一種用于煙絲處理的煙用微生物添加劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種煙用微生物添加劑及其在煙絲處理中的應(yīng)用。由生產(chǎn)菌株短梗霉菌OF-01（CGMCC?No.7609）菌株液體發(fā)酵培養(yǎng)后得到相應(yīng)的煙用添加劑，該添加劑用于煙絲處理。本發(fā)明的煙用添加劑能明顯提高煙絲的香氣量、愉悅性等品質(zhì)，雜氣、刺激性等下降，煙氣濃度和勁頭減少，余味變得舒適，提高煙絲在卷煙中的摻配量，達(dá)到減害降焦、降低卷煙生產(chǎn)成本，可控性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單，便于實(shí)現(xiàn)大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)，具有良好的開發(fā)應(yīng)用前景。
【專利說明】—種用于煙絲處理的煙用微生物添加劑
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于煙用添加劑的【技術(shù)領(lǐng)域】，更具體地說，本發(fā)明涉及一種煙用微生物添加劑，該煙用微生物添加劑的制備方法和在煙絲處理煙草工業(yè)中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]低焦化是煙草行業(yè)發(fā)展的必然趨勢(shì)，低焦化帶來的卷煙抽吸口感降低，香氣不足逐漸成為煙草發(fā)展的凸顯問題。如何攻克影響煙葉香氣質(zhì)、香氣量的關(guān)鍵技術(shù)，是提高卷煙生產(chǎn)競(jìng)爭(zhēng)力的核心所在。
[0003]同煙葉一樣，煙絲其主要成分為大分子碳水化合物，如纖維素，半纖維素，果膠等。這類大分子物質(zhì)對(duì)煙草抽吸口感，內(nèi)在品質(zhì)有不利的影響。如何降低這些大分子的含量，可以從很大程度上改善煙絲的質(zhì)量。
[0004]很多微生物在生長(zhǎng)繁殖中，均可直接以纖維素，果膠等作為能量來源，并將其降解為小分子物質(zhì)。如果篩選可產(chǎn)生具有芳香氣息小分子化合物的微生物來作用于煙絲，則可從一定程度上減少煙絲中的大分子碳水化合物，增加有益小分子化合物的生成。從而改善卷煙品質(zhì)。
[0005]現(xiàn)有技術(shù)中未見有用微生物菌株出芽短梗霉0F-01菌株(CGMCC N0.7609)制備的煙用微生物添加劑及其在煙絲處理中的應(yīng)用等的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于針對(duì)煙絲的本質(zhì)問題，提供一種新的煙用微生物添加劑。
[0007]本發(fā)明的另一目的 是提供所述煙用微生物添加劑的制備方法。
[0008]本發(fā)明進(jìn)一步的目的是提供所述煙用微生物添加劑在煙絲處理中的應(yīng)用。
[0009]本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn):
[0010]一種煙用微生物添加劑，由下述方法制得:取從烤煙葉面上分離得到的出芽短梗霉菌0F-01液體菌種，按照0.1%的接種量接種于200ml的麥芽提取物7g，酵母提取物0.5g，蛋白胨2.5g，瓊脂20g，水lL，pH自然的MYP培養(yǎng)基中，在26-32°C下培養(yǎng)4-10天獲得的斜面種子，用無菌水洗漆沉淀，離心，最后用20mL無菌水振蕩均勻,使用時(shí)稀釋10倍。
[0011]所述的煙用微生物添加劑的制備方法，該方法采用下述步驟:
[0012](I)烤煙葉面上分離得到出芽短梗霉菌0F-01的液體菌種；
[0013](2)取液體菌種，按照0.1%的接種量接種于200ml的麥芽提取物7g，酵母提取物
0.5g，蛋白胨2.5g，瓊脂20g，水1L，pH自然的MYP液體培養(yǎng)基中；
[0014](3)在26-32°C下培養(yǎng)4_10天獲得的斜面種子；
[0015](4)用無菌水洗漆沉淀,離心,最后用20mL無菌水振蕩均勻，使用時(shí)稀釋10倍。
[0016]所述的煙用微生物添加劑在煙絲處理中的應(yīng)用。
[0017]所述的煙用微生物添加劑在煙絲處理中的應(yīng)用包括下述步驟:
[0018]( I)稱取含水率在11%_13%的煙絲IOOg ；[0019](2)取菌劑20ml，用小型噴霧器將其均勻地噴灑到IOOg煙絲上，密封，以防止水分蒸發(fā)；
[0020](3)直接噴灑等量的無菌水在煙絲上作為對(duì)照；
[0021](4)將樣品封入密封袋，以防止水分蒸發(fā)，30°C恒溫6h ；
[0022](5)將煙絲置于120°C烘箱中烘干，使含水率達(dá)到11%_13% ；
[0023](6)將煙絲于22°C相對(duì)濕度為60%的恒溫恒濕箱平衡48h ；
[0024](7)取出部分煙絲，檢測(cè)主要化學(xué)成分含量和致香物質(zhì)；
[0025](8)將剩余的煙絲手工卷制成煙支，樣品和對(duì)照隨機(jī)編號(hào)，由評(píng)吸專家組成的評(píng)吸小組進(jìn)行感官評(píng)吸。
[0026]本 申請(qǐng)人:從倉儲(chǔ)陳化3年的紅花大金元烤煙品種煙葉微生物中篩選得到具有產(chǎn)香特性的良好殺根結(jié)線蟲功能的出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)0F_01菌株,在特定條件下，0F-01菌株能產(chǎn)生胞外多聚糖、酶、抗菌素、單細(xì)胞蛋白、揮發(fā)性香氣成分等多種產(chǎn)物。在煙草的應(yīng)用中具有廣泛的前景。
[0027]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下突出的優(yōu)點(diǎn):
[0028](I)本發(fā)明提供的煙用微生物添加劑能明顯提高煙絲的香氣量、愉悅性等品質(zhì)，雜氣、刺激性等下降，煙氣濃度和勁頭減少，余味變得舒適。
[0029](2)本發(fā)明成本低、可控性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)單，便于實(shí)現(xiàn)大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)，具有良好的開發(fā)應(yīng)用前景。`【具體實(shí)施方式】
[0030]為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下通過實(shí)施例及試驗(yàn)數(shù)據(jù)，對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體實(shí)施例僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0031]實(shí)施例1
[0032]本發(fā)明的微生物短梗霉菌0F-01的菌株來源:
[0033]將倉儲(chǔ)陳化3年的紅花大金元煙葉樣品粉碎，取5克粉碎后的煙末放入裝有IOOml無菌水的三角瓶中，在100-250rpm搖床上震蕩30分鐘后過濾去除煙末，用懸液涂布MYP培養(yǎng)基(麥芽提取物7g，酵母提取物0.5g，蛋白胨2.5g，瓊脂20g，水1L，pH7.0)平板，200微升/皿，共50皿，在28°C溫箱中培養(yǎng)5-7天后用MYP培養(yǎng)基純化出單一的微生物，從純化的煙葉表面微生物中篩選得到具有產(chǎn)香特性的0F-01菌株，經(jīng)鑒定該為出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)。
[0034]出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)是一種類酵母真菌，具有酵母型和真菌型兩種菌絲體形態(tài)，據(jù)其生理特征和孢子產(chǎn)生的特征將其歸屬于半知菌門、叢梗孢目、短梗霉菌屬。0F-01菌株在Yro培養(yǎng)基上，25 °C下7天，菌落初期為典型的酵母狀:粘稠、污白色，顯微鏡下菌體為單細(xì)胞個(gè)體、橢圓形；菌落后期為典型的真菌狀:轉(zhuǎn)暗為黑色，邊緣呈根狀，顯微鏡下菌體呈絲狀體。利用引物5’-TCCTCCGCTTAITGATATGC-3’和5’ -GGAAGTAAAAGTCG TAACAAG-3’經(jīng)PCR擴(kuò)增，獲得0F-01菌株獲得的ITS區(qū)基因序列，提交到GeneBank公共數(shù)據(jù)庫,其序列號(hào)為JQ916049，此序列是鑒定該菌株的主要特征依據(jù)。鑒于該菌株由于(自發(fā)的、物理的或化學(xué)的)突變、原生質(zhì)體融合，轉(zhuǎn)化或其他通過生物技術(shù)會(huì)發(fā)生變化或被改造，因此，本菌株的任何突變株、變種和衍生物均應(yīng)視為本專利申請(qǐng)所能預(yù)見和能得到的技術(shù)方案。
[0035]保藏生物材料的說明
[0036]本發(fā)明涉及的短梗霉菌0F-01的菌株已經(jīng)保存在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心；地址:中國(guó).北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)；保藏日期:2013年5月13日；保藏號(hào)為CGMCC N0.7609 ;分類命名:出芽短梗霉Aureobasidium pullulans。
[0037]實(shí)施例2
[0038]本發(fā)明的煙用微生物添加劑采用下述步驟制備:
[0039]1、試管斜面培養(yǎng)
[0040]將實(shí)施例1所得短梗霉菌0F-01菌株的菌體接種到MYP培養(yǎng)基(麥芽提取物7g，酵母提取物0.5g，蛋白胨2.5g，瓊脂20g，水lL，pH自然)斜面上，20_30°C下培養(yǎng)4_10天后獲得斜面種子，適宜的培養(yǎng)條件是28°C下培養(yǎng)7天。
[0041]2、液體種子培養(yǎng)
[0042]將I所得斜面種子接種到三角瓶中的MYP的液體培養(yǎng)基中，15-300C，50-300 rpm條件下?lián)u床培養(yǎng)3-7天獲得。最適培養(yǎng)條件為28℃，200rpm條件下培養(yǎng)4天。
[0043]3、發(fā)酵罐大量培養(yǎng)
[0044]將2所得液體種子按1-5% (V/V)的比例接入發(fā)酵罐中的MYP液體培養(yǎng)基中，在20-1000升發(fā)酵罐中的培養(yǎng)條件為:溫度26-32°C，攪拌速度150_250rpm，發(fā)酵時(shí)間4-6天。用無菌水洗滌沉淀，離心，最后用20mL無菌水振蕩均勻，使用時(shí)稀釋10倍即為菌劑。
[0045]應(yīng)用實(shí)施例1:
[0046]煙用微生物添加劑對(duì)煙絲的作用:
[0047]用實(shí)施例1和2制備好的微生物制劑對(duì)煙絲進(jìn)行處理，具體實(shí)驗(yàn)步驟如下:
[0048]I)稱取含水率在11%-13%的煙絲100g。
[0049]2)取實(shí)施例2所得菌劑20ml，用小型噴霧器將其均勻地噴灑到1OOg煙絲上，密封，以防止水分蒸發(fā)。
[0050]3)直接噴灑等量的無菌水作為對(duì)照。
[0051]4)將樣品封入密封袋，以防止水分蒸發(fā)，30°C恒溫6h。
[0052]5)將煙絲置于120°C烘箱中烘干，使含水率達(dá)到11%_13%。
[0053]6)將煙絲于22°C相對(duì)濕度為60%的恒溫恒濕箱平衡48h。
[0054]7)取出部分煙絲，檢測(cè)主要化學(xué)成分含量和致香物質(zhì)。
[0055]8)將剩余的煙絲手工卷制成煙支，樣品和對(duì)照隨機(jī)編號(hào)，由評(píng)吸專家組成的評(píng)吸小組進(jìn)行感官評(píng)吸。
[0056]常規(guī)化學(xué)成分的檢測(cè)結(jié)果表明:經(jīng)所述的煙用微生物添加劑處理后，煙絲的生物大分子化合物的含量發(fā)生了較大的改變，其中還原糖和總糖的含量發(fā)生了明顯的提高，同時(shí)還檢測(cè)到纖維素和木質(zhì)素的含量發(fā)生了下降。
[0057]致香成分檢測(cè)結(jié)果表明:經(jīng)煙用微生物添加劑處理后，煙絲的致香成分，包括苯甲醇、茄酮、香蘭素、3 -大馬酮、二氫獼猴桃內(nèi)酯、巨豆三烯酮、西柏三烯二醇和新植二烯等的含量較對(duì)照顯著提高。
[0058]感官評(píng)吸結(jié)果表明:煙絲經(jīng)本發(fā)明煙用微生物添加劑處理后，香氣量、愉悅性較對(duì)照顯著提升，雜氣、刺激性等下降，煙氣濃度和勁頭減少，余味變得舒適。
[0059]試驗(yàn)結(jié)果表明本發(fā)明的煙用微生物添加劑具有明顯降低煙絲刺激性、掩蓋雜氣、細(xì)膩醇和煙氣的效果，能夠 達(dá)到提高煙絲抽吸品質(zhì)，提高煙絲在卷煙中的摻配量的目的。
【權(quán)利要求】
1.一種煙用微生物添加劑，其特征在于該煙用微生物添加劑由下述方法制得:取從烤煙葉面上分離得到的出芽短梗霉菌OF-Ol液體菌種，按照0.1%的接種量接種于200ml的麥芽提取物7g，酵母提取物0.5g，蛋白胨2.5g，瓊脂20g，水1L，pH自然的MYP培養(yǎng)基中，在26-32°C下培養(yǎng)4-10天獲得的斜面種子,用無菌水洗漆沉淀,離心,最后用20mL無菌水振蕩均勻，使用時(shí)稀釋10倍。
2.權(quán)利要求1所述的煙用微生物添加劑的制備方法，該方法采用下述步驟: (1)烤煙葉面上分離得到出芽短梗霉菌0F-01的液體菌種； (2)取液體菌種，按照0.1%的接種量接種于200ml的麥芽提取物7g，酵母提取物0.5g，蛋白胨2.5g，瓊脂20g，水1L，pH自然的MYP液體培養(yǎng)基中； (3)在26-32°C下培養(yǎng)4-10天獲得的斜面種子； (4)用無菌水洗滌沉淀，離心，最后用20mL無菌水振蕩均勻，使用時(shí)稀釋10倍。
3.權(quán)利要求1所述的煙用微生物添加劑在煙絲處理中的應(yīng)用。
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述的煙用微生物添加劑在煙絲處理中的應(yīng)用包括下述步驟: (1)稱取含水率在11%_13%的煙絲IOOg； (2)取菌劑20ml，用小型噴霧器將其均勻地噴灑到IOOg煙絲上，密封，以防止水分蒸發(fā)； (3)直接噴灑等量的無菌水在煙絲上作為對(duì)照； (4)將樣品封入密封袋，以防止水分蒸發(fā)，30°C恒溫6h； (5)將煙絲置于120°C烘箱中烘干，使含水率達(dá)到11%-13%； (6)將煙絲于22°C相對(duì)濕度為60%的恒溫恒濕箱平衡48h； (7)取出部分煙絲，檢測(cè)主要化學(xué)成分含量和致香物質(zhì)； (8)將剩余的煙絲手工卷制成煙支，樣品和對(duì)照隨機(jī)編號(hào)，由評(píng)吸專家組成的評(píng)吸小組進(jìn)行感官評(píng)吸。
【文檔編號(hào)】A24B15/20GK103451107SQ201310338129
【公開日】2013年12月18日 申請(qǐng)日期:2013年8月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月6日
【發(fā)明者】楊乾栩, 楊蕾, 李慶華, 蔡波, 孔維玲, 楊清, 段焰青, 師建全, 周國(guó)福, 李勇, 楊洪明, 黨立志, 何雪峰, 莫明和 申請(qǐng)人:紅云紅河煙草(集團(tuán))有限責(zé)任公司