金針菇多糖、提取純化方法及其作為煙草保潤劑的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種金針菇多糖及其提取純化方法，具體為：將粉碎過的干燥金針菇用乙醚索氏提取后，殘渣揮干再用沸水進(jìn)行提取，沸水提取液濃縮、離心，取上清液醇沉靜置，再次離心收集沉淀物，洗滌后用蒸餾水溶解，再加入1－2‰的木瓜蛋白酶于50±5℃水浴中放置2－4h，采用Sevage法脫除蛋白，活性炭脫色后減壓濃縮，冷卻后進(jìn)行流水透析，透析結(jié)束后再次醇沉靜置，沉淀于60－70℃干燥得粗多糖。試驗(yàn)證明：本發(fā)明金針菇多糖對卷煙具有很好的物理和感官保潤作用，并且可以降低卷煙的刺激性和雜氣，提高卷煙煙氣的圓潤感和舒適性，可作為一種性能優(yōu)良的煙草保潤劑在卷煙中應(yīng)用。
【專利說明】金針菇多糖、提取純化方法及其作為煙草保潤劑的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于保潤劑【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種金針菇多糖、提取純化方法及其作為 煙草保潤劑的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 當(dāng)前，我國卷煙工業(yè)中主要采用甘油、丙二醇、山梨醇等多羥基物質(zhì)作為保潤劑， 使用此類保潤劑的主要目的在于維持加工過程中煙絲的含水率，提高煙絲的耐加工性，但 上述保潤劑對成品卷煙含水率的維持和吸食舒適度的改善效果并不理想。
[0003] 多糖是由大量單糖聚合而成，其大量的羥基與水分子形成氫鍵，可以使其具有較 強(qiáng)的持水能力。目前，國內(nèi)外尚未有將金針菇多糖作為煙草保潤劑在卷煙中應(yīng)用的相關(guān)報 道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明目的在于提供一種金針菇多糖、提取純化方法及其作為煙草保潤劑的應(yīng) 用。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案： 一種金針菇多糖的提取純化方法，包括下述步驟：將粉碎過的干燥金針菇用乙醚索氏 提取(一般按料液比lg :5 - 8ml添加乙醚）后，殘渣揮干再用沸水進(jìn)行提取，沸水提取液濃 縮、離心，取上清液醇沉靜置，再次離心收集沉淀物，沉淀物洗滌后用蒸餾水溶解，再加入沉 淀物重量1 一 2%。的木瓜蛋白酶于50±5°C水浴中放置2 - 4h，采用Sevage法脫除蛋白，活 性炭脫色后減壓濃縮，冷卻后進(jìn)行流水透析用以除去小分子雜質(zhì)，透析結(jié)束后再次醇沉靜 置，沉淀于60 - 70°C干燥得淡黃色粗多糖。
[0006] 進(jìn)一步優(yōu)選，將粗多糖層析分離純化兩次，獲得精制多糖；兩次分離純化所用洗脫 液分別為 0. 5 mol/L NaCl 溶液和 0. 05 mol/L NH4HC03 溶液。
[0007] 利用上述提取純化方法制備所得的金針菇多糖。
[0008] 利用上述提取純化方法制備所得金針菇多糖作為煙草保潤劑的應(yīng)用。
[0009] 本發(fā)明通過提取純化獲得了高純度的精制金針菇多糖，并將其進(jìn)行物理保潤性能 測試和內(nèi)在感官質(zhì)量評價，發(fā)現(xiàn)其對卷煙具有很好的物理和感官保潤作用，并且可以降低 卷煙的刺激性和雜氣，提高卷煙煙氣的圓潤感和舒適性，可以作為一種性能優(yōu)良的煙草保 潤劑在卷煙中應(yīng)用，并確定了其在卷煙中的適宜用量。
[0010] 和現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果：1)在金針菇多糖的提取過程中，利用醇沉、 蛋白酶水解、Sevage除蛋白和透析除小分子相結(jié)合的方法，有效地降低了金針菇多糖中的 雜質(zhì)，為進(jìn)一步的分離純化奠定基礎(chǔ)。2)采用凝膠色譜柱層析分離純化兩次，獲得高純度的 精制金針菇多糖。整個提取純化過程操作簡便，使用的原料和試劑價廉易得。3)經(jīng)試驗(yàn)證 明，本發(fā)明金針菇多糖對煙草制品的保潤效果明顯，因此具有顯著的工業(yè)應(yīng)用價值和廣闊 的推廣應(yīng)用前景。

【具體實(shí)施方式】
[0011] 以下通過實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于此。
[0012] 試驗(yàn)所用的主要試劑和儀器： 乙醚、乙醇、丙酮（中國宿州化學(xué)試劑有限公司，分析純)，DEAE-Celluose和Sephadex G200凝膠(美國sigma公司），實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水。
[0013] BS200SWE1型電子天平(感量：0. OOOlg，北京賽多麗絲天平有限公司）；R_215型旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士 BUCHI公司）；V-700真空泵(瑞士 BUCHI公司）;DLSB-20/60°C低溫冷卻循環(huán) 泵(上海美強(qiáng)儀器設(shè)備有限公司）;KDM型調(diào)溫電熱套（山東華魯電熱儀器有限公司）;85-2型 恒溫磁力攪拌器(上海司樂儀器廠)、ZK-82B型電熱真空干燥箱(上海申光儀器儀表有限公 司），CHRIST凍干機(jī)(瑞士BUCHI公司），TSKGEL G2000 PW高效凝膠色譜柱(美國Sigma公司）， Agilent LC1100型高效液相儀及示差折光檢測儀(美國Agilent公司）。
[0014] 實(shí)施例1 一種金針菇多糖的提取純化方法，包括下述步驟：將粉碎過的300g干燥金針菇用 1800ml乙醚索氏提取2h用以除去油脂，殘渣揮干。揮干后的殘渣再用750ml沸水提取3次， 合并3次所得的沸水提取液，濃縮、離心，取上清液，加上清液3倍體積量的無水乙醇進(jìn)行醇 沉，靜置過夜（12h)，再次離心收集沉淀物。沉淀物依次用300ml乙醇、300ml丙酮洗滌3次 后用蒸餾水溶解，再加入沉淀物重量1%。的木瓜蛋白酶于50°C水浴中放置2h，采用Sevage 法脫除蛋白。加入8g活性炭置于70°C水浴中加熱3h，過濾除去活性炭，減壓濃縮，自然冷 卻后裝入透析袋中流水透析48h用以除去小分子雜質(zhì)，透析結(jié)束后，再次加入透析后多糖 溶液體積3倍量的無水乙醇進(jìn)行醇沉，靜置過夜（12h)，沉淀于70°C干燥得3. 3g粗多糖，收 率為1. 1%。
[0015] 取1. 5g粗多糖用蒸懼水溶解后，用DEAE-Celluose凝膠色譜柱層析分離 (5.0X50cm),以0. 5mol/L NaCl溶液為流動相（即洗脫液)，流速為2. 5ml/min，采用硫酸苯 酚法對層析液顯色，收集主要色譜峰，凍干。然后將凍干所得固體用0. 05mol/L NH4HC03溶液 溶解，用S印hadex G200凝膠色譜柱再次層析分離（5. OX50cm)，以0. 05mol/L NH4HC03溶液 為流動相（即洗脫液)，流速為2. 0ml/min，采用硫酸苯酚法對層析液顯色，收集主要色譜峰， 凍干，即得372mg精制金針菇多糖固體，收率24. 8%，經(jīng)檢測LT1糖含量為95%。
[0016] 實(shí)施例2 一種金針菇多糖的提取純化方法，包括下述步驟：將粉碎過的300g干燥金針菇用 2000ml乙醚索氏提取4h用以除去油脂，殘渣揮干。揮干后的殘渣再用750ml沸水提取3次， 合并3次所得的沸水提取液，濃縮、離心，取上清液，加上清液3倍體積量的無水乙醇進(jìn)行醇 沉，靜置12h，再次離心收集沉淀物。沉淀物依次用300ml乙醇、300ml丙酮洗滌3次后用蒸 餾水溶解，再加入沉淀物重量2%。的木瓜蛋白酶于50°C水浴中放置4h，采用Sevage法脫除 蛋白。加入8g活性炭置于70°C水浴中加熱4h，過濾除去活性炭，減壓濃縮，自然冷卻后裝入 透析袋中流水透析48h用以除去小分子雜質(zhì)，透析結(jié)束后，再次加入透析后多糖溶液體積3 倍量的無水乙醇(透析后溶液體積的3倍)進(jìn)行醇沉，靜置過夜，沉淀于70°C干燥得3. lg粗 多糖，收率為1.03%。
[0017] 取1. 5g粗多糖用蒸懼水溶解后，用DEAE-Cel luose凝膠色譜柱層析分離 (5. OX 50cm)，以0. 5mol/L NaCl溶液為流動相（即洗脫液)，流速為2. 5ml/min，采用硫酸苯 酚法對層析液顯色，收集主要色譜峰，凍干。然后將凍干所得固體用0. 05mol/L NH4HC03溶液 溶解，用S印hadex G200凝膠色譜柱再次層析分離（5. OX50cm)，以0. 05mol/L NH4HC03溶液 為流動相（即洗脫液)，流速為2. Oml/min，采用硫酸苯酚法對層析液顯色，收集主要色譜峰， 凍干，即得367mg精制金針菇多糖固體，收率24. 5%，經(jīng)檢測LT1糖含量為94. 2%。
[0018] 應(yīng)用試驗(yàn)：實(shí)施例1制備所得精制金針菇多糖作為煙草保潤劑的應(yīng)用研究 1、物理保潤性能測試 為考察金針菇多糖對卷煙的物理保潤性能，以黃金葉(大金圓）空白卷煙煙絲為載體， 將金針菇多糖同甘油、丙二醇和山梨醇一起分別進(jìn)行物理保潤性能對比測試研究，分別配 制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的上述化合物水溶液。先將lOOOg混勻的空白卷煙煙絲置于溫度22 ± 1 °C、 相對濕度60±2%環(huán)境中平衡48h。然后等量稱取五份煙絲，每份100g，分別向煙絲中均勻 施加 4g上述化合物水溶液，對照空白樣為煙絲均勻施加 4g水。然后將五份煙絲分別置于 22土 1 °C、相對濕度40土2%的環(huán)境下考察其解濕過程，并對即時含水率的變化進(jìn)行分析，考 察其物理保潤效果（即添加不同樣品后煙絲72h內(nèi)的干基含水率變化)，結(jié)果見表1。
[0019] 表1金針菇多糖、甘油、丙二醇和山梨醇的物理保潤效果對比

【權(quán)利要求】
1. 一種金針菇多糖的提取純化方法，其特征在于，包括下述步驟：將粉碎過的干燥金 針菇用乙醚索氏提取后，殘渣揮干再用沸水進(jìn)行提取，沸水提取液濃縮、離心，取上清液醇 沉靜置，再次離心收集沉淀物，沉淀物洗滌后用蒸餾水溶解，再加入1 一 2%。的木瓜蛋白酶 于50±5°C水浴中放置2 - 4h，采用Sevage法脫除蛋白，活性炭脫色后減壓濃縮，冷卻后進(jìn) 行流水透析，透析結(jié)束后再次醇沉靜置，沉淀于60 - 70°C干燥得粗多糖。
2.如權(quán)利要求1所述的金針菇多糖的提取純化方法，其特征在于，將粗多糖層析分離 純化兩次，獲得精制多糖；兩次分離純化所用洗脫液分別為0. 5 mol/L NaCl溶液和0. 05 mol/L NH4HC03 溶液。
3.利用權(quán)利要求1或2所述提取純化方法制備所得的金針菇多糖。
4.權(quán)利要求3所述金針菇多糖作為煙草保潤劑的應(yīng)用。
【文檔編號】A24B15/30GK104045731SQ201410292812
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2014年6月26日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月26日
【發(fā)明者】陳芝飛, 劉強(qiáng), 蘆昶彤, 趙永振, 周浩, 郝輝, 孫志濤 申請人:河南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司