稱重，頸椎脫臼處死，取胸腺、脾臟稱重，分別計(jì)算胸腺指數(shù)和脾指數(shù)。
胸腺指數(shù)、脾指數(shù)組別動(dòng)物數(shù)(只) 胸腺指數(shù)(％) 脾指數(shù)(％)對(duì)照 10 0.15±0.01 0.49±0.02低劑量10 0.15±0.01 0.49±0.02中劑量10 0.15±0.01 0.49±0.03高劑量10 0.16±0.02 0.49±0.02經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析樣品各劑量組與對(duì)照組相比，均無(wú)顯著性差異。5.6小鼠碳廓清試驗(yàn)小鼠尾靜脈注射1∶3稀釋的印度墨汁，待墨汁注入，立即計(jì)時(shí)。注入墨汁后2、10分鐘，分別從眼眶靜脈叢取血20μl，并將其加到2mlNa2CO3溶液中，用分光光度在600nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值，以Na2CO3溶液作空白對(duì)照。根據(jù)動(dòng)物體重、肝重和脾重計(jì)算吞噬指數(shù)，結(jié)果以方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。
組別 動(dòng)物數(shù) 吞噬指數(shù)對(duì)照 10 6.30±1.88低劑量 10 7.13±2.09中劑量 10 8.19±3.49高劑量 10 10.22±1.51**P＜0.05與對(duì)照組相比(經(jīng)方差分析)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析樣品高劑量與對(duì)照組相比，有顯著性差異。5.7 ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)動(dòng)物連續(xù)給樣四周后頸椎脫臼處死，取脾臟，制成脾細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×106/ml，將細(xì)胞懸液分兩孔加入24孔培養(yǎng)板中，每孔1ml，一孔加50ulConA液(相當(dāng)于5ug/ml)，另一孔作為對(duì)照，置5％CO2，37℃培養(yǎng)72小時(shí)。培養(yǎng)結(jié)束前4h，每孔輕輕吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的PRM1640培養(yǎng)液，同時(shí)每加入MTT(5mg/ml)50ul/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h，培養(yǎng)結(jié)束后，每孔加入1ml酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結(jié)晶完全溶解后，以570nm波長(zhǎng)進(jìn)行比色，結(jié)果用方差分析進(jìn)行分析。組別動(dòng)物數(shù) 加ConA的不加ConA的 差值OD值 OD值對(duì)照 10 0.489±0.097 0.449±0.111 0.040±0.023低劑量10 0.374±0.128 0.304±0.093 0.070±0.066中劑量10 0.415±0.139 0.324±0.112 0.091±0.065高劑量10 0.396±0.141 0.295±0.131 0.101±0.058**P＜0.05與對(duì)照組相比(經(jīng)方差分析)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析樣品高劑量與對(duì)照組相比，有顯著性差異。5.8.DTH測(cè)定
致敏動(dòng)物連續(xù)給樣四周后，每鼠腹部去毛，范圍約3×3cm，將1％的DNFB50ul均勻涂抹致敏。
DTH的產(chǎn)生與測(cè)定5日后，用1％DNFB溶液10ul，均勻涂抹于小鼠右耳(兩面)進(jìn)行玫擊。24小時(shí)后，頸椎脫臼處死小鼠，用打孔器取下直徑8mm的左右耳片，稱重并計(jì)算腫脹度。
DTH測(cè)定結(jié)果組別動(dòng)物數(shù) 耳重均值(mg)腫脹度(只) 右 左對(duì)照 10 18±2.414±1.64±1.7低劑量10 22±1.016±1.66±2.2中劑量10 22±0.716±1.06±1.3低劑量10 27±4.115±1.6 12±4.7**P＜0.05與對(duì)照組相比(經(jīng)方差分析)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析樣品高劑量組與對(duì)照組相比，有顯著性差異。5.9.小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞試驗(yàn)動(dòng)物連續(xù)給樣四周后，每鼠腹腔注射20％雞紅細(xì)胞懸液1ml，間隔30分鐘，頸椎脫臼處死，固定于鼠板上，剪開腹壁皮膚，注射生理鹽水2ml，轉(zhuǎn)動(dòng)鼠板1分鐘，吸出腹腔洗液1ml，分滴于2片玻片上，37℃孵箱濕孵30分鐘，用生理鹽水漂洗，晾干，以1∶1丙酮甲醇溶液固定，4％Giemsa-磷酸緩沖液染色3分鐘，再用蒸餾水漂洗晾干，用油鏡鏡檢，計(jì)算吞噬％和吞噬指數(shù)。
巨噬細(xì)胞吞噬試驗(yàn)組別動(dòng)物數(shù)(只) 吞噬％ 吞噬指數(shù)對(duì)照 10 39±3.7 0.50±0.03低劑量10 40±6.8 0.50±0.08中劑量10 43±5.1 0.53±0.05高劑量10 55±8.0*0.69±0.08**P＜0.05與對(duì)照組相比(經(jīng)方差分析)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析樣品高劑量組吞噬％和吞噬指數(shù)與對(duì)照組相比，均存在顯著性差異。6、結(jié)論動(dòng)物經(jīng)口喂養(yǎng)30天后，具有免疫調(diào)節(jié)作用。三、對(duì)化學(xué)物所致肝損傷的保護(hù)作用1、樣品性狀及處理樣品為棕黑色液體，以蒸餾水調(diào)制成各濃度，供試。2、劑量設(shè)計(jì)本品人體推薦劑量為每天90ml/60kg。本次實(shí)驗(yàn)設(shè)低、中、高三個(gè)劑量組7.5、15、45ml/kg，另設(shè)肝損傷模型組和正常對(duì)照組。3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物昆明種小白鼠，20-25克，雌性，由上海醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供的清潔級(jí)小白鼠(本站SPF動(dòng)物房飼養(yǎng))。合格證號(hào)02-22-1。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)室溫度20±3℃，相對(duì)濕度50-70％，動(dòng)物房合格證號(hào)02-28，動(dòng)物飼養(yǎng)料，由蘇杭實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技發(fā)展公司提供。4、給樣方式灌胃，灌胃容積為0.4ml/20g。5、實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果各劑量組給以樣品，對(duì)照組和模型組飲用蒸餾水，連續(xù)30天。第30天各劑量組及模型組用CCL4染毒，劑量24mg/kg，腹腔注射(i.p)。第31天，5組動(dòng)物摘眼球取血，離心，取血清。測(cè)定如下生化指標(biāo)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、白/球蛋白比例(A/G)并取肝臟進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。實(shí)驗(yàn)結(jié)果用SAS軟件統(tǒng)計(jì)。5.1體重樣品對(duì)動(dòng)物體重的影響組別 動(dòng)物數(shù) 初始體重 中期體重 終期體重正常對(duì)照 10 19±0.726±0.9 35±1.1CCL4模型10 19±0.725±1.3 33±1.5低劑量 10 19±0.825±1.2 34±1.5中劑量 10 19±0.725±0.9 33±2.0高劑量 10 19±0.725±1.0 34±1.6由上表可見(jiàn)，樣品各劑量組與對(duì)照組相比，均無(wú)顯著性差異。5.2生化檢測(cè)結(jié)果組別 動(dòng)物數(shù) 谷丙轉(zhuǎn)氨酶 谷草轉(zhuǎn)氨酶 白/球蛋(只) (IU/L) (IU/L)白比例正常對(duì)照 10 44±7* 41+10* 1.63±0.33CCL4模型 10 1783±5941707±521 1.30±0.34低劑量 10 1533±5141570±465 1.51±0.60中劑量 10 988±371 1360±471.47±0.45高劑量 10 660±282*751±138* 1.38±0.42*P＜0.05與CCL4模型組比較，經(jīng)方差分析由上表可見(jiàn)，正常對(duì)照組的谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶含量明顯低于CCL4模型組，存在顯著性差異，說(shuō)明模型成立。樣品高劑量組與CCL4模型組比較，谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶明顯降低，均存在顯著性差異。5.3病理檢查病理檢查積分組別 動(dòng)物號(hào) 顆粒 水樣 氣球 脂肪 胞漿 細(xì)胞 炎癥細(xì)胞 總分變性 變性 變性 變性 凝聚 壞死 浸潤(rùn)對(duì)照11000000121000000131000000141000000152000000261000001271000001282000002490000001110 10010002病理檢查積分組別 動(dòng)物號(hào) 顆粒 水樣 氣球 脂肪 胞漿 細(xì)胞 炎癥細(xì)胞 總分變性 變性 變性 變性 凝聚 壞死 浸潤(rùn)C(jī)CL4模型1020022 2 82110022 2 83130033 2 124110022 3 105110033 2 106100022 3 77220044 2 148210022 2 99210022 2 910110122 2 8病理檢查積分組別 動(dòng)物號(hào) 顆粒 水樣 氣球 脂肪 胞漿 細(xì)胞 炎癥細(xì)胞 總分變性 變性 變性 變性 凝聚 壞死 浸潤(rùn)低劑量 1110022 2 82110022 2 83000033 2 84120011 2 75120033 2 116110033 2 107110033 2 108120033 2 119100022 2 7
1013 002 2 2 10病理檢查積分組別 動(dòng)物號(hào) 顆粒 水樣 氣球 脂肪 胞漿 細(xì)胞 炎癥細(xì)胞 總分變性 變性 變性 變性 凝聚 壞死 浸潤(rùn)中劑量 102 002 2 1 7221 002 2 2 9312 002 2 2 9410 002 2 2 7512 002 2 2 9611 003 3 1 9720 001 0 1 4812 001 1 2 7912 002 2 2 910 10 003 3 2 9病理檢查積分組別 動(dòng)物號(hào) 顆粒 水樣 氣球 脂肪 胞漿 細(xì)胞 炎癥細(xì)胞 總分變性 變性 變性 變性 凝聚 壞死 浸潤(rùn)高劑量 120000 3 5221001 2 7302002 2 8400002 3 7500013 2 8601003 2 9731000 1 5811002 2 8920001 1 510 20000 1 3病理檢查總積分組別動(dòng)物數(shù) 顆粒 水樣 氣球 脂肪 胞漿 細(xì)胞 炎癥細(xì)胞 總分 平均分變性 變性 變性 變性 凝聚 壞死 浸潤(rùn)對(duì)照 1011 001 00 5 17 1.7±0.9*CCL4模型 1012 13 00 24 24 2295 9.5±2.1低劑量10913 00 24 24 2090 9.0±1.6中劑量1011 12 00 20 19 1779 7.9±1.7高劑量1012 600 14 14 1965 6.5±1.9*
*P＜0.05與CCL4模型組比較(經(jīng)方差分析)由大體檢查和鏡檢結(jié)果可見(jiàn)，正常對(duì)照組的病理積分明顯低于CCL4模型組，存在顯著性差異，說(shuō)明模型成立。樣品高劑量組與CCL4模型對(duì)照組相比，病理積分明顯下降，存在顯著性差異。6、結(jié)論動(dòng)物經(jīng)口喂養(yǎng)樣品30天后，具有對(duì)化學(xué)物所致肝損傷的保護(hù)作用。
用本發(fā)明的含姬松茸中藥復(fù)方制劑，由上海市預(yù)防醫(yī)學(xué)研究院進(jìn)行安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)試驗(yàn)，結(jié)果證明本產(chǎn)品安全無(wú)毒。四、急性毒性(經(jīng)口LD50)試驗(yàn)?zāi)康挠^察受試樣品一次經(jīng)口給予動(dòng)物引起的不良反應(yīng)和死亡情況并確定半數(shù)致死劑量。1、樣品性狀棕黑色液體(5倍濃縮液)。2、受試樣品配制取樣品2150、4640、10000、21500mg，分別加蒸餾水至20ml充分混勻后為受試樣品。3、受試動(dòng)物3.1來(lái)源上海醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部，合格證號(hào)02-22-1。3.2種屬與品系昆明種小鼠3.3性別雌性和雄性3.4體重18-22克4、試驗(yàn)方法4.1試驗(yàn)前，動(dòng)物禁食16小時(shí)。4.2將動(dòng)物隨機(jī)分為4組，每組10只，雌雄各半，稱重，按0.4ml/20g體重，采用灌胃法進(jìn)行一次給樣。4.3觀察給樣后一周內(nèi)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的中毒癥狀及死亡情況。4.4計(jì)算LD50及95％可信限。5、結(jié)果表雌雄小鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果動(dòng)物性別劑量動(dòng)物數(shù)死亡數(shù)死亡率(mg/kg) (只) (只) (％)雌性小鼠2150 5 0 04640 5 0 010000 5 0 021500 5 0 0雄性小鼠2150 5 0 04640 5 0 010000 5 0 021500 5 0 05.1主要癥狀表現(xiàn)試驗(yàn)期間各組動(dòng)物活動(dòng)正常，毛色光澤度好，
未見(jiàn)任何中毒癥狀和死亡。5.2半數(shù)致死量，雌性小鼠LD50＞21500mg/Kg。
雄性小鼠LD50＞21500mg/Kg。6、結(jié)論根據(jù)急性毒性半數(shù)致死劑量分級(jí)，屬無(wú)毒級(jí)物質(zhì)。五、微核試驗(yàn)1、樣品性狀棕黑色液體(5倍濃縮液)。2、樣品的處理及配制取樣品10000、5000、2500mg，分別加蒸餾水至20ml，供試。3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物3.1來(lái)源上海醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部，合格證號(hào)02-22-1。3.2種屬與品系昆明種小鼠3.3性別雌性和雄性3.4體重25-30克4、實(shí)驗(yàn)方法4.1將動(dòng)物隨機(jī)分為5組，每組10只，雌雄各半，分別作為樣品三個(gè)劑量組及蒸餾水陰性對(duì)照組和環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組。4.2采用30小時(shí)兩次灌胃法，動(dòng)物稱重，將配制的不同濃度樣品按0.4ml/20g體重，分別對(duì)各組動(dòng)物灌胃。4.3于第二次灌胃后6小時(shí)，頸椎脫臼處死動(dòng)物，取股骨骨髓加小牛血清混勻，常規(guī)涂片、固定Giemsa染色制片。4.4鏡檢觀察，每鼠計(jì)數(shù)1000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞的微核數(shù)，計(jì)算微核發(fā)生率，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。5、結(jié)果表動(dòng)物骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核發(fā)生率劑量 性別 動(dòng)物數(shù) 受檢細(xì)胞數(shù) 微核細(xì)胞 微核率 統(tǒng)計(jì)學(xué)(mg/kg) (只) (個(gè)) 數(shù)(個(gè)) (‰) 檢驗(yàn)*10000 雄性550005 1.0 ＞0.0510000 雌性550004 0.8 ＞0.055000 雄性550004 0.8 ＞0.055000 雌性550004 0.8 ＞0.052500 雄性550006 1.2 ＞0.052500 雌性550005 1.0 ＞0.05陰性對(duì)照 雄性550006 1.2(蒸餾水20000mg/kg)雌性550005 1.0陽(yáng)性對(duì)照 雄性5500012224.4 ＜0.01(環(huán)磷酰胺40mg/kg) 雌性5500012625.2 ＜0.01*與陰性對(duì)照組相比(經(jīng)卡方檢驗(yàn))6、結(jié)論
經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，樣品骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)結(jié)果為陰性。六、精子畸形試驗(yàn)1、樣品性狀棕黑色液體(5倍濃縮液)。2、樣品的處理及配制取樣品10000、5000、2500mg，分別加蒸餾水至20ml，供試。3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物3.1來(lái)源上海醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部，合格證號(hào)02-22-1。3.2種屬與品系昆明種小鼠3.3性別雄性3.4體重25-35克4、實(shí)驗(yàn)方法4.1將動(dòng)物隨機(jī)分為5組，每組5只，分別作為樣品三個(gè)劑量組及蒸餾水陰性對(duì)照組和環(huán)磷酰胺陽(yáng)性對(duì)照組。4.2動(dòng)物稱重后，將配制的不同濃度樣品按0.4ml/20g體重，分別對(duì)各組動(dòng)物灌胃。每日一次，連續(xù)5天。4.3于首次給樣后第35天，頸椎脫臼處死動(dòng)物，取二側(cè)副睪放入生理鹽水中，剪碎，四層過(guò)濾，取濾液涂片，固定，2％伊紅染色制片。4.4鏡檢觀察，每鼠計(jì)數(shù)1000個(gè)精子的畸形數(shù)，計(jì)算精子畸形發(fā)生率，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。5、結(jié)果表動(dòng)物精子畸形發(fā)生率劑量 動(dòng)物數(shù)受檢精于數(shù)畸變精子畸變率統(tǒng)計(jì)學(xué)(mg/kg) (只) (個(gè)) 數(shù)(個(gè)) (煸) 檢驗(yàn)*10000 55000 6212.4 ＞0.055000 55000 45 9.0 ＞0.052500 55000 5210.4 ＞0.05陰性對(duì)照 55000 5911.8蒸餾水(20000mg/kg)陽(yáng)性對(duì)照 55000 329 65.8 ＜0.01環(huán)磷酰胺(40mg/kg)*與陰性對(duì)照組相比(經(jīng)卡方檢驗(yàn))6、結(jié)論經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，樣品精子畸形試驗(yàn)結(jié)果為陰性。七、Ames試驗(yàn)1、樣品性狀棕黑色液體。溶劑無(wú)菌蒸餾水溶劑無(wú)菌蒸餾水2、樣品處理及配制樣品用蒸餾水配制。3、測(cè)試劑量5μ1/皿、10gμl/皿、25μl/皿、50μl/皿、100μl/皿。3.1測(cè)試菌株TA97、TA98、TA100、TA102。由美國(guó)加利福尼亞大學(xué)生物化學(xué)系提供，生物學(xué)性狀符合菌株要求。測(cè)試用菌液濃度1-2×109/ml。3.2代謝活化多氯聯(lián)苯誘導(dǎo)SD大鼠肝S9組分，蛋白質(zhì)含量33mg/ml。代謝活化用含8％(v/v)的S9組分的S9混合液。3.3溶劑對(duì)照無(wú)菌蒸餾水3.4陽(yáng)性對(duì)照-S9TA97阿的平(500μg/皿)、TA98對(duì)硝基喹啉(200μg/皿)，TA100、TA102 MMS。
+S9TA97、TA98、TA100 2-氨基芴(10μg/皿)，TA102 1.8-二羥基蒽醌(50μl/皿)。4、測(cè)試方法按GB15193.4-94預(yù)培養(yǎng)平板摻入法受試物，菌液和0.5ml S9混合液或PBS于100×15mm無(wú)菌試管，30℃培養(yǎng)30min，加入2ml頂瓊脂，傾倒平板。
5、測(cè)試結(jié)果
6、結(jié)論樣品Ames試驗(yàn)結(jié)果為陰性。
八、30天喂養(yǎng)試驗(yàn)1、劑量設(shè)計(jì)樣品的人體推薦劑量為每日90ml/60kg。本實(shí)驗(yàn)設(shè)低、中、高三個(gè)劑量，即15、75、150ml/kg，相當(dāng)于人體推薦劑量的10倍，50倍，100倍，另設(shè)空白對(duì)照組。
2、樣品的處理及配制根據(jù)本實(shí)驗(yàn)劑量設(shè)計(jì)要求及動(dòng)物飼料攝入情況(約15g/100gBW/日)，將樣品按不同配比摻入飼料內(nèi)，拌勻，使成高、中、低三種不同樣品含量的飼料，分別給三組動(dòng)物喂飼。3.1來(lái)源上海醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部合格證號(hào)02-22-43.2種屬大鼠3.3品系Wistar3.4性別雌性和雄性3.5體重70-85克4、實(shí)驗(yàn)方法4.1將動(dòng)物隨機(jī)分為4組，每組20只，雌雄各半。分別作為樣品三個(gè)劑量組及空白對(duì)照組，單籠喂養(yǎng)，自由飲食，連續(xù)喂養(yǎng)30天。4.2將樣品含量不同的飼料按劑量設(shè)計(jì)分別給各組動(dòng)物喂養(yǎng)。4.3實(shí)驗(yàn)開始及實(shí)驗(yàn)后每周一次動(dòng)物稱體重，記錄飼料攝入量(剔除損耗10％)，計(jì)算食物利用率，繪制生長(zhǎng)曲線。4.4連續(xù)喂養(yǎng)30天后，取鼠血進(jìn)行血液學(xué)、生化學(xué)檢查，處死，解剖取肝、腎、脾等稱重。計(jì)算臟體比，并對(duì)主要臟器進(jìn)行組織學(xué)檢查。5、結(jié)果5.1生長(zhǎng)情況及食物利用率各實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物體重增長(zhǎng)情況(X±SD)單位g0周 1周 2周 3周 4周對(duì)照 78±13 108±15 155±19 194±17 245±14低劑量88±11 102±16 152±19 190±20 240±22♂中劑量 79±12 109±14 157±24 191±35 231±35高劑量80±12 108±14 157±18 195±25 247±29對(duì)照 79±12 115±13 160±17 181±17 206±16低劑量77±12 113±11 153±10 176±14 198±17♀中劑量 77±11 111±18 146±20 169±21 199±22高劑量75±11 110±18 150±22 174±24 199±26各實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物食物利用率(X±SD)單位g實(shí)驗(yàn)初 實(shí)驗(yàn)終增重食物攝取 食物利用體重(g) 體重(g) (g) 量(g)率(％)對(duì)照78±13245±14 167 696 24低劑量 80±11240±22 160 653 25♂中劑量79±12231±35 152 642 24高劑量 80±12247±29 167 668 25對(duì)照79±12206±16 127 686 19低劑量 77±12198±17 121 670 18♀中劑量 77±11199±2212268318高劑量 75±11199±2612469218由以上兩表可見(jiàn)，樣品各實(shí)驗(yàn)組大鼠生長(zhǎng)情況基本良好。5.2血液學(xué)檢查血常規(guī)測(cè)定結(jié)果(X±SD)組別白細(xì)胞計(jì)數(shù) 紅細(xì)胞計(jì)數(shù) 血色素 淋巴細(xì)胞 中性粒細(xì)胞(109個(gè)/L) (1012個(gè)/L) Hb(g/L) (％) (％)對(duì)照 9.7±0.45.4±0.3 156±3.1 69±2.4 31±2.4低劑量 9.8±0.45.5±0.1 158±3.3 68±3.7 32±3.7♂中劑量 9.6±0.45.5±0.1 157±2.9 68±3.1 32±3.1高劑量 9.7±0.45.6±0.1 156±4.7 69±2.4 31±2.4對(duì)照 9.0±3.15.4±0.2 151±2.4 69±2.8 31±2.8低劑量 9.8±0.55.4±0.2 152±5.6 68±2.9 32±2.9♀中劑量 9.7±0.45.4±0.1 150±3.1 69±2.1 31±2.1高劑量 9.6±0.55.4±0.1 151±4.1 68±2.8 32±2.8以上結(jié)果可見(jiàn)，各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組大鼠的血色素、紅細(xì)胞、白細(xì)胞計(jì)數(shù)及其分類的檢查結(jié)果均在正常范圍內(nèi)。5.3生化學(xué)檢查生化檢測(cè)結(jié)果(X±SD)組別葡萄糖白蛋白膽固醇 尿素氮 谷丙轉(zhuǎn)氨酶 總蛋白甘油三酯(mmol/L) (g/dL) (mmol/L) (mmol/L) (IU/L)(g/dL)(mmol/L)對(duì)照5.3±0.2 4.4±0.2 2.1±0.1 5.1±0.4 48±6.9 7.0±0.5 1.2±0.1低劑量 5.3±0.3 4.4±0.2 2.2±0.2 5.2±0.5 46±7.2 7.2±0.4 1.2±0.1♂中劑量5.4±0.4 4.4±0.2 2.1±0.1 5.2±0.4 47±5.1 7.4±0.5 1.2±0.1高劑量 5.3±0.5 4.4±0.2 2.1±0.1 5.2±0.2 45±8.0 7.4±0.4 1.2±0.1對(duì)照5.3±0.4 4.5±0.2 2.1±0.1 5.0±0.1 46±7.6 7.1±0.4 1.2±0.2低劑量 5.4±0.2 4.6±0.2 2.1±0.1 5.1±0.1 47±7.8 7.1±0.4 1.2±0.1♀中劑量5.4±0.1 4.6±0.2 2.1±0.1 5.2±0.4 50±6.0 7.1±0.3 1.2±0.1高劑量 5.3±0.1 4.5±0.2 2.1±0.1 5.1±0.5 46±10.7 7.2±0.3 1.2±0.1以上結(jié)果表明，各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組大鼠的血清葡萄糖、白蛋白、膽固醇、尿素氮、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、總蛋白、甘油三酯等生化檢查結(jié)果均在正常范圍內(nèi)。5.4臟器重量結(jié)果各劑量組大鼠膽體比值組別 肝/體 腎/體 脾/體(％) (％) (％)對(duì)照 4.51±0.081.02±0.080.50±0.02低劑量 4.49±0.491.05±0.240.51±0.02♂中劑量 4.34±0.300.99±0.100.51±0.08高劑量 4.53±0.571.04±0.170.52±0.03對(duì)照 4.48±0.101.09±0.06 0.50±0.04低劑量4.53±0.651.14±0.21 0.49±0.03♀中劑量 4.47±0.641.06±0.12 0.51±0.04高劑量4.44±0.481.00±0.23 0.51±0.04上表可見(jiàn)，各實(shí)驗(yàn)組大鼠主要臟體比與對(duì)照組相比，均無(wú)明顯差異。5.5組織學(xué)檢查結(jié)果由下表可見(jiàn)，各組動(dòng)物大體檢查均無(wú)異常，肝、腎等主要臟器的組織學(xué)檢查結(jié)果未發(fā)現(xiàn)與實(shí)驗(yàn)有關(guān)的病變。肝
*大體檢查未發(fā)現(xiàn)明顯病變，因此僅選高劑量組作組織學(xué)檢查腎
*大體檢查未發(fā)現(xiàn)明顯病變，因此僅選高劑量組作組織學(xué)檢查本發(fā)明的含姬松茸中藥復(fù)方制劑，將姬松茸與蘆筍配伍，增強(qiáng)了其免疫調(diào)節(jié)和保肝作用，本發(fā)明的產(chǎn)品功效確切、安全可靠，為免疫功能低下和肝病患者提供了一種較好的輔助治療藥物。
實(shí)施例1 姬松茸、蘆筍提取物的制備取姬松茸干品15Kg(或鮮品150Kg)和蘆筍干品5.6Kg(或鮮品56Kg)，加11倍水，回流1.5小時(shí)，過(guò)濾，殘?jiān)?倍水回流1小時(shí)，過(guò)濾，合并濾液減壓濃縮至12Kg，即得姬松茸、蘆筍提取物。每克提取物中的多糖含量等于或大于2.08mg。實(shí)施例2 顆粒劑的制備取實(shí)施例1制得的姬松茸、蘆筍提取物12Kg，加糊精16Kg，阿斯巴甜35g，拌和，制粒，干燥即得顆粒劑。每克顆粒中的多糖含量等于或大于0.89mg。實(shí)施例3 片劑的制備按實(shí)施例2方法制得顆粒，壓片，包衣后即得片劑。每片重0.5g，內(nèi)含多糖等于或大于0.45mg。實(shí)施例4 膠囊劑的制備按實(shí)施例2方法制得干燥的顆粒，直接裝入空膠殼中，即得膠囊劑。每粒膠囊中顆粒重0.5g，內(nèi)含多糖等于或大于0.45mg。實(shí)施例5 口服液的制備取實(shí)施例1制得的姬松茸、蘆筍提取物12Kg，加蒸餾水稀釋至40L，備用；取苯甲酸鈉和山梨酸鉀各24.75g，用2L蒸餾水溶解，然后加入2L單糖漿，充分混勻，然后邊攪拌邊加入到上述提取物溶液中，最后加蒸餾水至50L，攪拌均勻后分裝于瓶中，于121℃、1.1Kg/cm2條件下滅菌20分鐘，即得口服液。每毫升口服液中多糖含量等于或大于0.5mg。
權(quán)利要求
1.一種含姬松茸的中藥復(fù)方制劑，其特征在于該復(fù)方制劑由1份姬松茸、蘆筍提取物和0.1-1.5份藥用輔料組成的，每100g制劑含姬松茸多糖≥50mg的口服制劑。
2.一種如權(quán)利要求1所述的含姬松茸的中藥復(fù)方制劑的制備方法，其特征在于該制備方法包括下列步驟(1)姬松茸、蘆筍提取物的制備50-90％姬松茸和10-50％蘆筍加8-15倍水，回流1-2小時(shí)，過(guò)濾，殘?jiān)?-10倍水回流0.5-1.5小時(shí)，過(guò)濾，合并濾液減壓濃縮至原藥材量的40-60％，即得姬松茸、蘆筍提取物；(2)口服制劑的制備取姬松茸、蘆筍提取物1份加入0.1-1.5份藥用輔料，按常規(guī)方法制成片劑、膠囊劑、口服液及顆粒劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及含姬松茸的中藥復(fù)方制劑及制備方法。本發(fā)明的含姬松茸的中藥復(fù)方制劑是由1份姬松茸、蘆筍提取物和0.1－1.5份藥用輔料組成的,每100g制劑含姬松茸多糖≥50mg的口服制劑。本發(fā)明將姬松茸與蘆筍配伍,增強(qiáng)了其免疫調(diào)節(jié)和保肝作用,使產(chǎn)品功效確切、安全可靠,為免疫功能低下和肝病患者提供了一種較好的輔助治療藥物。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1349825SQ0012576
公開日2002年5月22日 申請(qǐng)日期2000年10月25日 優(yōu)先權(quán)日2000年10月25日
發(fā)明者芮和愷, 張國(guó)明, 張國(guó)安 申請(qǐng)人:上海市中藥研究所