專利名稱：內(nèi)皮素拮抗劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有內(nèi)皮素拮抗活性的八肽衍生物，其特備方法，含它們的藥物組合物及它們?cè)陬A(yù)防或治療與內(nèi)皮素有關(guān)疾病的用途。
內(nèi)皮素是重要的縮血管因子。人類或其它哺乳動(dòng)物基因組存在三種分別編碼內(nèi)皮素的基因，形成的大內(nèi)皮素在內(nèi)皮素轉(zhuǎn)換酶作用下，轉(zhuǎn)變?yōu)镋T1，ET2，ET3。它們均為二十一肽，含有兩個(gè)二硫橋鍵。ET1不但表達(dá)于非血管細(xì)胞，而且是唯一存在于血管內(nèi)皮細(xì)胞的內(nèi)皮素。ET2和ET3主要在腦、腎和腎上腺及小腸中表達(dá)。ET與靶細(xì)胞中的特異受體結(jié)合，最終產(chǎn)生相應(yīng)的生物學(xué)效應(yīng)。迄今已發(fā)現(xiàn)三類ET受體，即ETA，ETB，和ETC。ETA主要分布于主動(dòng)脈，心房，胎盤，肺、腦血的及腎臟血管平滑肌中；BTB存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，脈落叢上皮細(xì)胞，肺、胎血、腎小球內(nèi)皮，心室，腦中等，在血管平滑肌也有分布，ETC則分布于內(nèi)皮細(xì)胞中。三種受體對(duì)各型ET的親和力不同。內(nèi)皮素及受體在人體內(nèi)具有廣泛的生理病理學(xué)反應(yīng)。參與了高血壓，充血性心衰，心肌缺血，腦窒息，休克，急性腎衰，肺原性高血壓，血管痙攣性疾病等過程。因此，內(nèi)皮素拮抗劑有助于預(yù)防/治療心血管疾病。
本發(fā)明的目的是尋找新的內(nèi)皮素拮抗劑。
本發(fā)明人經(jīng)研究現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)式I的八肽衍生物RCO-A-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHI或其立體異構(gòu)體具有良好的內(nèi)皮素拮抗活性，因此式I八肽衍生物或其立體異構(gòu)體可作為藥物用于預(yù)防或治療與內(nèi)皮素有關(guān)的心血管疾病。本發(fā)明第一方面涉及式I八肽衍生物或其立體異構(gòu)體，RCO-A-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHI其中R為六亞甲基亞胺或RCO為N-乙?；?，或RCOA為下式基團(tuán)代表的O-CPh， A為Phe，其中的Phe中苯基可在2、3、4或5位被選自鹵素，硝基，COOC1-4烷基酯或C1-4烷基單取代或二取代，或其它非天然脂肪族氨基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基異丁酸。
本發(fā)明還涉及的含至少一種式I八肽衍生物或其立體異物體，RCO-A-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH I其中R為六亞甲基亞胺或RCO為N-乙?；騌COA為下式基團(tuán)代表的O-CPh， A為Phe，其中的Phe中苯基可在2、3、4或5位被選自鹵素，硝基，COOC1-4烷基酯或C1-4烷基單取代或二取代，或其它非天然脂肪族氨基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基異丁酸，及藥用載體或賦形劑的藥物組合物。
本發(fā)明還涉及制備式I八肽衍生物或其立體異物體的方法，其包括1)將Wang樹脂與Fmoc-Trp-OH在DMF，DCM，DCC-HOBt及DMAP中反應(yīng)，生成Fmoc-Trp-Wang樹脂，2)將1)中所得產(chǎn)物在哌啶，DMF，DCM中處理，生成Trp-Wang樹脂，3)將2)中產(chǎn)物Trp-Wang樹脂與Fmoc-Ile在DMF，DCM，DCC-HOBt中反應(yīng)，生成Fmoc-Ile-Wang樹脂，所得產(chǎn)物如2)中所述處理，生成式Ile-Trp-Wang樹脂，4)將Fmoc-Ile，F(xiàn)moc-Asp，F(xiàn)moc-Leu，F(xiàn)moc-D-Trp，F(xiàn)moc-D-Trp按順序與上一步所得產(chǎn)物先按3)所述進(jìn)行反應(yīng)，然后按2)中所述處理，得到D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-Wang樹脂，5)將4)中產(chǎn)物與RCO-A-OH按3)所述進(jìn)行反應(yīng)，然后在TFA，EDT，苯酚及水中處理，生成RCO-A-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH。
本發(fā)明還涉及式I八肽衍生物或其立體異構(gòu)體在制備預(yù)防或治療與內(nèi)皮素有關(guān)疾病或癥狀的藥物中用途。
根據(jù)本發(fā)明、術(shù)語“鹵素”是指氟、氯、溴或碘。
術(shù)語“C1-4烷基”指含1-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基。
在本發(fā)明中使用的縮寫具有下面含義Pro-脯氨酸，Asp-天冬氨酸，Ile-異亮氨酸，Leu-亮氨酸，Ala-丙氨酸，Phe-苯丙氨酸，Trp-色氨酸，Pya-β-吡啶基丙氨酸，GABA-γ-氨基丁酸，DMF-二甲基甲酰胺，DCM-二氯甲烷，NMM-N-甲基-嗎啉，DIC-HOBt-二異丙基碳二亞胺-1-羥基苯并三唑，F(xiàn)moc-9-芴甲氧羰基，TFA-三氟乙酸，EDT-乙二硫醇，DMAP-4-N，N-二甲胺基哌啶，HIM-六亞甲基亞胺基。
本發(fā)明所用術(shù)語“式I八肽衍生物立體異構(gòu)體”是指其相應(yīng)的D-或L-立體構(gòu)型。
具體講，本發(fā)明涉及式I八肽衍生物或其立體異構(gòu)體，RCO-A-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH I其中R為六亞甲基亞胺或RCO為N-乙酰基，或RCOA為下式基團(tuán)代表的O-CPh， A為Phe，其中的Phe中苯基可在2、3、4或5位被選自鹵素，硝基，COOC1-4烷基酯或C1-4烷基單取代或二取代，或其它非天然脂肪族氨基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基異丁酸。
本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包括至少一種式I八肽衍生物或其立體異構(gòu)體RCO-A-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH I其中R為六亞甲基亞胺或RCO為N-乙?；?，或RCOA為下式基團(tuán)代表的O-CPh， A為Phe，其中的Phe中苯基可在2、3、4或5位被選自鹵素，硝基，COOC1-4烷基酯或C1-4烷基單取代或二取代，或其它非天然脂肪族氨基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基異丁酸，及藥用載體或賦形劑。
根據(jù)本發(fā)明，式I八肽衍生物或其立體異構(gòu)體可選自下面的八肽1 N-Ac-L-Phe(2-F)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH2 N-Ac-L-Phe(3-F)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH3 N-Ac-L-Phe(4-F)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH4 N-Ac-L-Phe(2-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH5 N-Ac-L-Phe(3-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH6 N-Ac-L-Phe(4-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH7 N-Ac-L-Phe(4-Br)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH8 N-Ac-L-Phe(3-NO2)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH9 L-o-CPh-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH10 N-Ac-L-Phe(3-COOEt)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH11 N-Ac-L-Phe(4-COOEt)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH12 N-Ac-L-Phe(4-F-3-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH13 N-Ac-L-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH14 N-Ac-L-Phe(2，5-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH15 N-Ac-L-Phe(3，4-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH16 N-Ac-L-Trp-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH17 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH18 HIM-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH19 HIM-CO-NH-C(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH。
根據(jù)本發(fā)明，式I八肽衍生物或其立體異構(gòu)體進(jìn)一步優(yōu)選下面的八肽N-4c-L-Phe(2-F)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHN-Ac-L-Phe(3-F)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHN-Ac-L-Phe(4-F)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHN-Ac-L-Phe(2-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHN-Ac-L-Phe(4-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHN-Ac-L-Phe(4-Br)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHN-Ac-L-Phe(3-COOEt)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHN-Ac-L-Phe(4-COOEt)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHN-Ac-L-Phe(2，5-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHHIM-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH
HIM-CO-NH-C(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH。
根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的式I八肽衍生物或其立體異構(gòu)體可按本領(lǐng)域已知方法、文獻(xiàn)方法或下面所示的反應(yīng)路線1制備反應(yīng)路線1 i.DMF，DCM，DCC-HOBt，DMAP ii.哌啶，DMF，DCMiii.DMF，DCM，DCC-HOBt iv.TFA，EDT，苯酚水在反應(yīng)路線1中，i)將Wang樹脂與Fmoc-Trp-OH在DMF，DCM，DCC-HOBt及DMAP中反應(yīng)，生成Fmoc-Trp-Wang樹脂，ii)將所得Fmoc-Trp-Wang樹脂在哌啶，DMF及DCM中處理得Trp-Wang樹脂。iii)將Trp-Wang樹脂與Fmoc-Ile-OH在DMF，DCM，DCC-HOBt中反應(yīng)，生成Fmoc-Ile-Trp-Wang樹脂，所得Fmoc-Ile-Trp-Wang樹脂在哌啶，DMF及DCM中處理，生成Ile-Trp-Wang樹脂。接著Ile-Trp-Wang樹脂與Fmoc-Ile-OH按iii)所述反應(yīng)，然后按ii)中所述處理，生成Ile-Ile-Trp-Wangs樹脂，將Ile-Ile-Trp-Wangs樹脂與Fmoc-Asp按iii)中所述反應(yīng)，然后按ii)所述處理，生成Asp-Ile-Ile-Trp-Wangs樹脂。將Asp-Ile-Ile-Trp-Wangs樹脂與Fmoc-Leu按iii)中所述反應(yīng)，然后按ii)所述處理，生成Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-Wang樹脂，該產(chǎn)物與D-Trp按iii)中所述反應(yīng)，然后按ii)所述處理，生成D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-Wang樹脂。將D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-Wang樹脂與Fmoc-D-Trp按iii)中所述反應(yīng)，然后按ii)所述處理，生成D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-Wang樹脂，該產(chǎn)物與RCO-A-OH按iii)中所述反應(yīng)，生成RCO-A-D-Trp-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-Wang樹脂。該產(chǎn)物隨后在TFA，EDT，苯酚及水中處理，生成RCO-A-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH。
根據(jù)本發(fā)明，式I八肽衍生物的立體異構(gòu)體包括D-和/或L-構(gòu)型。
根據(jù)本發(fā)明，式(I)八肽衍生物及其立體異構(gòu)體在動(dòng)物抗Et1受體模型中顯示出優(yōu)良效果，因此可作為心血管藥用于動(dòng)物，優(yōu)選用于哺乳動(dòng)物，特別是人。
本發(fā)明因此還涉及含有作為活性成份的有效劑量的至少一種式(I)八肽衍生物和/或其立體異構(gòu)體以及常規(guī)藥物賦形劑或輔劑的藥物組合物。通常本發(fā)明藥物組合物含有0.1-90重量％的式(I)化合物和/或其立體異構(gòu)體。藥物組合物可根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法制備。用于此目的時(shí)，如果需要，可將式(I)化合物和/或立體異構(gòu)體與一種或多種固體或液體藥物賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成可作為人用的適當(dāng)?shù)氖┯眯问交騽┝啃问健?br> 本發(fā)明的式(I)八肽衍生物或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮膚、腹膜或直腸等。給藥劑型例如片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、脂質(zhì)體、透皮劑、口含片、栓劑、凍干粉針劑等。可以是普通制劑、緩釋制劑、控釋制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。為了將單位給藥劑型制成片劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如淀粉、糊精、硫酸鈣、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、碳酸鈣、白陶土、微晶纖維素、硅酸鋁等；濕潤(rùn)劑與粘合劑，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解劑，例如干燥淀粉、海藻酸鹽、瓊脂粉、褐藻淀粉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、碳酸鈣、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等；崩解抑制劑，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氫化油等；吸收促進(jìn)劑，例如季銨鹽、十二烷基硫酸鈉等；潤(rùn)滑劑，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸鹽、硼酸、液體石蠟、聚乙二醇等。還可以將片劑進(jìn)一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。為了將給藥單元制成丸劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氫化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高嶺土、滑石粉等；粘合劑如阿拉伯膠、黃蓍膠、明膠、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解劑，如瓊脂粉、干燥淀粉、海藻酸鹽、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等。為了將給藥單元制成栓劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種載體。關(guān)于載體的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高級(jí)醇、高級(jí)醇的酯、明膠、半合成甘油酯等。為了將給藥單元制成膠囊，將有效成分式(I)八肽衍生物或其立體異構(gòu)體與上述的各種載體混合，并將由此得到的混合物置于硬的明明膠囊或軟膠囊中。也可將有效成分式(I)八肽衍生物或其立體異構(gòu)體制成微囊劑，混懸于水性介質(zhì)中形成混懸劑，亦可裝入硬膠囊中或制成注射劑應(yīng)用。為了將給藥單元制成注射用制劑，如溶液劑、乳劑、凍干粉針劑和混懸劑，可以使用本領(lǐng)域常用的所有稀釋劑，例如，水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的異硬脂醇、多氧化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，為了制備等滲注射液，可以向注射用制劑中添加適量的氯化鈉、葡萄糖或甘油，此外，還可以添加常規(guī)的助溶劑、緩沖劑、pH調(diào)節(jié)劑等。
此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑或其它材料。
本發(fā)明式(I)八肽衍生物或其立體異構(gòu)體的給藥劑量取決于許多因素，例如所要預(yù)防或治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，患者或動(dòng)物的性別、年齡、體重及個(gè)體反應(yīng)，所用的具體化合物，給藥途徑及給藥次數(shù)等。上述劑量可以單一劑量形式或分成幾個(gè)，例如二、三或四個(gè)劑量形式給藥。
下面的實(shí)施例及生物活性實(shí)驗(yàn)用來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但這并不意味著對(duì)本發(fā)明的任何限制。制備例1 D，L-N-3-硝基-苯丙氨酸及其衍生物的合成1.1 D，L-3-硝基-苯丙氨酸(1aa)3-硝基-苯胺100克(0.725mol)懸浮于500毫升水和500毫升濃鹽酸中，維持內(nèi)溫不高于零下5℃，攪拌條件下滴加亞硝酸鈉59.0克(0.908mol)/150毫升水溶液，亞硝酸鈉加畢，反應(yīng)液澄清，繼續(xù)攪拌20分鐘。加入2.0克脲，再攪拌10分鐘，隨后加入48.0克醋酸鈉，反應(yīng)液為黃色透明溶液。另外，預(yù)先將110毫升丙烯酸、300毫升丙酮與26.0克水合氯化銅/80毫升水溶液混合，室溫下將此溶液加入上述重氮鹽溶液中，逐漸升溫(25～100℃/0.5小時(shí))，60～70℃產(chǎn)生大量氣泡，顏色逐漸加深為棕色，產(chǎn)氣完畢，停止加熱。冷卻后分層，分出有機(jī)相，水相用三氯甲烷提取(2×150毫升)，合并有機(jī)相，用水洗(3×150毫升)，濃縮有機(jī)相得到紅棕色油狀物。濃縮物用氨水溶成500毫升，放熱，用水稀釋為5000毫升澄清溶液，冷卻條件下充入足量的氨氣，溶液置于10升高壓釜中，60℃、70℃、80℃各反應(yīng)一天，90℃反應(yīng)兩天。冷卻后開啟高壓釜，取出反應(yīng)液，減壓濃縮至400毫升，加入500毫升工業(yè)酒精，冰箱中冷卻，析出白色固體，抽濾，固體干燥，約100克。1.2 D，L-3-硝基-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(1bb)將600毫升無水乙醇冰鹽浴冷卻至零下10℃，攪拌條件下緩慢滴入180毫升二氯亞砜，維持內(nèi)溫零下5℃以下，20分鐘后加入(1aa)粗品100克，室溫下攪拌兩天，再回流兩小時(shí)，趁熱濾除不溶物(無機(jī)鹽)約25克，溶液減壓蒸干，有白色固體析出，加入無水乙醇反復(fù)濃縮二次，得(1bb)52.0克(收率26.1％，按3-硝基苯胺計(jì))，m.p.184～186℃。FAB-MS m/z 239(M＋1—HCl)。1.3 D，L-N-乙酰-3-硝基苯丙氨酸乙酯(1cc) 將(1bb)40.0克(0.146mol)加入150毫升干燥的三氯甲烷中，攪拌溶解，加入45.0毫升(0.323mol)三乙胺，析出白色固體(三乙胺鹽酸鹽)，室溫下滴加30毫升(0.322mol)醋酐，反應(yīng)放熱，滴加完醋酐后繼續(xù)攪拌1小時(shí)。減壓濃縮，加入50毫升水，減壓濃縮除去醋酸，加入100毫升水，冷卻，油狀物固化，濾集固體，干燥，用乙酸乙酯-石油醚(60-90℃)重結(jié)晶，得到絮狀晶體，濾集干燥得(1cc)40.2克(98.5％)，m.p.86～87℃TLC Rf＝0.68(A，乙酸乙酯∶石油醚/80∶20，254nm顯色)；1HNMR(CDCl3)δ1.27(t，J＝7.08Hz，-OCH2CH3)，2.01(s，3H，-COCH3)，3.21(m，2H，β-H)，4.20(q，J＝7.08Hz，2H，-OCH2CH3)，4.88(m，1H，α-H)，6.06(s，1H，α-NH)，7.46-8.13(m，4H，Ar-H)。IR3260(NH)，2976(CH)，1738(C＝O，COOEt)，1646(C＝O，NHCOCH3)，1560，1523(CH，苯環(huán))，809，738，689(苯環(huán)間位硝基取代)。元素分析 C H N(％)C13H16N2O3理論值55.715.75 9.99280.28 測(cè)試值55.685.67 9.52制備例2 2-氟-苯丙氨酸及其衍生物的合成2.1 D，L-2-氟-苯丙氨酸(2aa)方法及投量比同(1aa)的合成。2-氟-苯胺25毫升(0.256mol)。用高壓釜氨解時(shí)，55℃七天，減壓濃縮至約100毫升，用濃鹽酸酸化至pH4～5，析出固體，冰箱放置過夜，濾集固體，干燥得(2aa)粗品約17克。2.2 D，L-2-氟-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(2bb)方法同(1bb)。投入(2aa)粗品17.0克。濃縮反應(yīng)液后，加入10毫升無水乙醇和50毫升乙醚，0℃以下放置一周，析出無色針狀結(jié)晶，濾集晶體，得(2bb)16.0克(24.7％，以2-氟苯胺計(jì))，m.p.112～115℃。FAB-MS m/z 212(M＋1-HCl)。2.3 D，L-N-乙酰-2-氟-苯丙氨酸乙酯(2cc)方法同(1cc)。投入(2bb)16.0克(0.065mol)。濃縮后，加入乙酸乙酯100毫升，依次用水、1M鹽酸、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉溶液洗滌，乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥過夜，過濾，濃縮，加入乙醚-石油醚冷卻析出無色晶體。濾集，得(2cc)13.0克(79.0％)，m.p.58～61℃。TLCRf＝0.63(A)。1HNMR(CDCl3)δ1.22(t，J＝7.12Hz，-OCH2CH3)，1.96(s，3H，-COCH3)，3.14(m，2H，β-H)，4.15(m，2H，-OCH2CH3)，4.82(m，1H，α-H)，5.98(s，1H，α-NH)，6.98-7.22(m，4H，Ar-H)。IR 3334(NH)，2964(CH)，1726(C＝O，COOEt)，1646(C＝O，NHCOCH3)，1553，1498(CH，苯環(huán))，753(苯環(huán)鄰氟取代)。元素分析 C H N(％)C13H16NFO3理論值61.656.375.53測(cè)試值61.656.445.75制備例3 3-氟-苯丙氨酸及其衍生物的合成3.1 D，L-3-氟-苯丙氨酸(3aa)方法及投量比同(1aa)的合成。3-氟-苯胺25毫升(0.256mol)。用高壓釜氨解時(shí)，50℃八天，減壓濃縮至約100毫升，用濃鹽酸酸化至pH4～5，析出固體，冰箱放置過夜，濾集固體，干燥得(3aa)粗品約25克。FAB-MS m/z 184(M＋1)。3.2 D，L-3-氟-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(3bb)方法同(1bb)。投入(3aa)粗品24.0克。濃縮反應(yīng)液后，加入10毫升無水乙醇和50毫升乙醚，0℃以下放置，析出無色針狀結(jié)晶，濾集晶體，得(3bb)20.0克(31.4％，以3-氟苯胺計(jì))，m.p.119～121℃。3.3 D，L-N-乙酰-3-氟-苯丙氨酸乙酯(3cc)方法同(1cc)。投入(3bb)20.0克(0.080mol)。濃縮后，加入乙酸乙酯100毫升，依次用水、1M鹽酸、飽和碳酸氫鈉和飽和氯化鈉溶液洗滌，乙酸乙酯層用無水硫酸鈉干燥過夜，過濾，濃縮，加入乙醚-石油醚冷卻析出無色晶體。濾集，得(3cc)16.0克(78.9％)，m.p.75～77℃2。TLC Rf＝0.60(A)。1HNMR(CDCl3)δ1.25(t，J＝7.32Hz，-OCH2CH3)，2.00(s，3H，-COCH3)，3.12(m，2H，β-H)，4.18(q，J＝7.32Hz，2H，-OCH2CH3)，4.85(m，1H，α-H)，6.00(s，1H，α-NH)，6.80-7.27(m，4H，Ar-H)。IR3334(NH)，2989，2939(CH)，1732(C＝O，COOEt)，1646(C＝O，NHCOCH3)，1529(CH，苯環(huán))，776，701(苯環(huán)間氟取代)。元素分析C HN(％)C13H16NFO3理論值61.656.375.53253.27 測(cè)試值61.706.265.37制備例4 4-氟-苯丙氨酸及其衍生物的合成4.1 D，L-4-氟-苯丙氨酸(4aa)方法及投量比同(1aa)的合成。4-氟-苯胺100毫升(1.04mol)。室溫下氨解7個(gè)月，減壓濃縮至約300毫升，用濃鹽酸酸化至pH3，析出固體，冰箱放置過夜，濾集固體，干燥得(4aa)粗品約150克。4.2 D，L-4-氟-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(4bb)方法同(3bb)。投入(4aa)粗品150.0克。得(4bb)81.0克(31.5％，以4-氟苯胺計(jì))，m.p.130～132℃。FAB-MS m/z 212(M＋1-HCl)。4.3 D，L-N-乙酰-4-氟-苯丙氨酸乙酯(4cc)方法同(3cc)。投入(4bb)40.0克(0.162mol)。得(4cc)39.0克(95.0％)，m.p.71～73℃。TLCRf＝0.68(A)。1HNMR(CDCl3)δ1.25(t，J＝7.02Hz，-OCH2CH3)，2.00(s，3H，-COCH3)，3.10(m，2H，β-H)，4.17(m，2H，-OCH2CH3)，4.84(m，1H，α-H)，6.01(s，1H，α-NH)，6.95-7.09(m，4H，Ar-H)。IR 3309(NH)，3087，2989(CH)，1756(C＝O，COOEt)，1658(C＝O，NHCOCH3)，1553，(CH，苯環(huán))，830，800，707(苯環(huán)對(duì)氟取代)。元素分析C HN(％)C13H16NFO3理論值61.656.375.53測(cè)試值61.566.305.25制備例5 2-氯-苯丙氨酸及其衍生物的合成5.1 D，L-2-氯-苯丙氨酸(5aa)方法及投量比同(1aa)的合成。2-氯-苯胺51.5克(0.40mol)。室溫下氨解5個(gè)月。減壓濃縮至約300毫升，用濃鹽酸酸化至pH3，析出固體。得19.8克。濃縮濾液，冰箱中放置過夜，得白色固體，干燥后重28.0克。合并共重47.8克。5.2 D，L-N-乙酰-2-氯-苯丙氨酸(5bb)(5aa)15.6克(0.078mol)溶于2mol/L NaOH 156ml，保持零下5℃，滴加醋酐15毫升，10分鐘后，加入23毫升濃鹽酸，pH約為3，冰箱中放置過夜，得白色固體，干燥后重14.0克。收率74％。熔點(diǎn)158～160℃5.3 D，L-N-乙酰-2-氯-苯丙氨酸乙酯(5cc)方法同(1bb)。(5bb)13.3克，無水乙醇170毫升，二氯亞砜8.5毫升。室溫下反應(yīng)4小時(shí)，減壓濃縮，殘液倒入500毫升水中，冰箱中放置過夜，過濾干燥得12.0克(81％)。熔點(diǎn)63～65℃。TLC Rf＝0.61(A)1HNMR(CDCl3)δ1.25(t，J＝7.12Hz，-OCH2CH3)，2.00(s，3H，-COCH3)，3.20～3.36(m，2H，β-H)，4.14～4.24(m，2H，-OCH2CH3)，4.94(m，1H，α-H)，6.04(s，1H，α-NH)，7.22～7.40(m，4H，Ar-H)。FAB-MS m/z 270.2(M)IR3334(NH)，3063，2976(CH)，1726(C＝O，COOEt)，1640(C＝O，NHCOCH3)，1547(CH，苯環(huán))，750(苯環(huán)鄰氯取代)。元素分析 C HN(％)C13H16NClO3理論值57.895.985.19MW.269.71測(cè)試值58.305.944.80制備例6 3-氯-苯丙氨酸及其衍生物的合成6.1 D，L-3-氯-苯丙氨酸(6aa)方法及投量比同(1aa)的合成。間氯苯胺96.0克(0.784mol)。高壓釜中(60℃)氨解十天。濃縮過濾，得粗品87克，經(jīng)乙醚洗得干燥品66克。6.2 D，L-3-氯-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(6bb)，方法同(1bb)。粗品(6a)66克(0.33mol)。無水乙醇400毫升，二氯亞砜110毫升。濃縮，用乙醚研出固體，過濾，乙醚洗滌固體，得白色固體63.0克，熔點(diǎn)138.5～140.5℃。按3-氯苯胺計(jì)，全程收率31.7％FAB-MS m/z 228.0(M＋1，-HCl)6.3 D，L-N-乙酰-3-氯-苯丙氨酸乙酯(6cc)方法同(1cc)。投入(6b)40.0克(0.162mol)。得(6cc)40.0克(98.0％)，m.p.88～90℃。TLC/Rf＝0.69(A)。1HNMR(CDCl3)δ1.24(t，J＝7.25Hz，-OCH2CH3)，1.99(s，3H，-COCH3)，3.08(m，2H，β-H)，4.16(m，2H，-OCH2CH3)，4.84(m，1H，α-H)，6.06(s，1H，α-NH)，6.98～7.26(m，4H，Ar-H)。IR 3334(NH)，2989(CH)，1750(C＝O，COOEt)，1652(C＝O，NHCOCH3)，1547(CH，苯環(huán))，880，787，692(苯環(huán)間氯取代)。元素分析 C HN(％)C13H16NClO3理論值57.895.985.19MW.269.71測(cè)試值57.865.935.08制備例7 4-溴-苯丙氨酸及其衍生物的合成7.1 D，L-4-溴-苯丙氨酸(7aa)方法及投量比同(1aa)的合成。對(duì)溴苯胺100.0克(0.58mol)。室溫氨解半年。濃縮過濾，得粗品81克。水不溶。FAB-MS m/z 245.2(M＋1，)7.2 D，L-4-溴-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(7bb)，方法同(1bb)。粗品(7aa)80克(0.33mol)。無水乙醇400毫升，二氯亞砜150毫升。濃縮，用乙醚研出固體，過濾，乙醚洗滌固體，得白色固體61.0克，熔點(diǎn)166～168℃。按對(duì)溴苯胺計(jì)，全程收率34.0％。7.3 D，L-N-乙酰-4-溴-苯丙氨酸乙酯(7cc)方法同(1cc)。投入(7bb)40.0克(0.143mol)。得(7cc)42.0克(94.O％)，熔點(diǎn)90～92℃。TLC/Rf＝0.57(A)。1HNMR(CDCl3)δ1.23(t，J＝7.14Hz，-OCH2CH3)，1.97(s，3H，-COCH3)，3.04(m，2H，β-H)，4.14(m，2H，-OCH2CH3)，4.82(m，1H，α-H)，5.90(s，1H，α-NH)，5.94～7.39(m，4H，Ar-H)。IR 3334(NH)，3001(CH)，1744(C＝O，COOEt)，1652(C＝O，NHCOCH3)，1535(CH，苯環(huán))，815(苯環(huán)對(duì)溴取代)。
元素分析 C HN(％)C13H16NBrO3理論值49.705.134.46MW.314.11測(cè)試值49.774.994.16制備例8 4-氟-3-氯-苯丙氨酸及其衍生物的合成8.1 D，L-4-氟-3-氯-苯丙氨酸(8aa)方法及投量比同(1aa)的合成。4-氟，3-氯-苯胺145克(1.00mol)。室溫下氨解10個(gè)月，減壓濃縮至約500毫升，用濃鹽酸酸化至pH3，析出固體，冰箱放置過夜，濾集固體，干燥得(8aa)粗品約196.0克。FAB-MS m/z 218(M)，220(M＋2)。8.2 D，L-4-氟-3-氯-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(8bb)方法同(1bb)。投入(8a)粗品196.0克。得(8bb)126.0克(44.6％，以4-氟，3-氯-苯胺計(jì))，熔點(diǎn)136～138℃。8.3 D，L-N-乙酰-4-氟-3-氯-苯丙氨酸乙酯(8cc)方法同(1cc)。投入(8bb)41.0克(0.145mol)。得(8cc)39.6克(94.7％)，熔點(diǎn)106～107℃。TLC/Rf＝0.54(A)。1HNMR(CDCl3)δ1.26(t，J＝7.02Hz，-OCH2CH3)，2.02(s，3H，-COCH3)，3.10(m，2H，β-H)，4.19(q，J＝7.02Hz，2H，-OCH2CH3)，4.80(q，1H，α-H)，6.01(s，1H，α-NH)，6.96-7.16(m，3H，Ar-H)。IR 3297(NH)，3001(CH)，1750(C＝O，COOEt)，1652(C＝O，NHCOCH3)，1553，(CH，苯環(huán))，886，827，695(苯環(huán)對(duì)氟間氯取代)。元素分析 C HN(％)C13H15NFClO3理論值54.275.254.87測(cè)試值54.115.154.86制備例9 2，4-二氯-苯丙氨酸及其衍生物的合成9.1 D，L-2，4-二氯-苯丙氨酸(9aa)方法及投量比同(1aa)的合成。2，4-二氯-苯胺80克(0.50mol)。室溫下氨解10個(gè)月，減壓濃縮至約500毫升，用濃鹽酸酸化至pH3，析出固體，濾集固體，干燥得(9aa)粗品約103.0克。9.2 D，L-2，4-二氯-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(9bb)，方法同(1bb)。投入(9aa)粗品100克。得(9bb)59.0克(32.1％，2，4-二氯-苯胺計(jì))，熔點(diǎn)180～182℃。FAB-MS m/z 262.0(M)，264(M＋2)。9.3 D，L-N-乙酰-2，4-二氯-苯丙氨酸乙酯(9cc)方法同(1cc)。投入(9bb)54.4克(0.182mol)。得(9cc)53.0克(96.0％)，熔點(diǎn)109～111。TLC/Rf＝0.66(A)。1HNMR(CDCl3)δ1.21(t，J＝7.18Hz，-OCH2CH3)，1.92(s，3H，-COCH3)，3.19(m，2H，β-H)，4.13(q，J＝7.02Hz，2H，-OCH2CH3)，4.85(q，1H，α-H)，5.97(s，1H，α-NH)，7.11～7.36(m，3H，Ar-H)。IR 3322(NH)，2989(CH)，1726(C＝O，COOEt)，1646(C＝O，NHCOCH3)，1553，(CH，苯環(huán))，867，849，818(苯環(huán)對(duì)氯鄰氯取代)。元素分析 C H N(％)C13H15NCl2O3理論值51.334.974.60測(cè)試值51.384.924.34制備例10 2，5-二氯-苯丙氨酸及其衍生物的合成10.1 D，L-2，5-二氯-苯丙氨酸(10aa)方法及投量比同(1aa)的合成。2，5-二氯-苯胺80克(0.50mol)。500毫升氨水(25％)，2000毫升乙醇，100毫升吡啶，0℃充氨，50℃氨解10天，減壓濃縮至于。1000毫升水充分溶解，濾除不溶物，濾液減壓濃縮至約300毫升，用濃鹽酸酸化至pH3，析出固體，濾集固體，干燥得(10aa)粗品約25克。10.2 D，L-2，5-二氯-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(10bb)，方法同(1bb)。投入(10aa)粗品25克。得(10bb)16克(8.7％，2，5-二氯-苯胺計(jì))，熔點(diǎn)184～188℃。(軟化，變黑)FAB-MS m/z 262.0(M)，264(M＋2)。10.3 D，L-N-乙酰-2，5-二氯-苯丙氨酸乙酯(10cc)方法同(1c)。投入(10bb)20.7克(0.069mol)。得(10cc)19.20克(91.0％)，熔點(diǎn)116～118℃。TLC/Rf＝0.63(A)。1HNMR(CDCl3)δ1.23(t，J＝7.15Hz，-OCH2CH3)，1.98(s，3H，-COCH3)，3.22(m，2H，β-H)，4.14(q，J＝7.08Hz，2H，-OCH2CH3)，4.87(q，1H，α-H)，6.01(s，1H，α-NH)，7.14～7.36(m，3H，Ar-H)。IR 3297(NH)，3075，2989(CH)，1744(C＝O，COOEt)，1658(C＝O，NHCOCH3)，1541(CH，苯環(huán))，815，713(苯環(huán)2，5-二氯取代)。元素分析 C HN(％)C13H15NCl2O3理論值51.334.974.60測(cè)試值51.434.984.39制備例11 3，4-二氯-苯丙氨酸及其衍生物的合成11.1 D，L-3，4-二氯-苯丙氨酸(11aa)方法及投量比同(1aa)的合成。3，4-二氯-苯胺250克(1.56mol)。50℃氨解7天，減壓濃縮至約1000毫升，用濃鹽酸酸化至pH3，析出固體，濾集固體，干燥得(11aa)粗品約287.0克。11.2 D，L-3，4-二氯-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(11bb)，方法同(1bb)。投入(11aa)粗品287克。得(11bb)159.0克(36.2％，3，4-二氯-苯胺計(jì))，熔點(diǎn)127～130℃。FAB-MS m/z 249.0(M)，251(M＋2)。11.3 D，L-N-乙酰-3，4-二氯-苯丙氨酸甲酯(11cc)方法同(1c)。投入(11bb)11.0克(0.039mol)。得(11cc)8.0克(71.3％)，熔點(diǎn)101～103℃。TLC/Rf＝0.62(A)。1HNMR(CDCl3)δ1.20(t，J＝7.12Hz，-OCH2CH3)，2.09(s，3H，-COCH3)，3.15(m，2H，β-H)，4.13(q，J＝7.11Hz，2H，-OCH2CH3)，4.85(q，1H，α-H)，5.97(s，1H，α-NH)，7.05～7.36(m，3H，Ar-H)。IR 3322(NH)，3075，2964(CH)，1732(C＝O，COOEt)，1652(C＝O，NHCOCH3)，1547(CH，苯環(huán))，898，830(苯環(huán)對(duì)氯間氯取代)。制備例12 2-氯，4-溴-苯丙氨酸及其衍生物的合成12.1 2-氯，4-溴-苯丙氨酸(12aa)方法及投量比同(1aa)的合成。2-氯，4-溴-苯胺10克(0.048mo1)。室溫氨解5個(gè)月，減壓濃縮至約100毫升，用濃鹽酸酸化至pH3，析出固體，濾集固體，干燥得(12aa)粗品約5.6克。12.2 D，L-2-氯，4-溴-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(12bb)，方法同(1bb)。投入(11aa)粗品5.6克。得(12bb)5.1克(30.7％，2-氯，4-溴-苯胺計(jì))，熔點(diǎn)172～174℃。FAB-MS m/z 308.0(M＋1)。1HNMR(CDCl3)δ1.20(t，J＝7.02Hz，-OCH2CH3)，3.28～3.34，3.42～3.48(m，2H，β-H)，4.21～4.26，(m，2H，-OCH2CH3)，4.45(m，2H，α-NH2)，7.25～7.74(m，3H，Ar-H)。IR 3445(NH2.HCl)，2939(CH)，1750(C＝O，COOEt)，1590(CH，苯環(huán))，855，821(苯環(huán)對(duì)溴鄰氯取代)。元素分析 C HN(％)C11H14NBrCl2O2理論值38.514.114.08MW.343.05測(cè)試值38.564.184.02制備例13 3-氯，2-甲基-苯丙氨酸及其衍生物的合成13.1 3-氯，2-甲基-苯丙氨酸(13aa)方法及投量比同(1aa)的合成。3-氯，2-甲基-苯胺142克(1.0mol)。室溫氨解5個(gè)月，減壓濃縮至約100毫升，用濃鹽酸酸化至pH3，析出固體，濾集固體，干燥得(13aa)粗品約105.6克。13.2 D，L-3-氯，2-甲基-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(13bb)，方法同(1b)。投入(13aa)粗品105.6克。得(13bb)74.0克(26.7％，3-氯，2-甲基-苯胺計(jì))，熔點(diǎn)142～4℃。FAB-MS m/z 242.2(M-HCl)。13.3 D，L-N-乙酰-3-氯，2-甲基-苯丙氨酸乙酯(13cc)方法同(1cc)。投入(13bb)19.0克(69mmol)。得(13cc)19.0克(98.1％)，熔點(diǎn)106～107℃。TLC/Rf＝0.73(A)。1HNMR(CDCl3)δ1.16(t，J＝7.32Hz，-OCH2CH3)，1.96(s，3H，-COCH3)，3.01(m，2H，β-H)，4.12(q，J＝7.11Hz，2H，-OCH2CH3)，4.82(q，1H，α-H)，6.08(s，1H，α-NH)，7.01～7.27(m，3H，Ar-H)。IR 3284(NH)，3075，2976，2939(CH)，1756(C＝O，COOEt)，1652(C＝O，NHCOCH3)，1560，1498(CH，苯環(huán))，796，707(苯環(huán)2-甲基，3-氯取代)。元素分析 C HN(％)C14H18NClO3理論值59.266.394.94測(cè)試值59.476.424.72制備例14 4-硝基，2-甲基-苯丙氨酸及其衍生物的合成14.1 4-硝基，2-甲基-苯丙氨酸(14aa)方法及投量比同(1aa)的合成。4-硝基，2-甲基-苯胺50克(0.33mol)。室溫氨解5個(gè)月，減壓濃縮至約100毫升，用濃鹽酸酸化至pH3，析出固體，濾集固體，干燥得(14aa)粗品約32.6克。14.2 D，L-4-硝基，2-甲基-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(14bb)，方法同(1bb)。投入(14aa)粗品32.6克。得(14b)26.0克(27.4％，4-硝基，2-甲基-苯胺)，熔點(diǎn)172～5℃。FAB-MS m/z 253.0(M＋1-HCl)。14.3 D，L-N-乙酰-4-硝基，2-甲基-苯丙氨酸乙酯(14cc)方法同(1cc)。投入(14bb)19.0克(66mmol)。得(14cc)12.5克(64.6％)，熔點(diǎn)114～6℃。TLC/Rf＝0.64(A)。1HNMR(CDCl3)δ1.22(t，J＝7.02Hz，-OCH2CH3)，2.00(s，3H，-COCH3)，3.22(m，2H，β-H)，4.19(q，J＝7.02Hz，2H，-OCH2CH3)，4.88(q，1H，α-H)，6.14(s，1H，α-NH)，7.27～8.03(m，3H，Ar-H)。IR 3334(NH)，2989(CH)，1732(C＝O，COOEt)，1640(C＝O，NHCOCH3)，1517(CH，苯環(huán))，913，843，800，744(苯環(huán)鄰甲基對(duì)硝基取代)。元素分析C HN(％)C14H18N2O5理論值57.146.169.52測(cè)試值56.996.199.48制備例15 4-羧基-苯丙氨酸及其衍生物的合成15.1 D，L-4-羧基-苯丙氨酸(15aa)將68.0克(0.5mol)4-羧基-苯胺與40.0克(0.29mol)碳酸鉀/200毫升水混合溶解，攪拌加入35克(0.507mol)亞硝酸鈉，形成紅色溶液。500毫升濃鹽酸/200毫升水?dāng)嚢枥鋮s至-5℃，滴加入上述紅色溶液，控制反應(yīng)溫度-5℃以下。20分鐘后加入0.5克脲，攪拌20分鐘，再加入30.0克醋酸鈉，溶解，得到亮黃色的重氮鹽。將預(yù)先配好的75毫升丙烯酸、100毫升丙酮與18克水合氯化銅/50毫升水溶液的混合液，加入至上述重氮鹽中，逐漸升溫，50～80℃產(chǎn)氣，產(chǎn)氣結(jié)束后冷卻，形成大量略帶粉紅色的沉淀，濾集固體，用2000氨水，密封，室溫放置9個(gè)月，濾去不溶物，濾液減壓濃縮，酸化至pH4，析出沉淀，濾集固體，干燥得(15aa)粗品84.8克。15.2 D，L-4-羧基-苯丙氨酸二乙酯鹽酸鹽(15bb)方法同(3bb)。投入(15aa)粗品84.8克。得(15bb)白色晶體60.0克(40.1％，以4-羧基-苯胺計(jì))，m.p.137～139℃。FAB-MS m/z 266(M＋1-HCl)。15.3 D，L-N-乙酰-4-羧基-苯丙氨酸二乙酯(15cc)方法同(3cc)。投入(15bb)40.0克(0.133mol)。得(15cc)34.0克(83.5％)，m.p.89.5～90.5℃。TLC Rf＝0.56(A)。1HNMR(CDCl3)δ1.25(t，J＝7.02Hz，-OCH2CH3)，1.38(t，J＝7.02Hz，3H，Ar-CO2CH2CH3)，2.00(s，3H，-COCH3)，3.18(m，2H，β-H)，4.17(m，2H，-OCH2CH3)，4.36(q，J＝7.02Hz，2H，Ar-CO2CH2CH3)，4.88(m，1H，α-H)，5.99(d，1H，α-NH)，7.1-7.98(m，4H，Ar-H)。IR 3247(NH)，3075，2989(CH)，1738，1707(C＝O，COOEt)，1646(C＝O，NHCOCH3)，855，766(苯環(huán)對(duì)羧基乙酯取代)。元素分析 C HN(％)C12H21NO6理論值62.536.894.56307.34 測(cè)試值62.566.854.46制備例16 3-羧基-苯丙氨酸及其衍生物的合成16.1 D，L-3-羧基-苯丙氨酸(16aa)3-氨基-苯甲酸100克(0.73mol)70～80℃氨解4天。減壓濃縮至約100毫升，用濃鹽酸酸化至pH3，析出固體，濾集固體，干燥得(16aa)粗品約92.6克。16.2 D，L-3-羧基-苯丙氨酸二乙酯鹽酸鹽(16bb)方法同(3bb)。投入(16aa)粗品92.6克。得(16bb)白色晶體65.0克(29.5％，以3-羧基-苯胺計(jì))，m.p.165～7℃。FAB-MS m/z 266.1(M＋1-HCl)。1HNMR(CDCl3)δ1.29(t，J＝7.12Hz，-OCH2CH3)，1.42(t，J＝7.08Hz，3H，Ar-CO2CH2CH3)，3.25(m，2H，β-H)，4.19(m，2H，-OCH2CH3)，4.39(q，J＝7.02Hz，2H，Ar-CO2CH2CH3)，5.02(m，1H，α-H)，6.09(d，1H，α-NH)，7.21-8.08(m，4H，Ar-H)。元素分析 C H N(％)C14H20NClO4理論值55.726.68 4.64301.77 測(cè)試值55.786.62 4.6216.3 D，L-N-酰-4-羧基-苯丙氨酸二乙酯(16cc)方法同(3cc)。投入(16bb)54.0克(0.18mol)。得(16cc)54.5克(99.1％)，紅色油狀物，待拆分用。制備例17 2-羧基-苯丙氨酸及其衍生物的合成17.1 D，L-2-羧基-苯丙氨酸(17aa)2-氨基-苯甲酸100克(0.73mo1)50℃氨解4天。減壓濃縮至約100毫升，用濃鹽酸酸化至pH3，析出固體，濾集固體，干燥得(17aa)粗品約88.6克。17.2 1-氨基-2-羰基-(3，4)苯并-6-羧基乙酯(17bb)。方法同(3bb)。投入(17aa)粗品88.6克。得(17bb)白色晶體74.0克(46.3％，以2-羧基-苯胺計(jì))，m.p.87～9℃。FAB-MS m/z 221.0(M＋2)。1HNMR(CDCl3)δ1.15(t，J＝7.01Hz，-OCH2CH3)，3.24～3.45(m，2H，β-H)，4.15(m，J＝7.08Hz，2H，-OCH2CH3)，5.13(m，J＝5.49Hz，1H，α-H)，7.22-8.08(m，4H，Ar-H)。IR 3445(NH)，2989(CH)，1750(C＝O，COOEt)，1726(C＝O，-NHCO-)，1553，1498(CH，苯環(huán))，757(苯環(huán)鄰羰基取代)。元素分析 C H N(％)C12H13NO3理論值65.745.986.39219.24 測(cè)試值65.786.026.35制備例18 D，L-N-乙酰-3-硝基-苯丙氨酸乙酯的拆分18.1 D-N-乙酰-3-硝基-苯丙氨酸乙酯(1AA)。D，L-N-乙酰-3-硝基-苯丙氨酸乙酯16.3克(58mmol)研成粉末，懸浮于200毫升0.1M KH2PO4和K2HPO4溶液中，水浴恒溫至37℃，用1M NaOH溶液調(diào)pH7.4，加入20.0毫克α-糜蛋白酶，緩慢攪拌，pH緩慢下降，用2M KOH溶液維持pH7.4，攪拌至pH穩(wěn)定，繼續(xù)攪拌2小時(shí)。反應(yīng)液用乙酸乙酯提取(3×100毫升)，合并有機(jī)相，飽和氯化鈉溶液洗一次，無水硫酸鈉干燥后濃縮至30毫升，加入石油醚，析出淡黃色針狀結(jié)晶，濾集，得(1AA)7.8克(95.7％)，m.p.109～110℃，[α]27D＝-9.90°(c＝1.02，無水甲醇)。18.2 L-N-乙酰-3-硝基-苯丙氨酸(1BB)上述拆分萃取后的水相中用濃鹽酸調(diào)至pH2～3，用乙酸乙酯提取(3×100毫升)，合并有機(jī)相，以飽和氯化鈉溶液洗一次，無水硫酸鈉干燥后，40℃以下減壓濃縮，得到(1B)淡黃色固體6.8克(92.7％)，m.p.167～169℃，[α]27D＝+31.09°(c＝1.01，無水甲醇)。18.3 D-3-硝基-苯丙氨酸鹽酸鹽(1CC)(1AA)5.00克(18mmol)，在100毫升6M鹽酸中回流6小時(shí)，減壓蒸干，加無水乙醇濃縮一次，加入50毫升乙酸乙酯濾集固體，得(1CC)淡黃色針晶4.38克(99.8％)，m.p.241～243℃(分解)，[α]25D＝-9.4°(c＝1.05，無水甲醇)。18.4 L-3-硝基-苯丙氨酸鹽酸鹽(1DD)(1BB)5.00克(20mmol)，同上法處理。得(1DD)白色細(xì)針狀晶體4.65克(95.1％)，m.p.229～232℃(分解)，[α]25D＝+8.0°(c＝1.01，無水甲醇)。18.5 D-N-乙酰-3-硝基-苯丙氨酸(1EE)(1AA)1.00克(3.64mmol)，加入10毫升甲醇溶解，冷卻攪拌條件下加入3毫升2M氫氧化鉀溶液，20分鐘后，加入1M鹽酸調(diào)至pH8.0，40℃以下減壓蒸干，加入15毫升水溶解，用1M鹽酸酸化至pH2～3，乙酸乙酯提取(3×20毫升)，合并有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥后，減壓濃縮得淡黃色固體(1EE)0.88克(98.0％)，m.p.162-164℃。[α]20D＝-33.9°(c＝1.27，無水甲醇)。18.6 D-3-硝基-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(1FF)。1.00克(1CC)，SOCl2/CH3OH法。得(1F)1.05克(99.3％)m.p.174～6℃。20D＝-13.5(c＝0.88，無水甲醇)。18.7 L-3-硝基-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(1GG)。1.00克(1DD)，SOCl2/CH3OH法。得(1GG)1.05克(99.4％)m.p.170～2℃。[α]20D＝+14.1(c＝1.02，無水甲醇)。制備例19 D，L-N-乙酰-2-氟-苯丙氨酸乙酯的拆分19.1 D-N-乙酰-2-氟-苯丙氨酸乙酯(2AA)拆分方法同(1AA)項(xiàng)。D，L-N-乙酰-2-氟-苯丙氨酸乙酯12.16克(47.7mmol)，得(2AA)5.50克(90.5％)，為無色油狀物。19.2 L-N-乙酰-2-氟-苯丙氨酸(2BB)拆分方法同(1BB)項(xiàng)。得白色固體4.76克(88.0％)，m.p.163～165℃，[α]20D＝+33.90°(c＝1.28，無水甲醇)。19.3 D-2-氟-苯丙氨酸鹽酸鹽(2CC)方法同(1CC)項(xiàng)。(2AA)4.73克(18.7mmol)，得(2CC)白色固體4.01克(97.7％)，m.p.215～218
℃，[α]25D＝-12.2°(c＝1.02，無水甲醇)。19.4 L-2-氟-苯丙氨酸鹽酸鹽(2DD)方法同(1DD)項(xiàng)。(2BB)4.20克(18.7mmol)，得(2D)白色細(xì)針狀晶體4.09克(99.8％)，m.p.221～223℃，[α]25D＝+14.50°(c＝1.02，無水甲醇)。19.5 D-N-乙酰-2-氟-苯丙氨酸(2EE)方法同(1EE)項(xiàng)。(2AA)1.00克(3.96mmol)，得(2EE)白色固體0.65克(73.1％)，m.p.156～159℃。[α]20D＝-37.9°(c＝1.02，無水甲醇)。19.6 D-2-氟-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(2FF)。1.00克(2CC H2O)，SOCl2/CH3OH法。得(2FF)0.88克(89.5％)m.p.176～8℃。[α]20D＝-25.54(c＝1.21，無水甲醇)。19.7 L-2-氟-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(2GG)。1.00克(2DD.H2O)，SOCl2/CH3OH法。得(2GG)0.97克(98.6％)m.p.176～7℃。[α]20D＝+29.33(c＝0.75，無水甲醇)。制備例20 D，L-N-乙酰-3-氟-苯丙氨酸乙酯的拆分20.1D-N-乙酰-3-氟-苯丙氨酸乙酯(3AA)拆分方法同(1AA)項(xiàng)。
D，L-N-乙酰-3-氟-苯丙氨酸乙酯15.28克(62.5mmol)，得(3AA)無色針晶7.24克(91.5％)，m.p.107～108℃，[α]25D＝-8.14°(c＝1.02，無水甲醇)。20.2L-N-乙酰-3-氟-苯丙氨酸(3BB)方法同(1BB)項(xiàng)。得(3BB)白色固體6.71克(95.4％)，m.p.151～154℃，[α]25D＝+31.59°(c＝0.997，無水甲醇)。20.3 D-3-氟-苯丙氨酸鹽酸鹽(3CC)方法同(1CC)項(xiàng)。(3AA)5.00克(19.8mmol)，得(3CC)白色固體4.32克(99.6％)，m.p.237～239℃(分解)，[α]25D＝-2.5°(c＝1.00，無水甲醇)。20.4 L-3-氟-苯丙氨酸鹽酸鹽(3DD)方法同(1DD)項(xiàng)。5.00克(3BB)。得(3DD)白色固體4.91克(99.3％)，m.p.＞241℃(分解)，[α]25D＝+3.7°(c＝1.02，無水甲醇)。20.5 D-N-乙酰-3-氟-苯丙氨酸(3EE)方法同(1EE)項(xiàng)。(3AA)1.00克(3.96mmol)，得白色固體0.87克(97.8％)，m.p.152～154℃。20D＝-33.6°(c＝1.19，無水甲醇)。20.6 D-3-氟-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(3FF)。1.00克(3CC)，SOCl2/CH3OH法。
得(3FF)1.05克(98.7％)m.p.151～3℃。[α]20D＝-12.52(c＝1.07，無水甲醇)。20.7 L-3-氟-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(3GG)。1.00克(3CC)，SOCl2/CH3OH法。
得(3GG)1.05克(98.7％)m.p.175.5～177.5℃。[α]20D＝+13.73(c＝0.75，無水甲醇)。制備例21D，L-N-乙酰-4-氟-苯丙氨酸乙酯的拆分21.1 D-N-乙酰-4-氟-苯丙氨酸乙酯(4AA)拆分方法同(1AA)項(xiàng)。D，L-N-乙酰-4-氟-苯丙氨酸乙酯37.43克(148mmol)，得(4AA)無色針晶16.60克(88.7％)，m.p.64～66℃，[α]25D＝-8.24°(c＝1.02，無水甲醇)。21.2 L-N-乙酰-4-氟-苯丙氨酸(4BB)方法同(1BB)項(xiàng)。得(4BB)白色固體16.71克(99.9％)，m.p.133～136℃，[α]25D＝+28.8°(c＝1.00，無水甲醇)。21.3 D-4-氟-苯丙氨酸鹽酸鹽(4CC)方法同(1CC)項(xiàng)。(4AA)5.00克(19.8mmol)，得(4CC)白色固體4.23克(97.5％)，m.p.238～240℃(分解)，[α]25D＝-5.9°(c＝1.00，無水甲醇)。21.4 L-4-氟-苯丙氨酸鹽酸鹽(4DD)方法同(1DD)項(xiàng)。(4BB)5.00克(22.2mmol)，得(4DD)白色固體4.88克(100％)，m.p.242～244℃(分解)，[α]25D＝+2.9°(c＝0.988，無水甲醇)。21.5 D-N-乙酰-4-氟-苯丙氨酸(4EE)方法同(1EE)項(xiàng)。(4AA)1.00克(3.96mmol)，得(4E)白色固體0.84克(94.4％)，m.p.139～142℃。20D＝-34.0°(c＝1.20，無水甲醇)。21.6 D-4-氟-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(4FF)。1.00克(4CC)，SOCl2/CH3OH法。
得(4FF)1.06克(100.0％)m.p.190～2℃。[α]20D＝-15.67(c＝1.04，無水甲醇)。21.7 L-4-氟-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(4GG)。1.00克(4DD)，SOCl2/CH3OH法。
得(4GG)1.06克(99.6％)m.p.185～7℃。[α]20D＝+14.76(c＝1.14，無水甲醇)。制備例22 D，L-N-乙酰-2-氯-苯丙氨酸乙酯的拆分22.1 D-N-乙酰-2-氯-苯丙氨酸乙酯(5AA)拆分方法同(1AA)項(xiàng)。D，L-N-乙酰-2-氯-苯丙氨酸乙酯10.0克(37mmol)，得(5AA)白色針晶4.7克(94.0％)，m.p.87～8℃，[α]25D＝+10.6°(c＝0.99，無水甲醇)。22.2 L-N-乙酰-2-氯-苯丙氨酸(5BB)方法同(1BB)項(xiàng)。得(5BB)白色固體4.17克(93.0％)，m.p.166～7℃，[α]25D＝-12.2°(c＝1.02，無水甲醇)。22.3 D-2-氯-苯丙氨酸鹽酸鹽(5CC)方法同(1CC)項(xiàng)(5AA)3.47克(12.87mmol)，得(5CC)白色晶體2.97克(97.7％)，m.p.233～6℃(分解)，[α]25D＝+15.9°(c＝1.02，無水甲醇)。22.4 L-2-氯-苯丙氨酸鹽酸鹽(5DD)方法同(1DD)項(xiàng)。(5BB)3.97克(16.44mmol)，得(5DD)白色晶體3.80克(99.4％)，m.p.243～7℃(分解)，[α]25D＝-17.3°(c＝1.01，無水甲醇)。22.5 D-N-乙酰-2-氯-苯丙氨酸(5EE)方法同(1zaEE)項(xiàng)。(5AA)1.00克(3.7mmol)，得(5EE)白色固體0.87克(97.1％)，m.p.165～7℃。20D＝+11.8°(c＝1.26，無水甲醇)。22.6 D-2-氯-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(5FF)。1.00克(5CC)，SOCl2/CH3OH法。
得(5FF)1.05克(99.1％)m.p.147～9℃。[α]20D＝+28.3(c＝1.15，無水甲醇)。22.7 L-2-氯-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(5GG)。1.00克(5DD)，SOCl2/CH3OH法。
得(5GG)1.06克(100.0％)m.p.144～6℃。[α]20D＝-29.64(c＝0.685，無水甲醇)。制備例23 D，L-N-乙酰-3-氯-苯丙氨酸乙酯的拆分23.1 D-N-乙酰-3-氯-苯丙氨酸乙酯(6AA)拆分方法同(1AA)項(xiàng)。D，L-N-乙酰-3-氯-苯丙氨酸乙酯16.5克(61.05mmol)，得(6AA)白色針晶6.67克(80.72％)，m.p.70～2℃，[α]25D＝-5.8°(c＝1.03，無水甲醇)。23.2 L-N-乙酰-3-氯-苯丙氨酸(6BB)方法同(1BB)項(xiàng)。得(6BB)白色固體6.30克(85.2％)，m.p.155～7℃，[α]25D＝+35.2°(c＝1.01，無水甲醇)。23.3 D-3-氯-苯丙氨酸鹽酸鹽(6CC)方法同(1C)項(xiàng)。(6AA)5.17克(19.18mmol)，得(6CC)白色固體4.29克(94.8％)，m.p.239～242℃(分解)，[α]25D＝-6.4°(c＝1.02，無水甲醇)。23.4 L-3-氯-苯丙氨酸鹽酸鹽(6DD)方法同(1DD)項(xiàng)。(6BB)5.38克(22.0mmol)，得(6DD)白色晶體5.06克(96.2％)，m.p.244～7℃(分解)，[α]25D＝+6.7°(c＝1.01，無水甲醇)。23.5 D-N-乙酰-3-氯-苯丙氨酸(6EE)方法同(1EE)項(xiàng)。(6AA)1.00克(3.7mmol)，得(6EE)白色固體0.85克(94.9％)，m.p.151～3℃。20D＝-29.4°(c＝1.02，無水甲醇)。23.6 D-3-氯-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(6FF)。1.00克(6CC)，SOCl2/CH3OH法。
得(6FF)0.80克(75.5％)m.p.122～3℃。[α]20D＝-12.27(c＝0.92，無水甲醇)。23.7 L-3-氯-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(6GG)。1.00克(6DD)，SOCl2/CH3OH法。
得(6GG)1.06克(100.0％)m.p.120～2℃。[α]20D＝+13.14(c＝0.845，無水甲醇)。制備例24 D，L-N-乙酰-4-溴-苯丙氨酸乙酯的拆分24.1 D-N-乙酰-4-溴-苯丙氨酸乙酯(7AA)拆分時(shí)采用枯草桿菌蛋白酶，其余方法同(1AA)項(xiàng)。D，L-N-乙酰-4-溴-苯丙氨酸乙酯20.0克(63.5mmol)，得(7AA)無色針晶9.41克(94.1％)，m.p.96～98℃，[α]25D＝-20.0°(c＝1.03，無水甲醇)。24.2 L-N-乙酰-4-溴-苯丙氨酸(7BB) 方法同(1BB)項(xiàng)。針狀晶體
9.17克(100.7％)，m.p.158～160℃，[α]25D＝+39.9°(c＝1.02，無水甲醇)。24.3 D-4-溴-苯丙氨酸鹽酸鹽(7CC)方法同(1CC)項(xiàng)。(7AA)5.00克(16.0mmol)，得(7CC)白色固體4.33克(96.9％)，m.p.244～6℃(分解)，[α]25D＝-4.90°(c＝1.01，無水甲醇)。24.4 L-4-溴-苯丙氨酸鹽酸鹽(7DD)方法同(1DD)項(xiàng)。(7BB)9.15克(32.0mmol)，得(7DD)白色晶體8.67克(96.6％)，m.p.244～7℃(分解)，[α]25D＝+4.75°(c＝0.998，無水甲醇)。24.5 D-N-乙酰-4-溴-苯丙氨酸(7EE) 方法同(1EE)項(xiàng)。(7AA)1.00克(3.2mmol)，得(7EE)白色固體0.87克(95.6％)，m.p.152～4℃。20D＝-37.9°(c＝1.00，無水甲醇)。24.6 D-4-溴-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(7FF)。1.00克(7CC)，SOCl2/CH3OH法。
得(7FF)1.01克(96.2％)m.p.198～200℃。[α]20D＝-16.02(c＝1.33，無水甲醇)。24.7 L-4-溴-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(7GG)。1.00克(7DD)，SOCl2/CH3OH法。
得(7GG)1.05克(99.9％)m.p.190～2℃。[α]20D＝+22.88(c＝0.75，無水甲醇)。制備例25 D，L-N-乙酰-4-氟-3-氯-苯丙氨酸乙酯的拆分25.1 D-N-乙酰-4-氟-3-氯-苯丙氨酸乙酯(8AA)拆分方法同(1AA)項(xiàng)。
D，L-N-乙酰-4-氟-苯丙氨酸乙酯17.6克(61mmol)，得(8AA)無色細(xì)針晶8.04克(91.4％)，m.p.92～94℃，[α]20D-7.16°(c＝1.145，無水甲醇)。25.2 L-N-乙酰-4-氟-3-氯-苯丙氨酸(8BB)方法同(1BB)項(xiàng)。得白色固體7.26克(91.4％)，m.p.163～165℃，[α]20D＝+33.33°(c＝0.96，無水甲醇)。25.3 D-4-氟-3-氯-苯丙氨酸鹽酸鹽(8CC)方法同(1CC)項(xiàng)。
(8AA)5.00克(17.4mmol)，得(8CC)白色固體4.18克(94.6％)，m.p.230～232℃(分解)，[α]25D＝-6.5°(c＝1.02，無水甲醇)。25.4 L-4-氟-3-氯-苯丙氨酸鹽酸鹽(8DD)方法同(1DD)項(xiàng)。
(8BB)5.00克(19.3mmol)，得(8DD)白色針晶4.76克(97.3％)，m.p.233～237℃(分解)，[α]25D＝+6.4°(c＝1.01，無水甲醇)。25.5 D-N-乙酰-4-氟-3-氯-苯丙氨酸(8EE)方法同(1EE)項(xiàng)。
(8AA)1.00克(3.48mmol)，得白色固體0.87克(96.4％)，m.p.160～163℃。[α]20D＝-32.4°(c＝1.27，無水甲醇)。25.6 D-4-氟-3-氯-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(8FF)。3.00克(8CC)，SOCl2/CH3OH法。得(8FF)2.89克(91.3％)m.p.178～182℃。20D＝-12.40(c＝1.12，無水甲醇)。25.7 L-4-氟-3-氯-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(8GG)。1.00克(8DD)，SOCl2/CH3OH法。得(8GG)1.08克(99.9％)m.p.182～3℃。20D＝+13.81(c＝1.00，無水甲醇)。制備例26 D，L-N-乙酰-2，4-二氯-苯丙氨酸乙酯的拆分26.1 D-N-乙酰-2，4-二氯-苯丙氨酸乙酯(9AA) 拆分時(shí)采用枯草桿菌蛋白酶[4]，其余方法同(1AA)項(xiàng)。D，L-N-乙酰-2，4-二氯-苯丙氨酸乙酯5.0克(16.34mmol)，得(9AA)無色針晶2.34克(93.6％)，m.p.89～91℃，[α]25D＝+7.0°(c＝1.00，無水甲醇)。26.2 L-N-乙酰-2，4-二氯-苯丙氨酸(9BB)方法同(1BB)項(xiàng)。得(9BB)針狀晶體2.28克(100.4％)，m.p.177～9℃，[α]25D＝-2.5°(c＝1.00，無水甲醇)。26.3 D-2，4-二氯-苯丙氨酸鹽酸鹽(9CC)方法同(1CC)項(xiàng)。
(9AA)1.75克(5.76mmol)，得(9CC)白色固體1.51克(97.0％)，m.p.240～1℃(分解)，[α]25D＝-9.29°(c＝1.01，無水甲醇)。26.4 L-2，4-二氯-苯丙氨酸鹽酸鹽(9DD)方法同(1DD)項(xiàng)。
(9BB)2.47克(10.0mmol)，得(9DD)白色晶體8.67克(96.6％)，m.p.244～7℃(分解)，[α]25D＝+9.00°(c＝0.995，無水甲醇)。26.5 D，L-N-乙酰-2，4-二氯-苯丙氨酸(9EE)方法同(1EE)項(xiàng)。D，L-N-乙酰-2，4-二氯-苯丙氨酸乙酯1.00克(3.29mmol)，得(9EE)白色固體0.908克(95.3％)，m.p.132～5℃。26.6 D-2，4-二氯-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(9FF)。1.00克(9CC)，SOCl2/C2H5OH法。得(9FF)1.07克(97.0％)m.p.133～4℃。20D＝-29.6(c＝1.50，無水甲醇)。26.7 L-2，4-二氯-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(9GG)。1.00克(9DD)，SOCl2/CH3OH法。得(9GG)1.03克(98.0％)m.p.175～8℃。[α]20D＝+16.86(c＝0.80，無水甲醇)。制備例27 D，L-N-乙酰-2，5-二氯-苯丙氨酸乙酯的拆分27.1 D-N-乙酰-2，5-二氯-苯丙氨酸乙酯(10AA)拆分時(shí)采用枯草桿菌蛋白酶，其余方法同(1AA)項(xiàng)。D，L-N-乙酰-2，5-二氯-苯丙氨酸乙酯18.0克(59.2mmol)，得(10AA)無色針晶8.80克(97.8％)，m.p.125～126℃，[α]25D＝-14.45°(c＝1.04，無水甲醇)。27.2 L-N-乙酰-2，5-二氯-苯丙氨酸(10BB)方法同(1BB)項(xiàng)。得(10BB)針狀晶體7.97克(97.4％)，m.p.179～181℃，[α]25D＝+14.27°(c＝1.08，無水甲醇)。27.3 D-2，5-二氯-苯丙氨酸鹽酸鹽(10CC)方法同(1CC)項(xiàng)。
(10AA)4.00克(13.16mmol)，得(10CC)白色固體3.54克(99.5％)，m.p.227～230℃(分解)，[α]25D＝-25.7°(c＝1.05，無水甲醇)。27.4 L-2，5-二氯-苯丙氨酸鹽酸鹽(10DD)方法同(1DD)項(xiàng)。
(10BB)5.00克(18.12mmol)，得(10DD)白色晶體4.82克(98.4％)，m.p.225～7℃(分解)，[α]25D＝+23.00°(c＝0.995，無水甲醇)。27.5 D-N-乙酰-2，5-二氯-苯丙氨酸(10EE)方法同(1EE)項(xiàng)。
(10AA)1.00克(3.29mmol)，得(10EE)白色固體0.86克(94.7％)，m.p.176～8℃。[α]25D＝-15.93°(c＝0.999，無水甲醇)。27.6 D-2，5-二氯-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(10FF)。1.00克(10CC)，SOCl2/C2H5OH法。得(10FF)1.10克(99.7％)m.p.157～9℃。20D＝-24.72(c＝1.06，無水甲醇)。27.7 L-2，5-二氯-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(10GG)。1.00克(10DD)，SOCl2/CH3OH法。得(10GG)1.05克(99.9％)m.p.182～3℃。20D＝+32.70(c＝0.85，無水甲醇)。制備例28 D，L-N-乙酰-3，4-二氯-苯丙氨酸甲酯的拆分28.1 D-N-乙酰-3，4-二氯-苯丙氨酸甲乙酯(11AA)拆分方法同(1AA)項(xiàng)。D，L-N-乙酰-3，4-二氯-苯丙氨酸乙酯7.7克(26.6mmol)，得(11AA)白色固體3.46克(89.9％)，m.p.122～4℃，[α]25D＝-23.8°(c＝1.16，無水甲醇)。28.2 L-N-乙酰-3，4-二氯-苯丙氨酸(11BB)方法同(1BB)項(xiàng)。得(11BB)白色固體3.44克(93.9％)，m.p.149～151℃，[α]25D＝+43.2°(c＝1.01，無水甲醇)。制備例29 D，L-N-乙酰-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸乙酯的拆分29.1 D-N-乙酰-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸乙酯(13AA)拆分方法同(1AA)項(xiàng)。D，L-N-乙酰-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸乙酯19.0克(67.02mmol)，得(13AA)無色針晶9.22克(92.0％)，m.p.130～2℃，[α]25D＝+9.40°(c＝1.165，無水甲醇)。29.2 L-N-乙酰-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸(13BB)方法同(1BB)項(xiàng)。得(13BB)針狀晶體7.74克(90.0％)，m.p.174～6℃，[α]25D＝-11.86°(c＝1.265，無水甲醇)。29.3 D-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸鹽酸鹽(13CC)方法同(1CC)項(xiàng)。
(13AA)2.0克(7.05mmol)，得(13CC)白色固體1.68克(95.2％)，m.p.224～7℃(分解)，[α]25D＝-5.18°(c＝1.10，無水甲醇)。29.4 L-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸鹽酸鹽(13DD)方法同(1DD)項(xiàng)。
(13BB)2.00克(7.05mmol)，得(13DD)白色晶體1.67克(95.0％)，m.p.222～5℃(分解)，[α]25D＝+6.03°(c＝1.09，無水甲醇)。29.5 D-N-乙酰-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸(13EE)方法同(1EE)項(xiàng)。
(13AA)1.00克(3.53mmol)，得(13EE)白色固體0.88克(97.6％)，m.p.1 73～5℃。[α]25D＝+10.35°(c＝0.85，無水甲醇)。29.6 D-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽(13FF)。1.00克(13CC)，SOCl2/C2H5OH法。得(13FF)1.08克(97.1％)m.p.188～190℃。20D＝-33.89(c＝0.95，無水甲醇)。29.7 L-2-甲基，3-氯-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(13GG)。260毫克(13DD)，SOCl2/CH3OH法。得(13GG)260毫克(95.0％)m.p.174～6℃。20D＝+31.75(c＝0.63，無水甲醇)。制備例30 D，L-N-乙酰-4-羧基-苯丙氨酸二乙酯的拆分30.1 D-N-乙酰-4-羧基-苯丙氨酸二乙酯(15AA)采用枯草桿菌蛋白酶，其余方法同(1AA)，D，L-N-乙酰-4-羧基-苯丙氨酸二乙酯21.1克(68.7mmol)，得(15AA)無色細(xì)小針晶10.3克(97.6％)，m.p.97～98℃，[α]25D＝+7.9°(c＝1.00，無水甲醇)30.2 L-N-乙酰-4-羧基乙酯-苯丙氨酸(15BB)方法同(1BB)項(xiàng)。針狀晶體8.9克(92.8％)，m.p.174～175℃，[α]25D＝-6.37°(c＝1.02，無水甲醇)。30.3 D-4-羧基-苯丙氨酸鹽酸鹽(15CC)方法同(1CC)項(xiàng)。(15AA)4.07克(13mmol)，得(15CC)白色固體3.28克(100％)，m.p.＞280(分解)，[α]20D＝-33.96°(c＝1.96，二甲亞砜)。30.4 L-4-羧基-苯丙氨酸鹽酸鹽(15DD)。方法同(1DD)項(xiàng)。(15BB)4.43克(16mmol)，得白色固體3.87克(99.3％)，m.p.＞280(分解)，[α]20D＝29.72°(c＝1.24，二甲亞砜)。30.5 D-4-羧基-苯丙氨酸二乙酯鹽酸鹽(15EE)。1.00克(15CC)，SOCl2/C2H5OH法。得(15EE)1.17克(95.3％)m.p.138～140℃。20D＝-15.02(c＝1.21，無水甲醇)。30.6 L-4-羧基-苯丙氨酸二甲酯鹽酸鹽(15FF)。1.00克(15DD)，SOCl2/CH3OH法。得(15FF)1.03克(92.4％)m.p.178～180℃。[α]20D＝+17.09(c＝1.11，無水甲醇)。制備例31 D，L-N-乙酰-3-羧基-苯丙氨酸二乙酯的拆分31.1 D-N-乙酰-3-羧基-苯丙氨酸二乙酯(16AA)拆分方法同(1AA)項(xiàng)。
按(1.16.3)項(xiàng)的合成產(chǎn)物55克(0.18mmol)，得(16AA)為油狀物。31.2 L-N-乙酰-3-羧基乙酯-苯丙氨酸(16BB)方法同(1BB)項(xiàng)。針狀晶體23.0克(92.0％)，m.p.148～9℃，[α]25D＝+39.37°(c＝1.625，無水甲醇)。IR 3321(NH)，2989(CH)，1707(C＝O，COOEt)，1615(C＝O，NHCOCH3)，1566(CH，苯環(huán))，760，704(苯環(huán)3-羧基乙酯取代)。31.3 D-3-羧基-苯丙氨酸鹽酸鹽(16CC)方法同(1C)項(xiàng)。(16AA)的最終產(chǎn)物，得(16CC)白色固體21.5克(97.8％)，m.p.265～270(分解)，[α]20D＝-26.65°(c＝1.314，二甲亞砜)。31.4 L-3-羧基-苯丙氨酸鹽酸鹽(16DD)。方法同(1DD)項(xiàng)。(16BB)1.00克(3.58mmol)，得白色固體0.84克(95.5％)，m.p.270～2(分解)，[α]20D＝+28.03°(c＝1.106，二甲亞砜)。31.5 D-3-羧基-苯丙氨酸二乙酯鹽酸鹽(16EE)。1.00克(16CC)，SOCl2/C2H5OH法。得(16EE)1.18克(95.8％)m.p.192～194℃。20D＝-13.02(c＝1.26，無水甲醇)。31.6 L-3-羧基-苯丙氨酸二甲酯鹽酸鹽(16FF)。1.00克(16DD)，SOCl2/CH3OH法。得(16FF)1.08克(92.4％)m.p.163～5℃。20D＝+18.85(c＝0.96，無水甲醇)。制備例32 1-氨基-2-羰基-(3，4)苯并-6-羧基乙酯的拆分32.1 D-1-氨基-2-羰基-(3，4)苯并-6-羧基乙酯(17AA)拆分方法同(1AA)項(xiàng)。D，L-1-氨基-2-羰基-(3，4)苯并-6-羧基乙酯10.0克。
得(17AA)4.55克(91％)。m.p.86～88℃，[α]20D＝+7.8(c＝1.16，無水甲醇)。32.2 L-1-氨基-2-羰基-(3，4)苯并-6-羧酸(17BB)方法同(1BB)項(xiàng)。
得(17BB)4.15克(95.2％)。m.p.151～3℃，[α]20D＝-5.5(c＝1.22，無水甲醇)。
實(shí)施例1N-Ac-DPhe(2-F)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH的制備1.1 Fmoc-L-Trp-OH導(dǎo)入Wang樹脂Wang樹脂(ACT公司，0.5mmol/克，100～200目)0.5克(0.25mmol)，放入肽反應(yīng)器中，按以下過程洗滌5毫升DMF，5分鐘/次，二次；5毫升DCM，5分鐘/次，一次；5毫升MeOH，5分鐘/次，二次；5毫升DCM，5分鐘/次，三次。然后加入Fmoc-Trp 300毫克(0.7mmol)，3毫升DMF，2毫升DCM，加入HOBt 115毫克(0.83mmol)，DCC 170毫克(0.83mmol)，DMAP 10毫克，攪拌24小時(shí)。抽干，依次用DCM、MeOH、DMF洗滌，減壓干燥。1.2 苦味酸法測(cè)定樹脂上氨基負(fù)載量取兩份Fmoc-Trp-Wang樹脂各10毫克左右，分別放入一小的砂心漏斗中，依次經(jīng)過下列處理a.25％哌啶/DMF 2毫升，15分鐘/次，二次；b.洗滌DMF 4毫升，二次，DCM 4毫升二次；0.1M苦味酸/DCM 3毫升，5分鐘/次，二次；洗滌DMF 4毫升，二次，DCM 4毫升二次；5％二異丙基乙胺/DCM 4毫升，5分鐘/次，二次；DCM 2毫升，四次。收集e，f兩項(xiàng)的溶液，用95％的乙醇稀釋至100毫升，在358nm測(cè)定紫外吸收，按下式計(jì)算每克樹脂氨基負(fù)載量(e＝14500M-1cm-1) 兩份的結(jié)果分別為0.474mmol/g和0.452mmol/g，平均負(fù)載率為92.6％。1.3 循環(huán)接肽反應(yīng)合成中所用溶劑都按照多肽合成用標(biāo)準(zhǔn)處理。合成每一個(gè)肽時(shí)，F(xiàn)moc-Trp-Wang樹脂的量為200毫克(約0.0925mmol)，縮合時(shí)取3倍摩爾量的氨基酸，依次按照反應(yīng)路線1所示，按序操作取Ile，Ile，Asp，Leu，D-Trp，D-Trp的相應(yīng)Fmoc保護(hù)氨基酸及N-Ac-D-Phe(2-F)-OH。對(duì)每一個(gè)氨基酸的縮合按照下列程序25％哌啶/DMF 5毫升，15分鐘/次，二次；洗滌DMF 5毫升/次，二次，DCM 5毫升/次，二次；加入Fmoe-氨基酸，HOBt，DCC，10毫升DMF/DCM(4∶1)；洗滌DMF 5毫升/次，二次，MeOH/DCM(1∶1)5毫升/次，二次，DCM 5毫升/次，二次(茚三酮法實(shí)驗(yàn)陽性時(shí)，返回c)。之后，肽樹脂真空干燥。1.4 裂解裂解液組成TFA∶EDT∶苯酚∶水 7.5∶1.5∶0.5∶0.5(V/V/W/V)[11]。
裂解基本過程為300毫克的肽樹脂，置于一圓底燒瓶中，冰浴下冷卻，加入新配制預(yù)先冷卻的裂解液3毫升，自然升溫，室溫?cái)嚢?0分鐘。砂心漏斗抽濾，樹脂用1毫升潔凈的TFA和5毫升DCM洗三次，濾液40℃以下迅速減壓濃縮，濃縮液劇烈攪拌下加入1毫升乙酸乙酯和10毫升石油醚，得到白色固體，濾集干燥。得標(biāo)題化合物。1.5 分析部分高效液相條件泵Waters 600E型色譜柱Kromasil-C18填料5μm，4.6×250mm流動(dòng)相A0.1％三氟醋酸/水B70％乙腈/0.1三氟醋 酸-水紫外檢測(cè)器Spectra-Physics UV1000，波長(zhǎng)280nm
權(quán)利要求
1.式I八肽衍生物或其立體異構(gòu)體RCO-A-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHI其中R為六亞甲基亞胺或RCO為N-乙酰基，或RCOA為下式基團(tuán)代表的O-CPh， A為Phe，其中的Phe中苯基可在2、3、4或5位被選自鹵素，硝基，COOC1-4烷基酯或C1-4烷基單取代或二取代，或其它非天然脂肪族氨基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基異丁酸。
2.權(quán)利要求1的八肽衍生物或其立體異構(gòu)體。其選自下面八肽化合物1 N-Ac-L-Phe(2-F)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH2 N-Ac-L-Phe(3-F)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-IIe-Ile-Trp-OH3 N-Ac-L-Phe(4-F)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH4 N-Ac-L-Phe(2-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH5 N-Ac-L-Phe(3-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH6 N-Ac-L-Phe(4-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH7 N-Ac-L-Phe(4-Br)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH8 N-Ac-L-Phe(3-NO2)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH9 L-o-CPh-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH10 N-Ac-L-Phe(3-COOEt)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH11 N-Ac-L-Phe(4-COOEt)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH12 N-Ac-L-Phe(4-F-3-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH13 N-Ac-L-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH14 N-Ac-L-Phe(2，5-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH15 N-Ac-L-Phe(3，4-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH16 N-Ac-L-Trp-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH17 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH18 HIM-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH19 HIM-CO-NH-C(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH。
3.權(quán)利要求1或2的八肽衍生物或其立體異構(gòu)體，其選自下面八肽化合物N-Ac-L-Phe(2-F)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHN-Ac-L-Phe(3-F)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHN-Ac-L-Phe(4-F)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHN-Ac-L-Phe(2-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHN-Ac-L-Phe(4-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHN-Ac-L-Phe(4-Br)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHN-Ac-L-Phe(3-COOEt)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHN-Ac-L-Phe(4-COOEt)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHN-Ac-L-Phe(2，5-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHHIM-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHHIM-CO-NH-C(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH。
4.藥物組合物，其包括至少一種式I八肽衍生物其立體異構(gòu)體RCO-A-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHI其中R為六亞甲基亞胺或RCO為N-乙?；騌COA為下式基團(tuán)代表的O-CPh， A為Phe，其中的Phe中苯基可在2、3、4或5位被選自鹵素，硝基，COOC1-4烷基酯或C1-4烷基單取代或二取代，或其它非天然脂肪族氨基酸，如β-Ala，γ-氨基丁酸，或氨基異丁酸，及藥用載體或賦形劑。
5.權(quán)利要求4的藥物組合物，其中式I八肽衍生物或其立體異構(gòu)體選自1 N-Ac-L-Phe(2-F)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH2 N-Ac-L-Phe(3-F)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH3 N-Ac-L-Phe(4-F)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH4 N-Ac-L-Phe(2-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH5 N-Ac-L-Phe(3-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH6 N-Ac-L-Phe(4-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH7 N-Ac-L-Phe(4-Br)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH8 N-Ac-L-Phe(3-NO2)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH9 L-o-CPh-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH10N-Ac-L-Phe(3-COOEt)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH11N-Ac-L-Phe(4-COOEt)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH12N-Ac-L-Phe(4-F-3-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH13N-Ac-L-Phe(2-CH3-3-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-IIe-IIe-Trp-OH14N-Ac-L-Phe(2，5-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH15N-Ac-L-Phe(3，4-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH16N-Ac-L-Trp-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH17 HIM-CO-Leu-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH18 HIM-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH19 HIM-CO-NH-C(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH。
6.權(quán)利要求4或5的藥物組合物，其中式I八肽衍生物或其立體異構(gòu)體選自N-Ac-L-Phe(2-F)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHN-Ac-L-Phe(3-F)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHN-Ac-L-Phe(4-F)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHN-Ac-L-Phe(2-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHN-Ac-L-Phe(4-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHN-Ac-L-Phe(4-Br)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHN-Ac-L-Phe(3-COOEt)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHN-Ac-L-Phe(4-COOEt)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHN-Ac-L-Phe(2，5-Cl)-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHHIM-CO-NH-CH2-CH2-CO-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHHIM-CO-NH-C(CH3)2-CO-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH。
7.式I八肽衍生物或其立體異構(gòu)體衍生物的制備方法，其包括1)將Wang樹脂與Fmoc-Trp-OH在DMF，DCM，DCC-HOBt及DMAP中反應(yīng)，生成Fmoc-Trp-Wang樹脂，2)將1)中所得產(chǎn)物在哌啶，DMF，DCM中處理，生成Trp-Wang樹脂，3)將2)中產(chǎn)物Trp-Wang樹脂與Fmoc-Ile在DMF，DCM，DCC-HOBt中反應(yīng)，生成Fmoc-Ile-Wang樹脂，所得產(chǎn)物如2)中所述處理，生成式Ile-Trp-Wang樹脂，4)將Fmoc-Ile，F(xiàn)moc-Asp，F(xiàn)moc-Leu，F(xiàn)moc-D-Trp，F(xiàn)moc-D-Trp按順序與上一步所得產(chǎn)物先按3)所述進(jìn)行反應(yīng)，然后按2)中所述處理，得到D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-Wang樹脂，5)將4)中產(chǎn)物與RCO-A-OH按3)所述進(jìn)行反應(yīng)，然后在TFA，EDT，苯酚及水中處理，生成RCO-A-D-Trp-D-Trp-Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OH。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有內(nèi)皮素拮抗活性的八肽衍生物,其特備方法,含它們的藥物組合物及它們?cè)陬A(yù)防或治療與內(nèi)皮素有關(guān)疾病的用途。
文檔編號(hào)A61P43/00GK1330077SQ00118668
公開日2002年1月9日 申請(qǐng)日期2000年6月21日 優(yōu)先權(quán)日2000年6月21日
發(fā)明者劉克良, 于文勝, 梁遠(yuǎn)軍, 汪海, 趙玉芬, 丁振闿 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所