專利名稱：凍干的甲肝疫苗制造工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種甲肝疫苗原液的處理技術(shù)，用以制造凍干的甲型肝炎減毒活疫苗。
甲型肝炎病毒是小RNA腸道病毒，由它感染引起的甲型肝炎是世界性傳染病，能引發(fā)大范圍流行，威脅人們的健康。目前控制流行的有效措施在于使用疫苗。
1986年美國MERCK公司provost等人獲得甲肝病毒F＇減毒株，我國從80年代初開始，用人工誘導(dǎo)方法減毒，選育出疫苗株，其中以L-A-1株和H2株作為毒種制造的甲型肝炎減毒活疫苗于1992年獲試生產(chǎn)文號，已生產(chǎn)了上千萬人份疫苗，經(jīng)大量人群接種觀察證明該疫苗安全，有效。
國產(chǎn)的甲型肝炎減毒活疫苗是以人胚肺二倍體細(xì)胞為甲肝病毒繁殖基質(zhì)，接種毒種，在32-36℃條件下培育3-4周，之后收獲感染的細(xì)胞，并經(jīng)凍融，超聲波處理，通過各項檢定即為疫苗成品。這種液體劑型的活疫苗不穩(wěn)定效期短，需冷鏈運輸與保存。在中國，尤其是在廣大偏遠(yuǎn)農(nóng)村地區(qū)接種，長途運輸成本高，增加了人們負(fù)擔(dān)。另外，疫苗效期短易造成制品過期浪費。因此，如果將甲肝疫苗制成凍干劑型，就會延長效期，解決冷鏈運輸?shù)膯栴}。
早在1998年，國內(nèi)生產(chǎn)廠家就開始著手研制凍干苗，技術(shù)上的難點在于以人胚肺二倍體細(xì)胞作為甲肝病毒繁殖基質(zhì)培養(yǎng)制造的活疫苗，直接加入凍干保護劑進行凍干，制品的水份升華受阻，不易成型，達(dá)不到保護病毒的目的。
本發(fā)明提供的原液處理技術(shù)，實現(xiàn)的凍干成型，能有效地保護病毒抗原。
技術(shù)方案是在收獲的疫苗原液中加入三氯甲烷，振搖使之充分溶解，經(jīng)超濾洗滌，收集制成病毒懸液，加入保護劑，同時添加微量三氯甲烷，灌裝西林瓶，半壓塞裝箱凍干，經(jīng)檢定合格后，即為凍干的疫苗產(chǎn)品。
本發(fā)明具體工藝方法為1.在長成單層的人胚肺二倍體細(xì)胞中，接種L-A-1株或H2株毒種，32-362培養(yǎng)3-4周，之后收獲感染的細(xì)胞懸液(又稱疫苗原液)。
2.懸液合并后，在其中加入2％-10％的三氯甲烷，振蕩使三氯甲烷充分溶解。三氯甲烷最佳使用量為6‰。
3.在孔徑為100KD的超濾膜上進行全超濾，最終使分子量大于100KD的微粒沉積于膜表面。
4.使用Earle’s或其他緩沖液pH6.5-7.5沖洗膜包上沉積物，洗液液量為疫苗原液的3-6倍。
5.洗滌后，配制199疫苗液或磷酸緩沖液pH7.0-7.3收集沉積于膜上病毒微粒。
6.在收集到的懸液中加入凍干保護劑同時添加0.25-3‰的三氯甲烷，振蕩使之溶解，三氯甲烷最佳使用量為2‰。
7.之后灌裝西林瓶，每支0.5-1ml，半壓塞裝箱凍干，-35℃以下凍結(jié)3-4hr，開始干燥，制品在-20℃以下升華，待成形后，升溫至28℃，控溫7-9hr，凍干結(jié)束。
8.經(jīng)檢定合格即為凍干疫苗產(chǎn)品。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點和積極效果采用本發(fā)明的技術(shù)方案，能將以人胚肺二倍體細(xì)胞為基質(zhì)制造的疫苗原液凍干成型，能有效保護病毒抗原，而工藝簡單高效。在制品中添加的三氯甲烷，在洗滌和升華階段已徹底除去(按《中國生物制品規(guī)程》(一部)(1995年版)中的方法測定)制品中不殘留有機溶劑三氯甲烷。
實施例用胰酶(0.125％)消化細(xì)胞培養(yǎng)瓶上的感染細(xì)胞，加入100-250ml疫苗液或緩沖液，制成懸液，將懸液合并于3L鋼瓶中，按合并的體積量加入6‰的三氯甲烷(A.R.)，然后將鋼瓶放置在搖床上振蕩20-40分鐘或凍融1-2次，使三氯甲烷充分溶解。合并3L瓶中疫苗液于10L玻璃瓶中進行超濾(超濾器上裝有100KD的膜包)。再以Earle’s或其他緩沖液pH6.0-7.5循環(huán)沖洗膜包，棄洗液，用1 99疫苗液收集膜上沉積的病毒顆粒，制成懸液。再加入保護劑[保護劑成份參見專利(申請?zhí)?8117802.2)]，同時添加2‰的三氯甲烷振蕩使之溶解。灌裝西林瓶，半壓塞裝箱凍干，預(yù)凍時間3-4hr，升華成型后，控溫至28℃，7-9hr，凍干結(jié)束，包裝后即為產(chǎn)品。
權(quán)利要求
1.一種凍干的甲肝疫苗的制造工藝，其技術(shù)特征為在含有人胚肺二倍體細(xì)胞的疫苗原液中添加2‰-10‰三氯甲烷，經(jīng)振蕩，超濾，洗滌處理后，收集病毒懸液，并在其中添加0.25‰-3‰的三氯甲烷和保護劑，進行凍干。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的凍干的甲肝疫苗制造工藝，其特征是在甲肝疫苗原液中添加三氯甲烷的濃度是2‰-10‰。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的添加三氯甲烷的方法，其特征是三氯甲烷最佳濃度為6‰。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的凍干的甲肝疫苗制造工藝，其特征在于添加三氯甲烷后進行超濾、洗滌。洗滌所用液量為疫苗原液量的3-6倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的凍干的甲肝疫苗制造工藝，其特征在于收集的病毒懸液中添加0.25‰-3‰的三氯甲烷。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的添加三氯甲烷的方法，其特征在于三氯甲烷的最佳濃度為2.0‰。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的凍干的甲肝疫苗制造工藝，其特征在于以人胚肺二倍體細(xì)胞作為甲肝病毒繁殖基質(zhì)，由此收獲的病毒原液。
全文摘要
本發(fā)明是一種甲肝疫苗原液的處理技術(shù),用以制造凍干的甲肝疫苗。在含有人胚肺二倍體細(xì)胞殘片的原液中添加三氯甲烷,經(jīng)超濾、洗滌、收集病毒制成懸液,再加入微量三氯甲烷和凍干保護劑,灌裝西林瓶,半加塞后裝箱凍干,制得的產(chǎn)品中不殘留有機溶劑。該技術(shù)實現(xiàn)了甲肝疫苗的凍干成型,有效地保護病毒抗原,由此延長了疫苗保存效期并且解決了冷鏈運輸?shù)膯栴}。
文檔編號A61K39/29GK1334123SQ0012074
公開日2002年2月6日 申請日期2000年7月13日 優(yōu)先權(quán)日2000年7月13日
發(fā)明者高正倫, 魏巍, 于蘭, 周妍, 高俊芳, 胡曉晨, 趙克儉, 徐昆, 張晶, 韋兆華, 張立志, 郭健, 王云霞, 仲宇航, 霍忠臣 申請人:長春長生實業(yè)股份有限公司